專利名稱：丹參提取物治療敗血癥的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品的新用途，特別涉及丹參提取物在治療和/或預(yù)防敗血癥的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丹參為中國的傳統(tǒng)中藥，最早見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，并被列為上品.丹參以唇型科鼠尾屬多年生草本植物丹參(Salviami Itior2rhizaBunge)的干燥根及根莖入藥.別名赤參，紫丹參，血丹參.丹參主產(chǎn)于山西，四川，安徽，河北，江蘇，山東，浙江等省.丹參味苦， 微寒，入心，心包，肝經(jīng).具有活性化瘀，涼血消癰及養(yǎng)血安神的功效，主治瘀血所致的各種疼痛，癥瘕積聚，瘡瘍痛腫以及心悸失眠等，為臨床之常用藥物，尤以治療冠心病及缺血性腦血管病最為常用，且療效頗佳，多用于治療冠心病，心絞痛，心肌梗塞，心動(dòng)過速，腦血栓等，已被現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)和藥理實(shí)驗(yàn)研究所證實(shí)活血化瘀等多方面的藥理活性，其主要成份是丹參酮(I，ΠΑ, IIB)，異丹參酮(I，II)，隱丹參酮，羥基丹參酮IIA，異隱丹參酮，丹參新酮，左旋二氫丹參酮I，丹參酸甲酯，次甲丹參醌，丹參酚，乙，丙，β-谷留醇，3，4_ 二羥基苯甲醛，兒茶精，蕓香甙，原兒茶醛，原兒茶酸，乳酸，維生素E等.丹參中的水溶性成分主要是二羥基苯基乳酸(DLA，見

圖1Α)
HO ^^v^^C H2C H (OH)C OOH
T T又名丹參素-D (+) β-(3，4-二羥基苯基)乳酸〔1〕是丹參水溶性各種成分的基本結(jié)構(gòu)成分，已被證明有抗氧化、抗纖維化等作用。丹酚酸B(SAB，見圖1Β)
HO丹酚酸類化合物具有很強(qiáng)的抑制脂質(zhì)過氧化、清除超氧陰離子和羥基自由基的作用。其中丹酚酸A和B活性最強(qiáng)。丹酚酸B對(duì)腦缺血-再灌注損傷所致線粒體損傷和神經(jīng)細(xì)胞凋亡有明顯抑制作用?？煽笴aspase-3高表達(dá)PCI2細(xì)胞的凋亡，還可抑制B淀粉樣蛋白(Αβ1-40)纖維形成及Aβ 1-40所致PC12細(xì)胞線粒體損傷和細(xì)胞凋亡。屬強(qiáng)抗氧化藥， 且能消除細(xì)胞內(nèi)鈣超載。敗血癥是致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)中生長繁殖，產(chǎn)生毒素和其他代謝產(chǎn)物所引起的急性全身性感染，臨床上以寒戰(zhàn)、高熱、皮疹、關(guān)節(jié)痛及肝脾腫大為特征，部分可有感染性休克和遷徙性病灶。引起敗血癥的原因有一、人體因素①當(dāng)皮膚粘膜有破損或發(fā)生化膿性炎癥時(shí)，細(xì)菌則容易侵入體內(nèi)。②人體的免疫反應(yīng)可分為非特異性免疫反應(yīng)及特異性免疫反應(yīng)兩種，后者又可分為細(xì)胞免疫與體液免疫兩方面。當(dāng)機(jī)體免疫功能下降時(shí)，不能充分發(fā)揮其吞噬殺滅細(xì)菌的作用，即使入侵的細(xì)菌量較少，致病力不強(qiáng)也能引起敗血癥。③條件致病菌所引起的醫(yī)源性感染也逐漸增多。二、細(xì)菌因素主要與病原菌的毒力和數(shù)量有關(guān)。毒力強(qiáng)或數(shù)量多的致病菌進(jìn)入機(jī)體，引起敗血癥的可能性較大。敗血癥的主要癥狀是1.原發(fā)炎癥各種病原菌所引起的原發(fā)炎癥與其在人體的分布部位有關(guān)。原發(fā)炎癥的特點(diǎn)是局部的紅、腫、熱、痛和功能障礙。2.毒血癥癥狀起病多急驟。常有寒戰(zhàn)、高熱、發(fā)熱多為弛張熱及或間歇熱，亦可呈稽留熱、不規(guī)則熱及雙峰熱，后者多系革蘭陰性桿菌敗血癥所致。發(fā)熱同時(shí)伴有不同程度的毒血癥癥狀，如頭痛、惡心、嘔吐、腹脹、腹痛、周身不適、肌肉及關(guān)節(jié)疼痛等。3.皮疹見于部分患者，以瘀點(diǎn)最為多見，多分布于軀干、四肢、眼結(jié)膜、口腔粘膜等處，為數(shù)不多。4.關(guān)節(jié)癥狀可出現(xiàn)大關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛和活動(dòng)受限，甚至并發(fā)關(guān)節(jié)腔積液、積膿，多見于革蘭陽性球菌、腦膜炎球菌、產(chǎn)堿桿菌等敗血癥的病程中。5.感染性休克約見于1/5 1/3敗血癥患者，表現(xiàn)為煩燥不安，脈搏細(xì)速，四肢厥冷，皮膚花斑，尿量減少及血壓下降等，且可發(fā)生DIC，系嚴(yán)重毒血癥所致。6.肝脾腫大一般僅輕度腫大。根據(jù)研究，脂多糖(LPQ是革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分之一，造成了革蘭氏陽性細(xì)菌導(dǎo)致的人敗血癥和感染性休克的多種表現(xiàn)。敗血癥時(shí)發(fā)生的微循環(huán)障是由LPS 的過度釋放造成的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)，由許多激活的因子所介導(dǎo)，這些因子如粘附分子，活性氧成份(ROS)，以及炎癥前體介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α (TNF- α )、白介素-6 (IL_6)以及干擾素-Y (INF- y)0 LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的微循環(huán)障礙對(duì)敗血癥時(shí)發(fā)生的器官功能障礙起著關(guān)鍵作用，在這個(gè)過程中白細(xì)胞沿著內(nèi)皮旋轉(zhuǎn)并粘附于血管內(nèi)皮，血管壁產(chǎn)生過氧化氫和肥大細(xì)胞脫顆粒都是文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)鍵步驟。當(dāng)前敗血癥的主要臨床治療方法包括容量復(fù)蘇，兒茶酚胺的運(yùn)用和抗生素補(bǔ)償治療。這些方法可以增加敗血癥病人的存活率，但是在臨床上會(huì)導(dǎo)致血糖升高以及血壓和血鈣的下降，并發(fā)生出血。臨床研究建議采用抗TNF-α治療對(duì)敗血癥的治療有所幫助。然而， 最近的研究表明這種方法不能治愈敗血癥且會(huì)增加嚴(yán)重?cái)⊙Y病人的死亡率。因而，在LPS 導(dǎo)致的敗血癥中尋找防止出現(xiàn)嚴(yán)重微循環(huán)障的方法仍然是個(gè)挑戰(zhàn)。本發(fā)明人在對(duì)丹參中的兩個(gè)重要提取物二羥基苯基乳酸和丹酚酸B進(jìn)行的研究過程中，發(fā)現(xiàn)二羥基苯基乳酸和丹酚酸B顯著改善脂多糖誘導(dǎo)的大鼠腸系膜微循環(huán)障礙， 并抑制脂多糖引起的⑶lib和⑶18表達(dá)和嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生· O2-和H2O2，對(duì)敗血癥有明顯的治療作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種丹參提取物的新的治療用途。所述新的治療用途，是用丹參提取物治療因微循環(huán)障礙引發(fā)的敗血癥。為此，本發(fā)明提供一種藥物新用途，即用丹參提取物制備一種治療和/或預(yù)防敗血癥的藥物。本發(fā)明所述丹參提取物選自兩個(gè)重要提取物二羥基苯基乳酸和丹酚酸B。本發(fā)明所述的二羥基苯基乳酸和丹酚酸B是現(xiàn)有技術(shù)，可以從市場上買到，也可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，符合藥用標(biāo)準(zhǔn)即可。優(yōu)選純度> 50%，更優(yōu)選純度> 90%，最優(yōu)選純度> 98%。本發(fā)明所述制備的藥物，是用上述丹參提取物作為藥物活性成分制備成的藥物制劑組合物。本發(fā)明的藥物制劑組合物，根據(jù)需要可以含有藥物可接受的載體，其中丹參提取物作為藥物活性成分，其在制劑中所占重量百分比可以是0. 1-99.9%，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物制劑組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋，注射劑的每支等。本發(fā)明的藥物制劑組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、 丸齊 、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧齊U、 滴劑、貼劑。本發(fā)明的中藥制劑，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉?？赏ㄟ^混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中?？诜后w制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉齊U、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。
本發(fā)明的中藥制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體， 所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的制劑在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每次1-20 劑，如1-20袋或?；蚱?，每劑lmg-1000mg。本發(fā)明所述的治療用途是通過以下實(shí)驗(yàn)證明的材料和方法試藥二羥基苯基乳酸和丹酚酸B均購自中國藥品生物制品檢定所(北京，中國)。脂多糖取自大腸桿菌血清型055:B5，甲苯胺藍(lán)，2’，7’ - 二氯熒光素乙酰乙酸鹽(DCFH-DA)和氫化乙啡啶均購自Sigma(圣路易斯，密蘇里州)。FITC-結(jié)合小鼠抗-大鼠⑶lib單克隆抗體， FITC-結(jié)合小鼠抗-大鼠⑶18單克隆抗體，F(xiàn)ITC-結(jié)合小鼠IgA，κ和FITC-結(jié)合小鼠IgG1, κ均購自BD生物科學(xué)系統(tǒng)(圣地亞哥，加州)。溶血素購自BD生物科學(xué)Immunocytometer 系統(tǒng)(美國加州硅谷)。Mono-Pol分離液購自大日本製薬株式會(huì)社(大阪，日本)。RPMI 1640和胎牛血清購自Hyclone (樓根，猶他州)。試驗(yàn)中使用的所有其它化學(xué)試劑為最優(yōu)商品級(jí)試劑。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重200 250g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所有研究經(jīng)過批準(zhǔn)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遵循北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究委員會(huì)指南進(jìn)行處理。腸系膜微循環(huán)觀察試驗(yàn)前SD大鼠禁食12小時(shí)，可以自由飲水。用烏拉坦將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉(1. 25mg/ kg體重，肌肉注射)。將導(dǎo)管插入左頸靜脈和右股靜脈，供注射各種實(shí)驗(yàn)藥物使用。經(jīng)腹正中線切開20-30mm，輕柔地將20cm腸系膜尾部的回盲腸由腹部取出，置于透明塑料大鼠實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。用恒溫裝置將腸系膜保持在37°C，在表面連續(xù)滴加生理鹽水，保持水分。取倒置顯微鏡(DM-IRB，Leica, Wetzlar，德國)，用透照法觀察腸系膜微循環(huán)血液動(dòng)力學(xué)。一臺(tái)攝像機(jī)(Jk-TU53H，日本東芝公司，東京，日本)安裝在顯微鏡上，將圖像反射到彩色監(jiān)視器 (J2118A，TCL，徽州，中國)，使用DVD(DVR-R25, Malata, Xiamen，中國)記錄圖像。研究中供測量參數(shù)使用的微靜脈應(yīng)為單根，非分枝，無明顯彎曲，直徑范圍為30 μ m-50 μ m，長度為 200 μ mo脂多糖誘導(dǎo)的微循環(huán)障礙和藥物輸注將大鼠隨機(jī)分成4組，每組6只。觀察大鼠腸系膜微血管系統(tǒng)的基本血液動(dòng)力學(xué) 10分鐘后，給予溶媒(生理鹽水溶液)或試驗(yàn)藥品。自試驗(yàn)開始(第O分鐘)至試驗(yàn)結(jié)束 (第60分鐘)，自對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左頸靜脈插管灌注鹽水溶液(8ml/kg體重/hr)；自試驗(yàn)開始(第O分鐘)至試驗(yàn)結(jié)束(第60分鐘)，自脂多糖組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左股靜脈連續(xù)灌注脂多糖(ang/kg體重/hrin鹽水溶液)。自脂多糖+ 二羥基苯基乳酸組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物左股靜脈輸注脂多糖(ang/kg體重/hr)后，自試驗(yàn)前20分鐘至觀察結(jié)束期間由左頸靜脈輸注二羥基苯基乳酸(5mg/kg體重/hrin鹽水溶液)。脂多糖+丹酚酸B組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理方法與脂多糖+ 二羥基苯基乳酸組相同，只需用丹酚酸B (5mg/kg體重/hrin鹽水溶液)代替二羥基苯基乳酸。四個(gè)實(shí)驗(yàn)組的總輸注量相同。微靜脈直徑測量使用圖像-Pro Plus 5. 0軟件評(píng)價(jià)系統(tǒng)記錄的微靜脈動(dòng)態(tài)圖像，在第0，10，30和 50分鐘測量微靜脈直徑。微靜脈紅細(xì)胞流速測量記錄微靜脈紅細(xì)胞流速，通過CXD將監(jiān)控器調(diào)節(jié)至高速度攝像機(jī)系統(tǒng)(FAST CAM-ultima APX, photron,圣地亞哥，加州)，調(diào)節(jié)速度至2000幀每秒(幀/秒)，以25幀 /秒重新播放高速保存圖像。用圖像-Pro Plus 5. 0軟件測量第0，10，30和50分鐘的微靜脈紅細(xì)胞流速。切變率測量遵循下述公式計(jì)算微靜脈切變率(Y ) Y = 8 (微靜脈/微靜脈直徑RBCs平均速度)。粒性白細(xì)胞粘附測量觀察系統(tǒng)記錄的粒性白細(xì)胞動(dòng)態(tài)圖像，鑒定粘附在微靜脈壁上的粒性白細(xì)胞。粘附的粒性白細(xì)胞是指重新播放DVD圖像時(shí)粒性白細(xì)胞在同一位點(diǎn)粘附10秒鐘以上。在觀察第0，10，30和50分鐘圖像隨機(jī)選擇200 μ m微靜脈，然后沿微靜脈統(tǒng)計(jì)粘附的粒性白細(xì)
胞數(shù)量。趨化游走粒性白細(xì)胞測量檢查記錄的圖像，測量趨化游走粒性白細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞趨化游走即每200 μ m微靜脈粒性白細(xì)胞的數(shù)量，在第0，10，30和50分鐘隨機(jī)選擇圖像。肥大細(xì)胞脫顆粒測量輸注脂多糖或鹽水溶液60分鐘后，用0. 1 %甲苯胺藍(lán)將組織局部染色1分鐘，然后用生理鹽水清洗。視野中沒有脫顆粒的肥大細(xì)胞和脫顆粒的肥大細(xì)胞的數(shù)量放大20X，每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共評(píng)價(jià)5個(gè)視野。脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)量與肥大細(xì)胞總數(shù)量的比值即為脫顆粒的肥大細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。嗜中性粒細(xì)胞表面⑶lib和⑶18表達(dá)測量經(jīng)腹主動(dòng)脈采集其它組大鼠血樣(n = 6)，加肝臟素抗凝，檢測嗜中性粒細(xì)胞表面 ⑶lib和⑶18表達(dá)。樣品分成四組對(duì)照組，脂多糖組(脂多糖2yg/ml)，脂多糖+ 二羥基苯基乳酸組(脂多糖2 μ g/ml加二羥基苯基乳酸0. 2mg/ml,0. 5mg/ml或1. Omg/ml)和脂多糖+丹酚酸B組(脂多糖2 μ g/ml加丹酚酸B0. 2mg/ml，0. 5mg/ml或1. 0mg/ml)。樣品在 37°C水浴中培育2小時(shí)，然后使用1 μ g/ml FITC-結(jié)合小鼠抗-大鼠⑶lib抗體，1 μ g/ml FITC-結(jié)合小鼠抗-大鼠⑶18抗體或FITC-結(jié)合相應(yīng)同種型(小鼠IgA，κ kr⑶11b，小鼠 IgGl, κ for⑶18)在室溫條件下標(biāo)記20分鐘。然后，按照生產(chǎn)廠家(BD生物科學(xué)系統(tǒng)，美國加州硅谷)說明，用溶血素將紅細(xì)胞溶解，磷殘留細(xì)胞用酸鹽緩沖溶液洗滌兩次。根據(jù)前向角_/側(cè)向角-散射表達(dá)特性，使用FACS Calibur流式細(xì)胞儀(BD生物科學(xué)系統(tǒng)，美國加州硅谷)將嗜中性粒細(xì)胞分類，評(píng)價(jià)每個(gè)樣本中的5000個(gè)嗜中性粒細(xì)胞，測量平均熒光強(qiáng)度。嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)H2A和‘ 02_測量血樣分別取自不同組大鼠，加肝臟素抗凝。遵循Ting所述方法，使用Mono-多分離液分離嗜中性粒細(xì)胞，然后將其懸浮在0. IM磷酸鹽緩沖溶液中。使用FACSCalibur流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)(BD生物科學(xué)系統(tǒng)，美國加州硅谷)分析細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的‘02_和H2O2。簡而言之，將采集的嗜中性粒細(xì)胞在20mM 2’ -7’ - 二氯熒光素雙醋酸鹽溶液中培育5分鐘，溫度為37°C， 然后在IOmM氫化乙啡啶中培育15分鐘。2’ _7’ - 二氯熒光素雙醋酸鹽的硝酸鹽部分被細(xì)胞內(nèi)酯酶斷開，釋放不能通過細(xì)胞膜的2’，7’ - 二氯熒光素，被H2A氧化成2’，7’ - 二氯熒光素(DCF)后發(fā)出熒光；另一方面Hydroethidium可以直接被·02_氧化成菲啶溴紅(EB)，嵌入核酸后發(fā)熒光。然后使用二羥基苯基乳酸(0. 5mg/ml)或丹酚酸B(0. 5mg/ml)處理細(xì)胞， 用脂多糖Qyg/ml)刺激細(xì)胞。在冰中培育20分鐘后，用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)測量產(chǎn)生的H2A 和 ‘(V，測量發(fā)射波長為 525nm(FLl，forDCF)和 590nm(FL2，forEB)。統(tǒng)計(jì)分析使用ANOVA和Fisher’ s post hoc test計(jì)算統(tǒng)計(jì)顯著性。統(tǒng)計(jì)顯著水平為ρ <0.05。數(shù)據(jù)以平均士S. Ε. M表示。結(jié)果二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的微靜脈紅細(xì)胞流速變化的干預(yù)作用 在不同時(shí)間點(diǎn)測量四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中微靜脈紅細(xì)胞流速(見表1)。脂多糖輸注30分鐘后，微靜脈紅細(xì)胞流速降低至74%基礎(chǔ)值水平，并且這種干預(yù)作用一直維持觀察結(jié)束。二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理后，脂多糖誘導(dǎo)的微靜脈紅細(xì)胞流速降低明顯降低。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的腸系膜微靜脈切變率變化的干預(yù)作用表2顯示四個(gè)實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)觀察的腸系膜微靜脈切變率。對(duì)照組，脂多糖組，脂多糖+ 二羥基苯基乳酸組和脂多糖+丹酚酸B組的基礎(chǔ)值微靜脈切變率未出現(xiàn)顯著性差異。 給予脂多糖后腸系膜微靜脈切變率明顯降低，30分鐘后變得更加顯著，并且這種降低一值維持到脂多糖輸注結(jié)束50分鐘。二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理減弱脂多糖誘導(dǎo)的腸系膜微靜脈切變率降低，降低數(shù)值較小，因此并不顯著，脂多糖輸注50分鐘后可以檢測到脂多糖+ 二羥基苯基乳酸或脂多糖+丹酚酸B組切變率降低。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的粘附在微靜脈壁上的粒性白細(xì)胞數(shù)量變化的干擾作用評(píng)價(jià)不同條件下粘附在微靜脈壁上的粒性白細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間的變化 (見圖2)。在觀察期內(nèi)，對(duì)照組粘附的粒性白細(xì)胞數(shù)隨著時(shí)間的推移只有少量增加。但是， 脂多糖刺激后粘附的粒性白細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)顯著性遞增，自脂多糖輸注第10分鐘開始增加， 且這種增加趨勢維持了 50分鐘。二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的白細(xì)胞粘附。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的沿微靜脈壁趨化游走的粒性白細(xì)胞數(shù)量變化的干擾作用沿微靜脈壁趨化游走的粒性白細(xì)胞數(shù)量的變化時(shí)間過程見圖3。在所有時(shí)間點(diǎn)，對(duì)照組出現(xiàn)很少或沒有出現(xiàn)趨化游走的粒性白細(xì)胞。給予脂多糖引起趨化游走粒性白細(xì)胞數(shù)量在50分鐘顯著增加，二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理后幾乎完全沒有出現(xiàn)這種增加。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒的干預(yù)作用圖4顯示四個(gè)實(shí)驗(yàn)組中微靜脈中脫顆粒肥大細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。對(duì)照組中甚至可以檢測到少量脫顆粒肥大細(xì)胞。脂多糖輸注60分鐘后脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)量開始增加，二羥基苯基乳酸或丹酚酸B 處理組顯著抑制脂多糖誘導(dǎo)的脫顆粒反應(yīng)肥大細(xì)胞。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)嗜中性粒細(xì)胞體外⑶lib和⑶18表達(dá)的干預(yù)作用本研究使用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)分析接受不同處理的嗜中性粒細(xì)胞表面粘附分子CDllb和 ⑶18表達(dá)。圖5A顯示，與對(duì)照組比較經(jīng)脂多糖處理后嗜中性粒細(xì)胞表面⑶lib的熒光強(qiáng)度顯著增加，加入丹酚酸B或二羥基苯基乳酸后這種由脂多糖誘導(dǎo)的CDllb熒光強(qiáng)度增強(qiáng)消失，加入的丹酚酸B的有效濃度可以低至0. 2mg/ml，二羥基苯基乳酸的有效濃度可以低至 0. 5mg/ml。圖5B表明，粘附分子CD18出現(xiàn)類似的趨勢經(jīng)脂多糖處理后嗜中性粒細(xì)胞表面 ⑶18熒光強(qiáng)度顯著增加，使用的濃度達(dá)到0. 2mg/ml時(shí)，二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理后這種作用受到抑制。二羥基苯基乳酸和丹酚酸B對(duì)嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生‘02_和H2A的體外干預(yù)作用使用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)檢測二羥基苯基乳酸和丹酚酸B的抗氧化作用。細(xì)胞經(jīng)脂多糖刺激后，嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生大量‘ O2-,加入0. 5mg/ml 二羥基苯基乳酸或丹酚酸B后，顯著抑制細(xì)胞產(chǎn)生‘02_(見圖6A)。與對(duì)照組比較，脂多糖刺激后嗜中性粒細(xì)胞H2A熒光強(qiáng)度幾乎增加兩倍，使用0. 5mg/ml 二羥基苯基乳酸或丹酚酸B處理后這種作用顯著降低(見圖6B)。試驗(yàn)結(jié)果表明，二羥基苯基乳酸和丹酚酸B均可以改善脂多糖誘導(dǎo)的大鼠腸系膜微循環(huán)障礙。包括抑制白細(xì)胞粘附和趨化游走，減弱紅細(xì)胞流速和微靜脈切變率降低， 抑制肥大細(xì)胞脫顆粒?？梢砸种浦嗵谴碳さ氖戎行粤＜?xì)胞粘附分子CDllb和CD18表達(dá)和‘02_和H2A產(chǎn)生。這些結(jié)果為LPS誘導(dǎo)的敗血癥的臨床治療提供了一個(gè)新的可供選擇的方法。表1輸注鹽水溶液或脂多糖后不同時(shí)間點(diǎn)微靜脈紅細(xì)胞流速。按照材料和方法所述方法，輸注鹽水溶液或脂多糖后，給予或不給予二羥基苯基乳酸或丹酚酸B預(yù)處理，在第0，10,30和50分鐘測量微靜脈紅細(xì)胞流速。數(shù)據(jù)以6只大鼠的平均士 S. E.M表示。
權(quán)利要求
1.丹酚酸B在制備治療敗血癥的藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述敗血癥是致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)中生長繁殖，產(chǎn)生毒素和其他代謝產(chǎn)物所引起的急性全身性感染。
3.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述敗血癥引發(fā)微循環(huán)障礙，該微循環(huán)障礙是由脂多糖的過度釋放造成的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是用丹酚酸B處理后，脂多糖誘導(dǎo)的微靜脈紅細(xì)胞流速降低。
5.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是丹酚酸B抑制脂多糖誘導(dǎo)的白細(xì)胞粘附。
6.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是丹酚酸B抑制脂多糖誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及丹參提取物治療敗血癥的應(yīng)用，特別涉及丹參提取物二羥基苯基乳酸或丹酚酸B在治療和/或預(yù)防敗血癥的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102210669SQ20111016612
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2007年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月21日
發(fā)明者劉育英, 孫凱, 王傳社, 郭俊, 韓晶巖 申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司