專利名稱：靶向VEGFA的siRNA及用于體內治療的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及siRNA的應用。
背景技術：
血管生成是一個生理學過程，包括新血管的生長。這個過程的一個重要部分是產生血管內皮生長因子(VEGF或VEGFA)，其是由細胞產生的一種化學信號，刺激新血管的生長。當VEGFA由細胞分泌并結合一或多個關聯(lián)受體如跨膜蛋白質激酶VEGFR1/FLT-1和VEGFR2/FLK-1/KDR時起始該過程。在VEGFA結合跨膜蛋白質之后，起始信號級聯(lián)，最終導致新血管形成。血管生成可以是正常和關鍵的身體發(fā)育和調節(jié)的一部分。不幸地，其也可以與許多不希望的病癥如視網(wǎng)膜病變、銀屑病、癌癥、滲出型老年性黃斑變性(ARMD)及類風濕性關節(jié)炎相關。在這些及其它情況中，存在高水平的VEGFA及伴隨的血管化增加。因此，試圖開發(fā)關注于控制VEGFA產生的治療策略。發(fā)明概述

本發(fā)明涉及抑制VEGFA表達的組合物和方法，以及與VEGFA過表達相關的病癥的治療。因此，本發(fā)明提供了抑制全部或部分VEGFA產生的試劑盒、siRNA以及導入siRNA的方法。根據(jù)第一個實施方案，本發(fā)明提供了抑制VEGFA表達的方法。所述方法包括在體內(例如在人體內)給予生物體siRNA的方法，所述siRNA包含選自如下的序列SEQ IDN0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88。根據(jù)第二個實施方案，本發(fā)明提供了一種抑制VEGFA表達的方法。所述方法包括在體外給予siRNA，所述siRNA包含選自如下的序列SEQ ID NOs: 2、4、6、8、10、12、14、16、
18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88。根據(jù)第三個實施方案，本發(fā)明提供了抑制VEGFA表達的方法。所述方法包括給予前兩個實施方案的任一 siRNA，其中所述siRNA具有一或多個如下修飾有義鏈內所有C和U核苷酸以及有義鏈的前兩個5’核苷酸的2’ -O-烷基修飾(如2’ -O-甲基修飾)，反義鏈內所有C和U核苷酸的2’氟修飾以及反義鏈位置I的核苷酸的5’磷酸化。在一些實施方案中，所述siRNA具有對有義鏈內所有C和U核苷酸的2’ -O-烷基修飾以及對反義鏈的至少一個2’ -O-燒基修飾。在一些實施方案中,所述siRNA具有一或多個1-6個核苷酸的突出端區(qū)。在一些實施方案中，存在所有前述修飾，以及僅那些修飾存在，因此除了位于有義鏈位置I和2的那些之外的所有G和A核苷酸均具有2’ -OH基團。根據(jù)第四個實施方案，本發(fā)明提供了抑制VEGFA表達的方法。所述方法包括給予前三個實施方案的任一 siRNA，其中所述siRNA具有一或多個如下修飾通過G5接頭附著的膽固醇部分，及在有義鏈的位置6、13和19的一或多個位置的錯配，其中有義鏈的長度為19個核苷酸，反義鏈的長度也為19個核苷酸(不包括突出端區(qū))。有義鏈上的位置是從有義鏈的5’末端測量，其中有義鏈的第一個5’核苷酸被鑒別為最5’的核苷酸，其與反義鏈上的核苷酸堿基配對。正如此，通過這個定義，5’有義鏈突出端區(qū)核苷酸不包括在計數(shù)方案中。在一些這樣的實施方案中，沒有5’突出端區(qū)。在一些實施方案中，有一或兩個1-6個堿基的3’突出端區(qū)或者沒有突出端區(qū)。在一些實施方案中，在雙鏈區(qū)內，除了位置6、13和19之外，有100%互補性。根據(jù)第五個實施方案，本發(fā)明提供了至少兩個siRNA的集合，所述siRNA選自SEQID N0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88。根據(jù)第六個實施方案，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的一或多個本文所述siRNA。根據(jù)第七個實施方案，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含治療有效量的siRNA，其中所述siRNA包含(a)反義鏈，其長度為19-36個堿基，并且包含選自如下的序列SEQ IDN0s:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86和 88 ;及(b)有義鏈，其長度為19-36個堿基，其中所述反義鏈和有義鏈形成17-30個堿基對的雙鏈區(qū)，在所述雙鏈區(qū)內具有至少75%互補性。在siRNA的雙鏈區(qū)的長度超過19個堿基對的情況中，在反義鏈的3’末端和有義鏈的5’末端加入另外的(有義和反義)序列。通過使用本文所 述的方法、siRNA和藥物組合物，可以高效及有效地沉默VEGFA。附圖簡述

圖1A和B證實修飾為Accell分子并通過玻璃體內(IVT)注射給予大鼠的兩個VEGFA siRNA的體內沉默活性。圖2是siRNA VEGFA3. 2(修飾為Accell分子)劑量應答曲線的示意圖。圖3A和3B是另一 siRNA VEGFA3. 7(修飾為Accell分子)的劑量應答曲線示意圖。圖4A和4B證實修飾為Accell分子及通過IVT注射給予大鼠的siRNA VEGFA3. 7的直至8周的作用持續(xù)時間。圖5A和5B證實大鼠氧誘導的視網(wǎng)膜病變(OIR)模型中通過被修飾為Accell分子的siRNA VEGFA3. 7對VEGFA表達和視網(wǎng)膜前新血管化的抑制。發(fā)明詳述定義除非特別指出或從上下文獲知，如下術語和短語具有下文提供的含義。2’ 修飾2’修飾是指典型位于核糖核苷酸內核糖的2’位置的羥基用另一部分如-O-烷基基團如_0_甲基、-0_乙基、-0_n-丙基、-0_異丙基等或者由另一基團如氟基團的取代。在一些實施方案中，在存在-O-烷基修飾的情況中，相同的-O-烷基基團存在于所有O-烷基-修飾的核苷酸上。2’修飾的其它類型是鹵素基團，如2’氟或2’溴。“AccelI” siRNA術語“AccelI”是指優(yōu)選的siRNA結構，其包含有義鏈長度為19個核苷酸，并且具有⑴在位置I和2上的2’-0_甲基修飾(從5’末端開始計數(shù))；⑵在所有C和U上的2’-0_甲基修飾；以及(3)通過C5接頭與3’末端綴合的膽固醇。反義鏈的長度是21個核苷酸，具有5’磷酸修飾，在所有C和U核苷酸含有F修飾，當與有義鏈配對時形成2個核苷酸的突出端區(qū)，以及在(I)突出端區(qū)的兩個核苷酸之間及(2)在雙鏈區(qū)的最3’核苷酸與突出端區(qū)第一個核苷酸之間含有硫代磷酸修飾。此外，Accell分子在位置6、13和19含有錯配(從有義鏈的5’末端開始計數(shù))。在所有情況中，這些錯配是通過用另一堿基置換有義核苷酸而產生。以此方式，反義鏈保持與靶分子的完全互補性。關于另外的詳細描述，見US 2009/0209626 Al，其揭示并入本文作參考?；パa性術語“互補性”是指多核苷酸彼此形成堿基對的能力。堿基對典型是通過反平行多核苷酸中核苷酸單位之間的氫鍵形成的?；パa的多核苷酸鏈可以是Watson-Crick方式的堿基對(如A與T，A與U，C與G)，或者使得雙鏈體形成的任何其它方式。本領域技術人員意識到當使用與DNA相反的RNA時，尿嘧啶而不是胸腺嘧啶被認為是與腺苷互補的堿基。然而，除非特別說明，當在本發(fā)明上下文中提及U時，暗含取代T的能力。完全互補性或100%互補性是指這樣的情況，其中一個多核苷酸鏈的每個核苷酸單位均可以與另一多核苷酸鏈的核苷酸單位氫鍵結合。不完全互補性是指這樣的情況，其中兩個鏈的一些而不是全部核苷酸單位可以彼此氫鍵結合。例如，對于兩個20-mer，如果每個鏈上僅兩個堿基對可以 彼此氫鍵結合，則所述多核苷酸鏈呈現(xiàn)10%互補性。在一些實施例中，如果每個鏈上18個堿基對可彼此氫鍵結合，則所述多核苷酸鏈呈現(xiàn)出90%互補性。在一些實施方案中，在雙鏈區(qū)內，具有至少75%互補性，至少80%互補性，至少90%互補性，至少95%互補性或者100%互補性。綴合部分本發(fā)明的綴合部分(也簡單稱作“綴合物”)是與核苷酸直接或間接連接的部分，且可以通過多種方式靶向進入細胞中。例如，綴合部分可以是天然脂質。如此，基于脂質的綴合部分可包括陽離子脂質、中性脂質、神經鞘脂及脂肪酸，包括硬脂酸、油酸、反式油酸、亞油酸、反亞油酸(linoleaidic)、亞麻酸和肉豆蘧酸?；蛘?，所述綴合部分可以是天然蛋白質樣物質，包括肽，其是膜轉位肽(如TAT，穿膜肽(penetratin)，MAP)或者陽離子肽(如聚(賴氨酸)，聚(精氨酸)，聚(組氨酸)，聚(賴氨酸/精氨酸/組氨酸)或者魚精蛋白)。或者，所述綴合部分可以是小分子，例如其靶向特定受體或者能將其自身插入膜中以及通過胞吞途徑吸收。因此，基于金剛烷、多環(huán)芳烴(如萘，菲或芘)、大環(huán)(maciOcyle)、類固醇或其它化學支架的小分子均是本發(fā)明潛在的綴合物。再或者，綴合部分可基于陽離子聚合物，如聚乙烯亞胺、樹突狀聚合物、聚(烷基吡啶)鹽或者陽離子白蛋白。在一些情況中，綴合部分是受體的配體或者可以與分子締合隨之與受體締合。這個類別包括膽汁酸、小分子藥物配體、維生素、適體、碳水化合物、肽(包括但不限于激素、蛋白質、蛋白質片段、抗體或抗體片段)、病毒蛋白(如衣殼蛋白)、毒素(如細菌毒素)等。還包括天然類固醇綴合物，如膽固醇、膽留烷醇、膽烷酸、豆留醇、孕烯醇酮(pregnelone)、孕酮、腎上腺酮、醛固酮、睪酮、雌二醇、麥角固醇等。本發(fā)明優(yōu)選的綴合部分是膽固醇(CHOL)、膽甾烷醇(CHLN)、膽烷酸(CHLA)、豆甾醇(STIG)和麥角固醇(ERGO)。在另一實施方案中，靶向特定受體的分子經修飾，以避免綴合的SiRNA損失至其它的可能源頭。例如，當將膽固醇綴合的siRNA在存在正常血清條件下放置時，這種材料的主要級分將與白蛋白和/或血清中其它蛋白質締合，因此產生不可用于如與LDL相互作用的siRNA。為此，本發(fā)明的綴合部分可以通過一定方式修飾，由此其繼續(xù)結合或締合其限定的靶(如LDL)，但是與未限定的結合配體(如血清白蛋白)的親和性較低。雙鏈區(qū)短語“雙鏈區(qū)”是指這樣的區(qū)域，其中兩個互補的或者基本互補的多核苷酸彼此形成堿基對，通過Watson-Crick堿基配對或任何其它方式配對,在互補或基本互補的多核苷酸鏈之間可以形成穩(wěn)定的雙鏈體。雙鏈區(qū)的舉例的大小包括但不限于17-30個堿基對，17-25個堿基對，17-23個堿基對，18-30個堿基對，18-25個堿基對，18-23個堿基對，19-30個堿基對，19-25個堿基對和19-23個堿基對。雙鏈區(qū)可以通過堿基對長度以及該區(qū)域的互補性程度限定。因此，當雙鏈區(qū)是在兩個單獨的核苷酸鏈-反義鏈和有義鏈-之間形成時，重要的是注意每個鏈在5’末端或3’末端可含有是雙鏈體一部分的核苷酸及不是雙鏈體一部分的核苷酸?？梢栽O計siRNA，由此在反義鏈上，與靶互補的所有核苷酸是雙鏈區(qū)的一部分，及因此在有義鏈上具有 互補核苷酸。然而，也可以這樣設計siRNA，由此反義鏈在其3’末端和/或5’末端也含有核苷酸，盡管在有義鏈上沒有互補核苷酸，其是在靶上有互補核苷酸的反義鏈內一段連續(xù)核苷酸序列的一部分。例如，有義鏈可含有19個核苷酸，反義鏈可含有21個核苷酸。除了反義鏈的兩個最3’端的核苷酸之外均與有義鏈的19個核苷酸互補，而反義鏈的21個核苷酸的完整序列可以與靶的21個核苷酸序列互補?；蛘?，可以選擇反義鏈的兩個最3’端的核苷酸以不與靶的部分互補，或者隨機選擇或促進加工由此一或這兩個核苷酸與所述靶的兩個核苷酸可以互補或可以不互補，與其相鄰的反義鏈的其它19個核苷酸是互補的。此外，在不同的實施方案中，在雙鏈區(qū)內，可例如沒有錯配、有一個錯配、兩個錯配、三個錯配、四個錯配或者五個錯配。錯配術語“錯配”包括這樣的情況，其中在有義鏈的核苷酸與反義鏈的核苷酸之間不發(fā)生Watson-Crick堿基配對。舉例的錯配包括但不限于A對G，C對A，U對C，U對G，A對A，G對G，C對C，及U對U。接頭接頭是附著兩或多個其它部分的部分。盡管不希望受定義或慣例的限制，在本申請中，接頭的長度通過計數(shù)原子數(shù)目描述，所述原子數(shù)目代表了將綴合部分與接頭連接的原子和與寡核苷酸關聯(lián)的末端磷酸部分的氧原子之間的最短距離，其中所述接頭通過所述末端磷酸部分附著于所述寡核苷酸。例如，在綴合部分與接頭通過氨基甲酸鍵連接的實施方案中，接頭的長度被描述為表示氨基甲酸鍵的氮原子與磷酸鍵的氧原子之間最短距離的原子數(shù)。在存在環(huán)形結構的情況中，優(yōu)選計數(shù)環(huán)周圍的代表最短路徑的原子。可用于本發(fā)明的組合物和方法中的綴合物-接頭的結構的非限制性實例包括但不限于接頭/接頭，其基于0-氨基_1，3-二醇、β -氨基-1，2-二醇、羥脯氨醇、ω-氨基-烷醇、二乙醇胺、@-羥基-1，3-二醇、β -羥基-1，2-二醇、6-硫-1，3-二醇、β _硫_1，2_ 二醇、β -竣基_1，3- 二醇、β -竣基_1，2- 二醇、ω -輕基-燒醇、ω -硫-燒醇、ω-羧基-烷醇、功能化寡乙二醇、烯丙胺、丙烯酸、烯丙醇、丙炔胺以及丙炔醇。在一些實施方案中，接頭不僅提供了附著綴合部分的位點，而且還提供了附著支持物以及起始寡核苷酸合成的功能性位點。優(yōu)選地，這些位點是羥基基團；最優(yōu)選地，其是初級羥基基團和二級羥基基團，以使得其在合成綴合物修飾的固體支持物期間被化學區(qū)分。一個羥基基團，優(yōu)選初級羥基基團，是用保護基團保護的，所述保護基團在合成寡核苷酸的第一個步驟可以除去，根據(jù)本領域技術人員熟知的方法進行。優(yōu)選地，這個保護基團是發(fā)色團，可用于估計與固體支持物附著的綴合部分的量；最優(yōu)選地，所述基團選自三苯甲基(Tr)、一甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)和三甲氧基三苯甲基(TMTr)。將另一羥基基團、優(yōu)選二級羥基基團用功能化的系鏈(tether)來進行衍生，其可以與固體合成支持物上的官能團共價反應，根據(jù)本領域技術人員熟知的方法進行。優(yōu)選的系鏈例如是二羧酸，如琥珀酸、戊二酸、對苯二甲酸、草酸、二甘醇酸及氫醌-0，O’-二乙酸酯。所述系鏈的羧酸功能性之一是與羥基反應提供酯鍵，其可通過使用堿性試劑(氫氧化物、碳酸鹽或胺)裂解，而另一羧酸功能性是與合成支持物反應，通常通過形成對支持物具有胺功能性的酰胺鍵進行。接頭也可以賦予寡核苷酸綴合物其它希望的性質改良的水溶液溶解性，綴合部分與寡核苷酸之間的最佳分隔距離，靈活性(或缺少這項)，特定方向，分支等。優(yōu)選地，接頭與綴合部分之間的化學鍵是氨基甲酸鍵；然而，其它化學性也在本發(fā)明范圍內。舉例的接頭上與綴合部分形成化學鍵的官能團包括但不限于羥基、胺、羧酸、羧酸鹵化物、羧酸戶型酯、羰基、氯羰基、咪唑羰基、硫醇、馬來酰亞胺、鹵代烷基、磺?；?、烯丙基和炔丙基。在接頭與綴合物之間形成的舉例的化學鍵包括但不限于基于氨基甲酸鹽、醚、酯、酰胺、二硫化物、硫醚、磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磺酰胺、磺酸鹽、亞砜、尿素、酰肼、肟、光不穩(wěn)定鍵，C-C 鍵形成基團如Diels-Alder環(huán)加成對或者閉環(huán)復分解對(ring-closing metathesis pairs),以及Michael反應對。通常地,所述綴合部分具有天然或化學安裝的合適的官能團；及然后用選擇的與綴合部分上的官能團有效及穩(wěn)定反應的官能團合成接頭。本發(fā)明特別涵蓋具有相同長度但是能與兩或多個綴合物關聯(lián)的接頭。在另一實施方案中，所述接頭可以是核苷衍生物。所述核苷可以是例如核糖核苷，2’ -脫氧核糖核苷或2’ -修飾的-2’ -脫氧核糖核苷，如2’ -O-甲基或2’ -氟。所述核苷可以是例如阿糖核苷或2’ -修飾的阿糖核苷。使用本領域熟知的方法，嘌呤和嘧啶核苷可以在堿基上特定部位修飾，以提供附著綴合部分的接頭和官能團。例如，嘧啶核苷如尿苷和胞苷可以在尿嘧啶或胞嘧啶堿基的5-位置修飾，使用醋酸汞、鈀催化劑和烯丙基試劑如丙烯胺、烯丙醇或丙烯酸?；蛘?，5-碘嘧啶可以在5-位置修飾，使用鈀催化劑和炔丙基試劑如炔丙胺、丙炔醇或丙炔酸進行?；蛘?，尿苷可以在4-位置修飾，通過用三唑或磺酰氯活化劑隨后與二胺、氨基醇或氨基酸反應進行。胞苷可相似地在4-位置修飾，通過用亞硫酸氫鹽處理及隨后與二胺、氨基醇或氨基酸反應進行。嘌呤可同樣在7、8或9位置使用相似類型反應序列進行修飾。在優(yōu)選的實施方案中，所述接頭長度為大約3-9個原子。因此，所述接頭的長度可以是3、4、5、6、7、8或9個原子。優(yōu)選地，所述接頭長度為5、6、7或8個原子。更優(yōu)選地，所述接頭長度為5或8個原子。最優(yōu)選地，所述接頭是直鏈C5接頭，即在連接綴合部分與接頭的原子與寡核苷酸關聯(lián)的末端磷酸部分的氧原子之間有5個碳原子，通過其所述接頭與寡核苷酸附著。因此，在綴合部分與C5接頭通過氨基甲酸鍵連接的情況中，在氨基甲酸鍵的氮原子與磷酸鍵的氧原子之間有5個碳原子。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述綴合部分是膽固醇，所述接頭是通過氨基甲酸基團附著于膽固醇的C5接頭(5個碳原子接頭)，因此形成Chol-C5綴合物-接頭。當通過磷酸二酯鍵附著于雙鏈體的有義和/或反義寡核苷酸的5’和/或3’末端時，所得綴合物-接
頭-寡核苷酸可具有如下結構
權利要求
1.用于降低VEGFA體內表達的方法，包括給予對象siRNA，其中所述siRNA包含選自如下的序列SEQ ID N0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88。
2.權利要求1的方法，其中所述對象是哺乳動物。
3.權利要求2的方法，其中所述對象是人。
4.權利要求1的方法，其中所述siRNA由雙鏈區(qū)組成，所述雙鏈區(qū)長度為17-30堿基對并且是無突出端區(qū)、一個突出端區(qū)或者兩個突出端區(qū)，其中每個突出端區(qū)有6個或更少的喊基。
5.權利要求1的方法，其中所述siRNA是具有長度為17-30堿基對的雙鏈區(qū)的shRNA。
6.權利要求1的方法，其中所述siRNA包含(a)有義鏈；及(b)反義鏈，其中每個所述有義鏈和所述反義鏈的長度為19-36個核苷酸，并且反義鏈包含選自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88 的序列。
7.權利要求6的方法，其中 (a)在有義鏈內，位置I和2的核苷酸、所有C核苷酸和所有U核苷酸具有2’-0-甲基修飾，并且有義鏈的所有其它核苷酸具有2’ OH基團；以及 (b)在反義鏈內，所有C核苷酸和所有U核苷酸具有2’氟修飾，并且反義鏈的所有其它核苷酸具有2’ OH基團，以及在反義鏈位置I的核苷酸是5’磷酸化的。
8.權利要求7的方法，其中反義鏈的兩個最3’端的堿基是UU。
9.權利要求8的方法，其中所述反義鏈長度是21個堿基。
10.權利要求9的方法，其中所述有義鏈的長度是19個堿基，并且所述反義鏈與有義鏈形成長度為19個堿基對的雙鏈區(qū)。
11.權利要求6的方法，其中所述siRNA還包含與有義鏈的3’末端附著的膽固醇部分，并且所述膽固醇部分通過C5接頭附著，以及其中所述雙鏈區(qū)在有義鏈的位置6、13和19含有錯配，其中所述位置是相對于有義鏈的5’末端限定的，并且所述有義鏈不含有5’突出端區(qū)。
12.權利要求7的方法，其中所述siRNA還包含與有義鏈的3’末端附著的膽固醇部分，并且所述膽固醇部分通過C5接頭附著，以及其中所述雙鏈區(qū)在有義鏈的位置6、13和19含有錯配，其中所述位置是相對于有義鏈的5’末端限定的，并且所述有義鏈不含有5’突出端區(qū)。
13.權利要求12的方法，其中所述反義鏈長度為21個堿基。
14.權利要求13的方法，其中所述有義鏈的長度為19個堿基，并且所述反義鏈與有義鏈形成長度為19個堿基對的雙鏈區(qū)。
15.權利要求14的方法，其中所述反義鏈包含SEQID N0:54。
16.權利要求15的方法，其中有義鏈內在位置6、13和19的所述錯配的核苷酸是與反義鏈上相對的核苷酸相同的堿基。
17.藥物組合物，其包含治療有效量的siRNA，其中所述siRNA包含 (a)反義鏈，其長度為19-36個堿基，并具有選自SEQ ID NO:2、4、`6、8、10、12、14、16、`18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、`48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、·68、70、72、74、76、78、80、82、84、86 和 88 的序列， (b)有義鏈，其長度為19-36個堿基，其中所述反義鏈與有義鏈形成17-30個堿基對的雙鏈區(qū)，并且雙鏈區(qū)內至少75%是互補的。
18.權利要求17的藥物組合物，其中在雙鏈區(qū)內，在位置6、13或19中的一或多個位置存在錯配，其中所述位置是相對于有義鏈的5’末端限定的。
19.權利要求18的藥物組合物，其中在有義鏈內，位置I和2及所有的C和U具有·2’ -OMe修飾，并且有義鏈的所有其它位置具有2’ -OH基團，以及其中反義鏈的所有C和U具有2’-F修飾，并且反義鏈的所有其它核苷酸均具有2’-OH基團，并且反義區(qū)位置I的核苷酸是磷酸化的。
20.權利要求19的藥物組合物，其中有義鏈的長度為19個堿基，而反義鏈的長度為21個堿基，并且反義鏈的兩個最3’端的堿基是UU突出端。
21.權利要求20的藥物組合物，其中膽固醇部分通過C5接頭附著于有義區(qū)的3’末端。
全文摘要
血管內皮生長因子A(VEGFA)是由細胞產生的化學信號，其刺激新血管生長，VEGFA的過表達可導致不希望的生理學狀況。通過新siRNA的鑒別及改善這些siRNA在體內的沉默能力，發(fā)明了治療組合物和方法以解決與這種過表達相關的問題。
文檔編號A61K31/7088GK103068981SQ201180036639
公開日2013年4月24日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權日2010年7月28日
發(fā)明者A·史密斯, A·雷諾茲, J·E·查特頓, 章新愉 申請人:愛爾康研究有限公司