專利名稱：：因子Ⅶ多肽類的含水液體藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含有因子VII多肽類的含水液體藥物組合物和這類組合物的制備和使用方法，以及含有這類組合物的容器和這類組合物在治療因子VII-反應(yīng)性綜合征中的應(yīng)用。更具體地說，本發(fā)明涉及針對化學(xué)和/或物理降解進(jìn)行了穩(wěn)定化的液體組合物。
背景技術(shù)：
：已經(jīng)鑒定了涉及凝血過程的各種因子，包括因子VII(FVII)，一種血漿糖蛋白。通過在損傷血管壁后暴露于血液循環(huán)的組織因子(TF)與以相當(dāng)于總FVII蛋白質(zhì)質(zhì)量約1％的量存在于循環(huán)中的FVIIa之間形成復(fù)合物而啟動(dòng)凝血。FVII主要作為單鏈酶原存在于血漿中，它可以被FXa裂解成雙鏈活化形式FVIIa。已經(jīng)將重組的活化因子VIIa(rFVIIa)開發(fā)為促止血?jiǎng)?pro-haemostaticagent)。給予rFVIIa在存在出血的血友病受試者中提供了快速和高度有效的促止血反應(yīng)，該血友病受試者因抗體形成而不能用其它凝固因子產(chǎn)品治療。還可以用FVIIa成功地治療因子VII缺乏的受試者或存在正常凝固系統(tǒng)、但發(fā)生過量出血的受試者中的出血。需要擁有適合于儲存和遞送的因子VIIa的給藥劑型。理想的情況是，將藥物產(chǎn)品作為液體儲存和給藥。或者，將藥物產(chǎn)品凍干，即冷凍干燥，然后在患者使用前通過添加合適的稀釋劑再溶解。理想的情況是，藥物產(chǎn)品足夠穩(wěn)定，能夠長期儲存，即6個(gè)月以上。以液體形式維持藥物成品或?qū)⑵鋬龈傻臎Q定通?；诘氖堑鞍踪|(zhì)藥物在那些劑型中的穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性特別可以受到諸如離子強(qiáng)度、pH、溫度、重復(fù)冷凍/融化循環(huán)和接觸剪切力這類因素的影響。舉幾個(gè)例子來說，由于包括變性和聚集(可溶性和不溶性聚集物形成)在內(nèi)的物理不穩(wěn)定性和包括例如水解、脫酰氨化和氧化在內(nèi)的化學(xué)不穩(wěn)定性，可以導(dǎo)致活性蛋白質(zhì)損耗。蛋白質(zhì)藥物穩(wěn)定性的一般綜述參見例如Manning等，《藥物研究》(PharmaceuticalResearch)6903-918(1989)。盡管已經(jīng)廣泛認(rèn)識到蛋白質(zhì)可能存在不穩(wěn)定性，但是無法預(yù)測特定蛋白質(zhì)的特定不穩(wěn)定性問題。任意這些不穩(wěn)定性均可以導(dǎo)致形成具有降低的活性、增加的毒性和/或增加的免疫原性的蛋白質(zhì)副產(chǎn)物或衍生物。實(shí)際上，蛋白質(zhì)沉淀可以導(dǎo)致血栓形成、劑型和量的不均勻性以及注射器阻塞。此外，翻譯后修飾，諸如N-末端某些谷氨酸殘基的γ羧化和碳水化合物側(cè)鏈的添加提供了在儲存時(shí)易于修飾的可能位點(diǎn)。此外，因子VIIa還有一特別之處，由于它是一種絲氨酸蛋白酶，可能會(huì)由于自我催化而發(fā)生片段化(酶促降解)。因此，蛋白質(zhì)的任意組合物的安全性和功效與其穩(wěn)定性直接相關(guān)。維持液體形式的穩(wěn)定性一般不同于維持凍干形式的穩(wěn)定性，這是因分子運(yùn)動(dòng)的可能性高度增加、由此分子相互作用的可能性增加所致。維持濃縮形式的穩(wěn)定性也不同于上述情況，因?yàn)樵诘鞍踪|(zhì)濃度增加時(shí)有聚集物形成傾向。當(dāng)開發(fā)液體組合物時(shí)，要考慮許多因素。短期(即6個(gè)月以下)的液體穩(wěn)定性一般取決于避免宏觀的結(jié)構(gòu)改變，諸如變性和聚集。這些過程被描述在許多蛋白質(zhì)文獻(xiàn)中，并且有許多穩(wěn)定劑的實(shí)例存在。眾所周知，有效地使一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定的試劑可能會(huì)使另一種蛋白質(zhì)不穩(wěn)定。一旦該蛋白質(zhì)針對宏觀結(jié)構(gòu)改變實(shí)現(xiàn)了穩(wěn)定化，那么研發(fā)長期穩(wěn)定性(例如6個(gè)月以上)的液體組合物就取決于進(jìn)一步使該蛋白質(zhì)穩(wěn)定化而免于發(fā)生該蛋白質(zhì)所特有的降解類型。更具體類型的降解可以包括例如二硫鍵混亂、某些殘基氧化、脫酰氨基化、環(huán)化。盡管并不是總能夠準(zhǔn)確地確定各降解種類，但已研發(fā)出了試驗(yàn)方法，用于監(jiān)測微小的改變，以便監(jiān)測具體賦形劑獨(dú)特地使目的蛋白質(zhì)穩(wěn)定化的能力。理想的是組合物的pH在注射/輸注時(shí)處于生理上合適的范圍內(nèi)，否則就可能使患者產(chǎn)生疼痛和不適。有關(guān)蛋白質(zhì)組合物的一般性綜述參見例如Cleland等″穩(wěn)定蛋白質(zhì)組合物的開發(fā)蛋白質(zhì)聚集、脫酰氨基化和氧化上的密切關(guān)注″(ThedevelopmentofstableproteincompositionsAcloserlookatproteinaggregation，deamidation和oxidation)-《治療藥物載體系統(tǒng)的關(guān)鍵綜述》(CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems)1993，10(4)307-377；和Wang等″蛋白質(zhì)和肽類的非腸道組合物穩(wěn)定性和穩(wěn)定劑″(ParenteralcompositionsofproteinsandpeptidesStabilityandstabilizers)-《非腸道科學(xué)和技術(shù)雜志》(JournalofParenteralScienceandTechnology)1988(增刊)，42(2S)。因子VIIa通過幾種降解途徑，尤其是聚集(二聚化)、氧化和自溶裂解(肽主鏈剪切或“重鏈降解”)。此外，可能發(fā)生沉淀。可以通過從蛋白質(zhì)中除去水而顯著減緩許多這些反應(yīng)。然而，研發(fā)因子VIIa的含水組合物具有消除再溶解誤差的優(yōu)點(diǎn)，由此可增加給藥精確性，簡化產(chǎn)品的臨床應(yīng)用，從而增加患者的順應(yīng)性。理想的情況是，因子VIIa的組合物應(yīng)在廣泛的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)穩(wěn)定6個(gè)月以上。這樣就可能使給藥方法比較靈活。一般來說，更高濃度的劑型允許給予較低的體積，這從患者觀點(diǎn)來看是非常理想的。液體組合物在給藥和使用的便利性方面可以具有許多超過凍干產(chǎn)品的優(yōu)點(diǎn)。目前，僅有的可商購型重組制備型FVII多肽組合物為冷凍干燥的因子FVIIa產(chǎn)品，它在使用前再溶解；它含有相對低濃度的因子VIIa，例如約0.6mg/mL。一個(gè)NovoSeven小瓶(1.2mg)(NovoNordiskA/S，Denmark)含有1.2mg重組人因子VIIa、5.84mgNaCl、2.94mgCaCl2，2H2O、2.64mg甘氨酰甘氨酸(GlyGly)、0.14mg聚山梨酸酯80和60.0mg甘露糖醇；用2.0mL注射用水(WFI)將其再溶解至pH5.5。當(dāng)再溶解時(shí)，該蛋白質(zhì)溶液可穩(wěn)定使用24小時(shí)。因此，目前尚無商購的隨時(shí)可用的液體或濃縮因子VII產(chǎn)品。因此，本發(fā)明的目的在于提供含水液體因子VII多肽藥物組合物，它提供了可接受的對化學(xué)和/或物理降解產(chǎn)物，諸如酶促降解或自我催化產(chǎn)物的控制。發(fā)明概述本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，因子VII或其類似物(“因子VII多肽類”)在與包含-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的至少一種穩(wěn)定劑(iii)一起配制成液體含水藥物組合物時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出改善的穩(wěn)定性，由此允許在實(shí)際使用前長期儲存。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及含水液體藥物組合物，包含至少0.01mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和至少一種含有-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自氫、C1-4-烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及制備因子VII多肽的含水液體藥物組合物的方法，包括下列步驟提供在溶液中的濃度至少為0.01mg/mL的因子VII多肽(i)，該溶液包含適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和至少一種含有-C(＝N-Z2-R2)-NH-Z2-R2基元的穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自由氫、C1-4-烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自由氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及所述的含水液體藥物組合物用作藥物。本發(fā)明的第四個(gè)方面涉及所述的含水液體藥物組合物在制備用于治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的第五個(gè)方面涉及治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的方法，該方法包括對有此需要的受試者給予有效量的所述含水液體藥物組合物。本發(fā)明的第六個(gè)方面涉及含有所述含水液體藥物組合物、并可選地含有惰性氣體的密閉容器。發(fā)明詳述如上所述，本發(fā)明涉及研發(fā)新的包含因子VII多肽的穩(wěn)定化含水液體藥物組合物。更具體地說，該含水液體藥物組合物包含至少0.01mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和至少一種含有-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自氫、C1-4烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。術(shù)語″C1-6-烷基″用以包括含有1-6個(gè)碳原子、并且可以為直鏈或支鏈的無環(huán)和環(huán)狀飽和烴基。具體實(shí)例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丙基甲基、正戊基、異戊基、正己基等。類似地，術(shù)語″C1-4-烷基″包括含有1-4個(gè)碳原子、并且可以為直鏈或支鏈的無環(huán)和環(huán)狀飽和烴基。類似地，術(shù)語″C2-6-烯基″用以包括含有2-6個(gè)碳原子且包括一個(gè)不飽和鍵、可以為直鏈或支鏈的無環(huán)和環(huán)狀烴基。C2-6-烯基的實(shí)例為乙烯基、烯丙基、丁-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、戊-1-烯-1-基和己-1-烯-1-基。術(shù)語″可選取代的″與C1-6-烷基和C2-6-烯基結(jié)合使用時(shí)表示所述的基團(tuán)可以被選自下述基團(tuán)組成之組的基團(tuán)取代1次或幾次，優(yōu)選1-3次羥基、C1-6-烷氧基(即C1-6-烷基-氧基)、C2-6-烯氧基、氧代(形成酮基或醛官能基)、芳基、芳氧基、芳基羰基、雜環(huán)基、雜環(huán)基氧基、雜環(huán)基羰基、氨基、一-和二(C1-6-烷基)氨基、鹵素，其中任意的芳基和雜環(huán)基可以被取代，如下文對可選取代的芳基和雜環(huán)基具體所述。″鹵素″包括氟、氯、溴和碘。本文所用的術(shù)語″芳基″用以表示完全或部分芳族碳環(huán)或環(huán)系，例如苯基、萘基、1，2，3，4-四氫萘基、蒽基、菲基、芘基、苯并芘基、芴基和呫噸基，其中苯基是優(yōu)選的實(shí)例。術(shù)語″雜環(huán)基″用以表示飽和、部分未飽和、部分芳族或完全芳族碳環(huán)或環(huán)系，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子被雜原子取代，所述雜原子例如是氮(＝N-或-NH)、硫(-S-)和/或氧(-O-)原子。這類雜環(huán)基的實(shí)例為唑基、唑啉基、唑烷基、異唑基、異唑啉基、異唑烷基、二唑基、二唑啉基、二唑烷基、噻唑基、異噻唑基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、噠嗪基、哌啶基、香豆基、呋喃基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并二唑基、苯并唑基(benzoxozolyl)、二唑基、二唑啉基、二唑烷基、三唑基、三唑啉基、三唑烷基、四唑等。優(yōu)選的雜環(huán)基為5-、6-或7-元單環(huán)基團(tuán)，諸如異唑基、異唑啉基、二唑基、二唑啉基、吡咯基、吡咯啉基、二唑基、二唑啉基、三唑基、三唑啉基、咪唑基、咪唑啉基等。術(shù)語″雜環(huán)″用以指相當(dāng)于″雜環(huán)基″條目下定義的那些環(huán)。與術(shù)語″芳基″、″雜環(huán)基″和″雜環(huán)″結(jié)合使用的術(shù)語″可選取代的″用以表示所述的基團(tuán)可以被選自下述組中的基團(tuán)取代一次或幾次，優(yōu)選1-3次羥基(當(dāng)存在于烯醇系統(tǒng)上時(shí)可以以互變酮基形式表示)、C1-6-烷基、C2-6-烯基、苯基、芐基、C1-6-烷氧基、氧代(可以以互變烯醇形式表示)、羧基、C1-6-烷氧羰基、C1-6-烷基羰基、氨基、一-和二(C1-6-烷基)氨基、二鹵代-C1-4-烷基、三鹵代-C1-4-烷基和鹵素。取代基最典型的實(shí)例為羥基、C1-4-烷基、苯基、芐基、C1-4-烷氧基、氧代、氨基、一-和二甲氨基和鹵素。除R1和R2可以獨(dú)立地選自氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組外，還可能的情況是-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的部分可以為雜環(huán)的組成部分，而該基元的其它部分具有分別針對Z1、Z2、R1和R2所定義的含義。在某些關(guān)注的實(shí)施方案中，-C＝N-Z1-R1可以形成雜環(huán)的組成部分，所述的雜環(huán)選自1，2-二唑環(huán)、異唑環(huán)、1，2，4-三唑環(huán)和1，2，4-二唑環(huán)組成的組；或者-C-NH-Z2-R2可以形成雜環(huán)的組成部分，所述的雜環(huán)選自1，2-二唑啉環(huán)、異唑啉環(huán)、1，2，4-三唑啉環(huán)和1，2，4-二唑啉環(huán)組成之組。這類雜環(huán)可以如上所述被取代。在某些實(shí)施方案中，R1和R2中至少一個(gè)為氫，例如兩者均為氫。此外，在某些可以與上述實(shí)施方案組合的實(shí)施方案中，Z1和Z2中至少一個(gè)為單鍵，例如兩者均為單鍵。在特殊實(shí)施方案中，R1和R2兩者均為氫且Z1和Z2均為單鍵。-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元被認(rèn)為對穩(wěn)定劑(iii)的穩(wěn)定作用而言特別重要。特別地，-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元被認(rèn)為模擬因子VII多肽底物的精氨酸部分。在更具體的實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為選自含有-C-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的脒化合物和含有＞N-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的胍類化合物組成的組中的至少一種。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為至少一種脒化合物，該脒化合物選自含有基元-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的芐脒類組成的組，其中C6H4表示可選取代的苯環(huán)，其中芐脒(R1和R2為氫，Z1和Z2為單鍵)構(gòu)成具體的實(shí)施方案(參見實(shí)驗(yàn)部分)。在其它具體實(shí)施方案中，芐脒類含有基元＞N-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2，其中C6H4表示可選取代的苯環(huán)，即鄰-氨基-芐脒、間-氨基-芐脒或?qū)?氨基-芐脒，其中對-氨基-芐脒是目前最有優(yōu)選的。對-氨基-芐脒類的其它解釋性實(shí)例由下列文獻(xiàn)公開Aventis，EP1162194A1，特別參見其中權(quán)利要求1-6和-部分中所述的那些；以及EP1270551A1，特別參見權(quán)利要求1和2以及-部分中所述的那些。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iiib)為選自含有-CH2-NH-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的胍類化合物組成的組中的至少一種胍化合物。胍化合物的實(shí)例為選自精氨酸、精氨酸衍生物和含有至少一個(gè)精氨酸殘基的2-5個(gè)氨基酸殘基的肽類組成之組中的那些。精氨酸構(gòu)成具體的實(shí)施方案(參見實(shí)驗(yàn)部分)。術(shù)語″精氨酸衍生物″用以包括精氨酸同系物、N-末端官能化的精氨酸(例如N-甲基化和N-酰化(例如乙?；?衍生物)、C-末端官能化的精氨酸(例如C-酰胺化、C-烷基酰胺化和C-烷基化衍生物)及其組合。如上所述，穩(wěn)定劑的一種重要基元為-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2。該穩(wěn)定劑的其它部分也可能是重要的，特別是在穩(wěn)定作用最優(yōu)化和患者的耐受性方面。一般來說，穩(wěn)定劑具有通式Y(jié)-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2，其中Y為有機(jī)基團(tuán)。通常將基團(tuán)Y選擇成可以改善穩(wěn)定作用的功效。此外，基團(tuán)Y可以含有一個(gè)或多個(gè)通式-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的其它基元。穩(wěn)定劑的分子量一般至多為1000Da，諸如至多為500Da。本發(fā)明的化合物可以帶有一個(gè)或多個(gè)不對稱中心，并且除非另有說明，認(rèn)為作為分離的其立體異構(gòu)體(旋光異構(gòu)體)、純或部分純化的立體異構(gòu)體或其外消旋混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。穩(wěn)定劑(或多種穩(wěn)定劑)(iii)的濃度一般至少為1μM。理想(或必要)的濃度一般取決于所選擇的穩(wěn)定劑(或多種穩(wěn)定劑)，更具體地說是取決于所選擇的穩(wěn)定劑對因子VII多肽的結(jié)合親和性。在不同的實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)的存在濃度至少為5μM、至少為10μM、至少為20μM、至少為50μM、至少為100μM、至少為150μM、至少為250μM、至少為500μM、至少為1mM、至少為2mM、至少為4mM、至少為5mM、至少為8mM、至少為9mM、至少為10mM、至少為15mM、至少為20mM，諸如在1-10000μM、10-10000μM、20-10000μM、50-10000μM、10-5000μM、10-2000μM、20-5000μM、20-2000μM、50-5000μM、0.1-100mM、0.1-75mM、0.1-50mM、0.1-10mM、0.2-75mM、0.2-50mM、0.2-20mM、0.5-75mM或0.5-50mM的范圍。在一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為芐脒，并且所述試劑的濃度至少為1mM，諸如至少為2mM，不過，預(yù)計(jì)取代的芐脒類可能更為有效，因而它們可以以較低濃度加入。在一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)不是芐脒。在一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為精氨酸，并且所述試劑的濃度至少為10mM，諸如至少為50mM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為對氨基芐脒，并且所述試劑的濃度至少為0.001mM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為具有如下通式的S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基(carbamimidoylphenyl))-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺并且所述試劑的濃度至少為0.001mM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為具有如下通式的S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-(1-苯基乙基)-乙酰胺并且所述試劑的濃度至少為0.001mM。在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)為具有如下通式的N-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺并且所述試劑的濃度至少為0.001mM。在不同實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑(iii)與因子FVII多肽(活性劑(iii)FVII)的摩爾比為大于0.1、大于0.5、大于1、大于2、大于5、大于10、大于25、大于100、大于250、大于1000、大于2500或大于5000，諸如在0.1-10000、0.1-5000、0.1-2500、0.1-1000、0.1-250、0.1-100、0.1-25、0.1-10、0.5-10000、0.5-5000、0.5-2500、0.5-1000、0.5-250、0.5-100、0.5-25、0.5-10、1-10000、1-5000、1-2500、1-1000、1-250、1-100、1-25、1-10、10-10000、10-5000、10-250、1000-10000或1000-5000的范圍內(nèi)。理想的濃度一般取決于所選擇的穩(wěn)定劑(或多種穩(wěn)定劑)，更具體地說是取決于所選擇的試劑與因子VII多肽的結(jié)合親合性。所述藥物組合物的生物學(xué)作用主要?dú)w因于存在因子VII多肽，不過可以與因子VII多肽一起包含其它活性組分。本文所用的術(shù)語″因子VII多肽″包括野生型因子VII(即具有美國專利US4,784,950中公開的氨基酸序列的多肽)以及表現(xiàn)出與野生型因子VII基本上相同或有所改善的生物學(xué)活性的因子VII變體。術(shù)語″因子VII″用以包括未裂解(酶原)形式的因子VII多肽類以及已經(jīng)蛋白水解加工成其相應(yīng)生物學(xué)活性形式(可以被命名為因子VIIa)的那些因子VII多肽類。一般來說，因子VII在殘基152與153之間被裂解，生成因子VIIa。術(shù)語″因子VII多肽″還包括這樣的多肽類，包括變體，其中因子VIIa生物學(xué)活性與野生型因子VIIa的活性相比基本上得到改變或在一定程度上得到降低。這些多肽包括，但不限于引入了改變或破壞所述多肽的生物學(xué)活性的特定氨基酸序列改變的因子VII或因子VIIa。因子VIIa在凝血中的生物學(xué)活性來源于其(i)結(jié)合組織因子(TF)和(ii)催化因子IX或因子X發(fā)生蛋白水解裂解而產(chǎn)生活化的因子IX或X(分別為因子IXa或Xa)的能力。為了本發(fā)明的目的，可以通過測定制劑促進(jìn)凝血的能力來對因子VII多肽類的生物學(xué)活性(″因子VII生物學(xué)活性″)定量，參見本文所述的試驗(yàn)4。在該試驗(yàn)中，將生物學(xué)活性表示為與對照樣品相比凝血時(shí)間的縮短，并通過與含有1單位/mL因子VII活性的匯集人血清標(biāo)準(zhǔn)品相比較而將其轉(zhuǎn)化成″因子VII單位″?；蛘?，可以通過下列方式對因子VIIa生物學(xué)活性進(jìn)行定量(i)測定因子VIIa或因子VII-相關(guān)多肽在包含包埋在脂膜中的TF和因子X的系統(tǒng)中產(chǎn)生活化因子X(因子Xa)的能力(Persson等《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)27219919-19924，1997)；(ii)測定含水系統(tǒng)中因子X的水解(″體外蛋白水解試驗(yàn)″，參見下文的試驗(yàn)2)；(iii)使用基于表面基元共振的儀器測定因子VIIa或因子VII-相關(guān)多肽與TF的物理結(jié)合(Persson，《FEBS通訊》(FEBSLetts.)413359-363，1997)；(iv)測定因子VIIa和/或因子VII-相關(guān)多肽對合成底物的水解(″體外水解試驗(yàn)″，參見下文的試驗(yàn)1)；或(v)測定TF-依賴性體外系統(tǒng)中凝血酶的產(chǎn)生(參見下文的試驗(yàn)3)。與野生型因子VIIa相比具有基本上相同或改善的生物學(xué)活性的因子VII變體包括在凝血試驗(yàn)(試驗(yàn)4)、蛋白水解試驗(yàn)(試驗(yàn)2)或如上所述的TF結(jié)合試驗(yàn)中的一種或多種中測試時(shí)，表現(xiàn)出在相同細(xì)胞類型中已經(jīng)產(chǎn)生的因子VIIa的比活性的至少約25％，諸如至少約50％，至少約75％或至少約90％的那些變體。與野生型因子VIIa相比具有基本上降低的生物學(xué)活性的因子VII變體包括在凝血試驗(yàn)(試驗(yàn)4)、蛋白水解試驗(yàn)(試驗(yàn)2)或如上所述的TF結(jié)合試驗(yàn)中的一種或多種中測試時(shí)，表現(xiàn)出在相同細(xì)胞類型中已經(jīng)產(chǎn)生的野生型因子VIIa的比活性的約25％以下，諸如約10％以下或約5％以下的那些變體。與野生型因子VII相比具有基本上改變的生物學(xué)活性的因子VII變體包括，但不限于表現(xiàn)出TF非依賴性因子X蛋白水解活性的因子VII變體以及結(jié)合TF、但不裂解因子X的那些變體。無論表現(xiàn)出與野生型因子VII基本上相同或更好的生物學(xué)活性還是與野生型因子VII相比表現(xiàn)出基本上改變或降低的生物學(xué)活性，因子VII的變體均包括，但不限于具有因一個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入、缺失或取代而不同于野生型因子VII序列的氨基酸序列的多肽類。與野生型因子VII具有基本上相同生物學(xué)活性的因子VII變體的非限制性實(shí)例包括S52A-FVIIa、S60A-FVIIa(Lino等《生物化學(xué)與生物物理學(xué)學(xué)報(bào)》(Arch.Biochem.Biophys.)352182-192，1998)；如美國專利US5,580,560中公開的表現(xiàn)出增加的蛋白水解穩(wěn)定性的FVIIa變體；在殘基290與291或殘基315與316之間已發(fā)生蛋白水解裂解的因子VIIa(Mollerup等《生物技術(shù)與生物工程》(Biotechnol.Bioeng.)48501-505，1995)；因子VIIa的氧化形式(Kornfelt等《生物化學(xué)與生物物理學(xué)學(xué)報(bào)》(Arch.Biochem.Biophys.)36343-54，1999)；如PCT/DK02/00189中公開的FVII變體；和如WO02/38162(ScrippsResearchInstitute)中公開的表現(xiàn)出增加的蛋白水解穩(wěn)定性的FVII變體；如WO99/20767(UniversityofMinnesota)中公開的具有被修飾的Gla-結(jié)構(gòu)域并表現(xiàn)出增強(qiáng)的膜結(jié)合的FVII變體；和如WO01/58935(MaxygenApS)中公開的FVII變體。與野生型FVIIa相比具有增加的生物學(xué)活性的因子VII變體的非限制性實(shí)例包括如WO01/83725、WO02/22776、WO02/077218、WO03/27147、WO03/37932、WO02/38162(ScrippsResearchInstitute)中公開的FVII變體以及如JP2001061479(Chemo-Sero-TherapeuticResInst.)中公開的具有增強(qiáng)活性的FVIIa變體。與野生型因子VII相比具有基本上降低的或改變的生物學(xué)活性的因子VII變體的非限制性實(shí)例包括R152E-FVIIa(Wildgoose等《生物化學(xué)》(Biochem)293413-3420，1990)。因子VII多肽類的實(shí)例包括，但不限于野生型因子VII，L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，andS336G-FVII，L305V/K337A-FVII，L305V/V158D-FVII，L305V/E296V-FVII，L305V/M298Q-FVII，L305V/V158T-FVII，L305V/K337A/V158T-FVII，L305V/K337A/M298Q-FVII，L305V/K337A/E296V-FVII，L305V/K337A/V158D-FVII，L305V/V158D/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V-FVII，L305V/V158T/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V-FVII，L305V/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/K316H-FVII，S314E/K316Q-FVII，S314E/L305V-FVII，S314E/K337A-FVII，S314E/V158D-FVII，S314E/E296V-FVII，S314E/M298Q-FVII，S314E/V158T-FVII，K316H/L305V-FVII，K316H/K337A-FVII，K316H/V158D-FVII，K316H/E296V-FVII，K316H/M298Q-FVII，K316H/V158T-FVII，K316Q/L305V-FVII，K316Q/K337A-FVII，K316Q/V158D-FVII，K316Q/E296V-FVII，K316Q/M298Q-FVII，K316Q/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D-FVII，S314E/L305V/E296V-FVII，S314E/L305V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/K337A/E296V-FVII，S314E/L305V/K337A/V158D-FVII，S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V-FVII，S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V-FVII，S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D-FVII，K316H/L305V/E296V-FVII，K316H/L305V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/K337A/E296V-FVII，K316H/L305V/K337A/V158D-FVII，K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V-FVII，K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V-FVII，K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D-FVII，K316Q/L305V/E296V-FVII，K316Q/L305V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII，K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII，K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII，K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/E296V/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII、S52A-因子VII，S60A-因子VII；R152E-因子VII、S344A-因子VII、缺乏Gla結(jié)構(gòu)域的因子VIIa；和P11Q/K33E-FVII、T106N-FVII、K143N/N145T-FVII、V253N-FVII、R290N/A292T-FVII、G291N-FVII、R315N/V317T-FVII、K143N/N145T/R315N/V317T-FVII；和在233Thr-240Asn的氨基酸序列中具有取代、添加或缺失的FVII、在304Arg-329Cys的氨基酸序列中具有取代、添加或缺失的FVII以及在Ile153-Arg223的氨基酸序列中具有取代、缺失或添加的FVII。在某些實(shí)施方案中，因子VII多肽為人因子VIIa(hFVIIa)，優(yōu)選重組制備的人因子VIIa(rhVIIa)。在其它實(shí)施方案中，因子VII多肽為因子VII序列變體。在某些實(shí)施方案中，因子VII多肽具有不同于野生型人因子VII的糖基化。在不同實(shí)施方案中，例如在其中因子VII多肽為因子VII-相關(guān)多肽或因子VII序列變體的那些實(shí)施方案中，當(dāng)在如本說明書中所述的″體外蛋白水解試驗(yàn)″(試驗(yàn)2)中測試時(shí)，因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之比至少約為1.25，優(yōu)選至少約2.0或4.0，最優(yōu)選至少約8.0。在某些實(shí)施方案中，因子VII多肽類為因子VII-相關(guān)多肽類，尤其是變體，其中當(dāng)在″體外水解試驗(yàn)″(參見下文試驗(yàn)1)中測試時(shí)，所述的因子VII多肽活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)活性之比至少約為1.25；在其它實(shí)施方案中，該比值至少約為2.0；在其它實(shí)施方案中，該比值至少約為4.0。在藥物組合物中，通常比較理想的是活性組分的濃度可使得單位劑量的施用不會(huì)對患者產(chǎn)生不必要的不適。因此，大于約2-10mL的單位劑量通常不理想。為了本發(fā)明的目的，因子VII多肽的濃度至少為0.01mg/mL。在不同實(shí)施方案中，因子VII多肽的存在濃度為0.01-20mg/mL；0.1-20mg/mL；0.1-15mg/mL；0.1-10mg/mL；0.5-5.0mg/mL；0.6-4.0mg/mL；1.0-4.0mg/mL；0.1-5mg/mL；0.1-4.0mg/mL；0.1-2mg/mL或0.1-1.5mg/mL?？梢詫⒁蜃覸IIa濃度簡便地表示為mg/mL或IU/mL，其中1mg通常表示43,000-56,000IU或更高。為了使所述含水液體藥物組合物可用于直接對哺乳動(dòng)物，諸如人進(jìn)行非腸道給藥，通常需要將組合物的pH值保持在合理界限范圍內(nèi)，諸如約4.0-約9.0。為了確保在指定條件下有合適pH值，該藥物組合物中還包含適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)。術(shù)語″緩沖劑″包括那些將溶液pH維持在約4.0-約9.0的可接受范圍內(nèi)的試劑或試劑組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，緩沖劑(ii)為選自下列組中的至少一種成分MES、PIPES、ACES、BES、TES、HEPES、TRIS、組氨酸(例如L-組氨酸)、咪唑、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰胺、磷酸(例如磷酸鈉或磷酸鉀)、乙酸(例如乙酸銨、乙酸鈉或乙酸鈣)、乳酸、戊二酸、檸檬酸(例如檸檬酸鈉或檸檬酸鉀)、酒石酸、蘋果酸、馬來酸和琥珀酸的酸和鹽。應(yīng)理解緩沖劑可以包括兩種或多種成分的混合物，其中所述的混合物能夠提供指定范圍內(nèi)的pH值。作為實(shí)例，可以提及的有乙酸和乙酸鈉等。選擇緩沖劑的濃度以便維持溶液的優(yōu)選pH。在不同實(shí)施方案中，緩沖劑的濃度為1-100mM；1-50mM；1-25mM；或2-20mM。在一個(gè)實(shí)施方案中，將組合物的pH保持在約4.0-約9.0；5.0-約9.0；約5.0-約8.0；諸如約5.0-約7.5，約5.0-約7.0，約5.0-約6.5；約5.0-約6.0，約5.5-約7.0，約5.5-約6.5，約6.0-約7.0，約6.0-約6.5，約6.3-約6.7，或約5.2-約5.7。除上述三種主要成分之外，所述的含水液體藥物組合物中還可以包含有益于該組合物的制備、配制、穩(wěn)定性或給藥的額外成分。因此，所述的藥物組合物還可以包含非離子型表面活性劑。表面活性劑(也稱作去污劑)一般包括那些防止蛋白質(zhì)接觸空氣/溶液界面誘導(dǎo)的應(yīng)力和溶液/表面誘導(dǎo)的應(yīng)力(例如導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集)的試劑。典型類型的非離子型表面活性劑為聚山梨酸酯類、伯洛沙姆類、聚氧乙烯烷基醚類、聚乙烯/聚丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯硬脂酸酯類和聚氧乙烯蓖麻油。非離子型表面活性劑的解釋性實(shí)例為Tween、聚山梨酸酯20，聚山梨酸酯80、Brij-35(聚氧乙烯十二烷基醚)、伯洛沙姆188、伯洛沙姆407、PEG8000、Pluronic多元醇類、聚氧基-23-月桂基醚、Myrj49和克列莫佛A(CremophorA)。在一個(gè)實(shí)施方案中，非離子型表面活性劑的存在量按重量計(jì)為0.005-2.0％。此外，該組合物中可以進(jìn)一步包含張力調(diào)節(jié)劑(v)。本文所用的術(shù)語″張力調(diào)節(jié)劑″包括提供溶液的重量克分子滲透壓濃度的試劑。張力調(diào)節(jié)劑(v)包括選自下列試劑組成的組中的至少一種中性鹽、氨基酸、2-5個(gè)氨基酸殘基的肽類、單糖類、二糖類、多糖類和糖醇類。在某些實(shí)施方案中，組合物中包含這類試劑中兩種或多種的組合。所謂″中性鹽″指的是在溶于水性溶液時(shí)既非酸、也非堿的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種張力調(diào)節(jié)劑為選自鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽組成之組中的中性鹽，諸如氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、乙酰丙酸鈣、氯化鎂、乙酸鎂、葡萄糖酸鎂和乙酰丙酸鎂。在另一個(gè)實(shí)施方案中，張力調(diào)節(jié)劑(v)包括氯化鈉與選自氯化鈣、乙酸鈣、氯化鎂和乙酸鎂組成之組中的至少一種的組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，張力調(diào)節(jié)劑(v)為選自氯化鈉、氯化鈣、蔗糖、葡萄糖和甘露糖醇組成之組中的至少一種。在不同的實(shí)施方案中，張力調(diào)節(jié)劑(v)的存在濃度至少為1mM、至少為5mM、至少為10mM、至少為20mM、至少為50mM、至少為100mM、至少為200mM、至少為400mM、至少為800mM、至少為1000mM、至少為1200mM、至少為1500mM、至少為1800mM、至少為2000mM或至少為2200mM。在一系列實(shí)施方案中，張力調(diào)節(jié)劑(v)的存在濃度為5-2200mM，諸如25-2200mM、50-2200mM、100-2200mM、200-2200mM、400-2200mM、600-2200mM、800-2200mM、1000-2200mM、1200-2200mM、1400-2200mM、1600-2200mM、1800-2200mM或2000-2200mM；5-1800mM、25-1800mM、50-1800mM、100-1800mM、200-1800mM、400-1800mM、600-1800mM、800-1800mM、1000-1800mM、1200-1800mM、1400-1800mM、1600-1800mM；5-1500mM、25-1400mM、50-1500mM、100-1500mM、200-1500mM、400-1500mM、600-1500mM、800-1500mM、1000-1500mM、1200-1500mM；5-1200mM、25-1200mM、50-1200mM、100-1200mM、200-1200mM、400-1200mM、600-1200mM或800-1200mM。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)為離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)。本文所用的術(shù)語″離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑″包括對溶液的離子強(qiáng)度產(chǎn)生影響的試劑。這些試劑包括，但不限于中性鹽、氨基酸、2-5個(gè)氨基酸殘基的肽類。在某些實(shí)施方案中，組合物中包含這類試劑中的兩種或多種的組合。離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)的非限制性實(shí)例為中性鹽，諸如氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的試劑(v/a)為氯化鈉。術(shù)語″離子強(qiáng)度″為由下列方程定義的溶液的離子強(qiáng)度(μ)μ＝∑([i](Zi2))，其中μ為離子強(qiáng)度，[i]為離子的毫摩爾濃度，且Zi為該離子的電荷(+或-)″(例如，參見Solomon《化學(xué)教育雜志》(JournalofChemicalEducation)，78(12)1691-92，2001；JamesFritz和GeorgeSchenk《定量分析化學(xué)》(QuantitativeAnalyticalChemistry)，1979)。在本發(fā)明的不同實(shí)施方案中，組合物的離子強(qiáng)度至少為50mM，諸如至少為75mM、至少為100mM、至少為150mM、至少為200mM、至少為250mM、至少為400mM、至少為500mM、至少為650mM、至少為800mM、至少為1000mM、至少為1200mM、至少為1600mM、至少為2000mM、至少為2400mM、至少為2800mM或至少為3200mM。在某些具體的實(shí)施方案中，張力調(diào)節(jié)劑(v)和離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)的總濃度在1-1000mM的范圍內(nèi)，諸如1-500mM、1-300mM、10-200mM或20-150mM；或諸如100-1000mM、200-800mM或500-800mM，這取決于任意其它組分對張力和離子強(qiáng)度可能產(chǎn)生的影響。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物為等滲的；在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物為高滲的。術(shù)語″等滲″指的是″與血清等滲″，即在約300±50毫滲克分子/kg(milliosmol/kg)。張力指的是給藥前溶液的重量克分子滲透濃度的度量值。術(shù)語″高滲″表示高于血清生理水平的重量克分子滲透濃度的水平，諸如高于300±50毫滲克分子/kg的水平。此外，本發(fā)明的具體實(shí)施方案涉及穩(wěn)定劑(iii)與適當(dāng)高濃度的離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)的組合。在它的一個(gè)實(shí)施方案中，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)選自鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽組成的組。在該實(shí)施方案中，離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)，即鈉鹽、鈣鹽和/或鎂鹽的存在濃度為15-1500mM，諸如15-1000mM、25-1000mM、50-1000mM、100-1000mM、200-1000mM、300-1000mM、400-1000mM、500-1000mM、600-1000mM、700-1000mM；15-800mM、25-800mM、50-800mM、100-800mM、200-800mM、300-800mM、400-800mM、500-800mM；15-600mM、25-600mM、50-600mM、100-600mM、200-600mM、300-600mM；15-400mM、25-400mM、50-400mM或100-400mM。在這些實(shí)施方案中，鈉鹽可以為氯化鈉，鈣鹽可以選自氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣和乙酰丙酸鈣組成的組，并且鎂鹽可以選自氯化鎂、乙酸鎂、葡萄糖酸鎂、乙酰丙酸鎂和強(qiáng)酸的鎂鹽組成的組。在更具體的實(shí)施方案中，鈣鹽和/或鎂鹽可以與氯化鈉聯(lián)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物中包含一種或多種選自鈣(Ca2+)鹽和鎂(Mg2+)鹽組成之組中的離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑，例如一種或多種選自氯化鈣、乙酸鈣、葡萄糖酸鈣、乙酰丙酸鈣、氯化鎂、乙酸鎂、硫酸鎂、葡萄糖酸鎂、乙酰丙酸鎂、強(qiáng)酸的鎂鹽組成之組中的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，鈣(Ca2+)和/或鎂(Mg2+)的存在濃度至少約為0.1μM，諸如至少約為0.5μM，至少約為1μM，至少約為5μM，至少約為10μM，至少約為50μM，至少約為100μM，至少約為1mM，至少約為2mM，至少約為5mM，或至少約為10mM。在具體的實(shí)施方案中，所述的組合物包含至少2mMCa2+。在不同的實(shí)施方案中，鈣離子(Ca2+)和/或鎂離子(Mg2+)與FVII多肽的摩爾比為0.001-750；0.001-250；0.001-100；0.001-10；0.001-1.0；0.001-0.5；0.5-750；0.5-250；0.5-100；0.5-10；0.5-1.0；0.001-0.4999；0.005-0.050。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，未配位的鈣(Ca2+)和/或鎂(Mg2+)與因子VII多肽的摩爾比低于0.5，例如在0.001-0.499、諸如0.005-0.050的范圍內(nèi)，或在0.000-0.499、諸如在0.000-0.050的范圍內(nèi)或約為0.000。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，未配位的鈣(Ca2+)與因子VII多肽的摩爾比低于0.5，例如在0.001-0.499、諸如0.005-0.050的范圍內(nèi)，或在0.000-0.499、諸如在0.000-0.050的范圍內(nèi)或約為0.000。本文所用的術(shù)語″未配位的鈣和/或鎂離子的濃度″用以指鈣和/或鎂離子總濃度與和鈣/鎂螯合劑結(jié)合的鈣和/或鎂濃度之差。在這方面，盡管預(yù)計(jì)鈣和/或鎂在某些條件下將結(jié)合因子VII多肽或與之相關(guān)聯(lián)，但不將因子VII多肽看作″鈣/鎂螯合劑″。在另一個(gè)實(shí)施方案中，未配位的鈣和/或鎂離子(Ca2+)與因子VII多肽的摩爾比高于0.5。在另一個(gè)實(shí)施方案中，未配位的鈣離子與因子VII多肽的摩爾比高于0.5。為了獲得鈣離子(Ca2+)和/或鎂離子與因子VII多肽之間的低相對比值，有必要或期望例如通過使所述組合物在適合于除去Ca2+和/或Mg2+的條件下接觸離子交換物質(zhì)而除去過量的鈣和/或鎂離子，或者加入鈣/鎂螯合劑以便結(jié)合(螯合)過量的鈣和/或鎂離子。這在來自上述配制步驟之前的加工步驟的溶液中鈣和/或鎂離子與因子VII多肽之比超出上述范圍的情況下特別相關(guān)。″鈣/鎂螯合劑″的實(shí)例包括EDTA、檸檬酸、NTA、DTPA、酒石酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、HIMDA、ADA和類似化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物可以進(jìn)一步包含抗氧化劑(vi)。在不同的實(shí)施方案中，抗氧化劑選自L-甲硫氨酸、D-甲硫氨酸、甲硫氨酸類似物、含甲硫氨酸的肽類、甲硫氨酸同系物、抗壞血酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、胱氨酸和胱硫醚(cysstathionine)組成的組。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗氧化劑為L-甲硫氨酸?？寡趸瘎┑臐舛纫话銥?.1-5.0mg/mL，諸如0.1-4.0mg/mL、0.1-3.0mg/mL、0.1-2.0mg/ml或0.5-2.0mg/mL。在具體的實(shí)施方案中，組合物中不包含抗氧化劑；相反，因子VII多肽對氧化的敏感性通過排除空氣來控制。抗氧化劑的應(yīng)用當(dāng)然也可以與排除空氣相聯(lián)用。因此，本發(fā)明還提供了含有本文所述的含水液體藥物組合物和可選地惰性氣體的密閉容器(例如小瓶或藥筒(諸如用于筆型涂藥器的藥筒))。所述的惰性氣體可以選自氮?dú)狻鍤獾冉M成的組。該容器(例如小瓶或藥筒)一般由玻璃或塑料(特別是玻璃)制成，可選地用橡膠隔片或其它具有保護(hù)藥物組合物完整性的允許穿透的封閉部件封閉。在本文的具體實(shí)施方案中，該組合物不含防腐劑(vii)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述容器為包封在密閉袋中的小瓶或藥筒，例如密封塑料袋，諸如分層的(例如金屬(諸如鋁)薄塑料袋)。除必要成分、非離子型表面活性劑(iv)、張力調(diào)節(jié)劑(v)和可選的抗氧化劑(vi)外，藥物組合物中還可以進(jìn)一步包含防腐劑(vii)。組合物中可以包括防腐劑以阻止微生物生長，由此允許因子VII多肽類的″多用途″包裝。防腐劑的實(shí)例包括苯酚、芐醇、鄰-甲酚、間-甲酚、對-甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯扎氯銨和芐索氯銨。防腐劑的存在濃度一般為0.1-20mg/mL，這取決于pH范圍和防腐劑類型。此外，組合物中還可以包括能夠抑制脫酰氨基化和異構(gòu)化的試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述含水液體藥物組合物包含0.1-20mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；含有基元-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的濃度至少為5μM的至少一種穩(wěn)定劑(iii)；非離子型表面活性劑(iv)；和濃度至少為5mM的至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，含水液體藥物組合物包含0.1-10mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；含有基元-CH2-NH-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的濃度至少為500μM的至少一種穩(wěn)定劑(iii)；非離子型表面活性劑(iv)；和濃度至少為5mM的至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)。在本文中，以″約″形容的pH值應(yīng)理解為±0.1，例如約pH8.0包括pH8.0±0.1。百分比在提及溶于溶液的固體和混入溶液的液體時(shí)均是(重量/重量)。例如，就Tween而言，它為100％原料重量/溶液重量。本發(fā)明的組合物可用作穩(wěn)定的、優(yōu)選隨時(shí)可用的因子VII多肽類的組合物。此外，相信本文所述的原理、指導(dǎo)方針和具體實(shí)施方案同樣可以應(yīng)用于因子VII多肽類的批量儲存，只是需要在細(xì)節(jié)上作必要的修改。當(dāng)在2℃-8℃范圍的溫度下儲存時(shí)，這些組合物一般可穩(wěn)定至少6個(gè)月，優(yōu)選長達(dá)36個(gè)月。當(dāng)在2℃-8℃下儲存至少6個(gè)月時(shí)，這些組合物在化學(xué)和/或物理上是穩(wěn)定的，特別是在化學(xué)上穩(wěn)定。術(shù)語″穩(wěn)定″用以表示(i)在2℃-8℃下儲存6個(gè)月后，基本上如本說明書試驗(yàn)4中所述一步凝血試驗(yàn)中所測定的，組合物中保持了至少50％的其起始生物學(xué)活性；或(ii)在2℃-8℃下儲存6個(gè)月后，重鏈降解產(chǎn)物含量的增加至多為因子VII多肽起始含量的40％(w/w)。術(shù)語″起始含量″指的是在制備組合物時(shí)加入到組合物中的因子VII多肽類的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定的組合物在2-8℃下儲存6個(gè)月后保持了至少70％，諸如至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的起始生物學(xué)活性。在本發(fā)明的不同實(shí)施方案中，穩(wěn)定的組合物在儲存至少30天，諸如60天或90天后，基本上如本說明書試驗(yàn)4中所述一步凝血試驗(yàn)中所測定的，進(jìn)一步保持了至少50％的其起始生物學(xué)活性。在不同的實(shí)施方案中，重鏈降解產(chǎn)物在穩(wěn)定組合物中的含量增加不大于約30％(w/w)、不大于約25％(w/w)、不大于約20％(w/w)、不大于約15％(w/w)、不大于約10％(w/w)、不大于約5％(w/w)或不大于約3％(w/w)的因子VII多肽的起始含量。為測定重鏈降解產(chǎn)物含量的目的，使用顆粒大小為5μm且孔徑為300的享有產(chǎn)權(quán)的4.5×250mm丁基鍵合型二氧化硅柱進(jìn)行反相HPLC。柱溫70℃。A-緩沖液0.1％v/v三氟乙酸。B-緩沖液0.09％v/v三氟乙酸、80％v/v乙腈。用從X到(X+13)％B的線性梯度在30分鐘內(nèi)洗脫柱。調(diào)節(jié)X，使得FVIIa以保留時(shí)間約為26分鐘進(jìn)行洗脫。流速1.0mL/分鐘。檢測214nm。上樣量25μgFVIIa。術(shù)語因子VII多肽類的″物理穩(wěn)定性″涉及因子VII多肽類的二聚化、寡聚化和多聚化形式的不溶性和/或可溶性聚集物形成以及該分子的任意結(jié)構(gòu)形變和變性。物理穩(wěn)定的組合物包括在外觀上保持澄清的組合物。常常通過在不同溫度下儲存不同時(shí)間期限后的視覺檢查和濁度評價(jià)組合物的物理穩(wěn)定性。在具有深色背景的銳利聚焦光中進(jìn)行組合物的視覺檢查。當(dāng)它表現(xiàn)出可視濁度時(shí)，將組合物分類為物理上不穩(wěn)定的。術(shù)語″化學(xué)穩(wěn)定性″用以涉及在加速條件下在溶液中儲存時(shí)，因子VII多肽類的任何化學(xué)改變的形成。實(shí)例為水解、脫酰氨化和氧化以及導(dǎo)致形成因子VII多肽類片段的酶促降解。特別地，含硫的氨基酸易于氧化，形成相應(yīng)的亞砜類。術(shù)語″化學(xué)上穩(wěn)定的″用以表示在2℃-8℃下儲存6個(gè)月后，如一步凝血試驗(yàn)(試驗(yàn)4)中所測定的，組合物保持至少50％的其起始生物學(xué)活性。本發(fā)明在另一個(gè)方面中還提供了制備因子VII多肽的含水液體藥物組合物的方法，包括下列步驟提供在溶液中的濃度至少為0.01mg/mL的因子VII多肽(i)，該溶液中包含適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和含有-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的至少一種穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自氫、C1-4-烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。使用方法在藥物領(lǐng)域中，可以使用本文定義的含水液體藥物組合物。因此，本發(fā)明還特別提供了如本文定義的含水液體藥物組合物用作藥物，更具體地說是用作治療VII-反應(yīng)性綜合征的藥物。因此，本發(fā)明還提供了如本文定義的含水液體藥物組合物在制備用于治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的藥物中的應(yīng)用，以及治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的方法，該方法包括對有此需要的受試者給予有效量的如本文定義的含水液體藥物組合物。本發(fā)明的制劑可以用于治療任何因子VII-反應(yīng)性綜合征，諸如出血障礙，包括那些因凝血因子缺乏導(dǎo)致的障礙(例如A型血友病、B型血友病、凝血因子XI缺乏、凝血因子VII缺乏)；血小板減少或維勒布蘭德病或凝血因子抑制劑導(dǎo)致的出血障礙；和腦內(nèi)出血或因任何原因?qū)е碌倪^量出血。這些制劑還可以與手術(shù)或其它創(chuàng)傷療法相結(jié)合對患者給藥或?qū)邮芸鼓煼ǖ幕颊呓o藥。術(shù)語″有效量″為可以由有資格的醫(yī)務(wù)工作者確定的有效劑量，該醫(yī)務(wù)工作者可以逐步確定劑量以獲得所需反應(yīng)。對于劑量需考慮的因素包括功效、生物利用度、所需藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)特性、治療的疾病、與患者相關(guān)的因素(例如體重、健康狀況、年齡等)、共同給予的藥物(例如抗凝藥)的存在情況、給藥時(shí)間或醫(yī)務(wù)工作者公知的其它因素。將術(shù)語″治療″定義為控制和護(hù)理受試者，例如哺乳動(dòng)物，特別是人，目的在于對抗疾病、病癥或障礙，包括給予因子VII多肽以防止癥狀或并發(fā)癥發(fā)作，或者緩解癥狀或并發(fā)癥，或者消除疾病、病癥或障礙?？梢酝ㄟ^非腸道途徑對需要這類治療的受試者給予含有因子VII多肽的本發(fā)明藥物組合物?？梢越?jīng)注射器，可選筆形注射器，通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射而進(jìn)行非腸道給藥?；蛘?，可以通過輸注泵進(jìn)行非腸道給藥。在重要的實(shí)施方案中，所述的藥物組合物適合于按照本領(lǐng)域中公知的方法進(jìn)行皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射。實(shí)驗(yàn)一般方法適合于測定因子VII多肽類的生物學(xué)活性的試驗(yàn)可以通過合適的試驗(yàn)選擇可用于本發(fā)明的因子VII多肽類，所述的試驗(yàn)可以作為簡單的體外預(yù)試驗(yàn)進(jìn)行。因此，本說明書中公開了因子VII多肽類活性的簡單試驗(yàn)(稱作″體外水解試驗(yàn)″)。體外水解試驗(yàn)(試驗(yàn)1)可以檢測天然(野生型)因子VIIa和因子VII多肽(下文一起稱作″因子VIIa″)的比活性。也可以平行檢測它們以直接比較其比活性。該試驗(yàn)在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進(jìn)行。將終濃度為1mM的顯色底物D-Ile-Pro-Arg-p-nitroanilide(S-2288，Chromogenix，Sweden)加入到在含有0.1MNaCl、5mMCaCl2和1mg/mL牛血清清蛋白的50mMHEPES(pH7.4)中的因子VIIa(終濃度100nM)中。用SpectraMaxTM340平板讀出器(MolecularDevices，USA)連續(xù)測定405nm處的吸光度。在減去不含酶的空白孔中的吸光度后，將20分鐘溫育過程中顯示的吸光度用于計(jì)算因子VII多肽與野生型因子VIIa的活性之比比值＝(A405nm因子VII多肽)/(A405nm野生型因子VIIa)。基于上述公式，可以鑒定出具有比天然因子VIIa更低、相當(dāng)或更高的活性的因子VII多肽類，例如，因子VII多肽的活性與天然因子VII(野生型FVII)的活性之比約為1.0-高于1.0的因子VII多肽類。還可以使用濃度適當(dāng)在100-1000nM的生理底物，諸如因子X(″體外蛋白水解試驗(yàn)″)測定因子VII多肽類的活性，其中在加入合適的顯色底物(例如S-2765)后測定產(chǎn)生的因子Xa。此外，可以在生理溫度下進(jìn)行活性試驗(yàn)。體外蛋白水解試驗(yàn)(試驗(yàn)2)平行測試天然(野生型)因子VIIa和因子VII多肽(下文均稱作″因子VIIa″)以直接比較其比活性。該試驗(yàn)在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，Denmark)中進(jìn)行。將在含有0.1MNaCl、5mMCaCl2和1mg/mL牛血清清蛋白的100μL50mMHEPES(pH7.4)中的因子VIIa(10nM)和因子X(0.8microM)保溫15分鐘。通過添加含有0.1MNaCl、20mMEDTA和1mg/mL牛血清清蛋白的50μL50mMHEPES(pH7.4)終止因子X裂解。通過添加終濃度0.5mM的顯色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-p-nitroanilide(S-2765，Chromogenix，Sweden)測定產(chǎn)生的因子Xa的量。用SpectraMaxTM340平板讀出器(MolecularDevices，USA)連續(xù)測定405nm處的吸光度。在減去不含F(xiàn)VIIa的空白孔中的吸光度后，將10分鐘過程中顯示的吸光度用于計(jì)算因子VII多肽與野生型因子VIIa的蛋白水解活性之比比值＝(A405nm因子VII多肽)/(A405nm野生型因子VIIa)。基于上述公式，可以鑒定出具有低于天然因子VIIa的活性、與之相當(dāng)或高于其活性的因子VII多肽類，例如，因子VII多肽的活性與天然因子VII(野生型FVII)的活性之比約為1.0-高于1.0的因子VII多肽類。凝血酶產(chǎn)生試驗(yàn)(試驗(yàn)3)還可以在一種試驗(yàn)(試驗(yàn)3)中測定因子VIIa或因子VII多肽類產(chǎn)生凝血酶的能力，該試驗(yàn)包括生理濃度的所有相關(guān)凝固因子和抑制劑(當(dāng)模擬A型血友病時(shí)減去因子VIII)和活化的血小板(如Monroe等(1997)在《英國血液學(xué)雜志》(Brit.J.Haematol.)99，542-547的543頁上所述，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考)。一步凝固試驗(yàn)(試驗(yàn)4)還可以使用一步凝固試驗(yàn)(試驗(yàn)4)測定因子VII多肽類的比活性。為了這一目的，用50mMPIPES-緩沖液(pH7.5)，0.1％BSA稀釋待測試樣品，并將40μl與40μl因子VII-缺乏型血漿和80μl含有10mMCa2+和合成磷脂類的人重組組織因子一起保溫。測定凝固時(shí)間(凝血時(shí)間)，并與在平行線性試驗(yàn)中使用參照標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較。因子VII多肽類的制備和純化優(yōu)選通過DNA重組技術(shù)，例如Hagen等在《美國國家科學(xué)院學(xué)報(bào)》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)832412-2416，1986中所述或如歐洲專利號EP0200421(ZymoGenetics，Inc.)中所述制備適用于本發(fā)明的純化人因子VIIa。還可以通過Broze和Majerus在《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)255(4)1242-1247，1980和Hedner和Kisiel《臨床研究雜志》(J.Clin.Invest.)711836-1841，1983中所述的方法生產(chǎn)因子VII。這些方法產(chǎn)生了因子VII而沒有可檢測量的其它凝血因子?？梢酝ㄟ^包括額外的凝膠過濾作為最終純化步驟而獲得甚至進(jìn)一步純化的因子VII制品。然后通過公知方式將因子VII轉(zhuǎn)化成活化的因子VIIa，例如用幾種不同的血漿蛋白，諸如因子XIIa、IXa或Xa。或者，如Bjoern等(《研究公開》(ResearchDisclosure)，269，1986年9月，pp.564-565)所述，可以通過使因子VII經(jīng)過離子交換色譜柱，諸如MonoQ(PharmaciafineChemicals)等或通過在溶液中自我活化來激活因子VII。可以通過修飾野生型因子VII或通過重組技術(shù)生產(chǎn)因子VII-相關(guān)多肽類。可以通過修飾編碼野生型因子VII的核酸序列而生產(chǎn)與野生型因子VII相比具有改變的氨基酸序列的因子VII-相關(guān)多肽類，該核酸序列修飾可通過用公知方式，例如通過位點(diǎn)特異性誘變，改變編碼天然因子VII的核酸中的氨基酸密碼子或通過除去其中的一些氨基酸密碼子來進(jìn)行。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然清楚，可以在對因子VIIa分子的功能而言關(guān)鍵的區(qū)域外進(jìn)行取代，仍然可以產(chǎn)生活性多肽?？梢园凑毡绢I(lǐng)域中公知的步驟，諸如定點(diǎn)誘變或丙氨酸-掃描誘變鑒定對因子VII多肽活性而言必需、因此優(yōu)選不進(jìn)行取代的氨基酸殘基(例如，參見Cunningham和Wells，1989，《科學(xué)》(Science)2441081-1085)。在后一種技術(shù)中，在分子的每一帶正電荷的殘基處引入突變并測試所得突變分子的凝血活性，即交聯(lián)活性，以鑒定對該分子活性而言關(guān)鍵的氨基酸殘基。還可以通過分析用諸如核磁共振分析、結(jié)晶或光親和標(biāo)記這類技術(shù)測定的三維結(jié)構(gòu)來確定底物-酶相互作用位點(diǎn)(例如參見deVos等，1992，《科學(xué)》(Science)255306-312；Smith等，1992，《分子生物學(xué)雜志》(JournalofMolecularBiology)224899-904；Wlodaver等，1992，《FEBS通訊》(FEBSLetters)30959-64)。可以通過使用本領(lǐng)域中公知的任意方法進(jìn)行定點(diǎn)誘變，將突變引入核酸序列內(nèi)，以便用一種核苷酸交換另一種核苷酸。特別有用的是使用帶有感興趣的插入片段的超螺旋雙鏈DNA載體和兩種含有所需突變的合成引物的操作。各自與該載體的相反鏈互補(bǔ)的寡核苷酸引物借助于PfuDNA聚合酶在溫度循環(huán)過程中延伸。在引入引物時(shí)，將產(chǎn)生含有交錯(cuò)切口的突變質(zhì)粒。在溫度循環(huán)后，用對甲基化和半-甲基化DNA具有特異性的DpnI處理產(chǎn)物，以消化親代DNA模板，并選擇出含有突變的合成DNA。還可以使用本領(lǐng)域中公知用于生成、鑒定和分離變體的其它操作，例如基因改組或噬菌體展示技術(shù)?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域中公知的任意方法將多肽從其細(xì)胞來源中分離，包括、但不限于從粘附細(xì)胞培養(yǎng)物中取出含有所需產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng)基；離心或過濾以除去未附著細(xì)胞等?？蛇x地，可以進(jìn)一步純化因子VII多肽類。可以使用本領(lǐng)域中公知的任意方法進(jìn)行純化，包括、但不限于在例如抗-因子VII抗體柱上的親和色譜法(例如，參見Wakabayashi等，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)26111097，1986；和Thim等，《生物化學(xué)》(Biochem.)277785，1988)；疏水相互作用色譜法；離子交換色譜法；大小排阻色譜法；電泳法(例如制備型等電聚焦(IEF)、差示溶解度(例如硫酸銨沉淀)或提取等。一般參見Scopes，《蛋白質(zhì)純化》(ProteinPurification)，Springer-Verlag，NewYork，1982；和《蛋白質(zhì)純化》(ProteinPurification)，J.C.Janson和LarsRyden，編輯，VCHPublishers，NewYork，1989。在純化后，制品中優(yōu)選含有低于10％重量，更優(yōu)選低于5％、最優(yōu)選低于1％的來源于宿主細(xì)胞的非-因子VII多肽類?？梢酝ㄟ^蛋白水解裂解，使用因子XIIa或具有胰蛋白酶類特異性的其它蛋白酶，例如因子IXa、激肽釋放酶、因子Xa和凝血酶來活化因子VII多肽類。例如，參見Osterud等，《生物化學(xué)》(Biochem.)112853(1972)；Thomas，美國專利US4,456,591；和Hedner等，《臨床研究雜志》(J.Clin.Invest.)711836(1983)。或者，可以通過使因子VII多肽類經(jīng)過離子交換色譜柱，諸如MonoQ(Pharmacia)等，或通過在溶液中自我活化來激活因子VII多肽類。然后可以如本申請所述配制和施用所得的活化因子VII多肽。下列實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明的實(shí)施。包括這些實(shí)施例僅是為了舉例目的，而絕不以任何方式來限定所要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍。操作實(shí)施例在下列操作實(shí)施例中，通過如下所述的RP-HPLC測定重鏈降解產(chǎn)物的含量使用顆粒大小為5μm且孔徑為300的享有產(chǎn)權(quán)的4.5×250mm丁基鍵合型二氧化硅柱進(jìn)行反相HPLC。柱溫70℃。A-緩沖液0.1％v/v三氟乙酸。B-緩沖液0.09％v/v三氟乙酸、80％v/v乙腈。用從X到(X+13)％B的線性梯度在30分鐘內(nèi)洗脫柱。調(diào)節(jié)X，使得FVIIa以保留時(shí)間約為26分鐘進(jìn)行洗脫。流速1.0mL/分鐘。檢測214nm。上樣量25μgFVIIa。在下列實(shí)施例中，使用如本說明書試驗(yàn)4中所述的一步凝血試驗(yàn)測定凝血活性。實(shí)施例1為了研究芐脒對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM乙酸鈉10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝6.5制品21.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM乙酸鈉10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝7.0制品31.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM乙酸鈉10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝6.5制品41.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM乙酸鈉10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.0通過將10mM組氨酸、10mM乙酸鈉和50mM芐脒(僅用于制品1和2)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.5和7.0。將制品儲存在5℃和30℃溫度下并在表中所示時(shí)間點(diǎn)處對重鏈降解產(chǎn)物的形成進(jìn)行分析(表1)。表1芐脒制品中重鏈降解(hcd)產(chǎn)物的形成(續(xù))正如從表1中可以看出的，在5℃下儲存6個(gè)月后，重鏈降解產(chǎn)物含量在參比制品(3和4)中的增加分別為34.0％和57.7％，而重鏈降解產(chǎn)物含量在舉例性組合物(1和2)中的增加分別僅為1.4％和4.2％。在5℃下儲存14個(gè)月后，重鏈降解產(chǎn)物含量在舉例性組合物(1和2)中的增加分別僅為3.0％和8.1％。如下所述通過RP-HPLC測定重鏈降解產(chǎn)物的含量使用享有產(chǎn)權(quán)的具有5μm顆粒大小和300孔徑的4.5×250mm丁基鍵合型二氧化硅柱進(jìn)行反相HPLC。柱溫70℃.A-緩沖液0.1％v/v三氟乙酸。B-緩沖液0.09％v/v三氟乙酸，80％v/v乙腈。用從X到(X+13)％B的線性梯度在30分鐘內(nèi)洗脫該柱。調(diào)整X，使得FVIIa洗脫物以保留時(shí)間約26分鐘洗脫。流速1.0mL/分鐘。檢測214nm。上樣量25μgFVIIa。實(shí)施例2為了研究精氨酸對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列溶液制品51.0mg/mLrFVIIa25mMHEPES10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.5制品61.0mg/mLrFVIIa25mMHEPES10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣200mM精氨酸pH＝7.5制品71.0mg/mLrFVIIa20mM組氨酸20mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.0制品81.0mg/mLrFVIIa50mM組氨酸50mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣200mM精氨酸pH＝7.0制品91.0mg/mLrFVIIa50mM組氨酸50mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣400mM精氨酸pH＝7.0通過將25mMHEPES(溶液5和6)和精氨酸(溶液6、8和9)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸調(diào)節(jié)pH。將制品儲存在5℃和30℃溫度下并在表2中所示時(shí)間點(diǎn)處如實(shí)施例1中所述對重鏈降解產(chǎn)物的形成進(jìn)行分析。表2精氨酸制品中重鏈降解(hcd)產(chǎn)物的形成·在t＝3天時(shí)分析，預(yù)計(jì)0天-3天內(nèi)適度增加·n.a.未分析實(shí)施例3關(guān)注下列含水液體藥物組合物制品A)rhFVIIa1mg/mL(約50,000IU/mL)PIPES15.12mg/mL(50mM)芐脒50mM伯洛沙姆1880.5mg/mL氯化鈉2.92mg/mL(50mM)氯化鈣2H2O1.47mg/mL(10mM)甲硫氨酸0.5mg/mL1MNaOH/1MHCl加至pH6.5B)rhFVIIa1mg/mL(約50,000IU/mL)PIPES15.12mg/mL(50mM)對-氨基芐脒10mM伯洛沙姆1880.5mg/mL氯化鈉2.92mg/mL(50mM)氯化鈣2H2O1.47mg/mL(10mM)甲硫氨酸0.5mg/mL1MNaOH/1MHCl加至pH6.5C)rhFVIIa1mg/mL(約50,000IU/mL)PIPES15.12mg/mL(50mM)精氨酸50mM伯洛沙姆1880.5mg/mL氯化鈉2.92mg/mL(50mM)氯化鈣2H2O1.47mg/mL(10mM)1MNaOH/1MHCl加至pH6.5D)rhFVIIa1mg/mL(約50,000IU/mL)PIPES15.12mg/mL(50mM)精氨酸100mM伯洛沙姆1880.5mg/mL氯化鈉2.92mg/mL(50mM)氯化鈣2H2O1.47mg/mL(10mM)1MNaOH/1MHCl加至pH6.5隨后可以將藥物組合物A-D轉(zhuǎn)入充滿氮?dú)饣驓鍤獾臒o菌小瓶或藥筒內(nèi)，然后可以包裝入密閉鋁分層的塑料袋。實(shí)施例4為了研究芐脒對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝6.5制品21.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝6.5制品31.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.5制品41.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝7.5通過將10mM組氨酸和50mM芐脒(僅用于制品2和4)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.5和7.5。將制品儲存在5℃溫度下并在表1中所示時(shí)間點(diǎn)處對凝血活性進(jìn)行分析。表1凝血活性(IU/mL)實(shí)施例5為了研究不同穩(wěn)定劑對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝6.5制品21.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣5mM對-氨基-芐脒pH＝6.5制品31.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基(carbamimidoylphenyl))-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝6.5制品41.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.5制品51.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣5mM對-氨基-芐脒pH＝7.5制品61.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝7.5通過將10mM組氨酸、5mM對-氨基-芐脒(僅用于制品2和5)和0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺(僅用于制品3和6)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.5和7.5。將制品儲存在5℃溫度下并在表中所示時(shí)間點(diǎn)處對凝血活性(表1)和重鏈降解(表2)進(jìn)行分析。表1凝血活性(IU/mL)表2重鏈降解產(chǎn)物含量(％)實(shí)施例6為了研究芐脒和N-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺·HCl對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝6.5制品21.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝6.5制品31.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50μMN-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺·HClpH＝6.5制品41.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣500μMN-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺·HClpH＝6.5制品51.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.5制品61.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50mM芐脒pH＝7.5制品71.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣50μMN-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺·HClpH＝7.5制品81.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣500μMN-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺·HClpH＝7.5通過將10mM組氨酸、50mM芐脒(僅用于制品2和6)和50/500μMN-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺HCl(僅用于制品3、4和7、8)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.5和7.5。將制品儲存在5℃和30℃溫度下并在表1中所示時(shí)間點(diǎn)處對凝血活性進(jìn)行分析。表1凝血活性(IU/mL)*不可靠的結(jié)果，未報(bào)導(dǎo)實(shí)施例7為了研究不同穩(wěn)定劑對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝6.5制品21.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣5mM對-氨基-芐脒pH＝6.5制品31.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.05mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝6.5制品41.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝6.5制品51.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣pH＝7.5制品61.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣5mM對-氨基-芐脒pH＝7.5制品71.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.05mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝7.5制品81.0mg/mLrFVIIa10mM組氨酸10mM甘氨酰甘氨酸50mM氯化鈉10mM氯化鈣0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝7.5通過將10mM組氨酸、5mM對-氨基-芐脒(僅用于制品2和6)和0.05/0.5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺(僅用于制品3、7和4、8)加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的1.0mg/mLrFVIIa總體溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉和1M鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.5和7.5。將制品儲存在5℃溫度下并在表中所示時(shí)間點(diǎn)處對凝血活性(表1)和重鏈降解(表2)進(jìn)行分析。表1凝血活性(IU/mL)表2重鏈降解含量(％)實(shí)施例8為了研究S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺對rFVIIa穩(wěn)定性的影響，制備下列制品制品11.0mg/mLrFVIIa50mM氯化鈉10mM氯化鈣10mM甘氨酰甘氨酸20mM組氨酸0.5mg/mL甲硫氨酸5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝6.0制品21.0mg/mLrFVIIa50mM氯化鈉10mM氯化鈣10mM甘氨酰甘氨酸20mM組氨酸0.5mg/mL甲硫氨酸5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝6.5制品31.0mg/mLrFVIIa50mM氯化鈉10mM氯化鈣10mM甘氨酰甘氨酸20mM組氨酸0.5mg/mL甲硫氨酸5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺pH＝7.5通過將20mM組氨酸、5mMS-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺和0.5mg/mL甲硫氨酸加入到已經(jīng)含有上述濃度的甘氨酰甘氨酸、氯化鈉和氯化鈣的rFVIIa溶液中制備所述制品。最終用1M氫氧化鈉/鹽酸將pH分別調(diào)節(jié)至6.0、6.5和7.5。將制品儲存在25℃溫度下并在表中所示時(shí)間點(diǎn)處對凝血活性(表1)和重鏈降解(表2)進(jìn)行分析。表1凝血活性(IU/mL)不含S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺的參比制品表現(xiàn)出如下的凝血活性。表2參比溶液的凝血活性(IU/mL)*沒有參比溶液在0時(shí)的結(jié)果，由于這一原因，列出了含有抑制劑物質(zhì)的溶液的相應(yīng)值。權(quán)利要求1.含水液體藥物組合物，其中包含至少0.01mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和至少一種含有-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自氫、C1-4-烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。2.權(quán)利要求1所述的組合物，其中R1和R2中至少一個(gè)為氫。3.權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中Z1和Z2中至少一個(gè)為單鍵。4.權(quán)利要求1所述的組合物，其中R1和R2均為氫且Z1和Z2均為單鍵。5.權(quán)利要求1-4中任意項(xiàng)所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為選自下列化合物組成的組中的至少一種含有-C-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的脒化合物和含有＞N-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的胍類化合物。6.權(quán)利要求5所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為選自由含有基元-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的芐脒類組成之組中的至少一種脒化合物，其中C6H4表示可選取代的苯環(huán)。7.權(quán)利要求6所述的組合物，其中芐脒類含有基元＞N-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2，其中C6H4表示可選取代的苯環(huán)。8.權(quán)利要求5所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為選自由含有-CH2-NH-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的胍類化合物組成之組中的至少一種胍化合物。9.權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述胍化合物選自由精氨酸、精氨酸衍生物和含有至少一個(gè)精氨酸殘基的2-5個(gè)氨基酸殘基的肽組成的組。10.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中穩(wěn)定劑具有通式Y(jié)-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2，其中Y為有機(jī)基團(tuán)。11.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中穩(wěn)定劑的分子量最高為1000Da。12.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)的濃度至少為1μM。13.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為芐脒，并且所述試劑的濃度至少為1mM，諸如至少2mM。14.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為對-氨基-芐脒且所述試劑的濃度至少為0.001mM。15.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-[1-(3-甲氧基苯基)-乙基]-乙酰胺且所述試劑的濃度至少為0.001mM。16.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為S-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-N-(1-苯基乙基)-乙酰胺且所述試劑的濃度至少為0.001mM。17.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為N-(3-溴芐基)-2-[3-(4-氨甲基亞氨基苯基)-脲基]-乙酰胺且所述試劑的濃度至少為0.001mM。18.權(quán)利要求12所述的組合物，其中穩(wěn)定劑(iii)為精氨酸且所述試劑的濃度至少為10mM，諸如至少為50mM。19.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中因子VII多肽為人因子VIIa。20.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中因子VII多肽為因子VII序列變體。21.權(quán)利要求20所述的組合物，其中當(dāng)在如本文所述的″體外蛋白水解試驗(yàn)″(試驗(yàn)2)中測試時(shí)，因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之比至少為1.25。22.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中因子VII多肽的存在濃度為0.01-20mg/mL。23.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，它具有的pH值在約4.0-約8.0的范圍內(nèi)。24.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中緩沖劑(ii)包含至少一種選自下述組成之組中的成分MES、PIPES、ACES、BES、TES、HEPES、TRIS、組氨酸、咪唑、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、甘氨酰胺、磷酸、乙酸、乳酸、戊二酸、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸和琥珀酸的酸和鹽。25.權(quán)利要求22所述的組合物，其中緩沖劑(ii)的濃度為1-100mM。26.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中進(jìn)一步包含非離子型表面活性劑(iv)。27.權(quán)利要求26所述的組合物，其中非離子型表面活性劑(iv)為選自聚山梨酸酯類、伯洛沙姆類、聚氧乙烯烷基醚類、乙烯/聚丙烯嵌段共聚物和聚乙二醇(PEG)組成之組中的至少一種。28.權(quán)利要求26-27中任意項(xiàng)所述的組合物，其中非離子型表面活性劑(iv)的濃度為0.005-2％重量。29.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中進(jìn)一步包含張力調(diào)節(jié)劑(v)。30.權(quán)利要求29所述的組合物，其中張力調(diào)節(jié)劑(v)為選自由中性鹽、氨基酸、2-5個(gè)氨基酸殘基的肽類、單糖類、二糖類、多糖類和糖醇類組成之組中的至少一種。31.權(quán)利要求30所述的組合物，其中至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)為選自由鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽組成之組中的中性鹽。32.權(quán)利要求30-31中任意項(xiàng)所述的組合物，其中張力調(diào)節(jié)劑(v)為氯化鈉與選自由氯化鈣、乙酸鈣、氯化鎂和乙酸鎂組成之組中的至少一種的組合。33.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中張力調(diào)節(jié)劑(v)的存在濃度至少為1mM。34.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)為離子強(qiáng)度調(diào)節(jié)劑(v/a)。35.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其具有的離子強(qiáng)度至少為50mM。36.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其具有的重量克分子滲透濃度為300±50毫滲克分子/kg。37.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中進(jìn)一步包含抗氧化劑(vi)。38.權(quán)利要求37所述的組合物，其中抗氧化劑(vi)選自L-甲硫氨酸、D-甲硫氨酸、甲硫氨酸類似物、含甲硫氨酸的肽類、甲硫氨酸-同系物、抗壞血酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、胱氨酸和胱硫醚。39.權(quán)利要求37-38中任意項(xiàng)所述的組合物，其中抗氧化劑(vi)的存在濃度為0.1-5.0mg/mL。40.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其中進(jìn)一步包含防腐劑(vii)。41.權(quán)利要求40所述的組合物，其中防腐劑(vii)選自苯酚、芐醇、鄰-甲酚、間-甲酚、對-甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯扎氯銨和芐索氯銨組成之組。42.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的含水液體藥物組合物，其包含0.1-20mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；含有基元-C6H4-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的濃度至少為5μM的至少一種穩(wěn)定劑(iii)；非離子型表面活性劑(iv)；和濃度至少為5mM的張力調(diào)節(jié)劑(v)。43.權(quán)利要求1-41中任意項(xiàng)所述的含水液體藥物組合物，其包含0.1-20mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；含有基元-CH2-NH-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2的濃度至少為500μM的至少一種穩(wěn)定劑(iii)；非離子型表面活性劑(iv)；和濃度至少為5mM的至少一種張力調(diào)節(jié)劑(v)。44.上述權(quán)利要求中任意項(xiàng)所述的組合物，其適合于非腸道給藥。45.權(quán)利要求44所述的組合物，其適合于皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射。46.制備因子VII多肽的含水液體藥物組合物的方法，包括下列步驟提供在溶液中的濃度至少為0.01mg/mL的因子VII多肽(i)，該溶液包含適合于將pH保持在約4.0-約9.0范圍內(nèi)的緩沖劑(ii)；和至少一種含有-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2基元的穩(wěn)定劑(iii)，其中Z1和Z2獨(dú)立地選自-O-、-S-、-NRH-和單鍵組成的組，其中RH選自由氫、C1-4-烷基、芳基和芳基甲基組成的組，并且R1和R2獨(dú)立地選自由氫、可選取代的C1-6-烷基、可選取代的C2-6-烯基、可選取代的芳基、可選取代的雜環(huán)基組成的組；或Z2和R2如上所述，并且-C＝N-Z1-R1形成雜環(huán)的組成部分；或Z1和R1如上所述，并且-C-NH-Z2-R2形成雜環(huán)的組成部分；或-C(＝N-Z1-R1)-NH-Z2-R2形成雜環(huán)，其中-Z1-R1-R2-Z2-為二價(jià)基。47.如權(quán)利要求1-43中任意項(xiàng)所定義的含水液體藥物組合物，其用作藥物。48.如權(quán)利要求1-43中任意項(xiàng)所定義的含水液體藥物組合物在制備用于治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的藥物中的應(yīng)用。49.治療因子VII-反應(yīng)性綜合征的方法，該方法包括對有此需要的受試者給予有效量的如權(quán)利要求1-41中任意項(xiàng)所定義的含水液體藥物組合物。50.含有如權(quán)利要求1-43中任意項(xiàng)所定義的含水液體藥物組合物和可選地惰性氣體的密閉容器。51.權(quán)利要求50所述的容器，其中所述的組合物不包含抗氧化劑(vii)。全文摘要本發(fā)明涉及針對化學(xué)和/或物理降解進(jìn)行了穩(wěn)定化的含有因子VII多肽類的含水液體藥物組合物，并涉及這類組合物的制備和使用方法以及含有這類組合物的小瓶和這類組合物在治療因子VII－反應(yīng)性綜合征中的應(yīng)用。主要的實(shí)施方案由含水液體藥物組合物代表，其中包含至少0.01mg/mL的因子VII多肽(i)；適合于將pH保持在約4.0－約9.0的緩沖劑(ii)；和至少一種含有－C(＝N－Z文檔編號A61K47/18GK1845753SQ200480025048公開日2006年10月11日申請日期2004年8月12日優(yōu)先權(quán)日2003年8月14日發(fā)明者M(jìn)·B·延森,A·K·彼得森,A·N·鮑勒申請人:諾和諾德醫(yī)療保健公司