專利名稱：：因子vii多肽的穩(wěn)定化固體組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及包含因子VII或因子VII相關(guān)多肽的化學和物理上穩(wěn)定的組合物，使得這些組合物能夠在室溫進行貯藏、操作、和使用。
背景技術(shù)：
：因子VII是參與血液凝結(jié)過程的多肽?，F(xiàn)在，可以通過重組技術(shù)來生產(chǎn)因子VIIa(rFVIIa)，而且它廣泛用作前止血劑。美國專利號4，784，950已經(jīng)描述了(人野生型)因子VII?，F(xiàn)在，rFVIIa為發(fā)生出血的血友病個體提供了快速且高效的前止血響應(yīng)。有利的是，rFVIIa可用于治療因抗體形成而不能用其它凝血因子產(chǎn)品進行治療的血友病個體。同樣，患有因子VII缺陷的個體或者具有正常凝血系統(tǒng)但仍發(fā)生過度出血的個體也可用rFVIIa成功治療。在開發(fā)包含多肽諸如例如因子VIIa的藥物時需要考慮幾個參數(shù)。例如，藥物必須是有效的、安全的、且具有良好患者順應(yīng)性。此外，可以使用制藥學可接受賦形劑配制成腸胃外施用的藥物，這必須獲得各種全世界醫(yī)學管理機構(gòu)的批準。為了腸胃外施用的目的，非常希望配方是大致等滲的，而且配方的PH能使得在注射/灌輸后處于生理學合適范圍內(nèi)，否則它可能導(dǎo)致患者疼痛和不適。關(guān)于蛋白質(zhì)配方的一般綜述參閱例如Cleland等人，((Thedevelopmentofstableproteinformulations:Acloserlookatproteinaggregation,deamidationandoxidation》即穩(wěn)定蛋白質(zhì)配方的開發(fā)對蛋白質(zhì)聚集、脫酉先胺、禾口氧化的密切關(guān)注，CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems,1993,10(4)307-377；禾口ffang等Α((ParenteralformulationsofproteinsandpeptidesStabilityandstabilizers》即蛋白質(zhì)和肽的腸胃外配方穩(wěn)定性和穩(wěn)定劑，JournalofParenteralScienceandTechnology，1988(±曾干Ij)，42(2S)。然而，對于包含多肽的藥物而言，安全性可能與多肽的物理和化學穩(wěn)定性直接相關(guān)。作為多肽，因子VII或因子VII相關(guān)多肽易受物理降解的影響，包括變性和聚集，諸如形成可溶性或不溶性的二聚體、寡聚物、和多聚物形式的聚集體；或者易受化學降解的影響，包括例如水解、脫酰胺、和氧化。因此，所述物理和化學不穩(wěn)定性可能導(dǎo)致因子VII多肽活性的損失、有毒且免疫原性降解產(chǎn)物的形成、在注射降解的因子VII多肽后誘發(fā)血栓癥的嚴重風險、堵塞用于注射的針頭和非均質(zhì)的風險等。因此，至關(guān)重要的是提供包含在物理和化學降解方面被穩(wěn)定化的因子VII多肽的組合物?，F(xiàn)在以凍干產(chǎn)品形式提供的重組生產(chǎn)的FVII多肽意欲貯藏于大約2°C-大約8°C。對冷卻條件的要求造成了對制造商或供應(yīng)商以及終端用戶(患者)的負擔和不便。目前，重組生產(chǎn)的FVII產(chǎn)品有NovoSeven(NovoNordiskA/S，丹麥)，它包含1.2mg重組人因子Vila,5.84mgNaCl,2.94mgCaCl2·2Η20、2·64mg甘氨酰甘氨酸、0.14mg聚山梨酸酯80、和60.Omg甘露醇。加入2.Oml注射用水(WFI)復(fù)水后，pH是5.5，而且由此配制的含F(xiàn)VII溶液足以在室溫穩(wěn)定24小時。本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，將凍干的NovoSeven產(chǎn)品于25°C貯藏6個月后，占初始含量大約6-7%w/w的rFVIIa以聚集體的形式存在。因此，包含因子VII多肽的組合物需要穩(wěn)定化，從而能夠在環(huán)境溫度進行貯藏和操作。然而，多肽的不穩(wěn)定性涉及幾個參數(shù)，而且不可能預(yù)測將因子VIIa或因子VII相關(guān)多肽穩(wěn)定化的正確方式。將蛋白質(zhì)穩(wěn)定化的一種方法涉及將蛋白質(zhì)脫水，例如諸如以凍干塊的形式提供蛋白質(zhì)，即在凍干處理后獲得的最終物質(zhì)。然而，凍干處理自身對蛋白質(zhì)有害；在凍干過程中，首先冷卻蛋白質(zhì)溶液直至充分凍結(jié)，蛋白質(zhì)溶液中大量的水將在此階段結(jié)冰。因此，蛋白質(zhì)易受由冷凍誘導(dǎo)的壓力，導(dǎo)致變形和沉淀。在下一步中，即所謂的第一干燥階段，冰升華；而在第二干燥階段，在較高溫度下除去吸附或結(jié)合水。在此脫水過程中，蛋白質(zhì)可能松開主要由氫鍵提供的正確構(gòu)象。因此，為了在凍干過程中保持蛋白質(zhì)的構(gòu)象、活性、和穩(wěn)定性，需要為多肽溶液補充足夠量的具有防凍劑和/或防溶劑特性的適當賦形劑，從而分別保護蛋白質(zhì)免于由冷凍誘導(dǎo)的壓力和/或脫水過程中的壓力。另外，在提供凍干產(chǎn)品時，關(guān)鍵的特征涉及凍干塊的特性。它需要具有在形式和結(jié)構(gòu)方面的優(yōu)良特性，即它應(yīng)當不會崩塌，因為這些崩塌塊難以或甚至不可能在使用前溶解(復(fù)水)。相反，凍干塊的物理結(jié)構(gòu)最好不要太松太軟。因此，在凍干前向蛋白質(zhì)溶液中加入一種或多種所謂的膨脹劑(bulkingagent)0下面列出了多肽穩(wěn)定化方面有用的其它發(fā)表物US20010031721A1(AmericanHomeProducts)關(guān)注高度濃縮、凍干且液態(tài)的因子IX配方。WO97/26909(GeneticsInstitute)關(guān)注適于貯藏和施用的因子IX凍干制劑。這些制劑可以包含蔗糖或甘露醇作為防凍劑。WO95/28954(GeneticsInstitute)關(guān)注適于貯藏和施用的因子IX制劑。這些制劑可以包含蔗糖作為防凍劑。本發(fā)明的一個目的是提供穩(wěn)定的因子VII多肽組合物，優(yōu)選在環(huán)境溫度貯藏較長時間例如至少6個月后基本上不存在降解產(chǎn)物且因子VII多肽活性沒有降低。本發(fā)明的另一目的是適于腸胃外施用從而不會給患者引起任何不便的穩(wěn)定組合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，可以在足夠穩(wěn)定的組合物中提供因子VII多肽，從而能夠在室溫貯藏大約至少8個月。研究人員發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定化作用涉及一些制藥學可接受賦形劑的適當組合。因此，在第一個方面中，本發(fā)明涉及含濕量不超過大約3%且包含因子VII多肽和至少一種選自由組成之組的穩(wěn)定劑的穩(wěn)定化組合物i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸。在另一個方面中，本發(fā)明涉及用于制備穩(wěn)定的因子VII多肽的方法，包括下列步驟1)在包含至少一種選自由i-ν組成之組的穩(wěn)定劑的溶液中提供所述因子VII多肽i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲石智氨酸2)加工所述溶液以獲得含濕量不超過大約3%w/w的固體組合物。如上所述，需要有穩(wěn)定化的因子VII多肽，從而在將因子VII多肽以治療性目的施用時將不利事件的風險降至最低并改進安全性和功效。因此，在還有一個方面中，本發(fā)明涉及因子VII多肽用于配制治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的藥物中的用途，所述藥物包含含有因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的組合物i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸，所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。最后，本發(fā)明涉及施用所述因子VII多肽以治療因子VII反應(yīng)性綜合癥，包括對有此需要的受試者施用有效量的組合物，所述組合物包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑1)抗氧化劑與甘露醇的組合；vi.甲硫氨酸與多元醇的組合；vii.糖類與甘露醇的組合；viii.蔗糖與多元醇的組合；和ix.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含因子VII多肽且貯藏穩(wěn)定的組合物。這些組合物可以在室溫貯藏較長時間而不會引起因子VII多肽的顯著降解。室溫指室內(nèi)環(huán)境溫度；它通常的范圍是大約5°c-大約40°C，諸如大約10°C-30°c、或15°C-25°C。通過特定制藥學可接受賦形劑的適當預(yù)定組合，本發(fā)明的研究人員提供了包含因子VII多肽的穩(wěn)定化組合物，從而能夠?qū)⒔M合物于室溫貯藏較長時間，諸如至少大約8個月。有利的是，穩(wěn)定化組合物不必貯藏于冷卻條件，諸如2V_8°C。本發(fā)明還關(guān)注于大約30°C貯藏至少大約8個月時仍穩(wěn)定的貯藏穩(wěn)定的組合物。這些組合物優(yōu)選貯藏于黑暗中。因此，本發(fā)明使之有可能將這些組合物貯藏于室溫而不會增加對施用這些組合物的患者的不利事件。有利的是，改進的貯藏穩(wěn)定性還將使花費降低，因為貯藏不需要特殊的冷卻條件，還使用戶處理組合物更加方便。術(shù)語“因子VII多肽”意指在預(yù)防或治療出血方面有效的任何因子VII多肽。這包括由血液或血漿衍生的因子VII多肽，或者通過重組技術(shù)生產(chǎn)的因子VII多肽。在用于本文時，“因子VII多肽”涵蓋但不限于因子VII以及因子VII相關(guān)多肽。術(shù)語“因子VII”意欲涵蓋但不限于具有野生型人因子VII氨基酸序列第1-406位(公開于美國專利號4，784，950)的多肽，以及由其它物種衍生的野生型因子VII，諸如牛、豬、犬、鼠、和鮭魚，所述因子VII是由血液或血漿衍生的，或者是通過重組技術(shù)生產(chǎn)的。它還涵蓋個體之間可能存在或發(fā)生的因子VII天然等位基因變異。同樣，糖基化或其它翻譯后修飾的程度和位置可能隨所選宿主細胞和宿主細胞環(huán)境的性質(zhì)而變化。術(shù)語“因子VII”還意欲涵蓋處于未切割(酶原)形式的因子VII多肽，以及經(jīng)過蛋白水解加工而生成的相應(yīng)生物活性形式，這可以稱為因子Vila。通常，因子VII在第152位與第153位之間得到切割而生成因子Vila。如上所述，術(shù)語“因子VII多肽”還意指“因子VII相關(guān)多肽”。術(shù)語“因子VII相關(guān)多肽”意欲涵蓋處于未切割(酶原)形式的這些多肽，以及經(jīng)過蛋白水解加工而生成的相應(yīng)生物活性形式。在用于本文時，“因子VII相關(guān)多肽”涵蓋但不限于與野生型人因子VII相比展示基本上相同或改進的生物學活性的多肽。這些多肽包括但不限于經(jīng)過化學修飾的因子VII或因子Vila，以及導(dǎo)入了略微改變或改進多肽生物學活性的特定氨基酸序列改變的因子VII變體。此外，因子VII相關(guān)多肽(包括與野生型因子VII相比展示基本上相同或更好的生物學活性的因子VII變體)包括但不限于因一個或多個氨基酸的插入、缺失、或取代而具有與野生型因子VII序列不同的氨基酸序列的多肽。因子VII相關(guān)多肽(包括與野生型因子VIIa相比具有基本上相同或改進的生物學活性的變體)涵蓋那些在本說明書所述凝結(jié)測定法、蛋白水解測定法、或TF結(jié)合測定法中的一種或多種方法中進行測試時，與在相同細胞類型中生成的野生型因子VIIa相比展示至少大約25%、優(yōu)選至少大約50%、更優(yōu)選至少大約75%、更優(yōu)選至少大約100%、更優(yōu)選至少大約110%、更優(yōu)選至少大約120%、且最優(yōu)選至少大約130%的比活的多肽。在有些實施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，特別是變體，其中在“體外水解測定法”(見下文實施例9)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型Vila)的活性之間的比率是至少大約1.25；在其它實施方案中，該比率是至少大約2.0；在還有一些實施方案中，該比率是至少大約4.0。在本發(fā)明的有些實施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，特別是變體，其中在“體外蛋白水解測定法”(見下文實施例9)中進行測試時，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型Vila)的活性之間的比率是至少大約1.25；在其它實施方案中，該比率是至少大約2.0；在還有一些實施方案中，該比率是至少大約4.0;在還有一些實施方案中，該比率是至少大約8.0。與野生型因子VII相比具有基本上相同或改進的生物學活性的因子VII變10體的非限制性范例包括S52A-FVII、S60A-FVII(Lino等人，Arch.Biochem.Biophys.，352:182-192，1998)；L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374P-FVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII,L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII,V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII,K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII、和S336G-FVII；美國專利號5，580，560中公開的展示蛋白水解穩(wěn)定性增加的FVIIa變體；在第290位與第291位殘基之間或第315位與第316位殘基之間受到蛋白水解切割的因子VIIa(M0llerup等人，Biotechnol.Bioeng.,48:501_505，1995)；氧化形式的因子Vila(Kornfelt等人，Arch.Biochem.Biophys.，363:43-54，1999);PCT/DK02/00189中公開的FVII變體；WO02/38162(Scripps研究院)中公開的展示蛋白水解穩(wěn)定性增加的FVII變體；WO99/20767(明尼蘇達大學)中公開的具有經(jīng)修飾的Gla結(jié)構(gòu)域且展示膜結(jié)合增強的FVII變體；WO01/58935(MaxygenApS)中公開的FVII變體；WO01/83725、WO02/22776、WO02/077218、PCT/DK02/00635、丹麥專利申請PA200201423、丹麥專利申請PA200101627；WO02/38162(Scripps研究院)中公開的與野生型FVIIa相比生物學活性增加的FVII變體；以及JP2001061479(Chemo-Sero-Therapeutic研究院)中公開的具有增強活性的FVIIa變體。因子VII或因子VII相關(guān)多肽的范例包括但不限于野生型因子VII、L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII,L305I-FVII,L305T-FVII,F374P-FVII,V158T/M298Q-FVII,V158D/E296V/M298Q-FVII,K337A-FVII,M298Q-FVII,V158D/M298Q-FVII,L305V/K337A-FVII,Vl58D/E296V/M298Q/L305V-FVII,V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII,V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII,K157A-FVII,E296V-FVII,E296V/M298Q-FVII,V158D/E296V-FVII,V158D/M298K-FVII,andS336G-FVII,L305V/K337A-FVII,L305V/V158D-FVII,L305V/E296V-FVII,L305V/M298Q-FVII,L305V/V158T-FVII,L305V/K337A/V158T-FVII,L305V/K337A/M298Q-FVII,L305V/K337A/E296V-FVII,L305V/K337A/V158D-FVII,L305V/V158D/M298Q-FVII,L305V/V158D/E296V-FVII,L305V/V158T/M298Q-FVII,L305V/V158T/E296V-FVII,L305V/E296V/M298Q-FVII,L305V/V158D/E296V/M298Q-FVIIL305V/V158T/E296V/M298Q-FVII,L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII,L305V/V158T/E296V/K337A-FVII,L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII,L305V/V158D/E296V/K337A-FVII,L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314Ε/Κ316H-FVII，S314E/K316Q-FVII,S314E/L305V-FVII,S314E/K337A-FVII，S314E/V158D-FVII,S314E/E296V-FVII,S314E/M298Q-FVII,S314E/V158T-FVII,Κ316H/L305V-FVII,Κ316Η/K337A-FVII,Κ316H/V158D-FVII,Κ316H/E296V-FVII,Κ316H/M298Q-FVII,Κ316Η/V158T-FVII,K316Q/L305V-FVII,Κ316Q/K3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4E-FVII,F374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII,S52A-FactorVII,S60A-FactorVII；和P11Q/K33E-FVII，T106N-FVII,K143N/N145T-FVII，V253N-FVII,R290N/A292T-FVII,G29IN-FVII,R315N/V317T-FVII,K143N/N145T/R315N/V317T-FVII；從233Thr至240Asn的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，從304Arg至329Cys的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，以及從153Ile至223Arg的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII。為了本發(fā)明的目的，可以使用缺乏因子VII的血漿和促凝血酶原激酶通過測量制劑促進血液凝結(jié)的能力而將因子VII多肽的生物學活性(“因子VII生物學活性”)定量，例如美國專利號5，997，864中所述。在這種測定法中，生物學活性表述成凝結(jié)時間相對于對照樣品的縮短，并且通過與含lU/ml因子VII活性的合并人血清標準品進行比較而轉(zhuǎn)變成“因子VII單位”。或者，可以通過下列方法而將因子VIIa生物學活性定量(i)在包含TF(包埋在質(zhì)膜中)和因子X的系統(tǒng)中測量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)多肽生成激活的因子X(因子Xa)的能力(Persson等人，J.Biol.Chem.，27219919-19924，1997)；(ii)在水性系統(tǒng)中測量因子X水解(“體外蛋白水解測定法”，見下文實施例12)；(iii)使用基于表面激元共振(surfaceρlasmonresonance)的儀器測量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)多肽與TF的物理結(jié)合(Persson，F(xiàn)EBSLetts.，413:359_363，1997)；(iv)測量因子VIIa和/或因子VIIa相關(guān)多肽對合成底物的水解(“體外水解測定法”，見下文實施例12)；和(ν)在不依賴TF的體外系統(tǒng)中測量凝血酶的生成。術(shù)語“因子VII生物學活性”或“因子VII活性”意欲包括生成凝血酶的能力；該術(shù)語還包括在缺乏組織因子時在激活的血小板的表面上生成凝血酶的能力。本說明書的實施例12詳細描述了可用于測定FVII生物學活性的測定法。此外，貫穿本說明書，下列術(shù)語具有以下含義術(shù)語“穩(wěn)定化”意欲涵蓋使組合物的貯藏或生產(chǎn)過程中(不溶性的和/或可溶性的)聚集體形成和/或化學降解降至最低，以及維持PH和蛋白質(zhì)的正確構(gòu)象，從而實現(xiàn)生物學活性的實質(zhì)性保持并維持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。此外，穩(wěn)定化還意指在凍干條件下生產(chǎn)組合物時對蛋白質(zhì)提供防溶保護(lyoprotection)和防凍保護。術(shù)語“結(jié)構(gòu)性穩(wěn)定化”或“結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性”意欲涵蓋形成具有優(yōu)良特性和外觀的凍干栓或塊的能力，例如使得它不崩塌且使用前易于溶解。術(shù)語“貯藏穩(wěn)定的”意欲定義在5°C-40°C貯藏后穩(wěn)定且在合適時間(常常是幾個月)內(nèi)保持預(yù)定產(chǎn)品規(guī)格的產(chǎn)品。術(shù)語因子VII多肽的“物理穩(wěn)定性”涉及不溶性和/或可溶性的二聚體、寡聚物、和多聚物形式的因子VII多肽聚集體的形成，以及該分子的任何結(jié)構(gòu)變形和變性。術(shù)語“化學穩(wěn)定性，，意指在加速條件下以溶解或固體狀態(tài)貯藏后因子VII多肽中任何化學變化的形成，例如水解、脫酰胺、和氧化。具體而言，含硫氨基酸易于氧化而形成相應(yīng)的亞砜。術(shù)語“防凍劑”在用于本文時通常包括針對由冷凍誘導(dǎo)的壓力為蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑。防凍劑的范例包括多元醇，諸如例如甘露醇，包括糖類，諸如例如蔗糖，還包括表面活性劑，諸如例如聚山梨酸酯、泊洛沙姆、或聚乙二醇等。防凍劑也有助于配方的張力。術(shù)語“防溶劑”“(Lyoprotectant)”在用于本文時包括在凍干工藝的干燥過程后的脫水過程中為蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑，例如維持蛋白質(zhì)的正確構(gòu)象。防溶劑的范例包括糖類，特別是二糖或三糖。防凍劑可能也具有防溶劑的效果。術(shù)語“適于將pH維持在范圍3-9內(nèi)的試劑”涵蓋那些將溶液pH維持在可接受范圍3.0-9.0內(nèi)的試劑。能夠?qū)H維持在3-9范圍內(nèi)的試劑的典型范例是檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、PIPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、和甘氨酰甘氨酸的酸形式或鹽。應(yīng)當理解的是，在本發(fā)明中還可以使用試劑組合，其中試劑組合適于將PH維持在上文所述范圍內(nèi)。術(shù)語“凍干塊”在用于本文時意欲涵蓋在一定條件下加工溶解的或至少部分溶解的組合物后得到的固體組合物，所述條件涉及至少一個將所述溶解的/部分溶解的組合物冷卻至結(jié)冰的步驟，和隨后至少一個真空干燥的步驟。術(shù)語“凍干”涵蓋在一定條件下由溶解或至少部分溶解的組合物除去液體的過程，所述條件涉及至少一個將所述溶解的/部分溶解的溶液冷卻至結(jié)冰、隨后真空干燥的步驟。凍干是用于制備固體蛋白質(zhì)藥物的最常用方法。該方法由兩個主要步驟組成將蛋白質(zhì)溶液冷凍和在真空條件下將冷凍的固體干燥。干燥步驟還可分成兩個階段第一和第二干燥。第一干燥除去凍結(jié)水(冰的升華)，第二干燥除去非凍結(jié)的“結(jié)合”水(水的解吸14附)。對每個凍干步驟的更詳細分析提供于例如Wang等人，2000，InternationalJournalofPharmaceutics,2031-60(見第4部分，第16頁及以下)。通常，通過將組合物裝到瓶中、在凍干機的架子上冷凍、然后建立真空并加熱架子以執(zhí)行第一干燥(或冰的升華)，實現(xiàn)對組合物的凍干。此后，在較高溫度進行第二干燥(或吸附水的解吸附)直至完成加工，即組合物的含濕(水)量足夠低。凍干的方法在本領(lǐng)域是普遍知道的，參閱例如Wang等人，2000，InternationalJournalofPharmaceutics,2031-60。從業(yè)人員憑借普通技術(shù)就能夠在特定組合物的加工過程中將要使用的溫度、每個溫度下的時間、還有壓力方面優(yōu)化凍干條件。術(shù)語“含濕量”意欲涵蓋與產(chǎn)品相關(guān)的水，包括但不限于吸附形式的水，諸如凍結(jié)溶質(zhì)相捕獲或吸附的非凍結(jié)水和/或與無定形相相關(guān)的非凍結(jié)水或結(jié)晶固體吸附的非凍結(jié)水。術(shù)語“含水量”與“含濕量”可互換使用。期望的殘余濕氣水平(含濕量)是第二干燥步驟的持續(xù)時間和溫度的函數(shù)。本領(lǐng)域知道用于在凍干過程中測定殘余含濕量的幾種方法；例如可以使用電子濕度計或殘余氣體分析儀?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域知道的幾種方法來測定凍干配方的含濕量，諸如例如干燥損失、KarlFischer滴定、熱比重分析(TGA)、氣相層析(GC)、或近似IR(參閱例如Wang等人，2000，InternationalJournalofPharmaceutics,203:1-60)。用于測定含濕量(含濕量)的方法還描述于歐洲和美國藥典。例如，可以如美國藥典(USP<921,Ic>)或歐洲藥典(ΕΡ<2·5.32中所述通過KarlFischer電量滴定來進行含水量測定。簡而言之，該方法如下通過電量滴定測定含水量水的電量測定利用KarlFischer反應(yīng)，其依據(jù)的是無水介質(zhì)中水與二氧化硫和碘的定量反應(yīng)。在反應(yīng)池中以電化學方式即通過碘化物的氧化生成碘。在陽極生成的碘立即與反應(yīng)池中所含的水和二氧化硫反應(yīng)。物質(zhì)中水的量與電量成正比，直至滴定終點。當池中的水都耗盡時，達到終點，由此出現(xiàn)過量的碘，這可以通過量電法檢測，由此指示終點。然后計算物質(zhì)中存在的含水量百分比。可以根據(jù)分析時小瓶中的樣品重量(即固體加上存在的水_稱為濕重基數(shù))來定義含濕量，或者可以根據(jù)校正樣品中測量到的水(即干重基數(shù))來進行定義。在具有低含濕量的凍干產(chǎn)品的情況中，兩種測量方法(濕重基數(shù)對干重基數(shù))產(chǎn)生非常相似的結(jié)果。在用于本文時，含濕量是根據(jù)固體加上存在的水(即濕重基數(shù))來定義的。術(shù)語“膨脹劑”(bulkingagent)通常包括提供優(yōu)良凍干塊特性、形成制藥學精致產(chǎn)品、幫助蛋白質(zhì)克服多種壓力(例如與凍干加工有關(guān)的剪切/凍結(jié))、和有助于在凍干過程及后續(xù)貯藏過程中維持蛋白質(zhì)活性水平的試劑。膨脹劑的典型范例包括甘露醇、甘氨酸、蔗糖、乳糖。這些試劑可能對配方的張力也有貢獻。術(shù)語“張力調(diào)節(jié)劑”(tonicitymodifier)意指能夠調(diào)節(jié)組合物的張力、使得在使用時將組合物溶解后組合物的張力在血液、腹膜液、或其它相關(guān)體液的生理范圍內(nèi)的任何試劑。顯然，張力還可取決于復(fù)水溶液是否包含張力調(diào)節(jié)劑。術(shù)語“表面活性劑”通常包括那些保護蛋白質(zhì)免于由空氣/溶液界面誘導(dǎo)的壓力和由溶液/表面誘導(dǎo)的壓力的影響的試劑。例如，表面活性劑可以保護蛋白質(zhì)免于聚集。合適的表面活性劑可以包括例如聚山梨酸酯、聚氧乙烯烷基醚諸如Brij35、或泊洛沙姆諸如吐溫20、吐溫80、或泊洛沙姆188。優(yōu)選的去污劑是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；聚氧乙烯烷基醚，例如Brij35、CremophorA25、SympatensALM/230；和聚山梨酸酯/吐溫，例如聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80。更優(yōu)選的是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188，和吐溫，例如吐溫20和吐溫80。術(shù)語“初始含量”指配制時加到組合物中的因子VII多肽的量。本文給出的濃度(mg/ml)指除濕前(例如凍干前)的因子VII多肽溶液或復(fù)水組合物中因子VII多肽的濃度，或者在涉及固體組合物例如凍干塊中的濃度時表述成％w/V。在用于本文時，所述量理解為士大約10%，因此大約50mM包括50mM士5mM，4%包括4%士0.4%，等等。如上所述，本發(fā)明的研究人員對本領(lǐng)域的本質(zhì)貢獻是將因子VII多肽穩(wěn)定化從而能夠長時間貯藏而不會引起用戶的風險和不便增加。本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，在將因子VII多肽穩(wěn)定化時需要調(diào)整許多至關(guān)重要的參數(shù)。一個重要的參數(shù)至少部分涉及含濕量，例如水。含濕量應(yīng)當受到限制。作為另一個重要參數(shù)，組合物應(yīng)當至少包含一種穩(wěn)定劑。依照本發(fā)明，適當穩(wěn)定劑包括選自下組的至少兩組制藥學可接受賦形劑的組合抗氧化劑、糖類、和多元醇。糖類和多元醇具有防溶劑和/或防凍劑特性，這在將組合物進行凍干的情況中可能是重要的，至少部分重要。一般而言，可以通過至少兩組賦形劑的適當組合而部分實現(xiàn)穩(wěn)定性的改進。然而，更具體的說，發(fā)現(xiàn)當所述組合包含糖類(蔗糖)或抗氧化劑(甲硫氨酸)時，穩(wěn)定效果可能甚至更加顯著。此外，還令人驚訝的發(fā)現(xiàn)甲硫氨酸可預(yù)防因子VII多肽的氧化性降解。因此，在第一個方面中，本發(fā)明涉及包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的組合物i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。也就是說，本發(fā)明的一個實施方案包含抗氧化劑與甘露醇的組合；第二個實施方案包含甲硫氨酸與多元醇的組合；另一個實施方案包含糖類與甘露醇的組合；在還有一個實施方案中，組合物包含蔗糖與多元醇的組合；最后，在另一個合適實施方案中，組合物包含甲硫氨酸。如上所述，依照本發(fā)明的穩(wěn)定劑包括組合至少兩組制藥學可接受賦形劑。在合適實施方案中，穩(wěn)定劑還包含第三組賦形劑。因此，在一個實施方案中，抗氧化劑與甘露醇的組合中還包含糖類。在第二個實施方案中，甲硫氨酸與多元醇的組合中還包含糖類。在還有一個有趣的實施方案中，糖類與甘露醇的組合中還包含抗氧化劑，而蔗糖與多元醇的組合中還包含抗氧化劑。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含甘露醇和蔗糖；在另一個實施方案中，組合物包含甘露醇、蔗糖、和甲硫氨酸；在另一個實施方案中，組合物包含甘露醇和海藻糖；在另一個實施方案中，組合物包含甘露醇、海藻糖、和甲硫氨酸。依照本發(fā)明，因子VII多肽意欲涵蓋上文所述多肽。在本發(fā)明的合適實施方案中，因子VII多肽選自下組人因子Vila、重組人因子Vila、和因子VII序列變體。優(yōu)選的是，16因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa或因子VII相關(guān)多肽，其中在本說明書所述“體外蛋白水解測定法”和“體外水解測定法”中的一種或多種方法中進行測試時，所述因子VII相關(guān)多肽與野生型因子VII的活性比率是至少1.25。如上所述，含濕量應(yīng)當受到限制。為了本發(fā)明的目的，在大量提供因子VII多肽時，它可以是固體或液體的形式。然而，在大量提供因子VII多肽時，它通常是液體的形式。因此，將大量蛋白質(zhì)進一步加工以制備組合物時需要添加合適賦形劑并由混合物除去液體的步驟，所述添加賦形劑可以在除去液體之前或之后進行。用于由蛋白質(zhì)除去液體的這樣一種方法涉及凍干。因此，在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，組合物是凍干塊的形式。然而，本發(fā)明不排除適于由散裝多肽除去液體以獲得含濕量不超過大約3%w/w的固體組合物的其它方法。此外，依照本發(fā)明，含濕量優(yōu)選不超過大約2.5%w/w,更優(yōu)選不超過大約2%w/w，最優(yōu)選不超過大約1.5%w/w?？梢岳斫?，本發(fā)明部分涉及在制備過程中例如在混合賦形劑和除去液體以獲得含濕量最高3%w/w的固體組合物的過程中限制因子VII多肽的降解，以及由制造至使用(例如直至將組合物施用于患者之時)該固體組合物這段時間里限制所述降解。因此，將包含因子VII多肽的組合物穩(wěn)定化時還有另一個參數(shù)，即在溶于水性溶劑，諸如純水或水性緩沖液后，應(yīng)當將PH維持在pH范圍3-9內(nèi)。也就是說，除去含濕量之前，例如凍干前，多肽溶液的PH應(yīng)當維持在大約3-大約9內(nèi)。有利的是，該pH范圍也處于期望的生理范圍內(nèi)，從而不會在通過腸胃外手段進行施用后對使用者造成傷害。優(yōu)選的是，溶液的PH是大約4.0-大約9.0，諸如4.0-8.0,4.0-7.5,4.0-7.0,4.5-7.0,4.5-6.8、4.5-6.5,5.0-7.0,5.0-6.5,5.0-6.0,5.5-6.5、或大約5.5-大約6.0，諸如大約5.5,5.6、5.7、5·8、5·9、或6.0。因此，本發(fā)明的實施方案還包括適于在溶于水性溶液(如水)后將所述組合物的PH維持在3-9范圍內(nèi)的試劑。因此，在合適實施方案中，適于將pH維持在3-9范圍內(nèi)的試劑選自下組檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、PIPES、和甘氨酰甘氨酸的酸或鹽。另外，用于將pH維持在3-9范圍內(nèi)的合適試劑還可以是至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供指定范圍內(nèi)的PH值。合適試劑的濃度范圍是大約0.ImM-lOOmM、大約0.2mM-50mM、大約0.5mM-25mM、大約lmM-20mM、或大約ImM-lOmM。正如由實施例5和6可以看出的，通過組合適當量的甘露醇(多元醇)、蔗糖(糖類)、和抗氧化劑(甲硫氨酸)，本發(fā)明的研究人員提供了在終止制造過程后(即終止凍干加工后)氧化形式和聚集體含量較低的組合物。因此，依照本發(fā)明的組合物的特征是在進行貯藏前具有較低的氧化形式和聚集體初始含量。氧化途徑和聚集途徑對因子VII多肽的降解是穩(wěn)定性的靈敏參數(shù)。通常，在終止凍干后，組合物得到穩(wěn)定化，使得少于初始含量5%w/w、諸如少于4、3、或2%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成其氧化形式。因子VII多肽的初始含量即配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的量。此外，根據(jù)常規(guī)分析方法(諸如例如本申請實施例中所述方法)的測定，少于初始含量5%w/w、諸如少于4.O%、3.O%、2.5%、2%、1.5%、或少于w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。17本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，因子VII多肽在貯藏于環(huán)境溫度后的進一步降解(即計算由終止制造過程時直至于30°C貯藏8個月)很少。正如可以由實施例5看出的，于30°C貯藏8個月后，增量是這樣的，其中除了終止凍干時存在的因子VII多肽氧化形式的含量以外，以所述氧化形式回收到的因子VII多肽少于其初始含量的10%w/w。極其重要的是，發(fā)現(xiàn)包含抗氧化劑(甲硫氨酸)的組合物針對因子VII多肽的氧化性降解更加穩(wěn)定。因此，依照本發(fā)明，合適組合物在于環(huán)境溫度貯藏至少8個月后氧化形式的含量增加有限。也就是說，在還有一些實施方案中，組合物是穩(wěn)定的，從而在終止制造過程(例如凍干加工)后將組合物于30°C貯藏8個月后不超過初始含量大約6%w/w的因子VII多肽被額外降解成氧化形式。在其它合適實施方案中，由終止制造過程時直至于30°C貯藏8個月后計算，不超過大約5、4、3、2、或1.5%w/w的因子VII多肽額外轉(zhuǎn)變成氧化形式。在本發(fā)明的這些實施方案中，組合物是穩(wěn)定的，從而所述組合物于30°C貯藏8個月后不超過初始含量大約5%(4、3、2、或1.5%)w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式。如上所述，初始含量指配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的因子VII多肽的量。如上所述，聚集途徑對因子VII多肽的降解也可看作基本的穩(wěn)定性指示參數(shù)。本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，因子VII多肽在貯藏于環(huán)境溫度后的進一步降解(即由終止制造過程時直至于30°C貯藏8個月計算)很少。正如可以由實施例6看到的，于30°C貯藏8個月后，以聚集體額外回收到不超過初始含量大約5%w/w、諸如不超過大約4、3、2.5、2.0、1.5、或1.0%/的因子￥11多肽。同樣極其重要的是，發(fā)現(xiàn)包含糖類(蔗糖)的組合物在聚集體形成方面更加穩(wěn)定。因此，本發(fā)明的實施方案涉及穩(wěn)定的組合物，使得將所述組合物于30°C貯藏8個月后，不超過初始含量大約5%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。如上所述，所述多肽VII多肽的初始含量指配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的量。通過糖類、多元醇、和抗氧化劑含量的適當優(yōu)化，至少是部分優(yōu)化，組合物是穩(wěn)定的，從而所述組合物于30°C貯藏8個月后，不超過初始含量大約4.0%、3.0%w/w、諸如2.5、2.0、1.5、或1.0%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。因此，有利的是，終止制造過程之后(即終止凍干加工后)，本發(fā)明的組合物具有低含量的氧化形式和聚集體，因此，依照本發(fā)明的組合物的特征是在進行貯藏前其中氧化形式和聚集體初始含量較低，例如在終止制造過程后不超過初始含量大約5%w/w、諸如4%、3%、或2%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式，而且少于5%w/w、諸如不超過大約4.0%,3.0%,2.5%,2%U.5%,或不超過大約1%w/w轉(zhuǎn)變成二聚體或高級聚合體形式。此外，有利的是，本發(fā)明的組合物是貯藏穩(wěn)定的，例如在黑暗中于30°C貯藏至少8個月后少于初始含量10%w/w、諸如6%、5%、4%、3%、2%、或1.5%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式，而且少于5%w/w、諸如4%、3%、2.5%,2%U.5%、或w/w轉(zhuǎn)變成二聚體或高級聚合體形式。如上所述，所述改進的穩(wěn)定性涉及特定賦形劑的適當組合。依照本發(fā)明，賦形劑應(yīng)當選自下組糖類、多元醇、和抗氧化劑，因為糖類和多元醇展示防溶劑和/或防凍劑特性。更具體的說，在依照本發(fā)明的合適實施方案中，感興趣的糖類是二糖、三糖、和多糖，而且糖類可以選自下組蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。此外，在有些實施方案中，多元醇選自下組甘露醇、山梨醇、和木糖醇。在還有一些實施方案中，抗氧化劑選自下組同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽中任意一種的肽?？梢岳斫?，糖類和多元醇賦形劑分別還可以是至少兩種所列試劑的混合物。在本發(fā)明的一系列實施方案中，所用糖類賦形劑是至少兩種二糖、三糖、和/或多糖的組合，諸如例如蔗糖與環(huán)糊精的組合、海藻糖與環(huán)糊精的組合、蔗糖與葡聚糖的組合、或蔗糖與乳糖的組合。在本發(fā)明的一系列實施方案中，所用多元醇賦形劑是至少兩種多元醇的組合，諸如例如甘露醇與山梨醇的組合、甘露醇與木糖醇的組合、或山梨醇與木糖醇的組合。在本發(fā)明的一系列實施方案中，所用抗氧化劑賦形劑是至少兩種抗氧化劑的組合，諸如例如甲硫氨酸與同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、谷胱甘肽以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽中任意一種的肽中一種或多種的組合。本發(fā)明的研究人員認識到或者至少部分認識到用于實現(xiàn)有利穩(wěn)定性的多元醇與糖類的適當組合以及它們的含量。因此，在本發(fā)明的有些更加有趣的實施方案中，多元醇存在的量是大約5%w/W-大約90%w/w。優(yōu)選的是，多元醇存在的量是大約18%w/w-大約88%w/w，諸如大約18%w/w-大約83%w/w,25%-80%,30%-65%,30%-80%,40%-80%,50%-80%,30%-75%,40%-75%,50%-75%、或大約50%-大約70%w/w。多元醇存在的量是大約0.5-75mg/ml，諸如大約2_60mg/ml、5mg/ml-55mg/ml、8-45mg/ml、10-40mg/ml、10-30mg/ml、或大約2-45mg/ml、5mg/ml-45mg/ml、5-35mg/ml、5-25mg/ml、5_20mg/ml、20_40mg/ml、或諸如大約20_30mg/ml。此外，在它的有趣實施方案中以及在本發(fā)明的其它一些有趣實施方案中，組合物中糖類存在的量是大約0-大約85%w/w。在它的其它有趣實施方案中，其存在量是大約3%w/w-大約80%w/w,諸如大約7%w/w-大約75%w/w、10%-70%U0%-50%,20%-50%,10%-40%、或大約10%w/w-大約35%w/w。糖類存在的量應(yīng)當是大約0.5-75mg/ml，諸如大約2_60mg/ml、大約5mg/ml_55mg/ml、大約8-45mg/ml、大約10_40mg/ml、大約10_30mg/ml、大約2_45mg/ml、大約5mg/ml-45mg/ml、大約5_35mg/ml、大約5_25mg/ml、諸如大約5_20mg/ml。此外，本發(fā)明的研究人員認識到抗氧化劑的適當量應(yīng)當是大約0.05-10mg/ml，諸如大約0.l-5mg/ml、0.lmg/ml-2.5mg/ml、0.l_2mg/ml、或大約0.1-lmg/ml。重要的是，需要適當調(diào)節(jié)多元醇與糖類之間的比率。在本發(fā)明的合適實施方案中，所述多元醇相對于所述糖類的重量比率的范圍是大約1001-150。在它的甚至更合適實施方案中，所述重量比率是大約501-110，更優(yōu)選大約201-15。在其它合適實施方案中，重量比率涉及范圍大約101-12和大約61-12。然而，正如本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)的(見實施例5)，凍干塊在插入較大量的糖類后崩塌。因此，在非常合適的實施方案中，所述糖醇相對于所述糖類的重量比率的范圍是大約41-11，諸如大約41-32或大約11-32。在本發(fā)明的有些實施方案中，多元醇是甘露醇；在還有一些實施方案中，糖類是蔗糖。此外，在還有一些實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。還可以通過插入其它制藥學可接受賦形劑來合適配制組合物，以獲得能夠腸胃外施用、特別是靜脈內(nèi)施用的組合物。用于制備腸胃外施用的組合物的實際方法對于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員而言是知道的，而且更加詳細的描述于例如《Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy》即雷明頓制藥科學和實踐，第19版，Mack出版公司，伊斯頓，賓夕法尼亞州，1995。術(shù)語“賦形劑”包括為蛋白質(zhì)提供優(yōu)良凍干塊特性(膨脹劑)以及提供防溶保護和防凍保護、在貯藏過程中維持PH、維持可接受張力以及蛋白質(zhì)的正確構(gòu)象從而實現(xiàn)生物學活性的實質(zhì)性保持并維持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的制藥學可接受試劑。因此，依照本發(fā)明，組合物還包含張力調(diào)節(jié)劑。張力調(diào)節(jié)劑可以選自下組醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、和氯化鈣。然而，不排除其它合適的張力調(diào)節(jié)劑。還應(yīng)當指出的是，組合物可以包含更高濃度的張力調(diào)節(jié)劑，只要組合物在使用前制成等滲或接近等滲(例如略微高滲或低滲)即可，例如散劑組合物不必與生理范圍等滲。可以通過添加表面活性劑來獲得包含因子VII多肽的組合物的進一步穩(wěn)定化。因此，在本發(fā)明的還有一些有趣實施方案中，組合物還包含選自下組的表面活性劑聚山梨酸酯，例如吐溫，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，例如聚烴氧基23月桂醇醚(Brij35)或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188(例如Pluronic)或泊洛沙姆407(例如Lutrol)和其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇(PEG)諸如PEG8000。通常，表面活性劑的添加量是0.005-5mg/mL·優(yōu)選的量是0.01_3mg/ml，對于吐溫20和/或吐溫80，更優(yōu)選的是0.01-0.3mg/ml；對于泊洛沙姆188，更優(yōu)選的是0.05-3.Omg/ml。在本發(fā)明的還有一些優(yōu)選實施方案中，組合物還包含擔當膨脹劑的其它制藥學賦形劑。也就是說，組合物中包含除了甘露醇以外的膨脹劑。具體而言，在通過凍干制備的組合物中包含膨脹劑。組合物中因子VII多肽的初始含量優(yōu)選大約0.6mg/ml-大約10.Omg/ml，諸如大約0.6mg/ml-大約6.Omg/ml、大約0.6mg/ml_大約5mg/ml、或大約0.6mg/ml_大約4mg/ml。在一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、和吐溫80，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸、和吐溫80，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在另一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸、和吐溫80，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸、組氨酸、和吐溫80，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在另一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、和泊洛沙姆188，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在另一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸、和泊洛沙姆188，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在另一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸、和泊洛沙姆188，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在另一個實施方案中，組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸、甲硫氨酸、和泊洛沙姆188，具有不超過大約3%的含濕量，而且在溶于水后具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個實施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個實施方案中，因子VII多肽是人因子Vila。在還有一些實施方案中，組合物如下文表A所示。表A在還有一些實施方案中，組合物如下文表B所示。表B表B(續(xù)前表)在還有一些實施方案El-Ll中，組合物包含賦形劑，而且它們的量如上文表B所列，但配制成pH5.9。在還有一些實施方案E2-L2中，組合物包含賦形劑，而且它們的量如上文表B所列，但配制成pH5.8。在還有一些實施方案E3-L3中，組合物包含賦形劑，而且它們的量如上文表B所列，但配制成PH5.7。在還有一些實施方案E4-L4中，組合物包含賦形劑，而且它們的量如上文表B所列，但配制成pH5.6。在還有一些實施方案E5-L5中，組合物包含賦形劑，而且它們的量如上文表B所列，但配制成pH5.5。如上所述，通過在包含選定制藥學可接受賦形劑(重要的是包含穩(wěn)定劑)的固體組合物中提供蛋白質(zhì)，本發(fā)明的研究人員提供了用于將因子VII多肽穩(wěn)定化的方法。依照本發(fā)明，這種穩(wěn)定劑由選自糖類、多元醇、或抗氧化劑中的至少兩組賦形劑的組合組成。此外，本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，糖類(蔗糖)和抗氧化劑(甲硫氨酸)是改進因子VII多肽穩(wěn)定性所必需的。因此，本發(fā)明的還有一個方面涉及用于制備穩(wěn)定的因子VII多肽的方法。該方法包括下列步驟1)在包含至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的溶液中提供所述因子VII多肽i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；2)加工所述溶液以獲得含濕量不超過大約3%w/w的固體組合物。在其特別感興趣的實施方案中，該方法中所述抗氧化劑選自下組同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨22酸、和谷胱甘肽中任意一種的肽。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。在還有一些有趣的實施方案中，所述糖類選自下組蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。在一個優(yōu)選的實施方案中，多元醇是甘露醇，糖類是蔗糖。此外，在其優(yōu)選實施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。優(yōu)選的是，應(yīng)當調(diào)節(jié)所述溶液中糖類的含量和任選的抗氧化劑的含量，以獲得優(yōu)異的穩(wěn)定化因子VII多肽。依照本發(fā)明，糖類的存在量范圍應(yīng)當是大約0.5-75mg/ml，諸如大約2_60mg/ml、大約5-55mg/ml、大約8_45mg/ml、大約10_40mg/ml、大約10_30mg/ml、或大約2_45mg/ml、大約5-45mg/ml、大約5_35mg/ml、大約5_25mg/ml，諸如大約5_20mg/ml。依照本發(fā)明，多元醇的存在量范圍應(yīng)當是大約0.5-75mg/ml，諸如大約2_60mg/ml、大約5-55mg/ml、大約8_45mg/ml、大約10_40mg/ml、大約10_30mg/ml、或大約2_45mg/ml、大約5-45mg/ml、大約5_35mg/ml、大約5_25mg/ml，諸如大約5_20mg/ml。抗氧化劑的存在量范圍應(yīng)當是大約0.05-10mg/ml，優(yōu)選大約0.l_5mg/ml，更優(yōu)選大約0.lmg/ml-2.5mg/ml，甚至更優(yōu)選大約0.l-2mg/ml,最優(yōu)選大約0.1-lmg/ml。在一個優(yōu)選的實施方案中，用于制備穩(wěn)定的因子VII多肽的方法包括凍干。凍干指如下過程，其中將包含所述因子VII多肽的溶液裝入凍干瓶等內(nèi)。所述因子VII多肽可以任選在開始凍干之前進行無菌過濾。對凍干機的架子施以冷卻，從而使瓶和溶液在臨界產(chǎn)品溫度以下凍結(jié)。通過引入真空和在凍干機的冷凝器上凝結(jié)水蒸汽來脫水。當產(chǎn)品干燥后，通常殘余含濕量低于3%(例如如上所述通過KarlFischer電量滴定來測量)，將瓶封閉并蓋帽。制造結(jié)束，組合物現(xiàn)在是凍干塊的形式。在通過注射手段施用于患者時，使用前需要將這些組合物在合適液體中復(fù)水。也可以為了其它目的而將它們復(fù)水，例如用于再配制成其它制藥學組合物。然而，本發(fā)明不排除可以以固體形式將組合物施用于患者。使用可接受的、優(yōu)選無菌的稀釋劑或載體、優(yōu)選水性載體將組合物復(fù)水?？梢允褂枚喾N水性載體，例如水(例如注射用水/WFI)、緩沖液、鹽水(例如0.4%鹽水)、甘氨酸(例如0.3%甘氨酸)、組氨酸等。復(fù)水稀釋劑還可以包含一種或多種鹽類，諸如鈣鹽(例如CaCl2)或鈉鹽與鈣鹽的組合(例如NaCl和CaCl2)。復(fù)水組合物意欲腸胃外施用，以進行預(yù)防性和/或治療性處理。優(yōu)選的是，對制藥學組合物進行腸胃外施用，即靜脈內(nèi)、皮下、或肌肉內(nèi)，或者通過連續(xù)或脈動灌輸進行施用。因此，本發(fā)明的還有一個方面涉及固體穩(wěn)定化組合物用于配制治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的藥物中的用途。也就是說，本發(fā)明的一個實施方案涉及因子VII多肽用于配制治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的藥物中的用途，所述藥物包含含有因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的組合物i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。另外，在另一個方面中，本發(fā)明涉及對患者施用所述穩(wěn)定化的因子VII多肽以治療因子VII反應(yīng)性綜合癥。因此，本發(fā)明涉及用于治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的方法，包括對有此需要的患者施用有效量的組合物，所述組合物包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲ii氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。在不同的實施方案中，所述因子VII反應(yīng)性綜合癥是血友病A、血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、vonWillebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、或創(chuàng)傷。另外，因子VII反應(yīng)性綜合癥可能與抗凝劑療法有關(guān)。如上所述，組合物處于固體形式。因此，在合適的實施方案中，藥物應(yīng)當適于溶解，從而能夠進行腸胃外施用。因此，在對患者施用組合物時，包括有在施用步驟之前將組合物溶于合適液體的步驟。本文所用縮寫FVII單鏈形式的凝血因子VIIFVIIa經(jīng)過切割的、激活的雙鏈形式的凝血因子VIIrFVIKrFVIIa)重組因子VII(重組因子Vila)圖Ia和圖Ib是按照實施例11所測定的小瓶貯藏的穩(wěn)定性的結(jié)果。圖2a和圖2b是按照實施例9所測定的配方A和配方B中聚集體形式和氧化形式的含量。提供下列實施例作為例示而非限制。具體實施例方式實施例1顯示了依照實施例2配制的包含因子VII多肽的組合物。其中顯示了典型的賦形劑及其典型用量。表1顯示了組合物處于液體形式(即完成制造如完成凍干前的組合物)或復(fù)水溶液時活性成分和賦形劑的濃度。表2顯示了組合物處于固體形式即凍干形式時活性成分和賦形劑的濃度。表1組合物，溶液中的賦形劑含量表2組合物，凍干形式中的賦形劑含量實施例2組合物的制造一般而言，由純化的大量溶液制備組合物。添加賦形劑，并將溶液稀釋至期望的rFVIIa濃度。使用無菌濾膜(0.2微米孔徑或相當物)將由此得到的溶液無菌過濾，并裝到無菌玻璃瓶中。將小瓶凍干，塞住，并用鋁制彈開式瓶帽密封。實施例3依照實施例2中所述方法配制包含不同量的氯化鈉、甘露醇、蔗糖、和甲硫氨酸且具有不同PH值的組合物1-19。這些組合物包含固定濃度的因子VII(1.0mg/ml)、CaCl2·2Η20(1·47mg/ml)、甘氨酰甘氨酸(1.32mg/ml)、和聚山梨酸酯80(1.Omg/ml)。表3:組合物1-19實施例4用于測定穩(wěn)定性指示參數(shù)的分析方法A.通過反相HPLC(RP-HPLC)測定氧化形式HPLC柱用粒度5μπι且孔徑300人的丁基鍵合硅石填充4.5x250mm柱。柱溫70°C。洗脫液A水99.9%ν/ν和三氟乙酸0.ν/ν。洗脫液B乙腈80%ν/ν、三氟乙酸0.09%ν/ν和水19.91%ν/ν。用30分鐘Β-(Χ+13)%B的線性梯度對柱進行洗脫。流速1.Oml/min。檢測214nm。氧化形式是因子VII多肽的甲硫氨酸亞砜。例如，F(xiàn)VII的兩種主要衍生物是Met(O)298FVII和Met(O)306FVII。氧化形式的含量表述成配制后組合物中以氧化形式回收的因子VII占因子VII初始量的百分比。B.通過高效凝膠滲透層析(GP-HPLC)測定因子VII多肽的聚集體在7.5x300mm的WatersProteinPak300SW柱上進行GP-HPLC，使用含5%異丙醇的0.2M硫酸銨ρΗ7·0作為流動相。流速0.5ml/min。檢測215nm。聚集體的含量表述成配制后組合物中以二聚體、寡聚物和多聚物形式回收的因子VII占因子VII初始量的百分比。實施例5終止凍干處理并貯藏后氧化形式因子VIIa的含量終止凍干并于30°C貯藏2和8個月后，通過方法A(實施例4)對實施例3的組合物1-19分析氧化形式的含量。表4氧化形式的含量及其貯藏8個月后的增量統(tǒng)計學分析顯示，包含甲硫氨酸的組合物在氧化性降解方面更加穩(wěn)定。實施例6終止凍干處理并貯藏后因子VIIa聚集體的含量終止凍干并于30°C貯藏2和8個月后，通過方法B(實施例4)對實施例3的組合物1-19分析聚集體的含量。表5聚集體的含量及其貯藏8個月后的增量統(tǒng)計學分析顯示，組合物中存在蔗糖對于降低聚集體形成而言是重要的。實施例7終止凍干處理后二聚體和寡聚物形式因子VIIa的含量依照實施例2中所述方法配制包含下表所列多元醇和糖類的組合物A。該組合物還包含因子VIIad.Omg/ml)、CaCl2·2Η20(1·47mg/ml)、甘氨酰甘氨酸(1.32mg/ml)、和聚山梨酸酯80(O.7mg/ml)。pH是5.O。終止凍干并于30°C貯藏1和2個月后通過方法B(實施例4)對組合物A分析聚集體的含量。表6列出了以聚集體回收的因子VIIa占初始含量的百分比。表6實施例8對多種組合物1-19(見實施例3)顯示了凍干塊的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。報告了每一種組合物中甘露醇與蔗糖的比率。表7依照甘露醇與蔗糖之間比率統(tǒng)計的凍干塊的穩(wěn)定性C崩塌塊；Man甘露醇；Suc蔗糖；OK輕微崩塌或未崩塌實施例9如實施例2中所述配制下列配方，填充體積為1和5ml。調(diào)查各配方在25°C、30°C、和40°C的穩(wěn)定性，并獲得了下列結(jié)果。分析前將小瓶復(fù)水。二聚體和寡聚物形式如實施例4中所述通過GP-HPLC測量二聚體和寡聚物的含量。所有結(jié)果表述成百分比。5ml填充體積Iml填充體積另外，可以由圖2a看出配方A(Ref)和配方B(New)中聚集體形式的含量，填充體積5ml。氧化形式如實施例4中所述通過RP-HPLC測量氧化形式的含量。5ml填充體積Iml填充體積另外，由圖2b可以看出配方A(Ref)和配方B(New)中氧化形式的含量?；钚匀鐚嵤├?2中所述通過一步凝結(jié)測定法對已經(jīng)于30°C貯藏3個月的配方測量活性。根據(jù)配方中的rFVIIa含量計算比活，并獲得了下列結(jié)果。對結(jié)果的解釋結(jié)果顯示，包含甘露醇、蔗糖、和甲硫氨酸的配方B和C更加穩(wěn)定_即二聚體和寡聚物形式以及氧化形式的含量增加較慢。因此，于30°C貯藏3個月后這些配方的活性較高。實施例10如實施例2中所述配制下列配方，填充體積5ml。將小瓶復(fù)水，并搖動19小時，以測試配方的物理穩(wěn)定性。通過目測和400nm的UV吸光率測量(下表中的吸光率)來研究搖動效果。下面的結(jié)果清楚顯示了通過添加去污劑獲得了物理穩(wěn)定性的增加。實施例11二聚體和寡聚物形式以及氧化形式的含量是如實施例4中所述測定的。實施例12用于測試因子VII多肽的生物學活性的測定法因子VIIa活性的測試可以通過簡單的初步體外測試(“體外水解測定法”)來進行測試因子VIIa活性從而選擇合適因子VIIa變體的合適測定法。體外水解測定法可以測定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變體(二者在下文中都稱為“因子Vila")的比活?？梢赃M行平行測定，從而直接比較它們的比活。該測定法是在微量滴定板(MaxiSorp,Nunc，丹麥)中進行的。向因子VIIa(終濃度ΙΟΟηΜ，溶于含有0.IMNaCl、5mMCaCl2、和lmg/ml牛血清清蛋白的50mMHepespH7.4)中加入呈色底物D-Ile-Pro-Arg-對硝基苯胺(S-2288，Chromogenix,瑞典)至終濃度ImM0在SpectraMax340讀板儀(MolecularDevices，美國)中連續(xù)測量405nm的吸光率。將保溫20分鐘期間形成的吸光率減去不含酶的空白孔的吸光率，用于計算變體與野生型因子VIIa的活性之間的比率比率=(因子VIIa變體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。據(jù)此，可能鑒定出與天然因子VIIa相比活性相當或更高的因子VIIa變體，諸如例如變體的活性與天然因子VII(野生型因子VII)的活性之間的比率接近或超過1.O的變體。還可以使用生理學底物來測量因子VIIa或因子VIIa變體的活性，諸如因子X，合適的濃度是ΙΟΟ-ΙΟΟΟηΜ，其中在加入合適呈色底物(如S-2765)后測量所生成的因子Xa(“體外蛋白水解測定法”)。另外，活性測定法可以在生理溫度進行。體外蛋白水解測定法平行測定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變體(二者在下文中都稱為“因子Vila”)，從而直接比較它們的比活。該測定法是在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，丹麥)中進行的。將因子VIIa(IOnM)禾Π因子Χ(0·8μΜ)(溶于100μ1含0.IMNaCl、5mMCaCl2、和lmg/ml牛血清清蛋白的50mMHepesρΗ7·4)保溫15分鐘。然后加入50μ1含有0.IMNaCl、20mMEDTAJPlmg/ml牛血清清蛋白的50mMHepespH7.4終止對因子X的切割。加入呈色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-對硝基苯胺(S-2765，Chromogenix，瑞典)至終濃度0.5mM，測量所生成的因子Xa的量。在SpectraMax340讀板儀(MolecularDevices，美國)中連續(xù)測量405nm的吸光率。將10分鐘內(nèi)形成的吸光率減去不含F(xiàn)VIIa的空白孔的吸光率，用于計算變體與野生型因子VIIa的蛋白水解活性之間的比率比率=(因子VIIa變體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。據(jù)此，可能鑒定出與天然因子VIIa相比活性相當或更高的因子VIIa變體，諸如例如變體的活性與天然因子VII(野生型因子VII)的活性之間的比率接近或超過1.0的變體。凝血酶生成測定法可以在包含生理濃度的所有相關(guān)凝血因子和抑制劑以及活化血小板的測定法中測量因子VII或因子VII相關(guān)多肽或者因子VIII或因子VIII相關(guān)多肽(如變體)生成凝血酶的能力，如Monroe等人，Brit.J.Haematol.,99:542_547，1997的第543頁所述(收入本文作為參考)。凝結(jié)測定法還可以使用一步凝結(jié)測定法(測定法4)來測量因子VII多肽的活性，該方法基本上如WO92/15686或US5，997，864中所述進行。簡而言之，將待測樣品在50mMTris(pH7.5)、0·BSA中稀釋，并取100μ1與100μ1缺乏因子VII的血漿和200μ1含IOmMCa2+的促凝血酶原激酶C一起保溫。測量凝結(jié)時間，并與使用連續(xù)稀釋的參考標準或含檸檬酸鹽的正常人血漿合并液獲得的標準曲線進行比較。權(quán)利要求一種組合物，其中包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3％的含濕量。2.依照權(quán)利要求1的組合物，其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖類。3.依照權(quán)利要求1的組合物，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖類。4.依照權(quán)利要求1的組合物，其中糖類與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。5.依照權(quán)利要求1的組合物，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。6.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中抗氧化劑選自下組同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽之任意一種的肽。7.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中糖類選自下組蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。8.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中多元醇選自下組甘露醇、山梨醇、和木糖9.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30°C貯藏8個月后不超過初始含量大約5%w/w、優(yōu)選不超過大約4.0%w/w,3.0%w/w,2.5%w/w、2.0%w/w、l.5%w/w、或1.0%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。10.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30°C貯藏8個月后不超過初始含量大約6%、優(yōu)選不超過大約5%w/w,4.0%w/w,3.0%w/w,2.5%w/w,2.0%w/w、或1.5%w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式。11.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述多元醇的存在量范圍是大約5%w/w-90%w/w、優(yōu)選大約18%w/w-88%w/w、18%-83%,25%-80%,40%-80%,50%-80%或大約50%w/w-70%w/w。12.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述糖類的存在量范圍是大約0%w/w-85%w/w、優(yōu)選大約3%w/w-80%w/w,7%-75%U0%-70%U0%-50%U0%-40%、或大約10%w/w-35%w/w。13.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述多元醇與所述糖類的重量比率的范圍是大約1001-150、優(yōu)選大約501-110,201-15、101-12、6:1-1:2、41-11、或大約41-32。14.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中還包含適于在溶于水性溶劑時將所述組合物的PH維持在3-9范圍內(nèi)的試劑，pH優(yōu)選在4-7范圍內(nèi)，更優(yōu)選在4.5-6.5范圍內(nèi)，甚至更優(yōu)選在5-6范圍內(nèi)。15.依照權(quán)利要求14的組合物，其中所述試劑選自下組檸檬酸鹽、醋酸鹽、組氨酸、蘋果酸鹽、磷酸鹽、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES,PIPES、咪唑、TRIS、乳酸鹽、谷氨酸鹽、和甘氨酰甘氨酸。16.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中還包含張力調(diào)節(jié)劑。17.依照權(quán)利要求16的組合物，其中張力調(diào)節(jié)劑選自下組醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、和氯化鈣。18.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中還包含表面活性劑。19.依照權(quán)利要求18的組合物，其中表面活性劑選自下組聚山梨酸酯，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，諸如Brij35或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188或407；以及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物或聚乙二醇(PEG)，諸如PEG8000。20.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中還包含擔當膨脹劑的其它制藥學賦形劑。21.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中糖類是蔗糖。22.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中多元醇是甘露醇。23.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中因子VII多肽選自下組人因子Vila、重組人因子Vila、和因子VII序列變體。24.依照權(quán)利要求23的組合物，其中因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子Vila。25.依照權(quán)利要求1-23任一項的組合物，其中因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，在本說明書所述“體外蛋白水解測定法”和“體外水解測定法”中一種或多種方法中進行測試時，所述因子VII相關(guān)多肽與野生型因子VII的活性比率是至少1.25。26.依照權(quán)利要求23-25任一項的組合物，其中因子VII多肽存在的濃度是大約0.6mg/ml-大約10.Omg/ml，諸如大約0.6mg/ml-大約6mg/ml、大約0.6mg/ml-大約5mg/ml、或大約0.6mg/ml-大約4mg/ml。27.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述含濕量不超過大約2.5%w/w，優(yōu)選不超過大約2%w/w，最優(yōu)選不超過大約1.5%w/w。28.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物是凍干塊。29.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖和選自下組的表面活性劑聚山梨酸酯或泊洛沙姆，諸如吐溫80或泊洛沙姆188。30.依照權(quán)利要求29的組合物，其中還包含甲硫氨酸。31.依照權(quán)利要求29或30任一項的組合物，其中還包含L-組氨酸。32.依照權(quán)利要求29-31任一項的組合物，其中還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2,NaCl、和甘氨酰甘氨酸。33.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物選自下表配方A-D34.依照上述權(quán)利要求任一項的組合物，其中所述組合物選自下表配方Ex-Lx35.依照權(quán)利要求29-34任一項的組合物，其中因子VII多肽是人因子Vila。36.用于制備穩(wěn)定的因子VII多肽的方法，包括下列步驟1)在包含至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的溶液中提供所述因子VII多肽i.抗氧化劑與甘露醇的組合；ii.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；2)加工所述溶液以獲得含濕量不超過大約3%w/w的固體組合物。37.依照權(quán)利要求36的方法，其中抗氧化劑選自下組同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽中任意一種的肽。38.依照權(quán)利要求36或37的方法，其中所述糖類選自下組蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。39.依照權(quán)利要求36-38任一項的方法，其中所述多元醇選自下組甘露醇、山梨醇、和木糖醇。40.依照權(quán)利要求36-39任一項的方法，其中所述多元醇存在的量是大約0.5-大約75mg/ml，優(yōu)選大約2_45mg/ml，諸如大約5mg/ml-45mg/ml、大約5_35mg/ml、大約5_25mg/ml、5-20mg/ml、20-40mg/ml、或大約20-大約30mg/ml。41.依照權(quán)利要求36-40任一項的方法，其中所述糖類存在的量是大約0.5-大約75mg/ml，優(yōu)選大約2_45mg/ml，諸如大約5mg/ml-45mg/ml、大約5_35mg/ml、大約5_25mg/ml、或大約5-20mg/ml。42.依照權(quán)利要求36-41任一項的方法，其中所述抗氧化劑的存在量范圍是大約0.05-10mg/ml,優(yōu)選大約0.l-5mg/ml,更優(yōu)選大約0.lmg/ml-2.5mg/ml,甚至更優(yōu)選大約0.l_2mg/ml，最優(yōu)選大約0.1-lmg/ml。43.依照權(quán)利要求36-42任一項的方法，其中糖類是蔗糖。44.依照權(quán)利要求36-43任一項的方法，其中抗氧化劑是甲硫氨酸。45.依照權(quán)利要求36-43任一項的方法，其中多元醇是甘露醇。46.依照權(quán)利要求36-45任一項的方法，其中所述加工包括凍干。47.用于治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的方法，包括對有此需要的受試者施用有效量的組合物，所述組合物包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑i.抗氧化劑與甘露醇的組合；.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。48.依照權(quán)利要求47的方法，其中所述綜合癥選自下組血友病A、血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、vonWillebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥、抗凝劑療法。49.依照權(quán)利要求47或48任一項的方法，包括在施用步驟之前將組合物溶于合適液體的步驟。50.依照權(quán)利要求47-49任一項的方法，其中組合物如權(quán)利要求1-33任一項定義。51.因子VII多肽用于配制治療因子VII反應(yīng)性綜合癥的藥物中的用途，所述藥物包含含有因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑的組合物i.抗氧化劑與甘露醇的組合；.甲硫氨酸與多元醇的組合；iii.糖類與甘露醇的組合；iv.蔗糖與多元醇的組合；和v.甲硫氨酸；所述組合物具有不超過大約3%的含濕量。52.依照權(quán)利要求51的用途，其中所述綜合癥選自下組血友病A、血友病B、因子XI缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、vonWillebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、和抗凝劑療法。53.依照權(quán)利要求51或52任一項的用途，其中所述藥物適于溶解。54.依照權(quán)利要求51-53任一項的用途，其中所述組合物如權(quán)利要求1-35中任一項定全文摘要本發(fā)明涉及包含因子VII或因子VII相關(guān)多肽的化學和物理上穩(wěn)定的組合物，使得這些組合物能夠在室溫進行貯藏、操作和使用。該組合物中包含至少一種選自下組的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸。所述抗氧化劑是例如同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸或谷胱甘肽。所述糖是例如蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精或葡聚糖。所述多元醇是例如甘露醇、山梨醇或木糖醇。文檔編號A61K47/36GK101912601SQ201010156689公開日2010年12月15日申請日期2003年6月20日優(yōu)先權(quán)日2002年6月21日發(fā)明者B·L·漢森,M·B·延森,T·科恩菲爾特申請人:諾和諾德醫(yī)療保健公司