專利名稱：抗il-17的抗體的制作方法
抗IL-17的抗體相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本專利申請(qǐng)要求2010年8月5日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/370，978的優(yōu)先權(quán)，其通過(guò)引用并入本文。通過(guò)引用并入的以電子形式提交的材料與本文一并提交的計(jì)算機(jī)可讀核苷酸/氨基酸序列表通過(guò)整體引用并入本文，所述序列表為2011年8月I日創(chuàng)建的名為“708661_ST25.TXT”的ASCII (TXT)文件，其大小為119，414字節(jié)。
背景技術(shù)：
白介素-17 (IL-17)是一種由活化的T-細(xì)胞分泌的促炎性細(xì)胞因子。細(xì)胞因子 IL-17 家族包括 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也稱為 IL-25)和 IL-17F，以及該家族的原型成員被稱為IL-17A (參見(jiàn)，例如，Moseley等，Cytokine Growth FactorRev.,14(2):155-74(2003) )0 IL-17家族的所有成員均具有類似的蛋白結(jié)構(gòu)，其具有對(duì)其三維形狀發(fā)揮關(guān)鍵作用的四個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基，但其與任何其他已知的細(xì)胞因子均不具有序列相似性。然而，在猴皰疹病毒的開(kāi)放閱讀框13中發(fā)現(xiàn)了 IL-17A的病毒同系物(參見(jiàn)，例如Yao等，Immunity, 3:811 (1995))，其與人IL-17A具有72%的氨基酸殘基同一性。已報(bào)道了 IL-17家族成員的多種功能，其主要涉及免疫應(yīng)答的調(diào)控。例如，IL-17參與上調(diào)粘附分子和誘導(dǎo)多種類型的細(xì)胞產(chǎn)生多種炎性細(xì)胞因子和趨化因子，所述多種細(xì)胞類型包括滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角化細(xì)胞、和巨噬細(xì)胞。而且，IL-17通過(guò)誘導(dǎo)趨化因子的釋放來(lái)誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞募集至炎癥部位，刺激前列腺素和金屬蛋白酶產(chǎn)生、以及抑制蛋白多糖合成。IL-17在造血祖細(xì)胞的成熟過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，并且IL-17在不同器官和組織中具有信號(hào)傳導(dǎo)的作用，所述器官和組織包括肺、關(guān)節(jié)軟骨、骨、腦、造血細(xì)胞、腎、皮膚和腸(參見(jiàn)，例如Kolls and Linden, Immunity, 21:467-476 (2004)，和 Fossiez 等,Int.Rev.Tmmunol., 16:541 (1998) )。IL-17 還能夠誘導(dǎo)金屬蛋白酶(MMP)的產(chǎn)生并且使金屬蛋白酶組織抑制劑( ΜΡ)下調(diào)(參見(jiàn)，例如Jovanovic等，J.Rheumatol.，28:712-718(2001))，以及阻斷IL-1和IL-17在體內(nèi)對(duì)炎癥和骨破壞具有協(xié)同作用(參見(jiàn)，例如 Chabaud 等,Arthritis Rheum., 44:1293-1303 (2001))。IL-17 (即，IL-17A)不適宜的產(chǎn)生或產(chǎn)生增加與多種疾病相關(guān)，如氣道炎癥、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)侵蝕、腹膜內(nèi)膿腫和粘連、炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(C0PD)、艾 迪生氏病、丙種球蛋缺乏癥、過(guò)敏性哮喘、斑禿、乳糜瀉、查加斯病、原發(fā)性肺纖維化、克隆氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、同種異體移植排斥(例如，腎)、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎、白塞氏病、某些類型的癌癥、血管新生、動(dòng)脈粥樣硬化、多發(fā)性硬化癥(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、敗血癥、膿毒性或內(nèi)毒素性休克、對(duì)過(guò)敏原暴露的應(yīng)答、幽門(mén)螺桿菌相關(guān)性胃炎、支氣管哮喘、強(qiáng)制性脊柱炎、狼瘡腎炎、牛皮癬、缺血、系統(tǒng)性硬化癥、中風(fēng)以及其他炎性疾病(參見(jiàn)，例如Witowski等，Cell Mol.Life Sc1.,61:567-579(2004) ；Antonysamy 等，J.1mmunol.，162:577-584(1999)，vanKooten 等，J.Am.Soc.Nephrol.，9:1526-1534(1998) ；Molet 等，J.Allergy Clin.Tmmunol., 108:430-438(2001) ；Teunissen 等,J.1nvest.Dermatol., 111:645-649(1998)；和 Kurasawa 等,Arthritis Rheum., 43:2455-2463(2000))。從上述內(nèi)容可以看出，IL-17可能是某些炎性或自身免疫性疾病的治療靶點(diǎn)。出于這個(gè)目的，已有研究提出采用與IL-17結(jié)合的抗體治療IL-17介導(dǎo)的疾病和病癥(參見(jiàn)，例如國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)W 02006/013107和W02007/117749 ;以及美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2008/0269467A1和2009/0280131A1 )。此外，通過(guò)IL-17特異性抗體或與IL-17結(jié)合的可溶性受體阻斷IL-17的生物活性，能夠在多種動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型中減輕炎癥和骨侵蝕(參見(jiàn)，例如 Lubberts 等，Arthritis&Rheumatism, 50:650-659 (2004))。但是，由于其在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、穩(wěn)定性和療效不理想，導(dǎo)致目前IL-17抗體的治療應(yīng)用受到局限。因此，需要一種IL-17結(jié)合劑(例如，抗體)，其與IL-17具有較高的結(jié)合親和性，在體內(nèi)顯示出增加的穩(wěn)定性、改善的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、和有效中和IL-17的活性。本發(fā)明即提供了這樣一種IL-17結(jié)合劑。發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括下述中的一種或兩種:(a)免疫球蛋白重鏈多肽，其包括SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的殘基32、53和59中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，以及任選地SEQ ID NO:1的殘基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或其包含至少五個(gè)氨基酸的片段，以及(b)免疫球蛋白輕鏈多肽，其包括SEQ ID N0:23，但其中SEQ ID NO:23的殘基9、10、11、
13、17、20、21和22中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO: 23具有至少85%同一性的氨基酸序列。本發(fā)明還提供了一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的殘基50被S、A、或I殘基取代，以及任選地SEQ ID N0:1的殘基31、32、35、40、52、62、66、88、和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的殘基104、109、和115中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，以及任選地SEQ ID N0:1的殘基100、101、102、106、107、108、和111中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。本發(fā)明提供了一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID N0:78、或SEQ IDNO: 79，或者與所述序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了皮下給予每只小鼠1、3、和IOyg劑量的hIL-17后，KC (CXCLl)隨時(shí)間變化的曲線。圖2顯示了給予小鼠hIL-17兩小時(shí)后，抗IL17抗體(與SEQ ID N0:24與SEQ IDNO:4配對(duì))對(duì)血清KC水平的劑量依賴性的抑制。
圖3顯示了實(shí)施例2中描述的HC和LC結(jié)合的BIAC0RE A100解離曲線。圖4顯示了實(shí)施例3中描述的人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)滑膜成纖維細(xì)胞中IL-6釋放試驗(yàn)的結(jié)果。圖5顯示了 ELISA的檢測(cè)結(jié)果，ELISA用于檢測(cè)實(shí)施例4中描述的抗IL17a抗體對(duì)受體-配體結(jié)合的抑制。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽和/或分離的免疫球蛋白輕鏈多肽，或其片段(例如，免疫原性片段)?！癐L-17結(jié)合劑”指與細(xì)胞因子IL-17特異性結(jié)合的分子，尤其是蛋白質(zhì)分子。優(yōu)選地，IL-17結(jié)合劑是抗體或其片段(例如，免疫原性片段)。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“免疫球蛋白”或“抗體”指在脊椎動(dòng)物血液或其他體液中發(fā)現(xiàn)的蛋白，其被免疫系統(tǒng)用于識(shí)別和中和外源性物質(zhì)，如細(xì)菌和病毒。完整的免疫球蛋白通常由四個(gè)多肽組成:兩個(gè)相·同的重鏈(H)多肽和兩個(gè)相同的輕鏈(L)多肽。各重鏈均含有一個(gè)N端可變(Vh)區(qū)和三個(gè)C端恒定(CH1XH2和CH3)區(qū)，并且各輕鏈均含有一個(gè)N端可變(')區(qū)和一個(gè)C端恒定(CJ區(qū)。根據(jù)其恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，可以將抗體的輕鏈分成兩種不同類型，即K或λ。在典型的免疫球蛋白中，各輕鏈與重鏈通過(guò)二硫鍵連接，并且兩條重鏈之間通過(guò)二硫鍵相互連接。輕鏈可變區(qū)與重鏈可變區(qū)對(duì)齊，輕鏈恒定區(qū)與重鏈第一恒定區(qū)對(duì)齊。重鏈其余的恒定區(qū)相互對(duì)齊。各對(duì)輕鏈和重鏈的可變區(qū)形成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。V1^P'區(qū)具有相同的基本結(jié)構(gòu)，各區(qū)域均包含四個(gè)框架區(qū)，其序列相對(duì)保守?？蚣軈^(qū)通過(guò)三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)相連。三個(gè)⑶R，已知為⑶R1XDR2、和⑶R3，形成抗體的“高變區(qū)”，其負(fù)責(zé)與抗原結(jié)合。四個(gè)框架區(qū)(FW或FR)大部分采用β_片層構(gòu)象，⑶R形成環(huán)狀連接，在某些情況下包括β_片層構(gòu)象。輕鏈和重鏈的恒定區(qū)并不直接涉及抗體與抗原的結(jié)合，但是表現(xiàn)出不同的效應(yīng)器功能，如通過(guò)效應(yīng)器分子和細(xì)胞之間的相互作用來(lái)參與抗體依賴性細(xì)胞毒作用。本發(fā)明的IL-17結(jié)合劑能夠優(yōu)選地與白介素-17(IL-17或IL-17A)結(jié)合。IL-17A是稱為IL-17家族的一組細(xì)胞因子的重要成員。最初將IL-17A鑒定為嚙齒類動(dòng)物T-細(xì)胞雜交瘤的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，在嚙齒類動(dòng)物中被稱為CTLA8 (Rouvier等，J.1mmunol.，150(12):5445-5456 (1993) )。IL-17A與被稱為IL-17R的I型細(xì)胞表面受體結(jié)合，IL-17R至少具有三個(gè)變體 IL17RA、IL17RB、和 IL17RC (Starnes 等，J.1mmunol.，169(2):642-646(2002))。除了IL-17A 以外，IL-17 家族還包括細(xì)胞因子 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也稱為 IL-25)、和IL-17F。IL-17家族的所有成員均具有相似的蛋白結(jié)構(gòu)，其具有對(duì)其三維結(jié)構(gòu)十分關(guān)鍵的四個(gè)高度保守的半胱氨酸殘基，但其與任何其他已知的細(xì)胞因子均不具有序列相似性。如上文所討論的，IL-17蛋白家族成員表現(xiàn)出多種免疫調(diào)節(jié)功能，這主要是由于其能夠誘導(dǎo)免疫信號(hào)分子。特別地，IL-17表現(xiàn)出能夠誘導(dǎo)和介導(dǎo)促炎性應(yīng)答，其通常與過(guò)敏應(yīng)答相關(guān)。IL-17 誘導(dǎo)細(xì)胞因子，如 IL-6、G-CSF, GM-CSF, IL-1 β、TGF- β、TNF- α、趨化因子(例如，IL-8、GRO-α、和MCP-1)和前列腺素(例如，PGE2)從多種細(xì)胞類型(例如，成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角化細(xì)胞、和巨噬細(xì)胞)產(chǎn)生。細(xì)胞因子的釋放可引起多種功能，如氣道重塑，其是IL-17應(yīng)答的特征。趨化因子的表達(dá)增加吸引包括中性粒細(xì)胞在內(nèi)的其他細(xì)胞，但不包括嗜酸性粒細(xì)胞。IL-17的功能對(duì)⑶4+Τ-細(xì)胞亞類也是必須的，⑶4+Τ-細(xì)胞亞類被稱為T(mén)輔助17 (Thl7)細(xì)胞的。如此，IL-17蛋白家族與多種免疫和自身免疫相關(guān)疾病的病理學(xué)相關(guān)，包括但不限于，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、狼瘡、同種異體移植排斥、和抗-腫瘤免疫(參見(jiàn)，例如 Aggarwal 等，J.Leukoc.Biol., 71 (I): 1-8(2002))。本發(fā)明的IL-17結(jié)合劑能夠與本文所述的IL-17蛋白家族的任意成員，例如IL-17A和/或IL-17F，結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，IL-17結(jié)合劑與IL-17A蛋白結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方式中，IL-17結(jié)合劑能夠與IL-17A人和/或非人直系同源物結(jié)合或交叉反應(yīng)。本發(fā)明的分離的IL-17結(jié)合劑包括免疫球蛋白重鏈多肽，或其中的包含至少五個(gè)氨基酸的片段，和/或免疫球蛋白輕鏈多肽，或其中的包含至少五個(gè)氨基酸的片段。在一個(gè)實(shí)施方式中，分離的IL-17結(jié)合劑包括免疫球蛋白重鏈多肽或免疫球蛋白輕鏈多肽。在另一個(gè)實(shí)施方式中，分離的IL-17結(jié)合劑包括免疫球蛋白重鏈多肽和免疫球蛋白輕鏈多肽。能夠與IL-17蛋白家族中的一個(gè)或多個(gè)成員結(jié)合的若干免疫球蛋白重鏈和輕鏈的氨基酸序列均為本領(lǐng)域所公知的(參見(jiàn)，國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)W02006/013107和W02007/117749 ；以及美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2008/0269467A1和2009/0280131A1 )。與IL-17結(jié)合的免疫球蛋白重鏈多肽的一個(gè)例子包括SEQ ID NO:1，或與SEQ IDNO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如，與其具有至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的同一性)。在本發(fā)明中，免疫球蛋白重鏈多肽包括SEQ ID N0:1，但其中SEQ ID NO:1的一個(gè)或多個(gè)殘基被不同氨基酸殘基取代。在這一方面，SEQ ID NO:1中殘基32、53、和59中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，并且任選地SEQ ID NO:1中殘基30、
31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和 97 中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。SEQID NO:1 中的各氨基酸殘基 30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和 97 均可以被任意適宜的氨基酸殘基取代，其在各位置可以相同或不同。氨基酸的“替換”或“取代”指在給定位置的一個(gè)氨基酸或殘基被在相同位置的另一個(gè)氨基酸或多肽序列內(nèi)的殘基取代。氨基酸可被大致分成“芳香族”或“脂肪族”。芳香族的氨基酸包含芳環(huán)?！胺枷阕濉卑被岬睦影ńM氨酸(H或His)、苯丙氨酸(F或Phe)、酪氨酸(Y或Tyr)、和色氨酸(W或Trp)。非芳香族氨基酸可被大致分為“脂肪族”?！爸咀濉卑被岬睦影ǜ拾彼?G或Gly)、丙氨酸(A或Ala)、纈氨酸(V或Val)、亮氨酸(L或Leu)、異亮氨酸(I或He)、甲硫氨酸(M或Met)、絲氨酸(S或Ser)、蘇氨酸(T或Thr)、半胱氨酸(C或Cys)、脯氨酸(P或pro)、谷氨酸(E或Glu)、天冬氨酸(A或Asp)、天冬酰胺(N或Asn)、谷氨酰胺(Q或Gin)、賴氨酸(K或Lys)、和精氨酸(R或Arg)?？梢詫⒅咀灏被嵩俜殖伤膫€(gè)亞組?！按笾咀宸菢O性亞組”由纈氨酸、亮氨酸、和異亮氨酸組成?！爸咀逦O性亞組”由甲硫氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、和半胱氨酸組成。“脂肪族極性/帶電荷亞組”由谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、和精氨酸組成。“小殘基亞組”由甘氨酸和丙氨酸組成。可以將帶電荷/極性氨基酸組再細(xì)分成三個(gè)亞組:“正電荷亞組”由賴氨酸和精氨酸組成，“負(fù)電荷亞組”由谷氨酸和天冬氨酸組成，以及“極性亞組”由天冬酰胺和谷氨酰胺組成。可以將芳香族氨基酸再分成兩亞組:“氮環(huán)亞組”由組氨酸和色氨酸組成以及“苯基亞組”由苯丙氨酸和 酪氨酸組成。短語(yǔ)“保守性氨基酸取代”或“保守性突變”指一個(gè)氨基酸被與其具有相同性質(zhì)的另一個(gè)氨基酸取代。確定各氨基酸之間共同性質(zhì)的有效方法為分析同源有機(jī)體相應(yīng)蛋白間氨基酸變化的歸一化頻率(Schulz, G.E.and R.H.Schirmer, Principles of ProteinStructure, Springer-Verlag, New York (1979))。根據(jù)這樣的分析,可以將氨基酸的組定義為組內(nèi)的氨基酸可以優(yōu)選地互換，因而其對(duì)總體蛋白結(jié)構(gòu)的影響彼此最為類似(Schulz，G.E.and R.H.Schirmer,同上)。保守性氨基酸取代的例子包括上述亞組內(nèi)部的氨基酸取代，例如賴氨酸可換為精氨酸，反之亦然，這樣可以保持其帶有正電荷；谷氨酸可換為天冬氨酸，反之亦然，這樣可以保持其帶有負(fù)電荷；絲氨酸可換為蘇氨酸，這樣能夠保持其具有游離的-OH ;以及谷氨酰胺可換為天冬酰胺，這樣能夠保持其具有游離的-nh2?！鞍氡Ｊ匦酝蛔儭卑ㄓ脤儆谏衔乃型唤M但不屬于同一亞組的氨基酸進(jìn)行的氨基酸取代。例如，將天冬氨酸換成天冬酰胺，或?qū)⑻於０窊Q成賴氨酸的突變均涉及屬于同一組但是不同亞組的氨基 酸?！胺潜Ｊ匦酝蛔儭鄙婕安煌M之間的氨基酸取代，例如將賴氨酸替換成色氨酸，或?qū)⒈奖彼崽鎿Q成絲氨酸等。在一個(gè)實(shí)施方式中，分離的IL-17結(jié)合劑包括免疫球蛋白重鏈多肽，其包含SEQ IDNO: USSEQ ID NO:1的殘基32被H (組氨酸)、S (絲氨酸)、或F (苯丙氨酸)殘基取代、SEQID NO:1的殘基53被E (谷氨酸)或H (組氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基59被H (組氨酸)殘基取代、或前述取代的任意組合。除了上文中討論的氨基酸取代以外，免疫球蛋白重鏈多肽任選地可以包含其他氨基酸取代。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫球蛋白重鏈多肽包括SEQ ID NO: USSEQ ID NO:1的殘基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。在另一個(gè)實(shí)施方式中，免疫球蛋白的重鏈多肽包括SEQ ID N0:USSEQ ID N0:1的殘基30被N (天冬酰胺)殘基取代、SEQ ID N0:1的殘基31被N (天冬酰胺)或D (天冬氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基35被T (蘇氨酸)、N (天冬酰胺)、或D (天冬氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基40被T (蘇氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基50被A (丙氨酸)、S(絲氨酸)、1 (異亮氨酸)、或G (甘氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基52被N (天冬酰胺)或R (精氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基53被E (谷氨酸)或H (組氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基59被H (組氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基62被G (甘氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基66被V (纈氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基69被I (異亮氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基75被D (天冬氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基79被V (纈氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基88被V (纈氨酸)殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基97被V (纈氨酸)、T (蘇氨酸)、L (亮氨酸)、或F (苯丙氨酸)、或前述取代的任意組
八
口 ο示例性的免疫球蛋白重鏈多肽可以包含下述氨基酸序列中的任意一個(gè):SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3-5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 10-20、SEQ ID NO:35-72、SEQ ID NO:76 和 SEQ ID NO:77。本發(fā)明還提供了一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽含有氨基酸序列SEQ ID NO:1JSSEQ ID NO:1的殘基50被不同殘基取代，和任選地SEQ ID NO:1中的殘基31、32、35、40、52、62、66、88、和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。就此而言，SEQ ID N0:1的50、31、32、35、40、52、62、66、88、和97位的氨基酸殘基可以被本文所描述的任意適宜的氨基酸殘基取代。在一個(gè)實(shí)施方式中，SEQ ID NO:1的殘基50被S、A、或I殘基取代。在其他實(shí)施方式中，SEQ ID NO:1的殘基31被N或D殘基取代，SEQ ID NO:1的殘基35被N、T、或D殘基取代，SEQ ID NO:1的殘基40被T殘基取代，SEQ ID NO:1的殘基52被N或R殘基取代，SEQ ID NO:1的殘基62被G殘基取代，SEQID NO:1的殘基66被V殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基88被V殘基取代，SEQ ID NO:1的殘基97被V、T、L、或F殘基取代，或前述取代的任意組合。例如，免疫球蛋白重鏈多肽可以包括 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:74、或 SEQ IDNO:75中的任意一個(gè)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽含有氨基酸序列SEQ ID N0:USSEQ ID NO:1的殘基104、109、和115中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，和任選地SEQ ID N0:1中的殘基100、101、102、106、107、108、和111中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。就此而言，SEQ ID NO:1的100、101、102、104、106、107、108、109、111、和115位的氨基酸殘基可以被本文所描述的任意適宜氨基酸殘基取代。在一個(gè)實(shí)施方式中，SEQ ID NO:1的殘基104被V殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基109被V殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基115被N或E殘基取代、或前述取代的任意組合。在其他實(shí)施方式中，SEQ ID NO:1的殘基100被H殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基101被H或F殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基102被E殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基106被N殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基107被S殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基108被H或F殘基取代、SEQ ID NO:1的殘基111被S殘基取代、或前述取代的任意組合。例如，免疫球蛋白重鏈多肽可以包括 SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、或 SEQ ID NO: 73。在另一個(gè)實(shí)施方式中，IL-17結(jié)合劑可以包括免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽含有氨基酸序列SEQ ID NO:1JSSEQ ID NO:1中被插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基?？梢詫⑷我鈹?shù)量的氨基酸殘基插入SEQ ID NO:1。優(yōu)選地，將至少一個(gè)氨基酸殘基(例如，2個(gè)或更多、3個(gè)或更多、5個(gè)或更多、或者8個(gè)或更多的氨基酸殘基)，但是少于20個(gè)氨基酸殘基(例如，18個(gè)或更少、15個(gè)或更少、12個(gè)或更少、或者10個(gè)或更少的氨基酸殘基)插入SEQ ID NO:1。優(yōu)選地，將約3至約20個(gè)氨基酸殘基(例如，約3-5個(gè)氨基酸殘基、約5-10個(gè)氨基酸殘基、約10-15個(gè)氨基酸殘基、或約15-20個(gè)氨基酸殘基、或者任意兩個(gè)前述值定義的范圍)插入SEQ ID NO:1。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，將不超過(guò)8個(gè)氨基酸殘基插入SEQ ID NO:1。例如，免疫球蛋白重鏈多肽可以包括SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79。對(duì)IL-17具有特異性的免疫球蛋白輕鏈多肽的一個(gè)例子包括SEQ ID NO: 23，或與其具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如，與其具有至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的同一性)。在本發(fā)明中，分離的IL-17結(jié)合劑包括免疫球蛋白輕鏈多肽，所述免疫球蛋白輕鏈多肽含有SEQ ID N0:23 JSSEQ ID NO:23殘基中的一個(gè)或多個(gè)被不同的氨基酸殘基取代。在這一方面，SEQ ID N0:23的殘基9、10、11、13、17、20、21、和22中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。SEQ ID N0:23的氨基酸殘基9、10、11、13、17、20、21、和22可以被本文所描述的任意適宜氨基酸殘基取代。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫球蛋白輕鏈多肽包括SEQ ID N0:23，但SEQ ID N0:23的殘基9被Y (酪氨酸)殘基取代、SEQ ID N0:23的殘基10被R (精氨酸)殘基取代、SEQ IDNO: 23的殘基11被T (蘇氨酸)殘基取代、SEQ ID NO: 23的殘基13被L (亮氨酸)或I (異亮氨酸)殘基取代、SEQ ID NO: 23的殘基17被G (甘氨酸)殘基取代、SEQ ID NO: 23的殘基20被K (賴氨酸)殘基取代、SEQ ID NO: 23的殘基21被V (纈氨酸)殘基取代、SEQ IDNO:23的殘基22被D (天冬氨酸)殘基取代、或前述取代的任意組合。例如，免疫球蛋白輕鏈多肽可以包括氨基酸序列 SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO:80、或 SEQ ID NO:81。本發(fā)明不限于分離的IL-17結(jié)合劑，其包含被本文所述的特定氨基酸殘基取代的免疫球蛋白重鏈多肽或輕鏈多肽。事實(shí)上，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 23的任意氨基酸殘基均可以被不同氨基酸殘基，以任意組合取代，或可以將任意數(shù)量的氨基酸殘基插入SEQ IDNO:1或SEQ ID NO: 23，只要氨基酸取代或插入的結(jié)果是使得IL-17結(jié)合劑的生物活性增強(qiáng)或改善即可。IL-17結(jié)合劑的“生物活性”指，例如與特定IL-17表位的結(jié)合親和性、在體內(nèi)對(duì)IL-17活性的中和作用(例如，IC5(I)、在體內(nèi)的穩(wěn)定性(包括但不限于熱穩(wěn)定性和蛋白水解穩(wěn)定性)、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、IL-17結(jié)合劑的免疫原性、和交叉反應(yīng)性(例如，與非人同源或直系同源的IL-17之間，或與其他蛋白或組織之間)。本領(lǐng)域公知的抗原結(jié)合劑的其他生物學(xué)性質(zhì)或特性包括，例如親和力、選擇性、溶解性、折疊、免疫毒性、表達(dá)、制劑、和催化活性。可以采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對(duì)上述性質(zhì)或特性進(jìn)行觀察、測(cè)量、和/或評(píng)價(jià)，所述標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包括但不限于，ELISA、競(jìng)爭(zhēng)性ELISA、BIAC0RE或KINEXA表面等離子共振分析、體外或體內(nèi)中和試驗(yàn)、受體結(jié)合試驗(yàn)、細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子產(chǎn)生和/或分泌檢測(cè)、以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫組化檢測(cè)。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)對(duì)IL-17結(jié)合劑活性的“抑制”或“中和”指基本上拮抗、抑制、阻止、限制、延緩、破壞、消除、終止、或逆轉(zhuǎn)，例如IL-17生物活性，或與IL-17相關(guān)的疾病或病癥的進(jìn)程或嚴(yán)重程度的能力。本發(fā)明的分離的IL-17結(jié)合劑優(yōu)選抑制或中和IL-17的活性達(dá)至少約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約100%，或上述值中任意兩個(gè)所定義的范圍。如本文所描述的，本發(fā)明的分離的IL-17結(jié)合劑可以是完整抗體，或抗體的片段。術(shù)語(yǔ)“抗體的片段”、“抗體片段”、或“抗體的功能性片段”在本文中可以互換使用，其是指抗體中保留與抗原特異性結(jié)合能力的一個(gè)或多個(gè)片段(參見(jiàn)，通常，Holliger等，Nat.Biotech.，23(9):1126-1129(2005))。分離的IL-17結(jié)合劑可以含有任意IL-17結(jié)合抗體片段?？贵w片段優(yōu)選包含例如一個(gè)或多個(gè)CDR、可變區(qū)(或其部分片段)、恒定區(qū)(或其部分片段)、或其組合?？贵w片段的例子包括，但不限于，(i)Fab片段，其是包含'、VH、Q、和CH1結(jié)構(gòu)域的單價(jià)片段；(ii)F(ab’)2片段，其是由兩個(gè)Fab片段在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫鍵連接組成的二價(jià)片段；以及(iii) Fv片段，其包含抗體單臂的\和Vh結(jié)構(gòu)域。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，分離的IL-17結(jié)合劑是抗體或抗體片段，其包含(a)免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽含有SEQ ID N0:2-22，或SEQ ID NO:31-79中的任意一個(gè)氨基酸序列，或其片段，以及(b)免疫球蛋白輕鏈多肽，其含有SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:28,SEQ ID N0:80、或SEQ ID N0:81的氨基酸序列，或其片段。在分離的IL-17結(jié)合劑包含免疫球蛋白重鏈或輕鏈多肽的實(shí)施方式中，所述片段可 以是任意尺寸，只要片段能結(jié)合至IL-17，并能優(yōu)選地抑制IL-17的活性。在這一方面，免疫球蛋白重鏈多肽的片段優(yōu)選包含約5至18個(gè)氨基酸(例如，約5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、或前述值中任意兩個(gè)所定義的范圍)。類似地，免疫球蛋白輕鏈多肽的片段擬包含約5至18個(gè)氨基酸(例如，約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、或前述值中任意兩個(gè)所定義的范圍)。當(dāng)IL-17結(jié)合劑是抗體或抗體片段時(shí)，抗體或抗體片段包含任意合適類型的恒定區(qū)(F。)。優(yōu)選地，抗體或其片段包含基于野生型IgGl、IgG2、或IgG4抗體,或其變體的恒定區(qū)。IL-17結(jié)合劑還可以是單鏈抗體片段。單鏈抗體片段的例子包括，但不限于，(i)單鏈Fv (scFv)，其是由Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域(S卩，'和Vh)組成的單價(jià)分子，由其由能夠使兩個(gè)結(jié)構(gòu)域合成一條多肽鏈的合成連接子連接(參見(jiàn)，例如 Bird 等，Science,242:423-426 (1988) ；Huston 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 85:5879-5883(1988);以及 Osbourn 等，Nat.Biotechnol.，16:778(1998))和(ii)雙抗體，其為多肽鏈的二聚體，其中各多肽鏈均包含通過(guò)肽連接子連接至'的Vh，肽連接子非常短從而允許Vh與\之間能夠在同一多肽鏈配對(duì)，籍此使不同Vh-'多肽鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域之間配對(duì)，以產(chǎn)生具有兩個(gè)功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的二聚體分子?？贵w片段是本領(lǐng)域公知的，更加詳細(xì)的描述參見(jiàn)例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2009/0093024A1。
分離的IL-17結(jié)合劑還可以是細(xì)胞內(nèi)抗體或其片段。細(xì)胞內(nèi)抗體是一種在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)和發(fā)揮功能的抗體。細(xì)胞內(nèi)抗體一般缺少二硫鍵，其能夠通過(guò)其特異性結(jié)合活性來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)或活性。細(xì)胞內(nèi)抗體包括單結(jié)構(gòu)域片段，例如分離的Vh和\結(jié)構(gòu)域以及ScFvs0細(xì)胞內(nèi)抗體可以包括連接至細(xì)胞內(nèi)抗體N端或C端的亞細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)，以使其在存在靶蛋白的亞細(xì)胞組件中高濃度的表達(dá)。通過(guò)與靶基因的相互作用，細(xì)胞內(nèi)抗體通過(guò)，例如加速靶蛋白降解和在非生理性亞細(xì)胞組件中隔離靶蛋白的機(jī)制，來(lái)調(diào)節(jié)靶蛋白的功能和/或?qū)崿F(xiàn)表型/功能敲除。細(xì)胞內(nèi)抗體介導(dǎo)的基因失活的其他機(jī)制可以依賴于細(xì)胞內(nèi)抗體導(dǎo)向的表位，如結(jié)合至靶蛋白的催化位點(diǎn)，或?qū)蛑羺⑴c蛋白-蛋白、蛋白-DNA、或蛋白-RNA相互作用的表位。分離的IL-17結(jié)合劑可以是，或可以來(lái)自人抗體、非人抗體、或嵌合抗體?！扒逗稀敝赴撕头侨藚^(qū)域的抗體或其片段。非人抗體包括分離自任意非人動(dòng)物，例如嚙齒類動(dòng)物(如，小鼠或大鼠)的抗體。IL-17結(jié)合劑的免疫球蛋白重鏈多肽可以來(lái)自人抗體、非人抗體、或嵌合抗體，其不依賴于IL-17結(jié)合劑的免疫球蛋白輕鏈多肽是否來(lái)自人抗體、非人抗體、或嵌合抗體。換言之，例如，免疫球蛋白重鏈多肽可以來(lái)自人抗體，免疫球蛋白輕鏈多肽可以來(lái)自非人抗體?；蚍粗?，免疫球蛋白重鏈多肽可以來(lái)自非人抗體，免疫球蛋白輕鏈多肽可以來(lái)自人抗體。或者，免疫球蛋白重鏈多肽可以來(lái)自嚙齒類動(dòng)物抗體或其片段，免疫球蛋白輕鏈多肽可以來(lái)自人抗體或其片段。這一方案可能是有用的，例如用于將抗體人源化。在另一個(gè)實(shí)施方式中，免疫球蛋白重鏈多肽和免疫球蛋白輕鏈多肽均來(lái)自人抗體或非人抗體?；蛘撸庖咔虻鞍字劓湺嚯暮兔庖咔虻鞍纵p鏈多肽均是嵌合抗體?？梢酝ㄟ^(guò)任意方法獲得人抗體、非人抗體、或嵌合抗體，包括通過(guò)體外來(lái)源(例如，產(chǎn)生重組抗體的雜交瘤或細(xì)胞系)和體內(nèi)來(lái)源(例如，嚙齒類動(dòng)物)。產(chǎn)生抗體的方法是本領(lǐng)域所公知的，其描述參見(jiàn)例如K6hler and Milstein, Eur.J.1mmunol.，5:511-519 (1976) ；Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A LaboratoryManual, CSH Press (1988)；和 C.A.Janeway 等(eds.), Immunobiology, 5th Ed., GarlandPublishing, New York, NY(2001))。在某些實(shí)施方式中，可以使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如，小鼠)生產(chǎn)人抗體或嵌合抗體，其一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源性的免疫球蛋白基因被一個(gè)或多個(gè)人免疫球蛋白基因所取代。內(nèi)源性抗體基因被人抗體基因有效取代的轉(zhuǎn)基因小鼠的例子，包括但不限于，HUMAB-MOUSE 、Kirin TC MOUSE 、以及KM-M0USE (參見(jiàn)，例如 Lonberg, Nat.Biotechnol., 23 (9): 1117-25 (2005),和 Lonberg, Handb.Exp.Pharmacol., 181:69-97(2008))。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，分離的IL-17結(jié)合劑可以部分是“替代支架(alternative scaffold) ”或其片段。“替代支架”指非抗體多肽或多肽結(jié)構(gòu)域，其對(duì)目標(biāo)抗原表現(xiàn)出與抗體類似的親和性和特異性。示例性的替代支架包括如來(lái)自纖連蛋白(例如，Adnectins)、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(例如,Anticalin)、Kunitz結(jié)構(gòu)域、硫氧還蛋白(例如，肽適體)、蛋白A(例如，AFFIB0DY 分子)、錨蛋白重復(fù)(例如，DARPins)、γ-β-晶狀體蛋白或泛素(例如，AFFLIN 分子)、CTLD3 (例如，四連接素)以及多價(jià)復(fù)合物(例如，ATRMER 分子或SMP 分子)的β-夾層結(jié)構(gòu)域。替代支架的描述參見(jiàn),例如Binz等，Nat.Biotechnol.，23:1257-1268(2005) ; Skerra, Curr.0pin.Biotech.，18:295-304(2007);和美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)2009/0181855A1。在一個(gè)實(shí)施方式中，替代支架可以是AVMER 分子。AVMER 分子是一類人類來(lái)源的與抗體和抗體片段無(wú)關(guān)的治療蛋白，其由若干模塊和可重復(fù)利用的結(jié)構(gòu)域組成，所述結(jié)構(gòu)域被稱為A-結(jié)構(gòu)域(也稱為·A類模塊、互補(bǔ)類型重復(fù)、或LDL-受體A類結(jié)構(gòu)域)。通過(guò)體外外顯子改組(exon shuffling)和曬菌體展示可從人細(xì)胞外受體結(jié)構(gòu)域中開(kāi)發(fā)得到 AVIMER 分子(SiIverman 等,Nat.Biotechnol., 23:1493-94(2005)，和 Silverman等，Nat.Biotechnol.，24:220(2006) )。AVMER 分子可以包含多個(gè)獨(dú)立的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其相對(duì)于單一表位的結(jié)合蛋白可以表現(xiàn)出改善的親和性(低于納摩的某些情況下)和特異性(參見(jiàn)，例如美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào) 2005/0221384A1 ；2005/0164301Α1 ；2005/0053973Α1 ；2005/0089932A1 ；2005/0048512Α1 ;和 2004/0175756A1 )。已知的 217 個(gè)人 A-結(jié)構(gòu)域均包含約35個(gè)氨基酸(約4kDa)。主要在鈣結(jié)合和二硫鍵形成的介導(dǎo)下，天然A-結(jié)構(gòu)域迅速和有效地折疊形成均一、穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。僅有12個(gè)氨基酸的保守支架基序是該共有結(jié)構(gòu)所必需的。AVMER 分子包含多個(gè)A-結(jié)構(gòu)域，通過(guò)長(zhǎng)度平均為五個(gè)氨基酸的連接子將其彼此間隔開(kāi)。最終結(jié)果是單蛋白鏈含有的多個(gè)結(jié)構(gòu)域均分別具有獨(dú)立的功能。AVMER 分子的各結(jié)構(gòu)域分別獨(dú)立地與抗原結(jié)合，并且各結(jié)構(gòu)域的作用是可累加的。本發(fā)明的分離的IL-17結(jié)合劑可以插入其他分子(例如，多肽)，以產(chǎn)生與目標(biāo)抗原結(jié)合的新分子。在這一點(diǎn)上，本發(fā)明包括一種生產(chǎn)與IL-17結(jié)合的多肽的方法，該方法包括將IL-17結(jié)合劑插入至不同多肽?？梢圆捎帽绢I(lǐng)域公知的常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)生產(chǎn)此類新抗原-結(jié)合分子。例如，將IL-17結(jié)合劑，或編碼IL-17結(jié)合劑的核酸序列插入不同分子(例如，多肽或多核苷酸)以產(chǎn)生與IL-17結(jié)合的重組分子。在一個(gè)實(shí)施方式中，采用蛋白化學(xué)或重組DNA技術(shù)，可以將本文所描述的免疫球蛋白重鏈多肽和/或免疫球蛋白輕鏈多肽的⑶R (例如，⑶R1、⑶R2、或⑶R3)或可變區(qū)移植入(即，嫁接到)另一個(gè)分子，如抗體或非抗體多肽。在這一點(diǎn)上，本發(fā)明提供了一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包含本文所述的免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的至少一個(gè)CDR。分離的IL-17結(jié)合劑可以包括如本文所描述的免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈多肽可變區(qū)的一個(gè)、兩個(gè)、或三個(gè)CDR。在這一點(diǎn)上，本文所述的免疫球蛋白重鏈多肽的CDRl位于SEQ ID NO:2-22和SEQ ID NO:31-79內(nèi)的氨基酸殘基25至35之間(包含在內(nèi))。本文所述的免疫球蛋白重鏈多肽的⑶R2位于SEQ ID N0:2-22和SEQ IDNO: 31-79內(nèi)的氨基酸殘基50-67之間(包含在內(nèi))。本文所述的免疫球蛋白重鏈多肽的⑶R3位于SEQ ID N0:2-22和SEQ ID NO:31-79內(nèi)的氨基酸殘基99至102之間(包含在內(nèi))。本文所述的各免疫球蛋白輕鏈多肽CDR的位置列于表I。表I
權(quán)利要求
1.一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括下述中的一種或兩種: (a)免疫球蛋白重鏈多肽，其包括SEQID N0:1，但其中SEQ ID NO:1的殘基32、53和59中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，以及任選地SEQ ID N0:1的殘基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列，以及 (b)免疫球蛋白輕鏈多肽，其包括SEQID NO:23，但其中SEQ ID NO:23的殘基9、10、11、13、17、20、21、和22中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:23具有至少85%同一'丨生的氨基酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括所述免疫球蛋白重鏈多肽或所述免疫球蛋白輕鏈多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括所述免疫球蛋白重鏈多肽和所述免疫球蛋白輕鏈多肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽，其中: (a)SEQ ID NO:1的殘基32被H、S、或F殘基取代， (b)SEQID ΝΟ:1的殘基53被E或H殘基取代， (C)SEQ ID NO:1的殘基59被H殘基取代，或者 (d) (a)、(b)和(C)的任意組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中免疫球蛋白重鏈多肽包括 SEQ ID NO:2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中SEQID NO:1的殘基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88 和 97 中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中: (a)SEQ ID NO:1的殘基30被N殘基取代， (b)SEQ ID NO:1的殘基31被N或D殘基取代， (c)SEQID NO:1的殘基35被T、N或D殘基取代， (d)SEQ ID NO:1的殘基40被T殘基取代， (e)SEQ ID NO:1的殘基50被A、S、I或G殘基取代， (f)SEQ ID NO:1的殘基52被N或R殘基取代， (g)SEQID ΝΟ:1的殘基53被E或H殘基取代， (h)SEQID NO:1的殘基59被H殘基取代， (i)SEQID NO:1的殘基62被G殘基取代， (j) SEQ ID NO:1的殘基66被V殘基取代， (k)SEQ ID NO:1的殘基69被I殘基取代， (I)SEQ ID NO:1的殘基75被D殘基取代， (m) SEQ ID NO:1的殘基79被V殘基取代， (n) SEQ ID NO:1的殘基88被V殘基取代， (O)SEQ ID NO:1的殘基97被V、T、L或F殘基取代，或者 (P) (a)至(O)的任意組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白重鏈多肽包括SEQ ID NO:3-5,SEQ ID NO: 7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO: 10-20,SEQ ID NO:35-72,SEQ ID NO:76、或 SEQ ID NO:77 中的任意一個(gè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白輕鏈多肽，其中: (a)SEQ ID NO:23的殘基9被Y殘基取代， (b)SEQID NO: 23的殘基10被R殘基取代， (C)SEQ ID NO:23的殘基11被T殘基取代， (d)SEQ ID NO:23的殘基13被L或I殘基取代， (e)SEQ ID NO: 23的殘基17被G殘基取代， (f)SEQ ID NO: 23的殘基20被K殘基取代， (g)SEQID NO: 23的殘基21被V殘基取代， (h)SEQID NO: 23的殘基22被D殘基取代，或者 (i)(a)至(i)的任意組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白輕鏈多肽包括SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:80或 SEQ ID NO:81。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白輕鏈多肽包括與SEQ ID NO:23具有至少90%同一性的氨基酸序列。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白輕鏈多肽包括與SEQ ID NO:23具有至少95%同一性的氨基酸序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其是抗體、抗體偶聯(lián)物或其抗原結(jié)合片段。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其是選自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、dAb和單鏈結(jié)合多肽的抗體片段。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或權(quán)利要求14所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其為人抗體、非人抗體、或嵌合抗體。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15任意一項(xiàng)所述的分離的IL17-結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)，所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:2-5,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10-20、SEQ ID NO:35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ IDNO:77中的任意一個(gè)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的一個(gè)CDR,所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一個(gè)。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的兩個(gè)CDR,所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一個(gè)。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR,所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一個(gè)。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-19任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的至少一個(gè)CDR，所述免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:24-28, SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:81中的任意一個(gè)。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的一個(gè)CDR,所述免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一個(gè)。
22.根據(jù)權(quán)利要求20所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的兩個(gè)CDR,所述免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一個(gè)。
23.根據(jù)權(quán)利要求20所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR,所述免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一個(gè)。
24.一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的殘基50被S、A或I殘基取代，以及任選地SEQ ID ΝΟ:1的殘基31、32、35、40、52、62、66、88和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中SEQID NO:1的殘基31、32、35、40、52、62、66、88和97中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的分 離的IL-17結(jié)合劑，其中: (a)SEQ ID NO:1的殘基31被N或D殘基取代， (b)SEQ ID NO:1的殘基35被N、T或D殘基取代， (c)SEQ ID NO:1的殘基40被T殘基取代， (d)SEQ ID NO:1的殘基52被N或R殘基取代， (e)SEQ ID NO:1的殘基62被G殘基取代， (f)SEQ ID NO:1的殘基66被V殘基取代， (g)SEQID NO:1的殘基88被V殘基取代， (h)SEQ ID NO:1的殘基97被V、T、L或F殘基取代，或者 (i)(a)至(h)的任意組合。
27.根據(jù)權(quán)利要求25或權(quán)利要求26所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白重鏈多肽包含 SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:74、或SEQ ID NO:75。
28.根據(jù)權(quán)利要求24-27任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)，所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO:6、SEQID NO:9, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:74、或 SEQ ID NO:75 中的任意一個(gè)。
29.一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的殘基104、109和115中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，以及任選地SEQ ID ΝΟ:1的殘基100、101、102、106、107、108和111中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中: (a)SEQ ID NO:1的殘基104被V殘基取代， (b)SEQ ID NO:1的殘基109被V殘基取代， (C)SEQ ID NO:1的殘基115被N或E殘基取代，或者 (d) (a)、(b)、和(C)的任意組合。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或權(quán)利要求30所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中SEQID ΝΟ:1的殘基100、101、102、106、107、108和111中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中:(a)SEQ ID NO:1的殘基100被H殘基取代， (b)SEQ ID NO:1的殘基101被H或F殘基取代， (c)SEQ ID NO:1的殘基102被E殘基取代， (d)SEQ ID NO:1的殘基106被N殘基取代， (e)SEQ ID NO:1的殘基107被S殘基取代， (f)SEQ ID NO:1的殘基108被H或F殘基取代， (g)SEQID NO:1的殘基111被S殘基取代，或者 (h)(a)至(g)的任意組合。
33.根據(jù)權(quán)利要求29-32中任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其中所述免疫球蛋白重鏈多肽包括 SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22 或 SEQ ID NO:73。
34.根據(jù)權(quán)利要求29-33任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)，所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)包括SEQ ID NO: 21, SEQID NO:22 或 SEQ ID NO:73 中的任意一個(gè)。
35.根據(jù)權(quán)利要求1、24或29任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽包含與SEQ ID NO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的分離的IL-17結(jié)合劑，其包括免疫球蛋白重鏈多肽，所述免疫球蛋白重鏈多肽包含與SEQ ID NO:1具有至少95%同一性的氨基酸序列。
37.一種包含免疫球蛋白重鏈多肽的分離的IL-17結(jié)合劑，所述免疫球蛋白重鏈多肽包括氨基酸序列 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:78 或 SEQ ID NO:79，或者與所述氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。
38.根據(jù)權(quán)利要求24-37任意一項(xiàng)所述的分離的IL17-結(jié)合劑，其進(jìn)一步包括免疫球蛋白輕鏈多肽，所述免疫球蛋白輕鏈多肽包含SEQ ID NO:23肽，但其中SEQ ID NO:23的殘基9、10、11、13、17、20、21和22中的一個(gè)或多個(gè)被不同殘基取代，或者與SEQ ID NO:23具有至少85%同一'丨生的氨基酸序列。
39.一種載體，其包含核酸序列，所述核酸序列編碼權(quán)利要求1-38任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑。
40.一種分離的細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求39所述的載體。
41.一種組合物，其包含如權(quán)利要求1-38任意一項(xiàng)所述的分離的IL-17結(jié)合劑或如權(quán)利要求39所述的載體以及藥學(xué)上可接受的載體。
42.一種在哺乳動(dòng)物中治療IL-17介導(dǎo)的疾病的方法，所述方法包括向患有IL-17介導(dǎo)的疾病的哺乳動(dòng)物給予如權(quán)利要求41所述的組合物，籍此在哺乳動(dòng)物中治療IL-17介導(dǎo)的疾病。
43.一種在哺乳動(dòng)物中預(yù)防IL-17介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括向易患IL-17介導(dǎo)的疾病的哺乳動(dòng)物給予如權(quán)利要求41所述的組合物，籍此在哺乳動(dòng)物中預(yù)防IL-17介導(dǎo)的疾病。
44.一種在哺乳動(dòng)物中診斷IL-17介導(dǎo)的疾病的方法，該方法包括向疑似患有IL-17介導(dǎo)的疾病的哺乳動(dòng)物給予如權(quán)利要求41所述的組合物，籍此通過(guò)檢測(cè)IL-17結(jié)合劑與IL-17的結(jié)合，來(lái)指示哺乳動(dòng)物患有IL-17介導(dǎo)的疾病。
45.根據(jù)權(quán)利要求42-44任意一項(xiàng)所述的方法,其中所述IL-17介導(dǎo)的疾病選自氣道炎癥、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)侵蝕、腹膜內(nèi)膿腫和粘連、炎性腸病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、艾迪生氏病、丙種球蛋白缺乏癥、過(guò)敏性哮喘、斑禿、乳糜瀉、查加斯病、特發(fā)性肺纖維化、克隆氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、同種異體移植排斥(例如，腎)、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、葡萄膜炎、白塞氏病、某些類型的癌癥、血管新生、動(dòng)脈粥樣硬化、多發(fā)性硬化癥(MS )、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、敗血癥、膿毒性或內(nèi)毒素性休克、對(duì)過(guò)敏原暴露的應(yīng)答、幽門(mén)螺桿菌相關(guān)性胃炎、支 氣管哮喘、強(qiáng)直性脊柱炎、狼瘡腎炎、牛皮癬、缺血、系統(tǒng)性硬化癥和中風(fēng)。
46.根據(jù)權(quán)利要求42-45任意一項(xiàng)所述的方法，其中IL-17結(jié)合劑在哺乳動(dòng)物中的半衰期為5至28天。
47.根據(jù)權(quán)利要求42-46任意一項(xiàng)所述的方法，其中與IL-17結(jié)合的IL-17結(jié)合劑的KD小于或等于I納摩爾。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中與IL-17結(jié)合的IL-17結(jié)合劑的KD小于或等于200皮摩爾。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分離的IL-17結(jié)合劑，其包括包含SEQ ID NO:1的免疫球蛋白重鏈多肽，以及任選地包含SEQ ID NO:23的免疫球蛋白輕鏈多肽，但SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:23的一個(gè)或多個(gè)特定殘基被不同殘基取代。本發(fā)明還包括使用IL-17結(jié)合劑治療IL-17介導(dǎo)的疾病的載體、組合物和方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK103154026SQ201180048098
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月5日
發(fā)明者R·霍里克, D·金, P·鮑爾斯, J·道爾頓, B·吳, T·羅伯茨, X·張, L·阿爾托貝爾三世 申請(qǐng)人:安奈普泰斯生物有限公司