專利名稱：二咖啡酰奎尼酸衍生物在制備用于治療支原體感染疾病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及二咖啡?？崴嵫苌镌谥苽溆糜谥委熤гw感染疾病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
支原體是一種不同于細(xì)菌和真菌的另一類微小病原體，與人類泌尿生殖道感染有 關(guān)的致病支原體有解脲支原體(UU)、人型支原體(MH)和生殖道支原體(MG)，相關(guān)疾病如支 原體尿道炎、宮頸炎、陰道炎、盆腔炎、附件炎、前列腺炎等。治療常用藥物有強(qiáng)力霉素、美滿 霉素、阿奇霉素、克拉霉素、氧氟沙星等抗生素?？股刂委熌壳按嬖谳^多問(wèn)題，一是四環(huán)素 類和大環(huán)類酯類抗生素胃腸道反應(yīng)大，對(duì)肝功能有副作用影響，依從性差。二是由于抗生素 的濫用及不規(guī)范使用，造成支原體的耐藥菌株日益增多，耐藥周期不斷縮短，嚴(yán)重危害人類 的生命與健康。因此，尋找敏感性高，副作用小，不易產(chǎn)生耐藥性的新型抗支原體藥物，對(duì)于 提高療效，減輕患者痛苦，保護(hù)機(jī)體微生態(tài)平衡，有非常重要意義。中藥是祖國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)，許多中藥制劑與抗生素藥物比較，臨床療效好，毒副作用 小，在人類面臨支原體耐藥性和抗生素不良反應(yīng)不斷增加的嚴(yán)峻形勢(shì)下，從具有臨床基礎(chǔ) 及獨(dú)特理論體系的抗感染中藥中尋找及發(fā)現(xiàn)抗支原體藥物具有重要的科學(xué)意義。二咖啡?？崴嵩诰湛啤⒍箍?、傘形科、忍冬科及旋花科植物中廣泛存在，常見(jiàn)的 有1，5_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸、3，5- 二 -0-咖啡?？崴?、4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸及3， 4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸等。本發(fā)明人在中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究過(guò)程中，出人意料地發(fā)現(xiàn)二 咖啡?？崴嵫苌飳?duì)支原體有顯著的抑制作用。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)得以完成。本發(fā)明的第一個(gè)目的涉及式1 (若存在對(duì)映體，包括兩對(duì)映體)的二咖啡酰奎尼酸
衍生物及類似物在制備用于治療支原體感染疾病藥物中的用途，
<formula>formula see original document page 4</formula>式1其中q1 為一價(jià)鍵，或 ch2、ch0h, ch2ch2、ch2choh, chohch2、chc00h、ch2ch2choh, CHoHCH2CH2、CH2CHoHCH2、ch2chohchoh 或 chohchohch2 ；q2 和 q3 可分別為 h 或合在一起表示 ch2ch2、ch2choh, chohch2、ch2ch2choh, chohch2ch2、ch2chohch2、ch2ch0hch0h、ch0hch0hch2、ch2coh (cooh) ch2、ch2ch2coh (cooh) ch2、 ch2coh (cooh) ch2ch2、ch0hch2c0h (cooh) ch2 或 ch2coh (cooh) ch2choh,從而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，
X1 為 0、NH、CH2 或 CHCOOH ；X2 為 0、NH、CH2 或 CHCOOH ；Y” Y2、Y3 和 Y4 各為一價(jià)鍵、0 或 NH;當(dāng)Y” \、Y3 和 Y4 各為一價(jià)鍵時(shí)，R” R2> R3> R4 為 H、CH2COOH, CH2CH2COOH 或 CH2CH2CH2COOH ；當(dāng)Y” \、Y3 和 Y4 各為 0 或 NH 時(shí)，R” R2, R3> R4 為 H、CH3> CH3CO, CH3CH2CO 或 CH3CH2CH2CO ；丫5、￥6、￥7、￥8、￥9、丫1(1為!1、(1、81~或1 ；Z1和Z2為H、C00H、C00M，其中M表示Cl_6烷基、芐基、堿金屬或堿土金屬。本發(fā)明的再一目的涉及含式1化合物的藥物組合物，該藥物組合物對(duì)支原體有顯 著的抑制作用。根據(jù)本發(fā)明，該藥物組合物可加有各種藥用賦形劑、添加劑及載體。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明式1化合物或含式1化合物的藥物組合物可用于治療支原體 感染，如支原體感染引起的生殖道疾病及泌尿道疾病。其中生殖道疾病是指解脲支原體、人 型支原體、生殖道支原體或混合感染引起的宮頸炎、陰道炎、盆腔炎及附件炎。支原體引起 的泌尿道疾病是指解脲支原體、人型支原體、生殖道支原體或混合感染引起尿道炎、前列腺 炎。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的藥物組合物可與藥學(xué)上可接受的載體組成藥物組合物，制 成各種制劑，包括膠囊、片劑、顆粒劑、滴丸、口服液、栓劑、泡騰片、凝膠劑等腸道或非腸道 給藥的制劑。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明式1化合物，主要來(lái)自菊科、忍冬科等多種植物，如杏香兔耳
M Ainsliaea fr^gr已ns、H5# Lonicer已 j&ponic&、i€§# Inul已 japonic已·。
全合成或半合成方法制備。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明優(yōu)選的抗支原體化合物為二咖啡?？崴帷８鶕?jù)本發(fā)明，本發(fā)明最優(yōu)選的抗支原體化合物為3，5_ 二-0-咖啡?？崴?、4， 5- 二 -0-咖啡?？崴?、3，4- 二 -0-咖啡?？崴?。根據(jù)本發(fā)明，二咖啡?？崴峥蓮纳鲜鲋参镏型ㄟ^(guò)以下提取、分離路線制備取植 物(杏香兔耳風(fēng)、金銀花等)，加70%乙醇回流提取，減壓回收至無(wú)醇味，濃縮液采用乙酸乙 酯萃取，繼續(xù)通過(guò)柱層析(硅膠、C18)分離，得到單體化合物?；蛉饪s液上樣于大孔吸附 樹(shù)脂柱，乙醇_水梯度洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收至干，得到二咖啡酰奎尼酸有 效部位提取物。根據(jù)本發(fā)明，二咖啡酰奎尼酸可通過(guò)3，4_ 二羥基被保護(hù)的咖啡酰氯與羥基被選 擇性保護(hù)的奎尼酸通過(guò)酯化反應(yīng)制備。下面將通過(guò)二咖啡?？崴岬捏w外及體內(nèi)抗支原體作用來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)一二咖啡酰基奎尼酸的抗支原體體外活性研究1 材料1. 1測(cè)試藥物:3，5_ 二 -0-咖啡酰奎尼酸(1)，4，5_ 二 _0_咖啡?？崴?2)3， 4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(3)，化合物1 3的分子式均為=C25H24O12，純度> 95%，以上化合 物均為中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室提供；陽(yáng)性藥阿奇霉素(Bio Basic Inc, Lot GS1219B508C)，環(huán)丙沙星(Bio Basic Inc，Lot :0916S06)。
1. 2支原體株解脲支原體標(biāo)準(zhǔn)株(UU，Tl)由東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)實(shí) 驗(yàn)室提供；人型支原體標(biāo)準(zhǔn)株(MH，ATCC25114)購(gòu)置于美國(guó)國(guó)家菌種保存中心；解脲支原體 (UU)臨床株(12株)及人型支原體(UH)臨床株(12株)均為東南大學(xué)中大醫(yī)院婦科門診 泌尿生殖道感染患者標(biāo)本中分離獲得。1.3培養(yǎng)基購(gòu)于南京黎明生物制品有限公司，進(jìn)口分裝。2實(shí)驗(yàn)方法采用液體培養(yǎng)基稀釋法。在96孔聚乙烯板上以UU或UH培養(yǎng)基倍比稀釋待檢藥物和對(duì)照藥物，各孔藥液量 為180 μ 1。每孔接種濃度約為IO4CCU的UU或UH標(biāo)準(zhǔn)株或臨床分離株培養(yǎng)物20 μ 1，加蓋 密封。同時(shí)設(shè)立陰、陽(yáng)性對(duì)照。接種后置36. 5°C培養(yǎng)箱孵育，24 48hr后觀察結(jié)果。根 據(jù)培養(yǎng)基顏色變化判斷結(jié)果培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色表明有支原體生長(zhǎng)。24h內(nèi)觀察UU生 長(zhǎng)變化，如加藥孔出現(xiàn)與對(duì)照孔相同的顏色變化，表示所加藥物的對(duì)應(yīng)濃度對(duì)UU無(wú)抑制作 用，24h仍不出現(xiàn)顏色變化為有效抑制UU生長(zhǎng)的藥物濃度；24 48h內(nèi)觀察MH生長(zhǎng)變化， 如加 藥孔出現(xiàn)與對(duì)照孔相同的顏色變化，表示所加藥物的對(duì)應(yīng)濃度對(duì)MH無(wú)抑制作用，48h 仍不出現(xiàn)顏色變化為有效抑制MH生長(zhǎng)的藥物濃度。加藥組以不出現(xiàn)顏色變化的最小濃度 為最小有效抑制支原體生長(zhǎng)的藥物濃度(MIC)。實(shí)驗(yàn)采用UU標(biāo)準(zhǔn)株、UU臨床株、MH標(biāo)準(zhǔn)株 及MH臨床株作參照。3 結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3，5- 二 -0-咖啡?？崴?1) ,4,5- 二 _0_咖啡?？崴幄?、及 3,4- 二 -0-咖啡?？崴?3)對(duì)UU的MIC50分別0. 625,0. 625，及1. 25mg/ml,陽(yáng)性藥阿奇 霉素對(duì)UU的MIC5tl值為1. 25mg/ml?；衔? 3對(duì)UH的MIC5tl值分別為1. 25，1. 25，及 0. 625mg/ml,陽(yáng)性藥阿奇霉素對(duì)UU的MIC5tl值為1. 25mg/ml。受試藥物的體外抗UU與MH作 用測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表1 二咖啡?？崴嵫苌矬w外對(duì)UU及UH的抑制活性
支原體 藥物MIC 范圍(mg/ml)MIC\ (mg/ml)—
j^YJ^ -^ (I625"-3K250625
20.312-1.250.625
30.625 2.51.25阿奇霉素1.25 2.51.25 UH (12 株) 11.25 2.51.25
20.625 2.51.25
30.312-1.250.625 ___ 阿奇霉素_ 0.312-0.625 0.312體外抗支原體藥效篩選顯示，二咖啡酰奎尼酸衍生物1 3對(duì)解脲支原體(UU)及 人型支原體(UH)均有較好的抑制作用。以上化合物來(lái)源于中藥，與臨床運(yùn)用的大環(huán)類酯 類、四環(huán)素類、喹諾酮類抗生素類化學(xué)結(jié)構(gòu)差異較大，適用于治療耐藥支原體引起的生殖泌 尿道感染疾病。實(shí)驗(yàn)二二咖啡?；崴岬目怪гw體內(nèi)活性研究1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料雌性BALB/C小鼠60只，8 10周，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所；解脲支原體標(biāo)準(zhǔn) 株(UU，T1)由東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。UU液體培養(yǎng)基，購(gòu)自南京黎明 生物制品有限公司。阿奇霉素，0.25g/片，江蘇揚(yáng)子江制藥有限公司。苯甲酸雌二醇注射液，lmg/ml，廣州白云山明興制藥有限公司。3，5- 二 -O-咖啡?？崴?，純度>95%，中國(guó) 藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室提供。2.方法2. IUU培養(yǎng)及其CCU (Colour changing unit,顏色變化單位測(cè)定)按文獻(xiàn) (Robertson JA，1982 年)方法。2. 2菌液制備將UU菌株連續(xù)傳代3次，取第3代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液( 106(XU/ml)，用 培養(yǎng)基稀釋至2. OX 105(XU/ml，作為工作菌液。2. 3小鼠解脲支原體感染動(dòng)物模型的制備BALB/C小鼠，6 8周，皮下注射苯甲酸雌二醇0. 125mg,濃度lmg/ml，連續(xù)4周， 每周1次；用藥的第2周，陰道接種UU菌株50 μ 1，濃度2. 0X105(XU/ml。接種1周后，取 陰道分泌物，UU培養(yǎng)，結(jié)果顯示48個(gè)培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色，顯示造模成功率80% ；培養(yǎng)陰性 者，繼續(xù)接種菌株，量同前，1周后UU培養(yǎng)，所有培養(yǎng)基均變?yōu)榉奂t色，顯示造模成功。造模 結(jié)果第3周陽(yáng)性個(gè)數(shù)49只，陽(yáng)性率80% ；第4周陽(yáng)性個(gè)數(shù)60只，陽(yáng)性率100%。2. 4藥物干預(yù)與標(biāo)本采集將造模成功小鼠隨機(jī)分為模型組、受試藥物組、陽(yáng)性阿奇霉素組，模型組給予生理 鹽水，受試藥物組灌胃給藥3，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸(100mg/kg)，陽(yáng)性組灌胃給藥阿奇霉 素組(100mg/kg)，給藥體積均為0.4ml，每日1次，連續(xù)干預(yù)2周。取陰道分泌物，UU培養(yǎng)。3 結(jié)果3，5- 二 -0-咖啡?？崴崾茉囁幬锝M18例轉(zhuǎn)陰，2例陽(yáng)性，轉(zhuǎn)陰率90% ；阿奇霉素 組12例轉(zhuǎn)陰，7例陽(yáng)性，1例死亡，轉(zhuǎn)陰率60%，死亡率5% ；模型組2例陰性，16例陽(yáng)性，3 例死亡，轉(zhuǎn)陰率10%，死亡率15%。3，5-二-0-咖啡?？崴?、阿奇霉素組與模型組比較， P < 0. 01，有顯著差異。3，5- 二 -0-咖啡?？崴崤c阿奇霉素組比較，P < 0. 05，有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義。體內(nèi)藥效結(jié)果顯示，二咖啡?？崴釋?duì)支原體生殖道感染具有較好的治療作用。三、急性毒性試驗(yàn)小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，口服給藥3，5- 二 -0-咖啡?？崴岬腖D5tl值> 3g/
kg ο
權(quán)利要求
下式的二咖啡酰奎尼酸衍生物在制備用于治療支原體感染疾病藥物中的用途，式1其中Q1為一價(jià)鍵，或CH2、CHOH、CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CHCOOH、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH或CHOHCHOHCH2；Q2和Q3可分別為H或合在一起表示CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2、CH2COH(COOH)CH2、CH2CH2COH(COOH)CH2、CH2COH(COOH)CH2CH2、CHOHCH2COH(COOH)CH2或CH2COH(COOH)CH2CHOH，從而形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，X1為O、NH、CH2或CHCOOH；X2為O、NH、CH2或CHCOOH；Y1、Y2、Y3和Y4各為一價(jià)鍵、O或NH；當(dāng)Y1、Y2、Y3和Y4各為一價(jià)鍵時(shí)，R1、R2、R3、R4為H、CH2COOH、CH2CH2COOH或CH2CH2CH2COOH；當(dāng)Y1、Y2、Y3和Y4各為O或NH時(shí)，R1、R2、R3、R4為H、CH3、CH3CO、CH3CH2CO或CH3CH2CH2CO；Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Y10為H、Cl、Br或I；Z1和Z2為H、COOH、COOM，其中M表示C1-6烷基、芐基、堿金屬或堿土金屬。FSA00000129515100011.tif
2.權(quán)利要求1的用途，當(dāng)式1存在兩對(duì)映體時(shí)，包括兩對(duì)映體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中二咖啡?？崴嵫苌餅?，5_二-0-咖啡?？?酸、4，5-二-0-咖啡酰奎尼酸、3，4-二-0-咖啡酰奎尼酸、1，5-二-0-咖啡?？崴?、1， 3- 二 -0-咖啡?？崴?、1，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸，它們的乙酰化衍生物及其相應(yīng)的鹽。式2 <formula>formula see original document page 2</formula>:3，5- 二 -0-咖啡?？崴崾? <formula>formula see original document page 2</formula>:4，5- 二 -0-咖啡?？崴崾? <formula>formula see original document page 2</formula>:3，4- 二 -0-咖啡?？崴崾? <formula>formula see original document page 2</formula>:1，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸<formula>formula see original document page 3</formula> 式6 1，3- 二 -0-咖啡酰奎尼酸式7 1，4- 二 -0-咖啡?？崴?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中二咖啡?？崴嵫苌餅?，5-二 -0-咖啡?？崴?、 4，5- 二 -0-咖啡酰奎尼酸、3，4- 二 -0-咖啡酰奎尼酸。
5.權(quán)利要求1的用途，其中支原體感染疾病是支原體引起的泌尿生殖道疾病，包括支 原體感染引起的宮頸炎、陰道炎、盆腔炎、附件炎、尿道炎、前列腺炎。
全文摘要
本發(fā)明涉及二咖啡?？崴嵫苌镌谥苽溆糜谥委熤гw感染疾病藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101829077SQ20101018259
公開(kāi)日2010年9月15日 申請(qǐng)日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者嚴(yán)明, 葉文才, 張陸勇, 江振洲, 汪豪, 趙守訓(xùn) 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)