專利名稱：：獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及獸藥新劑型制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：甲磺酸達(dá)氟沙星(Danofloxacinmesylate)是一種動(dòng)物專用的氟喹諾酮類藥物，于1988年由美國輝瑞公司研制成功并上市，已在世界范圍內(nèi)廣泛使用。甲磺酸達(dá)氟沙星的抗菌譜廣、殺菌活性強(qiáng)、毒性低、水溶性好、體內(nèi)分布廣泛、與其他抗菌藥無交叉耐藥性，可多種途徑給藥，吸收迅速，生物利用度高。該藥對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、細(xì)胞內(nèi)病原菌、支原體及某些耐藥菌株都表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗菌活性，常用于治療由溶血性巴氏桿菌、出血敗血性巴氏桿菌、嗜血桿菌、化膿放線桿菌和支原體引起的豬、牛呼吸道感染；鼠傷寒沙門氏菌引起的豬、牛胃腸道感染；敏感菌引起的山羊泌尿道感染；大腸桿菌、雞敗血支原體和出血敗血性巴氏桿菌引起的家禽胃腸道感染、禽霍亂、慢性呼吸道疾病等。目前，國內(nèi)外生產(chǎn)、銷售和使用的甲磺酸達(dá)氟沙星制劑主要有注射劑、內(nèi)服用的粉劑和溶液等3種劑型，如美國輝瑞公司生產(chǎn)的Advocin180、AdvocinInjectableSolution和A180SterileAntimicrobialInjectableSolution三種甲磺酸達(dá)氟沙星制劑，均為注射劑，主要用于治療由敏感菌引起的豬、牛和禽的呼吸道、消化道感染和乳房炎。有資料顯不(LindecronaR.H.,etal.PharmacokineticsandpenetrationofdanogloxacinintothegastrointestinaltractinhealthyandinSalmonellatyphimuriuminfectedpigs.ResearchinVeterinaryScience，2000，68:211-216)上述制劑在動(dòng)物體內(nèi)消除較快(豬t咖為6.7h左右)，在使用過程中需連續(xù)多次給藥才能達(dá)到治療效果，給臨床應(yīng)用造成極大的不便。微球制劑是將藥物與適宜的載體通過微囊化技術(shù)制得微球，具有緩釋長效、減少給藥次數(shù)、提高動(dòng)物的順應(yīng)性、平穩(wěn)血藥濃度、療效持久、安全等優(yōu)點(diǎn)。這類制劑的開發(fā)與應(yīng)用研究，可以提升我國新型獸藥制劑研發(fā)水平，為我國畜牧業(yè)養(yǎng)殖健康發(fā)展提供技術(shù)支撐與產(chǎn)品保障。關(guān)于甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑國內(nèi)外僅有一篇報(bào)道。申請?zhí)枮?00810197943.2的中國專利申請采用乳化冷凝法制備得到甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑。該專利申請制得的甲磺酸達(dá)氟沙星微球平均粒徑為1011μm，能滿足肌內(nèi)注射的要求，但載藥量6.3wt%)和包封率(8.16.5%)低，而且在制備過程中使用了大量的有機(jī)試劑如異丙醇、乙醚、石油醚、液體石蠟、甲醛、戊二醛等，這些試劑對人和動(dòng)物均有一定的毒副作用，乙醚、石油醚等試劑易燃、易爆、易揮發(fā)，使用時(shí)存在安全隱患，并污染環(huán)境。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明采用乳化化學(xué)交聯(lián)法，以海藻酸鈉、注射用大豆油、氯化鈣、醋酸鋅、無水乙醇等為材料制備了一種載藥量高、包封率高的注射用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑，并解決了獸用臨床使用需多次給藥帶來的不便。本發(fā)明的制劑使用簡便，藥效持久，生物利用度高等特點(diǎn)。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案如下所示—種甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑，制劑中有效成分磺酸達(dá)氟沙星占微球制劑的質(zhì)量百分比為11.4521.01%，海藻酸鈉多糖交聯(lián)物占微球制劑的質(zhì)量百分比為78.99%88.55%，所述的甲磺酸達(dá)氟沙星被包裹或包埋在所述海藻酸鈉多糖交聯(lián)物中，所述微球的平均粒徑為89μm。一種甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑的制備方法，是先將海藻酸鈉和甲磺酸達(dá)氟沙星混溶于去離子水中，以注射用大豆油作為油相，高速攪拌下乳化成穩(wěn)定乳液，然后滴加交聯(lián)劑使乳滴固化形成微球，通過洗滌、離心、過濾、干燥，即得甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球。其制備方法包括以下步驟(1)將海藻酸鈉溶解于去離子水中，45°C水浴攪拌至完全溶解，再加入0.2%抗氧化劑亞硫酸氫鈉，攪拌溶解，配成海藻酸鈉溶液。溶液中海藻酸鈉的濃度為10%(w/v)，優(yōu)選為2.0%(w/v)0(2)將甲磺酸達(dá)氟沙星用45mL去離子水溶解，在磁力攪拌的條件下，將甲磺酸達(dá)氟沙星溶液加至步驟(1)的海藻酸鈉溶液中，40°C水浴攪拌至兩者混合均勻，得到水相溶液。甲磺酸達(dá)氟沙星與海藻酸鈉的質(zhì)量比為0.512l(w/w)，優(yōu)選為1l(w/w)。(3)量取注射用大豆油，加入乳化劑Span-80，攪拌均勻，得到油相溶液。乳化劑的濃度為15%(w/v)，優(yōu)選為5%(w/v)0(4)稱取適量的氯化鈣和醋酸鋅，用去離子水溶解，混合均勻，得到交聯(lián)劑。交聯(lián)劑中氯化鈣濃度為4%10%(w/v)，優(yōu)選為6%(w/v)，醋酸鋅濃度為3%8%(w/v)，優(yōu)選為4%(w/v)ο(5)水浴5055°C中，高速攪拌的條件下，將步驟(3)的油相溶液加至步驟(2)的水相溶液中，制備成W/0型乳液。攪拌速度為8002000r/min，優(yōu)選1500r/min。乳化時(shí)間為0.53h，優(yōu)選50min。油相溶液與水相溶液的體積比為11101(ν/ν)，優(yōu)選為11(ν/ν)。(6)持續(xù)高速攪拌的條件下，往步驟(5)的乳液中緩慢滴加步驟⑷所得交聯(lián)劑，使乳滴固化形成微球。攪拌速度為8002000r/min，優(yōu)選為1500r/min。交聯(lián)固化時(shí)間為15h，優(yōu)選為濁。交聯(lián)劑與水相溶液的體積比為152l(v/v)，優(yōu)選為13(v/V)O(7)在步驟(6)所得溶液中加入無水乙醇，攪拌脫水30min，離心，棄除上層液體，將沉淀用無水乙醇反復(fù)洗滌23次，最后將含微球的溶液用0.45μm濾膜過濾，然后40°C、0.IMI^a真空干燥，得到獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球粉末。離心轉(zhuǎn)速為30007000r/min，優(yōu)選為6000r/min。(8)利用高效液相色譜法測定步驟(7)所得制劑的含量，高效液相色譜法測定條件為色譜柱為MrbaxSB-Aq柱，流動(dòng)相為磷酸二氫鉀-檸檬酸緩沖液(pH=3.0)乙腈=7822(ν/ν)，流速lmL/min,檢測波長282nm,柱溫30°C，進(jìn)樣量20μL0本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)原料天然易得本發(fā)明所使用的緩釋微球載體為海藻酸鈉，是一種具有良好生物相容性和生物降解性的天然多糖，對動(dòng)物體無毒、無害、無副作用。其他材料如注射用大豆油、氯化鈣、醋酸鋅均可以被動(dòng)物吸收、利用，無任何毒副作用，且價(jià)格便宜，容易得到。(2)本發(fā)明所涉及的微囊化技術(shù)為利用海藻酸鈉能與二價(jià)陽離子發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)為基礎(chǔ)，在含有海藻酸鈉-甲磺酸達(dá)氟沙星混合的穩(wěn)定乳液體系中加入鈣、鋅離子混合溶液，促使交聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生從而制備成固化的微球。(3)反應(yīng)設(shè)備、操作條件易控制。(4)無毒無污染本發(fā)明所需的有機(jī)試劑只有無水乙醇，對環(huán)境污染少。(5)所得微球包封率和載藥量高。(6)所得微球制劑具有長效緩釋的特點(diǎn)，藥物釋放緩慢平穩(wěn)，避免多次給藥引起血藥濃度波動(dòng)大而導(dǎo)致動(dòng)物對藥物的順應(yīng)性差等問題。該微球制劑經(jīng)豬肌內(nèi)注射后，在豬體內(nèi)生物利用度高，消除緩慢，有效濃度維持時(shí)間長。見表1。表1本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)的對比的積極效果權(quán)利要求1.一種獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑，其特征在于，所述制劑甲磺酸達(dá)氟沙星微球包含甲磺酸達(dá)氟沙星和海藻酸鈉多糖交聯(lián)物，按質(zhì)量百分比計(jì)，甲磺酸達(dá)氟沙星占微球重量的11.4521.01%，海藻酸鈉多糖交聯(lián)物占微球重量的78.9988.55%，所述甲磺酸達(dá)氟沙星被包裹或包埋在在所述海藻酸鈉多糖交聯(lián)物中，所述微球的平均粒徑在89μm，載藥量按w/w計(jì)為11.45%21.01%，藥物包封率按w/w計(jì)為59.5488.20%,其是通過包含如下步驟制備的(1)配制水相溶液將海藻酸鈉、抗氧化劑加去離子水溶解，水浴加熱攪拌至完全溶解后，加入甲磺酸達(dá)氟沙星水溶液，繼續(xù)攪拌至混合均勻，得到水相溶液；(2)配制油相溶液量取注射用大豆油，加入乳化劑，攪拌均勻，得到油相溶液；(3)乳化在水浴加熱高速攪拌的條件下，將步驟(2)的油相溶液加至步驟⑴的水相溶液中，乳化，制備成W/0型乳液；(4)交聯(lián)固化在持續(xù)高速攪拌的條件下，往步驟(所得乳液中緩慢滴加交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，使乳滴固化形成微球；(5)在步驟(4)所得溶液中加入無水乙醇，攪拌脫水30min，離心，棄去上層液體，將沉淀用無水乙醇反復(fù)洗滌23次，最后將含微球的溶液用0.454!11濾膜過濾，401、0.IMpa下真空干燥，得到甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑粉末；其中步驟(1)所述抗氧化劑為亞硫酸氫鈣，其濃度按W/V計(jì)為0.2%，所述水相溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量百分比濃度按W/W計(jì)為110%，甲磺酸達(dá)氟沙星與海藻酸鈉的質(zhì)量比為0.5121，水浴加熱溫度為40°C；步驟(所述乳化劑為Span-80，其在油相中的質(zhì)量體積比濃度為115%；步驟(3)水浴加熱溫度為5055°C，攪拌速度為8002000r/min；油相溶液與水相溶液的體積比為1101，乳化時(shí)間為0.5池；步驟(4)所述攪拌速度為8002000r/min，交聯(lián)時(shí)間為1證，交聯(lián)劑為氯化鈣-醋酸鋅溶液，其中氯化鈣-醋酸鋅溶液中的氯化鈣濃度為410%，醋酸鋅濃度為38%，交聯(lián)劑與水相溶液的體積比為1521;步驟(5)所述離心轉(zhuǎn)速為30007000r/min。2.權(quán)利要求1所述獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑，其特征在于步驟(1)所述海藻酸鈉的質(zhì)量百分比濃度為2.0%，甲磺酸達(dá)氟沙星與海藻酸鈉的質(zhì)量比為1:1;步驟⑵所述乳化劑為Span-80在油相中的質(zhì)量體積比為5%；步驟(3)的水浴加熱溫度為5055°C，攪拌速度為1500r/min，所述油相溶液與水相溶液的體積比為11，乳化時(shí)間為50min;步驟(4)的攪拌速度為1500r/min，交聯(lián)時(shí)間為池，所述氯化鈣-醋酸鋅溶液中的氯化鈣濃度為6%，醋酸鋅濃度為4%，所述的交聯(lián)劑與水相溶液的體積比為13;步驟(5)的離心轉(zhuǎn)速為6000r/min。3.權(quán)利要求1所述獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于，先將海藻酸鈉和甲磺酸達(dá)氟沙星混溶于去離子水中，以注射用大豆油作為油相，高速攪拌下乳化成穩(wěn)定乳液，然后滴加交聯(lián)劑使乳滴固化形成微球，通過洗滌、離心、過濾、干燥，即得甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球，其步驟包括(1)配制水相溶液將海藻酸鈉、抗氧化劑加去離子水溶解，水浴加熱攪拌至完全溶解后，加入甲磺酸達(dá)氟沙星水溶液，繼續(xù)攪拌至混合均勻，得到水相溶液；(2)配制油相溶液量取注射用大豆油，加入乳化劑，攪拌均勻，得到油相溶液；(3)乳化在水浴加熱高速攪拌的條件下，將步驟(2)的油相溶液加至步驟⑴的水相溶液中，乳化，制備成W/0型乳液；(4)交聯(lián)固化在持續(xù)高速攪拌的條件下，往步驟(所得乳液中緩慢滴加交聯(lián)劑進(jìn)行交聯(lián)固化，使乳滴固化形成微球；(5)在步驟(4)所得溶液中加入無水乙醇，攪拌脫水30min，離心，棄去上層液體，將沉淀用無水乙醇反復(fù)洗滌23次，最后將含微球的溶液用0.45μm濾膜過濾，40°C、0.IMPa真空干燥，得到甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑粉末；其中步驟(1)所述抗氧化劑為亞硫酸氫鈣，其濃度按W/V計(jì)為0.2%，所述水相溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量百分比濃度按W/W計(jì)為110%，甲磺酸達(dá)氟沙星與海藻酸鈉的質(zhì)量比為0.5121，水浴加熱溫度為40°C；步驟(所述乳化劑為Span-80，其在油相中的質(zhì)量體積比濃度按w/v計(jì)為115%;步驟(水浴加熱溫度為5055°C，攪拌速度為8002000r/min；油相溶液與水相溶液的體積比為1101，乳化時(shí)間為0.5池；步驟(4)所述攪拌速度為8002000r/min，交聯(lián)時(shí)間為1證，交聯(lián)劑為氯化鈣-醋酸鋅溶液，其中氯化鈣-醋酸鋅溶液中的氯化鈣濃度為410%，醋酸鋅濃度為38%，交聯(lián)劑與水相溶液的體積比為1521;步驟(5)所述離心轉(zhuǎn)速為30007000r/min。4.權(quán)利要求3所述獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于步驟(1)所述海藻酸鈉的質(zhì)量百分比濃度為2.0%，甲磺酸達(dá)氟沙星與海藻酸鈉的質(zhì)量比為1:1;步驟⑵所述乳化劑為Span-80在油相中的質(zhì)量體積比為5%；步驟(3)的水浴加熱溫度為5055°C，攪拌速度為1500r/min，所述油相溶液與水相溶液的體積比為11，乳化時(shí)間為50min;步驟(4)的攪拌速度為1500r/min，交聯(lián)時(shí)間為池，所述氯化鈣-醋酸鋅溶液中的氯化鈣濃度為6%，醋酸鋅濃度為4%，所述的交聯(lián)劑與水相溶液的體積比為13;步驟(5)的離心轉(zhuǎn)速為6000r/min。5.權(quán)利要求1所述的甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑在畜禽藥學(xué)中可接受的應(yīng)用，其中包括在治療畜禽敏感性細(xì)菌引起的呼吸道或消化道感染中的應(yīng)用。6.權(quán)利要求5的應(yīng)用，其特征在于，所述的方法是，以甲磺酸達(dá)氟沙星計(jì)，肌內(nèi)注射一次，給藥劑量為每Ikg體重5mg/kgb.W0全文摘要本發(fā)明涉及一種獸用甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑及其制備方法與應(yīng)用。制劑中有效藥物成分甲磺酸達(dá)氟沙星含量為11.45～21.01％，載體海藻酸鈉多糖交聯(lián)物含量為78.99～88.55％。該制劑采用乳化化學(xué)交聯(lián)法制備，先將甲磺酸達(dá)氟沙星、海藻酸鈉、抗氧化劑配成水相溶液，在乳化的條件下滴加交聯(lián)劑，固化形成微球，然后通過洗滌、離心、過濾、干燥，得到平均粒徑在8～9μm的甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑。該制劑的制備工藝簡單易行，所用原料具有很好的生物相容性、生物降解性和穩(wěn)定性，制備的甲磺酸達(dá)氟沙星緩釋微球制劑具有安全無毒、載藥量高(11.45％～21.01％)、包封率高(59.54～88.20％)和長效緩釋等特點(diǎn)，對豬肌內(nèi)注射該制劑后可維持有效濃度數(shù)天，適用于治療由敏感菌引起的畜禽呼吸道、消化道感染。文檔編號A61K9/16GK102552160SQ20101060417公開日2012年7月11日申請日期2010年12月24日優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日發(fā)明者劉振利,彭大鵬,戴夢紅,方螢玉,潘源虎,王玉蓮,袁宗輝,陳冬梅,陶燕飛,黃玲利申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)