專利名稱：治療慢性肝病的藥物組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種治療慢性肝病的藥物組合物及其應用；具體涉及一種具有抗肝纖維化、抗肝損傷作用的藥物組合物及其應用。
背景技術：
肝硬化是多種慢性肝臟疾病的終末階段，以彌漫性肝纖維化伴異常結節(jié)形成為其形態(tài)學特征。肝硬化是我國常見疾病和主要死亡病因之一，我國是乙型肝炎高發(fā)地區(qū)，僅慢性乙型肝炎患者達3000萬，其中約30%發(fā)展為肝硬化。已有明確證據表明肝纖維化甚至肝硬化是可逆的，阻斷、抑制或逆轉肝纖維化是治療慢性肝病的一個重要目標，但目前尚無 FDA批準的抗肝纖維化化學或生物制劑進入臨床應用。國外肝纖維化的研究進展主要體現(xiàn)在發(fā)病機制的深入研究。美國肝纖維化研究權威Friedman教授曾指出“肝纖維化機理的不斷闡明使有效地抗肝纖維化治療成為可能， 然而，抗肝纖維化治療仍然是一個富有挑戰(zhàn)的艱巨任務，迄今臨床上尚無有效的抗肝纖維化藥物，其有效作用于肝臟而無明顯毒副作用的治療藥物研制尚需長期努力?！敝袊鴮＠鸆N1539483A于2004年10月27日公開了一種治療慢性肝病及抗肝纖維化的中藥，屬于中醫(yī)藥技術領域，它是由藏紅花3-9份、蛤蚧3-9份、丹參4-18份、鱉甲9-M 份、黃芪9-30份、紅參3-9份、當歸1-6份、川芎1-6份、砂仁1_6份、僵蟲1_6份、三七3_9 份、枸杞1-9份、木香1-6份組成，經篩選清潔、粉碎成細粉、過篩、混勻、每100克粉加蜜煉 100克，制成蜜丸、用鈷60滅菌；本發(fā)明經臨床證明，能夠有效地治療慢性肝炎和肝纖維化， 總有效率可達94%。中國專利CN1985902A于2007年06月27日公開了一種治療慢性肝病的中藥，根據“君臣佐使”配方原則配伍，君藥為生白術；臣藥包括西洋參、豬苓、茯苓、生黃芪；佐藥包括垂盆草、蛇舌草、茵陳；使藥包括炙雞內金、丹參、赤芍、白芍；各組分的重量百分比為生白術5% 18%、西洋參 10%、豬苓1% 15%、茯苓0% 15%、生黃芪5% 20%、 垂盆草10% 50%、蛇舌草5% 30%、茵陳 15%、炙雞內金 10%、丹參0% 15%、赤芍 10%、白芍 10%，各組分總和為100%。中國專利CN101361782A于2009年02月11日公開了一種治療慢性肝病的藥物， 采用特定配比的蟲草多糖、苦杏仁甙、絞股藍總皂甙中藥有效組分或成分組成有理想療效的抗肝纖維化、抗肝損傷作用的藥物組合物。近年來，中醫(yī)藥整體觀念(系統(tǒng)論方法)指導下的病證結合、辨證論治對解決這一難題逐漸彰顯出理論特色和臨床優(yōu)勢，不但能改善臨床癥狀及肝功能，顯著提高患者的生活質量，而且在抑制肝臟炎癥反應及纖維組織增生，促進肝纖維化的逆轉等方面顯示出優(yōu)勢。我國近二十多年來的中醫(yī)藥抗肝纖維化研究，已取得顯著進展。自2000年起，已先后有復方鱉甲軟肝片、扶正化瘀膠囊(片)等抗肝纖維化國家中藥新藥應用于臨床，扶正化瘀片已被美國FDA批準在美國開展抗丙型肝炎肝纖維化II期臨床試驗。中藥復方抗肝纖維化作用是通過多途徑、多層次作用實現(xiàn)的，呈現(xiàn)出綜合效應，與肝纖維化發(fā)生發(fā)展的復雜病理
3機制相適應，這也正是中醫(yī)藥整體觀念的優(yōu)勢所在。近二十多年來，國內外也開展了一些抗肝纖維化中藥有效組分或成分的研究，并發(fā)現(xiàn)了一些有抗肝纖維化效應的中藥有效組分或成分。然而，無論傳統(tǒng)中藥復方還是單一的有效成分，皆有其不足之處。傳統(tǒng)中藥復方由于成分復雜，質控困難，穩(wěn)定性較差，這也是中藥國際化的難題之一；而單一組分或成分往往難以取得良好效應或者有效劑量就會出現(xiàn)較明顯的副作用。因此如何對傳統(tǒng)復方“去粗取精”而又保持中醫(yī)復方配伍治療復雜疾病的優(yōu)勢，是一大難題，也是中醫(yī)藥抗肝纖維化藥物研究的重要發(fā)展方向之一。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種能提高抗肝纖維化、抗肝損傷作用，能有效治療慢性肝病的藥物組合物，并提出該藥物組合物的用途。為了解決上述技術問題，本發(fā)明運用數(shù)學模型“均勻設計”和正交設計分析技術，在現(xiàn)有技術基礎上，進行了有效組分/成分配伍抗肝纖維化的研究，采用黃芪總苷 (Astragalus Astragalosides)禾口甘草酸(Glycyrrhiza Acid)中藥有效組分或成分組成的抗肝纖維化、抗肝損傷作用的藥物組合物篩選。本發(fā)明所述的藥物組合物由黃芪總苷和甘草酸兩種組分或成分組成，黃芪總苷和甘草酸的重量比為3 6 1，其中黃芪總苷來源于黃芪；甘草酸來源于中藥甘草。從黃芪中提取黃芪總苷以及從甘草中提取甘草酸的方法和現(xiàn)有技術中的常規(guī)方法無異。本發(fā)明藥物組合物的制備方法并無特別之處，按重量比稱取黃芪總苷和甘草酸，按常規(guī)方法制成臨床常用制劑，所述制劑的劑型，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑等口服固體制劑。本發(fā)明藥物組合物經二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine，DMN)誘導的經典的肝損傷、肝纖維化動物模型試驗(模型發(fā)展過程中介入干預)，并運用“均勻設計”和“正交設計”篩選以及反復驗證。結果證實，本發(fā)明所述藥物能顯著降低模型大鼠肝組織膠原含量，減輕肝纖維化程度和肝損傷程度，上述作用優(yōu)于各組分單用的效果。所述2種組分或成分配伍組合的藥物可以提高抗肝纖維化的作用，能有效阻止肝纖維化的發(fā)展并促進肝纖維化的逆轉，可用于治療和預防各種慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化等病癥。


圖1是實施例1的各組大鼠肝組織天狼星紅膠原染色照片(X 100)。
具體實施例方式下面結合附圖和具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例應理解為僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權利要求所限定的范圍。本發(fā)明的藥物組合物有益效果通過下述實驗證實實施例1運用DMN誘導的大鼠肝纖維化模型和正交設計分析獲得降低肝臟膠原含量作用的組合物的最佳比例。
一、材料和方法1.動物 Wistar雄性大鼠160只(正常組40只，造模組120只)，清潔級，體重(150士 10) g，由中科院上海實驗動物中心提供。上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心清潔級動物房飼養(yǎng)、造模與觀察，自由飲水。2.主要試劑及設備二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine，DMN)和羥脯氨酸(hydroxyproline，Hyp) 標準品，東京化成工業(yè)株式會社產品；所用肝功能試劑盒均購自于南京建成生物試劑公司； Image-Pro Plus 6. 1 專業(yè)圖像分析軟件購自 Media Cybernetics 公司；Olympus 1X70 光學顯微鏡購自Olympus公司。3.藥物黃芪總苷(Astragalus Astragalosides,Α)來源于黃芪，西安鴻生生物技術有限公司產品，規(guī)格90%;甘草酸(Glycyrrhiza Acid, B)來源于甘草，南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司產品，規(guī)格98%。將黃芪總苷和甘草酸按照重量比3 1、4 1、5 1和6 1混合均勻，隨機選取按不同比例混合得到的藥物組合物A+B，用于隨后的實驗方案。4.模型制備參照Ala-Kokko 方法造模(Ala-Kokko L, Pihlajaniemi T, Myers JC et al.Gene expression of type I ,III and IV collagens in hepatic fibrosis induced bydimethylnitrosamine in the rat. Biochem J 1987 ;244 :75_9·) 。Mtiiife^K^f DMN# 釋為0. 5 %的溶液，造模組120只大鼠以2ml/g體重劑量，腹腔注射每日1次，每周前3天連續(xù)腹腔注射，共4周。正常對照組大鼠40只腹腔注射等量生理鹽水。5.分組與給藥造模3天末、造模2周末、造模3周末、造模4周末取10只正常大鼠、10只模型大鼠作為模型動態(tài)觀察，從造模2周末開始，造模型大鼠隨機分為正交設計1-6組及模型組， 每組各10只，于繼續(xù)造模的同時，正交設計組按65kg成人體重臨床用量等體重的8倍量進行藥物干預，分別按照設計方案給藥。上藥臨用前用IOmL蒸餾水稀釋，按10ml/kg大鼠體重的劑量以相應藥物灌胃，每日1次，共2周，并設有正常對照大鼠(10)和模型對照組(10)； 正常大鼠與模型對照組以同體積蒸餾水灌胃。6.實驗方案將黃芪總苷A、甘草酸B和藥物組合物A+B作為考察因子，每個因子分別取2個水平(1水平=用藥，2水平=不用)，獲得正交設計方案。另設模型組和正常動物組。7.統(tǒng)計學方法計量資料用χ 表示，采用SAS 9. 1. 2，DAS 2. 1. 1和SPSS16. 0統(tǒng)計軟件處理數(shù)
據，采用單因素方差分析進行多組間比較。二、結果顯示正常肝組織僅在匯管區(qū)和中央靜脈壁見少量膠原纖維。DMN造模4周時增生的膠原纖維分割肝小葉形成較粗大、致密的完全間隔，正常肝小葉結構消失，個別形成不完整假小葉，89%模型大鼠已形成III期的肝纖維化。用藥組大鼠膠原纖維增生狀況有不同程度減
5輕，纖維間隔較窄、疏松而不連續(xù)，見附圖1。羥脯氨酸含量測定結果顯示，與模型組相比，A+B組大鼠肝組織羥脯氨酸含量較4 周模型對照組顯著降低(P < 0. 01)，見表1。表1.各組大鼠肝臟膠原增生程度分期
組另Ij η
Hypbg/g)
膠原增生程度分期(例)
"~ο ι π ι Γ
權利要求
1.一種治療慢性肝病的藥物組合物，其特征是，由黃芪總苷和甘草酸按照重量比3 6 1組成。
2.權利要求1的藥物組合物在制備治療慢性肝炎藥物中的應用。
3.權利要求1的藥物組合物在制備防治肝纖維化藥物中的應用。
4.權利要求1的藥物組合物在制備防治肝硬化藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療慢性肝病的藥物組合物，由重量配比為3～6∶1的黃芪總苷和甘草酸組成，經采用經典動物模型試驗并驗證，本發(fā)明藥物組合物能顯著降低模型大鼠肝組織膠原含量，減輕肝纖維化程度和肝損傷程度，能提高抗肝纖維化作用，有效阻止肝纖維化的發(fā)展并促進肝纖維化的逆轉，上述作用優(yōu)于各組分單用的效果，可用于治療和預防各種慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化等病癥。本發(fā)明藥物組合物可制成片劑、顆粒劑、膠囊劑等口服固體制劑。
文檔編號A61K36/481GK102370686SQ20101026320
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月26日 優(yōu)先權日2010年8月26日
發(fā)明者仝欣, 劉佳, 劉平, 劉成海, 孫明瑜, 徐列明, 李風華, 胡義揚, 陸雁, 陳高峰 申請人:上海中醫(yī)藥大學, 上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院