專利名稱：含笑內(nèi)酯的制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種含笑內(nèi)酯的制備方法及其以該藥物為有效成分的治療癌癥或輔助治療腫瘤的藥物組合物及其用途，以及該藥物化合物和組合物在制備抗癌或輔助抗癌藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤極大威脅著人類健康，我國現(xiàn)有癌癥患者約200萬人，每年新發(fā)160萬例，這是一個不小的群體，抗腫瘤研究是當(dāng)今生命科學(xué)領(lǐng)域極具挑戰(zhàn)性且意義重大的領(lǐng)域。過去的治療方法側(cè)重于對癌細(xì)胞的鏟除和殺傷，目前，臨床上常用的抗腫瘤藥物主要是細(xì)胞毒類藥物，這類抗癌藥具有選擇性差、毒副作用強、易產(chǎn)生耐藥性等缺點，是典型的雙面刃藥物，而且難以根除癌癥，不少癌癥的復(fù)發(fā)比例較高。惡性腫瘤的高復(fù)發(fā)率一直是困擾腫瘤醫(yī)生的難題，越來越多的研究證實腫瘤細(xì)胞群體中存在少數(shù)能使群體擴增的腫瘤干細(xì)胞。它們通常處于慢周期狀態(tài)，對化療藥物敏感性低，是腫瘤復(fù)發(fā)的根源。因此腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)給腫瘤治療帶來新的靶標(biāo)，針對腫瘤干細(xì)胞的藥物研究為徹底治愈癌癥提供可能。近年來，從天然產(chǎn)物中尋找抗癌活性化合物已經(jīng)成為抗癌藥物的開發(fā)熱點，前20 年間，全世界推出的藥物小分子新化學(xué)實體中，有61 %可追溯到天然產(chǎn)物。天然產(chǎn)物在某些治療領(lǐng)域出現(xiàn)率非常高78%的抗菌化合物和74%的抗腫瘤化合物都是天然產(chǎn)物，或從某個天然產(chǎn)物衍生而來，實踐證明，天然產(chǎn)物在抗癌藥物發(fā)現(xiàn)中的獨特作用重新引起高度重視。傳統(tǒng)治療腫瘤的化療藥物均存在耐藥問題，尤其是腫瘤干細(xì)胞更不敏感。抗癌中藥博大精深，高效低毒，從中有可能篩選出高效殺傷腫瘤干細(xì)胞，從而治療惡性腫瘤的藥物。倍半萜內(nèi)酯類化合物小白菊內(nèi)酯(Parthenolide)是從小白菊中提取的化合物， 最初被用來治療皮膚感染、風(fēng)濕病以及偏頭痛。近期研究表明，小白菊內(nèi)酯可抑制前列腺癌、乳腺癌、胃癌、白血病癌、腎癌、肺癌、結(jié)腸腺癌、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤等癌細(xì)胞的生長，在動物模型上小白菊內(nèi)酯還能治療紫外線引起的皮膚癌。對其作用機理研究發(fā)現(xiàn)，小白菊內(nèi)酯能抑制轉(zhuǎn)錄因子NF- κ B的激活，其活性可能主要來源于p65/NF- κ B亞基的Cys38上的巰基與含笑內(nèi)酯發(fā)生了 Michael加成反應(yīng)，由于NF-κ B是調(diào)控腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、藥物抗性的重要基因，抑制NF-K B的激活有可能提高腫瘤對于抑瘤劑所引起的細(xì)胞凋亡的敏感性。最近，紐約羅切斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Jordan，C. Τ.博士及其同事發(fā)現(xiàn)小白菊內(nèi)酯能夠在基本不損傷正常干細(xì)胞的情況下，針對性地消滅引發(fā)急性和慢性骨髓性白血病的干細(xì)胞，從而有可能根本上遏制白血病復(fù)發(fā)，小白菊內(nèi)酯這一獨特的作用機制，已引起人們的廣泛關(guān)注。含笑內(nèi)酯屬愈創(chuàng)木烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物，文獻報道[J. NatJrod. 1993，56， 90-98 ；Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003，11，1503-1510]的合成方法收率低(13 26% )、副反應(yīng)多，而且在反應(yīng)中使用的催化劑為三氟化硼乙醚絡(luò)合物，三氟化硼易燃、劇毒、強腐蝕性，這就大大限制了工業(yè)上的應(yīng)用。含笑內(nèi)酯的制備方法需要進一步改善，提高其制備效率，而且本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)了含笑內(nèi)酯的新的藥用用途。

發(fā)明內(nèi)容
含笑內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)如下結(jié)構(gòu)式⑴，分子式為C15H2tlO3,分子量為M8，性狀為白色無
定型粉末。本發(fā)明提供了制備含笑內(nèi)酯的制備方法和含笑內(nèi)酯的新的藥用用途。具體地，本發(fā)明提供了一種制備上式(I)的含笑內(nèi)酯的方法，該方法包括在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑中使小白菊內(nèi)酯在適當(dāng)?shù)乃岽呋瘎┑拇呋轮苽涞玫胶?nèi)酯。優(yōu)選地，上述制備含笑內(nèi)酯的方法包括如下步驟稱取適量小白菊內(nèi)酯和酸催化劑，加入適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑，攪拌反應(yīng)0.5 48小時， 將反應(yīng)液傾入適量冰水中，萃取，洗滌，干燥，減壓濃縮得含笑內(nèi)酯。更優(yōu)選地，上述制備含笑內(nèi)酯的方法包括如下步驟稱取適量小白菊內(nèi)酯和酸催化劑，加入適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑，在適當(dāng)溫度(_5°C IlO0C )下，攪拌0. 5 48小時，將反應(yīng)液傾入適量冰水中，乙酸乙酯萃取，有機層依次用適量飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，適量無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得含笑內(nèi)酯。為獲得純化含笑內(nèi)酯，可以通過硅膠柱層析純化得含笑內(nèi)酯純品。上述方法中，有機溶劑優(yōu)選選自四氫呋喃、乙醚、苯、甲苯、二氯甲烷和氯仿中一種或多種。酸催化劑優(yōu)選選自甲基磺酸、對甲基苯磺酸、三氟乙酸和乙酸中的一種或多種。上述方法中，有機溶劑優(yōu)選為甲苯、四氫呋喃或二氯甲烷中的一種。上述方法中，酸催化劑優(yōu)選為對甲基苯磺酸。本發(fā)明還提供了含笑內(nèi)酯制備治療癌癥的藥物的用途，其中癌癥優(yōu)選為白血病。本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的藥物組合物，該組合物中含有有效量的含笑內(nèi)酯以及藥學(xué)上可接受的載體，其中癌癥優(yōu)選為白血病。本發(fā)明還提供了一種含有含笑內(nèi)酯的組合物制備治療癌癥或輔助治療癌癥的藥物的用途，其中癌癥優(yōu)選為白血病。本發(fā)明的含笑內(nèi)酯在制備成治療癌癥的藥物后，可以直接使用含笑內(nèi)酯化合物， 或者以含笑內(nèi)酯的藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0. 1-99%、優(yōu)選為0. 5-90% 重量的含笑內(nèi)酯化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射和口服兩種形式給藥，注射可以是靜脈注射或肌肉注射。有益效果本發(fā)明提供的含笑內(nèi)酯的制備方法解決了含笑內(nèi)酯制備產(chǎn)率低的技術(shù)缺陷，使得含笑內(nèi)酯的產(chǎn)率達(dá)到了 60%以上，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)含笑內(nèi)酯的新的藥物用途，含笑內(nèi)酯在治療白血病方面同小白菊內(nèi)酯的效果幾乎等同，而且其對正常細(xì)胞無明顯殺傷作用。
具體實施例方式為了理解本發(fā)明，下面以實施例進一步說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明。實施例1 含笑內(nèi)酯的制備室溫下，將500mg小白菊內(nèi)酯、對甲基苯磺酸溶解于50mL甲苯中，回流反應(yīng) 12小時，將反應(yīng)液傾入適量冰水中，用乙酸乙酯萃取，然后將乙酸乙酯層分別用200mL的 5%碳酸氫鈉和300mL飽和食鹽水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得含笑內(nèi)酯的粗品，然后用硅膠柱層析(石油醚乙酸乙酯=80 20)得300mg含笑內(nèi)酯，收率為60%。制備得到的含笑內(nèi)酯的譜圖數(shù)據(jù)如下1H NMR (CDCl3,400MHz) δ 6. 14 (d，J = 3. 2Hz，1Η)，5. 45 (d，J = 2. 8Hz，1Η)，3. 76 (t， J = 10. 4Hz, 1H)，2· 61-2. 68 (m, 3H)，1. 98-2. 36 (m, 6H)，1. 67-1. 77 (m, 2H)，1. 62(s，3H)， 1. 28(s，3H) ； 13C NMR(CDCl3, 100MHz) δ 168. 8，137. 8，130. 8，129. 9，118. 6,83. 5,79. 2， 57. 6,48. 5,37. 2,33. 9,29. 1,24. 8,22. 9,21. 7。譜圖數(shù)據(jù)表明實施例1的方法制備得到的化合物是結(jié)構(gòu)式(I)的含笑內(nèi)酯。實施例2 含笑內(nèi)酯的藥理作用2. 1體外細(xì)胞測試取白血病干細(xì)胞標(biāo)記的癌細(xì)胞，將細(xì)胞配成2X 105/mL細(xì)胞懸液，加入96孔板圓底細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，分別加入小白菊內(nèi)酯(陽性對照)、含笑內(nèi)酯(實施例 1制備產(chǎn)品)，使其濃度均為25. 0μΜ,50.0μ Μ,每一測試濃度5孔，置37°C、5% CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)18小時，用MTT法在酶聯(lián)檢測儀570nm波長測得吸光度(A)值。計算出本發(fā)明化合物對白血病細(xì)胞的抑制作用。表1加入含笑內(nèi)酯后，癌癥干細(xì)胞和正常細(xì)胞的存活率(％ )
權(quán)利要求
1.一種制備含笑內(nèi)酯的方法，該方法包括在適當(dāng)有機溶劑中使小白菊內(nèi)酯在酸催化劑的催化下制備得到含笑內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法包括如下步驟稱取適量小白菊內(nèi)酯和酸催化劑，加入適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑，攪拌反應(yīng)0. 5 48小時，將反應(yīng)液傾入適量冰水中，萃取，洗滌，干燥，減壓濃縮得含笑內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，該方法包括如下步驟稱取適量小白菊內(nèi)酯和酸催化劑，加入適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑，在-5°C 110°C下，攪拌反應(yīng) 0. 5 48小時，將反應(yīng)液傾入適量冰水中，乙酸乙酯萃取，有機層依次用適量飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，適量無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得含笑內(nèi)酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，該方法還包括純化步驟將濃縮得到的含笑內(nèi)酯通過硅膠柱層析純化得含笑內(nèi)酯純品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其中有機溶劑選自苯、甲苯、二氯甲烷、氯仿、 四氫呋喃和乙醚中的一種或多種，優(yōu)選為甲苯、二氯甲烷和四氫呋喃中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的方法，其中酸催化劑選自甲基磺酸、對甲基苯磺酸、 三氟乙酸和乙酸中的一種或多種，優(yōu)選為對甲基苯磺酸。
7.一種含笑內(nèi)酯制備治療癌癥的藥物的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中癌癥為白血病。
9.一種治療癌癥的藥物組合物，該組合物中含有有效量的含笑內(nèi)酯以及藥學(xué)上可接受的載體，其中癌癥優(yōu)選為白血病。
10.權(quán)利要求9所述的組合物制備治療癌癥或輔助治療癌癥的藥物的用途，其中癌癥優(yōu)選為白血病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含笑內(nèi)酯的制備方法及其用途，制備方法是以小白菊內(nèi)酯為原料，適當(dāng)?shù)乃釣榇呋瘎?，在一定的溶劑和反?yīng)溫度下，即可得到本發(fā)明含笑內(nèi)酯；本發(fā)明還提供了含笑內(nèi)酯的藥用用途，含有治療有效量的含笑內(nèi)酯及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物在制備治療癌癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的制備方法解決了含笑內(nèi)酯制備產(chǎn)率低的技術(shù)缺陷，使得含笑內(nèi)酯的產(chǎn)率達(dá)到了60％以上，而且含笑內(nèi)酯在治療白血病方面同小白菊內(nèi)酯的效果幾乎等同，而且其對正常細(xì)胞無明顯殺傷作用。
文檔編號A61P35/02GK102234258SQ20101015368
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月23日
發(fā)明者張泉, 張福武, 翟佳黛, 范洪霞, 陳悅, 馬維維 申請人:南開大學(xué), 天津尚德藥緣科技有限公司