專(zhuān)利名稱(chēng)：：含有色氨酸的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有色氨酸的肽。
背景技術(shù)：
：腦內(nèi)的血清素(serotonine)水平己與情緒、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制、食欲和性行為相關(guān)聯(lián)。存在許多出版物，其中腦血清素水平的改變與天然氨基酸L-色氨酸(Trp或W)的可用度相關(guān)。因?yàn)檫@種關(guān)聯(lián)，提高血衆(zhòng)色氨酸水平的方法受到大量關(guān)注。已有報(bào)道，每個(gè)個(gè)體1克/天左右的色氨酸量產(chǎn)生臨床顯著的作用(Markusetal.，Am.JClin.Nutr2005;81,1026-1033)。提高血漿色氨酸水平的一種方法涉及消耗富含乳清蛋白(wheyprotein)a-乳白蛋白(lactalbumin)的蛋白質(zhì)制劑。a-乳白蛋白制劑是可容易獲得的，并具有相對(duì)高的色氨酸濃度。然而，其中提供o!-乳白蛋白的途徑(見(jiàn)例如DE4130284和JP2279700)并未考慮腦色氨酸和血清素水平的主要決定因子不只是血漿色氨酸濃度，而是所謂的Trp/LNAA比例(FernstromandWurtman.Science1971,173,149-152)。該Trp/LNAA比例代表血漿中色氨酸相對(duì)于大中性氨基酸(LargeNeutralAminoAcid,LNAA;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的和)的摩爾比例。這些LNAA與色氨酸競(jìng)爭(zhēng)攝入大腦，推測(cè)是因?yàn)槭褂昧讼嗤目缭窖?腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。因此，提高腦色氨酸濃度的最有效途徑是供應(yīng)具有高Trp/LNAA比例的制備物。大量出版物a.o.WO02/46210涉及從a-乳白蛋白制備具有提高的Trp/LNAA比例的肽級(jí)分。顯然，游離色氨酸(即游離氨基酸)的使用會(huì)提供最簡(jiǎn)單和最便宜的途徑，用于提供具有高Trp/LNAA比例的制劑。然而，在許多國(guó)家中，存在嚴(yán)格管制游離色氨酸供應(yīng)的立法。游離色氨酸在其多種應(yīng)用形式中的最大允許水平在各個(gè)國(guó)家不同。為了以更自然的方式供應(yīng)額外的膳食色氨酸，更近期的途徑著眼于提供富含色氨酸的蛋白質(zhì)。如所述的，a-乳白蛋白及其水解產(chǎn)物已作為提高血漿色氨酸水平的安全選擇獲得普及。然而，a-乳白蛋白作為色氨酸富集制劑起點(diǎn)的用途伴隨著最大Trp/LNAA比例和成本方面的缺點(diǎn)。a-乳白蛋白和0-乳球蛋白形成組成乳清的主要蛋白質(zhì)。因?yàn)樵诠I(yè)規(guī)模上完全分離g;-乳白蛋白和/3-乳球蛋白是困難的，所以意味著成本有效的a-乳白蛋白制劑會(huì)同樣含有/3-乳球蛋白。盡管o;-乳白蛋白具有5.3%的摩爾色氨酸含量，但是/3-乳球蛋白的色氨酸含量?jī)H為2%。盡管a-乳白蛋白具有0.11的摩爾Trp/LNAA比例，但是/5-乳球蛋白具有不多于0.04的摩爾Trp/LNAA比例。因此，顯然/3-乳球蛋白對(duì)a-乳白蛋白制劑的任何污染會(huì)顯著降低最終產(chǎn)物的Trp/LNAA比例?？紤]到對(duì)能夠調(diào)控腦血清素水平的制劑的廣泛興趣，人們需要下述改進(jìn)的生產(chǎn)方法，所述生產(chǎn)方法用于生產(chǎn)可在多種食物和營(yíng)養(yǎng)藥物制品中廣泛應(yīng)用的、具有高Trp/LNAA比例的蛋白質(zhì)和肽制劑。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明涉及生產(chǎn)組合物的工藝，所述組合物包含水溶性的、含色氨酸的肽，優(yōu)選地含有至少兩種水溶性的、含色氨酸的肽，并具有多于0.15、優(yōu)選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶，優(yōu)選地水解雞卵溶菌酶(henegglysozyme)，以制備具有5和45之間DH的水解產(chǎn)物，并任選地去除含精氨酸或賴(lài)氨酸的肽中的部分。優(yōu)選地，所述組合物包含AW或GNW，更優(yōu)選地包含AW和GNW。所述水解產(chǎn)物優(yōu)選地具有10和40之間的DH。本發(fā)明還涉及下述組合物，其包含至少兩種不同的水溶性肽，并且其中組合物的摩爾Trp/LNAA比例至少為0.15，優(yōu)選地在0.15和1.8之間。優(yōu)選地所述組合物包含AW或GNW，優(yōu)選地包含AW和GNW，最優(yōu)選地包含AW和GNW，其中AW與GNW的摩爾比例在1比2至U10比1之間，優(yōu)選地在1比2和5比1之間。另夕卜，本發(fā)明提供了富含色氨酸的水溶性肽的組合物。有利地，本發(fā)明還涉及包含至少兩種不同的二肽或三肽的組合物，其中選自二肽或三肽的兩種肽以占二肽和三肽總量至少5mo1%的量存在，且在所述組合物中，與肽結(jié)合的色氨酸中多于30mol%、優(yōu)選地多于40moP/。、更優(yōu)選地多于50mo1。/。、進(jìn)一步更優(yōu)選地多于60mol%、仍然更優(yōu)選地多于70mol%和最優(yōu)選地多于80mol%以二肽或三肽的形式存在，優(yōu)選地所述組合物具有多于0.15、優(yōu)選地在0.15和1.8之間的Trp/LNAA比例。與肽結(jié)合的色氨酸表示作為肽中的氨基酸存在的色氨酸。該組合物優(yōu)選地是溶菌酶水解產(chǎn)物或經(jīng)純化的溶菌酶水解產(chǎn)物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，溶菌酶水解產(chǎn)物尤其富含精氨酸殘基。精氨酸不屬于大中性氨基酸(LNAA)組，但是已知其胰島素刺激效應(yīng)。我們發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物能夠體內(nèi)產(chǎn)生高血漿Trp/LNAA比例。非常驚人的是發(fā)現(xiàn)在血漿中檢測(cè)的Trp/LNAA比例比水解產(chǎn)物的Trp/LNAA比例更高。本發(fā)明的又一優(yōu)點(diǎn)是含Tip的肽非常小，從而即便是與具有較不優(yōu)良的Trp/LNAA比例的富含蛋白質(zhì)的產(chǎn)物組合時(shí)，水解產(chǎn)物仍立即產(chǎn)生高的血漿Trp/LNAA比例。組合物還可含有游離的色氨酸。優(yōu)選地，水解產(chǎn)物不含有多于lwtM(以干物質(zhì)計(jì))的游離色氨酸。本發(fā)明的另一方面是下述組合物用于改善情緒、認(rèn)知、食欲、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的用途，或在用于情緒、認(rèn)知、食欲、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的食物、寵物食物、飼料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的制備中作為成分的用途，所述組合物是通過(guò)水解溶菌酶、優(yōu)選地水解雞卵溶菌酶獲得的組合物，或是根據(jù)本發(fā)明的另一組合物。除了溶菌酶水解產(chǎn)物以外，組合物還含有碳水化合物以及針對(duì)"腦"營(yíng)養(yǎng)、釋放壓力或抑郁或改善機(jī)警、情緒、認(rèn)知或睡眠模式的推薦化合物。另外，本發(fā)明涉及AW、SW或GNW用于改善情緒、認(rèn)知、食欲、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、食欲、機(jī)警、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的食物、飼料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的制備中作為成分的用途。本發(fā)明公開(kāi)了下述食物(包括嬰兒配方)、寵物食物、詞料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物，它們包含根據(jù)本發(fā)明的工藝生產(chǎn)的組合物或根據(jù)本發(fā)明的組合物，所述組合物包含GNW、SW或AW作為存在的肽。根據(jù)又一實(shí)施方案，提供了水溶性含色氨酸的肽或本發(fā)明的組合物用于在攝取肽或蛋白質(zhì)后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的用途，所述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中的Trp/LNAA比例。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了包含以肽形式存在的色氨酸的組合物，其非常適用于在非常短的時(shí)間間隔中提供血漿中Trp/LNAA比例的有效提高。我們注意到包含色氨酸的二肽和三肽有利地幫助該提高。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在工業(yè)過(guò)程中用酶(預(yù))水解溶菌酶，優(yōu)選地雞卵溶菌酶，即(雞卵)溶菌酶優(yōu)選地以水解產(chǎn)物的形式提供。以水解產(chǎn)物形式提供時(shí)，含色氨酸的肽的胃腸吸收被大幅促進(jìn)。在本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案中，雞卵溶菌酶被轉(zhuǎn)化為水解產(chǎn)物，其中包含帶正電荷的精氨酸和賴(lài)氨酸殘基的肽的水平被降低。后一水解產(chǎn)物的特征是高于0.14的摩爾Trp/LNAA比例。還在本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案中，雞卵溶菌酶被轉(zhuǎn)化為包含肽群體的水解產(chǎn)物，所述肽群體中多于50%、優(yōu)選地多于60%、更優(yōu)選地多于75%的存在的肽具有低于500Da的分子量。這具有下述條件水解產(chǎn)物中存在的肽的分子量分布如本申請(qǐng)的材料和方法章節(jié)中所述完成。后一實(shí)施方案的一個(gè)重要優(yōu)點(diǎn)是包含在二肽和三肽中的色氨酸在口服消耗后立即跨越腸壁轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血流中。因此，血漿色氨酸水平提高，幾乎立即伴有對(duì)腦血清素水平的直接影響。本申請(qǐng)實(shí)施例6中展示的數(shù)據(jù)顯示，以這類(lèi)二肽和三肽形式存在的色氨酸殘基非?？焖俚貙?dǎo)致高Trp/LNAA比例。在這一方面，以這些二肽和三肽形式存在的色氨酸殘基似乎比游離的色氨酸甚至更有效。根據(jù)本工藝獲得至少具有0.15的分子Trp/LNAA比例的水溶性肽級(jí)分，只要如本申請(qǐng)的材料和方法章節(jié)中所述進(jìn)行水解產(chǎn)物的氨基酸分析即可。以二肽和三肽形式提供色氨酸的另一重要優(yōu)點(diǎn)還在于這些肽的胃腸吸收迅速到使得它們能夠與含有蛋白質(zhì)的食物如乳制品(其天然地具有較不優(yōu)良的Trp/LNAA比例)組合消耗，并仍然導(dǎo)致在消耗后90分鐘內(nèi)，優(yōu)選地60分鐘內(nèi)，更優(yōu)選地30分鐘內(nèi)的周期中有效提高血漿中的Trp/LNAA比例。因此，本發(fā)明提供了本發(fā)明組合物(例如包含色氨酸的水溶性肽)用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)獲得提高的血漿Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的用途，所述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)獲得提高的血槳Trp/LNAA比例。優(yōu)選地，蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)食物的消耗與水溶性肽同時(shí)或幾乎同時(shí)。提高的Trp/LNAA比例表示與消耗或攝取本發(fā)明的組合物之前的情況相比該比例的提高。"蛋白質(zhì)"或"多肽"在本文中被定義為包含多于30個(gè)氨基酸殘基的鏈。"肽"或"寡肽"在本文中被定義為通過(guò)肽鍵連接的至少兩個(gè)氨基酸的鏈。術(shù)語(yǔ)"肽"和"寡肽"被認(rèn)為是同義的(如通常所認(rèn)為的那樣)，且每種術(shù)語(yǔ)可根據(jù)上下文的需要交換使用。"水溶性"肽是在5.0的pH下可溶于水的肽。本文中所有(寡)肽和多肽式根據(jù)通常的實(shí)踐從左到右以氨基端到羧基端的方向書(shū)寫(xiě)。本文中使用的氨基酸的單字母密碼是本領(lǐng)域通常己知的，并可見(jiàn)于Sambrook，etal.(MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nded.ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989)中。蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物、水解產(chǎn)物或經(jīng)水解的蛋白質(zhì)表示通過(guò)蛋白質(zhì)的酶水解形成的產(chǎn)物，富集的水解產(chǎn)物是下述蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物級(jí)分，其例如富含選定的肽，或其中肽或多肽已從水解產(chǎn)物中被去除。因此，富集的水解產(chǎn)物優(yōu)選地是肽的混合物(或肽混合物)。因此，本發(fā)明的肽混合物是至少兩種，優(yōu)選地至少三種，更優(yōu)選地至少四種含色氨酸的肽的混合物。更優(yōu)選地，混合物包含肽的群，所述群的多于50%、優(yōu)選地甚至多于60%、最優(yōu)選地多于75%的存在的肽具有低于500Da的分子量。含色氨酸的肽表示包含至少一個(gè)L-色氨酸氨基酸殘基的肽。Trp/LNAA比例表示色氨酸相對(duì)于其它大中性氨基酸(LNAA;即酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的總和)水平的摩爾比例。除了血漿Trp/LNAA比例外，Trp/LNAA比例僅涉及與肽結(jié)合的氨基酸。因此，游離的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸不被考慮進(jìn)Trp/LNAA比例中。與肽結(jié)合的氨基酸是屬于肽部分的氨基酸，并且不是游離的氨基酸。Tyr/LNAA比例表示酪氨酸相對(duì)于支鏈氨基酸(BCAA;即亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的總和)水平的摩爾比例。優(yōu)選地，Tyr/BCAA比例高于O.l，優(yōu)選地高于0.12。優(yōu)良的睡眠開(kāi)始和質(zhì)量被定義為在上床后45分鐘內(nèi)進(jìn)入的靜態(tài)睡眠。情緒被定義為精神的興奮狀態(tài)，并優(yōu)選地使用情緒狀態(tài)類(lèi)型問(wèn)巻法(ProfileofMoodStatesquestionnaire)測(cè)量(見(jiàn)本申請(qǐng)的實(shí)施例6)。認(rèn)知被定義為與例如解決問(wèn)題、學(xué)習(xí)、記憶和語(yǔ)言這類(lèi)領(lǐng)域相關(guān)的組合技能。食欲被定義為進(jìn)食的期望，其通過(guò)感覺(jué)或饑餓刺激。機(jī)警被定義為精神的注意或警惕狀態(tài)，優(yōu)選地使用MackworthClock測(cè)試和臨界追蹤任務(wù)(CriticalTrackingTask)測(cè)量(見(jiàn)本申請(qǐng)的實(shí)施例9)?？菇箲](anxiolytic)作用是導(dǎo)致釋放恐懼、不安(apprehension)或擔(dān)憂(yōu)的感覺(jué)的作用。抑郁被定義為一種精神狀態(tài)，特征是嚴(yán)重和持久的喪失越快的感覺(jué)。術(shù)語(yǔ)性行為在本文中被用作性欲(libido)的同義詞。在WO02/46210中描述了提高乳清蛋白水解產(chǎn)物中色氨酸水平的方法。在使用的方法中，首先在酸性pH下用一種或多種酸性蛋白酶水解乳清，優(yōu)選地用胃蛋白酶、凝乳酶(rennin)、酸性真菌蛋白酶、凝乳酶(chymosin)、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶或無(wú)花果蛋白酶水解乳清。優(yōu)選的孵育條件在pH1.5和3.5之間，并對(duì)其進(jìn)行選擇，以產(chǎn)生具有疏水性質(zhì)的肽。水解有意地以下述方式進(jìn)行，所述方式使得色氨酸殘基被摻入大的疏水肽中。小的、更溶于水的肽中存在少得多的色氨酸。在隨后的加工步驟中，pH被提高至4.0到6.0，以促進(jìn)這些大的、含色氨酸的肽沉淀，從而便于從乳清水解產(chǎn)物中選擇性回收它們。然而，所述工藝具有若干缺點(diǎn)。色氨酸作為大的酸性不溶肽中的存在被獲得，這意味著例如在酸性飲品中的應(yīng)用會(huì)有問(wèn)題。另外，由于色氨酸存在于相對(duì)大的肽中的事實(shí)，色氨酸進(jìn)入血的吸收會(huì)被延遲，從而限制了制劑作為食物或飲料成分(特別是與其它蛋白質(zhì)組合)的應(yīng)用可能性。使用這類(lèi)大肽的另一缺點(diǎn)是這類(lèi)肽可造成變應(yīng)性反應(yīng)。對(duì)于乳清蛋白的這類(lèi)反應(yīng)是公知的。本發(fā)明通過(guò)公開(kāi)簡(jiǎn)單的水解工藝克服了這些缺點(diǎn)，所述工藝用工業(yè)可獲得并且特征是高Trp/LNAA比例的蛋白質(zhì)開(kāi)始。本發(fā)明的工藝具有以蛋白質(zhì)色氨酸為基礎(chǔ)多于30%的色氨酸產(chǎn)率，并產(chǎn)生包含色氨酸的水溶性肽組合物。色氨酸殘基的較大部分包含在二肽和三肽中這一事實(shí)意味著立即攝入血流中。如即將公開(kāi)的，該特性允許在多種食物或營(yíng)養(yǎng)藥物制品中摻入所述水解產(chǎn)物。非常驚人地是本發(fā)明還公開(kāi)了通過(guò)口服消耗，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物能夠產(chǎn)生比實(shí)際的水解產(chǎn)物Trp/LNAA比例更高的血漿Trp/LNAA比例。最后，含色氨酸的肽混合物還有低抗原性的特征。根據(jù)本發(fā)明，雞卵溶菌酶被用作便利的底物，用于提供具有高Trp/LNAA比例的制劑。溶菌酶以3-4%的濃度存在于卵白中。通過(guò)利用其格外高的等電點(diǎn)，使用簡(jiǎn)單的陽(yáng)離子色譜純化步驟將其從卵白中工業(yè)分離。得到的產(chǎn)物幾乎是純的，并且該工業(yè)可獲得的產(chǎn)物具有7.8%的分子色氨酸含量和至少0.15的分子Trp/LNAA比例。因此，純?nèi)芫妇哂斜燃僡-乳白蛋白和/或/3-乳白蛋白更高的Trp/LNAA比例。因此，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物優(yōu)選地具有高于0.15的摩爾Trp/LNAA比例，更優(yōu)選地Trp/LNAA比例高于0.20，進(jìn)一步更優(yōu)選地Trp/LNAA比例高于0.23，仍然更優(yōu)選地Trp/LNAA比例高于0.25，最優(yōu)選地Trp/LNAA比例高于0.30。通常，摩爾Trp/LNAA比例低于3.0。同樣，這類(lèi)溶菌酶代表了含色氨酸的肽或組合物的優(yōu)選的起點(diǎn)。溶菌酶(EC3.2丄17)是能夠水解細(xì)菌細(xì)胞壁中特異肽聚糖鍵，導(dǎo)致細(xì)胞裂解的酶。因?yàn)槠錃⒓?xì)菌作用，溶菌酶通過(guò)防止感染在宿主防御(hostdefence)中起到重要作用。在生理?xiàng)l件下，溶菌酶分子非常能抵抗蛋白水解攻擊。該罕見(jiàn)的抗性可在進(jìn)化基礎(chǔ)上解釋因?yàn)槿肭值募?xì)菌能夠分泌多種蛋白酶，因此對(duì)這類(lèi)蛋白酶易感的溶菌酶分子會(huì)被快速失活。已針對(duì)a.o.反芻動(dòng)物的胃溶菌酶闡述了其蛋白酶抗性(Dobsonetal，J.BiolChem.1984，259(18)11607-11616)。從結(jié)構(gòu)觀點(diǎn)來(lái)看，分子中四個(gè)二硫鍵的存在可被預(yù)期增加溶菌酶的蛋白酶抗性。在本申請(qǐng)的實(shí)施例1中所示數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，雞卵溶菌酶可被認(rèn)為如此抵抗蛋白水解攻擊，使得該分子不太可能能夠在人腸道的相關(guān)部分中被有效消化。該蛋白酶抗性的結(jié)果是，盡管其具有非常吸引人的Trp/LNAA比例，但是不完整的溶菌酶不是產(chǎn)生血漿色氨酸水平的合適來(lái)源，僅僅因?yàn)樯彼釟埢谖改c道中存在的生理?xiàng)l件下不被解離。膳食攝取后，存在于食物中的蛋白質(zhì)被逐漸水解為更小的片段，然后被轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)小腸壁并吸收進(jìn)血中。在胃腸道中，從胃、胰和小腸產(chǎn)生的大量不同的蛋白酶能活性水解膳食蛋白質(zhì)。內(nèi)切蛋白酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶將大分子量蛋白質(zhì)切割為較小的寡肽。這些寡肽隨后被大量其它酶如二肽基和三肽基肽酶進(jìn)一步水解，產(chǎn)生二肽和三肽，并被氨基肽酶和羧基肽酶水解產(chǎn)生游離氨基酸。特異轉(zhuǎn)運(yùn)游離氨基酸或二肽和三肽的運(yùn)載體體系負(fù)責(zé)穿越腸壁有效轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血流。膳食攝取后，游離氨基酸、二肽和三肽立即被摻入血流中。比三肽更大的肽需要額外的酶切割使得能夠吸收。我們發(fā)現(xiàn)，如果被摻入以例如乳制品為代表的含高蛋白質(zhì)的食物基質(zhì)中，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物也是有效的。這是非常驚人的，因?yàn)楹鞍踪|(zhì)的食物基質(zhì)表現(xiàn)出高LNAA負(fù)荷，并因此可被期望為降低具有高Trp/LNAA比例制品的作用。對(duì)這種預(yù)料之外的現(xiàn)象的一種可能的解釋是通常的食物制品摻入了完整的而不是充分水解的蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物的典型大小分布在圖3中展示。根據(jù)該圖，大部分摻入色氨酸和酪氨酸的肽具有低于500Da的分子量?？紤]到色氨酸(MW=186)和酪氨酸(MW=163)的非常高的分子量和只存在非常低水平的游離色氨酸，意味著大部分這些肽應(yīng)該是三肽或二肽。因?yàn)樯彼嵩谑褂玫牟ㄩL(zhǎng)下具有比酪氨酸高得多的摩爾吸光系數(shù)，所以峰值應(yīng)涉及主要摻入色氨酸的肽。因?yàn)楦鶕?jù)本發(fā)明的含色氨酸的二肽和三肽被吸附得比例如未經(jīng)水解的基質(zhì)蛋白質(zhì)所代表的大量LNAA快得多，所以我們推測(cè)這是即便存在大量基質(zhì)蛋白質(zhì)時(shí)仍能獲得高血漿Trp/LNAA比例的原因。這樣的解釋對(duì)摻入酪蛋白和谷蛋白的食物基質(zhì)尤其適用，因?yàn)檫@類(lèi)蛋白質(zhì)在胃的酸性條件下顯示差的溶解度。然而，其還適用于慘入更多可溶完整蛋白質(zhì)(如乳清蛋白)的基質(zhì)，因?yàn)榧词惯@類(lèi)蛋白質(zhì)的胃腸消化相對(duì)低，使得與根據(jù)本發(fā)明的含色氨酸的二肽和三肽相比，得到的肽的摻入仍被顯著延遲。根據(jù)實(shí)施例6中展示的數(shù)據(jù)，這樣的延遲在30和60分鐘之間足夠長(zhǎng)到吸收所有含色氨酸的二肽和三肽。因此，蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)食物的攝取可以與水溶性肽同時(shí)或幾乎同時(shí)。幾乎同時(shí)表示肽的攝取在攝取蛋白質(zhì)后60分鐘內(nèi)，優(yōu)選地在30分鐘內(nèi)。有趣的是，我們目前的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也似乎表明，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物能夠在人志愿者體內(nèi)產(chǎn)生比水解產(chǎn)物的Trp/LNAA比例更高的Trp/LNAA比例。盡管這樣的現(xiàn)象是未知的，并且根據(jù)我們最大限度的知識(shí)不存在對(duì)該作用的被接受的解釋?zhuān)俏覀兿嘈?，這可能是由溶菌酶分子的極高的精氨酸含量引起的。本文公開(kāi)了最近提出的工作假設(shè)，以解釋實(shí)施例中所示實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。該假設(shè)被用于給出本發(fā)明人的目前看法，但是本發(fā)明不以任何方式關(guān)聯(lián)或限制于該假設(shè)。因此，本發(fā)明與該假設(shè)的正確性無(wú)關(guān)。血胰島素的提高刺激了從血進(jìn)入外周組織(特別是肌肉)的氨基酸吸收。然而，由于在血中色氨酸與血漿蛋白質(zhì)白蛋白結(jié)合的事實(shí)，色氨酸在很大程度上避開(kāi)了該途徑。因此，提高的胰島素水平降低了LNAA而不是色氨酸的濃度，進(jìn)而提高了血中的Trp/LNAA比例。因?yàn)樘妓衔锏臄z食引發(fā)胰島素分泌，并刺激外周組織和尤其是肌肉中LNAA的吸收，所以通過(guò)碳水化合物攝取提高血漿Trp/LNAA比例(FernstromandWurtman,1972,Metabolism,Vol.21,No.4，337-342)。除了被碳水化合物攝食刺激外，也已知胰島素分泌被具體的氨基酸刺激。如果灌輸個(gè)體氨基酸造成的血漿氨基氮水平非常相似，則胰島素應(yīng)答可觀地變化。Floydetal(JClinInvest45(9):1487-502)確立了針對(duì)氨基酸的遞減的胰島素應(yīng)答精氨酸>賴(lài)氨酸>亮氨酸>苯丙氨酸>纈氨酸>甲硫氨酸。考慮到溶菌酶尤其富含氨基酸精氨酸的事實(shí)，傾向于推測(cè)由精氨酸引發(fā)的胰島素刺激作用導(dǎo)致高的Trp/LNAA比例。因?yàn)橐阎妓衔锏囊葝u素刺激作用，所以根據(jù)本發(fā)明的碳水化合物優(yōu)選地被配制為與碳水化合物組合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，溶菌酶，優(yōu)選地雞卵溶菌酶在工業(yè)過(guò)程中被酶(預(yù))水解，即(雞卵)溶菌酶優(yōu)選地以水解產(chǎn)物或富集的水解產(chǎn)物形勢(shì)提供。以這類(lèi)(富集的)水解產(chǎn)物形勢(shì)提供時(shí)，極大地便利了含色氨酸的肽的腸吸收。在本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案中，雞卵溶菌酶被轉(zhuǎn)化為包含色氨酸的水解產(chǎn)物或富集的水解產(chǎn)物，其包含下述肽群體，其中多于50%、優(yōu)選地多于60%、更優(yōu)選地多于75。/。的存在的肽具有低于500Da的分子量。優(yōu)選地，這類(lèi)(富集的)水解產(chǎn)物不含有多于1wt%(以干物質(zhì)計(jì))的游離色氨酸。存在于水解產(chǎn)物中包含色氨酸的肽的分子量分析如本申請(qǐng)的材料和方法章節(jié)中所述進(jìn)行，并在圖3中闡述。后一實(shí)施方案的一個(gè)重要有點(diǎn)是二肽和三肽中包含的色氨酸在口服消耗后立即被穿過(guò)腸壁轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血流中。因此，血漿色氨酸水平被提高，幾乎同時(shí)伴有對(duì)腦血清素水平的直接影響。非常驚人的是本申請(qǐng)實(shí)施例6中所示數(shù)據(jù)顯示，以這些二肽和三肽形勢(shì)存在的色氨酸殘基的有效性比游離的色氨酸甚至更有效。該觀察結(jié)果強(qiáng)調(diào)了本發(fā)明提供的優(yōu)點(diǎn)。還在本申請(qǐng)的另一實(shí)施方案中，(雞卵)溶菌酶水解產(chǎn)物被分級(jí)分離，從而提高水解產(chǎn)物級(jí)分的色氨酸含量。該級(jí)分或富集的水解產(chǎn)物與分級(jí)分離前的水解產(chǎn)物相比優(yōu)選地具有提高的Trp/LNAA比例。水解產(chǎn)物或具有額外的游離色氨酸的經(jīng)富集的水解產(chǎn)物的富集，這也形成了本發(fā)明的部分。在制備這類(lèi)經(jīng)富集的水解產(chǎn)物的一個(gè)優(yōu)選的選項(xiàng)中，利用了我們的下述觀察結(jié)果溶菌酶摻入罕見(jiàn)大量的堿性精氨酸和賴(lài)氨酸殘基。驚人地，作為選擇的酶孵育條件(即選擇具有正確切割偏好的內(nèi)切蛋白酶如枯草桿菌蛋白酶，與產(chǎn)生高粱二肽和三肽的孵育條件組合，所述二肽和三肽摻入色氨酸但是幾乎沒(méi)有精氨酸或賴(lài)氨酸殘基)的結(jié)果，我們能夠生產(chǎn)根據(jù)本發(fā)明的富集的溶菌酶水解產(chǎn)物。因此，摻入精氨酸或賴(lài)氨酸殘基的含LNAA的肽能夠從不具有這類(lèi)堿性殘基的含色氨酸的肽中分離。例如，通過(guò)將水解產(chǎn)物的pH調(diào)節(jié)至4和6之間、更優(yōu)選地5.0和5.5之間的數(shù)值，不具有這類(lèi)堿性殘基的肽會(huì)不帶電荷，并因而具有降低的親水性。這些特征可例如在色譜或其它分離過(guò)程中用于我們的優(yōu)點(diǎn)，以選擇性地去除大部分含精氨酸或賴(lài)氨酸的肽。因此，含色氨酸的肽的含量被顯著提高，并任選地提高了該富集的水解產(chǎn)物的Trp/LNAA比例?？赏ㄟ^(guò)已知的技術(shù)，如離子色譜、疏水作用色譜或電滲析去除帶電的摻入精氨酸或賴(lài)氨酸的肽。在相關(guān)肽的層析分離中使用這類(lèi)特征的實(shí)踐背景可見(jiàn)于a.o.theProteinPurificationHandbook(issuedbyAmershamPharmaciaBiotech,nowadaysGEHealthcareBio-Sciences,Diegem，Belgium)。在朝向下述制劑的進(jìn)一步更先進(jìn)的純化途徑中，有利地使用溶菌酶中帶有酸性側(cè)基的氨基酸如谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)殘基的存在，所述制劑將高色氨酸含量與高Trp/LNAA比例結(jié)合。在該途徑中，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物的pH首先被調(diào)節(jié)至3.0，然后在陽(yáng)離子樹(shù)脂上進(jìn)行色譜。在該pH值下，摻入Glu或Asp的肽會(huì)通過(guò)柱，其它肽則會(huì)結(jié)合。隨后用pH5緩沖液的洗脫會(huì)解吸附如所述的不含賴(lài)氨酸或精氨酸殘基的所有結(jié)合的肽。大部分含有色氨酸的肽會(huì)在經(jīng)解吸附的該級(jí)分中。然后通過(guò)用具有甚至更高pH值的緩沖液洗脫，從柱上去除剩余的結(jié)合肽。該優(yōu)良的途徑在本申請(qǐng)的實(shí)施例4中闡述。盡管對(duì)于本發(fā)明而言，優(yōu)選地使用離子交換色譜和/或疏水作用色譜，但是也可使用其它合適的色譜分離方法，包括親和色譜和尺寸排除色譜?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法完成從得到的水性級(jí)分中回收富含色氨酸的肽。為了獲得濃縮的和保質(zhì)期穩(wěn)定的產(chǎn)物，回收優(yōu)選地包括蒸發(fā)和(噴霧)干燥步驟。另外，之后是蒸發(fā)/沉淀步驟的納米過(guò)濾和涉及有機(jī)溶劑的萃取過(guò)程代表了對(duì)期望的純化的選項(xiàng)。優(yōu)選地通過(guò)蒸發(fā)溶劑進(jìn)行從有機(jī)溶劑中回收富含色氨酸的肽。WO2006/009448提供了得自雞卵蛋白質(zhì)的具有抗高血壓特性的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，以及包含這些水解產(chǎn)物的食物制品和食物補(bǔ)劑。該文件公開(kāi)了大量水解產(chǎn)物(包括得自雞卵溶菌酶的水解產(chǎn)物)的制備。所有這些水解產(chǎn)物目的是在人中口服攝食后降低血壓或預(yù)防血壓升高。WO2006/009448還公開(kāi)了在堿性條件下使用枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)(EC3.4.21.62;商品名稱(chēng)Alcalase或Protex)獲得的溶菌酶水解產(chǎn)物制劑。根據(jù)獲得的高水解程度，這些溶菌酶水解產(chǎn)物含有大比例的具有低于500Da分子量的肽。然而，在WO2006/009448的上下文中均未涉及下述事實(shí)溶菌酶是具有高色氨酸含量的蛋白質(zhì)來(lái)源，其能夠積極影響腦血清素水平。也沒(méi)有提到溶菌酶水解產(chǎn)物包含水溶性肽，所述肽摻入了大量色氨酸和相對(duì)少量的LNAA。WO2006/009448還未提到溶菌酶或溶菌酶水解產(chǎn)物任一的高精氨酸和賴(lài)氨酸含量。我們根據(jù)本申請(qǐng)中所示數(shù)據(jù)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，溶菌酶分子的高色氨酸含量與精氨酸和賴(lài)氨酸的普遍存在組合，使得溶菌酶成為體內(nèi)產(chǎn)生高Trp/LNAA比例的完美的起始材料。另外，WO2006/009448的上下文未提到根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物與其它含蛋白質(zhì)的食物共同消耗時(shí)所提供的優(yōu)點(diǎn)。除了膜濾器的使用以外，WO2006/009448的上下文還沒(méi)有提到從具有選定的氨基酸組成的這些水解產(chǎn)物中獲得肽級(jí)分的方法，或使用特異方法提高色氨酸含量或提高Trp/LNAA比例的方法。另外，未記錄提供高度降解的、低變應(yīng)原性的溶菌酶水解產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn)。盡管事實(shí)上溶菌酶在生理?xiàng)l件(即在酸性pH下使用胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶作為蛋白酶)下顯示高度抵抗蛋白水解，但是在這類(lèi)較不優(yōu)良的酸性條件下也可獲得根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物。然而，在這類(lèi)條件下需要相對(duì)苛刻的孵育條件，例如高得多的酶濃度、更高的溫度和任選地額外的內(nèi)切蛋白酶。本申請(qǐng)實(shí)施例4中所示數(shù)據(jù)表明，通過(guò)在堿性pH下用枯草桿菌蛋白酶孵育溶菌酶獲得的溶菌酶水解產(chǎn)物尤其富含Ala-Trp(AW)二肽。該發(fā)現(xiàn)提出化學(xué)合成的AW二肽可能為本發(fā)明溶菌酶水解產(chǎn)物提供合適的備選方案。盡管合成的二肽的使用具有明顯的立法缺點(diǎn)，但是重要的優(yōu)點(diǎn)是其成本有效性及其理想的Trp/LNAA比例。理論上可獲得二十種不同的含色氨酸的二肽，但是我們的研究顯示二肽Ala-Trp(AW)和Ser-Trp(SW)代表了通過(guò)合成二肽增強(qiáng)血漿Trp/LNAA比例的尤其優(yōu)選的選項(xiàng)。可能使用例如"Peptides:ChemistryandBiology"byN.SewaldandH.D.Jakubke,Eds.Wiley-VCHVerlagGmbH,2002，Chapter4中所述的常規(guī)技術(shù)，通過(guò)化學(xué)合成生產(chǎn)AW和SW二肽。適用于大規(guī)模生產(chǎn)的尤其成本有效的化學(xué)肽合成方法基于用于活化羧基的垸基氯甲酸酯或特戊酰氯化物的使用，與用于C-端保護(hù)的甲基酯和用于N-保護(hù)的芐氧羰基(Z)或叔丁基氧羰基的使用組合。用于二肽SW的成本有效合成的詳細(xì)步驟在實(shí)施例5中提供。能夠獲得根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物后，我們?cè)O(shè)想了具有技術(shù)和經(jīng)濟(jì)優(yōu)點(diǎn)的其它新的和驚人的應(yīng)用。一種新的應(yīng)用是在多種嬰兒配方制品中摻入本發(fā)明的肽。牛乳含有20%的乳清蛋白，人乳則含有40%到60%。因此，牛乳含有比人乳少的a-乳白蛋白，進(jìn)而含有比人乳少的色氨酸。正常的、足月的嬰兒通常被喂養(yǎng)基于牛乳的配方，其為不能提供等價(jià)于母乳的氨基酸構(gòu)成的制品。盡管色氨酸供應(yīng)不足的結(jié)果尚未完全已知，但是具有高色氨酸的嬰兒配方制品可對(duì)嬰兒的認(rèn)知行為和睡眠開(kāi)始和質(zhì)量具有有益的影響。YogmanandZeisel在NEnglJMed.1983Nov10;309(19):1147-1149中提供了有力的跡象:在健康新生兒中，高血漿色氨酸水平促進(jìn)了靜態(tài)睡眠的快速開(kāi)始。因此，本發(fā)明提供了用于嬰兒配方制品的組合物，其中已使用得自(雞卵)溶菌酶的(富集的)水解產(chǎn)物提高了色氨酸水平。優(yōu)選地，這類(lèi)嬰兒配方制品中使用的(雞卵)溶菌酶被熔解至防止變應(yīng)原性問(wèn)題的程度，即雞卵溶菌酶優(yōu)選地以低變應(yīng)原性水解產(chǎn)物的形式被提供。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，根據(jù)本發(fā)明的(富集的)水解產(chǎn)物可以在膳食替代制品中使用。例如，WO2005/023017描述了高劑量明膠作為膳食替代制品中合適組分的優(yōu)點(diǎn)。盡管提供了極佳的感官特性，但是明膠不提供需要的氨基酸平衡，例如其不摻入必需氨基酸色氨酸。因此，為了達(dá)成具有ECDirective96/8/EC所要求的氨基酸適當(dāng)平衡的組合物，必須向這類(lèi)含明膠的組合物中添加色氨酸。在WO2005/023017中，優(yōu)選地以富含色氨酸的蛋白質(zhì)(例如卵清粉或全卵粉)的形式添加色氨酸。我們目前已發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的含色氨酸的水解產(chǎn)物對(duì)該問(wèn)題提供了改進(jìn)的溶液，因?yàn)檫@些水解產(chǎn)物以濃縮得多的形式供應(yīng)色氨酸。另外，溶菌酶自身以所需量含有所有必需氨基酸，并同樣是理想地適合膳食替代品的全營(yíng)養(yǎng)蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物被用于刺激食欲。我們非常驚人地發(fā)現(xiàn)具有高Trp/LNAA比例的制劑會(huì)刺激血漿生長(zhǎng)素釋放肽(ghrelin)水平。生長(zhǎng)素釋放肽已知是"饑餓"激素，并且刺激生長(zhǎng)素釋放肽生產(chǎn)已顯示在人中提高食物攝取和體重(Wrenetal.,2001,JClinEndocrinolMetab86，5992-5995)。因?yàn)樵擃A(yù)料之外的作用，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物在例如臨床食物中提供優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)閲?yán)重病患者(criticallyill)趨向于戒除所有食物，這減緩了他們的恢復(fù)。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物被用于在嬰兒、兒童和成人中改善睡眠開(kāi)始和質(zhì)量。睡眠問(wèn)題在屬于多種年齡組的個(gè)體中非常盛行，并與醫(yī)學(xué)病癥相關(guān)。根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物適用于治療普遍的睡眠問(wèn)題，但是他們代表了克服認(rèn)知、心理、社交(social)和行為紊亂(disturbance)相關(guān)問(wèn)題的一種有用工具。例子是建立良好的睡眠衛(wèi)生，克服睡眠開(kāi)始聯(lián)合征(sleep-onsetassociation)或晝夜節(jié)律睡眠障礙(circadianrythymsleepdisorder)。所述制品還可適用于改善例如纖維肌痛患者的睡眠開(kāi)始和質(zhì)量和精神狀態(tài)。纖維肌痛綜合征是一種慢性疼痛綜合征，其與嚴(yán)重紊亂的睡眠開(kāi)始和質(zhì)量和情緒緊張(emotionalstress)相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的富含色氨酸的水解產(chǎn)物的規(guī)律攝入一般改善受睡眠問(wèn)題困擾的個(gè)體的睡眠開(kāi)始和睡眠質(zhì)量。根據(jù)本發(fā)明的含色氨酸的水解產(chǎn)物提供了額外的優(yōu)點(diǎn)，例如供應(yīng)(半)必需的氨基酸。溶菌酶不僅具有高色氨酸水平，而且同樣摻入顯著量的酪氨酸殘基。酪氨酸是神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的前體，并且已知血漿酪氨酸水平影響腦中的多巴胺水平。溶菌酶水解產(chǎn)物不僅比其它已知的高色氨酸肽含有更少的LNAA，而且比其它已知的高色氨酸肽含有更少的支鏈氨基酸(BCAA)。這是重要的，因?yàn)榧褐狟CAA降低多巴胺前體酪氨酸的血漿可利用度。因此，其高Trp/LNAA比例與其高Tyr/BCAA比例組合，使溶菌酶成為獨(dú)特的分子。因此，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物被非常適當(dāng)?shù)囟ㄎ粸?腦食物"，也就是說(shuō)，用于供應(yīng)適當(dāng)?shù)纳窠?jīng)遞質(zhì)水平所需的必需氨基酸。已知多巴胺體系介導(dǎo)報(bào)酬(reward)和動(dòng)機(jī)(motivation)的關(guān)鍵作用，及其對(duì)集中精神(concentration)、記憶、機(jī)警、注意力、解決問(wèn)題和精神運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)的影響。如本申請(qǐng)實(shí)施例9中所闡述的，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物的攝入對(duì)警覺(jué)、機(jī)警、集中精神和精神運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)(psychomotorcoordination)具有顯著的有益影響。該發(fā)現(xiàn)證實(shí)根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物可被期望為不僅刺激血清素體系，而且剌激多巴胺體系。若干組個(gè)體可受益于該發(fā)現(xiàn)。例如，絕經(jīng)期的女性具有降低的解決問(wèn)題能力的普遍不適(complaint)，她們將其與不能集中精神關(guān)聯(lián)。因此，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物特別適用于在該年齡組的女性中對(duì)抗這些問(wèn)題。在年輕和中年女性的范疇內(nèi)，經(jīng)期綜合征(premenstrualsyndrome)是非常普遍的。該綜合征的特征是多種癥狀，但是關(guān)于抑郁和情緒不穩(wěn)定的不適經(jīng)常發(fā)生。為了對(duì)抗這些現(xiàn)象，經(jīng)常開(kāi)出選擇性血清素再吸收抑制劑如氟西汀的處方，并且在具有更溫和癥狀的女性中，經(jīng)常開(kāi)出飲食適應(yīng)(dietaryadaptation)和防止壓力的處方?；诒旧暾?qǐng)實(shí)施例6和9中所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物代表極佳的治療，特別是對(duì)這類(lèi)較溫和的病例而言。另外，多巴胺不足伴隨著注意力缺陷多動(dòng)癥(ADHD)，從而可預(yù)期通過(guò)溶菌酶水解產(chǎn)物減輕該病癥的癥狀。我們的下述發(fā)現(xiàn)是驚人的對(duì)壓力后表現(xiàn)的有益影響在抗壓的受試者中特別突出。可能的解釋可以是具有(過(guò)度)活動(dòng)的血清素體系的有壓力的人需要來(lái)自飲品的色氨酸來(lái)補(bǔ)充他們的血清素儲(chǔ)備，因此不能使用該色氨酸改進(jìn)他們?cè)谌蝿?wù)中的表現(xiàn)。根據(jù)這一條推理，沒(méi)有過(guò)度活動(dòng)的血清素能體系的抗壓人群不需要色氨酸來(lái)補(bǔ)充他們的色氨酸儲(chǔ)備，并且能夠使用其改善他們的壓力后表現(xiàn)。一種備選的解釋可能是這些作用事實(shí)上歸因于多巴胺能過(guò)程的刺激作用?？赏ㄟ^(guò)富含酪氨酸的食物成分增強(qiáng)多巴胺合成，尤其是與低水平的支鏈氨基酸(BCAA)組合時(shí)。在本文中公開(kāi)這些工作假設(shè)(workinghypotheses)以解釋實(shí)施例中所示實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并用于給出本發(fā)明人的目前看法(presentinsight)。但是本發(fā)明不以任何方式關(guān)聯(lián)或限制于這些假設(shè)。因此，本發(fā)明與這些假設(shè)的正確性無(wú)關(guān)。如別處所陳述的，溶菌酶不僅具有高色氨酸水平，而且同樣包括有顯著量的酪氨酸殘基。根據(jù)本發(fā)明的(富集的)水解產(chǎn)物還能提高食物制品中的半胱氨酸含量。盡管不是必需的氨基酸，但是在許多食物制品中半胱氨酸濃度是有限的。半胱氨酸的內(nèi)源合成需要甲硫氨酸的存在，像半胱氨酸一樣，甲硫氨酸濃度在許多食物制品中是有限的。提高的食物半胱氨酸含量的優(yōu)點(diǎn)尤其涉及甲硫氨酸對(duì)血清高半胱氨酸提升效應(yīng)的拮抗效應(yīng)(antagonisticeffect)。該發(fā)現(xiàn)在WO03/055335中已描述。根據(jù)本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物特征也是高半胱氨酸水平。事實(shí)上，溶菌酶分子含有比色氨酸殘基(6)甚至更多的半胱氨酸殘基(8)。在該角度中，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物形成提高某些制品半胱氨酸含量的極佳來(lái)源。發(fā)現(xiàn)提高的半胱氨酸含量對(duì)于例如嬰兒配方的制品而言是重要的。不僅嬰兒配方基于酪蛋白或酪蛋白和乳清蛋白的混合物，而且對(duì)基于大豆的制品和事實(shí)上對(duì)于所有富含蛋白質(zhì)的制品而言，其中主要的蛋白質(zhì)來(lái)源由含有相對(duì)低量色氨酸或半胱氨酸的蛋白質(zhì)提供。除了來(lái)自牛乳和明膠的蛋白質(zhì)組分以外，玉米蛋白、酵母蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白和水稻蛋白代表了這類(lèi)蛋白質(zhì)的例子。另外，含有高劑量明膠的上述膳食替代制品含有不足量的半胱氨酸。根據(jù)本發(fā)明的(富集的)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，或得自該蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物的肽級(jí)分，或包含色氨酸的二肽或三肽(特別是SW或AW)可以以任何合適的形式使用，例如食物或飲料，如用于特殊營(yíng)養(yǎng)用途的食物(FoodsforSpecialNutritionalUses),膳食補(bǔ)劑，營(yíng)養(yǎng)藥物或甚至用在詞料或?qū)櫸锸澄镏??？稍谶@些制品的正常過(guò)程中的任何階段添加溶菌酶水解產(chǎn)物。如果在食物或飲料中使用，則具有相對(duì)低蛋白質(zhì)含量的制品是優(yōu)選的，從而消耗根據(jù)本發(fā)明的制品后在血中維持高的Trp/LNAA比例。另外，優(yōu)選地向含溶菌酶水解產(chǎn)物的食物或飲料中添加碳水化合物，以進(jìn)一步提高消耗后血中的高Trp/LNAA比例。合適的食物制品包括例如谷物棒、烘焙物品如蛋糕和曲奇，以及液體食物如湯或湯粉末。除了乳制品如乳和酸乳之外，其它合適的飲料包括非醇和醇飲品以及要被添加進(jìn)飲用水和液體食物中的液體制劑。非醇飲品優(yōu)選地為礦物質(zhì)水、運(yùn)動(dòng)飲品、果汁、檸檬水、茶、濃縮飲品如shots、能量飲品(例如含有葡糖醛酸內(nèi)酯、咖啡因或?；撬?和碳酸飲料(例如汽水(pops)、蘇打水(sodas)和可樂(lè)飲品)。根據(jù)本發(fā)明的色氨酸水解產(chǎn)物的優(yōu)選的組合是與被推薦用于"腦營(yíng)養(yǎng)"的化合物例如鐵、鋅、鎂、維生素(特別是B2、B6、葉酸和C)、co-3和DHA脂肪或脂肪酸、葡萄糖、GABA、膽堿、磷脂酰絲氨酸、輔酶QIO、肌酸、?；撬岷?-HTP的組合，或與被推薦用于釋放壓力或抑郁的化合物如纈草(valerian)、巧克力、圣約翰草(StJohn'sworth)、5隱HTP、磷脂酰絲氨酸、醇、香蜂葉(lemonbalm)、綠茶或綠茶提取物、甘菊或S-腺苷甲硫氨酸的組合，或與被推薦用于改進(jìn)機(jī)警的化合物如咖啡因、瓜拉那、人參、白果(gingkobilboa)、圣約翰草和5-HTP的組合，或與被推薦用于情緒改善的化合物如GABA、5-HTP、PEA、綠茶或綠茶提取物、白果、洋蘇草(Salvia)或S-腺苷甲硫氨酸的組合，或與被推薦用于改善睡眠的化合物例如乳肽、游離色氨酸、阿片肽(opoidpeptide)或褪黑素的組合。用于特殊營(yíng)養(yǎng)用途的食物包括以下范疇運(yùn)動(dòng)食物、瘦身食物、嬰兒配方和臨床食物。術(shù)語(yǔ)膳食補(bǔ)劑在本文中使用時(shí)表示由口攝取的制品，其含有旨在補(bǔ)充膳食的化合物或化合物的混合物。這些制品中的化合物或化合物的混合物可包括維生素、礦物質(zhì)、草藥(herbs)或其它植物和氨基酸。膳食補(bǔ)劑也可以是提取物或濃縮物，并可以以例如片劑、膠囊、軟膠囊(softgel)、軟膠囊(gelcap)、液體或粉末的許多形式存在。在本文使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)營(yíng)養(yǎng)藥物表示在營(yíng)養(yǎng)和藥物兩種應(yīng)用領(lǐng)域中的有用性。根據(jù)本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物可以是適合施用給動(dòng)物體(包括人體)的任何形式，特別是口服施用的任何常規(guī)形式，例如固體形式如食物或飼料(添加劑/補(bǔ)劑)、食物或飼料預(yù)混合物、片劑、丸劑、顆粒、錠劑、膠囊和泡騰劑配制物如粉末和片劑，或是液體形式如溶液、乳劑或懸浮液，例如飲料、糊劑和油性懸浮液。摻入根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物的受控(延遲)釋放配制物也構(gòu)成本發(fā)明的部分。另外，可向本發(fā)明的營(yíng)養(yǎng)藥物組合物中添加多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑，以獲得足量的必需營(yíng)養(yǎng)素，所述必需營(yíng)養(yǎng)素在一些膳食中缺失。多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑也適用于疾病預(yù)防，和針對(duì)由于生活模式造成的營(yíng)養(yǎng)丟失和不足提供保護(hù)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方面，組合物可在例如老年人以及年輕人(例如準(zhǔn)備考試的學(xué)生)和例如玩計(jì)算機(jī)或網(wǎng)絡(luò)游戲的人中被用作營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑，例如用于情緒改善或用于改善認(rèn)知功能如學(xué)習(xí)、記憶、警覺(jué)和機(jī)警。如前文所述，根據(jù)本發(fā)明的組合物尤其與絕經(jīng)前和絕經(jīng)后的女性相關(guān)。根據(jù)本發(fā)明的組合物還尤其與運(yùn)動(dòng)人群相關(guān)；具有苛刻的訓(xùn)練計(jì)劃的職業(yè)運(yùn)動(dòng)員以及娛樂(lè)運(yùn)動(dòng)人群，如打網(wǎng)球或高爾夫球的人群。這表示本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物如上文給出的和作為"條件改善者"的用途，即在患病或正常的健康個(gè)體中作為用于以下的手段降低應(yīng)激性和疲勞(最終降低過(guò)度訓(xùn)練的風(fēng)險(xiǎn))，降低或防止或減輕生理和精神疲勞，保護(hù)安穩(wěn)的睡眠(即作用于對(duì)抗失眠和睡眠病癥并改善睡眠)和更籠統(tǒng)地提高能量生產(chǎn)，特別是提高腦能量生產(chǎn)。另外用于通常的認(rèn)知改善，特別是用于注意力和精神集中、記憶和記憶能力、學(xué)習(xí)能力、語(yǔ)言處理、解決問(wèn)題和智力功能的維持或改善；用于改善短期以及長(zhǎng)期記憶；用于提高精神機(jī)警；用于增強(qiáng)精神警覺(jué)；用于減少精神疲勞；用于支持認(rèn)知健康，用于維持平衡的認(rèn)知功能。另外，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物用于提高食欲的用途。如果需要獲得具有高Trp/LNAA比例的成本有效的制劑，根據(jù)本發(fā)明的水解產(chǎn)物任選地包含游離的色氨酸。附例圖1.消耗實(shí)施例6中詳述的制品后，血漿中摩爾Trp/LNAA比例對(duì)時(shí)間的函數(shù)。REF^酪蛋白水解產(chǎn)物，ALAC二完整的ce-乳白蛋白，Trp二游離色氨酸，WEPS-富含色氨酸的溶菌酶水解產(chǎn)物，SYN-合成的二肽Ser-Trp。圖2.消耗實(shí)施例6中詳述的制品后，負(fù)面情緒(用情緒狀態(tài)類(lèi)型測(cè)試(POMS)測(cè)量)對(duì)時(shí)間的函數(shù)。REF:酪蛋白水解產(chǎn)物，ALAC-完整的a-乳白蛋白，Trp:游離色氨酸，WEPS-富含色氨酸的溶菌酶水解產(chǎn)物，SYN=合成的二肽Ser-Trp。圖3.溶菌酶水解產(chǎn)物的水溶性肽級(jí)分的大小分布。使用材料和方法章節(jié)中詳述的測(cè)定水解產(chǎn)物中存在的肽和蛋白質(zhì)分子量分布的方法，分析了根據(jù)實(shí)施例3中所述方法制備的溶菌酶水解產(chǎn)物。214nm處的吸光度測(cè)量記錄了肽鍵的存在。280nm處的吸光度測(cè)量記錄了色氨酸和酪氨酸芳香族側(cè)鏈的存在。因?yàn)樯彼嵩谠摬ㄩL(zhǎng)下具有比酪氨酸高得多的摩爾吸光系數(shù)，所以峰值會(huì)主要涉及摻入色氨酸的肽。圖4.實(shí)施例9中所述實(shí)驗(yàn)的研究設(shè)計(jì)流程圖。高壓力易感的志愿者；低抗壓的志愿者；hydr:富含Trp的溶菌酶水解產(chǎn)物；安慰劑酪蛋白水解產(chǎn)物。圖5.實(shí)施例9中所述實(shí)驗(yàn)的典型研究日的流程圖。飲品消耗含有富含Trp的水解產(chǎn)物或安慰劑的飲品；血采血用于評(píng)價(jià)血漿氨基酸水平；表現(xiàn)不可控制的壓力之前和之后的表現(xiàn)測(cè)試；壓力算術(shù)任務(wù)。圖6.攝食實(shí)施例9中所述安慰劑(plc)或溶菌酶水解產(chǎn)物(Trp-hydr)后的血漿Trp/LNAA比例(/mi01/1)。黑色符號(hào)壓力易感的受試者；空心符號(hào)抗壓的受試者。圖7.如實(shí)施例9中所述進(jìn)行的MackworthClock測(cè)試的結(jié)果。消耗安慰劑(plc;左側(cè)圖)或富含Trp的水解產(chǎn)物(Trp-hydr;右側(cè)圖)之后、算術(shù)任務(wù)之前(壓力前)或之后(壓力后)的正確反應(yīng)數(shù)量(垂直軸)。黑色符號(hào)壓力易感的受試者；空心符號(hào)抗壓的受試者。因?yàn)樵讵?dú)立的日期中給予不同的干涉(intervention)制品，所以?xún)H在相同的處理和日期內(nèi)的壓力前和壓力后條件之間進(jìn)行相應(yīng)的比較。圖8.如實(shí)施例9中所述進(jìn)行的臨界追蹤任務(wù)(CriticalTrackingTask)的結(jié)果。在攝入安慰劑(plc)或富含Trp的水解產(chǎn)物(Trp-hydr)后表達(dá)XCT(指出受試者達(dá)到的最終復(fù)雜性水平)。黑色符號(hào)壓力易感的受試者；空心符號(hào)抗壓的受試者。材料和方法材料商品名為"Protex6L"的枯草桿菌蛋白酶得自Genencor(Leiden，荷蘭)，胃蛋白酶來(lái)自Sigma且胰蛋白酶/糜蛋白酶(PorcinePEM)來(lái)自Novozymes(Bagsvaerd，丹麥)。溶菌酶作為DelvozymeL(22%干物質(zhì))從DSMFoodSpecialities(Delft，荷蘭)獲得。酪蛋白水解產(chǎn)物("REF，)基本上如Edensetal(JAgricFoodChem,53(20)7950-7957,2005)所述獲得。用Protex6L充分水解酪蛋白酸鈉，將pH降低至4.5后，用脯氨酸特異的內(nèi)切蛋白酶達(dá)到DH>20%。超濾后對(duì)滲透物熱處理，以失活任何剩余的酶活性，并最終將其噴霧干燥。完整的a-乳白蛋白("ALAC")作為"Biopure"(>90%的a-乳白蛋白)從DaviscoFoodsInternational,Inc.(LeSeuer,MN)獲得；富含色氨酸的溶菌酶水解產(chǎn)物("WEPS")如實(shí)施例4中所述獲得；合成的Ser-Trp二肽("SYN")如實(shí)施例5中所述獲得；純L-色氨酸("TRP")作為L(zhǎng)-色氨酸-400從Orthica,Almere，荷蘭獲得。SDS-PAGE通過(guò)SDS-PAGE檢査使用的溶菌酶制劑的純度。用于SDS-PAGE和染色的所有材料均購(gòu)自Invitrogen(Carlsbad,CA,US)。使用SDS緩沖液根據(jù)制造商的說(shuō)明制備樣品，并使用MES-SDS緩沖體系根據(jù)制造商的說(shuō)明在12%Bis-Tris凝膠上分離。使用SimplyBlueSafeStain(CollodialCoomassieG250)進(jìn)行染色。水解前，溶菌酶在凝膠上作為具有約14kDa分子量的單一條帶出現(xiàn)。LC/MS/MS分析使用HPLC測(cè)定通過(guò)本發(fā)明的工藝生產(chǎn)的酶蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中含色氨酸的肽(主要是二肽或三肽)的存在，所述HPLC使用與P4000泵(ThermoElectron,Breda，荷蘭)偶聯(lián)的離子阱質(zhì)譜儀(ThermoElectron,Breda，荷蘭)。使用Inertsil3ODS3，3jum,150*2.1mm柱(VarianBelgium,Belgium),與用于洗脫的MilliQ水(Millipore,Bedford,MA,USA)中0.1%甲酸(溶液A)和乙腈中0.1%甲酸(溶液B)的梯度組合，分離形成的肽。所述梯度從100%溶液A開(kāi)始，保持10分鐘，在25分鐘內(nèi)線(xiàn)性化提高至20。/。B，立即進(jìn)入初始條件，并保持15分鐘用于穩(wěn)定。使用的注射體積為50微升，流速為每分鐘200微升，柱溫度維持在55°C。注射的樣品的蛋白質(zhì)濃度約為50微克/毫升。以滯留時(shí)間、質(zhì)子化的分子為基礎(chǔ)，并通過(guò)使用對(duì)感興趣的肽專(zhuān)用的MS/MS，使用約30%的最適碰撞能量，鑒定感興趣的肽。通過(guò)使用外標(biāo)法進(jìn)行含色氨酸的特異肽的定量。使用四肽VVPP(]V^410.2)調(diào)節(jié)MS模式中的最優(yōu)靈敏度和MS/MS模式中的最優(yōu)斷裂(fragmentation)，進(jìn)行5pg/ml的恒量輸注，得到MS模式中的質(zhì)子化分子和MS/MS模式中約30%的最優(yōu)碰撞能量，產(chǎn)生B-離子和Y-離子系列。在LC/MS/MS之前，在室溫和13000rpm下將酶蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物離心IO分鐘，并用濾過(guò)Millipore水過(guò)濾裝置的去礦質(zhì)水(MilliQ水)1:100稀釋上清液。氨基酸分析如實(shí)施例6中所述，通過(guò)HPLC根據(jù)vanEijketal(J.Chromatogr.1993:620:143-148)分析血漿中的氨基酸譜。根據(jù)如AminoAcidAnalysisSystemofWaters操作員手冊(cè)(MilfordMA,USA)中所述的PicoTag方法進(jìn)行其它氨基酸分析。為此，將終末樣品干燥并使用異硫氰酸苯酯直接衍生化。如所述使用HPLC方法定量存在的經(jīng)衍生化的氨基酸。因?yàn)槌Ｒ?guī)酸水解期間Trp和Cys被破壞，所以使用特殊的方法定量這兩種氨基酸。為了在水解期間防止Cys降解，首先使用過(guò)氧化氫將該氨基酸氧化為磺基丙氨酸，然后定量。色氨酸的分解以經(jīng)輕微修飾的Waters步驟為基礎(chǔ)。在該步驟中，在真空下干燥肽溶液的小份試樣，然后在1小時(shí)期間于15(TC下氮中，在含0.2%色胺的4M甲垸磺酸中水解。使用裝備有AlltechAltimaC18柱和熒光檢測(cè)的HPLC直接定量反應(yīng)產(chǎn)物。水解程度使用快速OPA測(cè)試(Nielsen,P.M.;Petersen,D.;Dambmann,C.Improvedmethodfordeterminingfoodproteindegreeofhydrolysis.JournalofFoodScience2001，66,642-646)，監(jiān)測(cè)用多種水解混合物孵育期間獲得的水解程度(DH)?？耸隙ǖ?KieldahlNitrogen)通過(guò)流動(dòng)注射分析(FlowInjectionAnalysis)測(cè)量總克氏氮。使用TecatorFIASTAR5000流動(dòng)注射體系，在590nm處定量從含蛋白質(zhì)的溶液中釋放的氨，所述體系裝備有TKNMethodCassette5000-040、具有SOFIA軟件的Pentium4計(jì)算機(jī)，和Tecator5027自動(dòng)采樣器。將對(duì)應(yīng)于本發(fā)明動(dòng)態(tài)范圍(0.5-20mgN/l)的樣品量與95-97%硫酸和Kjeltab—起置于消化管中，并進(jìn)行20(TC下30分鐘隨后36(TC下90分鐘的消化程序。注射進(jìn)FIASTAR5000體系中后，測(cè)量氮峰，從中可推理出被測(cè)量的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中存在的肽和蛋白質(zhì)的分子量分布在自動(dòng)HPLC體系上完成經(jīng)蛋白酶處理的蛋白質(zhì)樣品的肽大小分布分析，所述體系裝備有高壓泵、能夠注射10-100微升樣品的注射設(shè)備，和能夠在214nm監(jiān)測(cè)柱流出物的UV檢測(cè)器。用于該分析的住是用20mM磷酸鈉/250mM氯化鈉pH7.0緩沖液平衡的SuperdexPeptideHR10/300GL(Amersham)。注射樣品(典型地為50微升)后，在90分鐘內(nèi)以.5ml/min的流速用緩沖液從柱中洗脫多種組分。使用細(xì)胞色素C(Mw13500Da)、抑肽酶(Mw6510Da)和四甘氨酸(Mw246Da)的混合物作為分子量標(biāo)記物校準(zhǔn)該體系。以下的實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1雞卵溶菌酶不被胃蛋白酶或胰蛋白酶/糜蛋白酶中的任何而切割。為了測(cè)試其在人胃腸道中的可消化性，將雞卵溶菌酶與胃蛋白酶以及胰蛋白酶和糜蛋白酶的混合物體外孵育。兩種孵育均在下述pH條件下進(jìn)行，所述pH條件是胃(胃蛋白酶)和十二指腸(胰蛋白酶/糜蛋白酶)中盛行的pH。為此，將5%(w/w)溶菌酶溶液與酶(1%w/w酶比溶菌酶蛋白質(zhì))在37'C下孵育2小時(shí)。為了防止進(jìn)行的蛋白質(zhì)水解造成的重大pH改變，孵育在McIlvane緩沖液(0.2M檸檬酸加上Na2HP04)中進(jìn)行。在37'C水解兩小時(shí)后獲得的低DH值(見(jiàn)表1)證明了在模擬胃中和十二指腸與空腸中消化條件的條件下溶菌酶分子不能被降解，因?yàn)榭深A(yù)期成功的蛋白水解導(dǎo)致至少10%的DH值。因此，存在于完整的雞卵溶菌酶分子中的色氨酸殘基在胃腸道中不會(huì)被解離，因此意味著存在于完整雞卵溶菌酶中的色氨酸分子不能有助于血漿色氨酸水平。表1:通過(guò)胃蛋白酶和胰蛋白酶/糜蛋白酶混合物的溶菌酶水解<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實(shí)施例2在提高的PH值下，雞卵溶菌酶被枯草桿菌蛋白酶有效切割。為了測(cè)試非生理pH和酶條件下溶菌酶對(duì)酶水解的易感性，在堿性pH條件下將溶菌酶溶液與微生物枯草桿菌蛋白酶(EC3.4.21.62)體外孵育。為此，在pH7.0、8.0和9.0下將5%(w/w)溶菌酶溶液與12.5微升Protex6L./克存在的溶菌酶蛋白質(zhì)一起孵育。孵育在6(TC下進(jìn)行3小時(shí)，使用1MNaOH持續(xù)調(diào)節(jié)pH。孵育產(chǎn)生沒(méi)有任何顯著沉淀物的輕微混濁的溶液。用于失活枯草桿菌蛋白酶活性的加熱步驟后，根據(jù)材料和方法章節(jié)中所述方案測(cè)量多個(gè)孵育的DH值。與生理?xiàng)l件下獲得的結(jié)果(見(jiàn)實(shí)施例1)相反，使用枯草桿菌蛋白酶的堿性孵育導(dǎo)致完全的溶菌酶水解。pH7.0孵育得到6.3的DH，pH8.0孵育得到11.2的DH，pH9.0孵育得到16.4的DH。反應(yīng)產(chǎn)物隨后的SDS-PAGE分析表明，整個(gè)溶菌酶分子被降解，即枯草桿菌蛋白酶孵育后沒(méi)有殘余大分子量片段。另外，在Cr0wnpakCR+柱(Daicd)上對(duì)水解產(chǎn)物的HPLC分析揭示了含有色氨酸的肽未發(fā)生顯著的外消旋化，即便是在pH9.0下長(zhǎng)時(shí)間加熱后也未發(fā)生。實(shí)施例3使用Protex水解溶菌酶并鑒定形成的肽。使用NaOH將含10%(w/w)純?nèi)芫傅娜芤赫{(diào)節(jié)至pH8.2，并加熱至52°C。通過(guò)添加25微升Protex/g存在的蛋白質(zhì)開(kāi)始水解。在連續(xù)的攪拌下和將pH維持于8.2時(shí)，將水解持續(xù)5.5小時(shí)，得到?jīng)]有可見(jiàn)沉淀物的幾乎澄清的溶液。在用于失活Protex活性的加熱步驟后，取樣用于DH分析。溶液的DH顯示幾乎為30。/。。在10kDa濾器上超濾經(jīng)熱處理的溶液，得到完全澄清的液體。該澄清液體被用于LC/MS分析，用于存在的肽和蛋白質(zhì)的分子量分布分析，以及用于離子交換色譜。為了得到存在的肽和蛋白質(zhì)的分子量分布的印象，如材料和方法章節(jié)中所述對(duì)澄清的液體進(jìn)行分子量分析。獲得的結(jié)果(見(jiàn)圖3)清楚地表明幾乎所有摻入帶有芳香族側(cè)鏈的氨基酸(即色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸)的肽具有低于500kDa的分子量?？紤]到這些氨基酸的高分子量，意味著大部分這些小肽是三肽或二肽。根據(jù)材料和方法章節(jié)中所述步驟進(jìn)行LC/MS分析。通過(guò)選擇這些含有色氨酸("W")的肽，可以檢測(cè)肽AW、GNW、WIR、NAW、WVA、VAW、AWR、SLGNW和小量WW和SRWW。孵育后水解產(chǎn)物中游離色氨酸的水平被確立為代表少于1%的存在的總(溶菌酶)色氨酸。因?yàn)槎暮腿娜菀妆荒c壁中存在的肽運(yùn)載體吸收，所以毫無(wú)疑問(wèn)在口服攝入本發(fā)明的溶菌酶水解產(chǎn)物后，這類(lèi)肽中存在的色氨酸殘基會(huì)被快速吸收并導(dǎo)致提高的血漿色氨酸水平。實(shí)施例4提高水解產(chǎn)物的色氨酸含量。溶菌酶摻入了驚人的大量堿性精氨酸和賴(lài)氨酸殘基。另外，溶菌酶分子摻入了顯著量的酸性谷氨酸和天冬氨酸殘基。該數(shù)據(jù)已被用于設(shè)計(jì)朝向具有高Trp/LNAA比例的水解產(chǎn)物的創(chuàng)新和優(yōu)良的純化途徑。然而，該純化途徑的關(guān)鍵需求是，在還含有精氨酸或賴(lài)氨酸殘基或谷氨酸或天冬氨酸殘基任一的肽中，僅出現(xiàn)非常少的色氨酸殘基。如實(shí)施例3中所示，本文使用的特異水解途徑僅產(chǎn)生很少的含有精氨酸殘基的含色氨酸的肽，并且不產(chǎn)生含有賴(lài)氨酸、谷氨酸或天冬氨酸殘基的肽。理論預(yù)測(cè)，在pH3左右能夠達(dá)到含和不含谷氨酸或天冬氨酸殘基的肽之間的最大電荷差異。在pH5左右能夠達(dá)到含和不含精氨酸或賴(lài)氨酸殘基的肽之間的最大電荷差異。為了闡述該途徑的選擇能力，根據(jù)實(shí)施例3中說(shuō)明的步驟制備溶菌酶水解產(chǎn)物。然后使用乙酸將水解產(chǎn)物的pH調(diào)節(jié)至pH3.1，并將約0.5克蛋白質(zhì)應(yīng)用在用20mm檸檬酸鈉pH3.1平衡的SPSepharoseFF(GEHealthcare,Diegem,Belgium)柱的15ml柱床體積上。用一倍柱體積的檸檬酸鈉緩沖液洗滌柱，去除摻有谷氨酸或天冬氨酸的大部分肽后，將洗脫緩沖液變更為20mm檸檬酸鈉緩沖液pH5.1。用三倍體積的后一緩沖液洗滌柱時(shí)，洗脫了一系列含有色氨酸的肽。根據(jù)LC/MS分析，二肽AW以及三肽GNW、NAW、WVA、VAW大量存在，并存在小量戊肽SLGNW。多種pH5.1級(jí)分的氨基酸分析顯示，選擇性合并(sdectivepooling)產(chǎn)生具有1.75的分子Trp/LNAA比例的溶液和幾乎30%的色氨酸產(chǎn)率。更少選擇性的合并產(chǎn)生具有0.4的分子比例的溶液和70%的色氨酸產(chǎn)率。隨后，用三倍體積的20mM檸檬酸鈉pH7.1洗滌柱。根據(jù)LC/MS數(shù)據(jù)，該步驟洗脫了含精氨酸的肽WIR、AWIR并驚人地洗脫了肽WW。用1MNaOH、水和1M乙酸最后洗滌柱制備了用于下一輪的柱。實(shí)施例5二肽Ser-Trp的化學(xué)合成。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的肽技術(shù)合成二肽Ser-Trp。第一步中，通過(guò)碳酸酐方法(J.Am.Chem.Soc.1967,5012)將Z-Ser-OH和Trp-OMe偶聯(lián)，產(chǎn)生受保護(hù)的二肽Z-Ser-Trp-OMe。為此，將Trp-OMe.HCl懸浮于四氫呋喃(THF)中，隨后添加N-甲基嗎啉(NMM)。將混合物攪拌1小時(shí)，隨后添加至Z-Ser在四氫呋喃/二甲基酰胺(THF/DMF)中的溶液中。添加NMM的第二等價(jià)物，并將混合物冷卻至-15t:。以下述速率添加氯甲酸異丁酯，所述速率使得內(nèi)部溫度不超過(guò)-15"C。隨后，將混合物攪拌3小時(shí)，允許溫度提高至室溫并通過(guò)過(guò)濾去除沉淀的NMM.HCl。將濾液在4。C保持過(guò)夜，之后過(guò)濾額外的沉淀物并將濾液真空濃縮。通過(guò)柱色譜(Si02，乙酸乙酯/庚烷)純化殘基。將組合的級(jí)分濃縮，用水洗滌去除任何剩余的DMF并真空濃縮。在第二步中，使用Alcalase2.5LDX(/W./尸e;^^/仏1990,52)完成Z-Ser-Trp-OMe的酶水解，隨后的催化氫解提供了呈灰白色固體的期望的肽。為此，將純化的Z-Ser-Trp-OMe溶于WwO/7和水中，添加Alcalase2.5LDX(Novozymes,Bagsvaerd,丹麥)。攪拌混合物，直至(幾乎)所有的起始材料被消耗。然后將混合物真空濃縮，并將殘余物吸收在pH7的水中。用乙酸乙酯萃取水性混合物以去除任何剩余的起始材料，隨后酸化水相。通過(guò)用乙酸乙酯萃取分離期望的產(chǎn)物Z-Ser-Trp-OH;將萃取物在硫酸鈉上干燥并在真空中濃縮。在第三步中，獲得二肽Ser-Trp-OH。為此將濃縮的Z-Ser-Trp-OH溶于MeOH和水(l:l)中，添加Pd/C，在正的氫氣壓(5bar)下攪拌混合物。完成反應(yīng)后，通過(guò)過(guò)濾去除催化劑加上大部分產(chǎn)物，并棄去濾液。用milliQ水充分洗滌濾器，真空干燥濾液，得到呈白色到灰白色固體的二肽Ser-Trp-OH。如下達(dá)成額外的純化在丙酮-水的混合物中攪拌產(chǎn)物，并通過(guò)過(guò)濾分離肽。這得到了適合口服消耗的產(chǎn)物。實(shí)施例6健康志愿者中不同色氨酸來(lái)源對(duì)血漿Trp/LNAA比例和情緒的影響本研究的目的是在健康受試者中研究消耗含不同色氨酸的制劑后血漿Trp/LNAA譜和情緒。測(cè)試了以下的制劑-完整的a-乳白蛋白(見(jiàn)材料和方法)-經(jīng)水解的酪蛋白酸鹽(DH>20%;見(jiàn)材料和方法)-具有高Trp/LNAA比例的富含Tip的溶菌酶水解產(chǎn)物(見(jiàn)實(shí)施例4)-合成的SW二肽(實(shí)施例5)-游離的L-色氨酸(見(jiàn)材料和方法)。十八個(gè)健康的學(xué)生(9個(gè)男性和9個(gè)女性年齡18-30歲之間)參與了該研究。參與的排除標(biāo)準(zhǔn)是慢性病和當(dāng)前病，精神病或醫(yī)學(xué)病史，使用藥物或藥品，醇消耗(>2單位/天)，代謝疾病、激素-疾病或腸疾病和無(wú)規(guī)則的膳食或偏離標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)食習(xí)慣(通過(guò)健康和生活方式調(diào)査問(wèn)巻來(lái)評(píng)價(jià))。參與實(shí)驗(yàn)的受試者在體重指數(shù)的正常范圍內(nèi)(以kg計(jì)的BMI/n^在20-25之間)，女性受試者符合避孕。女性在其卵泡期的中晚期(第4-10天)參與，而使用避孕手段的女性當(dāng)她們實(shí)際使用避孕藥時(shí)參與。參與者是非吸煙者，并且在研究之前和期間不能使用任何醇。所有參與實(shí)驗(yàn)的受試者簽署征得同意書(shū)(InformedConsentForm)。該研究根據(jù)52ndWMAGeneralAssembly,Edinburgh,蘇格蘭，2000年10月所采取的優(yōu)良臨床試驗(yàn)規(guī)范(GoodClinicalPractice,GCP)EC原則進(jìn)行。指導(dǎo)受試者禁食過(guò)夜；只允許不含糖的水和茶。在五個(gè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的清晨階段，受試者來(lái)到實(shí)驗(yàn)室，攝入含有不同Trp或LNAA濃度的飲品后監(jiān)測(cè)血漿Trp/LNAA濃度和情緒。平衡多種飲品的出現(xiàn)順序，四個(gè)實(shí)驗(yàn)日通過(guò)一周的周期間隔開(kāi)。在每個(gè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的清晨，提供含有不同色氨酸(Trp)或LNAA濃度的312ml飲品(表1)。所有的飲品含有0.10g甜味劑(乙酰舒泛)并用凈水補(bǔ)充達(dá)到312ml。由不了解(blindto)膳食條件的助研人員管理不同飲品的施用。表l:使用的飲品的蛋白質(zhì)/氨基酸組成<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>攝入之前和攝入之后15、30、60、90、120、180和210分鐘時(shí)，在含肝素鈉的5ml真空采血管(vacutainer)中一式兩份收集血樣，然后于4°C下在5000rpm離心5分鐘。將得到的上清液與磺基水楊酸(4mg/100微升)混合，并直接儲(chǔ)存于-80。C直至分析。如vanEijketal(J.Chromatogr.1993:620:143-148)所述，利用2-3/miBischofSpherisorbODSII柱，用HPLC進(jìn)行血漿氨基酸分析。通過(guò)用血漿摩爾色氨酸濃度除以大中性氨基酸纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的血漿摩爾濃度總和，計(jì)算血漿Trp/LNAA比例。使用普通線(xiàn)性模型(GLM:SPSS12.0forWindows),借助于變量的重復(fù)測(cè)量多變量和單變量分析(MANOVA和ANOVA)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)在P=0.05的顯著性水平上評(píng)價(jià)。血漿Trp/LNAA值以條件和時(shí)間作為對(duì)血漿Trp/LNAA比例的受試者內(nèi)因素的第一種變量重復(fù)測(cè)量分析揭示了時(shí)間和條件的主要顯著影響和顯著的條件x時(shí)間相互作用。在提供"SYN，，(60分鐘后提高263%)和"WEPS"(90分鐘后提高255%)后發(fā)現(xiàn)了血漿Trp/LNAA比例中最高的顯著提高(見(jiàn)圖l)。這兩種產(chǎn)物后Trp/LNAA的提高比攝入"TRP'，(120分鐘后提高191%)或"ALAC"(120分鐘后提高67%)后顯著更快和更高。消耗"REF，后，從60分鐘起到210分鐘，存在顯著的Trp/LNAA降低(-27%)。發(fā)現(xiàn)用"WEPS"得到的Trp/LNAA中255%的提高可觀地超過(guò)了如先前用完整的o;-乳白蛋白(Markusetal.,2000;Booijetal.,2006)所發(fā)現(xiàn)的50-70%的提高，和所有較早報(bào)道的使用其它食物如碳水化合物時(shí)20-45%的提高(Markus,2003)。盡管血漿Trp/LNAA中40-50%的變異被認(rèn)為足以改變腦中的Trp水平和5-HT合成和釋放(Markusetal.，2000)，但是該提高被預(yù)期為引起可獲得的腦Trp禾n5-HT的高得多的提高，因此也可導(dǎo)致功能活性腦5-HT的更大釋放。情緒狀態(tài)類(lèi)型(POMS)。使用情緒狀態(tài)類(lèi)型調(diào)査問(wèn)巻(WaldandMellenbergh，NedTijdschrPsychol1990:45:86-90)的Dutch縮短版的紙-筆版本測(cè)量多個(gè)參與者的情緒改變，直觀類(lèi)比標(biāo)度(VASscale)范圍從"強(qiáng)烈不同意"到"強(qiáng)烈同意"POMS包括物種不同的情緒亞刻度；范圍從憤怒、抑郁、疲勞和緊張(表示消極的情緒狀態(tài))到有活力(涉及積極的情緒)。以條件和時(shí)間作為對(duì)總情緒分?jǐn)?shù)的受試者內(nèi)因素的變量重復(fù)測(cè)量分析揭示了時(shí)間的顯著影響和顯著的條件x時(shí)間相互作用；表明跨越時(shí)間的情緒改變?cè)诙鄠€(gè)條件之間顯著不同。攝入"WEPS"和"TRP"后60分鐘發(fā)現(xiàn)相當(dāng)?shù)那榫w改善，但是與"TRP"相比，只有"WEPS"直到攝入后210分鐘仍進(jìn)一步改善情緒。相反，攝入"REF"和"ALAC"后未發(fā)現(xiàn)情緒改變。完整的a-乳白蛋白后情緒效應(yīng)的缺失與先前的研究相當(dāng)，所述研究顯示完整的a-乳白蛋白后和僅在急性壓力暴露下的壓力易感受試者中，對(duì)情緒溫和的有益影響(Markusetal.,2000;Markusetal.,2000,Markus,2003)。盡管攝入"SYN"后情緒似乎改善，但是在該實(shí)驗(yàn)設(shè)定中該影響并不顯著。這些目前的結(jié)果提出血漿Tip/LNAA中255%的巨大提高可能足以在正常的非壓力易感的受試者中改善情緒?；谙惹暗陌l(fā)現(xiàn)，預(yù)期Trp-增強(qiáng)的溶菌酶水解產(chǎn)物對(duì)情緒的這些有益影響在處于高精神壓力條件下的壓力易感受試者中甚至?xí)?Markus，2003)。與我們的預(yù)期相反，攝入合成的二肽后不存在顯著的情緒改善。該預(yù)料之外的結(jié)果可能歸因于目前的實(shí)驗(yàn)設(shè)定，或歸因于來(lái)自這些多種來(lái)源的色氨酸生物可利用度的差異。表2:攝入酪蛋白水解產(chǎn)物("REF")、完整的a-乳白蛋白("ALAC")或Trp-增強(qiáng)的溶菌酶水解產(chǎn)物("WEPS")后血漿氨基酸濃度(/miol/l)隨時(shí)間的改變。時(shí)間(分鐘)<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表3:攝入游離的L-Trp("TRP")或合成的二肽SW("SYN")后，血漿氨基酸濃度(/miol/l)隨時(shí)間的改變。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>實(shí)施例7大規(guī)模溶菌酶水解。在更大規(guī)模的溶菌酶水解步驟中，基本上遵循實(shí)施例3中所述的步驟進(jìn)行一些較小的修飾。將含7.3%(w/w)純?nèi)芫傅娜芤杭訜嶂?5°C，然后使用NaOH將pH調(diào)節(jié)至pH8.2。通過(guò)添加25微升Protex6L/g干物質(zhì)開(kāi)始水解。在連續(xù)攪拌下和將pH維持于8.2并將溫度維持于53"C時(shí)，將水解持續(xù)2小時(shí)。然后將pH值提高至9.0并將孵育再繼續(xù)3.5小時(shí)，得到含有一些沉淀物的溶液。然后將溶液的pH降低至4.5，并將溶液冷卻至低于4°C。為了獲得完全澄清的產(chǎn)物，將液體濾過(guò)Z2000濾器(Pall)，隨后通過(guò)納米過(guò)濾去除過(guò)量的水和鹽。然后在12(TC對(duì)得到的濃縮物進(jìn)行UHT處理7秒，蒸發(fā)并最終干燥獲得干燥形式的溶菌酶水解產(chǎn)物。由此獲得的產(chǎn)物具有約0.19的摩爾Trp/LNAA比例。實(shí)施例8制備摻入溶菌酶水解產(chǎn)物的飲料。以下的配方說(shuō)明了無(wú)脂肪的、含溶菌酶水解產(chǎn)物的草莓飲品的制備。向IO克溶菌酶水解產(chǎn)物粉(根據(jù)實(shí)施例7制備)中添加40克葡萄糖、2.4克檸檬水、0.38克蘋(píng)果酸、0.15克三氯蔗糖(sucralose)和0.5克草莓香料(Buteressence,Zaandam,荷蘭)。該粉末混合物在1升水中容易地溶解，獲得具有高Trp/LNAA和高Tyr/BCAA比例的即飲型飲料。粉末混合物適用于例如藥囊填充?？墒褂枚喾N己知的技術(shù)生產(chǎn)包裝的液體制品。實(shí)施例9壓力易感和抗壓的健康志愿者中溶菌酶水解產(chǎn)物對(duì)壓力后表現(xiàn)的影響。本研究的目的是比較根據(jù)實(shí)施例7中所述步驟制備的溶菌酶水解產(chǎn)物與安慰劑(酪蛋白水解產(chǎn)物；見(jiàn)實(shí)施例6)對(duì)血漿Trp/LNAA水平的影響及其對(duì)壓力后表現(xiàn)任務(wù)造成的結(jié)果。已知使用的表現(xiàn)任務(wù)強(qiáng)調(diào)個(gè)體的"警覺(jué)"和"眼-運(yùn)動(dòng)控制"方面。四十位個(gè)體參與了本研究，其中有二十個(gè)男性和二十個(gè)女性。根據(jù)研究前的調(diào)査問(wèn)巻，一半該組被歸類(lèi)為抗壓的，另一半被歸類(lèi)為壓力易感的。個(gè)體的參與(in)和排除(exclusion)標(biāo)準(zhǔn)以及一般研究管理與實(shí)施例6中所述相同。圖4中給出所述研究設(shè)計(jì)的流程圖，圖5中給出典型研究日的概圖。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的清晨，受試者在禁食狀態(tài)下來(lái)到實(shí)驗(yàn)室。抵達(dá)后，給予他們含溶菌酶水解產(chǎn)物或安慰劑的飲品，即含有酪蛋白水解產(chǎn)物的飲品。測(cè)試飲品和安慰劑飲品的組成列于表4中。表4:使用的飲品的組成。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>消耗300ml飲品后90分鐘，采取血樣評(píng)價(jià)Trp/LNAA比例(見(jiàn)實(shí)施例6)。隨后，將抗壓組或壓力傾向組的受試者進(jìn)行表現(xiàn)測(cè)試，隨后暴露于壓力下。該壓力由必須在噪音刺激下進(jìn)行的算術(shù)任務(wù)組成。引導(dǎo)受試者相信噪音的存在或消失取決于他們?cè)跍y(cè)試中的表現(xiàn)。事實(shí)上，算術(shù)任務(wù)以所有的受試者每個(gè)試驗(yàn)都不成功的方式操作。己知該設(shè)定誘導(dǎo)生理壓力，并被認(rèn)為是高度不可控制的(Peters,M.L.,Godaert,G.L.R.,Ballieux,R.E.etal.(1998).Cardiovascularandcatecholamineresponsetoexperimentalstress:effectsofmentaleffortandcontrollability.Psychoneuroendocrinology.23，1—17)。算術(shù)任務(wù)后，重復(fù)第一種表現(xiàn)測(cè)試，來(lái)定量有效的血Trp/LNAA比例影響下，壓力對(duì)表現(xiàn)的影響。進(jìn)行的表現(xiàn)測(cè)試是MackworthClock測(cè)試(Mackworth,N(1948)Thebreakdownofvigilanceduringprolongedvisualsearch.QuartJExpPsych.1,6-21))和臨界追蹤任務(wù)(JexHRetal.,(1966)A"critical"trackingtaskforman-machineresearchrelatedtotheoperator'seffectivedelaytime.NASAContractR印NASACR.:1-105)。MackworthClock測(cè)試是被廣泛用于測(cè)量持久的時(shí)間段中"警覺(jué)"、機(jī)警和精神集中的測(cè)試。受試者坐在計(jì)算機(jī)屏幕前，所述計(jì)算機(jī)屏幕展示60個(gè)點(diǎn)的環(huán)狀排列，所述60個(gè)點(diǎn)模擬時(shí)鐘上的秒標(biāo)記。點(diǎn)以每500ms—個(gè)的速率，以順時(shí)針轉(zhuǎn)向短暫照亮。通常，該轉(zhuǎn)動(dòng)以單個(gè)(一個(gè)點(diǎn))跳躍繼續(xù)。告知受試者，該靶標(biāo)罕見(jiàn)地、以不規(guī)則的間隔通過(guò)遺漏正常順序中的一個(gè)點(diǎn)，以?xún)蓚€(gè)(連個(gè)點(diǎn))跳躍繼續(xù)。這會(huì)提示受試者盡可能快地按下按鈕。在45分鐘的測(cè)試期間總共出現(xiàn)了30次這樣的情況。10個(gè)情況發(fā)生在各連續(xù)的15分鐘周期內(nèi)，間隔范圍從8秒到7.2分鐘。臨界追蹤任務(wù)被用作知覺(jué)-運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)任務(wù)(perceptual-motorperformancetask)，所述任務(wù)在第一命令補(bǔ)償知覺(jué)-運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)任務(wù)(first-ordercompensatoryperceptual-motorcoordinationtask)中領(lǐng)!j量控帝U顯示的錯(cuò)誤信號(hào)的能力。在該任務(wù)中，受試者必須通過(guò)使用靈敏的操縱桿控制計(jì)算機(jī)屏幕上不穩(wěn)定的光標(biāo)。錯(cuò)誤會(huì)顯示為光標(biāo)與水平線(xiàn)性標(biāo)度的中點(diǎn)的水平偏差。受試者必須通過(guò)持續(xù)地進(jìn)行補(bǔ)償性操縱桿運(yùn)動(dòng)，保持不穩(wěn)定的光標(biāo)處于軸線(xiàn)中心，將偏差降低至零。光標(biāo)偏差的頻率作為時(shí)間的隨機(jī)、線(xiàn)性函數(shù)提高，因此要求受試者以逐漸更高的頻率進(jìn)行補(bǔ)償性運(yùn)動(dòng)。受試者的補(bǔ)償性應(yīng)答也會(huì)以下述頻率提高，從而喪失控制，所述頻率隨著具有提高的相位滯后(增加而不是減少錯(cuò)誤的應(yīng)答)。受試者喪失控制的頻率就是臨界頻率。將該測(cè)試進(jìn)行五次；排除最低和最高得分計(jì)算平均臨界頻率，作為該測(cè)試的因變量(dependentvariable)。消耗飲品后90分鐘測(cè)定血漿Trp/LNAA比例，揭示了在所應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)血漿Trp/LNAA比例改變的顯著影響(PO.OOOl)。溶菌酶水解產(chǎn)物("Trp-hydr")的攝入將血漿Trp/LNAA值提高至0.25pmol/l。酪蛋白水解產(chǎn)物("plc")的攝入得到0.08pmol/1的Trp/LNAA比例(圖6)。各相關(guān)氨基酸的值在表5中提供。表5:攝入安慰劑("plc")或溶菌酶水解產(chǎn)物("Trp-hydr")后的氨基酸濃度(拜o1/1)。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>攝入酪蛋白水解產(chǎn)物后，通過(guò)暴露于壓力下，進(jìn)行MackworthClock測(cè)試的兩組個(gè)體的表現(xiàn)均顯著受損。然而，攝入富含Trp的溶菌酶水解產(chǎn)物在抗壓組中防止了該受損的表現(xiàn)。非常驚人的是，富含Trp的水解產(chǎn)物在壓力傾向組中未防止這類(lèi)受損的表現(xiàn)。獲得的數(shù)據(jù)在圖7中圖示。在臨界追蹤任務(wù)中，入CT值指出受試者達(dá)到的最終復(fù)雜度食品。入CT值越高，控制越好。本實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)顯示暴露于壓力后，當(dāng)消耗富含Trp的水解產(chǎn)物時(shí)XCT值顯著更高。在抗壓的個(gè)體中，能夠記錄相對(duì)于安慰劑處理16%的提高。非常驚人的是，也在該測(cè)試中，壓力傾向組的XCT值顯示在富含Trp的水解產(chǎn)物和安慰劑之間無(wú)顯著差異。權(quán)利要求1.生產(chǎn)組合物的工藝，所述組合物包含水溶性的、含色氨酸的肽并具有多于0.15的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶，優(yōu)選地水解雞卵溶菌酶，以制備具有5和45之間的DH的水解產(chǎn)物，并任選地去除含精氨酸或賴(lài)氨酸的肽中的部分。2.根據(jù)權(quán)利要求1的工藝，其中所述組合物包含AW或GNW，優(yōu)選地包含AW和GNW。3.—種組合物，其包含至少兩種不同的水溶性的、含色氨酸的肽，并且其中組合物的Trp/LNAA比例至少為0.15，優(yōu)選地在0.15和1.8之間。4.根據(jù)權(quán)利要求3的組合物，其包含AW或GNW，優(yōu)選地包含AW和GNW。5.包含至少兩種選自二肽或三肽的不同肽的組合物，其中選自二肽或三肽的所述兩種肽各自以占二肽和三肽總量至少5mol。/。的量存在，且其中總色氨酸中多于30mol%作為與肽結(jié)合的色氨酸存在，并且優(yōu)選地，與肽結(jié)合的色氨酸中多于40mo1。/。、更優(yōu)選地多于50moP/。、進(jìn)一步更優(yōu)選地多于60mol%、仍然更優(yōu)選地多于70mol%和最優(yōu)選地多于80mol%以二肽或三肽的形式存在，優(yōu)選地所述組合物具有多于0.15的Trp/LNAA比例，優(yōu)選地具有15和1.8之間的Trp/LNAA比例。6.包含溶菌酶水解產(chǎn)物的水溶性級(jí)分的組合物。7.根據(jù)權(quán)利要求3到6中任一項(xiàng)的組合物，其可通過(guò)權(quán)利要求1或2的工藝獲得。8.根據(jù)權(quán)利要求3到7中任一項(xiàng)的組合物，其為溶菌酶水解產(chǎn)物，優(yōu)選地為雞卵溶菌酶水解產(chǎn)物。9.根據(jù)權(quán)利要求3到8中任一項(xiàng)的組合物，其中AW與GNW的摩爾比例在1比2禾B10比1之間，優(yōu)選地在1比2禾口5比1之間。10.根據(jù)權(quán)利要求3到9中任一項(xiàng)的組合物，其還包含游離的色氨酸。11.下述組合物用于改善情緒、認(rèn)知、食欲、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、機(jī)警、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的食物、飼料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的制備中作為成分的用途，所述組合物是通過(guò)水解溶菌酶、優(yōu)選地水解雞卵溶菌酶獲得的組合物，或是根據(jù)權(quán)利要求3到10中任一項(xiàng)的組合物。12.AW、SW或GNW用于改善情緒、認(rèn)知、食欲、機(jī)警、警覺(jué)、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的用途，或在用于情緒、食欲、機(jī)警、睡眠開(kāi)始和質(zhì)量、抗焦慮作用、抑郁、感情反應(yīng)控制或性行為的食物、飼料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的制備中作為成分的用途。13.溶菌酶生產(chǎn)下述組合物的用途，所述組合物包含至少兩種不同的水溶性、含色氨酸的肽，優(yōu)選地肽AW和GNW，并具有多于0.15的Trp/LNAA比例。14.食物、寵物食物、飼料、膳食補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的工藝生產(chǎn)的組合物，或根據(jù)權(quán)利要求3到10中任一項(xiàng)的組合物，或包含GNW、SW或AW。15.根據(jù)權(quán)利要求14的食物，其為嬰兒配方。16.根據(jù)權(quán)利要求3到10中任一項(xiàng)的組合物或水溶性含色氨酸肽用于在攝取肽或蛋白質(zhì)后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中Trp/LNAA比例的用途，或用于制備下述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物的用途，所述營(yíng)養(yǎng)藥物組合物用于在攝取肽后90分鐘內(nèi)、優(yōu)選地60分鐘內(nèi)、最優(yōu)選地30分鐘內(nèi)提高血漿中的Trp/LNAA比例。17.權(quán)利要求16的用途，其還包括與所述水溶性肽同時(shí)或幾乎同時(shí)地?cái)z取蛋白質(zhì)或含蛋白質(zhì)的食物。18.根據(jù)權(quán)利要求16或17的用途，其中血漿中的Trp/LNAA比例變得比根據(jù)權(quán)利要求3到10中任一項(xiàng)的組合物或水溶性肽的Trp/LNAA比例更高。全文摘要本發(fā)明涉及生產(chǎn)組合物的工藝，所述組合物包含水溶性肽并具有多于0.15的Trp/LNAA比例，所述工藝包括水解溶菌酶(優(yōu)選地為雞卵溶菌酶)以制備具有5和45之間的DH的水解產(chǎn)物。文檔編號(hào)C12P21/06GK101535494SQ200780041021公開(kāi)日2009年9月16日申請(qǐng)日期2007年10月30日優(yōu)先權(quán)日2006年11月2日發(fā)明者亞歷山大·露西雅·萊昂納德斯·迪沙托,安德烈·利納爾杜斯·魯斯·德,瓊?cè)鹚埂た藙诳?路泊·埃登斯,魯?shù)婪颉じダ涮K斯·威廉姆斯·柯納里斯·比克霍文·范申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司