專利名稱：用于制備干燥、穩(wěn)定的止血組合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于制備儲(chǔ)存穩(wěn)定形式的止血組合物的方法。
背景技術(shù)：
根據(jù)例如W098/008550A或W02003/007845A已知一種干燥、儲(chǔ)存穩(wěn)定形式的止血組合物，所述止血組合物含有生物相容的、可生物降解的、干燥穩(wěn)定的顆粒狀材料。這些產(chǎn)品已經(jīng)被成功應(yīng)用于止血用領(lǐng)域中。Flosear是用于有效的、多功能的止血?jiǎng)┑睦?，其含有溶脹于含凝血酶的溶液中的顆粒狀明膠基質(zhì)，以形成可流動(dòng)的糊劑。因?yàn)檫@樣的產(chǎn)品需用于人體，因此必需為最終產(chǎn)品及其成分的質(zhì)量、儲(chǔ)存穩(wěn)定性以及滅菌提供最高安全標(biāo)準(zhǔn)。另一方面，生產(chǎn)和處理應(yīng)當(dāng)盡量簡便有效。如果止血組合物需要使用凝血酶組分，則在最終產(chǎn)品中提供這種凝血酶組分具有挑戰(zhàn)性。由于凝血酶及基質(zhì)材料通常具有不同的與性能相關(guān)的生產(chǎn)要求，因此它們必須單獨(dú)生產(chǎn)和供應(yīng)。例如，相對穩(wěn)定的顆粒狀(經(jīng)常也是交聯(lián)的)基質(zhì)材料與蛋白質(zhì)組分例如凝血酶之間的滅菌要求可能明顯不同。這樣的基質(zhì)材料通?？赏ㄟ^有效的滅菌方法進(jìn)行滅菌(例如高壓滅菌法、Y輻射等)，而凝血酶(作為酶)必須更小心地處理。那些有效的滅菌方法通常不能用于凝血酶，因?yàn)檫@樣粗糙的處理會(huì)導(dǎo)致酶活性喪失。出于穩(wěn)定性的原因，這類產(chǎn)品(以及根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品)通常以干燥的形式提供，并且在使用前立即配成“即用”形式(其通常處于(水)凝膠、懸浮劑或溶液的形式)，這需要添加潤濕劑或溶解(懸浮)劑以及混合基質(zhì)材料組分與凝血酶組分。凝血酶復(fù)原或凝血酶溶液與顆粒狀基質(zhì)材料的混合步驟是通常需要一些時(shí)間及處理的步驟，從而會(huì)在尤其是重癥監(jiān)護(hù)時(shí)引起問題。本發(fā)明的目的在于解決這些問題，并且提供適用于制備干燥、儲(chǔ)存穩(wěn)定的止血組合物的方法，所述止血組合物可方便地提供及使用。這些方法應(yīng)提供一種產(chǎn)品劑型，其可便利地提供“即用型”止血組合物，尤其是在操作步驟數(shù)應(yīng)盡可能少的重癥監(jiān)護(hù)藥品中。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明提供一種用于制備干燥、穩(wěn)定的止血組合物的方法，所述方法包括a)提供適用于止血的生物相容性聚合物的干燥顆粒制劑，b)用凝血酶制劑對所述干燥顆粒制劑形式的顆粒進(jìn)行包衣，由此獲得凝血酶包衣聚合物顆粒，c)將所述凝血酶包衣聚合物顆粒填充入最終容器中，d)將所述最終容器最終轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓛?chǔ)存的給藥器作為干燥、穩(wěn)定的止血組合物，所述可儲(chǔ)存的給藥器含有所述凝血酶包衣聚合物顆粒。本方法提供一種根據(jù)本發(fā)明的簡便形式的干燥、穩(wěn)定的組合物，所述組合物可容易地被復(fù)原(reconstitute)用于醫(yī)療用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種將止血組合物運(yùn)送至患者身體靶位的方法，所述方法包括將通過本發(fā)明的方法制備的止血組合物運(yùn)送至靶位。另一方面，本發(fā)明涉及通過本發(fā)明所述的方法獲得的最終容器(finished finalcontainer)。本發(fā)明還涉及一種用于提供即用型止血組合物的方法，其包括使通過本發(fā)明的方法制備的止血組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑接觸，以及一種包括最終容器和其他用于提供所述組合物的裝置(如稀釋劑容器)的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的組合物特別適用于出血部位的止血，包括外科手術(shù)出血部位、外傷性出血部位等。所述組合物的示例性用途是封住為了進(jìn)行血管導(dǎo)管插入術(shù)而形成的血管穿透之上的組織束。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供對止血組合物的運(yùn)送和處理的改進(jìn)，主要通過提供簡便的單一組合物劑型的雙組分產(chǎn)品來實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的止血組合物含有凝血誘導(dǎo)劑包衣顆粒比如適用于止血的生物相容性聚合物(“止血的生物相容性聚合物組分”)的凝血酶包衣顆粒。該止血組合物還可進(jìn)一步存在其他組分。可以使用適宜的稀釋劑(例如，含水的離子溶液)將這些包衣顆粒復(fù)原成“即用型”止血制劑。優(yōu)選以水凝膠的形式提供所述“即用型”制劑。這種產(chǎn)品在本技術(shù)領(lǐng)域中實(shí)質(zhì)上是已知的，然而其以不同的劑型存在通常，這些組分作為單獨(dú)體(separate entities)以干燥的形式被供給。在混合這些組分對患者給藥之前，通常將這些干燥的組分分別與適宜的稀釋劑接觸。然后通過混合分別復(fù)原的組分來進(jìn)行這些組分的混合。例如，可以提供被藥學(xué)上可接受的(含水)稀釋劑復(fù)原了的干燥凝血酶組分。然后，復(fù)原后獲得的凝血酶溶液通常以水凝膠的形式被用于潤濕或溶解所述聚合物，然后其被應(yīng)用于患者。由于在該產(chǎn)品“即用”之前，這至少是兩步方法，故如果產(chǎn)品在即用之前僅需要一個(gè)步驟，那將變得更簡便。然而，如上所述，主要因?yàn)榉€(wěn)定性和活性的喪失，所述兩種組分的性質(zhì)阻礙了所述組分之間在制備方法過程中的簡單混合。
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通過本發(fā)明，提供了一種制備方法，所述制備方法可以使得兩種組分以組合、干燥形式(凝血誘導(dǎo)劑，例如凝血酶和所述聚合物)被提供從而可一起被立即復(fù)原。根據(jù)本發(fā)明的方法不僅可應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，還適用于藥品的大批量工業(yè)化生產(chǎn)。通過本發(fā)明，可以在沒有不希望的降解或酶活性喪失的風(fēng)險(xiǎn)下提供這種已經(jīng)混合的止血組合物。因?yàn)橥ㄟ^本發(fā)明可獲得的產(chǎn)品在醫(yī)學(xué)給藥之前不再需要進(jìn)行分別的復(fù)原和混合，故與以往已知的產(chǎn)品相比，所得的組合物具有儲(chǔ)存穩(wěn)定性、并且更便于處理。僅通過在最終容器中向組合物添加適宜的藥學(xué)上可接受的稀釋劑，就可以一步方法提供止血組合物的即用型水凝膠、懸浮劑或溶液。最終容器優(yōu)選設(shè)計(jì)為接觸稀釋劑后直接將復(fù)原的止血組合物給藥的注射器?？梢詫⒏鶕?jù)本發(fā)明的凝血酶包衣聚合物顆粒填充入注射器中，然后可以用塞子封閉所述注射器。凝血誘導(dǎo)劑是選自于包含凝血酶、蛇毒、血小板活化劑、凝血酶受體激活肽及纖維蛋白原沉淀劑的組中的物質(zhì)，優(yōu)選其為凝血酶。所述“凝血酶制劑”可以由任意的適用于人體(即藥學(xué)上可接受的)的凝血酶制劑制得。適宜的凝血酶的來源包括人或牛血、血漿或血清(如果預(yù)期無免疫不良反應(yīng)，則可應(yīng)用其他動(dòng)物來源的凝血酶)以及重組來源的凝血酶(如人的重組凝血酶);在某些應(yīng)用上可優(yōu)選自體人凝血酶。優(yōu)選止血組合物含有10 100. 000國際單位(1. U.)的凝血酶，更優(yōu)選為100 10. 0001. U.，尤其優(yōu)選為500 5. 0001. U.。優(yōu)選“即用型”組合物中的凝血酶濃度處于10 10. 0001. U.的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為50 5. 0001. U.，尤其優(yōu)選為100 1. 0001. U. /ml。稀釋劑的用量為凝血酶達(dá)到在“即用型”組合物中所希望的終濃度。凝血酶制劑可以含有其他有用的組分，例如離子、緩沖劑、賦形劑、穩(wěn)定劑等。優(yōu)選凝血酶制劑含有人血白蛋白、甘露醇或它們的混合物。優(yōu)選的鹽是NaCl和/或CaCl2,兩者均使用通常的用于凝血酶的量和濃度(例如0. 5 1. 5% NaCl (例如0. 9%)和/或20 80mM CaCl2 (例如40mM))。例如，根據(jù)W098/08550A已知根據(jù)本發(fā)明的“生物相容性聚合物的干燥顆粒狀制劑”，但是，其沒有凝血酶包衣。優(yōu)選所述聚合物為生物相容的、可生物降解的干燥穩(wěn)定的顆粒狀材料。根據(jù)本發(fā)明的“干燥的”聚合物通常以0.1 5. OOOym的粒徑被提供。通常，聚合物粒子具有10 IOOOym的平均粒徑(“平均粒徑”是通過激光衍射測得的中值粒徑；“中值粒徑”(或質(zhì)量中值粒徑)是將頻率分布平分為二的粒徑；給定制劑的顆粒的50%具有更大的直徑，50%的顆粒具有更小的直徑)，尤其優(yōu)選為50 500i!m (中值粒徑)。是否應(yīng)用更大的顆粒主要取決于醫(yī)療需求；在制備過程中平均粒徑更小的顆粒通常更難處理。因此干燥的聚合物以顆粒狀形式被提供。雖然術(shù)語“粉末”和“顆粒狀”(或顆粒)有時(shí)被用來區(qū)分不同種類的材料，但此處粉末被定義為顆粒狀材料的一種特殊的子類。特別地，粉末指那些具有更細(xì)粒徑的顆粒狀材料，因此在流動(dòng)時(shí)其具有更大的形成團(tuán)塊的傾向。顆粒包括除了潤濕時(shí)以外不傾向于形成團(tuán)塊的更粗的顆粒狀材料。用在本申請中的顆粒是那些能夠通過適宜的包衣技術(shù)包衣的顆粒。因此，根據(jù)該技術(shù)的要求，可以容易地調(diào)整并優(yōu)化根據(jù)本發(fā)明的聚合物顆粒的粒徑以適應(yīng)特定的包衣技術(shù)。根據(jù)本發(fā)明的“干燥的”止血組合物僅有殘余量的水分，其近似相當(dāng)于可比較的已有產(chǎn)品比如Floseal 中的水分含量(例如，F(xiàn)loseal，作為干燥產(chǎn)品時(shí)含有約12%的水分)。通常，根據(jù)本發(fā)明的干燥的組合物含有的殘余水分含量低于這些產(chǎn)品，優(yōu)選水分低于10%，更優(yōu)選水分低于5%，特別優(yōu)選水分低于1%。根據(jù)本發(fā)明的止血組合物也可含有更低的水分含量，如0. 1%或者甚至更低。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物的水分含量為0.1 10%，尤其為0. 5 5%。 根據(jù)本發(fā)明，止血組合物在最終容器中以干燥的形式被提供。通過使其為干燥形式，顯著并適當(dāng)?shù)亟档土私M分的降解或失活的過程，使穩(wěn)定的儲(chǔ)存成為可能。適宜的儲(chǔ)存穩(wěn)定性可基于凝血酶的活性來確定。因此，如果其復(fù)原后以干燥形式在室溫下(25° C)儲(chǔ)存24個(gè)月后仍然存在不少于4001. U. /ml (相對于5001. U. /ml的產(chǎn)品)(即與凍干之前的初始活性相比，80%或更多的凝血酶活性得到保持)，則這種干燥的止血組合物是儲(chǔ)存穩(wěn)定的。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的組合物具有更高的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，即24個(gè)月儲(chǔ)存后至少90%的凝血酶的活性得到保持，尤其優(yōu)選至少95%的凝血酶活性得到保持。然而，因混合需要被制成干燥形式，故提供凝血酶和生物相容性聚合物的干燥混合物很重要。以溶解(懸浮)形式混合這些組分然后開始進(jìn)行干燥工序會(huì)導(dǎo)致材料發(fā)生無法接受的降解。例如，即使于4°C保存凝血酶及明膠，24h后也能觀察到明顯的降解。因此，為了克服在混合時(shí)的這樣的降解過程，本發(fā)明采用包衣方法的原理。包衣方法應(yīng)當(dāng)抑制導(dǎo)致降解過程的凝血酶與聚合物接觸期間的完全潤濕。在包衣方法中，必須注意僅聚合物顆粒的外層溶脹至一定的程度來吸收所需量的凝血酶。因此，因?yàn)樵谶@樣的方式下聚合物顆粒表面的濕潤狀態(tài)可以容易的操作，故優(yōu)選包衣方法通過應(yīng)用噴霧形式的凝血酶來實(shí)施。根據(jù)本發(fā)明的用于實(shí)施包衣方法的優(yōu)選的技術(shù)是流化床方法。在流化床方法或流化床包衣中，聚合物顆粒被包含于凝血酶溶液中的蛋白質(zhì)層所包衣(即，優(yōu)選人血清白蛋白和甘露醇)。在本方法中，通過從下面鼓熱風(fēng)穿過聚合物顆粒的床將聚合物顆粒帶至流化床，由此使它們在氣流中懸浮來產(chǎn)生流化床。將凝血酶溶液的噴霧引入流化床，其與流化床親密的混合。噴霧液滴使顆粒被凝血酶均勻地包衣。該方法在保持凝血酶活性的工藝條件下進(jìn)行聚合物顆粒的外層可能會(huì)溶脹至一定程度并且吸收一定量的凝血酶溶液，同時(shí)凝血酶溶液中的大部分蛋白質(zhì)將在顆粒表面形成層。根據(jù)特別優(yōu)選的實(shí)施方式，引入包衣方法的凝血酶制劑通過噴霧，優(yōu)選通過無菌噴霧獲得。噴霧可以通過任意的噴霧設(shè)備實(shí)施，其尤其用于蛋白質(zhì)材料，優(yōu)選在帶入用于噴霧的凝血酶溶液之前立即對設(shè)備進(jìn)行滅菌。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的方法在無菌環(huán)境下實(shí)施，尤其是包衣步驟和填充入最終容器的填充步驟應(yīng)當(dāng)無菌操作。也優(yōu)選以已經(jīng)適當(dāng)滅菌的組分啟動(dòng)所述方法然后在無菌條件下進(jìn)行后續(xù)所有的步驟。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式使用Wurster包衣技術(shù)。Wurster方法是一種非常適于對單個(gè)顆粒材料均勻包衣或包裹并且尤其在藥物制劑技術(shù)中受歡迎的包衣技術(shù)。該技術(shù)的特征在于在固體顆粒的流化床的下部設(shè)置的噴嘴。顆粒被懸浮于流化氣流中，該流化氣流被設(shè)計(jì)為引導(dǎo)循環(huán)流動(dòng)的顆粒經(jīng)過噴嘴。噴嘴噴出包衣溶液、懸浮液或其他包衣載體(Coating vehicle)(在本情況下為凝血酶制劑)的霧化氣流。當(dāng)它們從噴嘴被帶出時(shí)，霧化的包衣材料與顆粒碰撞。設(shè)定流化空氣的溫度來適當(dāng)?shù)卣舭l(fā)溶液或懸浮溶劑或者在包衣材料與顆粒碰撞片刻之后馬上使包衣材料固化。全部包衣固體皆留在顆粒上作為過渡(Developing)薄膜或包衣的一部分。繼續(xù)該方法直至各顆粒被均勻包衣至所需的薄膜厚度。 Wurster方法是工業(yè)上公認(rèn)的用于對顆粒材料例如粉末、晶體或顆粒的薄膜包衣進(jìn)行精確實(shí)施的包衣技術(shù)。該技術(shù)可用于包裹直徑為50 Pm 幾厘米的固體材料。由于有相對較大的流化空氣流速，故該方法較之其他的包衣體系具有更大的干燥能力。因?yàn)楫?dāng)顆粒從噴嘴被帶出時(shí)顆粒實(shí)際上會(huì)分開，故可在不出現(xiàn)團(tuán)聚的情況下對小的顆粒進(jìn)行包衣。包衣的可能性相對沒有限制，包括在親水性核心(Core)上設(shè)置親水性包衣、或在水溶性核心上設(shè)置水基性(Water-based)包衣。包衣的性能可以由包衣配方參數(shù)、工藝條件和分層來進(jìn)行優(yōu)化。流化床包衣的一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)是其可以批處理模式技術(shù)(Wurster包衣)來運(yùn)行。制造上非常優(yōu)選批處理模式技術(shù)。通過流化床包衣，顆粒被流動(dòng)化、被噴上包衣液并且被干燥。較小的液滴和噴霧介質(zhì)的較低速度保證了均勻的產(chǎn)品包衣。優(yōu)選本發(fā)明的包衣作為批處理流化床包衣來實(shí)施，尤其在應(yīng)用了底部噴涂的條件下。所述方法的最后步驟是完成步驟。在該步驟中，最終容器被適當(dāng)密封并被制作成即存和/或即售。完成步驟包括給最終容器貼標(biāo)簽、包裝及實(shí)施(進(jìn)一步)滅菌工序(例如在最終容器上或在包含最終容器的包裝產(chǎn)品或試劑盒上進(jìn)行)。優(yōu)選步驟d)包括EO (環(huán)氧乙烷)滅菌步驟。EO滅菌是本技術(shù)領(lǐng)域中所常見的。環(huán)氧乙烷氣體殺滅細(xì)菌(及它們的芽孢)、霉菌及真菌。EO滅菌被用來對可被高溫技術(shù)比如巴氏滅菌法或高壓滅菌法破壞的物質(zhì)進(jìn)行滅菌。滅菌的其它優(yōu)選實(shí)施方式是應(yīng)用電離輻射比如P或Y輻射或使用過氧化氫蒸汽。所述最終容器可以是任意的適于存放(及儲(chǔ)存)藥學(xué)上可給藥的化合物的容器?？墒褂米⑸淦?、小瓶、管子等；然而，特別優(yōu)選用注射器提供根據(jù)本發(fā)明的止血組合物?，F(xiàn)有技術(shù)中也公開了注射器是優(yōu)選的用于止血組合物的給藥裝置，原因在于注射器在醫(yī)學(xué)應(yīng)用上的操作優(yōu)勢。然后，可優(yōu)選地通過特定的注射器的針管或通過適宜的導(dǎo)管應(yīng)用所述組合物(復(fù)原之后)。還可通過許多其他裝置，比如通過軟膏刀、刷子、噴霧器、手動(dòng)壓力或任何其他的傳統(tǒng)技術(shù)來應(yīng)用復(fù)原的止血組合物(其優(yōu)選被復(fù)原以形成水凝膠)。通常，根據(jù)本發(fā)明的復(fù)原的止血組合物的應(yīng)用是通過使用注射器或類似的可通過開口(Orifice)、孔(Aperture)、針、管或其他通道將復(fù)原的組合物擠出以形成材料珠、層或類似的部分。通過經(jīng)由注射器或其他點(diǎn)藥器的孔的擠出，可以進(jìn)行組合物的機(jī)械粉碎，所述孔典型地具有0. Olmm 5. Omm范圍內(nèi)的尺寸，優(yōu)選為0. 5mm 2. 5mm。然而，優(yōu)選所述止血組合物從具有預(yù)期粒徑的干燥形式開始制備(尤其在通過水合作用進(jìn)行復(fù)原時(shí)，獲得所需粒徑的亞單元(如水凝膠亞單元))或在最終擠出或其他應(yīng)用步驟之前被部分或全部機(jī)械粉碎至所需粒徑。當(dāng)然顯而易見的是，為了滿足人體使用的安全要求，這些機(jī)械組件必須以無菌形式被提供(內(nèi)部及外部)。根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物在使用之前，通常通過使干燥的組合物與適宜的稀釋劑接觸而被復(fù)原(復(fù)水)。根據(jù)本發(fā)明的稀釋劑可以是任何對干燥的止血組合物適宜的復(fù)原介質(zhì)，其允許干燥組合物適當(dāng)?shù)臐櫇瘛?yōu)選干燥的止血組合物被復(fù)原成水凝膠作為“即用”形式。適宜的稀釋劑是藥學(xué)上可接受的含水液體，例如藥用級(jí)去離子水(若所有的離子組分或緩沖組分已經(jīng)被提供于干燥的組合物中，則為“注射用水”)或含有特定的離子及/或緩沖劑的藥用級(jí)水溶液。這些水溶液還可進(jìn)一步含有其它成分，如賦形劑?！百x形劑”是一種被添加到溶液中的惰性物質(zhì)，例如以確保凝血酶在儲(chǔ)存(或滅菌(例如通過輻射))時(shí)保持其化學(xué)穩(wěn)定性和生物活性，或出于美觀的原因，例如顏色。優(yōu)選的賦形劑包括人血白蛋白、甘露糖醇及乙酸鈉。在復(fù)原的產(chǎn)品中優(yōu)選的人血白蛋白的濃度為0.1 100mg/ml，優(yōu)選為I 10mg/ml。優(yōu)選的甘露糖醇的濃度可以在0. 5 500mg/ml的濃度范圍內(nèi)，尤其是10 50mg/mlo優(yōu)選的乙酸鈉的濃度為I 10mg/ml的范圍，尤其為2 5mg/ml。 例如，適宜的稀釋劑包括注射用水；以及彼此獨(dú)立的NaCl (優(yōu)選為50 150mM，尤其是110mM)、CaCl2 (優(yōu)選為10 80mM，尤其為40mM)、人血白蛋白(優(yōu)選最多2% w/w，尤其為0. 5% w/w)、乙酸鈉(優(yōu)選為0 50mM,尤其為20mM)和甘露糖醇(優(yōu)選最多10% w/w,尤其為2% w/w)0稀釋劑也可優(yōu)選包含緩沖劑或緩沖體系以緩沖復(fù)原的干燥組合物的pH，優(yōu)選pH為6. 4 7. 5，尤其為pH6. 9 7.1。在優(yōu)選實(shí)施方式中，稀釋劑被置于單獨(dú)的容器中。優(yōu)選其為注射器。然后，在注射器中的稀釋劑便可容易地被添加至最終容器中以復(fù)原根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物。如果最終容器也是注射器，則兩個(gè)注射器可一起打包制得。因此，優(yōu)選將根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物提供于注射器中，所述注射器由含有用于復(fù)原所述干燥、穩(wěn)定的止血組合物的藥學(xué)上可接受的稀釋劑的注射器最終完成。本發(fā)明的適用于止血的生物相容性聚合物(“干燥的止血聚合物”)的干燥顆粒制劑可以由生物和非生物聚合物形成。適宜的生物聚合物包括蛋白質(zhì)，如明膠、可溶性膠原蛋白、白蛋白、血紅蛋白、酪蛋白、纖維蛋白原、纖維蛋白、纖維連接蛋白、彈性蛋白、角蛋白、以及層粘連蛋白；或它們的衍生物或組合。特別優(yōu)選使用明膠或可溶性非原纖維膠原蛋白，更優(yōu)選為明膠，示例性的明膠配方展示如下。其它適宜的生物聚合物包括多糖，比如糖胺聚糖、淀粉衍生物、木聚糖、纖維素衍生物、半纖維素衍生物、瓊脂糖、藻酸鹽、以及殼聚糖；或它們的衍生物或組合。適宜的非生物聚合物通過如下兩種機(jī)制中的任一種被選定為可降解的，即(I)聚合物骨架的崩解，或(2)導(dǎo)致水溶性的側(cè)鏈的降解。示例性的形成非生物水凝膠的聚合物包括合成材料，如聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚乙烯基樹脂、聚丙交酯-乙交酯、聚己內(nèi)酯以及聚氧乙烯；或它們的衍生物或組合。也可以是不同種類的聚合物的組合(如蛋白質(zhì)與多糖、蛋白質(zhì)與形成非生物水凝膠的聚合物等)。非交聯(lián)的聚合物與適宜的復(fù)水助劑一起可以以任意適于復(fù)原的方式例如以形成適宜的水凝膠基質(zhì)的方式進(jìn)行交聯(lián)。例如，聚合物分子可以使用雙官能或多官能交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)，所述交聯(lián)劑可共價(jià)結(jié)合于兩個(gè)以上聚合物分子鏈上。示例性的雙官能交聯(lián)劑包括醛、環(huán)氧化物、琥珀酰亞胺、碳化二酰亞胺、馬來酰亞胺、疊氮化物、碳酸酯、異氰酸酯、二乙烯基砜、醇、胺、酰亞胺酯、酸酐、鹵化物、硅烷、重氮基乙酸酯，氮雜環(huán)丙烷等。可選地，交聯(lián)可以通過使用氧化劑和其他試劑，如高碘酸鹽進(jìn)行，氧化劑和其他試劑激活聚合物上的側(cè)鏈或部分以便它們可以與其他側(cè)鏈或部分反應(yīng)，從而形成交聯(lián)鍵。另一個(gè)交聯(lián)方法包括使聚合物暴露于輻射，例如Y輻射，從而激活聚合物鏈以使交聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行。脫水熱交聯(lián)法也是適用的。用于交聯(lián)明膠分子的優(yōu)選方法如下所述。因此，根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，顆粒狀的適用于止血的生物相容性聚合物含有交聯(lián)多糖、交聯(lián)蛋白、或交聯(lián)非生物聚合物；或它們的混合物。如上所述，適用于止血的生物相容性聚合物為顆粒狀材料。所述顆粒狀材料在暴露于液體(如稀釋劑)時(shí)可以迅速溶脹，這種溶脹形式有助于形成可流動(dòng)的糊劑，其可應(yīng)用于出血部位。生物相容性聚合物，如明膠，可以以薄膜形式提供，然后其可被研磨成顆粒狀材料。包含在這種顆粒狀材料中的大部分顆粒的粒徑優(yōu)選為100 1. 000 u m,特別是300 500 u m0
根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，適用于止血的生物相容性聚合物是一種交聯(lián)明膠。干交聯(lián)明膠粉可被制備成接觸適宜的稀釋劑便可迅速復(fù)水。優(yōu)選明膠顆粒，尤其是明膠粉形式的明膠顆粒包含相對較大的顆粒，也稱作碎片或亞單元，如在W098/08550A及W02003/007845A中所述。其優(yōu)選(中值)粒徑為20 1. OOOiim的范圍，優(yōu)選為100 750 iim，尤其為150 500 ym，但該優(yōu)選范圍之外的粒徑也可以在許多情況下使用。干燥的組合物在暴露于含水的復(fù)水介質(zhì)(=稀釋劑)時(shí)，也將表現(xiàn)出顯著的“平衡溶脹度”。優(yōu)選所述溶脹度在400% 1000%的范圍內(nèi)?！捌胶馊苊浂取笨赏ㄟ^將明膠水凝膠粉完全水化從而完全溶脹時(shí)的重量減去其干重的值獲得。然后將該差值除以干重再乘以100，以進(jìn)行溶脹度的測定。應(yīng)當(dāng)將材料暴露于高溫下足夠長的時(shí)間以除去全部的殘余水分之后，例如在120°C下2個(gè)小時(shí)之后，再測定干重。可以通過在室溫下將干燥的材料浸潰在合適的稀釋劑比如鹽水中足夠長的時(shí)間，典型地18 24h，以使水分含量恒定，來實(shí)現(xiàn)材料的平衡水化。非交聯(lián)明膠與復(fù)水助劑一起可以以任意適于形成合適水凝膠基質(zhì)的方式進(jìn)行交聯(lián)。根據(jù)本優(yōu)選實(shí)施方式的干燥的交聯(lián)明膠粉優(yōu)選通過在特定的復(fù)水助劑的存在下制備粉末而獲得。這樣的復(fù)水助劑將會(huì)存在于制備粉末的過程中，但通常會(huì)從最終產(chǎn)品中移除。例如，以約20%的總固體含量存在的復(fù)水助劑典型地被減少至低于最終產(chǎn)品的1%，通常低于0.5% (以重量計(jì))。示例性的復(fù)水助劑包括聚乙二醇(PEG)，優(yōu)選其具有約1000的分子量；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，優(yōu)選其具有約50，000的平均分子量；以及葡聚糖，其典型地具有約40，000的平均分子量。優(yōu)選在制備本發(fā)明的組合物時(shí)采用上述復(fù)水助劑的至少兩種，尤其更優(yōu)選采用所有的三種。用于制備交聯(lián)明膠的示例性的方法如下。明膠在水溶液中獲得并被懸浮以形成非交聯(lián)水凝膠，其典型地具有I % 70% (以重量計(jì))的固體含量，通常為3% 10% (以重量計(jì))。典型地通過暴露于戊二醛(例如，0. 01% 0. 05% w/w，在含水緩沖液中、在0°C 15°C處過夜)、高碘酸鈉(例如，0. 05M，于(TC 15°C處保持48小時(shí))、或1-乙基-3- (3-二甲基氨基丙基)碳二酰亞胺(“EDC”)(例如，0.5% 1.5% w/w，在室溫下過夜)，或通過暴露于約0.3 3兆拉德的Y射線或電子束輻射，來使明膠交聯(lián)?？蛇x地，明膠顆?？梢砸?% 70% (以重量計(jì))、通常3% 10% (以重量計(jì))的固體含量懸浮于醇、通常優(yōu)選甲醇或乙醇中，并通過暴露于交聯(lián)劑而交聯(lián)，所述交聯(lián)劑典型地為戊二醛(例如，0. 01 % 0.1 %w/w，在室溫下過夜)。醛類的情況下，pH值應(yīng)保持在約6 11，優(yōu)選7 10。當(dāng)用戊二醛進(jìn)行交聯(lián)時(shí)，交聯(lián)通過希夫堿(Schiff bases)形成,所述希夫堿通過隨后的還原，比如通過用硼氫化鈉處理可被穩(wěn)定。交聯(lián)后，將所得顆粒在水中洗滌，并可選地用醇沖洗，然后干燥。接著，將制得的干粉末提供于此處所述的最終容器中。交聯(lián)后，至少50% (w/w)復(fù)水助劑將從所得水凝膠中移除。通常，通過過濾水凝膠、洗滌所得的濾餅而移除復(fù)水助劑。這樣的過濾/洗滌步驟可以重復(fù)一次或多次，以便將產(chǎn)品清洗至滿意的級(jí)別，并除去至少50%的復(fù)水助劑，優(yōu)選除去初始存在的復(fù)水助劑的至少90% (w/w)0過濾后，典型地通過干燥最終得到的濾餅來干燥明膠。然后將干燥的濾餅破碎或研磨，以制備具有上述所陳述的理想粒徑范圍的交聯(lián)粉末。根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，最終容器進(jìn)一步包含一定量的可有效抑制聚合物暴露于滅菌射線時(shí)的變性的穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑優(yōu)選為抗壞血酸、抗壞血酸鈉、抗壞血酸的其他鹽，或抗氧化劑。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明還提供用于將含有根據(jù)本發(fā)明的包衣顆粒的止血組合物運(yùn)送至患者身體靶位的方法，所述方法包括將通過根據(jù)本發(fā)明的方法制備的止血組合物運(yùn)送至靶位。雖然在某些實(shí)施方式中，也可將干燥的組合物直接應(yīng)用于靶位(且必要時(shí)，可選地使其在靶位處與稀釋劑接觸)，優(yōu)選在對靶位給藥前使干燥的止血組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑接觸，以便獲得 濕的形式尤其是水凝膠形式的止血組合物。本發(fā)明還涉及通過根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的最終容器。所述最終容器包含無菌的、儲(chǔ)存穩(wěn)定的及可出售形式的組合組分。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種用于提供即用型止血組合物的方法，所述方法包括使根據(jù)本發(fā)明的方法制備的止血組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑接觸。本發(fā)明還涉及一種試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明的成品形式的干燥、穩(wěn)定的止血組合物及含有適宜的稀釋劑的容器。所述試劑盒的其他組件可以是使用說明、給藥裝置，比如注射器，導(dǎo)管，刷子等(如果組合物尚未通過給藥裝置提供)、或其他醫(yī)療(外科手術(shù))操作中需要使用的組件，比如替代針管或?qū)Ч?、額外的小瓶或進(jìn)一步覆蓋傷口的裝置。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包含裝有干燥、穩(wěn)定的止血組合物的注射器及含有稀釋劑的注射器(或被提供用以采集來自另一稀釋劑容器的稀釋劑)。優(yōu)選這兩種注射器以適于彼此的形式被提供，以便稀釋劑可通過用于給藥復(fù)原組合物的出口之外的另一入口被運(yùn)送至干燥的止血組合物。本發(fā)明還涉及適用于止血的生物相容性聚合物的凝血酶包衣顆粒。這些包衣顆?？赏ㄟ^此處公開的方法獲得。優(yōu)選凝血酶包衣顆粒通過流化床包衣獲得，尤其是通過Wurster包衣獲得。根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方式，所述顆粒是凝血酶包衣明膠聚合物。在下面的實(shí)施例和附圖中進(jìn)ー步描述本發(fā)明，但本發(fā)明不限制于此。

圖1顯示了批處理流化床包衣、底部噴霧(Wurster包衣)的原理。圖2顯示了明膠顆粒(A)和根據(jù)本發(fā)明(B)的凝血酶包衣明膠顆粒的示例性的粒徑分布。實(shí)施例1.根據(jù)本發(fā)明的作為干燥的止血組合物的凝血酶包衣聚合物的制備材料及方法設(shè)備MiniGlatt、Wurster、作為エ藝氣體的氮?dú)?N2)、通過0，2pm的過濾器預(yù)過濾MiniGlatt 微試劑盒(MiniGlatt Micro-Kit)、0. 5 或 0. 8mm 的噴嘴、10 20mm 的Wurster分_間隙、空氣分布板標(biāo)準(zhǔn)、2或5 y m金屬過濾器GPCG3, 6〃Wurster、預(yù)過濾了的空氣(0，2 y m)、過濾器 PA-CF、空氣分布板 P2100、20mm的Wurster分隔間隙干燥室包衣將明膠顆粒和凝血酶包衣明膠顆粒在4 8°C下儲(chǔ)存于冰箱中。將凝血酶溶液(500IU/ml,0. 9% NaCl ;500IU/ml、42g甘露醇/I)在-20°C下儲(chǔ)存于冰箱中。通過提供81g明膠顆粒在Mini Glatt中實(shí)施該方法；將所述機(jī)器預(yù)熱至37°C ;預(yù)熱固體原材料至37±7°C并且在整個(gè)處理時(shí)間中保持該溫度。將凝血酶溶液噴霧直至使用了 400g溶液。然后在方法的最后將包衣材料干燥15min。分析方法干燥失重(LOD)通過梅特勒.托利多鹵素水分分析儀HB43型測定LOD (干燥失重)。在干燥溫度為140°C的條件下，采用具體的終止條件(< lmg/60s)。篩析通過萊馳篩分儀(Retsch sieve machine)AS200型進(jìn)行篩析(單位g,振幅1. 5,時(shí)間5min)粒徑分布使用激光衍射儀(LD)馬爾文粒度分析儀20005. 40版在ー個(gè)角度模式下測定粒徑分布。干燥狀態(tài)的10 15g質(zhì)量的顆粒被用于測定(平均標(biāo)準(zhǔn)差，n=3)。體積密度在IOOml體積的刻度量筒中進(jìn)行體積密度的測定。稀釋劑注射器稀釋劑注射器包含用于水化產(chǎn)品的合適的復(fù)原介質(zhì)。其可與Floseal注射器直接連通或通過連接器連通。稀釋劑被轉(zhuǎn)移至Floseal注射器中，并且水化產(chǎn)品在連通的注射器之間反復(fù)來回地轉(zhuǎn)移，以形成可流動(dòng)的糊劑。例如，所述稀釋劑注射器可通過如下方法準(zhǔn)備將介質(zhì)無菌過濾，填充于適宜的注射器中(如Toppac注射器、Clearshot等)，并在必要時(shí)通過輻射進(jìn)行最終滅菌。明膠顆粒根據(jù)已建立的方法(W098/08550A ;W02003/00785A等)進(jìn)行明膠顆粒塊體生產(chǎn)。所述顆粒(“Floseal”顆?！?“Floseal”基質(zhì))立即通過、-輻射滅菌。將Floseal基質(zhì)填充到適當(dāng)大小的肖特玻璃瓶中以進(jìn)行臨床前滅菌。在目前最大的生物負(fù)荷水平下(IOOOcfu/樣品)，最終容器中的產(chǎn)品的所需輻射劑量是25 40kGy。然后,在_20°C下儲(chǔ)存塊體材料(bulk material)用于進(jìn)ー步的制造。結(jié)果對于示例性的凝血酶包衣明膠顆粒，凝血酶包衣明膠顆粒的粒徑分布顯示在圖2中(圖 2A 顯示了包衣前的明膠顆粒(d (0, 1)=143. 2) ；d (0,5)=304.3 ；d (0,9)=517. 2)；圖 2B 由凝血酶溶液 500IU+甘露醇(d (0, 1)=155. 3 ；d (0,5)=327.1 ；d (0，9)=543. 0))獲得。所述方法在所有實(shí)施的實(shí)驗(yàn)中均非常穩(wěn)定。分別將產(chǎn)品溫度調(diào)整至36，0±1、33，0±1和39，0±1で。最終的顆粒在所有批次中均具有良好的流動(dòng)性。觀察到大于95%的高產(chǎn)量，表明來自凝血酶溶液的固體沉積在固體原材料上。包衣步驟后的エ藝容器看起來非常干凈。沒有材料粘在壁上，僅在最終產(chǎn)品中能看見少量的較大顆粒。實(shí)施l，64g/min和1，24g/ml的平均噴霧速率；分別總計(jì)為244min和323min的噴霧時(shí)間。低的噴霧速率通常減少材料損失(由此增加產(chǎn)量)。所述方法可以被成功升級(jí)為6〃Wurster。相比于在Mini Glatt中使用氮?dú)?，在GPCG3中將預(yù)過濾了的空氣用作エ藝氣體。在最終產(chǎn)品中幾乎觀察不到較大的顆粒。與Mini Glatt相比,在GPCG3中的材料流動(dòng)更加均勻。為了避免明膠的溶脹和團(tuán)聚，將所有方法中的エ藝濕度保持在低水平。在鹵素水分分析儀中，使用140°C的較高的干燥溫度確定包衣顆粒的LOD值在5，4%和8，3%之間。在明膠原材料和所有的包衣批次中可以確定平均直徑d (0，5)為290 327 u m?？梢缘贸龅慕Y(jié)論是，在明膠顆粒的包衣中幾乎沒有發(fā)生粒徑分布的變化。總之，在該方法中沒有因選定的處理?xiàng)l件而發(fā)生明膠原材料的團(tuán)聚?？傊谒械脑囼?yàn)中都證明了該方法是穩(wěn)定的?？梢宰杂蛇x擇在33 40°C之間的產(chǎn)品溫度。將方法從Mini Glatt升級(jí)為6〃Wurster。產(chǎn)品質(zhì)量可以在更大的范圍內(nèi)得到均衡地提高。明膠原材料和處理后的明膠的粒徑分布幾乎沒有變化，沒有觀察到大量的原材料的團(tuán)聚物。2. 根據(jù)本發(fā)明的凝血酶包衣明膠顆粒的穩(wěn)定性。該試驗(yàn)的目的在于研究從1.中獲得的流化床包衣顆粒包裝24個(gè)月后的穩(wěn)定性。具體地，凝血酶包衣明膠顆粒在制備后的0、3、6、12、18和24個(gè)月后進(jìn)行測試；分析樣品的平衡溶脹度、凝血彈性圖(TEG ;在體外凝血實(shí)驗(yàn)中)和a -凝血酶。對于本試驗(yàn)，在無菌條件下將由凝血酶+甘露醇溶液獲得的凝血酶包衣明膠顆粒填充入注射器作為最終容器。最后將全部注射器打包并且密封進(jìn)鋁涂層袋中來防止吸收水分。將它們儲(chǔ)存在室溫(22 28°C)下。在制備后0、3、6、12、18和24個(gè)月后收集樣品，并且分析關(guān)于明膠和a-凝血酶活性的平衡溶脹度。僅在完成制備(0個(gè)月)后才進(jìn)行TEG試驗(yàn)。
沒有第二次防濕步驟，例如將硅膠除濕袋放入鋁涂層袋中。為了簡化樣品的采集，將三個(gè)注射器打包并且密封在ー個(gè)鋁涂層袋中，因?yàn)槠胶馊苊浂鹊鹊囊淮未_定各需要三個(gè)注射器。緩沖劑和溶液0. 9% NaCl將9g NaCl溶解于IOOOml純化水中。40mM CaCl2將5，88g CaCl2 X 2H20 溶解于 IOOOml 純化水中。咪唑緩沖液將0，7g 咪唑、8，8g NaCl 和 4，4g CaCl2X2H20 溶解于 800ml 純化水中，用 IN HCl將PH調(diào)節(jié)為7，3并且最終用純化水將緩沖液的總體積填充至1000ml。穩(wěn)定注射器的復(fù)原用4，0ml40mM CaCl2溶液各自作為稀釋劑倒入注射器中來復(fù)原注射器。將穩(wěn)定注射器和填充了 CaCl2溶液的注射器連通，通過“傾倒”來混合組分(在兩個(gè)注射器間重復(fù)轉(zhuǎn)移共21個(gè)來回)。進(jìn)ー步的エ序依賴于各測 定。平衡溶脹度明膠的平衡溶脹度是ー個(gè)參數(shù)，其顯示了相對于其干重，溫育于過量較大的液體中24小時(shí)后的明膠顆粒可以吸收多少液體。其通過“溶脹重量/干重X100”來計(jì)算。用軟件程序“ Minitabl5”進(jìn)行平衡溶脹度的統(tǒng)計(jì)計(jì)算(回歸，置信水平=CL95%)。TEG通過標(biāo)準(zhǔn)手冊處方進(jìn)行試驗(yàn)；用軟件程序“Minitabl5”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)TEG計(jì)算(單因素方差分析(One-way ANOVA), CL95%)0a -凝血酶復(fù)原/凝血酶復(fù)原使用球凝血計(jì)(Kugelkoagulometer)根據(jù)已經(jīng)建立的方法進(jìn)行試驗(yàn)。對于凝血酶活性(KC4)的凝血計(jì)測定(coagulometric determination),需要從獲得的糊劑中萃取出凝血酶。這通過將稱量的約Ig的糊劑加入15ml的離心管(Falcontube)、加入IOml的IM NaCl并且在4°C下于波振蕩器中振蕩該管過夜來完成。次日早上在4°C、3500rpm下使該管離心lOmin。然后倒入來自上清液的5ml的等分液并且將其用于測試凝血酶活性。凝血酶復(fù)原(以百分比計(jì))被標(biāo)準(zhǔn)化為在注射器的制備中每g材料中最初使用的凝血酶的總量。在10倍過剩的IM NaCl中萃取凝血酶(lml Floseal糊劑+IOml萃取介質(zhì))。為了使參照品和試驗(yàn)樣品之間的鹽濃度不變(采用的試驗(yàn)體系是鹽依賴性的)，凝血酶參比溶液的第一次稀釋(用其制備樣品)在IM NaCl (1:10，稍后1+10)中進(jìn)行，并且所有樣品的第二次稀釋步驟是在1:20的咪唑緩沖液中。總稀釋因子為1:200 (或分別為1:220)。在最初的兩個(gè)穩(wěn)定性分?jǐn)?shù)處，僅將凝血酶起始溶液以1:400稀釋于咪唑緩沖液中。稍后，考慮鹽對凝血時(shí)間的影響并且將起始溶液按如上所述進(jìn)行稀釋。為了修正最初的穩(wěn)定性分?jǐn)?shù)處的結(jié)果，使用起始溶液的平均值(其稀釋于IM NaCl和咪唑緩沖液中，在后續(xù)的穩(wěn)定性分?jǐn)?shù)處產(chǎn)生中)。從通過上述方式稀釋的試驗(yàn)溶液中算出的凝血酶活性是凝血酶復(fù)原計(jì)算的參照值。出于比較的目的，凝血酶起始溶液也被完全稀釋于咪唑緩沖液中。此處的總稀釋因子為 1:400。凝血酶復(fù)原的計(jì)算。1.計(jì)算試驗(yàn)樣品中的每g糊劑的凝血酶[IU/g]:(最終試驗(yàn)樣本X稀釋度X萃取體積)/用于萃取的糊劑的質(zhì)量。2.計(jì)算試驗(yàn)運(yùn)行開始時(shí)的顆粒材料與凝血酶的固體含量的總量顆粒的質(zhì)量+凝血酶溶液的固體含量。固體含量的總量是用于一次試驗(yàn)運(yùn)行的顆粒材料的總量+用于該次試驗(yàn)行的凝血酶溶液的體積中的鹽含量。3.明膠體積的修正平均起始溶液X用于流化床包衣的凝血酶的總體積/固體
含量的總量。4.將樣品的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為起始溶液的數(shù)據(jù)(鹽調(diào)整)用軟件程序“Minitabl5”進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算(回歸，CL95%)0結(jié)果凝血酶復(fù)原的示例性結(jié)果為(以％計(jì)):72±3 (3mo);75±6 (6mo)和74±6 (12mo)；根據(jù)凝血酶復(fù)原的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，認(rèn)為測試的包衣顆粒是穩(wěn)定的。在整個(gè)穩(wěn) 定過程中凝血酶包衣明膠顆粒都易被復(fù)原。通過凝血酶復(fù)原顯示的本實(shí)施例表明根據(jù)本發(fā)明獲得的顆粒是穩(wěn)定的。3.在豬肝損傷模型中的有效性本研究的目的在于比較根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物與已經(jīng)出品的標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品(Floseal VH S/D ;巴克斯特保健公司)在豬肝損傷模型中的有效性。Floseal VH S/Di—種明膠基質(zhì)，其可在應(yīng)用2分鐘之內(nèi)運(yùn)送凝血酶以止住活動(dòng)性出血。這種產(chǎn)品需要2步制備，即(I)復(fù)原凝血酶以及(2)用復(fù)原的凝血酶使明膠顆粒水化。根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品被設(shè)計(jì)為通過一個(gè)步驟使凝血酶包衣明膠顆粒復(fù)原，這相對于2步制備具有顯著的進(jìn)步，所述2步制備在需要迅速或大量使用產(chǎn)品時(shí)是不利的。豬肝臟損傷模型進(jìn)行外科手術(shù)時(shí),稱量六頭從Oak Hill Genetics公司(Ewing,伊利諾伊州)獲得的平均體重為55. Okg (在52. 4 58. 4kg的范圍)的雌性家豬。抵達(dá)后，將動(dòng)物隔離觀察6天。手術(shù)時(shí)，所有的六頭豬皆未表現(xiàn)出臨床疾病。使用耳標(biāo)以識(shí)別動(dòng)物并且分配識(shí)別編號(hào)使它們互相參照。將動(dòng)物群飼于圍欄內(nèi)。豬自由進(jìn)水，每日進(jìn)食一次標(biāo)準(zhǔn)豬糧。豬類是被廣為接受的心血管模型并且其適于進(jìn)行這類研究。其肝臟的多個(gè)大的葉片允許多個(gè)用于直接比較不同測試項(xiàng)目的損傷。麻醉及輸液療法用咪達(dá)唑侖(0. 3mg/kg, IM)醫(yī)治豬并用氮?dú)馀c氧氣2:1的載體攜帶的異氟醚對其進(jìn)行ロ罩誘導(dǎo)(masked induced)。對豬插管，以10 15次呼吸/min進(jìn)行通氣。用氧氣載體攜帯的異氟醚對豬進(jìn)行持續(xù)麻酔。用溫?zé)岬娜樗崃指袷弦簩ωi進(jìn)行持續(xù)比率的輸液肝損傷方法
將豬肝損傷模型用于本項(xiàng)研究。準(zhǔn)備6頭豬，目標(biāo)在于評價(jià)120個(gè)損傷(每治療組40個(gè))并用a=0. 05、功率=90%足以檢測80%對40%的比率差。每組都依賴于中間、左側(cè)或右側(cè)葉片。每個(gè)損傷組包含使用配設(shè)了砂紙的手搖鉆制造出的3個(gè)直徑為1cm、深3 4_的肝損傷。評價(jià)出血，并用參照對象或試驗(yàn)對象對損傷進(jìn)行隨機(jī)、無偏見地處理。參照對象和試驗(yàn)對象使用隨機(jī)數(shù)產(chǎn)生器進(jìn)行隨機(jī)化。將各個(gè)對象置于損傷的上面，用濕紗布按住2分鐘，對治療2、5和10分鐘后的止血情況進(jìn)行無偏見評價(jià)。5分鐘評價(jià)后對剩下的參照對象或試驗(yàn)對象進(jìn)行灌洗。肝素化協(xié)議
設(shè)置基準(zhǔn)全血激活凝血時(shí)間(ACT)并且對每頭豬給予負(fù)荷劑量200IU/kg的肝素。每10分鐘測定一次ACT直至ACT為至少2倍基準(zhǔn)值。如果測得的ACT小于或約等于2倍基準(zhǔn)值，則對豬給予75IU/kg的單次劑量的肝素。一旦大于2倍基準(zhǔn)值，每20分鐘測定一次ACT。若測得的ACT小于或約等于作為目標(biāo)的2倍基準(zhǔn)值，則給予豬單次劑量40IU/kg的肝素。若測得ACT大于作為目標(biāo)的2倍基準(zhǔn)值，則對豬不作處理、或給予維持劑量的肝素，其不得超過2，000IU/ho所有肝素都通過外周靜脈導(dǎo)管給藥。所有的血液樣本都從頸靜脈導(dǎo)管取得。血壓及心率的參考值在測定ACT時(shí)記錄。止血評價(jià)建立及治療損傷組后，在0、2、5及10分鐘時(shí)評價(jià)止血情況，其中，0分鐘指預(yù)處理階段。將0、1、2、3、4及5的分?jǐn)?shù)分別指定為不出血、滲出、非常溫和、溫和、中等及嚴(yán)重。所有的三個(gè)損傷都在幾乎相同的時(shí)間下處理，以避免位置及凝血因各自獨(dú)立處理而產(chǎn)生差異。根據(jù)需要，各次評價(jià)后吸去來自損傷的血液。測量及記錄通過標(biāo)準(zhǔn)方法評價(jià)ACT、止血、血壓及心率。統(tǒng)計(jì)分析本研究的采樣單元為對于總計(jì)120個(gè)損傷來說，每個(gè)治療組中具有40個(gè)損傷的肝損傷位。采用多元回歸分析，根據(jù)治療2、5及10分鐘后的出血分?jǐn)?shù)評價(jià)治療效果(0=不出血、1=滲出、2=非常輕微，3=輕微、4=中度及5=嚴(yán)重)。獨(dú)立的變量包括治療組、豬、肝葉(中間、右側(cè)或左側(cè))及初始出血分?jǐn)?shù)。在治療后的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)處計(jì)算FB/FS、Lyo/FS、FB/Lyo、以及它們的置信區(qū)間(confidence intervals)的機(jī)會(huì)比率(odds ratios)。損傷部位不均勻地分布于三枚葉片及豬上。發(fā)現(xiàn)葉片的影響不顯著，因此去除該影響再次進(jìn)行分析。下述結(jié)果是對沒有葉片影響的模型的分析。進(jìn)ー步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以在非常嚴(yán)格的模型中(高度抗凝血)進(jìn)行臨床前評價(jià)以比較根據(jù)本發(fā)明的干燥的止血組合物與Floseal VH的體內(nèi)活性。所述模型包括具有以十字交叉的方式從穿刺病灶處發(fā)散的4個(gè)追加切ロ的總厚度5mm的肝穿刺。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組使用6只動(dòng)物，這些動(dòng)物被給予4. 0001. U. /kg肝素。在損傷被放置之后,應(yīng)用復(fù)原的Floseal,并用濕紗布以輕微的壓カ按住2分鐘。在此時(shí)間后，評價(jià)初期止血。若未實(shí)現(xiàn)初期止血，重新應(yīng)用產(chǎn)品直至實(shí)現(xiàn)止血，或產(chǎn)品以(5ml)/時(shí)間(15min)被耗盡。主要的終點(diǎn)是初期止血的實(shí)現(xiàn)(是/否)及止血時(shí)間(min)。 若初期止血被實(shí)現(xiàn)，則縫合動(dòng)物，并在24小時(shí)后評價(jià)動(dòng)物的再出血。
權(quán)利要求
1.一種用于制備干燥、穩(wěn)定的止血組合物的方法，所述方法包括 a )提供適用于止血的生物相容性聚合物的干燥顆粒制劑， b)用凝血誘導(dǎo)劑的制劑對所述干燥顆粒制劑形式的顆粒進(jìn)行包衣，由此獲得凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒， c)將所述凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒填充入最終容器中， d)將所述最終容器完成為可儲(chǔ)存的給藥器，其含有所述凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒來作為干燥、穩(wěn)定的止血組合物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟b)通過流化床方法實(shí)施。.
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述凝血誘導(dǎo)劑的制劑是凝血酶溶液，優(yōu)選為進(jìn)一步含有賦形劑、尤其是白蛋白、甘露醇或它們的混合物的凝血酶溶液。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟d)包含環(huán)氧乙烷滅菌步驟。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述凝血酶制劑是含有凝血酶的溶液，其中凝血酶的含量優(yōu)選在10 10，0001. U.的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在50 5，0001.U.的范圍內(nèi)，尤其在100 I, 0001. U. /ml的范圍內(nèi)。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述凝血酶制劑是進(jìn)一步包含NaCl和CaCl2的溶液。
7.如權(quán)利要求1 6中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,步驟b)作為Wurster包衣方法實(shí)施。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，Wurster包衣方法使用氮?dú)庾鳛楣に嚉怏w來實(shí)施，并且優(yōu)選使用O.1 1. 2mm的噴嘴,尤其是O. 4 1. Omm的噴嘴。
9.如權(quán)利要求1 7的任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，注射器被用作所述最終容器。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述注射器是稀釋劑注射器配以藥學(xué)上可接受的稀釋劑而得到的注射器，所述稀釋劑用于復(fù)原所述干燥、穩(wěn)定的止血組合物。
11.如權(quán)利要求1 10中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述凝血酶組分含有人凝血酶，尤其是重組人凝血酶。.
12.如權(quán)利要求1 11中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物含有選自于由明膠、可溶性膠原蛋白、白蛋白、血紅蛋白、纖維蛋白原、纖維蛋白、酪蛋白、纖維連接蛋白、彈性蛋白、角蛋白及層粘連蛋白構(gòu)成的組中的蛋白質(zhì)；或它們的衍生物或組合。
13.如權(quán)利要求1 12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物含有選自于由糖胺聚糖、淀粉衍生物、纖維素衍生物、半纖維素衍生物、木聚糖、瓊脂糖、藻酸鹽及殼聚糖構(gòu)成的組中的多糖；或它們的衍生物或組合。
14.如權(quán)利要求1 13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物含有選自于由聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚乙烯樹脂、聚丙交酯-乙交酯、聚己內(nèi)酯及聚氧乙烯構(gòu)成的組中的聚合物；以及它們的衍生物和組合。
15.如權(quán)利要求1 14中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物含有交聯(lián)多糖、交聯(lián)蛋白、或交聯(lián)非生物聚合物；或它們的混合物。
16.如權(quán)利要求1 15中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物為顆粒狀材料。
17.如權(quán)利要求1 16中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述適用于止血的生物相容性聚合物為交聯(lián)明膠。
18.如權(quán)利要求1 17中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述最終容器進(jìn)一步含有可有效抑制聚合物因暴露于滅菌射線時(shí)的變性的量的穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑優(yōu)選為抗壞血酸、抗壞血酸鈉、抗壞血酸的其他鹽、或抗氧化劑。
19.一種用于將止血組合物運(yùn)送至患者身體的靶位的方法，所述方法包括將通過如權(quán)利要求I 18中任一項(xiàng)所述的方法制備的止血組合物運(yùn)送至靶位。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述方法進(jìn)一步包括使所述止血組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑接觸以獲得水凝膠形式的止血組合物的步驟。
21.—種最終容器，其通過如權(quán)利要求1 18中任一項(xiàng)所述的方法獲得。
22.一種提供即用型止血組合物的方法，其包括使通過如權(quán)利要求1 18中任一項(xiàng)所述的方法制備的止血組合物與藥學(xué)上可接受的稀釋劑接觸。
23.用于給藥止血組合物的試劑盒，其包含權(quán)利要求21所述的最終容器和含有藥學(xué)上可接受的稀釋劑的容器。
24.適用于止血的生物相容性聚合物的凝血酶包衣顆粒。
25.如權(quán)利要求24所述的顆粒，其特征在于，所述聚合物是明膠。
全文摘要
本發(fā)明描述的是一種用于制備干燥、穩(wěn)定的止血組合物的方法，所述方法包括a)提供適用于止血的生物相容性聚合物的干燥顆粒制劑，b)用凝血誘導(dǎo)劑的制劑對所述干燥顆粒制劑形式的顆粒進(jìn)行包衣，由此獲得凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒，c)將所述凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒填充入最終容器中，d)將所述最終容器最終轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓛?chǔ)存的給藥器作為干燥、穩(wěn)定的止血組合物，所述可儲(chǔ)存的給藥器含有所述凝血誘導(dǎo)劑包衣聚合物顆粒。
文檔編號(hào)A61L24/10GK103037845SQ201180037645
公開日2013年4月10日 申請日期2011年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者A·格斯?fàn)?申請人:巴克斯特國際公司, 巴克斯特保健股份有限公司