一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種能迅速鑒定出多種不同菌種的淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)。本發(fā)明包括一三分隔平皿，在所述三分隔平皿上的每一格內(nèi)分別含有DIM培養(yǎng)基、尿素培養(yǎng)基和BCP-MS-G培養(yǎng)基，所述DIM培養(yǎng)基呈淺綠色，所述尿素培養(yǎng)基呈黃色，所述BCP-MS-G培養(yǎng)基呈灰藍(lán)色，所述三分隔平皿經(jīng)無(wú)菌密封包裝，保存于2～8℃冰柜中；本發(fā)明根據(jù)形成的菌落形態(tài)、性狀、顏色結(jié)合顯微鏡下菌絲或孢子的大小、形態(tài)以及排列規(guī)律等特點(diǎn)即可迅速鑒定此致病真菌屬于何種真菌。本發(fā)明可應(yīng)用于菌種鑒定領(lǐng)域。
【專利說(shuō)明】一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鑒定系統(tǒng)，尤其涉及一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]淺部真菌主要為皮膚絲狀菌(Dermatophytes)，侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲等角化組織引起癬癥，又稱癬菌(Ringworm),分為三屬,共37個(gè)種。癬癥病灶可見(jiàn)有隔菌絲和關(guān)節(jié)孢子，菌絲深入角化組織內(nèi)生成營(yíng)養(yǎng)菌絲體，縱橫交織成網(wǎng)狀，孢子可排列成鏈狀或零散分布，在病發(fā)上可見(jiàn)孢子在毛干外排成厚鞘(毛外型感染)或毛干內(nèi)排列成串(毛內(nèi)型感染)。在沙保氏培養(yǎng)基孵育I~3周，可生成絲狀型菌落，產(chǎn)生各種孢子和菌絲。根據(jù)菌落形態(tài)與色澤，菌絲的構(gòu)造與形態(tài)，大分生孢子的形態(tài)和小分生孢子的有無(wú)及排列形式等，可作為鑒別種屬的重要依據(jù)。癬菌主要由孢子散播傳染，常由于接觸患癬的人或動(dòng)物(狗、貓、牛、馬等)及染菌物體而感染。在臨床上同一種癬癥可由數(shù)種不同癬菌引起，而同一種癬菌因侵害部位不同，又可引起不同的癬癥。
[0003]淺部真菌病簡(jiǎn)稱為癬，是由寄生于角蛋白組織的致病真菌所引起的皮膚病，其病原菌可分為:
1.皮膚癬菌:寄生在皮膚角蛋白組織致病真菌統(tǒng)稱為皮膚癬菌。該菌憑其侵犯組織不同和培養(yǎng)特點(diǎn)差異把它再劃分以下三屬:
I)毛癬菌屬:侵犯皮膚、毛發(fā)和甲。本菌屬已查明有13種可使人類致病。常見(jiàn)有黃癬菌、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、紫色毛癬菌、石膏樣毛癬菌等；培養(yǎng)特點(diǎn)為呈棒形大分子孢子，壁光滑。
[0004]2)孢子菌屬:侵犯`毛發(fā)及皮膚，在我國(guó)以鐵銹色小孢子菌、羊毛樣小孢子菌等為多見(jiàn)；培養(yǎng)特征是梭形大分子孢子，壁有刺。已報(bào)道有8種能引起人類發(fā)病。
[0005]3)表皮癬菌屬:侵犯皮膚和甲。本菌屬僅絮狀表皮癬菌一種可使人類致病，其培養(yǎng)所見(jiàn)呈杵狀或梨形大分子孢子。
[0006]上述三屬的皮膚癬菌，感染人體后可引起組織反應(yīng)而發(fā)生紅斑丘疹、水皰、鱗屑、斷發(fā)、脫發(fā)和甲板改變等。按其侵犯部位差別，臨床可分為頭癬、體癬、股癬、手足癬和甲癬。
[0007]2.角層癬菌:寄生于皮膚角層或毛干表面的致病真菌可謂之角層癬菌。此類癬菌又分兩型，即角層型和毛發(fā)型。前者有花斑癬菌、紅癬微細(xì)棒狀桿菌，曼遜氏癬菌及威尼克氏癬菌；后一型有腋毛癬菌。
[0008]由于角層癬菌是寄生于人體組織的表面，故一般不引起組織的炎癥反應(yīng)，即使有也極輕微。
[0009]淺部真菌病流行頗廣，遍布在世界各地區(qū)，在我國(guó)也是常見(jiàn)多發(fā)病。本病傳染方式:一則直接接觸傳染，如頭癬的發(fā)病往往是直接接觸罹患頭癬的兒童或患有癬病的動(dòng)物后引起；二則間接接觸傳染，如經(jīng)常使用癬病患者用過(guò)的東西，象拖鞋、枕巾、擦腳布等就可能發(fā)生癖。
[0010]淺部真菌病可根據(jù)病史，臨床表現(xiàn)特點(diǎn)，診斷一般較容易。必要時(shí)可進(jìn)行如下輔助檢查:
真菌顯微鏡檢查:選取皮損邊緣的鱗屑或病發(fā)幾根。置于玻片上，加入氫氧化鉀溶液一滴，加蓋玻片。然后放在酒精燈上加熱片刻，以促進(jìn)角質(zhì)溶解。最后進(jìn)行鏡檢觀察。真菌檢查陽(yáng)性對(duì)診斷有確診作用，如陰性也不能排除癬的診斷。
[0011]真菌培養(yǎng):常規(guī)的培養(yǎng)基是采用沙堡弱(sabourauad)培養(yǎng)基。將從病灶取來(lái)的鱗屑、毛發(fā)或皰膜接種后，放入25~30°C恒溫箱中培養(yǎng)。一般5天左右即可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，隨后可進(jìn)行菌種鑒定。如經(jīng)三星期培養(yǎng)無(wú)菌落生長(zhǎng)，可報(bào)告培養(yǎng)陰性。
[0012]濾過(guò)紫外線燈檢查:該燈又名伍德(wood)燈，系紫外線通過(guò)含有氧化鎳的玻璃裝置，于暗室里，可見(jiàn)到某些真菌，在濾過(guò)紫外線燈照射下產(chǎn)生帶色彩的熒光。這樣可根據(jù)熒光的有無(wú)以及色彩不同，在臨床上對(duì)淺部真菌病，尤其頭癬的診斷提供重要參考。此外，本燈對(duì)諸如托兒所群體檢查也有幫助。
[0013]組織病理檢查:淺部真菌病一般無(wú)需組織病理學(xué)檢查。體股癬或手足癬一般在角質(zhì)層可見(jiàn)到菌絲或孢子；疊瓦癬真菌可深達(dá)棘層；花斑癬在角質(zhì)層可見(jiàn)到菌絲和孢子；馬拉色菌毛囊炎可見(jiàn)毛囊擴(kuò)張及毛囊角栓，毛囊皮脂腺漏斗部及周圍上皮炎性浸潤(rùn)或膿腫形成，可見(jiàn)孢子；甲真菌病顯示皮膚癬菌多侵犯甲板中層，菌絲沿甲板纖維平行生長(zhǎng)，可見(jiàn)關(guān)節(jié)孢子。
[0014]皮膚癬菌培養(yǎng)基(DTM)是1969年由Taplin等發(fā)明并應(yīng)用于頭癬致病真菌的分離和鑒定。皮膚癬菌鑒定培養(yǎng)基(DIM)是由Salkin等于1997年報(bào)道的用于皮膚癬菌鑒定的培養(yǎng)基。DTM在基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中加入了抗生素和放線菌酮，在皮膚癬菌選擇性生長(zhǎng)的同時(shí)能夠有效地防止細(xì)菌和大多數(shù)其它真菌的污染，添加了指示劑酚紅，皮膚癬菌生長(zhǎng)時(shí)產(chǎn)生的堿性代謝產(chǎn)物可以使培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色，能夠快速發(fā)現(xiàn)皮膚癬菌生長(zhǎng)。DIM增加了葡萄糖含量，加入指示劑溴甲酚紫，同時(shí)提高了放線菌酮的濃度，能夠更有效的抑制污染菌的生長(zhǎng)，增加了 37°C培養(yǎng)這一條件，認(rèn)為在37°C培養(yǎng)時(shí)能夠更加特異地分離和鑒定皮膚癬菌。`
[0015]KAHE/FISCHER系統(tǒng)是近些年發(fā)展起來(lái)的一種最新的皮膚癬菌鑒定方法，結(jié)合顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察，可以鑒定20余種皮膚癬菌，具有準(zhǔn)確率高、受污染少、影響小的優(yōu)點(diǎn)。但該系統(tǒng)比較繁雜，而經(jīng)過(guò)改良的系統(tǒng)以溴甲酚紫固體葡萄糖瓊脂(BCP-MS-G)和尿素培養(yǎng)基為主，可通過(guò)顏色變化以及水解暈的產(chǎn)生鑒定皮膚癬菌?？捎糜阼b定臨床常見(jiàn)的皮膚癬菌如紅色毛癬菌,須癬毛癬菌，石膏小孢子菌，紫色毛癬菌等。
[0016]在臨床上，直接鏡檢法檢查真菌因其簡(jiǎn)便、快速而成為最為普遍的真菌檢查法。鏡檢陽(yáng)性可確定為真菌感染，但一般不能確定致病菌種；鏡檢陰性不能排除真菌感染，如高度懷疑真菌感染可多次重復(fù)直接鏡檢或進(jìn)行真菌培養(yǎng)。如果有相關(guān)的產(chǎn)品能用于分離培養(yǎng)鑒定淺部真菌，則可指導(dǎo)臨床醫(yī)生根據(jù)病原學(xué)特點(diǎn)有針對(duì)性的選擇抗真菌藥物，對(duì)于淺部真菌的治療具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能迅速鑒定出多種不同菌種的淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)。
[0018]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:本發(fā)明所述淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)包括一三分隔平皿，在所述三分隔平皿上的每一格內(nèi)分別含有DIM培養(yǎng)基、尿素培養(yǎng)基和BCP-MS-G培養(yǎng)基，所述DM培養(yǎng)基呈淺綠色，所述尿素培養(yǎng)基呈黃色，所述BCP-MS-G培養(yǎng)基呈灰藍(lán)色，所述三分隔平皿經(jīng)無(wú)菌密封包裝，保存于2~8°C冰柜中。
[0019]所述DM培養(yǎng)基包含有葡萄糖、大豆蛋白胨、瓊脂、指示劑溴甲酚紫和抗生素系統(tǒng)，所述DM培養(yǎng)基的pH值為6.1±0.1。
[0020]所述尿素培養(yǎng)基包含有尿素、葡萄糖、瓊脂、指示劑酚紅和抗生素系統(tǒng)，所述尿素培養(yǎng)基的pH值為7.2±0.1。
[0021]所述BCP-MS-G培養(yǎng)基包含有脫脂奶粉、葡萄糖、瓊脂、指示劑溴甲酚紫和抗生素系統(tǒng)，所述BCP-MS-G培養(yǎng)基的pH值為6.8±0.I。
[0022]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明由適用于淺部真菌生長(zhǎng)及分離鑒定的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，經(jīng)無(wú)菌澆注密封而成，淺部真菌能在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出大量的菌落，該系統(tǒng)主要由含有適于淺部真菌分離及鑒定的改良DIM培養(yǎng)基(淺綠色)、尿素培養(yǎng)基(黃色)、BCP-MS-G培養(yǎng)基(灰藍(lán)色)和三分隔平皿組成；用于臨床時(shí)的操作方式為:收集具有活性菌落的指(趾)甲、皮屑、毛發(fā)等標(biāo)本，盡量剪碎，采用點(diǎn)植法，標(biāo)本應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)接種完畢，置于25-28°C培養(yǎng)3-5天，每天觀察結(jié)果；根據(jù)形成的菌落 形態(tài)、性狀、顏色結(jié)合顯微鏡下菌絲或孢子的大小、形態(tài)以及排列規(guī)律等特點(diǎn)即可迅速判斷出此致病真菌屬于何種真菌，必要時(shí)可做進(jìn)一步生化鑒定實(shí)驗(yàn)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1是所述三分隔平皿的俯視結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面就具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步闡述:
1.培養(yǎng)基配制=DIM培養(yǎng)基(改良皮膚癬菌培養(yǎng)基)成分:大豆蛋白胨IOg ;葡萄糖20g ；瓊脂20g ；1.6%溴甲酚紫溶液Iml ;氯霉素0.1g ;慶大霉素0.1g ;純化水加至1000ml ;用IMHCl 調(diào) pH 值至 6.1±0.I。
[0025]制法:將大豆蛋白胨、葡萄糖和瓊脂加至水中，文火加熱溶解；邊攪拌，邊加溴甲酚紫液，用IM HCl調(diào)pH值，121°C高壓滅菌15min。冷至50~55°C，加入經(jīng)除菌過(guò)濾氯霉素及慶大霉素，分裝于三分隔平皿的一格內(nèi)，如圖1所示，并冷卻。
[0026]尿素培養(yǎng)基成分:胰蛋白胨Ig ;氯化鈉5g ;葡萄糖50g ;磷酸二氫鉀2g ；0.4%酹紅溶液3mL ;瓊脂20g ;20%尿素溶液IOOmL ;氯霉素0.1g ;慶大霉素0.1g ;純化水加至1000ml ；用 IM NaOH 調(diào) pH 值至 7.2±0.I。
[0027]制法:將除尿素、瓊脂、氯霉素、慶大霉素以外的成分配好，用IM NaOH調(diào)pH值，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121°C高壓滅菌15min。冷至50~55°C，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液、氯霉素及慶大霉素。分裝于三分隔平板的一格內(nèi)，冷卻。
[0028]BCP-MS-G培養(yǎng)基成分:脫脂奶粉40g ；1.6 %溴甲酚紫醇溶液Iml ;瓊脂15g ;葡萄糖20g ;氯霉素0.1g ;慶大霉素0.1g ;純化水加至1000ml ;用IM NaOH調(diào)pH值至6.8±0.1。
[0029]制法:將除瓊脂、氯霉素、慶大霉素以外的成分配好，用IM NaOH調(diào)pH值，加入瓊月旨，加熱溶化并分裝燒瓶。121°C高壓滅菌15min。冷至50~55°C，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的氯霉素及慶大霉素。分裝于三分隔平板的一面內(nèi)，冷卻。
[0030]2.將制作好的含三種培養(yǎng)基的三分隔平皿，無(wú)菌密封包裝，保存于2~8°C冰柜，切忌冷凍保存。
[0031]3.使用時(shí)，從冰柜中取出所需數(shù)量的培養(yǎng)基，復(fù)溫。取各類標(biāo)本直接接種，指(趾)甲、皮屑、毛發(fā)等固型標(biāo)本，應(yīng)盡量剪碎，采用點(diǎn)植法；標(biāo)本應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)接種完畢。接種好的培養(yǎng)基，置于25-28°C培養(yǎng)3-5天，每天觀察結(jié)果。
[0032]4.根據(jù)形成的菌落形態(tài)、性狀、顏色結(jié)合顯微鏡下菌絲，孢子的大小，形態(tài)以及排列規(guī)律等特點(diǎn)報(bào)告此致病真菌屬于何種真菌。必要時(shí)可做進(jìn)一步生化鑒定實(shí)驗(yàn)。
[0033]下述列舉了多種不同菌種在本發(fā)明系統(tǒng)中進(jìn)行鑒定時(shí)的生長(zhǎng)情況和鑒定方法: 紫色毛癬菌:菌落生長(zhǎng)很慢，菌落小，能使淺綠色的DIM培養(yǎng)基顯紫色，使灰藍(lán)色的
BCP-MS-G培養(yǎng)基變紫色透明，使黃色的尿素培養(yǎng)基變紅褐色；
紅色毛癬菌:菌落生長(zhǎng)較慢，能使淺綠色的DM培養(yǎng)基顯紫色，使灰藍(lán)色的BCP-MS-G培養(yǎng)基變灰綠色；
須癬毛癬菌:菌落生長(zhǎng)較快，能使淺綠色的DIM培養(yǎng)基顯紫色，使黃色的尿素培養(yǎng)基顯粉紅色；
石膏樣小孢子菌:生長(zhǎng)較快 ，呈現(xiàn)彌漫的石膏粉末樣菌落，能使淺綠色的DIM培養(yǎng)基顯紫色，使灰藍(lán)色的BCP-MS-G培養(yǎng)基變藍(lán)紫色。
[0034]犬小孢子菌:生長(zhǎng)快，呈黃色菌落，培養(yǎng)基不變色。
[0035]酵母樣真菌:生長(zhǎng)快，使淺綠色的DM培養(yǎng)基顯黃色，使灰藍(lán)色的BCP-MS-G培養(yǎng)基顯黃色;
其他真菌:生長(zhǎng)快，使淺綠色的DIM培養(yǎng)基顯黃色，使灰藍(lán)色的BCP-MS-G培養(yǎng)基顯白色。
[0036]本發(fā)明可應(yīng)用于菌種鑒定領(lǐng)域。
【權(quán)利要求】
1.一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)，其特征在于:它包括一三分隔平皿，在所述三分隔平皿上的每一格內(nèi)分別含有DIM培養(yǎng)基、尿素培養(yǎng)基和BCP-MS-G培養(yǎng)基，所述DIM培養(yǎng)基呈淺綠色，所述尿素培養(yǎng)基呈黃色，所述BCP-MS-G培養(yǎng)基呈灰藍(lán)色，所述三分隔平皿經(jīng)無(wú)菌密封包裝，保存于2~8°C冰柜中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)，其特征在于:所述DIM培養(yǎng)基包含有葡萄糖、大豆蛋白胨、瓊脂、指示劑溴甲酚紫和抗生素系統(tǒng)，所述DM培養(yǎng)基的pH 值為 6.1±0.I。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)，其特征在于:所述尿素培養(yǎng)基包含有尿素、葡萄糖、瓊脂、指示劑酚紅和抗生素系統(tǒng)，所述尿素培養(yǎng)基的PH值為7.2±0.I。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種淺部真菌分離培養(yǎng)鑒定系統(tǒng)，其特征在于:所述BCP-MS-G培養(yǎng)基包含有脫脂奶粉、葡萄糖、瓊脂、指示劑溴甲酚紫和抗生素系統(tǒng)，所述BCP-MS-G培養(yǎng)基的pH值為6.`8±0.I。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK103773680SQ201410017629
【公開(kāi)日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月15日
【發(fā)明者】孫宜峰, 龔惠勇, 曾冰冰 申請(qǐng)人:珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司