專利名稱：含有色氨酸的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在精神壓力暴露中或精神壓力暴露后降低加餐。
背景技術(shù)：
精神壓力往往會(huì)影響食物喜好和攝入量。盡管精神壓力能夠引起厭食(hypophagia)，但大量的研究一致表明，輕度至中度急性精神壓力能增加甜的高脂肪食物的喜好和攝取量，并且精神壓力引起的情緒化飲食可歸因于減少的羥色胺(5-HTergic)神經(jīng)傳遞或功能。腦內(nèi)的5-羥色胺(serotonine)水平已與情緒、機(jī)警、警覺、睡眠開始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制、食欲和性行為相關(guān)聯(lián)。存在許多出版物，其中腦5-羥色胺水平的改變與天然氨基酸L-色氨酸(Trp或W)的可用度相關(guān)。因?yàn)檫@種關(guān)聯(lián)，提高血漿色氨酸水平的方法受到大量關(guān)注。已有報(bào)道，每個(gè)個(gè)體I克/天左右的色氨酸量產(chǎn)生臨床顯著的作用(Markus et al., Am.J Clin.Nutr2005; 81，1026-1033)。提高血衆(zhòng)色氨酸水平的一種方法涉及消耗富含乳清蛋白(whey protein) α -乳白蛋白(lactalbumin)的蛋白質(zhì)制齊U。α-乳白蛋白制劑是可容易獲得的，并具有相對(duì)高的色氨酸濃度。然而，其中提供α-乳白蛋白的途徑(見例如DE4130284和JP2279700)并未考慮腦色氨酸和5-羥色胺水平的主要決定因子不只是血衆(zhòng)色氨酸濃度，而是所謂的Trp/LNAA比例(Fernstrom and Wurtman.Sciencel971, 173，149-152)。該Trp/LNAA比例表示血漿中色氨酸相對(duì)于大中性 氨基酸(Large Neutral Amino Acid, LNAA ;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和繳氨酸的和)的摩爾比例。這些LNAA與色氨酸競(jìng)爭(zhēng)攝入大腦，推測(cè)是因?yàn)槭褂昧讼嗤目缭窖?腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。因此，提高腦色氨酸濃度的最有效途徑是供應(yīng)具有高Trp/LNAA比例的制備物。大量出版物例如W002/46210涉及從α -乳白蛋白制備具有提高的Trp/LNAA比例的肽級(jí)分。顯然，游離色氨酸(即游離氨基酸)的使用會(huì)提供最簡(jiǎn)單和最便宜的用于提供具有高Trp/LNAA比例的制劑的途徑。然而，在許多國(guó)家中，存在嚴(yán)格管制游離色氨酸供應(yīng)的立法。游離色氨酸在其多種應(yīng)用形式中的最大允許水平在各個(gè)國(guó)家不同。為了以更自然的方式供應(yīng)額外的膳食色氨酸，近期的途徑著眼于提供富含色氨酸的蛋白質(zhì)。如所述的，α-乳白蛋白及其水解產(chǎn)物已作為提高血漿色氨酸水平的安全選擇獲得普及。W02008/052995和W002/46210公開了一種生產(chǎn)組合物的方法，所述組合物包含含有色氨酸的肽且具有大于0.15的Trp/LNAA比例,其包含水解溶菌酶、優(yōu)選雞蛋溶菌酶，以制備具有5和45之間的DH的水解產(chǎn)物。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于口服消耗的含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物。令人驚奇的是，我們發(fā)現(xiàn)含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物的口服消耗導(dǎo)致飲食或食欲的降低，這通過(guò)數(shù)小時(shí)的減少食物的攝入來(lái)證明。因此，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式，口服攝取含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物，用來(lái)減少飲食或食欲。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物被用于制造口服攝取的營(yíng)養(yǎng)品或食品，來(lái)減少飲食或食欲。因此,含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物被用來(lái)減少飲食或食欲。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，公開了用來(lái)減少飲食或食欲的方法，其包含將含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物口服施用于需要該治療的受試者。特別地，本發(fā)明在精神壓力(包括急性和慢性(生活)精神壓力)情況下具有其效果O本發(fā)明涉及用于在精神壓力中或精神壓力后降低飲食或食欲的組合物，所述組合物包含含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例。本發(fā)明還涉及在精神壓力中或精神壓力后得到降低的飲食或食欲的治療，其通過(guò)口服攝取包含含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例的組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)。此外，本發(fā)明涉及用于通過(guò)口服攝取減少飲食或食欲的含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物、或包含含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物的組合物。該組合物優(yōu)選地為食品或飲料、膳食補(bǔ)充劑、保健品或飼料或?qū)櫸锸称?，包含谷物棒、烘焙物品如蛋糕和曲奇、液體食物如湯或湯粉末、包括非醇飲品和醇飲品的飲料以及要被添加進(jìn)飲用水和液體食物和臨床食物中的液體制劑。發(fā)明詳述人們認(rèn)為精神壓力以一種消極的方式影響人類的飲食行為。精神壓力可改變食物攝取，這可能導(dǎo)致吃零食或暴飲暴食。至少兩種方式的精神壓力發(fā)揮重要的作用。慢性(生活)精神壓力以及急性精神壓力可能與更偏愛甜品和脂肪有關(guān)。其結(jié)果往往是體重增加并可最終導(dǎo)致肥胖的發(fā)展。本發(fā)明提供了包含以肽形式存在的色氨酸的組合物，其非常適用于提供血漿中Trp/LNAA比例的有效提高。我 們注意到包含色氨酸的二肽和三肽有利地有助于該提高。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，在工業(yè)過(guò)程中用酶(預(yù))水解溶菌酶、優(yōu)選地雞卵溶菌酶，即(雞卵)溶菌酶優(yōu)選地以水解產(chǎn)物的形式提供。以水解產(chǎn)物形式提供時(shí)，大幅促進(jìn)含色氨酸的肽的胃腸吸收。本發(fā)明的水解產(chǎn)物的特征在于，分子的Trp/LNAA比例高于0.1、優(yōu)選地高于
0.15。本發(fā)明的水解產(chǎn)物優(yōu)選地具有5和45之間、更優(yōu)選地10和40之間的DH(水解度)。因此，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物(例如水溶性含色氨酸的肽)用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述保健品組合物的用途，所述保健品組合物用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中的Trp/LNAA比例。優(yōu)選地，與含色氨酸的肽同時(shí)或幾乎同時(shí)消耗蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)食物。提高的Trp/LNAA比例表示與消耗或攝取本發(fā)明的組合物之前的情況相比該比例的提高。“蛋白質(zhì)”或“多肽”在本文中被定義為包含多于30個(gè)氨基酸殘基的鏈?！半摹被颉肮央摹痹诒疚闹斜欢x為通過(guò)肽鍵連接的至少兩個(gè)氨基酸的鏈。術(shù)語(yǔ)“肽”和“寡肽”被認(rèn)為是同義的(如通常所認(rèn)為的那樣)，且每種術(shù)語(yǔ)可根據(jù)上下文的需要交換使用?！八苄浴彪氖窃?.0的pH下可溶于水的肽。本文中，所有(寡)肽和多肽的化學(xué)式根據(jù)通常的實(shí)踐從左到右以氨基端到羧基端的方向書寫。本文中使用的氨基酸的單字母代碼是本領(lǐng)域公知的，并可見于Sambrook, et al.(Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 2nded.Cold Spring HarborLaboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)中。蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、水解產(chǎn)物或經(jīng)水解的蛋白質(zhì)表示通過(guò)蛋白質(zhì)的酶水解形成的產(chǎn)物；富集的水解產(chǎn)物是下述蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物級(jí)分，其例如富含選定的肽，或其中肽或多肽已從水解產(chǎn)物中被去除。因此，富集的水解產(chǎn)物優(yōu)選地是肽的混合物(或肽混合物)。因此，本發(fā)明的肽混合物是至少兩種，優(yōu)選地至少三種，更優(yōu)選地至少四種含色氨酸的肽的混合物。更優(yōu)選地，混合物包含肽的群，所述群中的多于50%、優(yōu)選地甚至多于60%、最優(yōu)選地多于75%的存在的肽具有低于500Da的分子量。含色氨酸的肽表示包含至少一個(gè)L-色氨酸氨基酸殘基的肽。W02008/052995和W002/46210公開了包含可用于本發(fā)明中的與肽結(jié)合的色氨酸的蛋白水解產(chǎn)物和組合物。Trp/LNAA比例表示色氨酸相對(duì)于其它大中性氨基酸(LNAA ;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的總和)水平的摩爾比例。除了血漿Trp/LNAA比例外，Trp/LNAA比例僅涉及與肽結(jié)合的氨基酸。因此，游離的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸不被考慮進(jìn)Trp/LNAA比例中。本文中，富含色氨酸的組合物指的是，包含含有色氨酸的肽或含有色氨酸的水解產(chǎn)物且具有大于0.1的Trp/LNAA比例的組合物。本發(fā)中，富含色氨酸的 水解產(chǎn)物指的是，包含含有色氨酸的肽且具有大于0.1的Trp/LNAA比例的水解產(chǎn)物。與肽結(jié)合的氨基酸是屬于肽的一部分的氨基酸，并且不是游離的氨基酸。食欲被定義為進(jìn)食的期望，其通過(guò)饑餓感覺來(lái)刺激。精神壓力往往會(huì)影響食物喜好和攝入量。大量研究一致表明，慢性生活精神壓力、輕度至中度急性精神壓力和或消極情緒能增加甜的高脂肪食物的喜好和攝取量，并且精神壓力引起的情緒化飲食可歸因于減少的羥色胺(5-HTergic)神經(jīng)傳遞或功能。特別是針對(duì)這種精神壓力引起的情緒化食用零食，本發(fā)明提供了減少此類吃零食行為的方法。精神壓力可以來(lái)自許多不同的情況，并且可以是短暫的或長(zhǎng)期持久的。慢性精神壓力或慢性生活精神壓力是指長(zhǎng)期的精神壓力。慢性精神壓力是由于尚未得到解決的情況或在解決前持續(xù)數(shù)月或甚至數(shù)年的情況的結(jié)果而發(fā)生。急性精神壓力是指短暫的精神壓力。例如，當(dāng)限期將至?xí)r。有利地，在工業(yè)過(guò)程中用酶(預(yù))水解溶菌酶(優(yōu)選地雞卵溶菌酶)，即(雞卵)溶菌酶優(yōu)選地以水解產(chǎn)物或富集的水解產(chǎn)物的形式提供。以所述(富集的)水解產(chǎn)物形式提供時(shí)，大幅促進(jìn)含色氨酸的肽的胃腸吸收。(雞卵)溶菌酶水解產(chǎn)物可被分級(jí)分離，從而提高水解產(chǎn)物級(jí)分的色氨酸含量。該級(jí)分或富集的水解產(chǎn)物與分級(jí)分離前的水解產(chǎn)物相比優(yōu)選地具有提高的Trp/LNAA比例。具有額外的游離色氨酸的水解產(chǎn)物或富集的水解產(chǎn)物的富集也形成了本發(fā)明的一部分。根據(jù)本發(fā)明的(富集的)蛋白水解產(chǎn)物或由該蛋白水解產(chǎn)物得到的肽級(jí)分，可以以任意合適的形式使用，例如食物或飲料，如用于特殊營(yíng)養(yǎng)用途的食物(Foods for SpecialNutritional Uses)、膳食補(bǔ)劑、保健品或甚至用在飼料或?qū)櫸锸澄镏?。如果在食物或飲料中使用，則優(yōu)選具有相對(duì)低蛋白含量的制品，從而在消耗根據(jù)本發(fā)明的制品后維持血液中高的Trp/LNAA比例。另外，優(yōu)選地向含溶菌酶水解產(chǎn)物的食物或飲料中添加碳水化合物，以甚至進(jìn)一步提高消耗后血中的高Trp/LNAA比例。合適的食物制品包括例如谷物棒、烘焙物品如蛋糕和曲奇，以及液體食物如湯或湯粉末。除了乳制品如乳和酸乳之外，其它合適的飲料包括非醇飲品和醇飲品以及要被添加進(jìn)飲用水和液體食物中的液體制劑。非醇飲品優(yōu)選地為礦物質(zhì)水、運(yùn)動(dòng)飲品、果汁、檸檬水、茶、濃縮飲品如shots、能量飲品(例如含有葡糖醛酸內(nèi)酯、咖啡因或?；撬?和碳酸飲料(例如汽水(pops )、蘇打水(sodas )和可樂(lè)飲品)。用于特殊營(yíng)養(yǎng)用途的食物包括運(yùn)動(dòng)食物和臨床食物。術(shù)語(yǔ)膳食補(bǔ)劑在本文中使用時(shí)表示由口攝取的制品，其含有旨在補(bǔ)充膳食的化合物或化合物的混合物。這些制品中的化合物或化合物的混合物可包括:維生素、礦物質(zhì)、草藥(herbs)或其它植物和氨基酸。膳食補(bǔ)劑也可以是提取物或濃縮物，并可以以許多形式存在，例如片劑、膠囊、軟膠囊(softgel)、膠囊(gelcap)、液體或粉末。在本文使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)保健品表示同時(shí)在營(yíng)養(yǎng)和藥物兩種應(yīng)用領(lǐng)域中的有用性。根據(jù)本發(fā)明的保健品組合物可以是適合施用給動(dòng)物體(包括人體)的任何形式，特別是口服施用的任何常規(guī)形式，例如固體形式如食物或飼料(添加劑/補(bǔ)充劑)、食物或飼料預(yù)混物、片劑、丸劑、顆粒、錠劑、膠囊和泡騰劑配制物如粉末和片劑，或是液體形式如溶液、乳劑或懸浮液，例如飲料、糊劑和油性懸浮液。摻入根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物的受控(延遲)釋放配制物也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。另外，可向本發(fā)明的保健品組合物中添加多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑，以獲得足量的必需營(yíng)養(yǎng)素，所述必需營(yíng)養(yǎng)素在一些膳食中缺失。多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑也適用于疾病預(yù)防，和針對(duì)由于生活模式造成的營(yíng)養(yǎng)丟失和不足提供保護(hù)。因?yàn)楸景l(fā)明涉及降低食欲和飲食，這可影響體重增加，本發(fā)明的組合物優(yōu)選地包含少量的碳水化合物或脂肪，從而保持組合物的低熱量。因此在其中使用了本發(fā)明的最終產(chǎn)物，通常是“輕”制品。附例

圖1在攝入含色氨酸水解蛋白(M)和安慰劑蛋白(K)后面試準(zhǔn)備期間總的食物攝入量材料和方法材料從Genencor (Leiden,荷蘭)獲得商業(yè)名稱為“Protex6L”的枯草桿菌蛋白酶。溶菌酶作為Delvozyme L (22% 干物質(zhì))從 DSM Food Specialities (Delft,荷蘭)獲得。氨基酸分析根據(jù)如Amino Acid Analysis System of Waters 操作員手冊(cè)(Milford MA, USA)中所述的PicoTag方法進(jìn)行氨基酸分析。為此，將樣品干燥并使用異硫氰酸苯酯直接衍生化。如所述使用HPLC方法定量存在 的經(jīng)衍生化的氨基酸。因?yàn)槌Ｒ?guī)酸水解期間Trp和Cys被破壞，所以使用特殊的方法定量這兩種氨基酸。為了在水解期間防止Cys降解，首先使用過(guò)氧化氫將該氨基酸氧化為半胱氨酸，然后定量。色氨酸的分析以經(jīng)稍微修改的Waters步驟為基礎(chǔ)。在該步驟中，在真空下干燥肽溶液的小份試樣，然后在I小時(shí)內(nèi)于150°C下氮?dú)庵?，在?.2%色胺的4M甲烷磺酸中水解。使用裝備有Alltech Altima C18柱和熒光檢測(cè)的HPLC直接定量反應(yīng)產(chǎn)物。水解程度
使用快速OPA 測(cè)試(Nielsen, P.M.; Petersen, D.; Dambmann, C.1mprovedmethod for determining food protein degree of hydrolysis.Journal of FoodScience2001, 66，642-646)，監(jiān)測(cè)用多種水解混合物孵育期間獲得的水解程度(DH)。以下的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1使用Protex水解溶菌酶來(lái)生產(chǎn)富含色氨酸的水解產(chǎn)物使用NaOH將含10% (w/w)純?nèi)芫傅娜芤赫{(diào)節(jié)至pH8.2，并加熱至52°C。通過(guò)添加25微升Protex/ (g存在的蛋白質(zhì))來(lái)開始水解。在連續(xù)攪拌并維持pH在8.2情況下，繼續(xù)水解5.5小時(shí)，得到無(wú)可見沉淀物的幾乎澄清的溶液。在用于失活Protex活性的加熱步驟后，取樣用于DH分析。溶液的DH顯示幾乎為30%。在IOkDa過(guò)濾器上超濾經(jīng)熱處理的溶液，得到完全澄清溶液(富含色氨酸水解產(chǎn)物或富含色氨酸的水解的蛋白)。實(shí)施例2使用富含色氨酸的水解產(chǎn)物減少精神壓力引起的吃零食按照雙盲、安慰劑對(duì)照、交叉設(shè)計(jì)來(lái)進(jìn)行本研究。在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)中，每組42名參與者來(lái)到實(shí)驗(yàn)室，從而在急性精神壓力暴露前后以及在富含色氨酸的水解的蛋白(THP，見實(shí)施例1)攝入或安慰劑蛋白(PLC)攝入后監(jiān)測(cè)他們的食物攝入量。在測(cè)試的兩天，對(duì)膳食條件的順序進(jìn)行平衡抵消，采用至少一周的清除期(washout period)。每次測(cè)試天前，指導(dǎo)參與者在環(huán)節(jié)前，遠(yuǎn)離酒精至少36小時(shí)并禁食12小時(shí)；只允許不含糖的水和茶。 抵達(dá)后,志愿者要么消耗THP飲品，要么消耗PLC飲品。然后,使參與者休息(看書或看電視)2小時(shí)。參與者處在單獨(dú)的房間中，然后指導(dǎo)每個(gè)參與者準(zhǔn)備接受一些陌生的大學(xué)工作人員組成的小組的面試。在這5分鐘的準(zhǔn)備階段，參與者可以免費(fèi)獲得預(yù)先稱重的部分零食，并指示他們可以想吃多少就吃多少。準(zhǔn)備階段后，每對(duì)參與者匯聚在一個(gè)更大的試驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行15分鐘的精神壓力誘導(dǎo)面試。精神壓力誘導(dǎo)面試階段完成后，參與者有5分鐘的時(shí)間免費(fèi)獲取預(yù)先稱重的部分零食。飲食控制在這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，消耗包含富含色氨酸的卵蛋白水解產(chǎn)物、THP (DSM Delft，荷蘭)或者包含安慰劑酪蛋白水解產(chǎn)物(PLC，DSM Delft，荷蘭)的飲品。表I中給出了產(chǎn)品的主要特性。表1:標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(PLC)和富含色氨酸蛋白水解產(chǎn)物(TPH)條件的組合物。
權(quán)利要求
1.用于在精神壓力中或精神壓力后降低飲食或食欲的組合物，所述組合物包含含有色氨酸的肽并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述含有色氨酸的肽以含色氨酸的水解產(chǎn)物的形式存在。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其具有至少0.15、優(yōu)選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA 比例。
4.如權(quán)利要求1至3中任意一項(xiàng)所述的組合物，其中所述精神壓力為慢性精神壓力或急性精神壓力。
5.在精神壓力中或精神壓力后獲得飲食或食欲下降的治療，這通過(guò)口服組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)，所述組合物包含含有色氨酸的肽并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例。
6.如權(quán)利要求5所述的治療，其中所述含有色氨酸的肽以含色氨酸的水解產(chǎn)物的形式存在。
7.如權(quán)利要求5或6所述的治療，其具有至少0.15、優(yōu)選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例。
8.如權(quán)利要求5至7中任意一項(xiàng)所述的治療，其中所述精神壓力為慢性精神壓力或急性精神壓力。
9.組合物用于在精神壓力中或精神壓力后降低飲食或食欲的用途，所述組合物包含含有色氨酸的肽并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例。
10.如權(quán)利要求9所 述的組合物的用途，其中所述含有色氨酸的肽以含色氨酸的水解產(chǎn)物的形式存在。
11.如權(quán)利要求9或10所述的組合物的用途，其具有至少0.15、優(yōu)選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例。
12.如權(quán)利要求9至11中任意一項(xiàng)所述的組合物的用途，其中所述精神壓力為慢性精神壓力或急性精神壓力。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于在精神壓力中或精神壓力后降低飲食或食欲的組合物，所述組合物包含含有色氨酸的肽并且具有大于0.1的Trp/LNAA比例。
文檔編號(hào)A61K38/01GK103153326SQ201180048202
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2011年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月5日
發(fā)明者辛迪·格爾哈德, 瓊?cè)鹚埂た藙诳? 羅伯·馬庫(kù)斯 申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司