專利名稱：一種治療淺部真菌感染的藥物組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療淺部真菌感染的藥物組合物及其應用。
背景技術：
淺部真菌感染是由病原真菌感染人體粘膜、皮膚及其附屬器如甲、毛發(fā)等而引起的一組真菌感染性疾病，是人群中十分常見的真菌感染性疾病，其發(fā)病在近年來不斷增多， 嚴重影響著人們的身心健康、生活質量以及美容需求。淺部真菌感染的發(fā)病具有明顯的人群分布特征，譬如頭癬主要發(fā)生于兒童，甲癬主要發(fā)生于老年人或營養(yǎng)不良的患者，體股癬和手足癬主要見于青壯年，而粘膜念珠菌感染則主要見于婦女外陰陰道和免疫功能受損患者的口腔粘膜。從引起感染的部位來看，體股癬和手足癬主要 發(fā)生在皮膚角質層，甲癬主要發(fā)生在指/趾甲板及甲床，頭癬主要發(fā)生在毛囊及毛干，而粘膜念珠菌病則發(fā)生在粘膜組織。從感染的致病菌來看，體股癬和手足癬、甲癬主要由紅色毛癬菌引起，頭癬主要由小孢子菌引起，而粘膜念珠菌病主要由念珠菌感染引起；而且近些年來，淺部真菌病的致病真菌種類也不斷發(fā)生變遷，一些少見真菌和耐藥真菌引起的感染還不斷見于各種報道。咪康唑屬于咪唑類抗真菌藥物，是目前用于治療淺部真菌感染主要的藥物，其劑型有軟膏、栓劑等，這些制劑主要用于治療手足癬、體股癬以及口腔黏膜和外陰陰道念珠菌感染；盡管使用范圍相當廣泛，但臨床療效并不十分良好，復發(fā)性外陰陰道念珠菌病和手足癬仍然是十分常見的淺部真菌感染。而且由于耐藥菌株不斷增多，或者由于感染口腔的念珠菌形成生物膜而導致對藥物的敏感性減低，以及患者HIV感染、濫用抗生素和糖皮質激素等所致的免疫功能受損，而使得淺部真菌感染不但患病率多，而且復發(fā)率高。上述這些情況使得發(fā)展新型、敏感的針對淺部真菌感染的治療方法和治療措施，成為急需解決重要問題。漢防己甲素(又稱粉防己堿；tetrandrineJET)是從防己科千金藤植物粉防己的塊根中分離出的主要生物堿，化學結構屬于雙芐基異喹啉類化合物；無色針晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有機溶劑及稀酸水中；現(xiàn)代藥理研究證實TET是一種鈣離子拮抗劑，主要作用于鈣離子通道，影響鈣離子的跨膜轉運以及在細胞內的分布利用；TET具有消炎，鎮(zhèn)痛等多種作用，臨床用于治療高血壓，矽肺和關節(jié)炎等。此夕卜，TET在保護肝細胞、抗肝纖維化、降低門靜脈高壓及防治門脈高壓等方面具有良好的應用前景。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種治療淺部真菌感染的新型藥物組合物及其應用。本發(fā)明所提供的藥物組合物由咪康唑和漢防己甲素組成；其中，所述漢防己甲素在組合物溶液中的濃度> 40μ g/ml時，可以顯著提高咪康唑對皮膚癬菌和念珠菌的殺傷活性。本發(fā)明的藥物組合物可用于制備治療淺部真菌感染藥物。
所述淺部真菌感染為由病原真菌感染人體皮膚、粘膜、甲、毛發(fā)等組織所引起的淺部真菌病。所述真菌選自下述至少一屬念珠菌屬(Candida species)、毛癬菌屬(Trichophyton species)、小孢子菌屬(Microsporum species)及表皮癬菌屬 (Epidermophyton species)。所述念珠菌屬真菌具體可為致病性白念珠菌和/或近平滑念珠菌。白念珠菌包括對氟康唑耐藥的和對氟康唑敏感的菌株。所述毛癬菌屬真菌具體可為致病性紅色毛癬菌和/或須癬毛癬菌。所述小孢子菌屬真菌具體可為犬小孢子菌。所述表皮癬菌屬真菌具體可為絮狀表皮癬菌。本發(fā)明的再一個目的是提供一種治療淺部真菌感染的藥物。本發(fā)明所提供的治療淺部真菌感染的藥物，其活性成分為本發(fā)明的藥物組合物。所述淺部真菌感染由下述至少一屬真菌引起念珠菌屬(Candida species), 毛癬菌屬(Trichophyton species)、小孢子菌屬(Microsporum species)及表皮癬菌屬 (Epidermophyton species)。上述藥物可通過口服、外用、注射、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈或粘膜組織；或是被其它物質混合或包裹后導入機體。需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體及潤滑劑等。所述治療淺部真菌感染的藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、膏劑、 霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。體外抗菌試驗證明，漢防己甲素可以增強咪康唑對皮膚癬菌和念珠菌的抗真菌效果，尤其是對耐藥真菌的抑菌效果，同時降低了咪康唑的用量。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實施例中所用的近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)包括如下菌株 ATCC-22019, BMU-04868耐氟康唑，BMU-05030。ATCC即美國典型培養(yǎng)物保藏中心。BMU即北京醫(yī)科大學真菌和真菌病研究中心。白念珠菌(Candida albicans)包括如下菌株BMU_05582，BMU-05383，BMU-05758 耐氟康唑。須痛毛痛菌(Trichophyton mentagrophytes)包括如下菌株BMU_60050， BMU-O1666。紅色毛癬菌(Trichophytonrubrum)包括如下菌株BMU_31416，BMU-31442， BMU-31463。實施例1、咪康唑與漢防己甲素的組合物對淺部真菌病病原菌的殺傷作用測試菌株近平滑念珠菌(ATCC-22019，BMU-04868耐氟康唑，BMU-05030)；白色念珠菌(BMU-05582，BMU-05383，BMU-05758耐氟康唑)，均在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面培養(yǎng)基上;35°C培養(yǎng)2-3天；須癬毛癬菌(BMU-60050，BMU-01666)；紅色毛癬菌(BMU-31416， BMU-31442, BMU-31463)在燕麥瓊脂(OA)培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天。所有菌株均在測試當天用無菌水收集孢子懸液，調整孢子懸液濃度白念珠菌，近平滑念珠菌，紅色毛癬菌，須癬毛癬菌的菌懸液濃度均為2 X 103CFU/mL ；將菌懸液加入96 孔平底板，每孔加入100 μ L。藥液配制稱取6. 4mg咪康唑(MCZ)藥粉溶于二甲基亞砜(DMSO)中(含量為 1600 μ g/ml)；稱取Mmg漢防己甲素(TET)藥粉溶于2ml 二甲基亞砜(DMSO)中(含量為 32000 μ g/ml)；用RPMI-1640培養(yǎng)基將上述兩種藥液各稀釋50倍得到兩倍終濃度，MCZ藥物濃度(μ g/ml)為:16、8、4、2、1、0. 5、0. 25,0. 125、0. 06，0. 0313，10 個濃度；TET 藥物濃度 (μ g/ml)為320、160、80、40、20、10、5、2· 5、1· 25，10 個濃度。MIC值的判讀在35°C下培養(yǎng)M-48小時(念珠菌屬)或5天(皮膚癬菌)后，肉眼觀察下與生長對照相比生長濁度有明顯的減少最低藥物濃度為受試藥物的最小抑菌濃度 One)。單藥藥敏試驗最低抑菌濃度(MIC)的測定用二倍稀釋法。分別將各系列濃度的藥物加入96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100 μ 1。1 10列為藥物各濃度，11列為生長對照，12列為空白及溶媒對照。放入35°C孵育，念珠菌屬(近平滑念珠菌、白念珠菌)孵育2天，皮膚癬菌(須癬毛癬菌、紅色毛癬菌)孵育5天后判斷結果。聯(lián)合藥敏采用棋盤微量液基法以藥物單用時的最小抑菌濃度(MIC)為基礎，將 MCZ沿96孔藥敏板的行設置倍比稀釋系列(50 μ 1)，與之聯(lián)合的TET在藥敏板的列分別進行倍比稀釋(50 μ 1)。MCZ受試濃度范圍為8 0.0313 μ g/ml，TET受試濃度范圍為160 2. 5 μ g/ml。放入35°C孵育，念珠菌屬(近平滑念珠菌、白念珠菌)孵育2天，皮膚癬菌(須癬毛癬菌、紅色毛癬菌)孵育5天后判斷結果。結果咪康唑在聯(lián)合漢防己甲素(濃度為40yg/ml)前后對受試菌株的最小抑菌濃度 (MIC，μ g/ml)
菌種菌株MCZTET/MCZ
BMU-60050140/0.03
BMU-1666140/0.03
BMU-31416140/0.03
BMU-314420.12540/0.03
BMU-314630.540/0.03
ATCC-22019240/0.25
BMU-04868440/1
BMU-05030140/0.125
BMU-05582240/0.25
BMU-05383140/0.015
BMU-05758140/0.015 從表中可見，聯(lián)合漢防己甲素(濃度為彡40yg/ml)時，咪康唑對皮膚癬菌和念珠菌、其中包括耐氟康唑菌株的MIC可以明顯降低，說明咪康唑和漢防己甲素的組合可以使得咪康唑的抗真菌活性明顯增強，包括對氟康唑耐藥的菌株。
須癬毛癬菌紅色毛癬菌
近平滑念珠菌白念珠菌
結論咪康唑與漢防己甲素的組合可以明顯增強咪康唑的抗真菌效果，在該組合物溶液中漢防己甲素的濃度彡40μ g/ml。
權利要求
1.一種治療淺部真菌感染的藥物組合物，由咪康唑和漢防己甲素組成。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的溶液中漢防己甲素的濃度彡40yg/mlo
3.權利要求1或2所述的藥物組合物在制備治療淺部真菌感染藥物中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于所述淺部真菌感染由下述至少一屬的真菌引起念珠菌屬真菌、毛癬菌屬真菌、小孢子菌屬真菌和表皮癬菌屬真菌。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于所述念珠菌屬真菌為白念珠菌和/或近平滑念珠菌；所述毛癬菌屬真菌為紅色毛癬菌和/或須癬毛癬菌。
6.一種治療淺部真菌感染的藥物，其活性成分為權利要求1或2所述的藥物組合物。
7.根據權利要求6所述的藥物，其特征在于所述淺部真菌感染由下述至少一屬的真菌引起念珠菌屬真菌、毛癬菌屬真菌、小孢子菌屬真菌和表皮癬菌屬真菌。
8.根據權利要求7所述的藥物，其特征在于所述念珠菌屬真菌為白念珠菌和/或近平滑念珠菌；所述毛癬菌屬真菌為紅色毛癬菌和/或須癬毛癬菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療淺部真菌感染的藥物組合物及其應用。該藥物組合物由咪康唑和漢防己甲素組成；其中，咪康唑和漢防己甲素組合體系中漢防己甲素的濃度≥40μg/ml。該藥物組合物可作為活性成分用于制備治療淺部真菌感染藥物。體外抗菌試驗證明，漢防己甲素可以不同程度地增強咪康唑對皮膚癬菌和念珠菌的抗真菌效果，尤其是對耐藥真菌的抑菌效果，同時降低了咪康唑的用量。
文檔編號A61P31/10GK102293771SQ20111018030
公開日2011年12月28日 申請日期2011年6月30日 優(yōu)先權日2011年6月30日
發(fā)明者劉偉, 劉偉霞, 李若瑜 申請人:北京大學第一醫(yī)院