專利名稱：：抗c-MEt的單克隆抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及針對人C-Met這種肝細胞生長因子受體的單克隆抗體，并涉及這類抗體的用途，特別是其在癌癥治療中的用途。
背景技術(shù)：
：C-Met是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白質(zhì)。最初的單鏈前體經(jīng)翻譯后切割產(chǎn)生C-Met異二聚體的成熟形式,所述異二聚體由二硫鍵連接的胞外α-鏈(50kDa)和較長的跨膜β_鏈(145kDa)組成(Birchmeier等，2003,NatRevMolCellBiol4:915)。c-Met的胞外部分由3種結(jié)構(gòu)域類型組成。N端SEMA結(jié)構(gòu)域由完整的α-亞基和部分β-亞基構(gòu)成，并包括腦信號蛋白的同源物。SEMA結(jié)構(gòu)域后面是富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域，再后面是4個免疫球蛋白-(Ig)樣結(jié)構(gòu)域。胞質(zhì)部分含有對下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是必不可少的近膜激酶結(jié)構(gòu)域和羧基端尾。c-Met的唯一已知的高親和力配體肝細胞生長因子(HGF)在正常條件下主要由成纖維細胞表達(Li和Tseng1995，JCellPhysiol163:61)，并由腫瘤細胞表達(Ferracini等，1995，Oncogene10:739)。HGF(亦稱為分散因子SF)以前體合成，該前體經(jīng)蛋白水解轉(zhuǎn)化成有活性的α/β異二聚體。根據(jù)受體結(jié)合片段的晶體結(jié)構(gòu)，認為HGF作為二聚體與c-Met結(jié)合(Chirgadze等，1999,NatStructBiol6:72)。HGF-α鏈以高親和力與c-Met中的Ig樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合，而HGF-β鏈以低親和力與c_MetSEMA結(jié)構(gòu)域結(jié)合(Basilico等，2008，JBiolChem283:21267)。后一互相作用在活性HGF異二聚體結(jié)合時，負責(zé)c-Met二聚化和受體酪氨酸激酶活化。受體自身磷酸化產(chǎn)生用于效應(yīng)子募集的獨特?？课稽c，Gabl(生長因子受體結(jié)合蛋白2[Grb2]相關(guān)結(jié)合物I)與之結(jié)合對于以下主要c-Met下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是必需的(Comoglio等，2008,NatRevDrugDiscov7:504)·Ras-ERKI/2途徑增殖?！as-Rac途徑侵襲、移動、上皮至間充質(zhì)轉(zhuǎn)換?！I3K-Akt途徑存活。C-Met在胚胎發(fā)生期間和在成年期的許多器官的上皮和內(nèi)皮細胞表面上表達，包括肝、胰腺、前列腺、腎、肌肉和骨髓。c-Met活化在由包括增殖、移動、血管生成和防止細胞凋亡在內(nèi)的一系列過程組成的所謂“侵襲性生長”程序中起重要作用(Boccaccio和Comoglio2006,NatRevCancer6:637)。這些c_Met調(diào)節(jié)的過程發(fā)生在胚胎發(fā)育、肝臟和心臟損傷修復(fù)期間的正常生理條件下和腫瘤發(fā)生期間的病理情況下(Eder等，2009，ClinCancerRes15:2207)。不良的c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)幾乎發(fā)生在實體瘤的所有類型以及各種肉瘤、造血系統(tǒng)惡性腫瘤和黑素瘤中，所述實體瘤例如膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、頭頸癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌和甲狀腺癌(Birchmeier等，2003，NatRevMolCellBiol4:915;Comoglio等，2008,NatRevDrugDiscov7:504;Peruzzi和Bottaro2006,ClinCancerRes12:3657)。c_Met的致腫瘤性的主要機制通常以下列3種不同的方式實現(xiàn)·自分泌HGF/c-Met環(huán)，·C-Met或HGF過量表達，·c-Met受體編碼序列中激活激酶的突變。最值得注意的是，在遺傳性乳頭狀腎癌患者中鑒定出激活性c-Met突變(Schmidt等，1997，NatGenet16:68)。c_Met的組成型活化促成增殖、侵襲、存活或血管生成性癌表型之一或組合。已表明腫瘤細胞中內(nèi)源性表達的c-Met的基因沉默導(dǎo)致增殖和腫瘤生長缺乏及已建立的轉(zhuǎn)移消退，以及新轉(zhuǎn)移的產(chǎn)生減少(Corso等,2008,0ncogene27:684)。由于從開始直到向轉(zhuǎn)移進展，c-Met促成癌癥發(fā)展的多個階段，因此c-Met及其配體HGF成為定向癌癥療法的主要候選藥物(Comoglio等,2008,NatRevDrugDiscov7504；Knudsen和VandeWoude2008,CurrOpinGenetDev1887)。正對若干策略進行探索以達到該目的誘鉺受體HGF或c-Met或分子類似物的亞區(qū)可通過阻斷配體結(jié)合或受體二聚化而作為化學(xué)計量競爭劑(stochiometriccompetitor)起拮抗性作用。HGF的這類拮抗亞區(qū)的一個實例是NK4(KringlePharma)。小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI):在臨床評價的不同階段中，3種c-Met特異性TKI為ARQ197(ArQule)、JNJ38877605(Johnson&Johnson)和PF-04217903(Pfizer)?！た笻GF單克隆抗體，例如AMG102、rilotumumab(Amgen)、HuL2G7(Takeda)和AV-299(Schering)?！た笴-Met單克隆抗體描述于W02005016382、W02006015371、W02007090807、W02007126799TO2009007427、TO2009142738和vanderHorst等(vanderHorst等，2009，Neoplasoa11:355)。MetMAb(Genentech)是與c_Met的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合從而防止HGF結(jié)合和隨后的受體活化的人源化一價(單臂)0A-5D5抗體(Jin等，2008，CancerRes68:4360)。在小鼠異種移植模型中，發(fā)現(xiàn)用MetMAb治療抑制HGF驅(qū)動的原位成膠質(zhì)細胞瘤和皮下胰腺腫瘤的腫瘤生長(Jin等，2008,CancerRes68:4360;Martens等，2006,ClinCancerRes12:6144)oh224GlI(PierreFabre)(Corvaia和Boute2009，摘要835AACR第100周年年會(AACRIOOthAnnualMeeting))是人源化二價抗c_MetIgGl抗體。在小鼠中觀察到該抗體的抗腫瘤作用(Goetsch等，2009，摘要2792，AACR第100周年年會)。CE-355621(Pfizer)是一種人IgG2，在腫瘤異種移植模型中，通過與c-Met的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合阻斷配體結(jié)合并抑制HGF依賴性長生(Tseng等，2008，JNuclMed49:129)。綜上所述,對幾個抗c-Met產(chǎn)品正在進行研究,但迄今為止，尚無抗c-Met產(chǎn)品獲準用于治療應(yīng)用。仍然需要用于治療嚴重c-Met相關(guān)疾病(例如癌癥)的有效安全的產(chǎn)品。發(fā)明概述本發(fā)明的一個目的是提供用于醫(yī)藥用途的新的高特異性和有效的單克隆抗C-Met抗體。本發(fā)明的抗體具有不同于本領(lǐng)域所述抗體的c-Met結(jié)合性質(zhì)。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的抗體對人c-Met具有高親和力，是拮抗性的，并且具有用于人患者的有利的藥代動力學(xué)特征。附圖簡述圖1:HuMab重鏈可變區(qū)序列的比對。根據(jù)這些序列，可為一些⑶R序列確定共有序列。表4給出這些共有序列。圖2=HuMab輕鏈可變區(qū)序列的比對。根據(jù)這些序列，可為一些⑶R序列確定共有序列。表4給出這些共有序列。圖3:抗c-Met抗體的一價和二價形式與表達c_Met的A431細胞的結(jié)合曲線。所示數(shù)據(jù)為一次代表性實驗的MFI。由于IgGl-024和Un1-068不具有與A431細胞的飽和結(jié)合，因此不可能計算精確的EC5tl值。圖4:抗體與稱猴(Rhesusmonkey)上皮細胞中表達的c_Met的結(jié)合。所示數(shù)據(jù)為一次實驗的MFI。圖5:抗c-Met抗體誘導(dǎo)的對HGF與c_Met受體胞外結(jié)構(gòu)域的結(jié)合的抑制。所示數(shù)據(jù)為一次代表性實驗。圖6:針對與cMetSEMA_567His8的結(jié)合用TR-FRET測定的各種抗c_Met抗體的HGF結(jié)合抑制曲線。所示數(shù)據(jù)為3次獨立實驗的平均MFI土標準差。圖7:與未處理細胞(0%)相比，在抗c-Met抗體處理后活的KP4細胞的抑制百分比。所示數(shù)據(jù)為2次獨立實驗的活細胞的抑制百分比土標準差。在一次實驗中IgGl-1016-022僅為陽性。圖8=SCID小鼠KP4異種移植模型中抗c_Met抗體抑制腫瘤生長的功效。小鼠在第9天用400μg抗體治療，接著一周一次用200μg的維持劑量治療。給出了每個治療組的腫瘤大小中位值。圖9=SCID小鼠KP4異種移植模型中抗c_Met抗體抑制腫瘤生長的功效。小鼠在第9天用400μg抗體治療，接著一周一次用200μg的維持劑量治療。治療隨時間對腫瘤發(fā)生率的作用。給出了無腫瘤小鼠的百分比(腫瘤大小<500mm3)。與對照抗體相比，用拮抗性抗體治療的小鼠中，腫瘤形成延遲。圖10=SCID小鼠MKN45異種移植模型中抗c_Met抗體抑制腫瘤生長的功效。小鼠在第7天用40mg/kg抗體治療,在第14、21和28天用20mg/kg抗體治療。給出了每個治療組直到50%小鼠達到700_3終點的腫瘤大小中位值。圖11=SCID小鼠MKN45異種移植模型中抗c_Met抗體抑制腫瘤生長的功效。小鼠在第天用40mg/kg抗體治療,在第14、21和28天用20mg/kg抗體治療。KaplanMeier圖中給出腫瘤大小小于700mm3的小鼠百分比。與同種型對照抗體相比，用抗c_Met抗體治療的小鼠中，腫瘤形成延遲。圖12:測定抗體柔性對激動活性的作用的KP4存活力測定法。與相同抗體的IgAl和IgGl形式不同，IgA2m(l)形式不誘導(dǎo)增殖。5D5抗c-Met抗體的變體(參見US6468529和實施例2)用于該實驗。圖13(069)的柔性突變體的非還原SDS-PAGE分析。未觀察到多聚體或降解產(chǎn)物異常，但在C220S、AC220和IgGl-鉸鏈IgG3突變體中可見呈50kD條帶的輕鏈配對((LC)2)。圖14:測量c-Met抗體的鉸鏈突變體的c_Met結(jié)合的抗原結(jié)合ELISA。如ELISA所示，所有突變體以不相上下的親和力與c-Met結(jié)合。圖15c-Met磷酸化作為抗c_Met抗體的激動活性的讀出。圖15表示A549裂解物的蛋白質(zhì)印跡結(jié)果；用抗磷酸化c-met的抗體、抗總的c-Met的抗體或抗β-肌動蛋白的抗體染色的膜。圖16:用NC1-H441細胞的增殖測定法。在抗體或?qū)φ沾嬖谙聹赜?天后測定細胞質(zhì)量，并根據(jù)非處理樣品(設(shè)定為100%)的百分比作圖。圖17KP4存活力測定法。測定抗C-Met的抗體對ΚΡ4細胞的總體存活力的作用。通過引入降低抗體柔性的突變，保持和/或改進IgGl-1016-069降低KP4的存活力的能力。圖18:采用ELISA在A549裂解物中以總c_Met水平測量的減量調(diào)節(jié)?？贵w(069)的所有變體保持減量調(diào)節(jié)能力。圖19比較高和低巖藻糖形式的抗體IgGl-1016-069的ADCC測定法。圖20=FACS結(jié)合測定法中缺乏c_Met抗體與全血中細胞的結(jié)合。顯示了B細胞、單核細胞和粒細胞的結(jié)果。發(fā)明詳述定義術(shù)語“c-Met”當(dāng)用于本文時是指肝細胞生長因子受體(Genbank登記號匪000245)，包括由細胞天然表達的或在用c-Met基因轉(zhuǎn)染的細胞中表達的人c-Met的任何變體、同種型和種間同源物。術(shù)語“免疫球蛋白”是指一類結(jié)構(gòu)上相關(guān)的糖蛋白，由兩對多肽鏈組成，一對低分子量輕(L)鏈和一對重(H)鏈，所有4條鏈通過二硫鍵相互連接。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)已得到充分表征。參見例如FundamentalImmunology第7章(Paul,W.主編，第2版，RavenPress,N.Y.(1989))。簡單地說,各條重鏈通常由重鏈可變區(qū)(本文簡稱為Vh或VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)通常由3個結(jié)構(gòu)域CH1、Ch2和Ch3組成。各條輕鏈通常由輕鏈可變區(qū)(本文簡稱為'或VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)通常由I個結(jié)構(gòu)域Q組成。Vh和'區(qū)還可進一步再分為超變區(qū)(即在結(jié)構(gòu)上界線清晰的環(huán)的序列和/或形式上可以是超變化的超變區(qū))，亦稱互補決定區(qū)(CDR)，散布在稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的更保守的區(qū)中。各乂11和八通常由3個⑶R和4個FR組成，按下列順序自氨基端至羧基端排列FR1、⑶Rl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(另參見Chothia和LeskJ.Mol.Biol.196,901-917(1987))。通常，該區(qū)中氨基酸殘基的編號按照以下文獻所述方法進行Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版·PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991)(表述例如如Kabat中的或按照Kabat的可變結(jié)構(gòu)域殘基編號在本文是指該用于重鏈結(jié)構(gòu)域或輕鏈結(jié)構(gòu)域的編號系統(tǒng))。采用該編號系統(tǒng)，肽的實際線性氨基酸序列可含有相當(dāng)于可變結(jié)構(gòu)域FR或CDR的縮短或插入的較少或額外的氨基酸。例如重鏈可變結(jié)構(gòu)域在Vh⑶R2的殘基52后可包括單個氨基酸插入(按照Kabat的殘基52a)、在重鏈FR殘基82后可包括插入的殘基(例如按照Kabat的殘基82a、82b和82c等)?？赏ㄟ^將給定抗體的序列同源區(qū)與具有“標準”Kabat編號的序列進行比對，來確定所述抗體的殘基的Kabat編號。在本發(fā)明的情況下，術(shù)語“抗體”(Ab)是指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的片段或其任一種的衍生物，其具有在典型生理條件下與抗原特異性結(jié)合的能力，具有相當(dāng)時間的半壽期，例如至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約I小時、至少約2小時、至少約4小時、至少約8小時、至少約12小時、約24小時以上、約48小時以上、約3、4、5、6、7天或更多天等，或者任何其它相關(guān)的功能上明確的時期(例如足以誘導(dǎo)、促進、提高和/或調(diào)節(jié)與同抗原結(jié)合的抗體有關(guān)的生理反應(yīng)的時間，和/或足以供抗體募集效應(yīng)子活性的時間)。免疫球蛋白分子的重鏈和輕鏈可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w(Ab)的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的各種細胞(例如效應(yīng)子細胞)和補體系統(tǒng)的組分例如補體活化經(jīng)典途徑的第一組分Clq?？笴-Met抗體還可以是雙特異性抗體、雙鏈抗體(diabody)或類似分子(關(guān)于雙鏈抗體的描述參見例如PNASUSA迎(14),6444-8(1993))。實際上，本發(fā)明提供的雙特異性抗體、雙鏈抗體等可結(jié)合除c-Met的一部分以外的任何合適的靶標。如上所述，除非另有說明或與文中顯然抵觸，否則本文的術(shù)語抗體包括保持與抗原特異性結(jié)合的能力的抗體片段。已經(jīng)表明，可由全長抗體的片段執(zhí)行抗體的抗原結(jié)合功能。包括在術(shù)語“抗體”內(nèi)的結(jié)合片段的實例包括(i)Fab’或Fab片段，一種由'、Vh、Cl和ChI結(jié)構(gòu)域組成的一價片段，或描述于W02007059782(Genmab)中的一價抗體；(ii)F(ab')2片段，包含通過鉸鏈區(qū)上的二硫橋連接的2個Fab片段的二價片段；(iii)基本上由Vh和ChI結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)基本上由抗體單臂的\和Vh結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward等，Nature341,544-546(1989)),其某本h由V11結(jié)構(gòu)域組成，亦稱結(jié)構(gòu)域抗體(Holt等,TrendsBiotechnol.2003年11月；21(11):484-90)；(vi)胳馬它抗體或納米抗體(camelid或nanobodies)(Revets等；ExpertOpinBiolTher.2005年I月占(I):111-24)和(vii)分離的互補決定區(qū)(⑶R)。此外，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域'和Vh由單獨的基因編碼，但可采用重組方法，通過能夠使它們成為單條蛋白質(zhì)鏈的合成接頭將其連接，其中\(zhòng)和Vh區(qū)對形成一價分子(稱為單鏈抗體或單鏈Fv(scFv)，參見例如Bird等，Science242,423-426(1988)和Huston等，PNASUSA85,5879-5883(1988))這類單鏈抗體包括在術(shù)語抗體內(nèi)，除非另有說明或與文中顯然抵觸。雖然這類片段一般包括在抗體的含義內(nèi)，但它們總體上且各自獨立地是本發(fā)明的特色，具有不同的生物學(xué)性質(zhì)和用途。本文還進一步論述了在本發(fā)明的情況下的這些和其它有用的抗體片段。還應(yīng)了解的是，除非另有說明，否則術(shù)語抗體還包括通過任何已知技術(shù)例如酶促切割、肽合成和重組技術(shù)提供的多克隆抗體、單克隆抗體(mAb)、抗體樣多肽例如嵌合抗體和人源化抗體及保持與抗原特異性結(jié)合的能力的抗體片段(抗原結(jié)合片段)。如此產(chǎn)生的抗體可具有任何同種型。本文所用“同種型”是指由重鏈恒定區(qū)基因編碼的免疫球蛋白類別(例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA、IgE或IgM)。在本發(fā)明的情況下，術(shù)語“一價抗體”意指能夠結(jié)合單個抗原分子、因此不能夠抗原交聯(lián)的抗體分子?！叭狈π?yīng)子功能的抗體”或“效應(yīng)子功能缺陷型抗體”是指激活一種或多種效應(yīng)子機制(例如補體活化或Fe受體結(jié)合)的能力顯著降低或無激活能力的抗體。因此，效應(yīng)子功能缺陷型抗體介導(dǎo)依賴抗體的細胞介導(dǎo)的細胞毒性(ADCC)和/或依賴補體的細胞毒性(CDC)的能力顯著降低或無介導(dǎo)能力。這類抗體的實例是IgG4?！翱筩-Met抗體”是與抗原C-Met特異性結(jié)合的上述抗體。本文所用術(shù)語“人抗體”欲包括具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機誘變或位點專一誘變或者通過體內(nèi)體細胞突變引入的突變)。然而，本文所用術(shù)語“人抗體”無意包括其中來源于另一哺乳動物物種(例如小鼠)種系的CDR序列被移植入人構(gòu)架序列中的抗體。如果抗體獲自使用人免疫球蛋白序列的系統(tǒng)，例如通過免疫攜帶人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或通過篩選人免疫球蛋白基因文庫，且其中所選擇的人抗體與由種系免疫球蛋白基因編碼的氨基酸序列有至少90%、例如至少95%、例如至少96%、例如至少97%、例如至少98%或例如至少99%氨基酸序列同一性，則本文所用人抗體“來源于”特定種系序列。通常，除重鏈⑶R3外，來源于特定的人種系序列的人抗體與由種系免疫球蛋白基因編碼的氨基酸序列的差異將不超過20個氨基酸，例如不超過10個氨基酸，例如不超過9、8、7、6或5個、例如不超過4、3、2或I個氨基酸。在一個優(yōu)選的實施方案中，分離出本發(fā)明的抗體。本文所用“分離抗體”欲指基本不含具有不同抗原特異性的其它抗體的抗體(例如與C-Met特異性結(jié)合的分離抗體基本不含特異性結(jié)合非C-Met的抗原的抗體)。然而，與人C-Met的表位、同種型或變體特異性結(jié)合的分離抗體可與例如來自其它物種的其它相關(guān)抗原(例如C-Met種間同源物)具有交叉反應(yīng)性。此外，分離抗體可基本不含其它細胞物質(zhì)和/或化學(xué)物質(zhì)。在本發(fā)明的一個實施方案中，兩個或更多個具有不同抗原結(jié)合特異性的“分離的”單克隆抗體以明確的組成結(jié)合在一起。當(dāng)在本文中在兩種或更多種抗體的情況下使用時，術(shù)語“與......競爭”或“與......交叉競爭”表明兩種或更多種抗體競爭結(jié)合c-Met，例如在本文實施例中描述的測定法中競爭C-Met結(jié)合。對于某些抗體對，當(dāng)將一種抗體包覆在板上，另一抗體用來競爭時，才觀察到實施例測定法中的競爭，反之則不然。術(shù)語“與......競爭”當(dāng)用于本文時還欲包括這類組合抗體(combinationsantibody)。術(shù)語“表位”意指能夠與抗體特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)決定簇。表位通常由表面集合的分子(例如氨基酸或糖側(cè)鏈)組成，通常具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特性。分辨得出構(gòu)象和非構(gòu)象表位，因為在變性溶劑存在時，與前者的結(jié)合而非與后者的結(jié)合喪失。表位可包含直接參與結(jié)合的氨基酸殘基(亦稱為表位的免疫顯性組分)和不直接參與結(jié)合的其它氨基酸殘基，例如被特異性抗原結(jié)合肽有效封閉的氨基酸殘基(換句話說，氨基酸殘基位于特異性抗原結(jié)合肽的覆蓋區(qū)(footprint)內(nèi))。本文所用術(shù)語“單克隆抗體”是指具有單一分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗體組合物對特定表位具有單一的結(jié)合特異性和親和力。因此，術(shù)語“人單克隆抗體”是指具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的具有單一結(jié)合特異性的抗體。人單克隆抗體可由雜交瘤產(chǎn)生，所述雜交瘤包括與永生化細胞融合的、獲自具有包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體非人動物(例如轉(zhuǎn)基因小鼠)的B細胞。在抗體與預(yù)定抗原結(jié)合的情況下，本文所用術(shù)語“結(jié)合”通常是這樣的結(jié)合，即在使用抗原作為配體，抗體作為分析物，通過例如表面等離振子共振(SPR)技術(shù)在BIAcore3000儀器中測定時，其親和力相當(dāng)于約10_7M或更低、例如約10_8M或更低、例如約10_9M或更低、約ΙΟ,Μ或更低或約IO-11M或甚至更低的KD，且與所述預(yù)定抗原結(jié)合的親和力相當(dāng)于以下KD，其是所述抗體與并非預(yù)定抗原的非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)或密切相關(guān)的抗原結(jié)合的親和力的Kd的至多1/10、例如至多1/100、例如至多1/1，000、例如至多1/10，000、例如至多1/100，000。親和力較低時的量取決于抗體的KD，使得如果抗體的Kd非常低(即抗體是高特異性的)，則對抗原的親和力小于對非特異性抗原的親和力時的量可為至少10，000倍。本文所用術(shù)語“kd”(sec-1)是指特定抗體-抗原相互作用的解離速率常數(shù)。所述值亦稱為Iwf值。本文所用術(shù)語“ka”(M-1Xsec-1)是指特定抗體_抗原相互作用的締合速率常數(shù)。本文所用術(shù)語“KD”(M)是指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數(shù)。本文所用術(shù)語“KA”(Μ-1)是指特定抗體-抗原相互作用的締合平衡常，通過匕除以kd求得。本文所用術(shù)語“抑制生長”(例如涉及細胞，例如腫瘤細胞)欲包括與不與抗C-Met抗體接觸的相同細胞的生長相比，當(dāng)與抗C-Met抗體接觸時任何可測量的細胞生長的降低，例如抑制細胞培養(yǎng)物的生長達至少約10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%、99%或100%?？赏ㄟ^各種機制，例如效應(yīng)子細胞吞噬作用、ADCC、⑶C和/或細胞凋亡,來產(chǎn)生這類細胞生長的降低。本發(fā)明還提供包含實施例抗體的八區(qū)、Vh區(qū)或一個或多個⑶R的功能變體的抗體。在抗C-Met抗體情形中使用的\、Vh或⑶R的功能變體仍允許抗體保持至少相當(dāng)比例(至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高)的親本抗體的親和力/親合力和/或特異性/選擇性，在某些情況下，這類抗C-Met抗體可以比親本抗體大的親和力、選擇性和/或特異性締合。這類功能變體通常保持與親本抗體顯著的序列同一性。2個序列間的同一性百分比是序列所共同的相同位置數(shù)的函數(shù)(即％同源性=相同位置數(shù)/位置總數(shù)xlOO)，其要考慮空位數(shù)和各空位的長度，所述空位需要被引入以用于2個序列的最佳比對?？赏ㄟ^例如應(yīng)用整合至ALIGN程序(2.O版)的算法(E.Meyers和W.Miller,Comput.Appl.Biosci4,11-17(1988))，使用PAM120權(quán)重殘基表(weightresiduetable)、12的空位長度罰分和4的空位罰分，來確定2個核苷酸或氨基酸序列之間的同一'丨生百分比。另外，可應(yīng)用Needleman和ffunsch,J.Mol.Biol.48444-453(1970)算法，確定2個氨基酸序列之間的同一性百分比。CDR變體的序列可不同于親本抗體序列CDR的序列，雖然大部分為保守取代；例如變體中至少10個，例如至少9、8、7、6、5、4、3、2或I個取代是保守氨基酸殘基置換。在本發(fā)明的情況下，保守取代可定義為下表中所反映的氨基酸類別內(nèi)的取代保守取代的氨基酸殘基類別權(quán)利要求1.一種結(jié)合人C-Met的單克隆抗體。2.權(quán)利要求1的抗體，其中所述抗體與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:33的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:37的序列的VL區(qū)(024)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭超過50%，例如超過75%。3.權(quán)利要求2的抗體，其中所述抗體不與選自以下的抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHisa)含有包含SEQIDNO:1的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:5的序列的VL區(qū)的固定化抗體(005)，b)含有包含SEQIDNO:17的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:21的序列的VL區(qū)的固定化抗體(008)，c)包含抗體的VH區(qū)和VL區(qū)的固定化抗體，和d)含有包含SEQIDNO:49的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:53的序列的VL區(qū)的固定化抗體(045),優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭小于25%，例如小于20%。4.權(quán)利要求2的抗體，其中所述抗體與選自以下的抗體結(jié)合相同的表位a)含有包含SEQIDNO:33的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:37的序列的VL區(qū)的抗體(024)b)含有包含SEQIDNO:65的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:69的序列的VL區(qū)的抗體(061)c)含有包含SEQIDNO:73的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:77的序列的VL區(qū)的抗體(062)d)含有包含SEQIDNO:81的序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:85的序列的VL區(qū)的抗體(064)e)含有包含SEQIDNO:89的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:93的序列的VL區(qū)的抗體(068)f)含有包含SEQIDNO:97的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:101的序列的VL區(qū)的抗體(069)g)含有包含SEQIDNO:113的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:117的序列的VL區(qū)的抗體⑴98)h)含有包含SEQIDNO:121的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:125的序列的VL區(qū)的抗體(101)，和i)含有包含SEQIDNO:129的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:133的序列的VL區(qū)的抗體(181)。5.權(quán)利要求2或4的抗體，其中所述抗體包含具有下列所示序列的VHCDR3區(qū)a)SEQIDNO:36(024)b)SEQIDNO:193，例如SEQIDNO:68、76、84或92所示的VHCDR3區(qū)(061、062、064、068)c)SEQIDNO:196，例如如SEQIDNO:100或132所示的VHCDR3區(qū)(069，181)d)SEQIDNO:116(098)，或e)SEQIDNO:201，例如如SEQIDNO:124所示VHCDR3區(qū)(101)。6.權(quán)利要求2或4的抗體，其中所述抗體含有a)包含SEQIDNO:33、185和36的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:37、39和206的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDNO:34、35和36的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:38、39和40的CDRl、2和3序列的VL區(qū)的抗體，(024)b)包含SEQIDNO:191、192和193的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:78、79和208的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有以下的抗體a.包含SEQIDNO:66、67和68的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:70、71和72的CDRU2和3序列的VL區(qū)，(061)b.包含SEQIDNO:74、75和76的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:78、79和80的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(062)c.包含SEQIDNO:82、83和84的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:86、87和88的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(064)，或d.包含SEQIDNO:90、91和92的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:94、95和96的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(068)c)包含SEQIDNO:194、195和196的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:209、210和104的CDRU2和3序列的VL區(qū)，例如含有以下的抗體a.包含SEQIDN0:98、99和100的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:102、103和104的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(069)，或b.包含SEQIDN0:130、131和132的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:134、135和136的CDRU2和3序列的VL區(qū)，(181)d)包含SEQIDNO:197、198和116的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:118、119和211的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDNO:114、115和116的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:118、119和120的CDRU2和3序列的VL區(qū)的抗體(098)，或e)包含SEQIDNO:199、200和201的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:126、212和128的CDR1、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDNO:122、123和124的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:126、127和128的CDRl、2和3序列的VL區(qū)的抗體(101)。7.權(quán)利要求2的抗體，其含有a)包含SEQIDNO:33的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:37的序列的VL區(qū)(024)b)包含SEQIDNO:65的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDN0:69的序列的VL區(qū)(061)c)包含SEQIDNO:73的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:77的序列的VL區(qū)(062)d)包含SEQIDNO:81的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDN0:85的序列的VL區(qū)(064)e)包含SEQIDNO:89的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:93的序列的VL區(qū)(068)f)包含SEQIDNO:97的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:101的序列的VL區(qū)(069)g)包含SEQIDNO:113的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:117的序列的VL區(qū)h)包含SEQIDNO:121的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:125的序列的VL區(qū)(101)i)包含SEQIDNO:129的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:133的序列的VL區(qū)(181)j)包含SEQIDNO:159的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:160的序列的VL區(qū)(078)k)包含SEQIDNO:161的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:162的序列的VL區(qū)(084)1)包含SEQIDNO:163的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:164的序列的VL區(qū)(063)m)包含SEQIDNO:165的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:166的序列的VL區(qū)(087)n)包含SEQIDNO:137的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:138的序列的VL區(qū)(066)o)包含SEQIDNO:139的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:140的序列的VL區(qū)(065)p)包含SEQIDNO:141的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:142的序列的VL區(qū)(082)q)包含SEQIDNO:143的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:144的序列的VL區(qū)(089)，或r)所述抗體中的任一種的變體，其中所述變體在所述序列中優(yōu)選具有至多1、2或3個氨基酸修飾、更優(yōu)選氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。8.權(quán)利要求1的抗體，其中-所述抗體與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:9的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:13的序列的VL區(qū)(006)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭超過50%，例如超過75%，和-所述抗體不與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis,其中所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:49的序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:53的序列的VL區(qū)(045)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭小于50%,例如小于25%,例如小于20%和-所述抗體與c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域結(jié)合，優(yōu)選其中所述抗體能夠抑制HGF與SEMA結(jié)構(gòu)域結(jié)合，其IC50小于10ug/mL,例如小于2ug/mL,如實施例9所述。9.權(quán)利要求8的抗體，其中所述抗體不與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis，所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:33的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:37的序列的VL區(qū)(024)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭小于25%，例如小于20%。10.權(quán)利要求8的抗體，其中所述抗體與選自以下的抗體結(jié)合相同的表位a)含有包含SEQIDNO:1的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:5的序列的VL區(qū)的抗體(005)b)含有包含SEQIDNO:9的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:13的序列的VL區(qū)的抗體(006)c)含有包含SEQIDNO:25的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:29的序列的VL區(qū)的抗體(022)，和d)含有包含SEQIDNO:57的序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:61的序列的VL區(qū)的抗體(058)。11.權(quán)利要求8或10的抗體，其中所述抗體含有具有下列所示序列的VHCDR3區(qū)a)SEQIDNO:181，例如SEQIDN0:4或12中所示的VHCDR3區(qū)(005,006)b)SEQIDNO:28(022)，或c)SEQIDNO:60(058)。12.權(quán)利要求8或10的抗體，其中所述抗體含有a)包含SEQIDNO:179、180和181的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:6、7和202的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有以下的抗體a.包含SEQIDN0:2、3和4的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:6、7和8的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(005)，或b.包含SEQIDNO:10、11和12的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:14、15和16的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(006)b)包含SEQIDNO:26、184和28的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:30,31和205的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDNO:26、27和28的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:30、31和32的CDRl、2和3序列的VL區(qū)的抗體(022)，或c)包含SEQIDNO:189、190和60的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:62、63和207的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDNO:58、59和60的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:62，63和64的CDRl、2和3序列的VL區(qū)的抗體(058)。13.權(quán)利要求8或10的抗體，其含有a)包含SEQIDNO:1的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:5的序列的VL區(qū)(005)b)包含SEQIDNO:9的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:13的序列的VL區(qū)(006)c)包含SEQIDNO:25的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:29的序列的VL區(qū)(022)d)包含SEQIDNO:57的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:61的序列的VL區(qū)(058)e)(031)包含SEQIDNO:145的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:146的序列的VL區(qū)f)(007)包含SEQIDNO:147的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:148的序列的VL區(qū)g)(011)包含SEQIDNO:149的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:150的序列的VL區(qū)h)(017)包含SEQIDNO:151的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:152的序列的VL區(qū)i)包含SEQIDNO:153的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:154的序列的VL區(qū)(025)，或j)所述抗體中的任一種的變體，其中所述變體在所述序列中優(yōu)選具有至多1、2或3個氨基酸修飾、更優(yōu)選氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。14.權(quán)利要求1的抗體，其中-所述抗體與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis，其中所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:49的序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:53的序列的VL區(qū)(045)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭超過50%，例如超過75%，和-所述抗體不與固定化抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHis,其中所述固定化抗體含有包含SEQIDNO:9的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:13的序列的VL區(qū)(006)，優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時,所述抗體與所述固定化抗體的競爭小于25%,例如小于20%。15.權(quán)利要求14的抗體，其中所述抗體不與選自以下的抗體競爭結(jié)合可溶性cMetECDHisa)含有包含SEQIDNO:17的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:21的序列的VL區(qū)的固定化抗體(008)，和b)含有包含SEQIDNO:33的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:37的序列的VL區(qū)的固定化抗體(024),優(yōu)選其中在按實施例17中所述測定時，所述抗體與所述固定化抗體的競爭小于25%，例如小于20%。16.權(quán)利要求14的抗體，其中所述抗體與含有包含SEQIDNO:49的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:53的序列的VL區(qū)的抗體(045)結(jié)合相同的表位。17.權(quán)利要求14或16的抗體，其中所述抗體含有具有如SEQIDNO:188所示序列的VHCDR3區(qū)，例如如SEQIDNO:52所示的VHCDR3區(qū)(045)。18.權(quán)利要求14或16的抗體，其中所述抗體含有包含SEQIDNO:186、187和188的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:54、55和56的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有包含SEQIDN0:50、51和52的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:54,5556的CDRl、2和3序列的VL區(qū)的抗體(045)。19.權(quán)利要求14或16的抗體，其含有a)包含SEQIDNO:49的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:53的序列的VL區(qū)(045)b)包含SEQIDNO:155的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:156的序列的VL區(qū)(040)c)包含SEQIDNO:157的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:158的序列的VL區(qū)(039)，或d)所述抗體中的任一種的變體，其中所述變體在所述序列中優(yōu)選具有至多1、2或3個氨基酸修飾、更優(yōu)選氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。20.權(quán)利要求1的抗體，其中所述抗體與含有包含SEQIDNO:17的序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:21的序列的VL區(qū)的抗體(008)結(jié)合相同的表位，或與含有包含SEQIDNO:41的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:45的序列的VL區(qū)的抗體(035)結(jié)合相同的表位，或與含有包含SEQIDNO:105的序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:109的序列的VL區(qū)的抗體(096)結(jié)合相同的表位。21.權(quán)利要求20的抗體，其中所述抗體含有具有SEQIDNO:183所示序列的VH⑶R3區(qū)，例如SEQIDN0:20、44或108所示VHCDR3區(qū)(008、035、096)。22.權(quán)利要求20的抗體，其中所述抗體含有包含SEQIDNO:18、182和183的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:22、203和204的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，例如含有以下的抗體a)包含SEQIDNO:18、19和20的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:22、23和24的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(008)，或b)包含SEQIDN0:42、43和44的CDR1、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDN0:46、47和48的CDRl、2和3序列的VL區(qū)，(035)，或c)包含SEQIDNO:106、107和108的CDRl、2和3序列的VH區(qū)和包含SEQIDNO:110、111和112的CDRU2和3序列的VL區(qū)(096)。23.權(quán)利要求20或22的抗體，其含有a)包含SEQIDNO:17的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDN0:21的序列的VL區(qū)(008)b)包含SEQIDNO:41的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDN0:45的序列的VL區(qū)(035)c)包含SEQIDNO:105的序列的VH區(qū)和優(yōu)選包含SEQIDNO:109的序列的VL區(qū)(096)，或d)所述抗體中的任一種的變體，其中所述變體在所述序列中優(yōu)選具有至多1、2或3個氨基酸修飾、更優(yōu)選氨基酸取代，例如保守氨基酸取代。24.前述權(quán)利要求1-19中任一項的抗體，其中所述抗體與c-Met的SEMA結(jié)構(gòu)域結(jié)合，優(yōu)選其中所述抗體能夠抑制HGF與SEMA結(jié)構(gòu)域結(jié)合，其IC50小于10μg/mL,例如小于2μg/mL,如實施例9所述。25.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體與A431細胞結(jié)合，優(yōu)選按照實施例13測定時，其EC50為10nM或更低，例如EC50為2nM或更低。26.權(quán)利要求25的抗體，其中所述抗體是二價抗體。27.前述權(quán)利要求中任一項的抗體,其中所述抗體與c-Met結(jié)合,優(yōu)選按照實施例14測定時，其親和力常數(shù)(Kd)為20nM或更低，例如親和力為5nM或更低。28.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體與獼猴c-Met結(jié)合，優(yōu)選其中按照實施例15測定時，所述抗體與獼猴c-Met結(jié)合的信號是陰性對照抗體的至少5倍。29.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體抑制HGF與c-Met的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，優(yōu)選其中按照實施例16測定時，所述抗體抑制結(jié)合超過40%，例如超過50%、例如超過60%、例如超過70%、例如超過80%、例如超過90%。30.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體能夠抑制KP4細胞的存活力，優(yōu)選其中優(yōu)選按照實施例19所述，所述抗體能夠抑制存活力超過10%、例如超過25%、例如超過40%。31.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體是全長抗體，優(yōu)選IgGl抗體，特別是IgGl,K抗體。32.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體與另一部分例如細胞毒性部分、放射性同位素或藥物綴合。33.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體是效應(yīng)子功能缺陷型抗體，例如穩(wěn)定的人IgG4抗體，例如其中人IgG4重鏈恒定區(qū)中409位上的精氨酸被賴氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸或亮氨酸取代、優(yōu)選被賴氨酸取代和/或其中鉸鏈區(qū)包含Cys-Pro-Pro-Cys序列的抗體。34.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體是一價抗體。35.權(quán)利要求34的抗體，其中所述一價抗體包含(i)權(quán)利要求1-23中的抗體的可變區(qū)或所述區(qū)的抗原結(jié)合部分，和()免疫球蛋白的Ch區(qū)或其包含Ch2和Ch3區(qū)的片段，其中所述Ch區(qū)或其片段經(jīng)修飾使得相當(dāng)于鉸鏈區(qū)的區(qū)和如果免疫球蛋白不是IgG4亞型時的Ch區(qū)的其它區(qū)例如Ch3區(qū)不包含這樣的任何氨基酸殘基，所述氨基酸殘基在多克隆人IgG存在時能夠與相同Ch區(qū)形成二硫鍵或與相同的Ch區(qū)形成其它共價或穩(wěn)定的非共價重鏈間鍵。36.權(quán)利要求35的抗體，其中步驟(ii)中提及的免疫球蛋白是IgG4亞型的。37.權(quán)利要求35或36的抗體，其中重鏈經(jīng)修飾使得整個鉸鏈缺失。38.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體經(jīng)修飾使之較少柔性，例如通過鉸鏈區(qū)突變。39.權(quán)利要求38的抗體，其中所述抗體是IgGl亞型的，且其中通過以下方面修飾鉸鏈區(qū)(i)缺失序列EPKSCDKTHTCPPCP的鉸鏈區(qū)并將其用序列ERKCCVECPPCP的IgG2鉸鏈區(qū)取代(IgGl鉸鏈-1gG2)；(ii)缺失第220位使得修飾鉸鏈區(qū)具有EPKSDKTHTCPPCP的序列(IgGlAC220)；(iii)220位上的半胱氨酸用任何其它天然氨基酸(X)取代使得修飾鉸鏈區(qū)具有EPKSXDKTHTCPPCP的序列(IgGlC220X)；(iv)缺失序列EPKSCDKTHTCPPCP的鉸鏈區(qū)(UniBodyIgGl)；(V)缺失序列EPKSCDKTHTCPPCP的鉸鏈區(qū)并將其用序列ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP的IgG3鉸鏈區(qū)取代(IgGl鉸鏈_IgG3);或(vi)223位上的蘇氨酸用半胱氨酸取代，并缺失222上的賴氨酸和225位上的蘇氨酸，使得修飾鉸鏈區(qū)具有EPKSCDCHCPPCP的序列(IgGlΤΗ7Δ6-9)。40.權(quán)利要求39的抗體，其中通過將220位上的半胱氨酸用絲氨酸取代來修飾鉸鏈區(qū)，使得修飾鉸鏈區(qū)具有EPKSSDKTHTCPPCP的序列(IgGlC220S)。41.權(quán)利要求38的抗體，其中所述抗體是IgG2亞型的。42.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體經(jīng)修飾以降低核心巖藻糖基化低于10%，例如低于5%，如通過高效陰離子交換層析法-脈沖安培檢測聯(lián)用(HPAEC-PAD)所測定。43.前述權(quán)利要求中任一項的抗體，其中所述抗體是雙特異性抗體，其包含前述權(quán)利要求中的任一項限定的c-Met結(jié)合部位和具有不同結(jié)合特異性的第二抗原結(jié)合部位，例如對人效應(yīng)子細胞、人Fe受體、B細胞受體或c-Met的非重疊表位的結(jié)合特異性。44.一種編碼選自以下的一個或多個氨基酸序列的核苷酸序列SEQIDNO:1、5、.9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、97、101、105、109、113、117、121、125、.129、133、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、.149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、.174、175、176、177和178。45.一種表達載體，其包含權(quán)利要求44的核苷酸序列，其中所述載體還編碼有效連接的抗體的輕鏈恒定區(qū)、重鏈恒定區(qū)或輕鏈和重鏈恒定區(qū)兩者。46.一種重組真核或原核宿主細胞，其產(chǎn)生權(quán)利要求1-43中任一項限定的抗體。47.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-43中任一項限定的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。48.用作藥物的權(quán)利要求1-43中任一項的抗體。49.用于癌癥治療的權(quán)利要求1-43中任一項的抗體，所述癌癥例如依賴于HGF的癌癥或不依賴于HGF的癌癥。50.用于癌癥治療的權(quán)利要求1-43中任一項的抗體，其中所述癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、膽管癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌、胃癌、頭頸癌、腎癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、膽囊癌、前列腺癌、甲狀腺癌、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、纖維肉瘤、急性髓細胞白血病、成人型T細胞性白血病、慢性髓細胞樣白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、成膠質(zhì)細胞瘤、星形細胞瘤、黑素瘤、間皮瘤、腎母細胞瘤和MiT腫瘤，包括透明細胞肉瘤(CCS)、軟組織腺泡狀肉瘤(ASPS)和易位相關(guān)性腎細胞癌。51.權(quán)利要求49或50的抗體，其中所述抗體與一種或多種其它治療劑例如化療劑組合用于癌癥治療。52.權(quán)利要求1-43中任一項的抗體在制備用于癌癥治療的藥物中的用途，任選包含權(quán)利要求49和50的進一步特征。53.一種用于抑制表達c-Met的腫瘤細胞的生長和/或增殖的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1-43中任一項的抗體給予有需要的個體。54.一種用于產(chǎn)生權(quán)利要求1-43中任一項的抗體的方法，所述方法包括以下步驟a)培養(yǎng)權(quán)利要求46的宿主細胞，和b)從培養(yǎng)基中純化出所述抗體。55.一種用于檢測樣品中c-Met的存在情況的方法，所述方法包括-在允許在抗體和c-Met之間形成復(fù)合物的條件下使樣品與權(quán)利要求1-43中任一項的抗體接觸；和-分析是否形成了復(fù)合物。56.一種用于檢測樣品中c-Met的存在情況的試劑盒，所述試劑盒裝有-權(quán)利要求1-43中任一項的抗體；和-試劑盒使用說明書。57.一種抗權(quán)利要求1-43中任一項的抗體的抗獨特型抗體。全文摘要本發(fā)明公開了與人c-Met這種肝細胞生長因子受體結(jié)合的分離的單克隆抗體和相關(guān)的基于抗體的組合物和分子。還公開了包含該抗體的藥物組合物和使用該抗體的治療與診斷方法。文檔編號A61K39/395GK103003307SQ201180027522公開日2013年3月27日申請日期2011年3月10日優(yōu)先權(quán)日2010年3月10日發(fā)明者J.J.尼杰森,B.德格伊,E.范登布林克,A.F.拉布里恩,R.M.A.赫特,J.舒爾曼,P.帕倫,J.范德溫克爾申請人:根馬布股份公司