專利名稱：：玉米須黃酮在制備治療高血脂癥和減肥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其指玉米須黃酮的新藥物用途。
背景技術(shù)：
：含有黃酮成分的玉米須的藥理作用1抗氧化作用1.1提取物抗氧化活性劉平等將玉米須乙醇提取物再用氯仿、乙酸乙脂、正丁醇和甲醇分別萃取，獲得極性不同的5個(gè)組分，比較這5種不同溶劑萃取物在二苯基苦基苯胼(DPPH)體系及在Fe2+誘發(fā)卵黃脂蛋白多不飽和脂肪酸(PUFA)過(guò)氧化體系中的抗氧化活性。結(jié)果表明在DPPH體系中，正丁醇萃取物的抗氧化活性最強(qiáng)，氯仿萃取物次之；在Fe2+誘發(fā)脂蛋白PUFA過(guò)氧化體系中，氯仿萃取物的抗氧化活性最強(qiáng)，乙酸乙酯萃取物次之。由此可看出，同一組萃取物在不同測(cè)試體系中，抗氧化活性順序不同，故對(duì)抗氧化活性的評(píng)價(jià)必須考慮具體的測(cè)試體系。對(duì)于玉米須萃取物抗氧化作用的機(jī)理及影響抗氧化活性的因素有待進(jìn)一步的研究。Z.A.Maksimoviand報(bào)道成熟玉米須甲醇提取物對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化體系有抗氧化作用，活性最強(qiáng)的部位是中等油脂類濃縮物，包括酚酸類、黃酮類及其類似物。方敏等采用DPPH法和FRAP分析法評(píng)估了玉米須乙醇提取物的抗氧化活性。結(jié)果表明，不同濃度乙醇提取物顯示出不同的抗氧化活性，用五種不同濃度乙醇溶液浸提烘干至恒重的玉米須，用兩種方法測(cè)量其抗氧化活性，80%乙醇提取物的抗氧化能力最強(qiáng)。玉米須總黃酮的抗氧化作用明顯，對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到77.18%，總抗氧化能力FRAP值為691.04ymol/L。用新鮮玉米須進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)新鮮玉米須的無(wú)水乙醇提取物清除DPPH自由基能力和總抗氧化能力均最強(qiáng)。吳亞楠利用二苯代苦味?；杂苫w系、H202/Fe2+產(chǎn)生的羥基自由基體系、超氧陰離子自由基體系對(duì)玉米須黃酮粗提物、乙酸乙酯與正丁醇萃取物的體外清除自由基的能力進(jìn)行研究，并以蘆丁的測(cè)定值為對(duì)照。試驗(yàn)結(jié)果為清除DPPH自由基的能力依次為玉米須黃酮粗提物>正丁醇萃取物>乙酸乙酯萃取物。各試樣達(dá)到最大清除率的濃度及清除率分別為l、2、2g/L及93%、78%和71%；清除羥自由基的能力依次為玉米須黃酮粗提物>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物，當(dāng)試樣濃度為20g/L時(shí)，清除率達(dá)到最大，依次為92.04%、82.6%和56.5%；清除超氧陰離子自由基的能力依次為玉米須黃酮粗提物>乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物，當(dāng)試樣的濃度為20g/L時(shí)，清除率達(dá)到最大，依次為94.8%、90%和58%。結(jié)果表明，各試樣清除羥自由基和超氧陰離子自由基的效果優(yōu)于蘆丁的效果，玉米須黃酮具有較好的清除自由基的能力。許鋼研究了從玉米的不同部位中提取黃酮類物質(zhì)，并對(duì)其抗氧化性能進(jìn)行了比較研究。結(jié)果表明玉米須中黃酮類物質(zhì)含量最多，達(dá)到了2.106%；其次是玉米葉1.013%、玉米芯0.662%，玉米粒含量最少為0.411%。通過(guò)與TBHQ、VC茶多酚比較，發(fā)現(xiàn)除玉米粒夕卜，其他三者都表現(xiàn)出良好的抗氧化性能，其抗氧化性能隨提取物濃度的增加而增強(qiáng)。牛鵬飛等通過(guò)比較玉米須中不同極性的黃酮類化合物對(duì)羥基自由基生成體系以及對(duì)Fe2+誘發(fā)脂蛋白多不飽和脂肪酸(PUFA)過(guò)氧化體系的抑制作用，研究了不同極性黃酮類化合物的抗氧化活性(AOA)。結(jié)果表明不同極性的黃酮類化合物的抗氧化活性有較大差另O。在羥基自由基生成體系中，抗氧化活性順序依次為氯仿>正丁醇>乙酸乙酯。而在Fe2+誘發(fā)脂蛋白PUFA過(guò)氧化體系中，抗氧化活性順序依次為氯仿>乙酸乙酯>正丁醇，嚴(yán)格按照極性由小到大的順序排列。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，即使極性相同的黃酮類化合物，在不同抗氧化體系中，其抗氧化活性也有著明顯的差別。舒孝和報(bào)道分別在豬油中加0.01%的提取物(玉米須總黃酮)、抗壞血酸、檸檬酸、己二胺基四乙酸二鈉(EDTA)。每隔幾天測(cè)定其POV值，結(jié)果四種試劑中抗氧化性強(qiáng)弱順序如下EDTA>提取液>檸檬酸>壞血酸。得出提取物的抗氧化活性比較強(qiáng)。1.2有效成分抗氧化活性任順成等[利用硫代巴比妥酸法(TBA法)、共軛二烯檢測(cè)法(紫外法)對(duì)從玉米須中分離得到的2個(gè)黃酮類ax-5“-methane-3‘-methoxymaysin禾口ax-4"-0H-3'-methoxymaysin的抗脂質(zhì)體過(guò)氧化的能力進(jìn)行了檢測(cè).結(jié)果表明前者比后者對(duì)共軛二烯(CD-POV)的產(chǎn)生有更強(qiáng)的抑制能力，均表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。玉米須黃酮類單體對(duì)丙二醛(MDA)的抑制能力和對(duì)CD-POV的抑制能力基本一致，只是MDA達(dá)最大值時(shí)比CD-POV達(dá)最大值時(shí)需要的時(shí)間更長(zhǎng)，表現(xiàn)出抗氧化活性。近幾年玉米須黃酮類化學(xué)成分國(guó)內(nèi)外研究的比較多，抗氧化方面取得了一定的成果。研究已發(fā)現(xiàn)同一組提取物在不同測(cè)試體系中，所表現(xiàn)出來(lái)的抗氧化活性不同，故對(duì)其抗氧化活性的評(píng)價(jià)必須考慮具體的測(cè)試體系。選用何種評(píng)價(jià)方式最為科學(xué)及玉米須提取物抗氧化作用的機(jī)理與影響因素等問(wèn)題都有待于進(jìn)一步深入研究。2玉米須水提取物對(duì)血液粘度的作用高妮娜等玉米須總黃酮可降低瘀血模型動(dòng)物全血黏度和血漿黏度，改善血液循環(huán)。玉米須總黃酮對(duì)血瘀證模型動(dòng)物血漿黏度的影響血漿黏度觀察表明，模型組動(dòng)物血漿黏度(1.6774士0.0826)較空白對(duì)照組(1.2108士0.1069)明顯升高(P<0.01)，與模型組比較，玉米須總黃酮高劑量組動(dòng)物血漿黏度(1.3642士0.1096)明顯降低(P<0.05)，而陽(yáng)性藥對(duì)照組(1.4335士0.1127)、玉米須總黃酮中劑量組(1.4552士0.1138)和低劑量組(1.5220士0.1871)與模型組無(wú)差異(P>0.05)，表明玉米須總黃酮可降低瘀血模型動(dòng)物血漿黏度。3玉米須水提取物有降血脂作用MiuraT報(bào)道玉米須水提物能夠明顯降低正常小鼠和實(shí)驗(yàn)小鼠血中膽固醇含量。對(duì)正常小鼠血中甘油三酯能夠顯著降低。對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠血中甘油三酯含量未影響。結(jié)果提示，玉米須水提物降膽固醇作用是由于阻止膽固醇在肝臟合成。4玉米須制劑調(diào)血脂作用許衛(wèi)等研制的玉芩蓬口服液為中藥復(fù)方制劑，由豬毛菜、玉米須、杜仲炭、黃芩4味中藥組成，具有降低血壓，調(diào)節(jié)血脂、消腫利尿之功效。本實(shí)驗(yàn)表明玉芩蓬口服液對(duì)大鼠長(zhǎng)期喂以高脂飼料所造成的血清TC、TG、LDL-C的升高、HDL-C的降低有明顯抑制作用，對(duì)已經(jīng)形成高脂血癥的大鼠，也可使TC、TG、LDL-C水平明顯降低，并使HDL-C水平有一定程度的升高，表明玉芩蓬口服液對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥有明顯的預(yù)防和治療作用。另外，急性毒性試驗(yàn)及慢性毒性試驗(yàn)均表明玉芩蓬口服液毒性較低。因此，玉芩蓬口服液在調(diào)血脂和防治AS方面有較好的應(yīng)用前景。中藥降脂的研究進(jìn)展1降脂中藥的研究有降脂作用的中草藥有90余種，如山楂、澤瀉、丹參丹、大黃、決明子、何首烏、甘草、茯苓、柴胡、芍藥、川芎、白術(shù)、黃芪、菊花、茵陳、當(dāng)歸、葛根、荷葉、桑寄生、桃仁、生地黃、黨參、姜黃、人參、絞股藍(lán)、枸杞子、靈芝、刺五加葉、女貞子、冬蟲夏草、懷牛膝、杜仲、月見(jiàn)草、蒲黃、紅花、三七、沒(méi)藥、銀杏葉、沙棘、虎杖、陳皮、半夏、漏蘆、黃連、黃芩、鬼箭羽、赤松葉、火麻仁、柿葉、花粉、馬齒莧、大豆、大蒜、茶葉、海帶、米糠、香菇、紫菜、燕麥、洋蔥、桔梗、薤白、水蛭、熊膽、木耳等。其中以降膽固醇(TC)為主的中藥有山楂、澤瀉、何首烏、柴胡、川彎、當(dāng)歸、荷葉、黨參、人參、靈芝、刺五加葉、懷牛膝、蒲黃、沙棘、陳皮、半夏、漏蘆、大豆、薤白等。降三酰甘油(TG)為主的中藥有甘草、刺五加葉、黃連、黃芩等。降TC、TG的中藥有大黃、決明子、葛根、桑寄生、姜黃、人參、絞股藍(lán)、枸杞、女貞子、蟲草、月見(jiàn)草、三七、銀杏葉、虎杖、馬齒莧、大蒜、茶葉、水蛭、熊膽、木耳等。其降脂作用以降血清膽固醇居多；其功效多屬補(bǔ)肝腎、健脾益氣、活血化瘀及消食、除痰、利水等。2中藥降血脂有效成分研究經(jīng)大量的實(shí)驗(yàn)研究和臨床考察發(fā)現(xiàn)，有多種活性成分具有良好的降脂作用，現(xiàn)就多種降脂活性成分的藥效及作用機(jī)制概述如下。皂苷類成分具有降脂作用的有效成分以皂苷類居多。以這類成分降脂作用為主的天然藥物有絞股藍(lán)、人參、柴胡、三七葉、刺五加葉等，它們對(duì)高脂血癥動(dòng)物的Tc、TG和LDL有顯著降低作用。蒽醌類成分廣泛存在于天然藥物中，而以蓼科、豆科植物居多，主要代表藥物有大黃、何首烏、虎杖等。黃酮類成分其生理活性多樣，降血脂主要通過(guò)抗氧化作用實(shí)現(xiàn)。代表植物中，山楂為常用中藥材，主要含金絲桃苷為主的黃酮類有機(jī)酸，能明顯降低小鼠血清TC和升高HDL/TC；蕎麥總黃酮、沙棘黃酮、銀杏葉黃酮均能抑制高脂血癥動(dòng)物TC、TG的升高，對(duì)高脂血癥有顯著的預(yù)防和治療作用。生物堿類成分生物堿是天然藥物中存在最多的一類化學(xué)成分，具有強(qiáng)烈的生理活性。如利用荷葉生物堿制劑喂飼高脂血癥小鼠，其血清TC的含量有明顯降低。揮發(fā)油及脂肪油類揮發(fā)油為一類主要由萜類、低分子脂肪族和芳香族化合物組成的混合物。如沙棘油、微孔草油、月見(jiàn)草油、中華大蒜油及火麻仁油均屬于此類。蛋白質(zhì)類成分主要指一些活性蛋白質(zhì)、活性肽及氨基酸等富有特殊生物活性的物質(zhì)。大豆蛋白、甘薯粘蛋白、決明子蛋白質(zhì)都屬于此類，均能使高脂血癥大鼠的Tc、TG和LDL顯著降低。因?yàn)檫@類蛋白質(zhì)中含有與膽汁酸相結(jié)合的組分，從而抑制膽固醇的吸收和在體內(nèi)的沉積?；钚远嗵穷惤抵瑱C(jī)制與蛋白質(zhì)類似。枸杞多糖、北蟲草多糖、海帶多糖、石莼多糖和魔芋中所含葡甘聚糖，都可以顯著降低高脂血癥動(dòng)物血脂中的Tc、TG水平，同時(shí)提高HDL/TC值。不飽和脂肪酸它能與膽固醇結(jié)合生成熔點(diǎn)低、易于運(yùn)轉(zhuǎn)、代謝和排泄的酯，改變膽固醇體內(nèi)分布，減少血管壁中脂酯沉積。多酚降脂機(jī)制與黃酮類似，也是通過(guò)抗氧化作用和清除自由基來(lái)實(shí)現(xiàn)的。其他類成分除了上述降脂活性成分外，還有少數(shù)固醇類，萜類等化合物。如綠豆中所含植物固醇能夠減少膽固醇的吸收。澤瀉主含三萜類化合物，可降低血清TC、TG，升高血清HDL。綜上所述，中藥降血脂是一種簡(jiǎn)便快捷、行之有效的方法。在降脂中藥中，有一部分既是藥品又是食品，如山楂、枸杞子、荷葉、菊花、大蒜、海帶、馬齒莧等，這為開發(fā)降脂食品創(chuàng)造了良好條件。但目前仍存在一些亟待解決的問(wèn)題，如中醫(yī)藥在防治高脂血癥方面低水平重復(fù)現(xiàn)象嚴(yán)重；臨床實(shí)驗(yàn)大多缺少現(xiàn)代科學(xué)的理論依據(jù)；研究近期效果遠(yuǎn)多于遠(yuǎn)期效果；很多報(bào)道中沒(méi)有進(jìn)行深層次的有效化學(xué)成分的研究。所以今后不僅要進(jìn)行有效藥物的篩選，而且應(yīng)該深入地研究藥理和中藥化學(xué)成分，根據(jù)構(gòu)效關(guān)系擬制出降脂效果好的配方，以便更好地為人類健康服務(wù)。目前，尋找新的降脂中藥，對(duì)已發(fā)現(xiàn)的中藥進(jìn)行評(píng)價(jià)已經(jīng)成為一個(gè)重要的研究方向。急性毒性玉米須黃酮小鼠急性毒性毒性太低，無(wú)法測(cè)得LD5tl，最大耐受量為16g/kg。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種玉米須黃酮在治療高血脂癥和減肥的藥物中的應(yīng)用，目的在于提供一種新型的降血脂、減肥藥物，滿足人們對(duì)該類藥物的需要。本發(fā)明玉米須黃酮可以采取常規(guī)方法或文獻(xiàn)中記載的方法獲得，優(yōu)選為包括下列步驟1、工藝流程玉米須一備料一脫脂一水提一濃縮一脫色一醇析一上清液一回收乙醇一層析一干燥一玉米須黃酮2、生產(chǎn)控制參數(shù)及具體操作①備料選取無(wú)蟲蛀、無(wú)霉變、新鮮的玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過(guò)40目篩，待用。②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過(guò)夜，以除去脂溶性雜質(zhì)。真空過(guò)濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇，循環(huán)使用。③水提將脫脂后的藥材粉料投入圓底燒瓶中，加入1020倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8090°C加熱30min，提取3次，合并提取清液，待用。④濃縮把浸提清夜投入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5左右，得濃縮液，待用。⑤脫色把濃縮液投入圓底燒瓶中，在攪拌下加入少量濃度為2030%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時(shí)間2h，加熱溫度50°C，趁熱過(guò)濾，得脫色液，加熱蒸去殘留雙氧水，待用。⑥醇析把脫色液投入燒杯中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%75%(V/V)，攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過(guò)夜，離心分離，收集液相回收乙醇，待用。⑦層析把回收乙醇濃縮液上AB-8大孔吸附樹脂，水洗后，不同濃度乙醇洗脫，收集60%-70%乙醇部分，回收乙醇，待用。⑧干燥把玉米須乙醇部分至真空干燥箱中，干燥，過(guò)100目篩，得玉米須黃酮。⑨用蘆丁做對(duì)照品、三氯化鋁甲醇做顯色劑和待測(cè)樣品溶液搖勻，放置10分鐘，以60%乙醇為溶劑空白，在272血紫外測(cè)定吸光度，代入回歸方程中，計(jì)算出百分含量。要求純度在50%以上為合格。本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服制劑、外用制劑。本發(fā)明專利的有益效果1、用水作溶劑提取黃酮的提取方法簡(jiǎn)單易行，濃縮后乙醇沉淀，沉淀部分為多糖，上清液即為黃酮部分。將玉米須多糖和黃酮同時(shí)提取，節(jié)約能源。2、采用AB-8對(duì)粗黃酮進(jìn)行精制，使黃酮的純度由約5%提高到50%以上。并對(duì)含量測(cè)定進(jìn)行方法學(xué)考查，RSD均小于2%。3、增加植物資源的新用途玉米須現(xiàn)階段作為廢棄物被白白扔掉，作為藥用資源對(duì)其研究亦甚少，屬未開發(fā)利用品種。將玉米須總黃酮開發(fā)成降血脂、減肥制劑是對(duì)中草藥資源的有效利用。4、帶動(dòng)區(qū)域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展吉林省是玉米的主產(chǎn)區(qū)之一，可年產(chǎn)玉米須90萬(wàn)噸，現(xiàn)階段還未進(jìn)行有效的利用，由于降糖降脂藥物臨床需求量較大，必將帶動(dòng)區(qū)域產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。本發(fā)明制成的藥物玉米須黃酮降血脂作用顯著并有減肥作用。服用劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴(yán)重程度和其它類似的因素而改變，口服量為0.45-3.Og/日·人，每日分一三次服用。具體實(shí)施例方式下面通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證本發(fā)明。第一部分玉米須總黃酮對(duì)正常大鼠血脂的影響1.材料和方法1.1主要試劑、藥品及儀器玉米須黃酮吉林化工學(xué)院玉米須研發(fā)小組提供(含量為54%)戊巴比妥鈉上海清析化工科技有限公司20070416生理鹽水吉林康乃爾制藥有限公司20070515數(shù)顯恒溫水浴鍋國(guó)華電器有限公司HH-2型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)北京醫(yī)用機(jī)廠LDZ5-2型電子天平上海友聲衡器有限公司BS-600L型1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，40只，體重120160g(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第10-5112)。1.3藥物配制及動(dòng)物分組1.3.1藥物配制將玉米須黃酮用蒸餾水配成0.4%,0.8%和1.6%的溶液。1.3.2動(dòng)物分組及給藥方案40只大鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，灌胃給藥，每日一次，連續(xù)28d?？瞻捉M蒸餾水10mL/kg低劑量組玉米須黃酮40mg/kg中劑量組玉米須黃酮80mg/kg高劑量組玉米須黃酮160m/kg1.4實(shí)驗(yàn)方法給藥期間，每7d記錄每組每只大鼠的體重，飲水量和攝食量。末次給藥前，各組動(dòng)物禁食不禁水14h，末次給藥后30min，將動(dòng)物用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，分離血清，測(cè)定血清中膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及游離脂肪酸的含量。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有結(jié)果均采用Excel進(jìn)行組間差異性t檢驗(yàn)，結(jié)果以均值士標(biāo)準(zhǔn)差(3f士S)表示。3.結(jié)果3.1玉米須黃酮對(duì)正常大鼠飲水量、攝食量和體重的影響與空白組比較，玉米須黃酮中、高劑量能降低21d和28d正常大鼠的飲水量和攝食量，ρ<0.05或ρ<0.01，見(jiàn)Tab.1及Tab.2，玉米須黃酮中、高劑量可明顯降低正常大鼠的體重，P<0.05或口<0.01，見(jiàn)Tab.3。Tab.1玉米須黃酮對(duì)正常大鼠飲水量的影響(〒士s,η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05，**P<0·01。Tab.2玉米須黃酮對(duì)正常大鼠攝食量的影響(J±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05，**P<0·01。Tab.3玉米須黃酮對(duì)正常大鼠體重的影響(元士s，η=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05，**P<0·01。3.2玉米須黃酮對(duì)正常大鼠血脂的影響與空白組比較，玉米須黃酮對(duì)正常大鼠有降低血清膽固醇含量、降低血清甘油三酯含量、降低血清高密度脂蛋白含量、增加血清低密度脂蛋白含量以及降低血清游離脂肪酸含量的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)Tab.4。Tab.4玉米須黃酮對(duì)正常大鼠血脂的影響(元士s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>4.結(jié)論①玉米須黃酮能降低正常大鼠的飲水量和攝食量②玉米須黃酮對(duì)正常大鼠的體重有降低作用③玉米須黃酮對(duì)正常大鼠血清TC、TG、LDL-c和FFA有降低的趨勢(shì)綜上所述，玉米須黃酮在降低飲水量和攝食量的情況下，能明顯降低正常大鼠的體重；對(duì)正常大鼠有降血脂的趨勢(shì)。第二部分玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響1.材料和方法1.1主要試劑、藥品及儀器玉米須黃酮吉林化工學(xué)院玉米須研發(fā)小組提供(含量為54%)洛伐他汀黑龍江肇東華富藥業(yè)有限公司20091101丙硫氧嘧啶上海朝暉藥業(yè)有限公司20090604膽固醇天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所20090630膽酸鈉中國(guó)惠世生化試劑有限公司20050830戊巴比妥鈉上海清析化工科技有限公司20070416全自動(dòng)生化分析儀美國(guó)雅培C8000型數(shù)顯恒溫水浴鍋國(guó)華電器有限公司HH-2型低速離心機(jī)北京醫(yī)用機(jī)廠LDZ5-2型電子天平上海友聲衡器有限公司BS-600L型1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，80只，體重120160g(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第10-5112)。1.3藥物配制及動(dòng)物分組1.3.1高脂飼料配方2.0%膽固醇、0.2%丙硫氧嘧啶、0.3%膽酸鈉、7.5%豬油、2.·0%蛋黃、88.0%基礎(chǔ)飼料1.3.2藥品配制將玉米須黃酮用蒸餾水配成0.4%、0.8%和1.6%的溶液；洛伐他汀用0.5%羧甲基纖維素鈉配成0.3%混懸液。1.3.3動(dòng)物分組及給藥方案Wistar雄性大鼠80只，體重120160g，先將其分為空白組(10只)和高脂飼料組(80只)，空白組正常飲食，高脂飼料組給高脂飼料，連續(xù)喂養(yǎng)21d，取血，分離血清，測(cè)定高脂飼料組大鼠血清中膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及游離脂肪酸的含量(取血之前禁食不禁水14h)。選取血脂較高的大鼠，根據(jù)血脂水平對(duì)高脂飼料組重新分為5組，S卩模型組、陽(yáng)性藥組、玉米須黃酮低、中、高劑量組，每組10只，灌胃給藥，每日一次，連續(xù)28d。空白組普通飼料蒸餾水10mL/kg模型組高脂飼料蒸餾水10mL/kg洛伐他汀組高脂飼料洛伐他汀30mg/kg低劑量組高脂飼料玉米須黃酮40mg/kg中劑量組高脂飼料玉米須黃酮80mg/kg高劑量組高脂飼料玉米須黃酮160mg/kg1.4實(shí)驗(yàn)方法給藥期間，每7d記錄每組每只大鼠的體重，攝水量和進(jìn)食量。末次給藥前，各組動(dòng)物禁食不禁水14h，末次給藥后30min，將動(dòng)物用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測(cè)定血清中膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及游離脂肪酸的含量。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有結(jié)果均采用Excel進(jìn)行組間差異性t檢驗(yàn)，結(jié)果以均值士標(biāo)準(zhǔn)差(χ士S)表7J\ο3.結(jié)果3.1玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠飲水量、攝食量和體重的影響與模型組比較，玉米須黃酮中、高劑量能降低28d高脂血癥大鼠的飲水量和攝食量，ρ<0.05或P<0.01，見(jiàn)Tab.5及Tab.6；與模型組比較，玉米須多糖低、中、高劑量可明顯降低高血脂癥大鼠的體重，P<0.05，見(jiàn)Tab.7。Tab.5玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠飲水量的影響(i士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。Tab.6玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠攝食量的影響(〒士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。Tab.7玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠體重的影響(〒士s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與模型組比較，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。3.2玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響與空白組比較，模型組TC和LDL-c顯著升高，ρ<0.01，說(shuō)明血脂代謝已經(jīng)紊亂，高脂血癥模型造模成功；與模型組比較，陽(yáng)性藥能降低高血脂大鼠血清TC、TG、LDL-c水平，ρ<0.05或ρ<0.01，玉米須黃酮中、高劑量組能降低2型糖尿病大鼠血清TC、TG、LDL-c和FFA水平，ρ<0.05或ρ<0.01見(jiàn)Tab.8。Tab.8玉米須黃酮對(duì)高脂血癥大鼠血脂的影響(3f±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與空白組比較，ΔΡ<0.05，ΔΔΡ<0.01；與模型組比較，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。4.結(jié)論①玉米須黃酮能降低高脂血癥大鼠的飲水量和攝食量②玉米須黃酮能明顯降低高脂血癥大鼠的體重。③玉米須黃酮能明顯降低高脂血癥大鼠血清的TC、TG、LDL-c和FFA水平綜上所述，玉米須黃酮在降低高脂血癥大鼠飲水量和攝食量的情況下，能明顯降低高脂血癥大鼠的體重，具有降低高脂血癥大鼠血脂的作用。第三部分玉米須黃酮對(duì)型糖尿病大鼠血脂的影響1.材料和方法1.1主要試劑、藥品及儀器玉米須黃酮吉林化工學(xué)院玉米須研發(fā)小組提供(含量為54%)二甲雙胍江蘇衡山藥業(yè)有限公司20091201丙硫氧嘧啶上海朝暉藥業(yè)有限公司20090604膽固醇天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所20090630膽酸鈉中國(guó)惠世生化試劑有限公司20050830戊巴比妥鈉上海清析化工科技有限公司20070416全自動(dòng)生化分析儀美國(guó)雅培C8000型數(shù)顯恒溫水浴鍋國(guó)華電器有限公司ΗΗ-2型低速離心機(jī)北京醫(yī)用機(jī)廠LDZ5-2型電子天平上海友聲衡器有限公司BS-600L型血糖儀長(zhǎng)沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司SXT-I型1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，80只，體重120160g(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第10-5112)。1.3藥物配制及動(dòng)物分組1.3.1高脂飼料配方2.O%膽固醇、0.2%丙硫氧嘧啶、0.3%膽酸鈉、7.5%豬油，2.O%蛋黃，88.O%基礎(chǔ)飼料1.3.2藥品配制將玉米須黃酮用蒸餾水配成0.4%、0.8%和1.6%的溶液；二甲雙胍用0.5%羧甲基纖維素鈉配成0.4%混懸液；四氧嘧啶，用生理鹽水配制成12%溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。1.3.3動(dòng)物分組及給藥方案先80只大鼠分為空白組(10只)和高脂飼料組(70只)，空白組正常飲食，高脂飼料組給予高脂飼料。連續(xù)喂養(yǎng)21d，取血，分離血清，測(cè)定高脂飼料組大鼠血清中膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、游離脂肪酸的含量以及血糖值并測(cè)定空白組血糖值(取血之前均禁食不禁水14h)。選取高脂飼料組中血脂較高的大鼠，腹腔注射四氧嘧啶，120mg/kg對(duì)其進(jìn)行造模。三天后，測(cè)定造模大鼠的空腹血糖值，選取血糖值>11.lmmol/L的大鼠，根據(jù)血糖、血脂和體重將造模大鼠重新分為5組，S卩模型組、陽(yáng)性藥組、玉米須黃酮低、中、高劑量組，每組10只，灌胃給藥，每日一次，連續(xù)28d。空白組普通飼料蒸餾水10mL/kg模型組高脂飼料蒸餾水10mL/kg二甲雙胍組高脂飼料二甲雙胍40mg/kg低劑量組高脂飼料玉米須黃酮40mg/kg中劑量組高脂飼料玉米須黃酮80mg/kg高劑量組高脂飼料玉米須黃酮160mg/kg1.4實(shí)驗(yàn)方法給藥期間，記錄每組大鼠的體重，攝水量和進(jìn)食量。于第7d，14d和21d，給藥30min后，尾靜脈取血，用測(cè)定每組大鼠的血糖值(取血之前禁食不僅水14h)。末次給藥前，各組動(dòng)物禁食不禁水14h，末次給藥后30min，測(cè)定每組大鼠的血糖值，用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，測(cè)定血清中膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及游離脂肪酸的含量。2.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有結(jié)果均采用Excel進(jìn)行組間差異性t檢驗(yàn)，結(jié)果以均值士標(biāo)準(zhǔn)差(〒士s,n=10)表示。3.結(jié)果3.1玉米須黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的影響與空白組比較，模型組7d、14d、21d、28d血糖值均顯著升高，ρ<0.01，說(shuō)明高血糖模型造模成功；與模型組比較，陽(yáng)性藥能降低第21d和28d2型糖尿病大鼠的血糖值，ρ<0.05，玉米須黃酮各組對(duì)2型糖尿病大鼠的血糖有降低的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)Tab.9οTab.9玉米須黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠血糖的影響(元士s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與空白組比較，ΔΡ<0.05，ΔΔΡ<0.01；與模型組比較，*P<0.05,**Ρ<0.01。3.2玉米須黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠血脂的影響與空白組比較，模型組幾36、0^-(3顯著升高，？<0.01，說(shuō)明血脂代謝已經(jīng)紊亂，2型糖尿病模型造模成功；與模型組比較，陽(yáng)性藥能降低2型糖尿病大鼠血清TC、TG、LDL-c水平，P<0.05或ρ<0.01，玉米須黃酮中、高劑量組能降低2型糖尿病大鼠血清TC和FFA水平，玉米須黃酮低、中、高劑量組能降低2型糖尿病大鼠血清TG和LDL-c水平，ρ<0.05或ρ<0.01見(jiàn)Tab.10。Tab.10玉米須黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠血脂的影響(jf士s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白組比較，ΔΡ<0.05，ΔΔΡ<0.01；與模型組比較，*Ρ<0.05，**Ρ<0.01。4.結(jié)論①玉米須黃酮對(duì)2型糖尿病大鼠的血糖有降低的趨勢(shì)②玉米須黃酮降低2型糖尿病大鼠的TC、TG、LDL-c和FFA水平綜上所述，玉米須黃酮2型糖尿病大鼠的血糖有降低的趨勢(shì)，具有降低2型糖尿病大鼠的血脂的作用。本發(fā)明的制備方法實(shí)施例1①備料選取無(wú)蟲蛀、無(wú)霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過(guò)40目篩，待用。②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過(guò)夜，以除去脂溶性雜質(zhì)。真空過(guò)濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇，循環(huán)使用。③水提將脫脂后的藥材粉料投入圓底燒瓶中，加入1020倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8090°C加熱30min，提取3次，合并提取液，待用。④濃縮把提取夜投入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5左右，得濃縮液，待用。⑤脫色把濃縮液投入圓底燒瓶中，在攪拌下加入少量濃度為2030%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時(shí)間2h，加熱溫度50°C，趁熱過(guò)濾，得脫色液，加熱蒸去殘留雙氧水，待用。⑥醇析把脫色液投入燒杯中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%75%(V/V)，攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過(guò)夜，離心分離，收集液相回收乙醇，待用。⑦層析把回收乙醇濃縮液上AB-8大孔吸附樹脂，水洗后，不同濃度乙醇洗脫，收集60%-70%乙醇部分，回收乙醇，待用。⑧干燥把玉米須乙醇部分至真空干燥箱中，干燥，過(guò)100目篩，得玉米須黃酮。⑨用蘆丁做對(duì)照品、三氯化鋁甲醇做顯色劑和待測(cè)樣品溶液搖勻，放置10分鐘，以60%乙醇為溶劑空白，在272nm紫外測(cè)定吸光度，代入回歸方程中，計(jì)算出百分含量。要求純度在50%以上為合格。實(shí)施例2①備料選取無(wú)蟲蛀、無(wú)霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過(guò)40目篩，待用。②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過(guò)夜，以除去脂溶性雜質(zhì)。真空過(guò)濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇，循環(huán)使用。③醇提將脫脂后的藥材粉料投入圓底燒瓶中，加入1020倍量60%-70%的乙醇，攪拌，浸泡24h后，于7080°C加熱30min，提取3次，合并提取液，待用。④濃縮把提取夜投入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5左右，得濃縮液，待用。⑤脫色把濃縮液投入圓底燒瓶中，在攪拌下加入少量濃度為2030%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時(shí)間2h，加熱溫度50°C，趁熱過(guò)濾，得脫色液，加熱蒸去殘留雙氧水，待用。⑥層析把脫色液上AB-8大孔吸附樹脂，水洗后，不同濃度乙醇洗脫，收集60%-70%乙醇部分，回收乙醇，待用。⑦干燥把玉米須乙醇部分置真空干燥箱中，干燥，過(guò)100目篩，得玉米須黃酮。⑧用蘆丁做對(duì)照品、三氯化鋁甲醇做顯色劑和待測(cè)樣品溶液搖勻，放置10分鐘，以60%乙醇為溶劑空白，在272nm紫外測(cè)定吸光度，代入回歸方程中，計(jì)算出百分含量。要求純度在50%以上為合格。實(shí)施例3AB-8精制玉米須粗黃酮的工藝研究將玉米須水提物濃縮至原溶液體積的1/5，按計(jì)算量加入95%乙醇，使得溶液濃度達(dá)到70-80%，靜置24小時(shí)，離心后收集溶液，即得玉米須水提醇沉上清液，將其濃縮后真空蒸干得干燥樣品粉末(粗品黃酮)；稱取40mg上述粉末，置于IOOmL容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲使之溶解，放冷并用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。為了能更好的縮減實(shí)驗(yàn)成本，提高效率，使工藝條件得以進(jìn)一步優(yōu)化，以單因素探索實(shí)驗(yàn)所得最佳條件為基準(zhǔn)，縮小相應(yīng)因素的水平范圍，選定正交實(shí)驗(yàn)三因素三水平Tab.11正交實(shí)驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)表<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>Tab.12L9(34)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>經(jīng)過(guò)一系列的正交實(shí)驗(yàn)可以得出用ΑΒ-8型大孔吸附樹脂對(duì)玉米須總黃酮進(jìn)行精制，得出的最佳工藝條件為洗脫劑流速3.6mL/min,洗脫劑pH值5.61，洗脫劑濃度70%；采用優(yōu)化的工藝條件，總黃酮的純度由14.24%提高到58.32%，得率達(dá)到了69.35%。說(shuō)明AB-8樹脂對(duì)玉米須總黃酮有較好的特異性和解吸附性能，富集效果好，具有操作簡(jiǎn)便，所得產(chǎn)品純度和轉(zhuǎn)移率較高，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。實(shí)施例4玉米須黃酮降脂膠囊的制備及質(zhì)量控制①原料按實(shí)施例1或2的方法提取，實(shí)施例3的方法精制，置70°C真空干燥，粉碎，過(guò)7號(hào)標(biāo)準(zhǔn)篩，備用。②制成硬膠囊將上述藥粉加入碳酸鈣和淀粉充分?jǐn)嚢杈鶆颍^(guò)篩。必要時(shí)加乙醇調(diào)整濕度，于60°C70°C烘干，裝入1或2號(hào)膠囊中，共制成1000粒。常規(guī)滅菌，整粒后密封包裝，每粒重含玉米須黃酮的膠囊0.030.2g。每日三次，每次35丸。③質(zhì)量控制外觀、水分、裝量差異、崩解時(shí)限、衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)均符合要求。④玉米須黃酮膠囊具有工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量穩(wěn)定、純度高、劑量準(zhǔn)確、療效確切，服用方便，便于識(shí)別、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。權(quán)利要求玉米須黃酮在制備治療高血脂藥物中的應(yīng)用。2.玉米須黃酮在制備治療減肥藥物中的應(yīng)用。3.如權(quán)利要求1或2或3所述的藥物中應(yīng)用，其特征在于玉米須黃酮的制備方法包括如下步驟①備料選取無(wú)蟲蛀、無(wú)霉變、新鮮的玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過(guò)40目篩，待用。②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過(guò)夜，以除去脂溶性雜質(zhì)。真空過(guò)濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇，循環(huán)使用。③水提將脫脂后的藥材粉料投入圓底燒瓶中，加入1020倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8090°C加熱30min，提取3次，合并提取液，待用。④濃縮把提提夜投入真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5左右，得濃縮液，待用。⑤脫色把濃縮液投入圓底燒瓶中，在攪拌下加入少量濃度為2030%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時(shí)間2h，加熱溫度50V，趁熱過(guò)濾，得脫色液，加熱蒸去殘留雙氧水，待用。⑥醇析把脫色液投入燒杯中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%75%(V/V)，攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過(guò)夜，離心分離，收集液相回收乙醇，待用。⑦層析把回收乙醇濃縮液上AB-8大孔吸附樹脂，水洗后，不同濃度乙醇洗脫，收集60%-70%乙醇部分，回收乙醇，待用。⑧干燥把玉米須乙醇部分至真空干燥箱中，干燥，過(guò)100目篩，得玉米須黃酮。⑨用蘆丁做對(duì)照品、三氯化鋁甲醇做顯色劑和待測(cè)樣品溶液搖勻，放置10分鐘，以60%乙醇為溶劑空白，在272nm紫外測(cè)定吸光度，代入回歸方程中，計(jì)算出百分含量。要求純度在50%以上為合格。全文摘要本發(fā)明涉及玉米須黃酮在制備治療高血脂癥和減肥藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是指玉米須黃酮的新用途，玉米須黃酮在制備治療高血脂癥和減肥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是玉米須黃酮為純天然藥物，在降低血脂的同時(shí)，還能夠減輕體重，說(shuō)明其降血脂機(jī)制不是單一環(huán)節(jié)，而是多方面、多靶點(diǎn)綜合作用的結(jié)果。將其作為防治高血脂及其并發(fā)癥或減肥藥物開發(fā)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，還可以增加植物資源的新用途，帶動(dòng)區(qū)域經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。文檔編號(hào)A61P3/06GK101810793SQ20101013901公開日2010年8月25日申請(qǐng)日期2010年4月6日優(yōu)先權(quán)日2010年4月6日發(fā)明者周鴻立,展瑞巖,張揚(yáng),張艷申請(qǐng)人:吉林化工學(xué)院