專利名稱：因子vii多肽的穩(wěn)定化固體組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥盒，所述藥盒包含含有因子VII或因子VII相關(guān)多肽的化學(xué)和物理上穩(wěn)定的組合物，使得這些組合物能夠在室溫進(jìn)行貯藏、操作和使用。
背景技術(shù)：
含有多肽的藥物是復(fù)雜的組合物。開(kāi)發(fā)這類藥物時(shí)需要考慮一系列參數(shù)。例如，藥物必須是有效的、安全的、且具有良好患者順應(yīng)性。此外，可以使用藥物上可接受賦形劑配制成非胃腸道施用的藥物，這必須獲得各種全世界醫(yī)學(xué)管理機(jī)構(gòu)的批準(zhǔn)。為了非胃腸道施用的目的，非常希望制劑是大致等滲的，而且制劑的pH能使得在注射/灌輸后處于生理學(xué)合適范圍內(nèi)，否則它可能導(dǎo)致患者疼痛和不適。關(guān)于蛋白質(zhì)制劑的一般綜述參閱例如Cleland等人，穩(wěn)定蛋白質(zhì)制劑的開(kāi)發(fā)對(duì)蛋白質(zhì)聚集、脫酰胺、和氧化的密切關(guān)注，CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1993，10(4)307-377；和Wang等人，蛋白質(zhì)和肽的腸胃外制劑穩(wěn)定性和穩(wěn)定劑，Journal of Parenteral Science and Technology，1988(增刊)，42(2S)。
然而，對(duì)于包含多肽的藥物而言，安全性可能與多肽的物理和化學(xué)穩(wěn)定性直接相關(guān)。多肽易受物理降解的影響，包括變性和聚集，諸如形成可溶性或不溶性的二聚體、寡聚物和多聚物形式的聚集體；或者易受化學(xué)降解的影響，包括例如水解、脫酰胺、和氧化。因此，所述物理和化學(xué)不穩(wěn)定性可能導(dǎo)致多肽活性的損失、有毒且免疫原性降解產(chǎn)物的形成、在注射降解的多肽后誘發(fā)血栓癥的嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)、堵塞用于注射的針頭和非均質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)等。
因此，包含多肽的組合物需要穩(wěn)定化，從而能夠在環(huán)境溫度進(jìn)行貯藏和操作。將多肽穩(wěn)定化的一種方法涉及將多肽脫水，例如諸如以凍干餅的形式提供多肽，即在凍干處理后獲得的最終物質(zhì)。然而，凍干處理自身對(duì)多肽有害；在凍干過(guò)程中，首先冷卻多肽溶液直至充分凍結(jié)，多肽溶液中大量的水將在此階段形成冰。因此，多肽易受由冷凍誘導(dǎo)的壓力，導(dǎo)致變形和沉淀。在下一步中，即所謂的第一干燥階段，冰升華；而在第二干燥階段，在較高溫度下除去吸附或結(jié)合水。在此脫水過(guò)程中，多肽可能松開(kāi)主要由氫鍵提供的正確構(gòu)象。
因此，為了在凍干過(guò)程中保持多肽的構(gòu)象、活性、和穩(wěn)定性，需要為多肽溶液補(bǔ)充足夠量的具有防凍劑和/或防溶劑特性的適當(dāng)賦形劑，從而分別保護(hù)蛋白質(zhì)免于由冷凍誘導(dǎo)的壓力和/或脫水過(guò)程中的壓力。
US 20010031721 A1(American Home Products)關(guān)注高度濃縮、凍干且液態(tài)的因子IX制劑。
WO 97/26909(Genetics Instute)關(guān)注適于貯藏和施用的因子IX凍干制劑。這些制劑可以包含蔗糖或甘露醇作為防凍劑。
WO 95/28954(Genetics Institute)關(guān)注適于貯藏和施用的因子IX制劑。這些制劑可以包含蔗糖作為防凍劑。
另外，在提供凍干產(chǎn)品時(shí)，關(guān)鍵的特征涉及凍干餅的特性。它需要具有在形式和結(jié)構(gòu)方面的優(yōu)良特性，即它應(yīng)當(dāng)不會(huì)崩塌，因?yàn)檫@些崩塌塊難以或甚至不可能在使用前溶解(重構(gòu))。相反，凍干餅的物理結(jié)構(gòu)最好不要太松太軟。因此，在凍干前向蛋白質(zhì)溶液中加入一種或多種所謂的膨脹劑(bulking agent)。
除了選擇正確的膨脹劑，關(guān)鍵是避免賦形劑，其使餅的物理性質(zhì)不穩(wěn)定。所述物質(zhì)的濃度應(yīng)當(dāng)盡可能的低。此外，重要的是，重構(gòu)溶液不能過(guò)于低滲或高滲，因?yàn)槟菢訒?huì)引起注射不便，或者在注射時(shí)甚至引起患者疼痛。因此，通常需要向組合物中加入滲透性。其它賦形劑可為緩沖物質(zhì)，用于在貯藏期間保持重構(gòu)溶液的pH穩(wěn)定。
維生素K-依賴性多肽是一組參與凝血過(guò)程的多肽，包括因子VII，因子IX，因子X(jué)，因子II，蛋白C，蛋白S，gas6，和骨基質(zhì)Gla多肽，或可以是選自如下的蛋白酶因子VIIa，因子IXa，因子X(jué)a，因子IIa，和活化的蛋白C。因子VIIa，IXa和Xa是特別有用的蛋白酶。因子VIII是參與凝血的多肽?？赏ㄟ^(guò)重組技術(shù)獲得或者從血漿中制備，且廣泛用于血友病患者出血事件的治療。
因子VII是參與凝血過(guò)程的多肽。目前，因子VIIa可通過(guò)重組技術(shù)制備(rFVIIa)且廣泛用作促止血物質(zhì)。因子VII(人野生型)在美國(guó)專利4,784,950中有描述。rFVIIa為目前提供了快速且高效的經(jīng)歷出血之血友病個(gè)體中的促止血應(yīng)答。有利地，rFVIIa可被用于治療由于抗體形成而不能用其它凝固因子產(chǎn)品治療的血友病個(gè)體。患有因子VII缺乏的個(gè)體或具有正常凝血系統(tǒng)但是仍經(jīng)歷過(guò)量流血的個(gè)體可用rFVIIa成功治療。
現(xiàn)在以凍干產(chǎn)品形式提供的重組生產(chǎn)的FVII多肽意欲貯藏于約2℃-約8℃。對(duì)冷卻條件的要求造成了對(duì)制造商或供應(yīng)商以及終端用戶(患者)的負(fù)擔(dān)和不便。
目前，重組生產(chǎn)的FVII產(chǎn)品有NovoSeven_(Novo Nordisk A/S，丹麥)，它由1.2mg重組人因子VIIa、5.84mg NaCl、2.94mgCaCl2·2H2O、2.64mg甘氨酰甘氨酸、0.14mg聚山梨酸酯80、和60.0mg甘露醇組成。加入2.0ml注射用水(WFI)重構(gòu)后，pH是5.5，而且由此配制的含F(xiàn)VII溶液足以在室溫穩(wěn)定24小時(shí)。
本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，將凍干的NovoSeven_產(chǎn)品于25℃貯藏6個(gè)月后，占初始含量約6-7％w/w的rFVIIa以聚集體的形式存在。
因此，含有因子VII多肽的組合物需要被穩(wěn)定從而允許在室溫貯藏和操作。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供改進(jìn)的組合物、藥盒和制備它們的方法，其中所述含有多肽的干組合物對(duì)化學(xué)和物理降解是穩(wěn)定的(諸如，例如形成較少的二聚體/寡聚物降解形式)；由于其形式和結(jié)構(gòu)具有凍干餅的良好性質(zhì)，即它不應(yīng)當(dāng)崩塌；具有凍干餅的良好和穩(wěn)定的物理結(jié)構(gòu)；且該干組合物摒棄了使餅的物理性質(zhì)不穩(wěn)定的賦形劑，例如通過(guò)降低最低可融化的熔點(diǎn)并因此增加了餅崩塌的風(fēng)險(xiǎn)；其中通過(guò)將含干多肽的組合物在施用載體中溶解重建的組合物是等滲的，或接近等滲的，具有確定的pH(pH-穩(wěn)定的)。特別的，一個(gè)目的是提供含有因子VII多肽而基本上不存在降解產(chǎn)物且不降低因子VII多肽的活性(優(yōu)選的在室溫條件下長(zhǎng)期貯藏后，例如至少6個(gè)月)的改進(jìn)組合物。此外，一個(gè)目的是適于非胃腸道施用的穩(wěn)定組合物，以不引起患者的任何不便。
發(fā)明概述本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，含有多肽的藥物可以藥盒的部分的形式提供，所述藥盒的部分包含第一單元形式，所述第一單元形式由含有多肽和至少一種穩(wěn)定劑的干(例如凍干)組合物和用于容納所述第一單元形式的容器組成，其中所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量；以及在用于容納所述單元的容器中，由施用載體組成的第二單元形式，所述施用載體包含溶解(重建)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分(i)當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，和(ii)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物于第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的張力調(diào)節(jié)劑。
通常存在于制劑中的物質(zhì)如緩沖物質(zhì)和張力調(diào)節(jié)劑非常容易降低最低可融化的熔點(diǎn)，因此增加餅的崩塌風(fēng)險(xiǎn)。如果在凍干過(guò)程中存在這些物質(zhì)，在初步干燥過(guò)程中冰的溫度必須被降低，以避免崩塌，因此，用于凍干的時(shí)間延長(zhǎng)了。這些凍干餅中的物質(zhì)濃度應(yīng)當(dāng)盡可能的低，或者它們應(yīng)當(dāng)完全避免。相反，它們可有利的加入重建液體。
通過(guò)降低這些賦形劑的濃度或者完全除去它們，重建溶液有時(shí)候會(huì)變得低滲，其需要加入張力調(diào)節(jié)劑到溶劑中，以獲得具有需要的張力之溶液，如等滲的，或接近等滲的(“基本上等滲的″)。溶劑中另一需要的賦形劑是緩沖物質(zhì)，以保持重建的溶液之pH在貯藏過(guò)程中穩(wěn)定。
藥盒的部分足夠穩(wěn)定，以允許在室溫下貯藏約至少8個(gè)月。
此外，發(fā)現(xiàn)可以在足夠穩(wěn)定的組合物中提供因子VII多肽，從而能夠在室溫貯藏約至少8個(gè)月。研究人員發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定化作用涉及一些藥物上可接受賦形劑的適當(dāng)組合。
因此，本發(fā)明第一方面，涉及一種藥盒(含有藥物/治療)，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有多肽和至少一種穩(wěn)定劑的組合物，其中所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量，以及用于容納所述第一單元形式的容器裝置；和b)在第二單元形式中，含有用于重構(gòu)(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(i)當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，(ii)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物于第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的量的張力調(diào)節(jié)劑；和用于容納所述第二單元形式的容器裝置。
第二方面，本發(fā)明涉及一種制備多肽的液體制劑的方法，所述方法包括步驟a)提供上述的第一單元形式和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中的溶解的組合物液體溶液。
在第三和第四方面，本發(fā)明涉及一種治療凝固因子應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據(jù)上述方法制備的所述凝固因子之液體制劑，以及涉及所述制劑用于制備呈如上述藥盒形式的用于治療因子VII-應(yīng)答性綜合征的藥物的用途。
在第五方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其中包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑
a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；d)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
在第六方面，本發(fā)明涉及一種制備如上述定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，其量為約0.06-0.08mg/mL；ii)加工所述溶液以獲得具有含濕量不超過(guò)約3％w/w的固體組合物。
在第七和第八方面，本發(fā)明涉及一種治療FVII-應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的如上述定義的組合物，以及涉及因子VII多肽用于制備治療因子VII-應(yīng)答性綜合征的藥物的用途，所述藥物包含上述定義的組合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含因子FVIII、維生素K依賴性多肽和因子VII多肽之多肽的貯藏穩(wěn)定的藥盒和組合物。這些組合物可以在室溫貯藏較長(zhǎng)時(shí)間而不會(huì)引起多肽的顯著降解。室溫指室內(nèi)環(huán)境溫度；它通常的范圍是約5℃-約40℃，諸如約10℃-30℃、或15℃-25℃。
通過(guò)特定藥物上可接受賦形劑的適當(dāng)預(yù)定組合，本發(fā)明的研究人員提供了包含多肽，特別是因子VII多肽的穩(wěn)定化組合物，從而能夠?qū)⒔M合物于室溫貯藏較長(zhǎng)時(shí)間，諸如至少約8個(gè)月。有利的是，穩(wěn)定化組合物不必貯藏于冷卻條件，諸如2℃-8℃。
本發(fā)明還關(guān)注于在約30℃貯藏至少約8個(gè)月時(shí)仍穩(wěn)定的貯藏穩(wěn)定的組合物。這些組合物優(yōu)選貯藏于黑暗中。因此，本發(fā)明使之有可能將這些組合物貯藏于室溫而不會(huì)增加對(duì)施用這些組合物的患者的不利事件。有利的是，改進(jìn)的貯藏穩(wěn)定性還將使花費(fèi)降低，因?yàn)橘A藏不需要特殊的冷卻條件，還使用戶處理組合物更加方便。
待根據(jù)本發(fā)明配制的多肽包括，但不限于，凝血因子包括維生素K-依賴性多肽，如例如，不限于，因子VIII、因子V、因子X(jué)I、因子VII、因子IX、因子X(jué)、因子II、蛋白C、蛋白S、gas6、和骨基質(zhì)Gla多肽；活化的FVIII、因子Va、因子X(jué)Ia、因子VIIa、因子IXa、因子X(jué)a、因子IIa、和活化的蛋白C。
術(shù)語(yǔ)″維生素K依賴性多肽″包括選自如下的多肽因子VII、因子IX、因子X(jué)、因子II、蛋白C、蛋白S、gas6、和骨基質(zhì)Gla多肽或可為選自如下的蛋白酶因子VIIa、因子IXa、因子X(jué)a、因子IIa和活化的蛋白C。因子VIIa、IXa和Xa為特別有用的蛋白酶。
術(shù)語(yǔ)″因子VII多肽″意指任何在防止或治療出血中有效的因子VII多肽。包括來(lái)自血液或血漿的，或由重組方法產(chǎn)生的因子VII多肽。
在用于本文時(shí)，″因子VII多肽″涵蓋但不限于因子VII以及因子VII相關(guān)多肽。術(shù)語(yǔ)″因子VII″意欲涵蓋但不限于具有野生型人因子VII氨基酸序列第1-406位(公開(kāi)于美國(guó)專利號(hào)4,784,950)的多肽，以及由其它物種衍生的野生型因子VII，諸如牛、豬、犬、鼠、和鮭魚，所述因子VII是由血液或血漿衍生的，或者是通過(guò)重組技術(shù)生產(chǎn)的。它還涵蓋個(gè)體之間可能存在或發(fā)生的因子VII天然等位基因變異。同樣，糖基化或其它翻譯后修飾的程度和位置可能隨所選宿主細(xì)胞和宿主細(xì)胞環(huán)境的性質(zhì)而變化。術(shù)語(yǔ)″因子VII″還意欲涵蓋處于未切割(酶原)形式的因子VII多肽，以及經(jīng)過(guò)蛋白水解加工而生成的相應(yīng)生物活性形式，這可以稱為因子VIIa。通常，因子VII在第152位與第153位之間得到切割而生成因子VIIa。
術(shù)語(yǔ)“因子VII衍生物″如此處所用，意在指顯示與野生型因子VII基本上相同或改善的生物學(xué)活性的FVII多肽，其中親本肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被基因工程和/或化學(xué)和/或酶學(xué)修飾，例如通過(guò)烷基化、糖基化、PEG化、?；?、酯形成或酰胺形成等。這包括但不限于PEG化的人因子VIIa，半胱氨酸-PEG化的人因子VIIa及其變異體。因子VII衍生物的非限定性實(shí)例包括GlycoPeg化的FVII衍生物，如WO 03/31464和美國(guó)申請(qǐng) US20040043446，US 20040063911，US20040142856，US 20040137557以及US20040132640中所述NeoseTechnologies，Inc.)；FVII偶聯(lián)物如WO 01/04287，US專利申請(qǐng)20030165996，WO 01/58935，WO 03/93465(Maxygen ApS)和WO02/02764，美國(guó)專利申請(qǐng)20030211094(University of Minnesota)中所述。
術(shù)語(yǔ)“改善的生物活性″是指具有如下性質(zhì)的FVII多肽i)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的蛋白水解活性的多肽，或ii)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的TF結(jié)合活性的FVII多肽，或iii)與重組野生型人因子VIIa相比，具有基本上相同或增加的血漿半壽期的FVII多肽。術(shù)語(yǔ)″PEG化人因子VIIa″是指人因子VIIa，具有與人因子VIIa多肽偶聯(lián)的PEG分子。應(yīng)當(dāng)知曉，PEG分子可以與因子VIIa多肽的任一部分相連，包括因子VIIa多肽的任一氨基酸殘基或糖基。術(shù)語(yǔ)″半胱氨酸-PEG化的人因子VIIa″是指具有偶聯(lián)于導(dǎo)入人因子VIIa的巰基的PEG分子之因子VIIa。
如上所述，術(shù)語(yǔ)″因子VII多肽″還意指″因子VII相關(guān)多肽″。術(shù)語(yǔ)″因子VII相關(guān)多肽″意欲涵蓋處于未切割(酶原)形式的這些多肽，以及經(jīng)過(guò)蛋白水解加工而生成的相應(yīng)生物活性形式。在用于本文時(shí)，″因子VII相關(guān)多肽″涵蓋但不限于與野生型人因子VII相比展示基本上相同或改進(jìn)的生物學(xué)活性的多肽，其中相對(duì)于野生型人因子VIIa，其生物學(xué)活性大大降低(如美國(guó)專利4,784,950中所公開(kāi))。這些多肽包括但不限于因子VII或因子VIIa已被化學(xué)修飾，例如通過(guò)使因子VII與不可逆抑制劑如有機(jī)磷化合物、磺酰氟、肽鹵甲基酮或氮雜肽反應(yīng)，或者非限制性實(shí)例被酰化，以及導(dǎo)入了略微改變或改進(jìn)多肽生物學(xué)活性的特定氨基酸序列改變的因子VII變體，諸如例如其中因子VIIa的催化活性通過(guò)催化位點(diǎn)或三聯(lián)體的化學(xué)衍生化被抑制術(shù)語(yǔ)″催化位點(diǎn)″或“活性位點(diǎn)″，當(dāng)此處用于指FVIIa時(shí)，是指催化和酶原底物結(jié)合位點(diǎn)，包括FVIIa的“S1″位點(diǎn)，該術(shù)語(yǔ)如Schecter，I.和Berger，A.所述，(1967)Biochem.Biophys.Res.Commun.7157-162。人和牛因子VII蛋白質(zhì)的催化位點(diǎn)包括氨基酸Ser344、Asp242和His193(下標(biāo)表示在序列中的位置編號(hào))，形成所謂的催化“三聯(lián)體″。其它哺乳動(dòng)物的因子VII中的催化位點(diǎn)可以利用現(xiàn)有的技術(shù)確定，尤其是包括蛋白質(zhì)分離和氨基酸序列分析。催化位點(diǎn)也可通過(guò)序列與其它絲氨酸蛋白酶的序列比對(duì)確定，特別是胰凝乳蛋白酶，其活性位點(diǎn)此前業(yè)已確定(Sigler等人，J.Mol.Biol.，35143-164(1968))，由比對(duì)確定類似的活性位點(diǎn)殘基。
因子VII相關(guān)多肽(包括與野生型因子VIIa相比具有基本上相同或改進(jìn)的生物學(xué)活性的變異體)涵蓋那些在本說(shuō)明書所述凝結(jié)測(cè)定法、蛋白水解測(cè)定法、或TF結(jié)合測(cè)定法中的一種或多種方法中進(jìn)行測(cè)試時(shí)，與在相同細(xì)胞類型中生成的野生型因子VIIa相比展示至少約25％、優(yōu)選至少約50％、更優(yōu)選至少約75％、更優(yōu)選至少約100％、更優(yōu)選至少約110％、更優(yōu)選至少約120％、且最優(yōu)選至少約130％的比活的多肽。
因子VII相關(guān)多肽包括變異體，相對(duì)于野生型人因子VIIa的活性，其所述生物學(xué)活性被大大降低，包括顯示低于約25％，更優(yōu)選低于約10％，或5％，或3％，或2％，且最優(yōu)選低于約1％的野生型因子人因子VIIa的比活性的那些多肽，如本說(shuō)明書中所述在一種或多種凝結(jié)測(cè)定法、FIXa或FXa產(chǎn)生測(cè)定法、氨解或蛋白解測(cè)定法中測(cè)定。
在有些實(shí)施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，特別是變異體，其中在″體外水解測(cè)定法″(見(jiàn)下文實(shí)施例，一般方法)中進(jìn)行測(cè)試時(shí)，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比是至少約1.25；在其它實(shí)施方案中，該比是至少約2.0；在還有一些實(shí)施方案中，該比是至少約4.0。在本發(fā)明的有些實(shí)施方案中，因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，特別是變異體，其中在″體外蛋白水解測(cè)定法″(見(jiàn)下文實(shí)施例，一般方法)中進(jìn)行測(cè)試時(shí)，所述因子VII多肽的活性與天然人因子VIIa(野生型FVIIa)的活性之間的比是至少約1.25；在其它實(shí)施方案中，該比是至少約2.0；在還有一些實(shí)施方案中，該比是至少約4.0；在還有一些實(shí)施方案中，該比是至少約8.0。
與野生型因子VII相比具有基本上相同或改進(jìn)的生物學(xué)活性的因子VII變異體的非限制性實(shí)例包括S52A-FVII、S60A-FVII(Lino等人，Arch.Biochem.Biophys.352182-192、1998)；L305V-FVII、L305V/M306D/D309S-FVII、L305I-FVII、L305T-FVII、F374P-FVII、V158T/M298Q-FVII、V158D/E296V/M298Q-FVII、K337A-FVII、M298Q-FVII、V158D/M298Q-FVII、L305V/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII、V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII、V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII、K157A-FVII、E296V-FVII、E296V/M298Q-FVII、V158D/E296V-FVII、V158D/M298K-FVII、和S336G-FVII；美國(guó)專利號(hào)5,580,560中公開(kāi)的展示蛋白水解穩(wěn)定性增加的FVIIa變異體；在第290位與第291位殘基之間或第315位與第316位殘基之間受到蛋白水解切割的因子VIIa(Mollerup等人，Biotechnol.Bioeng.48501-505，1995)；氧化形式的因子VIIa(Kornfelt等人，Arch.Biochem.Biophys.，36343-54，1999)；PCT/DK02/00189中公開(kāi)的FVII變異體；WO02/38162(Scripps研究院)中公開(kāi)的展示蛋白水解穩(wěn)定性增加的FVII變異體；WO 99/20767，美國(guó)專利US6017882和US6747003、美國(guó)專利申請(qǐng)20030100506(明尼蘇達(dá)大學(xué))和WO00/66753、美國(guó)專利申請(qǐng)US2001 0018 414，US2004220106和US200131005，US專利US6762286和US6693075(明尼蘇達(dá)大學(xué))中公開(kāi)的具有經(jīng)修飾的Gla結(jié)構(gòu)域且展示膜結(jié)合增強(qiáng)的FVII變異體；WO 01/58935、美國(guó)專利US68060063、美國(guó)專利申請(qǐng)20030096338(Maxygen Aps)、WO03/93465(Maxygen，Aps)和WO 04/029091(Maxygen ApS)中公開(kāi)的FVII變異體；WO 01/83725、WO 02/22776、WO 02/077218、PCT/DK02/00635、丹麥專利申請(qǐng)PA2002 01423、丹麥專利申請(qǐng)PA 2001 01627；WO 02/38162(Scripps研究院)中公開(kāi)的與野生型FVIIa相比生物學(xué)活性增加的FVII變異體；以及JP 2001061479(Chemo-Sero-Therapeutic研究院)中公開(kāi)的具有增強(qiáng)活性的FVIIa變異體。
具有相對(duì)于野生型因子VII明顯降低的生物學(xué)活性之因子VII多肽的非限制性實(shí)例包括R152E-FVIIa(Wildgoose等人，Biochem 293413-3420，1990)，S344A-FVIIa(Kazama等人，J.Biol.Chem.27066-72，1995)，F(xiàn)FR-FVIIa(Holst等人，Eur.J.Vasc.Endovasc.Surg.15515-520，1998)，和缺乏Gla結(jié)構(gòu)域的因子VIIa(Nicolaisen等人，F(xiàn)EBS Letts.317245-249，1993)。非限制性實(shí)例也包括人FVIIa，其在位置341的賴氨酸殘基被另一氨基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置344的絲氨酸殘基被另一氨基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置242的天冬氨酸殘基被另一氨基酸殘基替代；人FVIIa，其在位置193的組氨酸殘基被另一氨基酸殘基替代；FVII-(K341A)；FVII-(S344A)；FVII-(D242A)；FVII-(H193A)；Phe-Phe-Arg-FVII(FFR-FVII)，D-Phe-Phe-Arg-FVII(D-FFR-FVII)，Phe-Pro-Arg-FVII(FPR-FVII)，D-Phe-Pro-Arg-FVII(D-FPR-FVII)，L-Glu-Gly-Arg-FVII(EGR-FVII)和D-Glu-Gly-Arg-FVII(D-EGR-FVII)，Dansyl-Phe-Phe-Arg-FVII，Dansyl-D-Phe-Phe-Arg-FVII，Dansyl-Phe-Pro-Arg-FVII，Dansyl-D-Phe-Pro-Arg-FVII，Dansyl-L-Glu-Gly-Arg-FVII和Dansyl-D-Glu-Gly-Arg-FVII?；瘜W(xué)修飾的因子VII多肽的非限制性實(shí)例和序列變異體描述于例如美國(guó)專利5,997,864。因子VII或因子VII相關(guān)多肽的實(shí)例包括但不限于野生型因子VII，L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII，L305V/K337A-FVII，L305V/V158D-FVII，L305V/E296V-FVII，L305V/M298Q-FVII，L305V/V158T-FVII，L305V/K337A/V158T-FVII，L305V/K337A/M298Q-FVII，L305V/K337A/E296V-FVII，L305V/K337A/V158D-FVII，L305V/V158D/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V-FVII，L305V/V158T/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V-FVII，L305V/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/K316H-FVII，S314E/K316Q-FVII，S314E/L305V-FVII，S314E/K337A-FVII，S314E/V158D-FVII，S314E/E296V-FVII，S314E/M298Q-FVII，S314E/V158T-FVII，K316H/L305V-FVII，K316H/K337A-FVII，K316H/V158D-FVII，K316H/E296V-FVII，K316H/M298Q-FVII，K316H/V158T-FVII，K316Q/L305V-FVII，K316Q/K337A-FVII，K316Q/V158D-FVII，K316Q/E296V-FVII，K316Q/M298Q-FVII，K316Q/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D-FVII，S314E/L305V/E296V-FVII，S314E/L305V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/V158T-FVII，S314E/L305V/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/K337A/E296V-FVII，S314E/L305V/K337A/V158D-FVII，S314E/L305V/V158D/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V-FVII，S314E/L305V/V158T/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V-FVII，S314E/L305V/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，S314E/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，S314E/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D-FVII，K316H/L305V/E296V-FVII，K316H/L305V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/V158T-FVII，K316H/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/K337A/E296V-FVII，K316H/L305V/K337A/V158D-FVII，K316H/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V-FVII，K316H/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V-FVII，K316H/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316H/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316H/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D-FVII，K316Q/L305V/E 96V-FVII，K316Q/L305V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158T-FVII，K316Q/L305V/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/K337A/E296V-FVII，K316Q/L305V/K337A/V158D-FVII，K316Q/L305V/V158D/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V-FVII，K316Q/L305V/V158T/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V-FVII，K316Q/L305V/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/K337A/M298Q-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，K316Q/L305V/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/S314E/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/V158T/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/M298Q/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/K337A/E296V/V158D-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q/E296V-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/S314E/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158T/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/M298Q-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158T/E296V/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/M298Q/K337A/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/E296V/M298Q/K337A/V158T/S314E-FVII，F(xiàn)374Y/L305V/V158D/E296V/M298Q/K337A/S314E-FVII，S52A-因子VII，S60A-因子VII；和P11Q/K33E-FVII，T106N-FVII，K143N/N145T-FVII，V253N-FVII，R290N/A292T-FVII，G291N-FVII，R315N/V317T-FVII，K143N/N145T/R315N/V317T-FVII；從233Thr至240Asn的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，從304Arg至329Cys的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII，以及從Ile153至Arg223的氨基酸序列中具有取代、添加、或缺失的FVII。
為了本發(fā)明的目的，可以使用缺乏因子VII的血漿和促凝血酶原激酶通過(guò)測(cè)量制劑促進(jìn)血液凝結(jié)的能力而將因子VII多肽的生物學(xué)活性(″因子VII生物學(xué)活性″)定量，例如美國(guó)專利號(hào)5,997,864中所述。在這種測(cè)定法中，生物學(xué)活性表述成凝結(jié)時(shí)間相對(duì)于對(duì)照樣品的縮短，并且通過(guò)與含1U/ml因子VII活性的合并人血清標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較而轉(zhuǎn)變成″因子VII單位″。或者，可以通過(guò)下列方法而將因子VIIa生物學(xué)活性定量(i)在包含TF(包埋在脂膜中)和因子X(jué)的系統(tǒng)中測(cè)量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)多肽生成激活的因子X(jué)(因子X(jué)a)的能力(Persson等人，J.Biol.Chem.，27219919-19924，1997)；(ii)在水性系統(tǒng)中測(cè)量因子X(jué)水解(″體外蛋白水解測(cè)定法″，見(jiàn)下文實(shí)施例，一般方法)；(iii)使用基于表面激元共振(surface plasmon resonance)的儀器測(cè)量因子VIIa或因子VIIa相關(guān)多肽與TF的物理結(jié)合(Persson，F(xiàn)EBS Letts.，413359-363，1997)；(iv)測(cè)量因子VIIa和/或因子VIIa相關(guān)多肽對(duì)合成性底物的水解(″體外水解測(cè)定法″，見(jiàn)下文實(shí)施例，一般方法)；和(v)在不依賴TF的體外系統(tǒng)中測(cè)量凝血酶的生成。
術(shù)語(yǔ)″因子VII生物學(xué)活性″或″因子VII活性″意在包括生成凝血酶的能力；該術(shù)語(yǔ)還包括在缺乏組織因子時(shí)在激活的血小板的表面上生成凝血酶的能力。
本說(shuō)明書詳細(xì)描述了可用于測(cè)定FVII生物學(xué)活性的測(cè)定法。
此外，貫穿本說(shuō)明書，下列術(shù)語(yǔ)具有以下含義術(shù)語(yǔ)“藥盒″或“部分的藥盒″是指在第一單元中的干產(chǎn)品(含有多肽和一種或多種穩(wěn)定劑)；和在第二單元中，由適于溶解第一單元的干產(chǎn)品之溶劑，結(jié)合至少一種緩沖劑(量為約0.1mM-100mM)和/或至少一種張力調(diào)節(jié)劑組成的施用載體的組合。藥盒含有藥物治療，特別是出血事件。在使用前，第一單元的干組合物與包含在第二單元的施用載體混合并溶于其中，由此提供了一種可以使用的藥物。
可以使用的藥物是基本上等滲的。
術(shù)語(yǔ)“施用載體″意在包括藥物上可接受的，優(yōu)選適于通過(guò)注射單元施用的無(wú)菌液體，諸如通過(guò)例如靜脈內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)注射的輸注或注射。施用載體優(yōu)選為水性的。施用載體包括適于多肽組合物重構(gòu)(溶解)的溶劑或溶劑混合物(例如，注射用水/WFI)，和一種或多種當(dāng)溶于水性溶劑中適于使所述組合物的pH范圍保持在3-9的試劑，其量為0.1mM-100mM；和/或一種或多種張力調(diào)節(jié)劑，其量足以使通過(guò)將第一單元形式的組合物溶于第二單元形式的載體中所得的重構(gòu)溶液基本上等滲。
施用載體可含有其他物質(zhì)，諸如鹽例如，鈣鹽和/或鎂鹽，氨基酸，例如甘氨酰甘氨酸。
重構(gòu)組合物意在用于預(yù)防和/或治療的非胃腸道施用。
“有效量″的多肽是指如下多肽的量，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明施用時(shí)，產(chǎn)生本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知曉的至少一種止血臨床參數(shù)中的可測(cè)量的改善。
應(yīng)當(dāng)知曉多肽的有效量可根據(jù)受試者的凝血狀況變化，其反過(guò)來(lái)可在一種或多種臨床參數(shù)中反應(yīng)，包括例如循環(huán)凝固因子的相對(duì)水平；失血量；出血速度；紅細(xì)胞壓積等等。還應(yīng)理解單一劑量有效量可根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)構(gòu)建數(shù)值矩陣和測(cè)定矩陣中的不同點(diǎn)，由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。
術(shù)語(yǔ)″穩(wěn)定化″意欲涵蓋使組合物的貯藏或生產(chǎn)過(guò)程中(不溶性的和/或可溶性的)聚集體形成和/或化學(xué)降解降至最低，以及維持pH和蛋白質(zhì)的正確構(gòu)象，從而實(shí)現(xiàn)生物學(xué)活性的實(shí)質(zhì)性保持并維持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。此外，穩(wěn)定化還意指在凍干條件下生產(chǎn)組合物時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)提供防溶保護(hù)(lyoprotection)和防凍保護(hù)。
術(shù)語(yǔ)″穩(wěn)定劑″意在包括能夠在貯藏或生產(chǎn)含有所述多肽的組合物的過(guò)程中穩(wěn)定多肽的物質(zhì)，或物質(zhì)的混合物。
術(shù)語(yǔ)″結(jié)構(gòu)性穩(wěn)定化″或″結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性″意欲涵蓋形成具有優(yōu)良特性和外觀的凍干塊或餅的能力，例如使得它不崩塌且使用前易于溶解。
術(shù)語(yǔ)″貯藏穩(wěn)定的″意欲定義在5℃-40℃貯藏后穩(wěn)定且在合適時(shí)間(常常是幾個(gè)月)內(nèi)保持預(yù)定產(chǎn)品規(guī)格的產(chǎn)品。
術(shù)語(yǔ)因子VII多肽的″物理穩(wěn)定性″涉及不溶性和/或可溶性的二聚體、寡聚物和多聚物形式的因子VII多肽聚集體的形成，以及該分子的任何結(jié)構(gòu)性變形和變性。
術(shù)語(yǔ)″化學(xué)穩(wěn)定性″意指在加速條件下以溶解或固體狀態(tài)貯藏后因子VII多肽中任何化學(xué)變化的形成，例如水解、脫酰胺、和氧化。具體而言，含硫氨基酸易于氧化而形成相應(yīng)的亞砜。
術(shù)語(yǔ)″防凍劑″在用于本文時(shí)通常包括針對(duì)由冷凍誘導(dǎo)的壓力為蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑。防凍劑的范例包括多元醇，諸如例如甘露醇，包括糖，諸如例如蔗糖，還包括表面活性劑，諸如例如聚山梨酸酯、泊洛沙姆、或聚乙二醇等。防凍劑也有助于制劑的張力。
術(shù)語(yǔ)″防溶劑″(Lyoprotectant)在用于本文時(shí)包括在凍干工藝的干燥過(guò)程后的脫水過(guò)程中為蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑，例如維持蛋白質(zhì)的正確構(gòu)象。防溶劑的范例包括糖，特別是二糖或三糖。防凍劑也可具有防溶劑的效果。
術(shù)語(yǔ)″適于將pH維持在范圍3-9的試劑″涵蓋那些將溶液pH維持在可接受范圍3.0-9.0之間的試劑。能夠?qū)H維持在3-9范圍內(nèi)的試劑的典型范例是檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、PIPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、和甘氨酰甘氨酸的酸形式或鹽。應(yīng)當(dāng)理解的是，在本發(fā)明中還可以使用試劑組合，其中試劑組合適于將pH維持在上文所述范圍內(nèi)。
術(shù)語(yǔ)″凍干餅″在用于本文時(shí)意欲涵蓋在一定條件下加工溶解的或至少部分溶解的組合物后得到的固體組合物，所述條件涉及至少一個(gè)將所述溶解的/部分溶解的組合物冷卻至結(jié)冰的步驟，和隨后至少一個(gè)真空干燥的步驟。
術(shù)語(yǔ)″凍干″和“冷凍干燥″涵蓋在一定條件下由溶解或至少部分溶解的組合物除去液體的過(guò)程，所述條件涉及至少一個(gè)將所述溶解的/部分溶解的溶液冷卻至結(jié)冰、隨后真空干燥的步驟。凍干是用于制備固體多肽藥物的最常用方法。該方法由兩個(gè)主要步驟組成將多肽溶液冷凍和在真空條件下將冷凍的固體干燥。干燥步驟還可分成兩個(gè)階段初步和次級(jí)干燥。初部干燥除去凍結(jié)水(冰的升華)，次級(jí)干燥除去非凍結(jié)的″結(jié)合″水(水的解吸附)。對(duì)每個(gè)凍干步驟的更詳細(xì)分析提供于例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60(見(jiàn)第4部分，第16頁(yè)及以下)。
通常，通過(guò)將組合物裝到瓶中、在凍干機(jī)的架子上冷凍、然后建立真空并加熱架子以執(zhí)行初步干燥(或冰的升華)，實(shí)現(xiàn)對(duì)組合物的凍干。此后，在較高溫度進(jìn)行次級(jí)干燥(或吸附水的解吸附)直至完成加工，即組合物的含濕(水)量足夠低。凍干的方法在本領(lǐng)域是普遍知道的，參閱例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60。從業(yè)人員憑借普通技術(shù)就能夠在特定組合物的加工過(guò)程中將要使用的溫度、每個(gè)溫度下的時(shí)間、還有壓力方面優(yōu)化凍干條件。
術(shù)語(yǔ)″含濕量″意欲涵蓋與產(chǎn)品相關(guān)的水，包括但不限于吸附形式的水，諸如凍結(jié)溶質(zhì)相捕獲或吸附的非凍結(jié)水和/或與無(wú)定形相相關(guān)的非凍結(jié)水或結(jié)晶固體吸附的非凍結(jié)水。術(shù)語(yǔ)″含水量″與″含濕量″可互換使用。期望的殘余濕氣水平(含濕量)是次級(jí)干燥步驟的持續(xù)時(shí)間和溫度的函數(shù)。本領(lǐng)域知道用于在凍干過(guò)程中測(cè)定殘余含濕量的幾種方法；例如可以使用電子濕度計(jì)或殘余氣體分析儀。可以通過(guò)本領(lǐng)域知道的幾種方法來(lái)測(cè)定凍干制劑的含濕量，諸如例如干燥損失、Karl Fischer滴定、熱比重分析(TGA)、氣相層析(GC)、或近IR(參閱例如Wang等人，2000，International Journal ofPharmaceutics，2031-60)。用于測(cè)定含水量(含濕量)的方法還描述于歐洲和美國(guó)藥典。例如，可以如美國(guó)藥典(USP<921，Ic>)或歐洲藥典(EP<2.5.32>)中所述通過(guò)Karl Fischer電量滴定來(lái)進(jìn)行含水量測(cè)定。
簡(jiǎn)而言之，該方法如下通過(guò)電量滴定測(cè)定含水量水的電量測(cè)定利用Karl Fischer反應(yīng)，其依據(jù)的是無(wú)水介質(zhì)中水與二氧化硫和碘的定量反應(yīng)。在反應(yīng)池中以電化學(xué)方式即通過(guò)碘化物的氧化生成碘。在陽(yáng)極生成的碘立即與反應(yīng)池中所含的水和二氧化硫反應(yīng)。物質(zhì)中水的量與電量成正比，直至滴定終點(diǎn)。當(dāng)池中的水都耗盡時(shí)，達(dá)到終點(diǎn)，由此出現(xiàn)過(guò)量的碘，這可以通過(guò)量電法檢測(cè)，由此指示終點(diǎn)。然后計(jì)算物質(zhì)中存在的含水量百分比。
可以根據(jù)分析時(shí)小瓶中的樣品重量(即固體加上存在的水-稱為濕重基數(shù))來(lái)定義含濕量，或者可以根據(jù)校正樣品中測(cè)量到的水(即干重基數(shù))來(lái)進(jìn)行定義。在具有低含濕量的凍干產(chǎn)品的情況中，兩種測(cè)量方法(濕重基數(shù)對(duì)干重基數(shù))產(chǎn)生非常相似的結(jié)果。在用于本文時(shí)，含濕量是根據(jù)固體加上存在的水(即濕重基數(shù))來(lái)定義的。
術(shù)語(yǔ)″膨脹劑″(bulking agent)通常包括提供優(yōu)良凍干餅特性、形成藥物上精致產(chǎn)品、幫助多肽克服多種壓力(例如與凍干加工有關(guān)的剪切/凍結(jié))、和有助于在凍干過(guò)程及后續(xù)貯藏過(guò)程中維持多肽活性水平的試劑。膨脹劑的典型范例包括甘露醇、甘氨酸、蔗糖、乳糖。這些試劑可能對(duì)制劑的張力也有貢獻(xiàn)。
等滲溶液具有血液、腹水或其它相關(guān)體液的生理范圍內(nèi)的張力。等滲性是指具有相應(yīng)于0.9％NaCl溶液的滲透壓(＝286mOsM)之滲透壓的溶液。術(shù)語(yǔ)″基本上等滲的″意在表示相應(yīng)于含有約0.7-約1.5％NaCl，諸如例如約0.8-約1.3％，約0.8-約1.1％，約0.8-約1.0％，或約0.9％NaCl的鹽水溶液之滲透壓的張力。
術(shù)語(yǔ)″張力調(diào)節(jié)劑″意指能夠調(diào)節(jié)組合物的張力、使得在使用時(shí)將組合物溶解(或重構(gòu))后組合物。顯然，重構(gòu)的溶液之張力可取決于干組合物中和重構(gòu)溶劑中張力調(diào)節(jié)劑的含量。
張力調(diào)節(jié)劑包括但不限于選自如下的組分醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘露醇、甘油、丙二醇，或這些化合物中兩種或多種的混合物。
適于提供具有上述張力的組合物之張力調(diào)節(jié)劑的量為例如從0-約9mg/ml氯化鈉，從0-約17mg/ml二水合氯化鈣，從0-約51mg/ml甘露醇，從0-約26mg/ml甘油，從0-約21mg/ml丙二醇，取決于是否各個(gè)張力調(diào)節(jié)劑單獨(dú)或與一種或多種張力調(diào)節(jié)劑組合使用。
術(shù)語(yǔ)″表面活性劑″通常包括那些保護(hù)蛋白質(zhì)免于由空氣/溶液界面誘導(dǎo)的壓力和由溶液/表面誘導(dǎo)的壓力的影響的試劑。例如，表面活性劑可以保護(hù)蛋白質(zhì)免于聚集。合適的表面活性劑可以包括例如聚山梨酸酯、聚氧乙烯烷基醚諸如Brij35_、或泊洛沙姆諸如吐溫20、吐溫80、或泊洛沙姆188。優(yōu)選的表面活性劑是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆407；聚氧乙烯烷基醚，例如Brij35_、Cremophor A25、Sympatens ALM/230；和聚山梨酸酯/吐溫，例如聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80。更優(yōu)選的是泊洛沙姆，例如泊洛沙姆188，和吐溫，例如吐溫20和吐溫80。一般地，所加表面活性劑的量為0.005-5mg/ml。優(yōu)選的量為0.01-3mg/mol，更優(yōu)選的0.01～3mg/ml(對(duì)于吐溫20和/或吐溫80)和0.05-3.0mg/ml(對(duì)于泊洛沙姆188)。
術(shù)語(yǔ)″初始含量″指配制時(shí)加到組合物中的因子VII多肽的量。本文給出的濃度(mg/ml)指除濕前(例如凍干前)的因子VII多肽溶液或重構(gòu)組合物中因子VII多肽的濃度，或者在涉及固體組合物例如凍干餅中的濃度時(shí)表述成％w/w。
在用于本文時(shí)，所述量理解為±約10％，因此約50mM包括50mM±5mM，4％包括4％±0.4％，等等。
如上所述，本發(fā)明的研究人員對(duì)本領(lǐng)域的主要貢獻(xiàn)是將因子VII多肽穩(wěn)定化從而能夠長(zhǎng)時(shí)間貯藏而不會(huì)引起用戶的風(fēng)險(xiǎn)增加和不便。
本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，在將因子VII多肽穩(wěn)定化時(shí)需要調(diào)整許多關(guān)鍵的參數(shù)。一個(gè)重要的參數(shù)至少部分涉及含濕量，例如水。含濕量應(yīng)當(dāng)受到限制。作為另一個(gè)重要參數(shù)，組合物應(yīng)當(dāng)至少包含一種穩(wěn)定劑。
穩(wěn)定劑包括但不限于，抗氧化劑、糖、多元醇、表面活性劑和適于在預(yù)定范圍內(nèi)維持pH的試劑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑包括選自下組的至少兩組藥物上可接受賦形劑的組合抗氧化劑、糖、和多元醇。糖和多元醇具有防溶劑和/或防凍劑特性，這在將組合物進(jìn)行凍干的情況中可能是重要的，至少部分重要。一般而言，可以通過(guò)至少兩組賦形劑的適當(dāng)組合而部分實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定性的改進(jìn)。然而，更具體的說(shuō)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)所述組合包含糖(蔗糖)或抗氧化劑(甲硫氨酸)時(shí)，穩(wěn)定效果可能甚至更加顯著。此外，還令人驚訝的發(fā)現(xiàn)甲硫氨酸可預(yù)防因子VII多肽的氧化性降解。
如所述，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑包括組合至少兩組藥物上可接受的賦形劑。
依照本發(fā)明，因子VII多肽意欲涵蓋上文所述多肽。在本發(fā)明的合適實(shí)施方案中，因子VII多肽選自下組人因子VIIa、重組人因子VIIa、和因子VII序列變體。優(yōu)選的是，因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa或因子VII相關(guān)多肽，其中在本說(shuō)明書所述“體外蛋白水解測(cè)定法″和″體外水解測(cè)定法″中的一種或多種方法中進(jìn)行測(cè)試時(shí)，所述因子VII相關(guān)多肽與野生型因子VII的活性比是至少1.25。
如上所述，含濕量應(yīng)當(dāng)受到限制。為了本發(fā)明的目的，在大量提供因子VII多肽時(shí)，它可以是固體或液體的形式。然而，在大量提供因子VII多肽時(shí)，它通常是液體的形式。因此，將大量蛋白質(zhì)進(jìn)一步加工以制備組合物時(shí)需要添加合適賦形劑并由混合物除去液體的步驟，所述添加賦形劑可以在除去液體之前或之后進(jìn)行。用于從多肽除去液體的這樣一種方法涉及凍干。因此，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物是凍干餅的形式。然而，本發(fā)明不排除適于由大量多肽除去液體以獲得含濕量不超過(guò)約3％w/w的固體組合物的其它方法。
此外，依照本發(fā)明，含濕量?jī)?yōu)選不超過(guò)約2.5％w/w，更優(yōu)選不超過(guò)約2％w/w，最優(yōu)選不超過(guò)約1.5％w/w。
可以理解，本發(fā)明部分涉及在制備過(guò)程中(例如在混合賦形劑和除去液體以獲得含濕量最高3％w/w的固體組合物的過(guò)程中)限制因子VII多肽的降解，以及由制造至使用(例如直至將組合物施用于患者之時(shí))該固體組合物這段時(shí)間里限制所述降解。
因此，將包含因子VII多肽的組合物穩(wěn)定化時(shí)還有另一個(gè)參數(shù)，即在溶于水性溶劑，諸如純水或水性緩沖液后，應(yīng)當(dāng)將pH維持在pH范圍3-9內(nèi)。也就是說(shuō)，除去含濕量之前，例如凍干前，多肽溶液的pH應(yīng)當(dāng)維持在約3-約9內(nèi)。有利的是，該pH范圍也處于期望的生理范圍內(nèi)，從而不會(huì)在通過(guò)腸胃外手段進(jìn)行施用后對(duì)使用者造成傷害。優(yōu)選的是，溶液的pH是約4.0-約9.0，諸如4.0-8.0，4.0-7.5，4.0-7.0，4.5-7.0，4.5-6.8，4.5-6.5，5.0-7.0，5.0-6.5，5.0-6.0，5.5-6.0，或約5.5-約6.5，諸如約5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，6.1，6.2，6.3，6.4，或6.5。
在合適實(shí)施方案中，適于將pH維持在3-9范圍的試劑選自下組檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、戊二酸、PIPES、和甘氨酰甘氨酸的酸或鹽，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能提供所示范圍的pH值。
此外，用于將pH保持在3-9的適當(dāng)試劑也可以是至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能提供所示范圍的pH值。所述適當(dāng)試劑的濃度范圍為約0.1mM-100mM；約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mm-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，適于將pH保持在3-9的適當(dāng)試劑為組氨酸，優(yōu)選為L(zhǎng)-組氨酸。
通過(guò)氧化途徑以及通過(guò)聚集途徑的因子VII多肽的降解是穩(wěn)定性的敏感參數(shù)。
通常，在終止凍干后，組合物得到穩(wěn)定化，使得少于初始含量5％w/w、諸如少于4、3、或2％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成其氧化形式。因子VII多肽的初始含量即配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的量。此外，根據(jù)常規(guī)分析方法(諸如例如本申請(qǐng)實(shí)施例中所述方法)的測(cè)定，少于初始含量5％w/w、諸如少于4.0％、3.0％、2.5％、2％、1.5％、或少于1％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
本發(fā)明的研究人員發(fā)現(xiàn)，因子VII多肽在貯藏于環(huán)境溫度后的進(jìn)一步降解(即計(jì)算由終止制造過(guò)程時(shí)直至于30℃貯藏8個(gè)月)很少。發(fā)現(xiàn)包含抗氧化劑(甲硫氨酸)的組合物針對(duì)因子VII多肽的氧化性降解更加穩(wěn)定。
因此，依照本發(fā)明，合適組合物在于環(huán)境溫度貯藏至少8個(gè)月后氧化形式的含量增加有限。也就是說(shuō)，在還有一些實(shí)施方案中，組合物是穩(wěn)定的，從而在終止制造過(guò)程(例如凍干加工)后將組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約6％w/w的因子VII多肽被額外降解成氧化形式。在其它合適實(shí)施方案中，由終止制造過(guò)程時(shí)直至于30℃貯藏8個(gè)月后計(jì)算，不超過(guò)約5、4、3、2、或1.5％w/w的因子VII多肽額外轉(zhuǎn)變成氧化形式。在本發(fā)明的這些實(shí)施方案中，組合物是穩(wěn)定的，從而所述組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約5％(4、3、2、或1.5％)w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式。如上所述，初始含量指配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的因子VII多肽的量。
如上所述，聚集途徑對(duì)因子VII多肽的降解也可看作基本的穩(wěn)定性指示參數(shù)。
因此，本發(fā)明的實(shí)施方案涉及穩(wěn)定的組合物，使得將所述組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。如上所述，所述因子VII多肽的初始含量指配制組合物之后、凍干步驟之前添加到組合物中的量。通過(guò)糖、多元醇、和抗氧化劑含量的適當(dāng)優(yōu)化，至少是部分優(yōu)化，組合物是穩(wěn)定的，從而所述組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約4.0％、3.0％w/w、諸如2.5、2.0、1.5、或1.0％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
因此，有利的是，終止制造過(guò)程之后(即終止凍干加工后)，本發(fā)明的組合物具有低含量的氧化形式和聚集體，因此，依照本發(fā)明的組合物的特征是在進(jìn)行貯藏前其中氧化形式和聚集體初始含量較低，例如在終止制造過(guò)程后不超過(guò)初始含量約5％w/w、諸如4％、3％、或2％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式，而且少于5％w/w、諸如不超過(guò)約4.0％、3.0％、2.5％、2％、1.5％、或不超過(guò)約1％w/w轉(zhuǎn)變成二聚體或高級(jí)聚合體形式。
此外，有利的是，本發(fā)明的組合物是貯藏穩(wěn)定的，例如在黑暗中于30℃貯藏至少8個(gè)月后少于初始含量10％w/w、諸如6％、5％、4％、3％、2％、或1.5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化形式，而且少于5％w/w、諸如4％、3％、2.5％、2％、1.5％、或1％w/w轉(zhuǎn)變成二聚體或高級(jí)聚合體形式。
如上所述，所述改進(jìn)的穩(wěn)定性涉及特定賦形劑的適當(dāng)組合。依照本發(fā)明，賦形劑應(yīng)當(dāng)選自下組糖、多元醇、和抗氧化劑。在合適實(shí)施方案中，感興趣的糖是二糖、三糖、和多糖，而且糖可以選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。此外，在有些實(shí)施方案中，多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇。在還有一些實(shí)施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽中任意一種的肽。
可以理解，糖和多元醇賦形劑分別還可以是至少兩種所列試劑的混合物。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，所用糖賦形劑是至少兩種二糖、三糖、和/或多糖的組合，諸如例如蔗糖與環(huán)糊精的組合、海藻糖與環(huán)糊精的組合、蔗糖與葡聚糖的組合、或蔗糖與乳糖的組合。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，所用多元醇賦形劑是至少兩種多元醇的組合，諸如例如甘露醇與山梨醇的組合、甘露醇與木糖醇的組合、或山梨醇與木糖醇的組合。在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，所用抗氧化劑賦形劑是至少兩種抗氧化劑的組合，諸如例如甲硫氨酸與同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、谷胱甘肽以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽中任意一種的肽中一種或多種的組合。
在特別感興趣的實(shí)施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽以及含有同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽中任一種的肽。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。
在更加有趣的實(shí)施方案中，多元醇存在的量是約5％w/w-約90％w/w。優(yōu)選的，多元醇存在的量是約18％w/w-約88％w/w，諸如約18％w/w-約83％w/w、25％-80％、30％-65％、30％-80％、40％-80％、50％-80％、30％-75％、40％-75％、50％-75％、或約50％-約70％w/w。
多元醇存在的量是約0.5-75mg/ml，諸如約2-60mg/ml、5mg/ml-55mg/ml、8-45mg/ml、10-40mg/ml、10-30mg/ml、或約2-45mg/ml、5mg/ml-45mg/ml、5-35mg/ml、5-25mg/ml、5-20mg/ml、20-40mg/ml、或諸如約20-30mg/ml。
在其有趣實(shí)施方案中以及在本發(fā)明的其它一些有趣實(shí)施方案中，組合物中糖存在的量是約0-約85％w/w。在其它有趣實(shí)施方案中，其存在量是約3％w/w-約80％w/w，諸如約7％w/w-約75％w/w、10％-70％、10％-50％、20％-50％、10％-40％、或約10％w/w-約35％w/w。
糖存在的量應(yīng)當(dāng)是約0.5-75mg/ml，諸如約2-60mg/ml、約5mg/ml-55mg/ml、約8-45mg/ml、約10-40mg/ml、約10-30mg/ml、約2-45mg/ml、約5mg/ml-45mg/ml、約5-35mg/ml、約5-25mg/ml、諸如約5-20mg/ml。
應(yīng)當(dāng)提供的抗氧化劑的量是約0.05-10mg/ml，優(yōu)選約0.1-5mg/ml，更優(yōu)選約0.1mg/ml-2.5mg/ml、甚至更優(yōu)選約0.1-2mg/ml，最優(yōu)選約0.1-1mg/ml。
需要適當(dāng)調(diào)節(jié)多元醇與糖之間的比率。在本發(fā)明的合適實(shí)施方案中，所述多元醇相對(duì)于所述糖的重量比的范圍是約100∶1-1∶50。在甚至更合適實(shí)施方案中，所述重量比是約50∶1-1∶10，更優(yōu)選約20∶1-1∶5。在其它合適實(shí)施方案中，重量比涉及范圍約10∶1-1∶2和約6∶1-1∶2。在非常合適的實(shí)施方案中，所述糖醇相對(duì)于所述糖的重量比的范圍是約4∶1-1∶1，諸如約4∶1-3∶2或約1∶1-3∶2。
本發(fā)明的有些實(shí)施方案中，多元醇是甘露醇；在還有一些實(shí)施方案中，糖是蔗糖。此外，在還有一些實(shí)施方案中，抗氧化劑是甲硫氨酸。
在本發(fā)明又一優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物還包含其它用作膨脹劑的藥物賦形劑。即甘露醇之外的膨脹劑包括在組合物中。特別的，膨脹劑包括在通過(guò)凍干制備的組合物中。
在組合物中因子VII多肽的初始濃度優(yōu)選為約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約6mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約4mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，約1.0mg/mL-約4mg/mL，或約1.0mg/mL-約3mg/mL，例如約1.0mg/mL，約2.0mg/mL，約3.0mg/mL，約4.0mg/mL，或約5.0mg/mL。
在一個(gè)實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、和聚山梨酸酯，優(yōu)選聚山梨酸酯20或80，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸，和聚山梨酸酯，優(yōu)選聚山梨酸酯20或80，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸和聚山梨酸酯，優(yōu)選聚山梨酸酯20或80，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸、組氨酸和聚山梨酸酯，優(yōu)選聚山梨酸酯20或80，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖和泊洛沙姆188，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、甲硫氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。
在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含在藥盒的第一單元形式中的組合物包含因子VII多肽、甘露醇、蔗糖、組氨酸、甲硫氨酸和泊洛沙姆188，具有不超過(guò)約3％的含濕量，而且組合物當(dāng)溶于水時(shí)具有5.0-7.0范圍內(nèi)的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，因子VII多肽是人因子VIIa。
在一個(gè)實(shí)施方案中，包含在藥盒的第二單元形式中的施用載體包括水和組氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體還包含一種或多種選自下組的成分CaCl2、NaCl、和甘氨酰甘氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體包含選自如下的一種或多種成分CaCl2，濃度為約5-15mM；NaCl，濃度為約30-60mM，諸如例如約40mM或約50mM。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，制備穩(wěn)定因子VII多肽的方法包括凍干。凍干涉及一種方法，其中含有所述因子VII多肽的溶液注入冷凍干燥管等中。所述因子VII多肽可任選的在開(kāi)始凍干前經(jīng)過(guò)無(wú)菌過(guò)濾。為凍干小管，對(duì)凍干機(jī)的托架降溫，使溶液低于臨界產(chǎn)物溫度。通過(guò)導(dǎo)入真空除去水份，水蒸汽在凍干機(jī)的冰冷凝器上冷凝。當(dāng)產(chǎn)品干時(shí)，通常少于3％的殘留含濕量(例如，通過(guò)上述Karl Fischer電量滴定測(cè)定)，封閉小管并加帽。制備完成且組合物現(xiàn)在呈凍干餅的形式。
重構(gòu)組合物意在用于預(yù)防和/或治療性處理的非胃腸道施用。優(yōu)選的，藥物組合物通過(guò)非胃腸道，即靜脈內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)施用，或其通過(guò)例如連續(xù)或脈沖輸注的方式施用。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及所述固體穩(wěn)定的組合物用于制備治療凝固因子應(yīng)答性綜合征的藥物的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及因子VII多肽用于制備治療因子VII應(yīng)答性綜合征的藥物的用途。
在不同的實(shí)施方案中，所述因子VII應(yīng)答性綜合征為血友病A、血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)或創(chuàng)傷。此外因子VII應(yīng)答性綜合征可與抗凝劑療法相關(guān)。
如所述，本發(fā)明的組合物為固體形式。因此，在適合的實(shí)施方案中，藥物應(yīng)當(dāng)適于被溶解，因此，允許非胃腸道施用所述藥物。當(dāng)所述組合物施用于患者時(shí)，包括在施用步驟前溶解所述組合物于適當(dāng)液體中的步驟。
此處使用的縮寫FVII凝固因子VII，以其單鏈形式FVIIa凝固因子VII，以其切割的活化的雙鏈形式rFVII(rFVIIa)重組因子VII(重組因子VIIa)實(shí)施方案在本發(fā)明的一系列實(shí)施方案中，藥盒的第一單元形式包括賦型劑，和其量，且具有如制劑1-48所示的pH(表1)
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
(表1，續(xù))
在本發(fā)明的另一系列實(shí)施方案中，藥盒的第一單元形式包括賦形劑，和其量，且具有如制劑100-124所示的pH
(表2)
(表2，續(xù))
(表2，續(xù))
(表2，續(xù))
(表2，續(xù))
(表2，續(xù))
在一系列實(shí)施方案中，在任一組合物1-48和100-124中FVII多肽的濃度為約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，或約1.0mg/mL-約3mg/mL。
在另一系列實(shí)施方案中，在任一組合物1-48和100-124中FVII多肽的濃度選自約0.6mg/mL，約0.7mg/mL，約0.8mg/mL，約0.9mg/mL，約1.0mg/mL，約1.1mg/mL，約1.2mg/mL，約1.3mg/mL，約1.4mg/mL，約1.5mg/mL，約1.6mg/mL，約1.7mg/mL，約1.8mg/mL，約1.9mg/mL，約2.0mg/mL，約2.1mg/mL，約2.2mg/mL，約2.3mg/mL，約2.4mg/mL，約2.5mg/mL，約2.6mg/mL，約2.7mg/mL，約2.8mg/mL，約2.9mg/mL，約3.0mg/mL，約3.1mg/mL，約3.2mg/mL，約3.3mg/mL，約3.4mg/mL，約3.5mg/mL，約3.6mg/mL，約3.7mg/mL，約3.8mg/mL，約3.9mg/mL，和約4.0mg/mL。
在一系列實(shí)施方案中，制劑1-48和100-124中聚山梨酸酯的濃度為約0.05-0.08mg/mL，諸如約0.06-0.08mg/mL，或約0.07mg/mL。
在另一系列實(shí)施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有如下量的L-組氨酸約0.5mg/mL-3mg/mL，例如約1.0-約2.0mg/mL，或約1.55mg/ML。
在另一系列實(shí)施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有約30-約60mM NaCl，諸如約40mM，約45mM，或約50mM NaCl。
在另一系列實(shí)施方案中，第一單元形式含有在任一組合物1-48和100-124中所述的組合物，第二單元形式含有約30-約60mM NaCl，諸如約40mM，約45mM，或約50mM NaCl，以及如下量的L-組氨酸約0.5mg/mL-3mg/mL，例如約1.0-約2.0mg/mL，或約1.55mg/ML。
本發(fā)明的另一方面，提供了一種組合物，其中包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑
a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含糖。在另一實(shí)施方案中，甲硫氨酸和多元醇的組合(b)還包含糖。在另一實(shí)施方案中，糖和甘露醇的組合(c)還包含抗氧化劑。在另一實(shí)施方案中，其中蔗糖和多元醇的組合(d)還包含抗氧化劑。
在一個(gè)有趣的實(shí)施方案中，抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽之任意一種的肽，或其混合物；優(yōu)選甲硫氨酸，或含有甲硫氨酸的混合物。在另一有趣的實(shí)施方案中，所述糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖，或其混合物；優(yōu)選蔗糖，或含有蔗糖的混合物。在另一有趣的實(shí)施方案中，所述多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇，或其混合物；優(yōu)選甘露醇或含有甘露醇的混合物。
組合物可還含有一種當(dāng)溶于水性溶劑中適于保持所述組合物的pH范圍為3-9的試劑。所述試劑的非限制性實(shí)例以及優(yōu)選的pH范圍如上述。
組合物還可以包含張力調(diào)節(jié)劑。所述張力調(diào)節(jié)劑的非限制性實(shí)例如上述。
聚山梨酸酯表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優(yōu)選聚山梨酸酯80。
在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，新組合物選自
(表3)
在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物選自(表4)
在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物選自(表5)
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XVI中的聚山梨酸酯濃度是約0.05-0.08mg/mL，諸如約0.06-0.08mg/mL，或約0.07mg/mL。
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XVI中的聚山梨酸酯是聚山梨酸酯20，例如吐溫20TM。在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XVI中的聚山梨酸酯是聚山梨酸酯80，例如吐溫80TM。
在發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，組合物選自(表6)
(表6，續(xù))
(表6，續(xù))
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XXVIII還包含一種或多種選自如下的成分Ca2+，優(yōu)選的量為約5-約15mM，諸如約10mM，和優(yōu)選的為CaCl2 x2H2O；NaCl，優(yōu)選的量為約50mM，或約40mM，例如39mM；組氨酸，優(yōu)選的L-組氨酸，優(yōu)選的量為約10mM；和甘氨酰甘氨酸，例如，量為約10mM在一系列實(shí)施方案中，組合物含有賦形劑，且其量如任一制劑I-XXVIII中所述，但是具有的pH為pH5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5.
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XVI中FVII多肽的濃度為約1.0mg/mL。
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XXVIII中FVII多肽為野生型人因子VIIa。
在一系列實(shí)施方案中，制劑I-XXVIII中FVII多肽為FVII變異體。
在不同系列的實(shí)施方案中，制劑I-XXVIII中FVII多肽選自L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FYII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FYII，V158D/E296V-FYII，V158D/M298K-FVII和S336G-FVII；在不同系列實(shí)施方案中，任一組合物1-48和100-124中的因子VII多肽選自約0.6mg/mL-約10.0mg/mL，諸如約0.6mg/mL-約8mg/mL，約0.6mg/mL-約6mg/mL，約0.6mg/mL-約5mg/mL，約0.6mg/mL-約4mg/mL，約0.6mg/mL-約3mg/mL，約1.0mg/mL-約5mg/mL，約1.0mg/mL-約4mg/mL，約1.0mg/mL-約3mg/mL，約0.6mg/mL，約0.7mg/mL，約0.8mg/mL，約0.9mg/mL，約1.0mg/mL，約1.1mg/mL，約1.2mg/mL，約1.3mg/mL，約1.4mg/mL，約1.5mg/mL，約1.6mg/mL，約1.7mg/mL，約1.8mg/mL，約1.9mg/mL，約2.0mg/mL，約2.1mg/mL，約2.2mg/mL，約2.3mg/mL，約2.4mg/mL，約2.5mg/mL，約2.6mg/mL，約2.7mg/mL，約2.8mg/mL，約2.9mg/mL，約3.0mg/mL，約3.1mg/mL，約3.2mg/mL，約3.3mg/mL，約3.4mg/mL，約3.5mg/mL，約3.6mg/mL，約3.7mg/mL，約3.8mg/mL，約3.9mg/mL，和約4.0mg/mL.
另一方面，本發(fā)明提供了一種制備如下表3-6所定義的新組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及ii)加工所述溶液以獲得具有含濕量不超過(guò)約3％w/w的固體組合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，多元醇存在的量的范圍為約0.5-約75mg/ml，優(yōu)選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，5-20mg/ml，20-40mg/ml，或約20-約30mg/ml，在一個(gè)實(shí)施方案中，糖存在的量的范圍為約0.5-75mg/ml，優(yōu)選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，或約5-20mg/ml。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗氧化劑存在的量的范圍為約0.05-10mg/ml，優(yōu)選約0.1-5mg/ml，更優(yōu)選約0.1mg/ml-2.5mg/ml，甚至更優(yōu)選約0.1-2mg/ml，最優(yōu)選約0.1-1mg/ml。
在一個(gè)實(shí)施方案中，糖為蔗糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗氧化劑為甲硫氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，多元醇為甘露醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，加工包括凍干。
本發(fā)明的新組合物用可接受的，優(yōu)選地?zé)o菌的稀釋劑或載體優(yōu)選為水性載體重構(gòu)。水性載體的非限制性實(shí)例包括注射用水(WFI)以及本說(shuō)明書(上述)中所述的溶劑，其含有至少一種選自如下的成分(i)當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH在3-9之間的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，和(ii)以足以使重構(gòu)的溶液基本上等滲的量存在的張力調(diào)節(jié)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體是WFI；在另一實(shí)施方案中，所述溶劑包含組氨酸。
發(fā)明的實(shí)施方案實(shí)施方案1一種含有藥物的藥盒，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有多肽和至少一種穩(wěn)定劑的組合物，其中所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量，以及用于容納所述第一單元的容器裝置；和，b)在第二單元形式中，含有用于重構(gòu)(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(iii)當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，
(iv)以足以使得自溶解第一單元形式的組合物于第二單元形式之施用載體的溶液基本上等滲的量的張力調(diào)節(jié)劑；和用于容納所述第二單元形式的容器裝置。
實(shí)施方案2根據(jù)實(shí)施方案1的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
實(shí)施方案3根據(jù)實(shí)施方案2或?qū)嵤┓桨?的藥盒，其中所述第二單元形式還含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
實(shí)施方案4根據(jù)實(shí)施方案1-3中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述多肽為凝血因子，諸如因子VIII，因子IX，因子X(jué)，因子II，因子V，因子VII。
實(shí)施方案5根據(jù)實(shí)施方案1-3中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述多肽為維生素K依賴性多肽，諸如因子VII，因子IX，因子X(jué)，因子II，蛋白C，蛋白S，促凝血酶。
實(shí)施方案6根據(jù)實(shí)施方案4或5的藥盒，其中凝固因子多肽選自人因子VIII，人因子VIIa，因子VII-相關(guān)多肽，人因子IX，人因子X(jué)，活化的人蛋白C。
實(shí)施方案7根據(jù)實(shí)施方案6的藥盒，其中FVII相關(guān)多肽是選自如下的因子VII變異體L305V-FVII，L305V/M306D/D309S-FVII，L305I-FVII，L305T-FVII，F(xiàn)374P-FVII，V158T/M298Q-FVII，V158D/E296V/M298Q-FVII，K337A-FVII，M298Q-FVII，V158D/M298Q-FVII，L305V/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V-FVII，V158D/E296V/M298Q/K337A-FVII，V158D/E296V/M298Q/L305V/K337A-FVII，K157A-FVII，E296V-FVII，E296V/M298Q-FVII，V158D/E296V-FVII，V158D/M298K-FVII，和S336G-FVII。
實(shí)施方案8根據(jù)實(shí)施方案6的藥盒，其中FVII相關(guān)多肽是因子VII變異體，其中所述因子VII變異體與人因子VIIa(野生型因子VII)的活性之比至少為1.25(當(dāng)于如本發(fā)明所述的一種或多種“體外蛋白水解測(cè)定法″和″體外水解測(cè)定法″測(cè)定)。
實(shí)施方案9根據(jù)實(shí)施方案1-8中任一項(xiàng)的藥盒，所述″當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑″存在的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
實(shí)施方案10根據(jù)實(shí)施方案1-9中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述″當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑″選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、谷氨酸、PIPES和甘氨酰甘氨酸或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示范圍內(nèi)的pH值。
實(shí)施方案11根據(jù)實(shí)施方案1-10中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第二單元形式包含試劑，當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)其適于保持所述組合物的pH范圍在4-7；優(yōu)選的范圍在4.5-7.5，諸如5-7，或5.5-6.5。
實(shí)施方案12根據(jù)實(shí)施方案1-11中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第二單元形式包含組氨酸。
實(shí)施方案13根據(jù)實(shí)施方案1-12中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述″張力調(diào)節(jié)劑″選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇或至少兩種所列調(diào)節(jié)劑的混合物；優(yōu)選的選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
實(shí)施方案14根據(jù)實(shí)施方案13的藥盒，其中所述″張力調(diào)節(jié)劑″包含Ca2+或Mg2+。
實(shí)施方案15根據(jù)實(shí)施方案1-14中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第一和第二單元形式之一或二者還含有防腐劑。
實(shí)施方案16根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自下組的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；
d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；和f)表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
實(shí)施方案17根據(jù)實(shí)施方案16的藥盒，其中其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
實(shí)施方案18根據(jù)實(shí)施方案16的藥盒，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
實(shí)施方案19根據(jù)實(shí)施方案16的藥盒，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
實(shí)施方案20根據(jù)實(shí)施方案16的藥盒，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
實(shí)施方案21根據(jù)實(shí)施方案16或17任一項(xiàng)的藥盒，其中抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含表面活性劑。
實(shí)施方案22根據(jù)實(shí)施方案16或18任一項(xiàng)的藥盒，其中甲硫氨酸和多元醇的組合(b)還包含表面活性劑。
實(shí)施方案23根據(jù)實(shí)施方案16或19任一項(xiàng)的藥盒，其中糖和甘露醇的組合(c)還包含表面活性劑。
實(shí)施方案24根據(jù)實(shí)施方案16或20任一項(xiàng)的藥盒，其中蔗糖和多元醇的組合(d)還包含表面活性劑。
實(shí)施方案25根據(jù)實(shí)施方案16的藥盒，其中所述穩(wěn)定劑是表面活性劑和甲硫氨酸的組合(e)。
實(shí)施方案26根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽之任意一種的肽。
實(shí)施方案27根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖。
實(shí)施方案28根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇。
實(shí)施方案29根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約5％w/w、優(yōu)選不超過(guò)約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過(guò)約1.0％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
實(shí)施方案30根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約6％w/w，優(yōu)選不超過(guò)約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過(guò)約1.5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化的形式。
實(shí)施方案31根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述多元醇的量的范圍為約5％w/w-90％w/w，優(yōu)選約18％w/w-88％w/w，18％-83％，25％-80％，40％-80％，50％-80％，或約50％w/w-70％w/w。
實(shí)施方案32根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述糖的量的范圍為約0-85％w/w，優(yōu)選約3％w/w-80％w/w，7％-75％，10％-70％，10％-50％，10％-40％，或約10％w/w-35％w/w。
實(shí)施方案33根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述多元醇與所述糖的重量比的范圍是約100∶1-1∶50，優(yōu)選約50∶1-1∶10；20∶1-1∶5；10∶1-1∶2；6∶1-1∶2；4∶1-1∶1；或約4∶1-3∶2。
實(shí)施方案34根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中第一單元形式還包含張力調(diào)節(jié)劑。
實(shí)施方案35根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中表面活性劑選自聚山梨酸酯，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，諸如Brij35_；或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188或407；以及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物或聚乙二醇(PEG)，諸如PEG 8000。
實(shí)施方案36根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述糖為蔗糖。
實(shí)施方案37根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述多元醇為甘露醇。
實(shí)施方案38根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
實(shí)施方案39根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述含濕量不超過(guò)約2.5％w/w，優(yōu)選不超過(guò)約2％w/w，最優(yōu)選不超過(guò)約1.5％w/w。
實(shí)施方案40根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述第一單元形式為凍干餅。
實(shí)施方案41根據(jù)前述任一實(shí)施方案的藥盒，其中所述第一單元形式包含因子VII多肽，甘露醇，蔗糖，和選自如下的表面活性劑聚山梨酸酯或泊洛沙姆，諸如吐溫80_或泊洛沙姆188_。
實(shí)施方案42根據(jù)實(shí)施方案41的藥盒，其還含有甲硫氨酸。
實(shí)施方案43根據(jù)實(shí)施方案41或42的藥盒，其中所述第二單元形式含有L-組氨酸，其量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
實(shí)施方案44根據(jù)實(shí)施方案41-43任一項(xiàng)的藥盒，所述第二單元形式含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨酰甘氨酸。
實(shí)施方案45一種制備多肽的液體制劑的方法，所述方法包括步驟a)提供實(shí)施方案1-44中任一項(xiàng)所述的第一單元形式和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中的溶解的組合物液體溶液。
實(shí)施方案46一種治療凝固因子應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據(jù)實(shí)施方案45的方法制備的所述凝固因子之液體制劑。
實(shí)施方案47根據(jù)實(shí)施方案46的方法，其中所述凝固因子應(yīng)答性綜合征是血友病，且所述凝固因子是因子VIII或因子IX；或者所述綜合征為膿毒癥，且所述凝固因子是蛋白C或活化的蛋白C。
實(shí)施方案48根據(jù)實(shí)施方案46用于治療FVII應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的由實(shí)施方案45方法制備的所述生物試劑的液體制劑。
實(shí)施方案49根據(jù)實(shí)施方案48的方法，所述綜合征選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
實(shí)施方案50因子VII多肽用于制備呈實(shí)施方案1-44中任一項(xiàng)定義的藥盒形式的藥物的用途，用于治療因子VII應(yīng)答性綜合征。
實(shí)施方案51一種組合物，其包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
實(shí)施方案52根據(jù)實(shí)施方案51的組合物，其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
實(shí)施方案53根據(jù)實(shí)施方案51的組合物，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
實(shí)施方案54根據(jù)實(shí)施方案51的組合物，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
實(shí)施方案55根據(jù)實(shí)施方案51的組合物，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
實(shí)施方案56根據(jù)前述實(shí)施方案51-55中任一項(xiàng)的組合物，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、和谷胱甘肽之任意一種的肽實(shí)施方案57根據(jù)前述實(shí)施方案51-56中任一項(xiàng)的組合物，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精、和葡聚糖。
實(shí)施方案58根據(jù)前述實(shí)施方案51-57中任一項(xiàng)的組合物，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇、和木糖醇。
實(shí)施方案59根據(jù)前述實(shí)施方案51-58中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約5％w/w、優(yōu)選不超過(guò)約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過(guò)約1.0％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
實(shí)施方案60根據(jù)前述實(shí)施方案51-59中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后不超過(guò)初始含量約6％w/w、優(yōu)選不超過(guò)約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過(guò)約1.5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化的形式。
實(shí)施方案61根據(jù)前述實(shí)施方案51-60中任一項(xiàng)的組合物，其中所述多元醇的量的范圍為約5％w/w-90％w/w，優(yōu)選約18％w/w-88％w/w，18％-83％，25％-80％，40％-80％，50％-80％，或約50％w/w-70％w/w。
實(shí)施方案62根據(jù)前述實(shí)施方案51-61中任一項(xiàng)的組合物，其中所述糖的量的范圍為約0-85％w/w，優(yōu)選約3％w/w-80％w/w，7％-75％，10％-70％，10％-50％，10％-40％，或約10％w/w-35％w/w。
實(shí)施方案63根據(jù)前述實(shí)施方案51-62中任一項(xiàng)的組合物，其中所述多元醇與所述糖的重量比為約100∶1-1∶50，優(yōu)選約50∶1-1∶10；20∶1-1∶5；10∶1-1∶2；6∶1-1∶2；4∶1-1∶1；或約4∶1-3∶2。
實(shí)施方案64根據(jù)前述實(shí)施方案51-63中任一項(xiàng)的組合物，其中還包含試劑，當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)其適于保持所述組合物的pH在3-9之間；優(yōu)選的pH范圍為4-7，更優(yōu)選的范圍為4.5-6.5，甚至更優(yōu)選的范圍為5.5-6.5。
實(shí)施方案65根據(jù)實(shí)施方案64的組合物，其中所述試劑選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、谷氨酸、PIPES和甘氨酰甘氨酸或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示范圍內(nèi)的pH值。
實(shí)施方案66根據(jù)前述實(shí)施方案51-65中任一項(xiàng)的組合物，其中還包含張力調(diào)節(jié)劑。
實(shí)施方案67根據(jù)實(shí)施方案66的組合物，其中所述張力調(diào)節(jié)劑選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘露醇、甘油和丙二醇實(shí)施方案68根據(jù)前述實(shí)施方案51-67中任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優(yōu)選聚山梨酸酯80。
實(shí)施方案69根據(jù)前述實(shí)施方案51-68中任一項(xiàng)的組合物，其中所述糖是蔗糖。
實(shí)施方案70根據(jù)前述實(shí)施方案51-69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述多元醇是甘露醇。
實(shí)施方案71根據(jù)前述實(shí)施方案51-70中任一項(xiàng)的組合物，其中所述因子VII多肽選自人因子VIIa，重組人因子VIIa和因子VII序列變異體。
實(shí)施方案72根據(jù)實(shí)施方案71的組合物，其中所述因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa。
實(shí)施方案73根據(jù)前述實(shí)施方案51-72中任一項(xiàng)的組合物，其中所述因子VII多肽是因子VII相關(guān)多肽，其中所述因子VII相關(guān)多肽與野生型因子VII的活性之比至少為1.25，當(dāng)于如本發(fā)明所述的一種或多種“體外蛋白水解測(cè)定法″和″體外水解測(cè)定法″測(cè)定。
實(shí)施方案74根據(jù)前述實(shí)施方案51-73中任一項(xiàng)的組合物，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
實(shí)施方案75根據(jù)前述實(shí)施方案51-74中任一項(xiàng)的組合物，其中所述含濕量不超過(guò)約2.5％w/w，優(yōu)選不超過(guò)約2％w/w，最優(yōu)選不超過(guò)約1.5％w/w。
實(shí)施方案76根據(jù)前述實(shí)施方案51-75中任一項(xiàng)的組合物，其中，組合物是凍干餅。
實(shí)施方案77根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物包含因子VII多肽，甘露醇，蔗糖，和泊洛沙姆80，諸如吐溫80_。
實(shí)施方案78根據(jù)實(shí)施方案77的組合物，其還包含甲硫氨酸。
實(shí)施方案79根據(jù)前述實(shí)施方案77-78中任一項(xiàng)的組合物，其還含有L-組氨酸。
實(shí)施方案80根據(jù)前述實(shí)施方案77-79中任一項(xiàng)的組合物，其中還含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨酰甘氨酸。
實(shí)施方案81根據(jù)前述實(shí)施方案51-80中任一項(xiàng)的組合物，選自
實(shí)施方案82根據(jù)實(shí)施方案81的組合物，選自
實(shí)施方案83根據(jù)前述實(shí)施方案81或82中任一項(xiàng)的組合物，其含有聚山梨酸酯80，量為0.07mg/mL。
實(shí)施方案84根據(jù)前述實(shí)施方案81-83中任一項(xiàng)的組合物，其含有FVIIa多肽，量為1.0mg/mL。
實(shí)施方案85根據(jù)前述實(shí)施方案81-84中任一項(xiàng)的組合物，其還含有至少一種選自如下的組分Ca2+，量為約10mM，優(yōu)選為CaCl2 x2H2O；NaCl，量為約50mM或約40mM，例如39mM；組氨酸，優(yōu)選L-組氨酸，量為約10mM。
實(shí)施方案86根據(jù)前述實(shí)施方案81-85中任一項(xiàng)的組合物，其具有的pH為5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.0，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5。
實(shí)施方案87一種制備如實(shí)施方案51-86中所定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，量為約0.06-0.08mg/mLii)加工所述溶液以獲得具有含濕量不超過(guò)約3％w/w的固體組合物。
實(shí)施方案88根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽之任意一種的肽。
實(shí)施方案89根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖。
實(shí)施方案90根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇。
實(shí)施方案91根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述多元醇存在的量為約0.5-約75mg/ml，優(yōu)選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，5-20mg/ml，20-40mg/ml，或約20-約30mg/ml。
實(shí)施方案92根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述糖存在的量范圍為約0.5-75mg/ml，優(yōu)選約2-45mg/ml，諸如約5mg/ml-45mg/ml，約5-35mg/ml，約5-25mg/ml，或約5-20mg/ml。
實(shí)施方案93根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述抗氧化劑的量范圍為約0.05-10mg/ml，優(yōu)選約0.1-5mg/ml，更優(yōu)選約0.1mg/ml-2.5mg/ml，甚至更優(yōu)選約0.1-2mg/ml，最優(yōu)選約0.1-1mg/ml。
實(shí)施方案94根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述，其中所述糖為蔗糖。
實(shí)施方案95根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述抗氧化劑為甲硫氨酸。
實(shí)施方案96根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述多元醇為甘露醇。
實(shí)施方案97根據(jù)實(shí)施方案87的方法，其中所述加工包括凍干。
實(shí)施方案98一種治療FVII應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據(jù)實(shí)施方案51-86中任一項(xiàng)所定義的組合物實(shí)施方案99根據(jù)實(shí)施方案98的方法，其中所述綜合征選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
實(shí)施方案100因子VII多肽用于制備治療因子VII應(yīng)答性綜合征的藥物的用途，所述藥物含有實(shí)施方案51-86中任一項(xiàng)所定義的組合物。
實(shí)施方案101根據(jù)實(shí)施方案100的用途，其中所述綜合征選自血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝結(jié)因子抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
下述實(shí)施例以示例方式提供，而不意在限制實(shí)施例一般方法實(shí)施例1用于測(cè)定穩(wěn)定性指示參數(shù)的分析方法A.通過(guò)反相HPLC(RP-HPLC)測(cè)定氧化形式HPLC柱用粒度5μm且孔徑300_的丁基鍵合硅石填充4.5×250mm柱。柱溫70℃。洗脫液A水99.9％v/v和三氟乙酸0.1％v/v。洗脫液B乙腈80％v/v、三氟乙酸0.09％v/v和水19.91％v/v。用30分鐘X％B-(X+13)％B的線性梯度對(duì)柱進(jìn)行洗脫。流速1.0ml/min。檢測(cè)214nm。
氧化形式是因子VII多肽的甲硫氨酸亞砜。例如，F(xiàn)VII的兩種主要衍生物是Met(O)298FVII和Met(O)306FVII。
氧化形式的含量表述成配制后組合物中以氧化形式回收的因子VII占因子VII初始量的百分比。
B.通過(guò)高效凝膠滲透層析(GP-HPLC)測(cè)定因子VII多肽的聚集體在7.5×300mm的Waters多肽Pak 300 SW柱上進(jìn)行GP-HPLC，使用含5％異丙醇的0.2M硫酸銨pH7.0作為流動(dòng)相。流速0.5ml/min。檢測(cè)215nm。
聚集體的含量表述成配制后組合物中以二聚體、寡聚物和多聚物形式回收的因子VII占因子VII初始量的百分比。
實(shí)施例2測(cè)試因子VII多肽的生物學(xué)活性的測(cè)定法因子VIIa活性的測(cè)試可以通過(guò)簡(jiǎn)單的初步體外測(cè)試(″體外水解測(cè)定法″)來(lái)測(cè)試因子VIIa活性從而選擇合適因子VIIa變體的合適測(cè)定法。
體外水解測(cè)定法可以測(cè)定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變體(二者在下文中都稱為″因子VIIa″)的比活?？梢赃M(jìn)行平行測(cè)定，從而直接比較它們的比活。該測(cè)定法是在微量滴定板(MaxiSorp，Nunc，丹麥)中進(jìn)行的。向因子VIIa(終濃度100nM，溶于含有0.1M NaCl、5mMCaCl2、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mM Hepes pH7.4)中加入呈色底物D-Ile-Pro-Arg-對(duì)硝基苯胺(S-2288，Chromogenix，瑞典)至終濃度1mM。在SpectraMaxTM340讀板儀(Molecular Devices，美國(guó))中連續(xù)測(cè)量405nm的吸光率。將保溫20分鐘期間形成的吸光率減去不含酶的空白孔的吸光率，用于計(jì)算變體與野生型因子VIIa的活性之間的比率比率＝(因子VIIa變異體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。
據(jù)此，可鑒定出與天然因子VIIa相比活性相當(dāng)或更高的因子VIIa變異體，諸如例如變異體的活性與天然因子VII(野生型因子FVII)的活性之間的比率接近或超過(guò)1.0的變異體。
還可以使用生理學(xué)底物來(lái)測(cè)量因子VIIa或因子VIIa變異體的活性，諸如因子X(jué)，合適的濃度是100-1000nM，其中在加入合適呈色底物(如S-2765)后測(cè)量所生成的因子X(jué)a(″體外蛋白水解測(cè)定法″)。另外，活性測(cè)定法可以在生理溫度進(jìn)行。
體外蛋白水解測(cè)定法平行測(cè)定天然(野生型)因子VIIa和因子VIIa變異體(二者在下文中都稱為″因子VIIa″)，從而直接比較它們的比活。該測(cè)定法是在微量滴定板(MaxiSrp，Nunc，丹麥)中進(jìn)行的。將因子VIIa(10nM)和因子X(jué)(0.8μM)(溶于100μl含0.1M NaCl、5mM CaCl2、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mM Hepes pH7.4)保溫15分鐘。然后加入50μl含有0.1M NaCl、20mM EDTA、和1mg/ml牛血清清蛋白的50mMHepes pH7.4終止對(duì)因子X(jué)的切割。加入呈色底物Z-D-Arg-Gly-Arg-對(duì)硝基苯胺(S-2765，Chromogenix，瑞典)至終濃度0.5mM，測(cè)量所生成的因子X(jué)a的量。在SpectraMaxTM340讀板儀(MolecularDevices，美國(guó))中連續(xù)測(cè)量405nm的吸光率。將10分鐘內(nèi)形成的吸光率減去不含F(xiàn)VIIa的空白孔的吸光率，用于計(jì)算變異體與野生型因子VIIa的蛋白水解活性之間的比率比率＝(因子VIIa變異體的405nm吸光率)/(野生型因子VIIa的405nm吸光率)。
據(jù)此，可鑒定出與天然因子VIIa相比活性相當(dāng)或更高的因子VIIa變異體，諸如例如變異體的活性與天然因子VII(野生型因子FVII)的活性之間的比率接近或超過(guò)1.0的變異體。
凝血酶生成測(cè)定法可以在包含生理濃度的所有相關(guān)凝集因子和抑制劑以及活化血小板的測(cè)定法中測(cè)量因子VII或因子VII相關(guān)多肽或者因子VIII或因子VIII相關(guān)多肽(如變異體)生成凝血酶的能力，如Monroe等人，Brit.J.Haematol.，99542-547，1997的第543頁(yè)所述(收入本文作為參考)。
凝結(jié)測(cè)定法還可以使用一步凝結(jié)測(cè)定法(測(cè)定法4)來(lái)測(cè)量因子VII多肽的活性，該方法基本上如WO 92/15686或US 5,997,864中所述進(jìn)行。簡(jiǎn)而言之，將待測(cè)樣品在50mM Tris(pH 7.5)、0.1％BSA中稀釋，并取100μl與100μl缺乏因子VII的血漿和200μl含10mM Ca2+的促凝血酶原激酶C一起保溫。測(cè)量凝結(jié)時(shí)間，并與使用連續(xù)稀釋的參考標(biāo)準(zhǔn)或含檸檬酸鹽的正常人血漿合并液獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較。
工作實(shí)施例實(shí)施例3分別帶有和不帶有組氨酸的rFVIIa組合物的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)可見(jiàn)，不存在組氨酸的凍干有利，因?yàn)樾纬奢^少的二聚體/寡聚物。
組合物
對(duì)于組合物A1，C1，E1，G1，I1，和K1的重構(gòu)，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑；對(duì)于組合物B1，D1，F(xiàn)1，H1，J1，和L1，使用注射用水(WFI)。
實(shí)施例4分別帶有和不帶有組氨酸、和/或甘氨酰甘氨酸、和/或NaCl凍干的rFVIIa組合物的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)可見(jiàn)，不存在NaCl時(shí)凍干是有利的，因?yàn)闀?huì)降低餅崩塌的風(fēng)險(xiǎn)。
為了重構(gòu)，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑(對(duì)于組合物A2，I2和Q2)；對(duì)于組合物B2，J2和R2，使用注射用水(WFI)。
為了重構(gòu)，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑(對(duì)于組合物C2，K2，和S2)；對(duì)于組合物D2，L2和T2，使用注射用水(WFI)。
為了重構(gòu)，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑加NaCl 2.92mg/mL(對(duì)于組合物E2，M2和U2)；對(duì)于組合物F2，N2和V2，使用生理鹽水2.92mg/mL。
為了重構(gòu)，使用1.55mg/mL組氨酸溶劑加NaCl 2.92mg/mL(對(duì)于組合物G2，O2和X2)；對(duì)于組合物H2，P2和Y2，使用生理鹽水2.92mg/mL。
實(shí)施例5組合物的制備通常，組合物從純化的大體積溶劑中制備。加入賦形劑，將溶劑稀釋至期望的rFVIIa濃度。所得溶液利用無(wú)菌的膜過(guò)濾器無(wú)菌過(guò)濾(0.2微米孔徑或等價(jià)物)，填充入無(wú)菌玻璃小管將小管凍干，用橡膠帽封閉，用鋁箔型帽密封。
實(shí)施例6比較在凍干前添加或不添加L-組氨酸制劑中形成的可溶性聚集體的含量制備如下制劑(所有濃度示為mg/ml)
如實(shí)施例5所述制備制劑，利用填充體積5.3ml。凍干后，二聚體、寡聚物和多聚物形式的含量如實(shí)施例3所述用GP-HPLC測(cè)量。結(jié)果如下
結(jié)果顯示，凍干后，不加入L-組氨酸的制劑1和2具有較低的二聚體和寡聚物形式的含量，與含有L-組氨酸的相應(yīng)制劑3和4相比。
實(shí)施例7凍干的rFVIIa制劑之穩(wěn)定性制劑含有rFVIIa1.0mg/mlNaCl 2.34mg/mlCaCl2， 2H2O 1.47mg/ml甘氨酰甘氨酸 1.32mg/ml聚山梨酸酯80 0.07mg/mlL-甲硫氨酸0.5mg/ml甘露醇25mg/ml蔗糖 10mg/mlpH6.0利用1.1ml的填充體積通過(guò)如實(shí)施例5所述制備。
制劑置于25℃和40℃的暗處。根據(jù)下表收集樣品。凍干產(chǎn)品于10mM L-組氨酸溶劑中重構(gòu)后，如實(shí)施例3測(cè)定二聚體/寡聚物/聚合物以及氧化形式，而活性通過(guò)如實(shí)施例4所述一步凝結(jié)測(cè)定法確定。
n.d.未測(cè)定實(shí)施例8在因素設(shè)計(jì)研究中研究了氯化鈉對(duì)凍干餅的可見(jiàn)外觀的影響，可變的參數(shù)中有氯化鈉的含量。包括在研究中的四種制劑的結(jié)果示于下表中。
所有制劑還含有rFVIIa 1.0mg/mL氯化鈣 1.47mg/mL甘氨酰甘氨酸 1.32mg/mL聚山梨酸酯80 0.1mg/mL甘露醇 40mg/mL蔗糖 10mg/mL此外，制劑1和2含有0.5mg/mL甲硫氨酸。
pH調(diào)整為6.0(制劑1和4)
5.0(制劑2和3)實(shí)施例9FVII多肽組合物的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)可見(jiàn)，在25℃貯藏6個(gè)月后所述組合物就形成二聚體/寡聚物而言是穩(wěn)定的。
組合物
對(duì)于組合物A-9至H-9的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9，D-9，F(xiàn)-9和H-9的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9至H-9，但是具有pH4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9至H-9，但是具有pH5.5。
對(duì)于組合物A-9-1至H-9-1的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9-1，D-9-1，F(xiàn)-9-1和H-9-1的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-1至H-9-1，但是具有pH4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-1至H-9-1，但是具有pH5.5。
對(duì)于組合物A-9-2至H-9-2的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9-2，D-9-2，F(xiàn)-9-2和H-9-2的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-2至H-9-2，但是具有pH4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-2至H-9-2，但是具有pH5.5。
對(duì)于組合物A-9-3至H-9-3的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9-3，D-9-3，F(xiàn)-9-3和H-9-3的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-3至H-9-3，但是具有pH 4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-3至H-9-3，但是具有pH 5.5。
對(duì)于組合物A-9-4至H-9-4的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9-4，D-9-4，F(xiàn)-9-4和H-9-4的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-4至H-9-4，但是具有pH4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-4至H-9-4，但是具有pH5.5。
對(duì)于組合物A-9-5至H-9-5的重構(gòu)，要使用注射用水(WFI)。
對(duì)于組合物B-9-5，D-9-5，F(xiàn)-9-5和H-9-5的重構(gòu)，也可使用1.55mg/mL組氨酸溶劑。
也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-5至H-9-5，但是具有pH4.5。此外，也制備了含有相同成分和成分的量的組合物做為組合物A-9-5至H-9-5，但是具有pH5.5。
權(quán)利要求
1.一種含有藥物的藥盒，所述藥盒包含a)在第一單元形式中，含有凝血因子多肽和至少一種選自如下的穩(wěn)定劑的組合物表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇，其中所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量，以及用于容納所述第一單元形式的容器裝置；和，b)在第二單元形式中，含有用于重構(gòu)(溶解)所述組合物的溶劑和至少一種選自如下的成分之施用載體(v)當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑，其中所述試劑以約0.1mM-100mM的量存在，(vi)足以使得自溶解第一單元形式的組合物于第二單元形式之施用載體所產(chǎn)生的重構(gòu)溶液基本上等滲的量的張力調(diào)節(jié)劑；和用于含有所述第二單元形式的容器裝置。
2.權(quán)利要求1的藥盒，其中所述第二單元形式還含有至少一種選自表面活性劑、抗氧化劑、糖和多元醇的成分。
3.權(quán)利要求1或2的藥盒，其中所述多肽選自人因子VIII，人因子VIIa，人因子IX，人因子X(jué)，活化的人蛋白C，或因子VII序列變異體。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述“當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑″存在的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述″當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9的試劑″選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、谷氨酸、PIPES和甘氨酰甘氨酸，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示范圍內(nèi)的pH值。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第二單元形式包含一種試劑，當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)其適于保持所述組合物的pH范圍在4-7；優(yōu)選的在4.5-7.5，諸如5-7，或5.5-6.5。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第二單元形式包含組氨酸，優(yōu)選的量為約0.1mM-約50mM；諸如約0.1mM-約40mM；約0.1mM-約35mM；約0.1mM-約30mM；約0.5mM-約25mM；約1mM-約20mM；約1mM-約15mM；約5mM-約20mM；或約5mM-約15mM。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述″張力調(diào)節(jié)劑″選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇，或至少兩種所列調(diào)節(jié)劑的混合物；優(yōu)選地選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
9.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的藥盒，其中所述第一單元形式含有至少一種選自下組的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；f)表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
10.權(quán)利要求9的藥盒，其中抗氧化劑與甘露醇的組合(a)還包含糖。
11.權(quán)利要求9的藥盒，其中甲硫氨酸與多元醇的組合(b)還包含糖。
12.權(quán)利要求9的藥盒，其中糖與甘露醇的組合(c)還包含抗氧化劑。
13.權(quán)利要求9的藥盒，其中蔗糖與多元醇的組合(d)還包含抗氧化劑。
14.權(quán)利要求9-13中任一項(xiàng)的藥盒，其還含有表面活性劑。
15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽之任意一種的肽；優(yōu)選甲硫氛酸。
16.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖；優(yōu)選蔗糖。
17.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇；優(yōu)選甘露醇。
18.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約5％w/w、優(yōu)選不超過(guò)約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過(guò)約1.0％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
19.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第一單元形式的組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約6％w/w，優(yōu)選不超過(guò)約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過(guò)約1.5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化的形式。
20.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述多元醇的存在量范圍是約5％w/w-90％w/w，優(yōu)選約18％w/w-88％w/w、18％-83％、25％-80％、40％-80％、50％-80％或約50％w/w-70％w/w。
21.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述糖的存在量范圍是約0％w/w-85％w/w、優(yōu)選約3％w/w-80％w/w、7％-75％、10％-70％、10％-50％、10％-40％、或約10％w/w-35％w/w。
22.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述多元醇與所述糖的重量比的范圍是約100∶1-1∶50，優(yōu)選約50∶1-1∶10、20∶1-1∶5、10∶1-1∶2、6∶1-1∶2、4∶1-1∶1，或約4∶1-3∶2.
23.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第一單元形式還包含張力調(diào)節(jié)劑。
24.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述表面活性劑選自聚山梨酸酯，諸如聚山梨酸酯20或80；聚氧乙烯烷基醚，諸如Brij 35_；或泊洛沙姆，諸如泊洛沙姆188或407；以及其它乙烯/聚丙烯嵌段聚合物或聚乙二醇(PEG)，諸如PEG 8000。
25.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中因子VII多肽存在的濃度是約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml、約0.6mg/ml-約5mg/ml、或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
26.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第一單元形式是凍干餅。
27.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥盒，其中所述第二單元形式含有一種或多種選自如下的成分CaCl2，NaCl，和甘氨酰甘氨酸。
28.一種制備凝血因子多肽的液體制劑的方法，所述方法包括步驟a)提供權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的第一和第二單元形式；b)將所述第一和第二單元形式混合以提供施用載體中組合物的溶解的液體溶液。
29.一種治療凝固因子應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求28的方法制備的所述凝固因子之液體制劑。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述綜合征是FVII應(yīng)答性綜合征且所述凝固因子是因子VII多肽。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述綜合征選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無(wú)力癥、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
32.因子VII多肽用于制備呈權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述形式的藥盒之藥物的用途，所述藥物用于治療因子VII應(yīng)答性綜合征。
33.一種組合物，其包含因子VII多肽和至少一種選自下組的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；e)甲硫氨酸；以及約0.06-0.08mg/mL量的聚山梨酸表面活性劑；所述組合物具有不超過(guò)約3％的含濕量。
34.權(quán)利要求33的組合物，其中抗氧化劑與甘露醇的組合還包含糖。
35.權(quán)利要求33的組合物，其中甲硫氨酸與多元醇的組合還包含糖。
36.權(quán)利要求27的組合物，其中糖與甘露醇的組合還包含抗氧化劑。
37.權(quán)利要求27的組合物，其中蔗糖與多元醇的組合還包含抗氧化劑。
38.前述權(quán)利要求27-37中任一項(xiàng)的組合物，其中抗氧化劑選自同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸、谷胱甘肽、以及包含同型半胱氨酸、半胱氨酸、胱硫醚、甲硫氨酸和谷胱甘肽之任意一種的肽；優(yōu)選甲硫氨酸。
39.前述權(quán)利要求27-38中任一項(xiàng)的組合物，其中糖選自蔗糖、右旋糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖、環(huán)糊精、麥芽糖糊精和葡聚糖；優(yōu)選蔗糖。
40.前述權(quán)利要求27-39中任一項(xiàng)的組合物，其中多元醇選自甘露醇、山梨醇和木糖醇；優(yōu)選甘露醇。
41.前述權(quán)利要求27-40中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約5％w/w、優(yōu)選不超過(guò)約4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、1.5％w/w、或不超過(guò)約1.0％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成聚集體。
42.權(quán)利要求27-51中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是穩(wěn)定的，從而在將該組合物于30℃貯藏8個(gè)月后，不超過(guò)初始含量約6％、優(yōu)選不超過(guò)約5％w/w、4.0％w/w、3.0％w/w、2.5％w/w、2.0％w/w、或不超過(guò)約1.5％w/w的因子VII多肽轉(zhuǎn)變成氧化的形式。
43.權(quán)利要求27-42中任一項(xiàng)的組合物，其還包含當(dāng)溶于水性溶劑時(shí)適于保持所述組合物的pH范圍在3-9，優(yōu)選的pH范圍在4-7，更優(yōu)選的范圍在4.5-6.5，甚至更優(yōu)選的范圍在5.5-6.5的試劑。
44.權(quán)利要求43的組合物，其中所述試劑選自檸檬酸、醋酸、組氨酸、蘋果酸、磷酸、酒石酸、琥珀酸、MES、HEPES、咪唑、TRIS、乳酸、谷氨酸、PIPES和甘氨酰甘氨酸，或至少兩種所列試劑的混合物，其中所述混合物能夠提供所示范圍內(nèi)的pH值。
45.權(quán)利要求27-44中任一項(xiàng)的組合物，其還含有張力調(diào)節(jié)劑。
46.權(quán)利要求45的組合物，其中所述張力調(diào)節(jié)劑選自醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇，或至少兩種所列調(diào)節(jié)劑的混合物；優(yōu)選地選自氯化鈉、氯化鎂、甘露醇、甘油、丙二醇、氯化鈣或其混合物。
47.權(quán)利要求27-46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述聚山梨酸酯表面活性劑選自聚山梨酸酯20或80，優(yōu)選聚山梨酸酯80。
48.權(quán)利要求27-47中任一項(xiàng)的組合物，其中所述因子VII多肽選自人因子VIIa、重組人因子VIIa和因子VII序列變異體。
49.權(quán)利要求48的組合物，其中因子VII多肽是人因子VIIa或重組人因子VIIa。
50.權(quán)利要求27-49中任一項(xiàng)的組合物，其中因子VII多肽是因子VII序列變異體，在本說(shuō)明書所述“體外蛋白裂解測(cè)定法″和″體外水解測(cè)定法″的一種或多種方法中進(jìn)行測(cè)試時(shí)，所述變異體與野生型因子VII的活性比是至少1.25。
51.權(quán)利要求27-50中任一項(xiàng)的組合物，其中因子VII多肽存在的濃度為約0.6mg/ml-約10.0mg/ml，諸如約0.6mg/ml-約6mg/ml，約0.6mg/ml-約5mg/ml，或約0.6mg/ml-約4mg/ml。
52.權(quán)利要求27-51中任一項(xiàng)的組合物，選自
53.權(quán)利要求52的組合物，選自
54.權(quán)利要求52的組合物，選自
55.權(quán)利要求52-54中任一項(xiàng)的組合物，其含有聚山梨酸酯80，量為約0.07mg/mL。
56.權(quán)利要求52-55中任一項(xiàng)的組合物，其含有FVIIa多肽，量為約1.0mg/mL。
57.權(quán)利要求52-56中任一項(xiàng)的組合物，還含有至少一種選自如下的成分量為約10mM的Ca2+，優(yōu)選為CaC12x2H20；量為約50mM或約40mM，例如39mM的NaCl；組氨酸，優(yōu)選量為約10mM的L-組氨酸。
58.權(quán)利要求52-57中任一項(xiàng)的組合物，具有pH為5.5，或5.6，或5.7，或5.8，或5.9，或6.0，或6.1，或6.2，或6.3，或6.4，或6.5。
59.一種制備權(quán)利要求27-58中定義的組合物的方法，包括步驟i)提供溶液中的因子VII多肽，所述溶液包含至少一種選自如下的穩(wěn)定劑a)抗氧化劑與甘露醇的組合；b)甲硫氨酸與多元醇的組合；c)糖與甘露醇的組合；d)蔗糖與多元醇的組合；和e)甲硫氨酸；以及聚山梨酸酯表面活性劑，其量為約0.06-0.08mg/mL；ii)加工所述溶液以獲得具有含濕量不超過(guò)約3％w/w的固體組合物。
60.一種治療FVII-應(yīng)答性綜合征的方法，包括向需要的受試者施用有效量的權(quán)利要求27-57中任一項(xiàng)定義的組合物。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述綜合征選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無(wú)力癥、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
62.因子VII多肽用于制備治療因子VII-應(yīng)答性綜合征的藥物的用途，所述藥物包含權(quán)利要求27-58中任一項(xiàng)定義的組合物。
63.權(quán)利要求62的用途，其中所述綜合征選自獲得性或先天性血友病A、獲得性或先天性血友病B、因子X(jué)I缺乏、因子VII缺乏、Glanzmann血小板無(wú)力癥、血小板減少、von Willebrand氏病、存在凝固因子抑制劑，如因子VIII或IX的抑制劑、手術(shù)、創(chuàng)傷、稀釋性凝血癥和抗凝劑療法。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)上以及物理上穩(wěn)定的藥盒和組合物，其含有多肽，特別是因子VII或因子VII相關(guān)多肽，使得這些組合物能夠在室溫進(jìn)行貯藏、操作和使用。
文檔編號(hào)A61K38/36GK1917861SQ200480037799
公開(kāi)日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2004年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月19日
發(fā)明者B·L·漢森, M·B·延森, T·科恩菲爾特 申請(qǐng)人:諾和諾德醫(yī)療保健公司