專利名稱：改善梗死區(qū)灌注的組合物以及血管損傷修復方法
技術領域：
本發(fā)明涉及改善梗死區(qū)灌注的組合物，其包含趨化性造血干細胞產物，以及其在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中修復梗死區(qū)損傷的使用方法。
背景技術：
心動周期術語“舒張期”是指心腔的正常收縮后擴張，在此期間心腔充滿血液。術語“收縮期”是指心臟、尤其是心室的收縮，通過此收縮將血液分別通過主動脈和肺動脈驅動穿過體循環(huán)和肺循環(huán)。本文所使用的術語“心動周期”是指與冠脈血流或血液相關的全部或任何力學事件，其從一次心搏開始至下一次心搏開始。在心動周期中，血壓升高和下降。心動周期的頻率是心率。心臟的每一次“搏動”包括5個主要的階段(1) “舒張晚期”，其是當半月瓣關閉，房室(AV)瓣打開，并且整個心臟舒張；(2) “心房收縮”，其是當左右心房的心肌收縮，AV 瓣關閉，且血從心房流到血管；(3) “等容心室收縮”，其是當心室開始收縮，AV和半月瓣關閉，并且體積沒有變化；(4) “心室噴血”，其是當心室是空的，但仍然收縮并且半月瓣打開； (5) “等容心室舒張”，當壓力降低，沒有血液進入心室，心室停止收縮并開始舒張，并且半月瓣關閉，這是由于主動脈的血液推動它們關閉。心動周期由一系列電沖擊來協(xié)調，這些電沖擊由存在于竇房結和房室結中的特定心臟細胞產生。冠脈血流通過冠狀動脈的血流是搏動的，具有特征性的時相的收縮和舒張流成分。收縮流與心臟周期的收縮或泵送期相關，具有快速、短暫、逆行反應。舒張流與心臟周期的舒張或填充期相關，在心肌收縮后的舒張期發(fā)生，具有超過收縮水平的突然升高和與主動脈舒張壓平行的逐漸下降。壁內冠狀血體積在每一心跳期間發(fā)生改變，由心肌來容納由肌肉收縮造成的體積變化。冠狀靜脈流與冠狀動脈流不協(xié)調，冠狀靜脈流主要發(fā)生在收縮期并且在舒張期幾乎不存在。對于每一次心跳，血液在收縮和舒張壓之間變化。術語“收縮壓”是指動脈中的峰壓，其在心動周期即將結束當心室收縮時發(fā)生。術語“舒張壓”是指動脈中的最小壓力，其在心動周期接近開始的時間當心室充滿血液時發(fā)生。 冠脈血流不僅是時相的，而且還隨著血管類型和在心肌中的位置而不同。冠狀小動脈似乎沿著它們的長度具有特定的調節(jié)元件，其以集成的方式“串聯(lián)”運作。由多個功能性“瓣”組成的系統(tǒng)允許冠狀循環(huán)的精細控制。最小的小動脈在代謝性應激期間擴大，導致減小的微血管阻力和升高的心肌灌注。狹窄即血管的變窄產生對血流的阻力，這與狹窄的形態(tài)特征直接相關。當上游小動脈壓下降(這是由于穿過狹窄的擴張壓下降所導致的)時， 上游稍大的小動脈發(fā)生肌源性擴張，并且導致阻力的進一步下降。最大小動脈中升高的血流增加剪切應力并且引發(fā)血流介導的擴張，進一步減少這一網絡的阻力。心臟動脈和靜脈搏動流特征取決于心肌的柔度。術語“柔度”是指中空器官在移除擴張或壓縮力之后抗彈回其原始大小的傾向性的程度。柔度越高，材料越有彈性。應用以下等式計算柔度，其中△ V是體積變化，以及△ P是壓力變化
C=AV
ΔΡ心臟作為儲存器的能力受控于小動脈對冠狀血管入流的阻力。出口阻力與壁內心靜脈相關。心肌毛細血管阻力影響動脈和靜脈反應，但主要與出口阻力協(xié)同作用。約75%的總冠狀阻力發(fā)生在動脈系統(tǒng)中，其包括傳導(Rl)、前小動脈(R2)和小動脈及心肌內毛細血管(舊)。人正常的心外膜冠狀動脈的直徑通常為0.3至5mm，并且對血流沒有可評估的阻力。通常，大心外膜血管阻力(Rl)是不重要的，直到動脈粥樣硬化梗阻累及管腔。大小為100至500 μ m的前毛細血管小動脈(似)是連接心外膜的與心肌毛細血管的阻力血管，并且是冠脈血流的主要控制者。它們貢獻了約25%至35%的總冠狀阻力。 末梢前毛細血管小動脈(直徑< ΙΟΟμπι)是冠脈血流代謝調節(jié)的主要部位，其負責40-50% 的冠脈血流阻力。每平方毫米約4000毛細血管的密集網絡保證了每一肌細胞與毛細血管相鄰。毛細血管不是一致開放的(意思是打開，允許自由通過)，因為前毛細血管括約肌根據(jù)心肌的需要調節(jié)血流。多種病癥，諸如左心室肥大、心肌缺血或糖尿病，會損害微循環(huán)阻力(R3)，使得在需氧量增加時冠狀流的最大絕對增長減弱。局部缺血心肌幾乎完全依賴于需氧代謝，因為心臟中氧氣儲存是不足的。心肌氧氣供應隨著心肌的氧氣(能量)需求而升高或降低。術語“自體調節(jié)”是指面對驅動力改變將心肌灌注維持在恒定水平的能力。自體調節(jié)在很寬的平均主動脈壓范圍內維持冠狀灌注在相對恒定水平。當主動脈壓超過其上限或下限時，冠脈血流成比例地突然下降或上升。心臟需要供應足量的氧量以避免灌注不足。當狹窄遠端的降低的灌注壓不能被阻力血管的自體調節(jié)擴張補償?shù)脑挘瑒t發(fā)生局部缺血，即缺乏血液供應和氧。由于最少供應的區(qū)域通常是最遠處，局部缺血通常在距離血液供應最遠區(qū)域出現(xiàn)。在冠狀動脈完全或幾乎完全閉合后，心肌灌注通過側支的方式發(fā)生，即心外膜動脈間相互連接的血管通道。側支通道可急性形成或可能在出現(xiàn)冠狀動脈疾病之前以未發(fā)育的狀態(tài)預先存在。預先存在的側支是直徑為20 μ m至200 μ m的薄壁結構，在不同的物種中有不同的密度。預先存在的側支通常是閉合的且沒有功能，因為不存在壓力梯度以驅動在它們連接的動脈之間的血流。在冠狀動脈閉塞后，遠端壓力突降，并且預先存在的側支幾乎在一瞬間打開。術語“心肌缺血”是指對心肌細胞的血液供應和氧的減少。心肌缺血的發(fā)生已被歸因于兩種機制(1)升高的心肌氧需求；以及O)降低的心肌灌注和氧遞送(Willerson， J. Τ.等，JACC 8(1) :245-50(1986))。心肌缺血首先出現(xiàn)在心內膜下區(qū)域以及在這里更廣泛，因為這些更深的心肌層離血液供應最遠，需要更多的氧。短暫性局部缺血、冬眠心肌以及心肌梗死是臨床上不同的病癥。短暫性局部缺血。本文所使用的術語“短暫性局部缺血”是指在休息時或運動中冠狀動脈的可逆(即心肌細胞在發(fā)作之后仍存活)狹窄，其中沒有血栓或血小板破裂，但是其中不能滿足血液供應。每次心臟需氧量升高時，產生了需氧量和供應之間的不平衡。短暫性局部缺血產生了事件級聯(lián)，首先是代謝和生物化學改變，導致受損的心室放松和舒張紊亂、受損的心臟收縮功能以及具有ST段改變的心電圖異常，隨后是左心室不同步性的升高的舒張期末壓、運動機能減退、運動不能以及運動障礙，并且最后是心絞痛的疼痛癥狀。 盡管缺血肌細胞在冠脈血流停止后數(shù)秒內經歷生理和代謝改變，導致T波以及有時ST段異常(但沒有血清酶升高)，但是沒有細胞由于缺血死亡。Kloner，R. Α.和Jennings，RB, Circulation 104:2981-89 0001)。一旦重新建立血流，則肌細胞收縮功能完全恢復。盡管心絞痛(胸痛)可能是短暫性局部缺血的癥狀，但基本上在79%的受治療者中短暫性局部缺血是無癥狀的(即存在ST-段的至少Imm的降低，但是沒有相關的癥狀，例如胸痛)。例如，在患有穩(wěn)定型心絞痛的多數(shù)患者中，用力或情緒，及其導致的心率、血壓或收縮狀態(tài)增加或其任意組合，增加了心肌需氧量，而在通過緊緊變窄的(狹窄)冠狀動脈的氧氣遞送沒有充足的遞送。超過40%的應用一種或多種抗心絞痛藥物治療的穩(wěn)定型心絞痛患者具有無癥狀缺血的頻繁發(fā)作，其已被證實預兆著更高的冠狀動脈事件和心臟死亡的風險。Deedwania，PC，Carbajal, EV, Arch. Intern. Med. 150 :2373-2382 (1991)。慢性心肌缺血。本文使用的術語“慢性心肌缺血”是指由于冠狀血管狹窄導致的心肌缺血的延續(xù)急性或慢性狀態(tài)，其中心肌“冬眠”，意思是心肌下調或減少其收縮性，并且因此減少其需氧量，以匹配減少的灌注，由此保持細胞活力和逃避凋亡。心肌如此的基礎機制為人知之甚少。在恢復足夠的血液供應后，這一冬眠的心肌能夠恢復正常或幾乎正常的功能。然而，一旦冠脈血流恢復至正常或接近正常，并且局部缺血解除，冬眠心肌仍然不收縮。這一在局部缺血解除后導致心功能緩慢恢復的血流-功能錯配稱為頓抑(stunning)。 功能恢復的時長是很不相同的，從幾天到數(shù)月，并且取決于多個參數(shù)，包括最初局部缺血發(fā)作的持續(xù)時間、最初發(fā)作期間缺血的嚴重程度、以及動脈血流恢復的充分性。許多研究提供了冬眠心肌中炎癥的證據(jù)。Heusch, G.等人，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288 984-99000 。在心肌冬眠的豬模型(其中將平均靜止LAD冠脈血流降低至基線值的約 60%，持續(xù)M小時至4周的時間)中進行的研究中，在所有試驗豬的由狹窄LAD提供的動脈區(qū)域中檢測到凋亡肌細胞，意味著在冬眠心肌中功能下調可能不足以阻止逐步的、正在進行的通過細胞凋亡的肌細胞死亡。Chen，C，等，J.Am. Coll. Cardiol. 30 1407-12 (1997)。對進行冠狀動脈分流術的人類患者的活組織檢查同樣地將肌細胞凋亡認定為冬眠心肌的重要現(xiàn)象，其不利地影響左心室功能的恢復。Angelini，A.，等，Eur. J. Heart Failure 9(4) 377-83(2006)。急性心肌梗死(AMI)。另一類型的發(fā)作在AMI期間發(fā)生。AMI是冠狀血管腔的突然改變，其導致缺血性梗死，意思是其一直持續(xù)直到心肌死亡。按肉眼檢查，可將心肌梗死分為兩類透壁性梗死，其中心肌壞死涉及心室壁的全部或幾乎全部厚度；以及心內膜下(非透壁性)梗死，其中心肌壞死涉及心內膜下、壁內心肌，或兩者，而沒有擴展到穿過心室壁到心外膜的所有部分。通常有血管的完全閉塞，伴有ST段的升高，因為血小板破裂而導致在官腔內形成血栓。延長的局部缺血導致凋亡和壞死的心肌細胞死亡。參見Kaj stura, J.，等，Lab Invest. 74 :86-107(1996)。壞死累及肌纖維膜和細胞內大分子的完整性，由此釋放血清心臟標志物，諸如心臟特異性肌鈣蛋白和酶，諸如血清肌酸激酶(CK)。此外，由于對肌肉的全厚損傷，患者可能具有心電圖改變(ECG)。ST升高的心肌梗死(STEMI)是比沒有ST升高的心肌梗死更大的損傷。ECG的ST段升高和Q波是兩個高度指示心肌梗死的的特征，其僅在約一半的所展示的心肌梗死病例中看到。急性心肌梗死仍然很普遍，僅在美國就每年報道有110萬病例發(fā)生(Antman， Ε. Μ. , Braunwald, Ε. , Acute Myocardial Infarction, in Principles of Internal Medicine，第 15 版，Braunwald，E.等，編輯，New York :McGraw_Hi 11 (2001))。臨床前和臨床數(shù)據(jù)證實，心肌梗死后，心肌肌細胞的急劇喪失和伴隨的梗死區(qū)周圍灌注不足導致事件的級聯(lián)反應，引起心功能的立即減少，具有長期持續(xù)的可能。心肌細胞喪失的程度取決于冠狀動脈阻塞的持續(xù)時間、現(xiàn)存的側支冠狀循環(huán)以及心臟微血管系統(tǒng)的狀況。Paul等人，Am. Heart J. 131 :710-15(1996) ；Pfeffer, Μ. Α. ， Braunwald, Ε. ， Circulation 81 1161-72(1990) ；Sheilban, I.等人，J. Am. Coll. Cardiol. 38 :464-71 (2001) ；Braunwald Ε. ， Bristow, Μ. R. ， Circulation 102 :IV-14-23 (2000) ；Rich 等,Am. J. Med. 92 7-13(1992) ;Ren 等 K, J. Histochem. Cytochem. 49 :71-79(2002) ；Hirai, Τ.等人， Circulation 79 :791-96 (1989) ;Ejiri，Μ·等，J. Cardiology 20:31-37(1990)。由于心肌細胞事實上沒有再生功能，因此心肌梗死導致永久的心臟機能障礙，這是由于收縮肌細胞喪失并替代以沒有功能的纖維疤痕。Frangogiannis，N. G.，等人，Cardiovascular Res. 53(1) :31-47 000 。此外，有活力的心臟肌肉的代償性肥大導致微血管不足，其通過引起梗死區(qū)周圍肥大肌細胞的心肌肌肉冬眠和凋亡而進一步損害心功能。在心肌梗死的幸存者中，殘留的心功能受到心室重建(意思是心臟受損后大小、 形狀以及功能的改變，通常是功能的逐漸下降)程度的影響。心肌梗死后，心室地形圖 (意思是心室形狀、構造、或形態(tài))的改變發(fā)生在梗死和健康心臟組織中。Pfeffer，Μ. Α., Braunwald, Ε.，Circulation 81 :1161-72 (1990)。心室擴張(意思是超過該心室的延伸、變大或擴展)造成總體心功能的下降，并且受到梗死大小、梗死愈合以及心室壁應力的影響。 近期最小化重建的努力已取得了成功，通過應用溶血栓試劑以及機械介入(包括但不限于支架)通過快速再灌注(意思是血流的恢復)限制梗死大小，以及通過適當?shù)貞妙A加載的治療和合適的加載后處理而降低心室應力。見上。不管這些介入，很高百分比的患者在心肌梗死后經歷臨床相關和長期的心功能不良。Sheiban，I.等人J. Am. Coll. Cardiol. 38 464-71 0001)。盡管有與動脈循環(huán)相關的血運重建和適當?shù)尼t(yī)學管理從而最小化心室壁應力，但顯著比例的這些患者經歷心室重建、永久的心臟機能不良以及心功能的逐步退化， 并且保持在升高的經歷不良心臟事件(包括死亡)的生命危險當中。Paul等人，Am. Heart J.131 :710-15(1996) ；Pfeffer, Μ. Α. , Braunwald, Ε. , Circulation 81 :1161-72(1990)在細胞水平，在心肌梗死之后，瞬時全面的心臟官能不良立即均勻地發(fā)生。在短暫的(即，持續(xù)3分鐘至5分鐘)冠狀動脈阻塞的情況下，能量代謝受損，導致顯而易見的心臟肌肉功能不良，盡管立即再灌注其也能持續(xù)達48小時。這一所謂的“頓抑心肌現(xiàn)象”在再灌注隨后或之后發(fā)生，并且認為是活性氧類的結果。該過程是瞬時的，并且不與炎癥反應相關。Frangogiannis, N. G.，等，Cardiovascular Res. 53(1) :31-47 Q002)。在成功的血運重建后，在3至4天內發(fā)生頓抑的顯著恢復，盡管完全恢復可能需要長得多的時間。Boli， R. , Prog. Cardiovascular Disease 40(6) :477-515 (1998) ；Sakata, K.等人，Ann. Nucleic Med. 8 :153-57(1994) ；Wollert, K. C.等，Lancet 364 :141-48(2004) 更顯著長時間(S卩，持續(xù)超過5分鐘)的冠狀動脈阻塞導致心肌缺血并且與顯著的炎癥反應相關，所述炎癥反應在再灌注后馬上開始并可持續(xù)數(shù)周。Frangogiannis,N. G.， 等人，Cardiovascular Res. 53 (1) :31-47(2002) ；Frangogiannis, N. G.等，Circulation 98 :687-798(1998)。再灌注后的炎癥過程是復雜的。最初其導致心肌損傷，但后來導致愈合及疤痕形成。這一復雜的過程似乎以兩個階段發(fā)生。在第一個所謂的“熱”階段(在前5天內) 中，活性氧簇(在缺血心肌組織中)以及補體激活產生白細胞的信號趨化性(趨化性是能動的細胞、有機體或部分定向向其認為有吸引力的環(huán)境中移動和/或遠離其發(fā)現(xiàn)相斥的環(huán)境)以及啟動細胞因子級聯(lián)。Lefer, D. J. , Granger, D. N. , Am. J. Med. 4 :315-23 (2000)； Frangogiannis, N. G.，等.，Circulation 7 :699-710 (1998)。肥大細胞脫粒，腫瘤壞死因子α (TNFa)釋放，以及升高的白介素_6 (IL_6)、細胞間粘附分子1 ( “ICAM-I”或⑶-54， 其為通常在內皮細胞和免疫系統(tǒng)細胞上表達的受體)、選擇蛋白(L、E和P)以及整聯(lián)蛋白((⑶11a、⑶lib和⑶18))的表達均似乎導致缺血性心肌中嗜中性粒細胞的積聚以及脫粒。Frangogiannis, N. G.等人，Circulation 7 :699-710 (1998)，Kurrelmeyer ；K. M，等人，Proc. Nat，1 Acad. Sci. 10 :5456-61 (2000) ；Lasky，L. Α.，Science 258:964-69(1992)； Ma, X. L.，等人，Circulation 88(2) :649-58(1993) ；Simpson, P. J.等，J. Clin. Invest. 2 624-29(1998)。嗜中性粒細胞顯著地導致通過微血管阻塞的心肌細胞損傷和死亡以及在配體特異性地與心肌細胞粘附后嗜中性粒細胞呼吸爆發(fā)通路的活化。Entman，Μ. L.，等人， J. Clin. Invest. 4 :1335-45(1992)。在“熱”階段期間，血管發(fā)生受到抑制，這是由于釋放了血管生成抑制物質，包括干擾素Y可誘導蛋白(IP 10) 0 Frangogiannis,N. G.，等人，F(xiàn)ASEB J. 15 :1428-30(2001)。在第二階段，心臟修復過程開始(約第6天至約14天)，其最終導致疤痕形成(約第14天至約21天)以及隨后的心室重建(約第21天至約90天)。再灌注之后，單核細胞馬上滲透到梗死的心肌中。受到補體(Cfe)、轉化生長因子Bl ( “TGF-B1”)和單核細胞趨化蛋白1( “MCP-1”)的吸引，單核細胞分化為巨噬細胞，其通過清除死亡組織、調節(jié)細胞外基質代謝以及誘導成纖維細胞增殖而開始愈合過程。Birdshall，H. H.，等人，Circulation 3 :684-92(1997)。由滲入的淋巴細胞分泌的白介素10 (IL-IO)也通過下調炎癥細胞因子和影響組織重建而促進愈合。Frangogiannis，N. G.等人，J. Immunol. 5 :2798-2808 (2000)。 肥大細胞似乎還通過參與纖維疤痕組織的形成而參與到心肌修復的后期階段。干細胞因子 (SCF)是肥大細胞的強吸引物。已顯示SCF mRNA在心肌梗死犬模型的缺血心肌區(qū)域上調， 并因此可能導致肥大細胞在缺血心肌部位積聚。Franigogiannis，N. G.等人，Circulation 98:687-798(1998)。肥大細胞產物(包括TGF-B、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)血管內皮生長因子(VEGF)和明膠酶A及B)誘導成纖維細胞增殖、影響細胞外基質代謝、以及誘導血管發(fā)生。Fang, K. C，等人，J. Immunol. 162 :5528-35(1999) ；Takeshi, S.，等人， Cardiology 93 :168-74(2000)。心肌梗死后，新血管發(fā)生在炎癥過程的“熱”階段消退(約第5天)后發(fā)生，這與VEGF升高的水平相一致(VEGF在約第7天達到峰值，并約第14天至21天逐步下降至基線水平)。在愈合過程的這一階段，內皮前體細胞(EPC)被動員并募集至梗死部位。Siinitani， S.，等人，Circulation 103 :2776-79 (2001)。不受理論限制，已有人提出趨化因子基質細胞衍生因子-1 (SDF-1，其為⑶34+細胞上表達的CXCR-4趨化因子受體的配體)在將細胞歸巢至缺血損傷區(qū)域中也起作用。Ceredini，D. J.，等人，Nature Medicine 10:858-63(2004)； Askari, Α., 等，Lancet 362 :697-703(2003) ；Yamaguchi, J.等，Circulation 107 1322-34 (2003)。盡管已知SDF-I在血細胞發(fā)生中起作用，并且參與造血祖細胞的遷移、歸巢和存活，以及盡管已顯示SDF-I涉及通過增加EPC募集至缺血部位而參與體內缺血新血管形成(Yamaguchi 等，Circulation 107 1322-1328 (2003)), {0 SDF-1 在新血管發(fā)生中的作用并不確定。存在涉及SDF-I的提示性證據(jù)。例如，在缺氧(組織中的氧缺乏)期間， SDF-I基因的表達通過缺氧誘導性因子-I(HIF-I)而上調。此外，⑶34+細胞還能夠歸巢至缺血、富SDF-I區(qū)域，包括缺血性心肌。Askari等人，Lancet 362 :697-703 (2003)。此外，幾乎所有表達VEGF-2的細胞均共表達⑶34和CXCR-4，但是僅有約1 %至2%的⑶34+CXCR-4+ 細胞共表達VEGF-2。梗死周圍邊界區(qū)由冠狀動脈阻塞產生的功能不良心肌區(qū)域擴展至梗死區(qū)域以外，以包括相鄰的看起來正常的組織的可變邊界(Hu, Q.，等人，Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 291 H648-657(2006))o這一缺血但有活力的梗死周圍區(qū)組織將逐漸壞死的區(qū)域與周圍正常心肌分離開來。梗死周圍區(qū)不與梗死大小的酶參數(shù)相關，并且基本上在小梗死中更大。Stork, A.，等人，European Radiol. 16(10) :2350-57 Q006)。邊界區(qū)域中由浮腫和血管壓縮導致的局部缺血對結果可能非常重要。例如，已知 AMI后，在邊界區(qū)域發(fā)生短暫性局部缺血，也知打開了梗死相關動脈的經皮冠狀介入能不利地影響梗死周圍邊界區(qū)域的健康。已有人提出平均血流的中間水平可以在梗死邊界處作為缺血組織半島與正常灌注心肌區(qū)域交錯混合的結果而存在。(Hu，Q.，等人，Am. J. Physiol. Heart Circ Physiol. 291 :H648-657 (2006)) 然而，在狗中不超過3mm寬的混合冠狀微血管不能解釋梗死周圍功能不良心肌的相對寬的區(qū)域。Murdock, RH, Jr.，等，Cir. Res. 52 451-59(1983) ；Buda，AJ，等人，J. Am. Coll. Cariol. 8 150-58 (1986)。這一梗死周圍區(qū)心肌隨時間進行性的功能不良可能在AMI之后將代償性重建轉變?yōu)檫M行性的心臟衰竭。目前，沒有理想的治療用于預防血管功能不全，尤其是心肌梗死后顯著血管功能不全的長期不利結果。盡管大血管血運重建(即成功地放置支架)看起來是有希望的，但是目前的研究顯示此類應用在解決由代償性心肌肥大所引起的升高的需求是不夠的。結果， 梗死擴大以及纖維替換普遍發(fā)生，而不管大血管再通、心室壁應力的合適醫(yī)學管理、以及可能的天然(盡管是次理想的)CD34+細胞介導的新血管發(fā)生(涉及引起心肌梗死基礎原因的理論之一是動員這些細胞的能力可能是在生物學上受限的)。人們對于評估內皮和心肌前體細胞限制梗死后對心肌的損傷以及限制或預防心室重建的能力已經產生了極大的興趣。顯著的臨床前數(shù)據(jù)和一些臨床數(shù)據(jù)表明細胞治療的安全性和可能性，所述細胞治療應用各種細胞前體(尤其是造血細胞)以幫助新血管發(fā)生、有限的心臟肌生成(主要通過融合)、以及在心肌梗死區(qū)肌肉保存。例如，參見，Jackson,等人，J.Clin· Invest. 107 :1395-1402(2001) ；Edelberg, J. Μ.，等人，Cir.Res. 90 :e89-e93(2002) ；Schichinger, V.等人，New Engl. J. Med. 355(12) :1210-21 (2006) (應用骨髓衍生的祖細胞)；Assmus, B.等人，New Engl. J. Med. 355 (12) 1222-32 (2006)(應用骨髓衍生的祖細胞)，但參見 Lunde，K.等人，New Eng. J. Med. 355(12) =1199-209(2006) (應用骨髓衍生的祖細胞)。不知道在什么情況下心室重建能夠逆轉或逆轉達到何種程度。骨髓由各種前體和成熟細胞類型組成，包括造血細胞(成熟血細胞前體)和基質細胞(廣譜結締組織細胞的前體)，這兩者均表現(xiàn)出能分化為其他細胞類型。Wang，J.S.等人’ J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 122 :699-705 (2001) ；Tomita, S.等人’ Circulation 100(Suppl. II) :247-256(1999) ；Saito, Τ.等，Tissue Eng. 1 :327-43 (1995)。已將未修飾(S卩，未分級)的骨髓或血液衍生的細胞用于多種臨床研究，例如，Hamano, K.等人， Japan Cir. J. 65 :845-47(2001) ；Strauer，B. Ε·，等人，Circulation 106 :1913-18(2002)； Assmus, φ A, Circulation 106 :3009-3017(2002) ；Dobert, N.等)κ, Eur. J. Nue 1. Med. MoI. Imaging, 8 :1146-51(2004) ；ffollert,K. C.等人，Lancet 364:141-48 0004)。由于骨髓的單核細胞級份含有基質細胞、造血前體和內皮前體，這些群體中的每一種對所觀察到的效果的相關貢獻(如果有的話)仍然是未知的。⑶34是在衍生自人骨髓、血液和胎兒肝臟中的造血干細胞和祖細胞上選擇性表達的造血干細胞抗原。Yin 等人，Blood 90:5002-5012(1997) ；Miaglia, S.等人，Blood 90: 5013-21 (1997)。表達0)34的細胞稱為0)34+?；|細胞不表達0)34，并且被稱為0)34-。從人血液中分離的CD34+細胞能夠在體內分化為心肌細胞、上皮細胞以及平滑肌細胞。參見ke Yeh，等人，Circulation 108 =2070-73(2003) CD34+細胞占骨髓衍生的有核細胞約1% ； ⑶34抗原也由未成熟內皮細胞前體表達，而成熟的內皮細胞不表達⑶34。Peichev，Μ.等人，Blood 95 :952-58(2000)。在體外，從成年人骨髓衍生得到的CD34+細胞產生大多數(shù)粒細胞/巨噬細胞祖細胞(CFU-GM)、一些集落生成單位混合物(CFU-Mix)以及小群前紅細胞祖細胞(爆發(fā)集落形成單位、紅細胞或BFU-E) jeh，等人，Circulation 108 :2070-73 (2003)。 CD34+細胞還可能具有分化為新心肌或對新心肌的發(fā)育作出貢獻的潛力，盡管不頻繁。已開發(fā)了應用免疫磁珠分離的技術，從而從骨髓單核細胞中分離高純度且有活力的 CD34.細胞群。參見美國專利號 5，536，475,5, 035，994,5, 130，144,4, 965，205，其每一份文獻的內容均在此通過引用并入本文。兩個臨床研究均支持了骨髓衍生的CD34+細胞在心肌梗死后的臨床應用。參見 C. Mamm，等，Lancet 361 =45-46(2003) ；Herenstein,B.等， Blood Supplement,Abs.2696(2004)。動物模型優(yōu)選的AMI后的治療將能在康復期間阻止細胞死亡，其導致逆轉重建和衰竭，或用心肌細胞替換垂死細胞。已在小鼠中描述了允許控制VEG-F表達時間的條件轉基因系統(tǒng)。May，D等人， Proc. Nat' 1 Acad. Sci. 105(1) =282-87(2008) 應用這一系統(tǒng)來產生心室灌注不足和心肌局部缺血的可調狀態(tài)。在將大量心肌細胞驅動進入仍沒有可檢測的細胞死亡的冬眠模型中的條件下，發(fā)現(xiàn)心肌細胞功能不良(冬眠)與微血管密度的減少程度線性相關。這沒有模擬AMI-誘導的心室重建，后者是梗死擴展、炎癥、疤痕形成和肌細胞肥大過程的并發(fā)。周圍動脈疾病(PAD)也稱為周圍血管疾病(PVD)，其由局部缺血的后肢模型來作為模型，其中將小鼠的股動脈結扎以模擬周圍動脈疾病。PAD通常影響影響供應大腿的動脈并且包括手臂和大腿大動脈梗阻所導致的所有疾病，其可由動脈粥樣硬化、導致狹窄的炎癥過程、栓塞或血栓形成所導致。由于動脈狹窄或梗死所導致的血流的限制通常導致患者抱怨行走時肌肉痛(間歇性跛行)。血流任意的進一步減少導致靜止時引起局部缺血疼痛。這一病癥稱為慢性肢局部缺血，意思是靜止時對氧的需求不能持續(xù)。隨后可能在最遠離血液供應的趾中發(fā)生潰瘍和壞疽，并且如果不治療的話可能導致所涉肢的喪失。對于肢體局部缺血的治療具有側支發(fā)育和血液供應補充的目的。已在此類后肢局部缺血模型中測試了骨髓衍生的CD34+單核細胞，但該后肢局部缺血模型不能模擬心臟中發(fā)生的事情。最接近的動物模型即豬模型不是人類疾病的良好模型，因為(i)所有實驗均一般地在非動脈粥樣硬化的動物中完成，(ii)沒有用血管成形術治療該動物，(iii)正常豬不會栓塞血管，(iv)豬的循環(huán)不與人精確相同；以及(ν)梗死周圍邊界區(qū)域可能不相同。最近報道，當用GCSF動員⑶34+細胞、5天后分離并然后基于Noga作圖注射至心臟的缺血區(qū)域時，心絞痛癥狀有微小的改善。本發(fā)明描述了用于改善心肌梗死后梗死區(qū)域灌注的治療。來自階段I試驗的數(shù)據(jù)提供的這樣的證據(jù)，即用至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞(含有至少0. IO6 個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的有效⑶34+細胞的亞群)治療的受治療者與接受500萬個細胞和對照的受治療者相比，在6個月的靜止期灌注率顯著得到改善，如通過 SPECT 總嚴重性得分(Total Severity Score)測得的那樣(-256 對 +13，ρ = 0. 01)發(fā)明_既述本發(fā)明提供了用于治療梗死區(qū)損傷的藥物組合物以及在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中治療或修復梗死區(qū)損傷的方法，該方法通過導管腸胃外地施用一種無菌藥物組合物至該受治療者，該組合物含有作為第一治療劑的治療有效量未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，以及任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑。該改善梗死量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體CD34+細胞富集群，該富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞的亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細胞富集群提供至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞。根據(jù)一個方面，本發(fā)明提供了一種在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中治療或修復梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過導管腸胃外地施用無菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體CD34+造血干細胞富集群，所述富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細胞富集群提供至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能CD34+細胞；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ ν)，以及(iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；以及(b)在至少一個梗死區(qū)相對于對照改善灌注，其中，當通過該導管并在體外測試時，在含有表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群中至少70%的細胞是 CD34+細胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群后至少約M小時，當通過該導管并在體外測試時，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4 介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持該CXCR-4介導的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；以及其中施用步驟(a) 發(fā)生在一個或多個灌注日期，以及其中第一灌注日期包含由第一時間和第二時間定義的特定時間間隔，其中該第一時間是在梗死區(qū)中峰值炎癥細胞因子級聯(lián)發(fā)生之后，以及第二時間是在梗死區(qū)中形成心肌疤痕之前。根據(jù)該方法的一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有 0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進行性下降。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括至少一個缺血的心肌組織梗死周圍區(qū)的灌注過少。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)另一種實施方案，該方法進一步包括步驟在第二灌注日期施用冷凍并解凍的第二無菌藥物組合物的第二等分試樣，該冷凍并解凍的第二等分試樣包含(i)冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有至少0. IO6 個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清， 其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)；其中，在從解凍該第二等分試樣后至少約對小時，當通過該導管并在體外測試時，該第二等分試樣冷凍并解凍的含有表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群，(1)保持CXCR-4介導的趨化活性；( 含有至少70%⑶34+細胞；C3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。根據(jù)另一種實施方案，該方法進一步包括步驟任選地在第三灌注日期施用冷凍并解凍的無菌藥物組合物的第三等分試樣，該第三等分試樣包含冷凍并解凍的分離的自體 ⑶34+造血干細胞富集群，其含有至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能CD34+細胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ ν)；其中，在從解凍該第三等分試樣后至少約M小時，當通過該導管并在體外測試時，該第三等分試樣冷凍并解凍的含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的⑶；34+細胞富集群，(1)保持CXCR-4介導的趨化活性；(2)含有至少70%⑶34+細胞；C3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。根據(jù)另一種實施方案，該第二灌注日期是第一灌注日期后約30天。根據(jù)另一種實施方案，該第三灌注日期是第一灌注日期后約60天。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達C)(CR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a) 中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4 介導的趨化活性至少72小時。根據(jù)另一種實施方案，該表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少M小時。根據(jù)另一種實施方案，該方法進一步包括將該組合物血管內遞送至梗死相關動脈的步驟。根據(jù)另一種實施方案，該方法進一步包括通過導管將該組合物遞送至心肌的步驟。根據(jù)另一種實施方案，該導管是流量控制導管。根據(jù)另一種實施方案，該導管是球囊擴張心導管。根據(jù)另一種實施方案，該導管具有至少約0. 36mm的內直徑。根據(jù)另一種實施方案，第一灌注日期特定時間間隔的第一時間是梗死后至少約5天。根據(jù)另一種實施方案，第一灌注日期特定時間間隔的第二時間是梗死后少于約14天。根據(jù)另一種實施方案，第一灌注日期特定時間間隔的第一時間是梗死后至少約5天，以及第一灌注日期特定時間間隔的第二時間是梗死后少于約14天。根據(jù)另一種實施方案，該任選的第二治療劑是至少一種促進心肌細胞生長的相容劑。根據(jù)另一種實施方案，該任選的第二治療劑選自如下所述地構成的組，即，所述組由血管緊張素轉化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包含酪氨酸激酶受體激動劑神經調節(jié)蛋白1。 根據(jù)另一種實施方案，該方法比成分(i)加上(ii)或單獨的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該方法改善梗死區(qū)中的微血管血流。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該方法減少梗死損傷的面積。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該方法減少梗死量。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該方法增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該方法增加對至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)中冬眠心肌的灌注。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內皮生長因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胎盤生長因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括兒茶酚胺。根據(jù)另一種實施方案，該兒茶酚胺是去甲腎上腺素。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括內皮素-1。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括前列腺素F2a。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑是血管緊張素 II。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括佛波酯。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括神經肽Y。根據(jù)另一種實施方案， 該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括活性轉化生長因子β 1。根據(jù)另一種實施方案， 該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括Gtl蛋白。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括甘油二酯。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括salusin-a。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括salusin-β。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胰島素樣生長因子-1。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括肌抑素。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括粒細胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括巨噬細胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑(TWEAK)。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括噻唑烷二酮。根據(jù)另一種實施方案，該噻唑烷二酮是羅西格列酮。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了一種治療由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的組合物，其包含(a)梗死損傷改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，所述富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群，從而使得所述分離的自體CD34+造血干細胞富集群提供至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞；(b)穩(wěn)定量的血清， 其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進心肌細胞生長的相容劑；其中，通過導管將該組合物腸胃外地施用至受治療者；其中，當通過導管并在體外測試時，在含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群中至少70%的細胞是CD34+細胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群后至少約M小時，當通過該導管并在體外測試時，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+ 細胞富集群(1)保持該CXCR-4介導的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落。根據(jù)一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群。根據(jù)另一種實施方案，該組合物比成分(i)加上(ii)或單獨的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進行性下降。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括至少一個缺血的心肌組織梗死周圍區(qū)。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)另一種實施方案，含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從自該受治療者獲得的骨髓抽吸物的細胞成分純化得到。根據(jù)另一種實施方案，含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從周圍血純化得到。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。根據(jù)另一種實施方案， 該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群 (a)能在體外形成造血集落，以及(b)在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的 ⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少M小時。根據(jù)另一種實施方案， 通過導管將該組合物血管內遞送至梗死相關動脈。根據(jù)另一種實施方案，通過導管將該組合物遞送至心肌。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該組合物改善梗死區(qū)中的微血管血流。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該組合物增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該組合物增加對至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)中冬眠心肌的灌注。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該組合物減少梗死損傷的面積。根據(jù)另一種實施方案，與對照相比較，該組合物減少梗死量。根據(jù)另一種實施方案， 該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑選自如下所述地構成的組，即，所述組由血管緊張素轉化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動劑神經調節(jié)蛋白1。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和 VEGF-D組成的組的血管內皮生長因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胎盤生長因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括兒茶酚胺。根據(jù)另一種實施方案，該兒茶酚胺是去甲腎上腺素。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括內皮素-1。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括前列腺素F2a。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑是血管緊張素II。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括佛波酯。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括神經肽Y。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括活性轉化生長因子β 。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括Gtl 蛋白。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括甘油二酯(DAG)。 根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括salusin-a。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括salusin-β。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胰島素樣生長因子-1。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括肌抑素。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括粒細胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括巨噬細胞集落刺激因子。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑(TWEAK)。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括噻唑烷二酮。根據(jù)另一種實施方案，該噻唑烷二酮是羅西格列酮。附圖簡述

圖1顯示了本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物在72小時的功能生存力與48小時的相當。圖2顯示了本發(fā)明配制的包含⑶34+細胞的趨化性造血干細胞產物的遷移效率。圖3顯示了在人血清中配制的⑶34+細胞的改善的穩(wěn)定性。圖4㈧顯示了灌注缺損(RTSS)的改變對產物(⑶34+劑量乘以在SDF梯度中移動的CD34+的百分比)。圖4(B)顯示了作為LV質量百分比的梗死大小的改變對產物(CD34+ 劑量乘以在SDF梯度中移動的⑶34+的百分比)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了改善梗死區(qū)灌注的組合物，其包含未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，以及其在血運重建受治療者中對自然疾病過程導致的心肌梗死后果治療梗死區(qū)損傷和改善心功能的用途方法。術語表術語“轉化生長因子β 1” (TGF-β 1)是指在許多細胞類型中控制增殖、分化和其他功能的多功能蛋白。許多細胞合成TGF-β 1并且具有特定的針對它的受體。其正向或負向調控許多其他生長因子，并且作為成骨細胞骨形成的有效刺激劑，在定型成骨細胞中引起趨化性、增殖和分化，在骨重建中具有重要的作用。(Schluter，K. D.，和Piper，H. Μ. FASEBJ. 13 :S17-S-22(1999))。本文所使用的術語“施用”以其各種語法形式表示給予或應用。本文所使用的術語“施用”包括體內施用，以及體外直接施用至組織。一般地，可以以劑量單位制劑腸胃外地或局部地全身性施用組合物，所述制劑含有如所需要的常規(guī)無毒藥學上可接受的載體、 佐劑和運載體，或可通過諸如以下的方式局部地施用組合物注射、植入、移植、局部施用或腸胃外地施用，但不限于此。施用細胞的方法可包括但不限于灌注。本文所使用的術語“后果”是指由事件引起的或由其得出的后果或結果。本文所使用的術語“血管發(fā)生”是指血管形成與發(fā)育的過程。術語“血管緊張素II”是指通過血管緊張素轉化酶(或ACE)的作用從血管緊張素 I形成的多肽激素。術語“細胞凋亡”或“程序性細胞死亡”是指有助于生物體內穩(wěn)態(tài)的高度調控且活躍的過程，其包括一系列導致各種形態(tài)學改變的生物化學事件，包括起泡、細胞膜改變(諸如膜不對稱性和附著的喪失)、細胞收縮、細胞核片段化、染色質濃縮、以及染色體DNA片段化，不會對生物體造成損害。細胞凋亡死亡可由許多不同的因素誘導，并且包括多個信號通路，有些依賴于半胱天冬酶(一類半胱氨酸蛋白酶)以及其他是不依賴半胱天冬酶的。其可由許多不同的細胞刺激引發(fā)，包括細胞表面受體、線粒體對脅迫的反應、以及細胞毒T細胞、導致細胞凋亡信號通路的活化。參與細胞凋亡的半胱天冬酶在蛋白水解級聯(lián)中傳遞細胞凋亡信號，其中半胱天冬酶切割并或活化其他半胱天冬酶，后者然后降解其他導致細胞死亡的細胞靶。在該級聯(lián)上端的半胱天冬酶包括半胱天冬酶-8和半胱天冬酶_9。半胱天冬酶-8是涉及對死亡結構域 (DD)(如i^as)受體的反應的起始半胱天冬酶。TNF受體家族中的受體與細胞凋亡的誘導、以及炎癥信號相關。Fas受體(⑶95) 通過其他細胞表面表達的i^as-配體介導凋亡信號。Fas-FasL相互作用在免疫系統(tǒng)中起著重要作用，并且這一系統(tǒng)的缺乏導致自體免疫，表明I^as-介導的凋亡移除自身反應性淋巴細胞。Fas信號還參與免疫監(jiān)視，以移除轉化的細胞和病毒感染的細胞。Fas與另一細胞上的寡聚體化i^asL的結合通過稱為死亡結構域(DD)的胞漿結構域活化凋亡信號，所述死亡結構域與包括FAF、FADD和DAX在內的信號轉換器相互作用，從而活化半胱天冬酶蛋白水解級聯(lián)。半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-10被首先活化以隨后切割和活化下游半胱天冬酶以及各種導致細胞死亡的細胞底物。線粒體通過釋放線粒體蛋白至細胞質從而參與細胞凋亡信號通路。細胞色素c 是電子傳遞的重要蛋白，其被從線粒體釋放作為對細胞凋亡信號的響應，并活化從線粒體釋放的蛋白酶Apaf-Ι。經活化的Apaf-I激活半胱天冬酶-9以及剩余的半胱天冬酶通路。 Smac/DIABLO從線粒體釋放以抑制LAP蛋白，所述LAP蛋白正常情況下與半胱天冬酶_9相互作用以抑制細胞凋亡。當Bcl-2家族成員形成進入線粒體膜的復合物時，發(fā)生由Bcl-2 家族蛋白調節(jié)的細胞凋亡，調節(jié)細胞色素c和其它蛋白質的釋放。引起細胞凋亡的TNF家族受體直接活化半胱天冬酶級聯(lián)，但還可活化Bcl-2家族成員Bid，其活化線粒體介導的細胞凋亡。Bcl-2家族的另一成員Bax由這一通路活化，從而定位至線粒體膜上，并增加其滲透性，釋放細胞色素c和其它線粒體蛋白。Bcl-2和Bcl-xL防止孔形成，阻斷細胞凋亡。如細胞色素c 一樣，AIF(細胞凋亡誘導因子)是在線粒體中發(fā)現(xiàn)的、通過細胞凋亡刺激而從線粒體釋放的蛋白。盡管細胞色素C與半胱天冬酶依賴性細胞凋亡信號連接，但AIF釋放刺激了半胱天冬酶不依賴性細胞凋亡，移入細胞核中，在此處其與DNA結合。由AIF結合的 DNA刺激染色質濃縮，以及DNA片段化，可能是通過募集核酸酶。線粒體應激通路以細胞色素c從線粒體的釋放開始，其然后與Apaf-I相互作用， 引起自我切割并活化半胱天冬酶-9。半胱天冬酶_3、-6、和-7是由該上游蛋白酶活化的下游半胱天冬酶，并且它們自身作用以切割細胞靶。由細胞毒T細胞釋放的粒酶B和穿孔素蛋白誘導靶細胞凋亡，形成跨膜孔，并誘發(fā)細胞凋亡，可能是通過半胱天冬酶的切割，盡管也有人提出過粒酶B誘導細胞凋亡的半胱天冬酶非依賴性機制。通過多個核酸酶的細胞核基因組片段化是凋亡的細胞反應特征，所述核酸酶通過凋亡信號通路活化以產生核小體梯狀物(ladder)。參與細胞凋亡的一個核酸酶是DNA片段化因子(DFF)，其為半胱天冬酶活化的DNA酶(CAD)。DFF/CAD通過在凋亡期間的半胱天冬酶蛋白酶切割其相關抑制劑ICAD而得以活化。DFF/CAD與染色質成分(諸如拓撲異構酶II和組蛋白Hl)相互作用，以濃縮染色質結構，并可能募集CAD至染色質。另一細胞凋亡活化的蛋白酶是核酸內切酶G(EndoG)。在正常細胞中，EndoG在細胞核基因組中編碼，但定位于線粒體中。EndoG可能在線粒體基因組的復制中、以及在凋亡中起作用。凋亡信號引起EndoG從線粒體釋放。EndoG和DFF/CAD通路是獨立的，因為在缺乏DFF的細胞中EndoG 通路仍然發(fā)生。缺氧以及復氧后的缺氧能誘發(fā)細胞色素c釋放和凋亡。糖原合成酶激酶(GSK-3) 是在多數(shù)細胞類型中遍在表達的絲氨酸-蘇氨酸激酶，其似乎介導或加強由許多刺激導致的細胞凋亡，活化線粒體細胞死亡通路。Loberg，RD，等，J. Biol. Chem. 277(44) 41667-673(2002)。已證明其誘導半胱天冬酶3的活化，以及活化促凋亡腫瘤抑制基因p53。 還有人提出GSK-3促進原凋亡Bcl-2家族成員Bax的活化和運輸，所述Bax通過聚合及線粒體定位，從而誘導細胞色素c釋放。Akt是GSK-3的關鍵調節(jié)子，并且GSK-3的磷酸化和失活可能介導Akt的某些抗凋亡作用。本文所使用的術語“生物標志物”是指客觀測得的疾病風險、基礎病理過程、診斷和疾病狀態(tài)、預后、治療反應、復發(fā)和臨床結果的指示物。生物標志物可以是基因、遺傳變體、RNA、蛋白和代謝物的形式。能可靠地反映或預測疾病進展或改善的生物標志物可幫助疾病診斷以及評估疾病的嚴重程度、發(fā)生的風險、以及進展。術語“c-kit”是指在一些細胞表面的、與干細胞因子(引起某些類型的細胞生長的物質)結合的蛋白。這一受體的變形可能與一些類型的癌癥相關。術語“心臟生物標志物”是指與心功能、損傷或衰竭相關的、用于診斷和預后目的的酶、蛋白和激素。不同的心臟標記在體內的水平升高、峰值和下降的時間不同，使得它們不僅可用于跟蹤心臟病發(fā)作的進展，還能用于估計其何時開始以及用于監(jiān)測復發(fā)。有些測試對心臟是特異的，而其他則還隨著骨骼肌的損傷而升高。當前的心臟生物標志物包括但不限于CK(磷酸肌酸激酶或肌酸激酶)和CK-MB (肌酸激酶-肌紅蛋白水平(以幫助區(qū)分骨骼肌和心肌))、肌鈣蛋白(肌鈣蛋白I和T的血液水平將在心臟病發(fā)作后1-2周保持高水平，肌鈣蛋白通常不受其它肌肉損傷的影響)、肌紅蛋白(以確定是否有肌肉，尤其是心肌受損)、以及BNP (腦利納肽)或NT-原BNP (N端前激素腦利納肽(以幫助診斷心臟衰竭和定級心臟衰竭的嚴重程度))。術語“心導管插入術”是指使導管通過通往心臟動脈并到達冠狀動脈的方法。這一方法產生冠狀動脈和左心室(心臟的主要泵送室)的血管造影片(即，X射線圖像)，其可用于測量肺動脈的壓力，以及監(jiān)測心功能。術語“兒茶酚胺”是指任意類型的擁有兒茶酚(C6H4(OH2))環(huán)的胺。兒茶酚胺的非限制性例子包括多巴胺、腎上腺素和去甲腎上腺素(降腎上腺素)。分化抗原簇(命名簇(cluster of designation))(通常簡寫為CD)是用于鑒定和研究白細胞表面存在的細胞表面分子的方案。CD分離可以以各種方式起作用，通常作為對細胞很重要的受體或配體(意思是活化受體的分子)起作用。信號級聯(lián)通常被啟始，改變細胞的行為。一些CD蛋白不在細胞信號中起作用，但具有其他功能，諸如細胞粘附。本文所使用的術語“細胞表面標志物”是指在特定類型的細胞表面發(fā)現(xiàn)的抗原決定簇或表位。細胞表面標志物可促進表征細胞類型、其鑒定以及最后促進其分離。本文所使用的術語“CD34+細胞”是指衍生自人骨髓的造血干細胞和祖細胞，其對造血干細胞抗原是“陽性的”，即“表達”該抗原，至少其的亞群表達CXCR4，并且其能遷移至受損區(qū)域。術語“CD38”是指在巨噬細胞、樹狀突細胞、以及活化的B和NK細胞上的蛋白質標志物，其可介導淋巴細胞和內皮細胞的粘附。術語“⑶45”和“白細胞共同抗原”是指位于除紅細胞和血小板之外的造血細胞上的蛋白質酪氨酸磷酸酶(PTP)。術語“CD59”是指糖基化磷脂酰肌醇(GPI)連接的膜糖蛋白，其保護人細胞不被補體介導的裂解所裂解。本文所使用的術語“CXCR-4”是指G蛋白連接的趨化因子受體。本文所使用的術語“細胞因子”是指由細胞分泌的小的可溶蛋白物質，其對其他細胞具有各種作用。細胞因子介導許多重要的生理功能，包括生長、發(fā)育、損傷愈合以及免疫反應。它們通過與其位于細胞膜上細胞特異性受體結合而起作用，這允許不同的信號轉導級聯(lián)在細胞中開始，其最終將導致靶細胞的生物化學和表型改變。一般地，細胞因子局部地作用。它們包括1型細胞因子，包括許多白介素、以及多種造血生長因子；II型細胞因子， 包括干擾素和白介素-10 ；腫瘤壞死因子(“TNF”)相關分子，包括TNFa和淋巴毒素；免疫球蛋白超家族成員，包括白介素1(“IL_1”)；以及趨化因子，即在許多免疫和炎癥功能中起著關鍵作用的分子的家族。取決于細胞狀態(tài)，相同的細胞因子可能對細胞具有不同的作用。 細胞因子通常調節(jié)其他細胞因子的表達，以及引發(fā)其他細胞因子的級聯(lián)。術語“集落刺激因子”是指負責控制白細胞產生的細胞因子。類型包括粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)、以及粒細胞巨噬細胞集落刺激因子 (GM-CSF)。術語“甘油二酯”(DAG)是指由兩條脂肪鏈組成的甘油酯，所述脂肪鏈通過酯鍵共價地與甘油分子結合。甘油二酯還可具有許多不同組合的與Cl和C2位置結合的脂肪酸。術語“內皮素”是指血管收縮肽，其由血管內皮合成并釋放，并且其為內皮功能的標志物。
術語“制劑”和“組合物”在本文中可互換，表示本發(fā)明的包含所有活性和惰性組分的產物。術語“活性”是指本發(fā)明組合物中負責預期治療效果的要素、成分或組分。本文所使用的術語“藥物制劑”或“藥物組合物”是指被應用以預防、減少其強度、治愈或以其他方式治療靶病癥或疾病的制劑或組合物。術語“G/，蛋白是指異源三聚體G蛋白亞單位，其活化磷脂酶C并且參與多種細胞信號通路。術語“造血干細胞”是指從血液或從骨髓分離的細胞，其可更新其本身、分化為各種特異的細胞、從骨髓移出至循環(huán)血液中、以及發(fā)生程序性細胞死亡(細胞凋亡)。在本發(fā)明的一些實施方案中，從人受治療者中衍生得到的造血干細胞表達至少一種的細胞表面標志物，包括但不限于CD34、CD38、HLA-DR、c_kit、CD59、Sca-U Thy-I 和 / 或 CXCR-4，或其組合?！癏LA-DR”是指人II類組織相容性抗原，其存在于多種細胞類型中，包括抗原遞呈細胞、B細胞、單核細胞、巨噬細胞以及活化的T細胞。術語“胰島素樣生長因子1” (IGF-I)是指在功能和結構上與胰島素類似的蛋白質，其為參與介導生長和發(fā)育的蛋白家族的成員。本文所使用的術語“分離”及其各種語法形式是指以基本上沒有污染物或其他的通常與下述物質聯(lián)系的材料的形式放置、分離出、獲得蛋白、分子、物質、核酸、肽、細胞或粒子。本文所使用的術語“白介素”是指由白細胞分泌的細胞因子，作為與其他白細胞通信的方式。術語“VDGF”、“VEGF_1”或“血管內皮生長因子”在本文中可互換使用，表示介導內皮細胞多種功能的細胞因子，包括增殖、遷移、侵襲、存活以及滲透性。術語“VEGF-2”是指血管內皮和平滑肌細胞生長的調節(jié)子。VEGF-2刺激人血管內皮細胞的生長，但抑制由血小板衍生生長因子誘導的人主動脈平滑肌細胞生長。本文所使用的術語“趨化因子”是指一類趨化性細胞因子，其提供白細胞以特定方向移動的信號。術語“化學向性”或“趨化性”是指能動的細胞或部分沿著化學濃度梯度向其認為有吸引力的環(huán)境條件移動和/或遠離其發(fā)現(xiàn)排斥的環(huán)境的定向移動。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的潛能⑶34+CXCR-4+能夠移動，意思是它們可從一個地方、位置或區(qū)域移動至另一個。在一種實施方案中，它們的遷移由趨化性驅動。術語“全血細胞計數(shù)”(CBC)是指提供了每一種血細胞類型的數(shù)量及質量詳細信息的實驗測試。其通常包括測量3種主要血細胞(紅細胞、白細胞和血小板)的每一種，以及測量血紅蛋白和紅細胞比容?！把t蛋白”(HGB)是指每分升血液中的血紅蛋白克數(shù)(g/ dL)。在健康成年受治療者中正常的血紅蛋白水平是男性為約14g/dL至約18g/dL，以及女性為約12g/dL至約16g/dL。作為大體的指引，血紅蛋白通常應當是紅細胞比容的三分之一。“紅細胞比容” (HCT)是指作為總血體積百分比的紅細胞比重。人受治療者的正常紅細胞比容是男性為約40%至約55%，以及女性為35%至45%。“紅細胞計數(shù)”(RBC)是指在一定量的血液中紅細胞的總量。人受治療者中的正常范圍是男性為約450萬細胞/mm3至約 600萬細胞/mm3，以及女性為約400萬細胞/mm3至約550萬細胞/mm3。“白細胞計數(shù)”(WBC)是指在一定量的血液中白細胞或白血球的總量。人受治療者中的正常范圍是約4. 3x10s細胞 /mm3 至約 10. 8x IO3 細胞 /mm3。本文所用的術語“疾病”或“障礙”指健康的惡化或異常執(zhí)行功能的狀況。本文所用的術語“綜合征”是指表現(xiàn)出某種疾病或狀況的癥狀的型式。本文所用的術語“狀況”是指各種健康狀態(tài)，并意在包括由任何潛在的機理或紊亂、損傷以及對健康組織和器官的促進作用引發(fā)的障礙或疾病。如本文所使用的術語“炎癥”是指對感染和損傷的反應，其中參與解毒和修復的細胞通過炎癥介質遷移到受損部位。無論引發(fā)動因如何，伴隨急性炎癥的生理變化包括4個主要特征(1)血管舒張是對急性組織損傷的一種早期身體反應，它導致血流量的凈增加；(2)響應于炎性刺激，內襯小靜脈的內皮細胞收縮，擴展細胞內連接以形成間隙，導致血管通透性增加，而這可使血漿蛋白質和血細胞泄漏出血管；C3)炎癥通常以在炎癥部位白細胞的強烈浸潤為特征，特別是嗜中性粒細胞(多形核細胞)。這些細胞通過在血管壁或者未損傷的組織內釋放有毒物質而促進組織損害；以及(4)發(fā)熱，作為對特異性刺激的反應，由從白細胞釋放的熱原引起。在炎癥過程中，炎癥反應的可溶炎癥介質與細胞成分以全身方式一起起作用，以試圖遏制并消除引起身體不適的動因。在本文中關于介質使用術語“炎癥”或“免疫炎癥” 時，是指炎癥過程的分子介質。這些可溶的、可擴散的分子在組織損傷和感染的部位局部起作用，以及在更遠的部位起作用。一些炎癥介質由炎癥過程激活，而其他的炎性介質響應于急性炎癥或因另外的可溶性炎性介質而從細胞源合成和/或釋放。炎癥反應的炎癥介質的例子包括但不限于血漿蛋白酶、補體、激肽、血凝固和纖維蛋白溶解性蛋白、脂質性介體、 前列腺素、白三烯、血小板活化因子(PAF)、肽和胺(包括但不限于組胺、血清素和神經肽) 以及促炎因子(包括但不限于白介素-1、白介素_4、白介素-6、白介素-8、腫瘤壞死因子 (TNF)、干擾素-γ以及白介素12)。術語“入時”(in-date)是指從完成在無菌條件下從受治療者獲得包含潛能⑶34+ 細胞富集群的制備物至開始從該制備物無菌純化潛能CD34+細胞之間的時間間隔。術語“出時”(out-date)是指從完成在無菌條件下從受治療者獲得包含潛能CD34+細胞富集群的制備物至將該配制的包含趨化性造血干細胞產物的藥物組合物輸注給該受治療者之間的時間間隔。本文所使用的術語“輸注，，或“輸液”是指將除血液之外的其他流體弓I入包括人在內的受治療者的血管之中，用于治療目的。本發(fā)明的無血清“輸注溶液”含有補充有25USP單位/ml肝素和人血清白蛋白 (HSA)的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在一種實施方案中，該輸注溶液補充有血清。在一些實施方案中，該血清是自體的。術語“損傷”是指由物或力對受治療者身體結構或功能引起的損壞或傷害，它可以是物理或化學的。術語“脈管損傷”是指對脈管系統(tǒng)(即，脈管網絡，意思是血管或運輸流體(諸如但不限于血液或淋巴液)的導管的網絡)的損傷。本文所使用的術語“限制”是指限制或限定范圍、程度或量。本文所使用的術語“巨噬細胞”是指從骨髓的單核干細胞產生的單核、活躍的吞噬細胞。這些細胞廣泛地分布于身體中，并且形態(tài)和運動性不同。吞噬作用活性通常由包括某些免疫球蛋白和補體系統(tǒng)成分在內的血清識別因子介導，但也可以是非特異性的。巨噬細胞還參與抗體的產生和細胞介導的免疫反應，尤其是參與將抗原遞呈給淋巴細胞。它們分泌各種免疫調節(jié)分子。術語“微菌”和“微生物”在本文中可互換使用，指小到無法用肉眼清楚看到的生物，包括但不限于微小的細菌、真菌(霉菌)、藻類、原生動物和病毒。本文所使用的各種語法形式的術語“調節(jié)”的意思是調控、改變、調適、操縱或調整某一量或比例。此類調節(jié)可以是任何改變，包括不能檢測到的改變。術語“心肌梗死”是指對心肌的死亡或永久損傷。多數(shù)心臟病發(fā)作是由冠狀動脈的阻塞所引起的，所述阻塞阻斷了對心肌的血流和氧氣，導致這些區(qū)域中心臟細胞的死亡。 受損心肌喪失其收縮的能力，使得剩下的心肌補償弱化的區(qū)域。本發(fā)明包括了涉及評估受治療者對根據(jù)本發(fā)明治療的適合性的步驟，通過應用測試以查看心臟在跳動時的大小、形狀和功能，檢測對心臟節(jié)律的改變，以及檢測和評估受損的組織和阻斷的動脈。此類測試的實例包括但不限于心電圖、超聲心動圖顯像、冠狀動脈血管造影術、以及核心室造影術。心臟生物標志物也被用于評估受治療者對根據(jù)本發(fā)明的治療的適合性。術語“肌抑素”(MSTN)是指屬于骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)家族和TGF-β超家族成員的蛋白。這一蛋白組由多元蛋白水解處理部位所表征，其被切割以產生含有7個保守半胱氨酸殘基的成熟蛋白。這一家族的成員是胚胎組織和成人組織中細胞生長和分化的調節(jié)子。術語“神經肽Y”是指在中樞神經系統(tǒng)中廣泛表達且影響許多生理過程的神經肽， 所述生理過程包括皮層興奮性、應激反應、攝食、晝夜節(jié)律以及心血管功能。其通過G蛋白偶聯(lián)受體起作用，以抑制腺苷酸環(huán)化酶、抑制活化的促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、調節(jié)細胞內鈣水平、以及活化鉀通道。本文所使用的術語“灌注”是指動脈血液向生物組織中毛細血管床的營養(yǎng)遞送過程。灌注(“F”)可用公式F= ( (Pa-Pv)/R)計算，其中Pa是平均動脈壓，Pv是平均靜脈壓， 以及R是血管阻力。可在體內測量組織灌注，例如通過，但不限于磁共振成像(MRI)技術。 該技術包括應用注射的造影劑和動脈自旋標記(ASL)(其中在其進入目標組織前磁性地標記動脈血，以及測量標記量并與對照記錄相比較)。術語“胎盤生長因子”(PIGF)是指一種屬于血管內皮生長因子家族成員的細胞因子。術語“佛波酯”是指天然的、植物衍生的有機化合物，其為二萜的惕各烷家族的成員。如本文所使用的術語“潛能的”或“潛能”是指本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物必需的生物活性，即本發(fā)明的潛能⑶34+CXCR-4+細胞保持有生存力，能夠有CXCR-4-介導的趨化活性，以及能夠生長，即在體外CFU測試法中形成造血干細胞集落。本文使用的術語“前列腺素”是指一組為前列腺烷酸衍生物的生理活性物質中的任一個，所述前列腺烷酸是20碳結構，其為含有五元環(huán)戊烷環(huán)的脂肪酸。本文所使用的術語“祖細胞”是指骨髓中的未成熟細胞，其可通過將骨髓懸浮液培養(yǎng)于添加有生長因子的培養(yǎng)皿中而分離。祖細胞成熟為前體細胞，前體細胞成熟為血細胞。祖細胞稱為集落形成單位(CFU)或集落生成細胞(CFC)。祖細胞的具體世系由后綴表明，諸如但不限于CFU-E(紅細胞)、CFU-GM(粒細胞/巨噬細胞)以及CFU-GEMM(多能造血干細胞)。本文所使用的術語“減少”及其各種語法形式是指變小、變窄或降至更小的范圍、
大小、量、程度或強度。本文所使用的作為名詞的術語“修復”是指任何恢復功能的修正、強化、更新、補救、彌補、修補、復原、修復、修補等等。當用作動詞時，其意思是修正、強化、修整、補救、彌補、使完好、更新、愈合、修補或以其他方式恢復功能。在一些實施方案中，“修復”包括完全修復和部分修復。術語“salusin”是指28個氨基酸(salusin-α )或20個氨基酸(salusin-β )的生物活性肽，其從T0R2A的可變剪接mRNA翻譯得到，所述T0R2A是編碼一個扭轉張力障礙家族蛋白的基因。Salusin增加細胞內Ca2+，上調各種基因以及誘導細胞有絲分裂。術語“Sca-I，，或“干細胞抗原_1，，是指影響間充質干細胞自我更新能力的信號通路中的表面蛋白成分。術語“干細胞”是指具有自我更新能力的高增值潛能未分化細胞，其能產生子細胞，所述子細胞能末端分化為超過一種不同的細胞表型。術語“支架”是指用于撐開動脈的小管。使支架塌縮為小直徑，放置在球囊導管之上，通過腹股溝(股動脈)或手臂(肱動脈)的主動脈插入，并穿達動脈的狹窄/阻滯區(qū)域。 當其到達正確的位置，球囊輕微膨脹以推開任何斑塊，并擴展血管(球囊血管成形術)。當球囊膨脹后，支架張開，在適當?shù)牡胤焦潭ǎ⑿纬芍Ъ芤跃S持動脈張開。支架永久地停放在血管中。在某些受治療者中，支架減少球囊血管成形術或其他應用了導管的方法之后發(fā)生的再狹窄。支架還可能有助于恢復正常血流，以及保持動脈張開，如果其被球囊導管撕裂或損傷的話。再閉合(再狹窄)可能是支架方法的問題。藥物洗脫支架是包被有緩慢釋放的藥物的支架。這些藥物可能幫助保持血管不再閉合。術語“受治療者”和“患者”在本文中可互換使用，并且包括哺乳動物起源的動物物種，包括人類。本文使用的術語“易感受治療者”是指有風險的人群的成員。術語“噻唑烷二酮類”(TZD)是指一類與過氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)結合的化合物，所述PPAR是一組在細胞核內部的的分子受體。這一類化合物的成員是母體化合物噻唑烷二酮的衍生物，并且包括羅西格列酮、匹格列酮和曲格列酮。術語“Thy-1”是指Ig超家族細胞表面糖蛋白Thy_l，其在嚙齒類動物和人類的免疫細胞和神經元上表達，推測其在細胞粘附，以及T細胞分化、增殖和凋亡的信號轉導中起作用。本文所使用的術語“治療”或“處理”可互換使用，包括消除(廢除、清除)、基本上抑制、減緩或逆轉病癥的進程，基本上改善(改良)病癥的臨床或審美癥狀，基本上阻止臨床或審美癥狀的出現(xiàn)，保護免受有害刺激，以及實現(xiàn)以下一種或多種(a)降低障礙、疾病或病癥的嚴重性；(b)限制治療中的障礙、疾病或病癥的特征性癥狀的發(fā)展；(C)限制治療中的障礙、疾病或病癥的特征性癥狀的惡化；(d)限制患者曾患的障礙、疾病或病癥的復發(fā)；以及(e)限制患者先前曾有的障礙、疾病或病癥癥狀的復發(fā)。
術語“腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑”(TWEAK)是指TNF-α生長因子家族的成員，其作為II型跨膜蛋白產生并且被加工為156個氨基酸的可溶細胞因子。 (Chicheportiche, Y.等，J Biol. Chem. 272 :32401-410 (1997))。TWEAK 具有多種生物學活性，包括刺激細胞生長和血管發(fā)生、誘導炎癥細胞因子，以及在某些實驗條件下刺激細胞凋亡(Wiley, S. R.，等，Cytokine Growth Factor Rev. 14(3-4) :241_9，2003)，并且是心肌細胞增殖的正向調節(jié)子(Novoyatieva，Τ.，等，Cardiovacs. Res. 2009 年 11 月 26，PMID 19887380)。TWEAK通過成纖維細胞生長因子可誘導的分子14 (FN14)受體介導這些過程 (Harada, N.等，Biochem. Biophys. Res. Commun. 299 :488-93 (2002) ；Nakayama, M 等， Biochem. Biophys. Res. Communic.，306 :819-825 000；3))，所述受體是嚴緊調控的且可誘導的受體，已有人提出其通過各種下游信號級聯(lián)傳遞信號。(Ando，T.，等，Arthritis Res. Ther. 8 :R146(2006) ；Brown, S. Α.，等，Biochem. J. 371 :395-403(2003) ；Saitoh, Τ.等， J. Biol. Chem. 278 :36005-36012 (2003) ；Dogra, C.等，F(xiàn)ASEB J. 21 1857-69 (2007)，其每一個均在此通過引用并入本文)。術語“血管功能不全”是指不充分的血流。本發(fā)明提供了梗死區(qū)灌注改善組合物，以及其在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后治療和修復梗死區(qū)損傷的方法。在一個方面中，本發(fā)明提供了治療由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的組合物，其包含(a)梗死區(qū)改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+細胞富集群，其含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群；(b)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進心肌細胞生長的相容劑；其中通過導管將該組合物腸胃外地施用于受治療者；其中，當通過導管和在體外測試時，在含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群中至少70%的細胞是CD34+細胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群后至少約 24小時，當通過該導管并在體外測試時，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持該CXCR-4介導的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及C3)能在體外形成造血集落。根據(jù)一些此類實施方案，所述促進心肌細胞生長的相容劑選自如下所述地構成的組，即，所述組由血管緊張素轉化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑和降膽固醇劑組成。根據(jù)另一種實施方案，該至少一種促進心肌細胞生長的相容劑是酪氨酸激酶受體激動劑神經調節(jié)蛋白1。其他促進心肌細胞生長的相容劑包括但不限于血管內皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C和VEGF-D、胎盤生長因子(PIGF)、兒茶酚胺(諸如但不限于去甲腎上腺素)、內皮素-1、前列腺素F2a、血管緊張素II、佛波酯、神經肽 Y、活性轉化生長因子 β 1(TGF-1 β)、Gq 蛋白、甘油二酯(DAG)、salusin-a ,salusin-β、 胰島素樣生長因子(IGF-I)、肌抑素、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑(TWEAK)、噻唑烷二酮，諸如但不限于羅西格列酮，及其變體或重組衍生物。根據(jù)一種實施方案，該組合物比成分(i)加上(ii)、或單獨的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。在一些實施方案中，與對照相比較，該組合物改善梗死區(qū)的微血管血流。在一些實施方案中，與對照相比較，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。在一些實施方案中，與對照相比較，該梗死區(qū)損傷包括心室重建，如通過LVEF下降或LVESV升高所測得的那樣。在一些實施方案中，該梗死區(qū)損傷包括由AMI導致的心肌功能的進行性下降。在一些實施方案中，相對于對照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的灌注不足。在一些實施方案中，與對照相比較，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的心肌冬眠。在一種實施方案中，與對照相比較，該組合物增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。在一些實施方案中，與對照相比較，該組合物增加對至少一個心肌組織梗死周圍區(qū)中冬眠心肌的灌注。 在一些實施方案中，與對照相比較，該組合物減少梗死損傷的面積。在一些實施方案中，與對照相比較，該組合物減少梗死量。根據(jù)另一種實施方案，含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從自該受治療者獲得的骨髓抽出物的細胞成分純化得到。根據(jù)另一種實施方案，含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從周圍血純化得到。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4 且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群 (a)能在體外形成造血集落，以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。 根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的 ⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少M小時。根據(jù)一種實施方案，通過從自該受治療者獲得的骨髓中分離或純化該含有表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群，從而制備趨化性造血干細胞產物。根據(jù)一種實施方案，通過從周圍血中分離或純化該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群，從而制備趨化性造血干細胞產物。根據(jù)本發(fā)明，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少70%的純⑶34+細胞。 在一些實施方案中，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少75%的純⑶34+細胞。在一些實施方案中，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少80%的純⑶34+細胞。在一些實施方案中，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少85%的純⑶34+細胞。在一些實施方案中，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少90%的純⑶34+細胞。在一些實施方案中，該富集⑶34+細胞的造血干細胞產物含有至少95%的純⑶34+細胞。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少M小時，至少約70% 的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少M 小時，至少約75%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細胞群后至少M小時，至少約80%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細胞群后至少M小時，至少約85%的⑶34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少M小時，至少約90%的CD34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少M小時，至少約95%的⑶34+ 細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少48小時，至少約70% 的CD34+細胞是是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少48 小時，至少約75%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細胞群后至少48小時，至少約80%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細胞群后至少48小時，至少約85%的⑶34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少48小時，至少約90%的CD34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少48小時，至少約95%的⑶34+ 細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少72小時，至少約70% 的CD34+細胞是是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少72 小時，至少約75%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+ 細胞群后至少72小時，至少約80%的CD34+細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶；34+細胞群后至少72小時，至少約85%的⑶34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少72小時，至少約90%的CD34+細胞是有活力的。在一些實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少72小時，至少約95%的⑶34+ 細胞是有活力的。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少M小時，該⑶34+細胞能形成造血集落。在另一種實施方案中，在獲得該富集的CD34+細胞群后至少48小時，該 ⑶34+細胞能形成造血集落。在另一種實施方案中，在獲得該富集的⑶34+細胞群后至少72 小時，該⑶34+細胞能形成造血集落。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物包含至少約1000萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+ 細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1100萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1200萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1300萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1400萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1500萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1600萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1700萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1800萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約1900萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約2000萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。 根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約2500萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約3000萬個從受治療者獲得的、 并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約3500萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約4000萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約4500萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約5000萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約陽00萬個從受治療者獲得的、并且含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。根據(jù)另一種實施方案，該梗死區(qū)灌注改善組合物還包含至少約6000萬個從受治療者獲得的、并且含有表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的⑶34+細胞。⑶34+細胞可通過本領域技術人員公知的任何方法富集/選擇。例如，在一些實施方案中，通過熒光激活細胞選擇術(FACQ針對表達CD34細胞抗原和CXCR4細胞抗原的細胞富集包含CD34+細胞的骨髓細胞群。在一些實施方案中，通過正向或負向免疫分離技術富集/選擇骨髓中的CD34+細胞。在一些實施方案中，基于細胞分級方法從骨髓分離和/或純化造血干細胞，所述細胞分級方法基于大小和細胞密度、代謝染料的流出、或對細胞毒劑的耐性。在一種實施方案中，例如，應用單克隆抗CD34+抗體和免疫磁性分離技術富集/選擇骨髓中的⑶；34+細胞?？赏ㄟ^本領域公知的技術鑒定、量化和表征選擇的⑶34+細胞。例如，在一些實施方案中，可通過FACS分析確定CD34+細胞在骨髓和在趨化性造血干細胞產物中的百分比。 在另一種實施方案中，通過蛋白質免疫印記(Western blot)方法量化CD34蛋白質表達。術語“蛋白質免疫印記”是指在復雜混合物中鑒定蛋白質的方法；在凝膠介質中電泳分離蛋白質；從凝膠轉移至蛋白結合片或膜上；將含有分離的蛋白質的片或膜暴露于抗體，所述抗體結合、定位以及使得可顯現(xiàn)目的蛋白質。例如，可應用單克隆抗CD34抗體檢測原位附著在膜上的⑶34蛋白。在另一種實施方案中，分離的⑶34+細胞中⑶；MmRNA和DNA的表達可以被量化。 本文所使用的術語“RNA印記”(Northern blot)是指這樣的技術，其中通過電泳將來自標本的RNA在凝膠上分離為其組成部分，并轉移至特異修飾的紙支持物上，以把mRNA固定在其電泳位置上。應用包含報告分子(諸如，但不限于放射性標記)的探針鑒定CD34相關序列。在另一種實施方案中，⑶34和/或CXCR4的表達水平通過定量或半定量PCR或實時PCR( “RT-PCR”)技術得以確定。縮寫“PCR”是指聚合酶鏈式反應，其是用于擴張DNA 數(shù)量，從而使得DNA更易于分離、克隆和測序的技術。例如，參見美國專利號5，656，493、 5，333，675,5, 234，824和5，187，083，其每一個均在此通過引用并入本文。實時PCR是同時進行DNA定量和擴增的方法，其中通過聚合酶鏈式反應(PCR)特異性地擴增DNA，并且在擴增的每一個循環(huán)之后，量化DNA。 本發(fā)明趨化性造血干細胞產物的選擇的⑶34+造血干細胞含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的CD34+細胞亞群。在一種實施方案中，本發(fā)明的造血干細胞產物包含最小量的分離的⑶34+造血干細胞，使得存在至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的CD34+細胞的亞群。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+ 細胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約3%的CD34+CXCR-4+細胞的 CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+ 細胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約5%的CD34+CXCR-4+細胞的 CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+ 細胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約7%的CD34+CXCR-4+細胞的 CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+ 細胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約9%的CD34+CXCR-4+細胞的 CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+ 細胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約11%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約21%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約31%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少24小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。 在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約3%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約5%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約7%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約9%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約11 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約21 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約沈％的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約31 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。 在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約2%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約3%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約4%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約5%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約6%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約7%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約8%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約9%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約10%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約11 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約12%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約13%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約14%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約15%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約16%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約17%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約18%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約19%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約20%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約21 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約22%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約23%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約25%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約27%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約30%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約31 %的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約32%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約33%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約34%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約35%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約40%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約45%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約50%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約55%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約60%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約65%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約70%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約75%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約80%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的 ⑶34+細胞群后，至少約85%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少 72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，至少約90%的⑶34+CXCR-4+ 細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，至少約95%的⑶34+CXCR-4+細胞的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，⑶34+CXCR-4+細胞的至少平均約17%的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少M小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的⑶34+細胞群后，⑶34+CXCR-4+細胞的至少平均約17%的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少48小時。在另一種實施方案中，在獲得富集的CD34+細胞群后，CD34+CXCR-4+細胞的至少平均約17%的CXCR-4介導的趨化活性得以保持至少72小時。在另一種實施方案中，趨化性造血干細胞產物中的⑶34+CXCR-4+細胞維持至少約2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。本發(fā)明的藥物組合物還包含濃度為梗死區(qū)灌注改善組合物體積至少10%的血清。 在一種實施方案中，血清是自體的。在另一種實施方案中，血清是合成的或重組血清。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的至少約10%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約15%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約20%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約21%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約 22%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約23%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約25%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約沈％。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約27%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是， 作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約觀％。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約四％。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的至少約30%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約31%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約32%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約33%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約 34%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約35%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約36%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約37%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約38%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約39%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是， 作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約40%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約45%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約50%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約55%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約60%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約65%。在另一種實施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約70%。在另一種實施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約75%。在另一種實施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的至少約80%。在另一種實施方案中，存在于梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約85%。在另一種實施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約 90%。在另一種實施方案中，存在于該組合物中的血清的最小濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的至少約95%。 在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約100%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約95%。 在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達的約90%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約85%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的約80%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約75%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約70%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約65%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約60%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約55%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約50%。 在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/100cc組合物終體積表達的約45%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約40%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的約39%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約38%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約37%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約36%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約35%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約34%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約33%。 在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達的約32%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約31%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的約30%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約四％。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約觀％。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約27%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約沈％。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約25%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約對％。 在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為 ml/lOOcc組合物終體積表達的約23%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約22%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc 組合物終體積表達的約21%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約20%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約15%。在另一種實施方案中，存在于本發(fā)明梗死區(qū)灌注改善組合物中的血清的最大濃度是，作為ml/lOOcc組合物終體積表達的約10%。在一些實施方案中，可用賦形劑、載體或運載體(包括但不限于溶劑)配制梗死區(qū)灌注改善組合物。本文所使用的術語“賦形劑”、“載體”或“運載體”是指適于本文描述的趨化性造血干細胞產物的配制和施用的載體材料。在本文中有用的載體和運載體包括本領域公知的、無毒且不與其他成分相互作用的任何此類材料。本文所使用的短語“藥學上可接受的載體”是指對本發(fā)明組合物的配制和施用有用的任何基本上無毒的載體，本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物在其中將保持穩(wěn)定和生物可利用。藥學上可接受的載體必須具有足夠高的純度和足夠低的毒性，以使其適合施用到所治療的哺乳動物。其還應當保持有效物質的穩(wěn)定性和生物利用度。藥學上可接受的載體可以是液體或固體，并且根據(jù)頭腦計劃的施用方式進行選擇，從而當與活性劑和給定組合物的其他成分結合時，提供期望的體積和一致性等。例如，藥學上可接受的載體可以是，但不限于粘結劑(例如，預膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素，等)、填充劑(例如，乳糖及其他糖、微晶纖維素、果膠、明膠、硫酸鈣、乙基纖維素、聚丙烯酸酯、磷酸氫鈣，等)、潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石、硅石、膠態(tài)二氧化硅、硬脂酸、硬脂酸金屬鹽、氫化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸鈉、醋酸鈉，等)、崩解劑(例如，淀粉、淀粉羥基乙酸鈉，等)，或潤濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉，等)。其他可用于本發(fā)明組合物的合適藥學上可接受的載體包括，但不限于水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、直鏈淀粉、硬脂酸鎂、滑石、 硅酸、粘性石蠟、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等。此類載體溶液還可含有緩沖劑、稀釋劑和其他合適的添加劑。本文所使用的術語“緩沖劑”是指這樣的溶液或液體，其化學組成中和酸或堿，使得沒有PH的顯著改變。本發(fā)明設想的緩沖劑的實例包括但不限于杜伯科氏磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、林格氏溶液、5%葡萄糖水溶液(D5W)、和正常/生理鹽水(0.9% NaCl) ο在一些實施方案中，輸注溶液與受治療者組織等滲。在一些實施方案中，輸注溶液與受治療者組織相比是高滲的。用于腸胃外施用的本發(fā)明組合物可包括諸如以下的藥學上可接受的載體無菌水溶液、在一般溶劑諸如乙醇中的非水溶液、或在液體油基中的溶液。
在一些實施方案中，本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善組合物的載體可包括釋放劑，諸如持續(xù)釋放或延遲釋放載體。在此類實施方案中，載體可以是能夠持續(xù)或延緩釋放有效物質的任何材料，以提供更有效的施用，例如，導致組合物的更低頻率和/或降低的劑量、改進處理的方便性、以及擴展或延遲對正在接受治療、預防或促進的疾病、障礙、病癥、綜合征等的效果。此類載體的非限制性例子包括天然及合成的聚合物的脂質體、微海綿體、微球體或微膠囊等。脂質體可由各種磷脂如膽固醇、硬脂酰胺或磷脂酰膽堿形成?？勺鳛闊o菌可注射水或油混懸液的形式腸胃外地施用本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善組合物。本文所使用的術語“腸胃外”或“腸胃外地”是指通過注射的方式引入體內(例如， 通過注射施用)，包括但不限于輸注技術。通過適于將流體組合物(即，能夠流動的組合物) 遞送至所選擇的解剖結構的球囊導管方式將本發(fā)明的包含趨化性造血干細胞產物的梗死區(qū)灌注改善組合物遞送至受治療者。本發(fā)明的無菌梗死區(qū)灌注改善組合物可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌溶液或混懸劑。通常認為溶液是兩種或多種物質的均質混合物；它通常是液體， 盡管并非是必要的。在溶液中，溶質(或所溶解的物質)的分子均勻地分散于溶劑分子之間?；鞈覄┦欠稚Ⅲw(混合物)，其中被精細分離的物質與另一種物質結合，前者被如此精細地分離和混合以至于它不會迅速沉淀出來。在日常生活中，最常見的混懸劑是固體分散在液體水中的那些。在可以采用、可接受的的運載體和溶劑中包括水、林格液、以及等滲氯化鈉(鹽)溶液。在一些實施方案中，應用高滲溶液。此外，通常應用無菌不揮發(fā)油作為溶劑或混懸介質。對于腸胃外應用，尤其合適的運載體由溶液(優(yōu)選油或水溶液)、以及混懸液、乳劑或埋植劑組成。水混懸劑可含有增加該混懸劑粘度的物質，例如包括羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。本發(fā)明的其他梗死區(qū)灌注改善組合物可容易地應用本領域公知的技術制備，諸如描述于 Remington' s Pharmaceutical Sciences,第 18 或 19 版，由賓夕法尼亞州 Easton 市Mack Publishing Company出版，其在此通過引用并入本文。在本文中使用的術語“治療有效”、“梗死區(qū)改善量”、“灌注改善量”或“藥學有效量”是指在其施用于患者后產生治療或有益效果的本發(fā)明組合物的量。梗死區(qū)改善、灌注改善、治療、或藥學有效可以是治愈、最小化、預防或改善疾病或病癥，或可以具有任何其他的梗死區(qū)改善、灌注改善、治療或藥學有益效果。選擇物質的濃度，從而使其發(fā)揮梗死區(qū)改善、 灌注改善、治療或藥學效果，但是在醫(yī)生范圍和合理的判斷內足夠低以避免顯著的副作用。 組合物的有效量可隨著所治療的生物受治療者的年齡和生理狀況，病癥的嚴重程度，治療的持續(xù)時間，并行治療的性質，輸注的時間，所應用的特定化合物、組合物或其他有效成分， 所使用的具體載體等多種因素而不同。通過確定誘發(fā)給定強度的劑量單位(意思是使用單位)中的劑量(下文稱為“單位劑量”)，本領域技術人員可確定本發(fā)明組合物的藥學有效量。術語“劑量-強度關系”是指個體接受者中的作用強度與劑量相關的方式。作用強度通常指定為最大強度的50%。相應的劑量稱為50%有效劑量或個體ED5tlt5術語“個體”的使用是將本文所使用的基于作用強度的ED5tl區(qū)別于從群體反應數(shù)據(jù)的頻率確定的半數(shù)有效劑量，也縮稱ED5tlt5本文所使用的“功效”是指本發(fā)明組合物達到期望反應的性質，以及“最大效果”是指可達到的最大效果。對治療特定障礙或病癥有效的本發(fā)明藥物組合物中的趨化性造血干細胞產物的用量將取決于障礙或病癥的本性，并可通過標準的臨床技術確定(例如，參見，Goodman和Gilman 的 THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Joel G. Harman, Lee E.Limbird，編輯；McGraw Hill,紐約，2001 ;THE PHYSICIAN' S DESK REFERENCE, Medical Economics Company，he.，新澤西州 Oradell 市，1995 ；以及 DRUG FACTS AND COMPARISONS, FACTS AND COMPARISONS, INC.，密蘇里州圣路易斯市，1993)。在本發(fā)明制劑中應用的精確劑量還取決于施用途徑以及疾病或障礙的嚴重性，并且應當根據(jù)醫(yī)師的判斷和每個受治療者的情況確定。預期受治療者可從本發(fā)明藥物組合物的多次施用中收益。在另一種實施方案中，以醫(yī)生的判斷腸胃外施用的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物每劑量單位含有至少IOx IO6個⑶34+造血干細胞，其含有至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的⑶34+細胞的亞群。在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的梗死區(qū)灌注改善藥物組合物還進一步可包含一種或多種相容有效成分，其在由本發(fā)明分離的趨化性造血干細胞產物提供的藥物效果之外，還給該梗死區(qū)灌注改善藥物組合物提供另一藥物效果。本文所使用的“相容”的意思是此組合物的有效成分能夠以此種方式彼此結合，從而使得在正常使用條件下沒有會實質性地減少每種有效成分或該組合物的功效的相互作用。在一些實施方案中，聯(lián)合治療包括給有需要的受治療者施用梗死區(qū)灌注改善藥物組合物，其包含與選自以下組的相容劑相結合的本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物，所述組由血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑或肌力藥、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。在一些實施方案中，酪氨酸激酶受體激動劑是神經調節(jié)蛋白1。神經調節(jié)蛋白 1 (NRGl)是表皮生長因子受體家族的酪氨酸激酶受體的激動劑，由ErbBl、2、3和4組成。 (Fuller，SJ，等，J. MoL Cell Cariol. 44 :831-54 (2008)) NRGl 與 Erb4 的結合升高其激酶活性，并且導致與erbB2的異質二聚化或與Erb4的同源二聚化，以及刺激細胞內細胞轉導途徑。同上。NFRGl受體亞單位ErbB2和ErbB4也在分化的心肌細胞中表達。同上。最近顯示在小鼠中，NRGl通過誘導分化的心肌細胞離開增殖靜止期，從而誘導分化的單核心肌細胞增殖。Bersell，等(Bersell，K.等，Cell 138:257-70(2009))。未分化的干細胞和祖細胞對這一增殖沒有貢獻。(同上)。應用小鼠模型，其中永久結扎兩個月大小鼠的冠狀動脈左前降支(LAD)，并在一周后每天一次施用NRGl共施用12周，顯示施用NRGl 12周導致心肌功能的持續(xù)改善，通過射血分數(shù)、縮小的梗死疤痕大小以及心肌細胞肥大的減弱來確定。 (同上)。在急性心肌梗死后，除了作為缺血結果的壞死細胞死亡之外，進行性凋亡細胞死亡和心肌細胞冬眠共同導致心功能的減弱，其可能隨時間惡化并且最終引起重大的不利心臟事件。一旦喪失，心肌細胞不能顯著地再生以恢復心功能。心肌細胞的碳14年齡測定顯示心肌的再生能力低于每年 1% (Bergman 0. Science. 2009 ；324 :98-101)。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物還包含約0.5%至約5%的白蛋白。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約0. 5%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約0. 75%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1.0%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1.25%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1.5%。在一些實施方案中， 白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1.75%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約2.0%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約2.5%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為1111/100(^組合物體積表達的約2.75(%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3.0%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3.5%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約4.0%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約4.5%。在一些實施方案中，白蛋白的最小量是作為 ml/100cc組合物體積表達的約5. 0%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約5.0%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc 組合物體積表達的約4. 75%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為 ml/100cc組合物體積表達的約4. 5%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約4. 25%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約4. 0%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3. 75%。在一些實施方案中， 本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3. 5%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3. 25%。 本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約3. 0%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約2. 75%。 在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約2.0%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1.75%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc 組合物體積表達的約1.5%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為 ml/lOOcc組合物體積表達的約1.25%。在一些實施方案中，本發(fā)明組合物中白蛋白的最大量是作為ml/lOOcc組合物體積表達的約1 %。在一些實施方案中，該白蛋白是人白蛋白。 在一些實施方案中，白蛋白是重組人白蛋白。本發(fā)明的方法在另一方面中，本發(fā)明提供了制備包含趨化性造血干細胞產物的用于治療有需要的受治療者的梗死區(qū)灌注改善藥物組合物的方法。該方法包含步驟(1)在無菌條件下通過趨化性細胞獲得方法從受治療者體內獲得包含潛能⑶34+ 細胞富集群的制備物；(2)從該制備物無菌純化含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的潛能⑶34+細胞；(3)無菌配制該純化的潛能⑶34+細胞，以形成趨化性造血干細胞產物；(4)無菌配制該含有具有趨化活性的潛能⑶34+CXCR-4+細胞亞群的趨化性造血干細胞產物，以形成藥物組合物；(5)評估該藥物組合物的無菌度；
(6)釋放合格的無菌藥物組合物，用于輸注至受治療者；(7)將治療有效量的藥物組合物載入遞送裝置；以及(8)任選地將該含有治療有效量的包含趨化性造血干細胞產物的無菌藥物組合物的遞送裝置運輸至心導管插入術場所，用于輸注至受治療者。在一種實施方案中，在完成獲得步驟(1)后約12至約M小時開始步驟O)。在另一種實施方案中，只有在完成獲得步驟(1)后約48至約72小時將無菌配制的細胞產物輸注給受治療者，才要進行釋放步驟(7)。在另一種實施方案中，在完成獲得步驟(1)后約12 至約M小時內開始步驟O)，并且只有在完成獲得步驟(1)后約48至約72小時內將無菌配制的細胞產物輸注給受治療者，才要進行釋放步驟(6)。在一種實施方案中，步驟( ，即評估該藥物組合物的無菌度的步驟，還包含步驟 (i)離心包含有效⑶34+CXCR-4+細胞的趨化性造血干細胞產物，以形成細胞沉淀和上清液， 該細胞沉淀包含有效CD34+CXCR-4+細胞；(ii)在不擾動細胞沉淀的情況下無菌移除上清液，以及(iii)分析該上清液是否被微生物污染，從此確定細胞沉淀的無菌度，而不會耗費其細胞含量。在一種實施方案中，在步驟(a)中，該趨化性細胞采集方法是小量骨髓采集技術， 用于在無菌條件下從受治療者的骨髓獲得包含潛能CD34+細胞富集群的制備物。對于骨髓收集技術，步驟(a)的方法進一步包括步驟(i)在從受治療者收集骨髓之前，用肝素預加載收集注射器；(ii)應用該收集注射器和小量骨髓采集技術從受治療者左后髂嵴和右后髂嵴抽出骨髓，從而形成收集的骨髓；以及(iii)將該收集的骨髓注入收集袋中。在一種實施方案中，步驟(i)中的收集注射器以及步驟(iii)中的收集袋含有無防腐劑的肝素化溶液，其包含0. 9%生理鹽水。在肝素化鹽水溶液中肝素的終濃度為約20單位/ml至約25單位 /ml ο任選地，在該方法的一種實施方案中，將收集的骨髓運輸至加工場所，該加工場所不同于在其中收集骨髓的場所。在一種實施方案中，將該收集的骨髓運輸至加工場所的方法包括步驟(a)將收集的骨髓置于收集袋中；(b)將該收集袋置于第二袋中；(c)將該含有收集袋的第二袋置于運輸容器中，所述運輸容器包含含有冷凍濕冰的內部腔室，以及至少一層包裝紙(bubble wrap) ； (d)將溫度標簽監(jiān)測器固定在該運輸容器中的內部腔室； (e)密封該運輸容器；以及(f)將該運輸容器運送至加工場所。在另一方面中，本發(fā)明提供了一種在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中治療或修復梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過導管腸胃外地施用無菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，所述富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能CD34+細胞亞群；(ii)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)，以及(iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；其中，當通過該導管并在體外測試時，在含有表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群中至少 70%的細胞是CD34+細胞，以及其中在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的 CD34+細胞富集群后至少約M小時，當通過該導管并在體外測試時，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持該CXCR-4 介導的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；以及(b)在一個梗死區(qū)相對于對照改善灌注，其中施用步驟(a)發(fā)生在一個或多個輸注日期，以及所述第一輸注日期包含由第一時間和第二時間定義的特定時間間隔，其中該第一時間是梗死區(qū)中峰值炎癥細胞因子級聯(lián)產生之后，以及第二時間是在梗死區(qū)中形成心肌疤痕之前。根據(jù)一種實施方案，該治療有效量的趨化性造血干細胞產物包含至少15x IO6個分離的自體⑶；34+造血干細胞富集群，其含有至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4 介導的趨化活性的潛能細胞亞群。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4 介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落，以及(b) 在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2% 的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。根據(jù)另一種實施方案，該含有表達CXCR-4且具有 CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落， 以及(b)在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。根據(jù)另一種實施方案，該表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群，在從受治療者體內獲得該含有在(a)中表達 CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少24小時。根據(jù)一些實施方案，所述任選的第二治療劑選自由血管緊張素轉化酶抑制劑、β 阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、 纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成的組。根據(jù)一些實施方案，酪氨酸激酶受體激動劑是神經調節(jié)蛋白1。根據(jù)一些實施方案，所述梗死區(qū)損傷是急性心肌梗死后心肌功能的進行性下降。根據(jù)另一種實施方案，該方法比成分⑴加上(ii)或單獨的成分(iii)更能減少至少一種梗死區(qū)損傷。根據(jù)一些實施方案，該梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。根據(jù)一些實施方案，該梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。根據(jù)一些實施方案，該梗死區(qū)損傷包括由急性心肌梗死導致的心肌功能的進行性下降。根據(jù)一些實施方案，與對照相比較，該方法增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。根據(jù)一些實施方案，與對照相比較，該方法增加對至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)中冬眠心肌的灌注。 根據(jù)一些實施方案，相對于對照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍區(qū)的灌注不足。根據(jù)一些實施方案，相對于對照，該梗死區(qū)損傷包括梗死周圍區(qū)中的心肌冬眠。根據(jù)一些實施方案，與對照相比較，該方法改善梗死區(qū)微血管血流。根據(jù)一些實施方案，與對照相比較，該方法減少梗死面積。根據(jù)一些實施方案，與對照相比較，該方法減少梗死量。根據(jù)本發(fā)明的一種實施方案，有需要的受治療者是血運重建的心肌梗死患者。在這一實施方案中使用的“血運重建”是指成功地放置了支架。應用非實驗室測試、心導管插入術、炎癥細胞因子測量、以及心臟生物標志物測量對例如冠狀動脈功能不全的臨床評估可用于確定根據(jù)本發(fā)明的方法施用藥物組合物的合適時間。在一些實施方案中，檢測峰值炎癥細胞因子級聯(lián)產生使得能夠將施用制定在對具體患者最重要的窗口。在一些實施方案中，通過測量血漿和/或尿液中的合適細胞因子的水平從而確定峰值炎癥細胞因子級聯(lián)產生。在其他實施方案中，免疫化學地測量合適細胞因子的水平，例如通過夾層酶免疫測試法(sandwich enzyme immunoassay)、通過酶聯(lián)免疫吸附測試法(ELISA)或通過多珠試劑盒。根據(jù)一種實施方案，在炎癥細胞基因劑量產物峰值之后的第一輸注日期將組合物施用受治療者。在一些實施方案中，在梗死后約5天至約14天的第一輸注日期將組合物施用于血運重建的心肌梗死患者。在第一輸注日期將組合物施用于血運重建的心肌梗死患者的最小時間是約5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。在第一輸注日期施用組合物的最大時間是約 14、12、11、10、9、8、7、6 或 5 天。根據(jù)一些實施方案，在含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能 ⑶34+細胞亞群的⑶34+細胞富集群中⑶34+細胞的最小數(shù)量是提供足夠數(shù)量的表達CXCR-4 且具有CXCR-4介導的運動性的潛能CD34+細胞以產生梗死區(qū)灌注改善效果的細胞數(shù)量。因此，在其中例如可通過選擇和富集CXCR-4+運動細胞從而增加CXCR-4的表達和CXCR-4介導的運動性的一些實施方案中，本發(fā)明預期可需要更少數(shù)量的CD34+細胞以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少Ix IO5個分離的自體⑶34+造血干細胞的富集群提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少切IO5個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少9x IO5個分離的自體⑶34+造血干細胞的提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少Ix IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少& IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少3x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少4x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少切IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少6x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少7x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少8x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些此類實施方案，至少9x IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞提供了足夠數(shù)量的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的運動性的潛能⑶34+細胞，以產生梗死區(qū)灌注改善效果。根據(jù)一些實施方案，在第二輸注日期施用梗死區(qū)灌注改善量的含有至少0. 5x IO6 個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群的⑶34+細胞，其包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，所述富集群含有0. IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少5天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少6天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少7天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少8天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少9天。根據(jù)一些此類實施方案， 該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少10天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少11天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少12天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少13天。 根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少14天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少15天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少16天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少17天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少18天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少19天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少20天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少21天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少22天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少23天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少M 天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少25天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少26天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少27天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少觀天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少四天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少30天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少31天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少32天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少33天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少34天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少 35天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少36天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少37天。根據(jù)一些此類實施方案， 該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少38天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少39天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少40天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少45天。 根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少50天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少陽天。根據(jù)一些此類實施方案，該第二輸注日期是第一輸注日期之后至少60天。 根據(jù)一些實施方案，在第三輸注日期施用梗死區(qū)灌注改善量的趨化造血干細胞產物，其包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，所述富集群含有0. IO6 個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群。根據(jù)一些此類實施方案， 該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少30天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少31天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少32天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少33天。 根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少34天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少35天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少36天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少37天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少38天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少39天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少40天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少45天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少50天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少55天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少60 天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少61天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少62天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少63天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少64天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少65天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少66天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少67天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少68天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少69天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少70天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少 75天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少80天。根據(jù)一些此類實施方案，該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少85天。根據(jù)一些此類實施方案， 該第三輸注日期是第一輸注日期之后至少90天。在一些實施方案中，用于將本發(fā)明的藥物組合物遞送至有需要的受治療者體內的遞送裝置包含輸注注射器、沖洗注射器、四通旋塞閥、以及球囊導管。在一種實施方案中， 該遞送裝置包含(a)與無菌四通旋塞閥連接的輸注設備，其含有包含趨化性造血干細胞產物的藥物組合物；(b)與該無菌四通旋塞閥連接的沖洗設備，該沖洗設備含有沖洗溶液；以及(c)通過該無菌四通旋塞閥與該遞送裝置連接的導管。根據(jù)一種實施方案，該輸注設備是由任何合適材料制得的注射器。合適四通旋塞閥的本體和把手可由相同或不同的材料制得。合適的四通旋塞閥的實例包括但不限于具有聚碳酸酯本體/聚碳酸酯把手的旋塞閥， 具有聚乙烯本體/聚乙烯把手的旋塞閥，具有聚碳酸酯本體/聚乙烯把手的旋塞閥，或一次性旋塞閥。在另一種實施方案中，還有一設備與該旋塞閥連接以調節(jié)施加于遞送溶液上的壓力。在一些實施方案中，將集成的沖洗裝置或注射器與該旋塞閥連接。在一種實施方案中，該導管是球囊導管。術語“球囊導管”是指一類“軟”的薄的可彎曲管，其在其頂部具有可膨脹的“球囊”，所述球囊在導管插入術期間用于擴大體內狹窄的開口或通道。放置泄氣的球囊導管，使其膨脹以完成需要的步驟，然后再次泄氣以便移出。本發(fā)明的包含潛能⑶34+CXCR-4+細胞的趨化性造血干細胞產物的生存力和潛在功效取決于當細胞通過導管時維持它們的潛能。在本發(fā)明方法中使用的導管具有至少 0. 36mm的內直徑。具有至少0. 36mm內直徑的任何類型的導管在遞送本發(fā)明的藥物組合物中均可能是有效的。
例如，使得通過冠狀動脈系統(tǒng)的血流排放變慢的流量控制導管可以給細胞時間以通過血管壁并進入組織。在一些實施方案中，該導管是球囊導管。例如，但不限于，已驗證了以下導管可從 Cordis、Boston Scientific、Medtronic 和 Guidant 獲得的、具有約 0. 36mm 內直徑的球囊擴張導管(參見表1)。表1 已證實可用于通過IRA輸灃所詵擇的⑶3驢細胞的球囊導管
生產商名稱和型號球嚢直徑腔內直徑CordisRaptor OTW 579-13015 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)Boston ScientificOTW Maverick 20620-153015 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)MedtronicOTW Sprinter SPR3015W15 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)GuidantVoyager OTW 1009443-1515 mm χ 3.0 mm0.36 mm (0.14 in.)此外，還描述了這樣的導管，其具有與球囊相鄰的液體遞送出口，從而使得該球囊可抗血管壁而膨脹，從而從與球囊相反的血流動力學將遞送位點與該出口分離，其可能位于球囊遠端。此外，已公開了這樣的球囊導管，其具有在位于球囊導管近側的側孔中終結的腔，這些球囊導管可一般地稱為“球囊/遞送”導管，盡管具體的文獻可能使用不同的描述語。參見，例如firman的美國專利5，415，636號，其在此通過引用并入本文。在一些實施方案中，治療或修復在由天然疾病過程導致的急性心肌梗死后的梗死區(qū)損傷的方法包括通過球囊導管血管內地(意思是在血管內)將梗死區(qū)灌注改善藥物組合物遞送至梗死的動脈中。在一些實施方案中，在血管修復術之后，將遞送球囊導管通過股動脈插入需要的冠狀動脈中，諸如冠狀動脈左前降支。一些醫(yī)學病癥可能不僅需要球囊導管而且也需要流體遞送導管兩者以幫助治療。在一些實施方案中，使用導管將細胞直接注射至心肌。在提供數(shù)值范圍的情況下，除非文中另外明確指明，應當理解為在該范圍及任一其他所描述范圍的上限和下限之間的每一個中間值，到下限單位的十分之一，或在所描述范圍內的中間值均包括在本發(fā)明的范圍內。被獨立地包括在這些較小范圍內的這些范圍的上限和下限也都包括在本發(fā)明的范圍內，在所描述的范圍內可以有任何明確排除的界限。 當所描述的范圍包括一個或者兩個界限時，排除這些所包括的界限的兩者中任一個的范圍也包括在本發(fā)明中。除非另有說明，在本文中使用的所有技術和科學術語如本發(fā)明所屬領域的普通技術人員通常理解的那樣，具有相同的含義。盡管任何與本文中所述的那些類似或等同的方法和材料也可用在本發(fā)明的實施和試驗中，但現(xiàn)在對優(yōu)選的方法和材料進行描述。在本文中所提及的所有公開出版物通過引用的方式并入本文，以結合引用的公開出版物披露和描述這些方法和/或材料。在本文和所附權利要求書中使用的單數(shù)形式“一”以及“該”包括復數(shù)個指示對象， 除非上下文明確地以其他方式指出。在本文中使用的所有技術和科學術語具有相同的含義。在本文中引用的每一個參考文獻均通過引用以其全文并入本文。本文中討論的公開出版物的提供僅是因為它們公開于本發(fā)明的申請日之前。本文中并沒有內容可理解為承認本發(fā)明由于在先發(fā)明而不能早于這樣的出版物。此外，所提供的
公開日也可能不同于需要獨立核實的實際
公開日。
實施例提出以下實施例，以便給本領域技術人員提供如何制備和使用本發(fā)明的完全的公開和描述，并且不旨在限制發(fā)明人所認為的其發(fā)明的范圍，而且它們也不代表以下實驗為所實施的全部或唯一的實驗。已努力地保證所使用的數(shù)值(例如，量、溫度等)的精確，但需要計及一些實驗誤差和偏差。除非另外指出，份數(shù)是按重量計的份數(shù)，分子量是重均分子量，溫度是攝氏度，以及壓力是或近似大氣壓。I期臨床試驗方案實施例1.合適受治療者的選擇具有暗示患心肌梗死的癥狀和臨床發(fā)現(xiàn)的受治療者/患者根據(jù)機構指南接受急診診斷和臨床管理。如果確認透壁(意思是穿過壁)性心肌梗死，則記錄首個癥狀的時間， 以及成功放置支架的時間。血運重建的受治療者根據(jù)機構指南接受恰當?shù)尼t(yī)療管理，以降低心室壁應力。在這一實施方案中使用的術語“血運重建”是指成功地放置支架。包括藥物洗脫支架(例如，紫杉醇或西羅莫司)在內的所有類型的支架均可用于梗死相關動脈的血運重建。應用球囊導管以輸注細胞產物的之前的研究稱，對于用于放置支架的參考血管直徑沒有限制。由于這一研究是用來將細胞產物分散至IRA循環(huán)中，并且試圖限制損傷非常小的血管的可能性，因此本發(fā)明要求在輸注本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物之前放置支架。與支架相關的藥物作用主要在該支架與血管壁接觸的部位發(fā)生。隨著球囊擴張， 有限的血液在細胞輸注期間流過支架，并且因此預期對趨化性造血干細胞產物中的CD34+ 細胞沒有顯著不利的藥物介導作用。此外，先前的臨床研究表明，在放置藥物洗脫支架后過 96小時，紫杉醇或西羅莫司的全血水平也低于檢測極限。因此，可以預料到，在所輸注的表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的⑶34+細胞將要遷移至此的心肌部位的組織水平是無關緊要的。參見，Sousa，J.等人，Circulation 107 :2274-79,2383-89(2003) 在血運重建期間，通過標準方法評估受治療者的心功能和灌注。心肌梗死后心功能的相關測量包括評估總體射血分數(shù)、心室容積、靜止灌注以及梗死面積。術語“射血分數(shù)”(“EF”)是指在收縮期間從心室排空的血液的百分數(shù)。更具體地說，其為每一次搏動射出的舒張期末容積的百分數(shù)，即，其為每搏量(SV)除以舒張期末容積(EDV)。在緊位于收縮之前的心室中的血液容量被稱為舒張期末容積，而在收縮結束時心室中剩余的血液容量被稱為收縮期末容積。舒張期末容積和收縮期末容積之間的差是每搏量，即每一次搏動射出的血液容量。在健康的70kg (IMlb)男性中，SV大約為70ml，并且左心室EDV是120ml，給出的射血分數(shù)是70/120，或0. 58(58% )。認為EF在55-60%的范圍內是正常的。在有限的限度內，右心室的射血分數(shù)(“RVEF”)通常等于左心室的射血分數(shù)(“LVEF，，)。心回波描記術、放射性核素掃描[例如，多門控采集掃描，其為評定心室、心腔的泵血功能和心臟收縮如何的核掃描]以及左心室造影術是左心室射血分數(shù)(“LVEF”)的容易利用且精確的測量手段。已利用心回波描記術，通過采用雙平面面積長度法確定收縮期末和舒張期末容積。在梗死后期間心功能的其他度量方法包括評估每搏量指數(shù)和周徑纖維縮短的速率。Strauer，等人，Circulation 106 :1913-18(2002) 每搏量(SV)是每次搏動左心室射出的血量，以每搏毫升數(shù)(ml/搏)計量。通過將SV除以體表面積以產生心搏指數(shù)(Si)，可根據(jù)患者的身體大小為SV加索引。對梗死心肌的修復的評估還包括應用鉈閃爍造影法評定梗死周圍區(qū)域灌注。同上。磁共振成像(MRI)是這一設定當中評估心功能和活力(梗死面積)的一種有用工具。參見 Yin，A，等人，Blood 90:5002-5012(1997)。在成功放置支架后的第二天，對受治療者進行研究合格性評估，在合適的情況下， 使其知情同意參與到研究中。出院前，對在成功放置支架前表現(xiàn)出癥狀不超過三C3)天的受治療者進行研究合格性的評估。對于發(fā)現(xiàn)符合合格標準(見后)的受治療者，使其知情同意參與。同意的受治療者在放置支架后不早于96小時進行研究進入心回波描記術。受治療者如果滿足以下條件則有資格繼續(xù)進行研究(i)根據(jù)心回波描記術，LVEF小于或等于 50%，以及(ii)在IRA中觀察到節(jié)段性心室壁異常。合格的受治療者立即完成基線心功能和灌注評定。具體地說，基線心功能包括在靜止時以及在低劑量多巴酚丁胺的情況下的經胸廓心回波描記術，以評估心功能，包括射血分數(shù)、收縮期末和舒張期末容積、以及壁運動評分指數(shù)和活力。心回波描記術。在放置支架后4天，采用心肌對比心回波描記術進行研究篩查，以識別具有左心室功能不良的患者 (心回波描記的射血分數(shù)< 50% )。心臟灌灃。在基線時及6個月后，在靜止狀態(tài)且在靜脈內注射腺苷之后，采用常規(guī)的锝(Tc-99m)塞斯米比(kstamibi)放射性核素掃描評估灌注。采用靜態(tài)單光子發(fā)射計算機化斷層成像(SPECT)作為靜態(tài)總嚴重性得分(RTSS)來判斷灌注缺損大小。應用Emory Cardiac Toolbox來進行圖像量化；評估使用17-段模型。核心審查實驗室通過對研究隊列不知情的解釋者來評估該灌注研究。以半定量的用語(是/否)來表達灌注的改善。將觀察到具有灌注改善的受治療者的百分比在劑量隊列中進行比較。MSI。在基線、3個月和6個月時，對所有入選的受治療者進行釓增強的心臟磁共振成像(MRI)，以評定左心室收縮期末和舒張期末容積(LVESV和LVEDV)、左心室射血分數(shù) (LVEF)以及梗死面積。受治療者在掃描期間接受釓對比。MRI掃描采用屏氣技術。如釓成像那樣進行穩(wěn)態(tài)進動成像，以獲得完全的和部分LV功能。應用AHA/A VV17-段模型報告左心室收縮和舒張期末容積、LVEF、LV舒張期末大小、梗死區(qū)收縮期和舒張期中的壁厚、以及梗死面積大小，其中梗死的透壁程度被報道為< 25 %、沈％ -50 %、51 % -75 %和> 76 %。核心審查實驗室通過對研究隊列不知情的解釋者來評估MRI。選擇用于這一研究的受治療者必須符合所有以下臨床標準(“包涵標準”) 年齡18-75 歲 符合ACC/AHA標準的急性ST段升高心肌梗死，具有在入院前3天內胸痛的癥狀。這些標準包括(在肢體導聯(lián)中，ST升高> 1mm，或者在兩個或多個心前區(qū)導聯(lián)中，ST升高> 2mm，以及升高的肌鈣蛋白、肌酸激酶MB (CPK MB)或其兩者的水平)，I、II或III級的紐約心臟病學會(NYHA)心臟衰竭分類(待記錄的)。 可進行經皮冠狀動脈介入術(PCI)； 可進行 MRI; 可進行單光子發(fā)射計算機斷層顯像(SPECT)成像； 在檢查了入院心回波描記術后能夠足以評估心臟參數(shù)的心回波描記術實驗室結論。 研究進入心回波描記術[放置支架后96至144小時{即，約4天至約6天}]， 根據(jù)心回波描記術LVEF小于或等于50%，以及在再灌注后通過心回波描記術在IRA循環(huán)中的節(jié)段性心室壁異常； 受治療者必須能夠提供知情的書面同意書，而且必須愿意參與所有要求的研究隨訪評定； 在骨髓采集的前一天，受治療者必須具有血紅蛋白含量(Hgb) > 10克/dL、白細胞計數(shù)(WBC) > 3500個細胞/mm3、血小板計數(shù)> 100，000個細胞/mm3，以及國際標準化比率(INR，凝血試驗)< 2.0 ； 在骨髓采集的7天之內，受治療者必須具有血清肌酸酐< 2. 5、總膽紅素 < 2. 0 ； 當在超過一個血管中存在疾病時，IRA和靶病變必須是已可以清楚辨認的； 成功地再灌注和冠狀動脈內放置支架，并且在血運重建后心肌梗死溶栓 (TIMI)2或3級血流，以及IRA具有< 20%的狹窄； 受治療者必須已經被認為適宜接受清醒鎮(zhèn)靜、小量骨髓采集以及用于趨化性造血干細胞產物輸注的第二次導管插入術； 必須記錄了所用支架的類型、插入的時間和日期；藥物洗脫支架僅限于紫杉醇或西羅莫司類型； 包括的受治療者必須具有至少一年的預期存活期，并且在血運重建后必須不患有多種血管疾病，或者不預期在研究進入的6個月內需要介入；滿足以下任意一個條件的受治療者是不合格的，并且從本研究中排除(“排除標準”) 受治療者不是經皮介入、清醒鎮(zhèn)靜、MRI、SPECT成像或小量骨髓采集的候選者； 有在血運重建前4天或更多天發(fā)生不能通過硝酸鹽緩解持續(xù)胸痛的病史； 再灌注梗死相關冠狀動脈失敗的受治療者，或放置支架失敗的受治療者； 在入院心回波描記術檢查后，心回波描記術實驗室的結論是該研究不足以評估心臟參數(shù)；
表現(xiàn)出心原性休克的受治療者(在采用血管升壓藥或主動脈內反搏法時收縮壓< 80)； 具有> 2mm的靶損傷側支，并且在血運重建后具有> 50%直徑狹窄的門口狹窄的受治療者； 不能接受阿司匹林、氯吡格雷或噻氯匹定的受治療者； 接受丙酮芐羥香豆素的受治療者必須具有小于或等于2的INR[術語INR是指 INR國際標準化比率，其為由世界衛(wèi)生組織(WHO)和國際血栓形成和止血委員會建立的系統(tǒng)，用于報告凝血(凝固)試驗的結果]； 具有嚴重主動脈狹窄的受治療者； 具有嚴重免疫缺陷狀態(tài)(例如，AIDS)的受治療者； 需要積極的醫(yī)療管理的肝硬化的受治療者； 具有需要積極療法的患惡性腫瘤(基底細胞皮膚癌除外)的受治療者； 具有有記錄的活潑醇和/或其他物質濫用的受治療者； 可能懷孕的女性，除非在小量骨髓采集的7天內妊娠試驗為陰性； 根據(jù)研究進入心回波描記術，具有超過50%射血分數(shù)的受治療者(放置支架后 96至144小時)； 在加索引程序后經歷少于三個月的計劃抗血小板療法的受治療者； 在血運重建后具有多血管疾病、在接下來的6個月期間需要隨后的計劃介入的受治療者； 參與正在進行的研究實驗的受治療者； 具有活性細菌感染、需要全身性抗生素的受治療者。在所計劃的小量骨髓采集和趨化性造血干細胞產物的輸注的前一天獲得心功能和心臟灌注的初始期評估(參見下文)。在初始期評估心功能和心臟灌注后的第二天進行小量骨髓采集(“MMH”)。實施例2.心導管插入術無菌準備和鋪巾在研究者獲得知情同意之后，將每一受治療者帶入心導管插入術實驗室。受治療者在心導管插入術實驗室接受無菌準備和鋪巾。心導管插入術應用右或左腹股溝通過標準技術獲得脈管通路。將護套置于股動脈或者右或左肱動脈。通過獲得右和左冠狀動脈的標準視野進行冠狀動脈造影檢查。獲得多個視圖，以識別之前放置支架的梗死相關動脈。所有受治療者在導管插入術期間根據(jù)操作規(guī)程接受標準藥物。實施例3 獲得可富集CD34+細胞的趨化性造血干細胞產物的獲得方法盡管可以想到任何適于獲得包含潛能⑶34+細胞的趨化性造血干細胞產物的獲得方法均在本發(fā)明的范圍之內，但是以下實施例描述了在本文中稱為小量骨髓采集技術的這樣一種方法。采集注射器的準備在骨髓采集之前，在無菌條件下準備40個IOcc注射器，這些注射器裝載約2ml無防腐劑的肝素化鹽水溶液(約100單位/ml至約125單位/ml，APP貨號42592B或等同物)。在從每一個袋子中移除IOcc至12. 5cc生理鹽水后，通過無菌端口將肝素注射到兩個 IOOml袋的無菌0. 9%生理鹽水溶液(“生理鹽水”，Hospira貨號7983-09或等同物)的每一個中，產生約100單位/ml (U/ml)至約125單位/ml (U/ml)的肝素終濃度。在無菌條件下將2ml無防腐劑的肝素溶液(約100U/ml至約125U/ml)裝載到這40個IOcc注射器的每一個中，然后加蓋并置于無菌袋中，用于運輸至采集場所。在如實施例1中詳細描述的那樣獲得書面知情同意后，受治療者接受骨髓采集準備。采用標準的機構程序和指南提供清醒鎮(zhèn)靜。在無菌條件下進行骨髓采集。本文所使用的術語“無菌條件”包括適當?shù)南礈欤约安杉t(yī)生和助手穿戴具有無菌面罩的手術服和手套。采集過程可在手術室外邊進行，該過程如下進行在消毒準備和鋪巾后，用利多卡因溶液，以每一嵴最少IOml的方式對每一髂嵴進行麻醉。麻醉區(qū)是直徑不超過IOcm的環(huán)形區(qū)。插入采集針頭，直到穿刺髂嵴。移除蓋帽和管心針，并將2ml骨髓采集至含有aiil 肝素溶液的IOml采集注射器中。然后，將注射器移除并置于無菌區(qū)域。在重新插入管心針后，輕微地向前推動采集針頭并隨后旋轉90°。此后，移除管心針，并將2ml附加的骨髓抽吸到從無菌區(qū)域取回的采集注射器中。這一過程重復兩次以上，直到該采集注射器含有8ml 骨髓，此時肝素化骨髓總共10ml，肝素終濃度為約20U/ml至約25U/ml。最后，將滿的采集注射器遞交給采集助手，并進行搖動，以及如下所述的那樣輸注到無菌采集袋中。采集醫(yī)生隨后采用之前用肝素溶液沖洗的其他采集針頭，并重復這一過程。如下所述地將滿的采集注射器輸注到無菌采集袋中。采集助手手持滿的采集注射器，并通過一個裝在袋子上的無菌接頭將該注射器排空至500ml采集袋中。然后，用肝素溶液沖洗采集針頭，并將其放回無菌區(qū)域。在一個髂嵴上重復該采集過程，直到收集了約19個注射器并倒入采集袋中。在另一髂嵴上重復相同的過程，直到另外大約19個注射器被充滿。從兩個髂嵴獲得總共38個 8ml吸出物(理想的是從每一髂嵴獲得19個)，得到在380ml終體積中采集的302ml骨髓， 肝素濃度為約20U/ml至約25U/ml。通過結扎連接管3次并隨后將末端夾緊在結上來密封采集袋。將袋子適當?shù)貥擞?“人骨髓采集物”，并在Mayo Clinical Risk Score (MCRS)病歷報告表上記錄采集過程的結果，包括采集的最終體積以及任何手術相關的并發(fā)癥。將完整的標簽固定在骨髓袋上。隨后，將該袋子置于待運送至處理實驗室的無菌運送袋中。實施例4 用于運輸?shù)墓撬璁a物的制備在一個實施方案中，如下所述地將采集的骨髓輸送至處理實驗室。當準備臨床場所以運送骨髓制備物時，給處理實驗室提供M小時的預先通告。處理實驗室對于在當天遞送至該處理實驗室、在盡可能最早的時間對獲取做好運輸安排。在收集骨髓之后，立即將該骨髓產物置于提供的運輸容器中。該運輸容器包括在底部的兩小塊冷凍濕冰以及在濕冰頂部的一片氣泡包裝膜(bubble wrap) 0將骨髓產物置于第二袋中，并將該第二袋置于氣泡包裝膜的頂部。將溫度特征監(jiān)測器(用于監(jiān)測內部溫度的傳感器)固定在盒子的內部。然后，在密封該運輸容器之前，將另一層氣泡包裝膜置于產物的頂部。實施例5 從采集的骨髓產物中選擇⑶34+細胞
從采集的骨髓產物中分離CD34+細胞。在一個實施方案中，如在美國專利 5，536，475,5，035，994,5，130，144,4，965，204,5，968，753,6，017，719,6，251，295, 5，980，887,6, 676，937、美國公開申請 No. 2003/0232050 和 Isolex 300 產品說明書(以上的每一篇文件均在此通過引用并入本文)中所描述的那樣，應用Isolex 300i磁細胞選擇系統(tǒng)(Baxter Healthcare Corp.貨號 4R9734)的抗 CD34 單克隆抗體(Mab)、Dynabeads M-450羊抗小鼠IgG、以及冊34+( )干細胞釋放劑成分分離⑶34+細胞。這一操作系統(tǒng)適于從根據(jù)本發(fā)明的骨髓分離CD34+細胞。在到達處理實驗室后，立即檢查收集的骨髓產物(在收集袋中)，并檢查袋子是否有任何泄漏。采集物應當可以自由流動，沒有視在團塊，并且應當沒有發(fā)生溶血。如果袋子的完整性以任何方式受到破壞，則不使用該采集物。在檢查后約12小時至約M小時內處理骨髓產物。獲得300ml或400ml轉移包裝容器，并將血漿轉移設備與該容器的取樣端口連接。將骨髓產物從收集袋中轉移至轉移包裝容器。通過顛倒該容器二十00)次，徹底地混合匯集的骨髓采集產物。然后，取樣該匯集的骨髓采集產物，以用于分析。根據(jù)一個實施方案，總共移除 2. Oml體積的產物，并且按如下所述地分樣0. 3ml用于一式兩份地應用血液分析儀進行全血細胞計數(shù)(CBC) ；0. 2ml被分配至75x100mm玻璃試管中，以用于通過革蘭氏染劑檢測革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌(革蘭氏染劑盒，VWR，貨號BB231401)；作為無菌檢查，將0. 6ml 分配至胰蛋白酶豆胨培養(yǎng)液(Tryptic Soy Broth(TSB)) (VWR，貨號四446_184)瓶中，用于需氧細菌生長測定；將0. 6ml分配至液態(tài)巰基乙酸培養(yǎng)基(FTM) (VWR貨號四446_138)瓶中，用于厭氧細菌生長測定；以及將0. 3ml用于流式分析CD34+細胞計數(shù)和細胞生存力。在電子秤上稱重收集物，并且記錄收集袋的適當?shù)钠ぶ?。骨髓產物的體積與產物重量之間的關系可表達為體積(ml)=[產物重量(gm)-袋子皮重(gm)] +1. 06 (gm/ml)(式 I)應用從CBC獲得的白細胞(WBC)計數(shù)，根據(jù)以下關系計算骨髓產物中總有核細胞 (TNC)的數(shù)量TNC = WBC/ μ 1 χ IOOOx 產物體積(ml) (式 2)根據(jù)以下關系計算骨髓產物中⑶34+細胞的個數(shù)骨髓產物中總的⑶34+細胞=⑶34+細胞數(shù)/ μ 1 χ 1，OOOx產物體積(ml) (式3)根據(jù)以下關系計算骨髓收集產物的紅細胞(RBC)體積RBC體積(ml)=產物體積(ml) χ紅細胞比容(% )/100 (式4)在最初計算RBC體積后，包裝骨髓產物并在20°C以IOOg離心20分鐘，制動設定為“關”。離心后，從離心機中小心地移出骨髓容器，并懸掛在具有朝下的取樣端口的100級生物安全櫥柜中。小心地將血漿轉移設備置于袋子的中間取樣端口中，并將RBC級分抽吸到注射器中。用其他新的注射器重復這一過程，直到將剩余的RBC從MMH中移除。從洗滌程序中制備MMH，該程序首先是在20°C以1，OOOg離心10分鐘，其中制動為“關”，隨后是血漿擠壓，所有均為在PBS基洗滌緩沖溶液[在PBS (無Ca++和Mg++)中1 %的HSA和0. 41 % 的檸檬酸鈉(w/v)](其在這一過程的早些時候制備)中的洗滌做準備。在添加洗滌緩沖液后，再次使細胞在20°C以1，OOOg離心10分鐘，其中制動處于“關”位置。在這次(最后)離心之后，應用血漿擠壓器擠壓細胞，移除上清液，并使用60ml注射器將150ml PBS洗滌溶液轉移至該產物袋中。通過人工按壓使壓緊的細胞重懸浮。在這一洗滌過程之后，如下所述地計算RBC減損和有核細胞(NC)回收。根據(jù)以下關系確定消耗了 RBC的骨髓產物中的 TNC 消耗了 RBC的產物中的總TNC =消耗了 RBC的產物中的WBC/μ 1 χ IOOOx RBC 消耗掉的MMH體積(ml)(式5)根據(jù)以下關系計算消耗了 RBC的產物的TNC回收率，其必須至少是初始產物計數(shù)的 80% TNC回收率=消耗了 RBC的產物的TNC+未經處理產物的TNC χ 100 % (式6)如上所述地計算總RBC ；在消耗了 RBC的產物中RBC體積應當< 20ml。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，根據(jù)以下處理步驟，應用Isolex 300 系統(tǒng)處理消耗了 RBC的產物或骨髓產物，其RBC體積< 20ml (i)自動地洗滌骨髓，以移除血小板；(ii)特異性地標記CD34陽性_4+)細胞，以通過與Isolex 300i CD34單克隆抗體(Mab)溫育而進行選擇；(iii)通過用緩沖溶液洗滌細胞懸液而移除未結合的試劑；(iv)通過Dynabeads M-450羊抗小鼠IgG捕獲致敏的CD34+細胞(意思是用 CD34Mab標記的CDiM+細胞)；(ν)采用選擇柱將已捕獲⑶34+細胞的磁標記Dynabeads與不想要的細胞分開，所述不想要的細胞被從選擇柱中洗脫并被收集在陰性級分袋中；以及(vi)PR34+干細胞釋放劑將⑶34+細胞從所述柱上釋放，并將該⑶34+細胞收集于終產物袋中。該系統(tǒng)進行數(shù)次洗滌步驟，將多數(shù)液體處置在緩沖液廢物袋中。如下地分析Isolex 選擇的⑶34+細胞級分，以確定WBC和⑶34+細胞產量。通過在終產物袋中混合細胞而確定⑶34陽性級分的體積；用手輕柔地按壓袋子，以確保細胞均勻地分布。將轉移設備插入終產物袋的取樣端口，并連接一個60ml注射器。將細胞懸液抽入注射器中(一次最多50ml)，以便測量總體積。使用3ml或5ml注射器，以通過轉移設備從終產物袋中移出2. Oml樣本，用于質量控制測試。樣本的等分體積以及對這些樣本進行的分析如之前所述，即CBC 0. 3ml ；革蘭氏染色0. 3ml ；CD34+細胞計數(shù)和細胞生存力0. 2mL·根據(jù)以下關系計算⑶34陽性級分的總TNC陽性級分的總TNC = WBC/ μ 1陽性級分χ IOOOx陽性級分體積(式7)根據(jù)以下關系計算陽性級分的TNC回收率，其必須少于初始產物計數(shù)的5% TNC回收率=陽性級分的總TNC+未經處理產物的總TNC xlOO % (式8)根據(jù)以下關系確定陽性級分中有活力的CD34+細胞的總數(shù)陽性級分中的總⑶34+細胞=終產物的⑶34+細胞數(shù)/ μ 1 χ 1，OOOx終產物體積 (ml) (式 9)根據(jù)以下關系計算陽性級分的CD34+細胞回收率
⑶34+細胞回收率=陽性級分中的總⑶34+細胞+未經處理產物的總⑶34+細胞 χ 100% (式 10)實施例6 制備選擇的⑶34+細胞用于輸入移出趨化性造血干細胞產物的樣本，以通過流式細胞計數(shù)法(用于⑶34+細胞計數(shù)和生存力)、革蘭氏染色和無菌度而進行用于測試WBC計數(shù)。CD34+細胞通過用抗 CD34 和抗 CD45 抗體(Beckman Coulter，PNIM3630)進行雙標記來表征⑶34 和⑶45 熒光性的流式細胞檢測分析來表征。通過排除那些攝取嵌入的DNA染料7-氨基放線菌素D(7AAD)的垂死細胞，可確定⑶34+細胞和⑶45+細胞的生存力。參見 Brocklebank AM, Sparrow RL. Cytometry. 2001 ；46 :254-261 (2001) ；Barnett D 等 A, Br. J Haematol. 106 :1059-1062(1999) ；Sutherland,等人，J Hematotherapy 5 :213-226(1996)，以及美國專利 No. 4，520，110,4, 859，582,5, 055，556 ；歐洲專利 No. 76. 695 ；加拿大專利 No. 1，179，942 (ΡΕ, APC)；美國專利 No. 4，876，190PerCP)；美國專利 No. 5，268，486、5，486，616、5，569，587、5，569，766、5，627，027(Cy)；美國專利 No. 4，714，680,4, 965，204,5, 035，994 (CD34)；美國專利 No. 5，776，709 (溶解 / 無洗滌方法)；美國專利No. 5，723，218和5，187，288 (TruCOUNTTubes)，這些文獻中的每一個的的全部內容均在此通過弓I用并入本文。任何流式細胞儀或等同設備均可用于進行CD34+細胞計數(shù)和生存力的分析。在一種實施方案中，處理實驗室使用BDFACSCalibur(TM)流式細胞儀，并且采用BD FACSComp(TM)軟件來用于儀器設定和監(jiān)測。預先安裝模板和一組圖例標記，以用于采樣和分析。在使用前，使試劑，即CD45FITC/CD;34PE、Stem-Count Fluorospheres、濃縮的氯化銨裂解液以及7AAD活力染料處于室溫。運用CD34+細胞對照作為陽性對照，以確認該儀器被調定用于分析CD34+細胞，并將結果與生產商預先確定的CD34百分比范圍進行比較。未處理的骨髓產物和經Isolex 處理的趨化性造血干細胞產物可通過許多不同的方法進行分析。在一種實施方案中，例如，如果樣本的WBC計數(shù)大于& IO7個細胞/ml， 則在獲得該樣本之后立即用鞘液稀釋該樣本，以達到約h IO7個WBC/ml的細胞計數(shù)。將 100 μ 1稀釋產物等分至兩個15x 100mm管中。應用微量移液管，將20 μ 1⑶45FITC/⑶34ΡΕ 和7-AAD活力染料試劑加入到每一個管中，并輕微地渦旋振蕩樣本。用鋁箔覆蓋這些管，并置于室溫下15至20分鐘。通過往每一管中加入1. 5ml Ix裂解液、輕微渦旋振蕩，從而裂解 RBC0將管在室溫下避光溫育10分鐘。將樣本在約2°C至約8°C (即，在冰浴上)的條件下避光儲存，直到進行數(shù)據(jù)采集。必須在添加裂解緩沖液后1小時內進行數(shù)據(jù)采集。在數(shù)據(jù)采集之前，通過豎轉式方寵轉(end-over-end rotation) (10 次)使 Stem-Count Fluorospheres 重懸浮。將100 μ 1 Fluorospheres添加到每一管中，并且輕微地渦旋振蕩，小心地不產生氣泡。根據(jù)以下關系計算產物中的CD34+細胞的絕對計數(shù)每微升產物中有活力的⑶34+細胞數(shù)=IXD34x FAC(式 11)其中，LCD34是活CD34+/總CD45+事件的平均數(shù)，“FAC”是Fluorospheres測試的濃度；以及F是Fluorosphere單態(tài)計數(shù)的平均數(shù)量。計算CD34+陽性級分的體積，以獲得所需給藥量需要的CD34+細胞的數(shù)量。需要的陽性級分體積(ml)被定義為
所要求的⑶34+細胞劑量+(陽性級分中每μ 1的總⑶34+細胞xl，000) (式⑵將合適數(shù)量的細胞分配至50ml圓錐管中，并以500g離心10分鐘。采用30ml血清移液管移除上清液并作為廢物處理，而在這一過程中小心操作以避免使在管底的細胞沉淀分散。將輸注溶液OOml)添加到CD34+細胞陽性級分管中，并且利用IOml血清移液管通過重復吸移來分散細胞。使重懸的細胞在500g離心10分鐘。使用30ml血清移液管(在避免擾亂細胞沉淀的情況下)將上清液/輸注溶液轉移至帶有“陽性部份上清液”標簽的 50ml錐形管中。渦旋振蕩含有該上清液的管，以使該溶液均勻。使用IOml血清移液管將 IOml勻化的上清液轉移回CD34+細胞陽性級分管中。上清液管中的剩余的IOml懸浮液用于無菌度測試(TSB(胰蛋白酶豆胨培養(yǎng)液)瓶和FTM(液態(tài)巰基乙酸鹽培養(yǎng)基)瓶各加入 5ml)。采取通過固定在IOml注射器(輸注注射器)上的鈍端針頭緩慢地抽吸數(shù)次的方式， 使CD34+細胞陽性級分中的細胞重懸。將細胞懸液吸入注射器，抽出任何氣泡，并將鈍端針頭取下。將該輸注注射器裝在四通旋塞閥的注射端口上。僅在其滿足以下標準的情況下，才釋放本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物以用于輸注
至少約 70%、75%、80%、85%、90% 或 95% 的 CD34+細胞純度； 所選擇的陽性級分的革蘭氏染色結果為陰性；·內毒素水平少于約0. 5內毒素單位/ml ； 該“趨化性造血干細胞產物”中有活力的CD34+細胞產量符合按照治療隊列的需求劑量； 根據(jù) 7-AAD，CD34+細胞至少約 70%、75%、80%、85%、90%或 95%是有活力的；· “陽性級分上清液”的USP無菌度結果陰性(14天后)；以及 在完成骨髓采集后約12至約M小時內開始骨髓⑶34+細胞選擇。在產物釋放以用于輸注之前，對干細胞產物進行無菌度評估，包括革蘭氏染色和內毒素。進行USP無菌度(細菌和真菌)培養(yǎng)，并將結果報告給首席研究員。在陽性USP 無菌度結果的情況下，立即通知受治療者和待命主治醫(yī)師，當可得到時提供該生物的鑒定和敏感性，并且由研究場所和發(fā)起人記錄適當?shù)目刮⑸镏委煹奈募约爸委熃Y果。在符合這些釋放標準后，釋放趨化性造血干細胞產物用于輸注，并進行包裝以便運輸至導管插入術場所。還將一份樣本送去進行試管內測試。只有在完成骨髓采集后12 至約M小時內開始選擇CD34+細胞，以及只有在完成骨髓采集后約48小時至72小時內輸注的情況下，才釋放產品。實施例7 配制包含⑶34+細胞的趨化性造血干細胞產物將趨化性造血干細胞產物配制在IOml補充有1 % HAS(人白蛋白US P，Alpha, 貨號521303)( “灌注溶液”)和至少20%自體血清的鹽水(0.9%氯化鈉，注射液，USP, Hospira，貨號7983-09)中。此外，在趨化性造血干細胞產物中可能存在痕量的在產物處理過程中使用并殘留的物質(未確定量)。這些物質包括=Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水-不含 Ca++、Mg++(D-PBS) (Baxter，貨號 EDR9865)、檸檬酸鈉(Baxter/Fenwal，貨號 4B7867)、羥乙基淀粉(Abbott Laboratories，貨號 0074-7248-03)、IVIg(Gammagard 靜脈內免疫球蛋白， Baxter，貨號060384)，以及Isolex 300i干細胞試劑盒(Baxter，貨號4R9734)中的試劑，包括抗CD34單克隆抗體、干細胞釋放劑和羊抗小鼠磁珠。實施例8.將趨化性造血干細胞產物運送至導管插入術場所在位于控制無菌環(huán)境(例如，最少為100，000級細胞處理場所；優(yōu)選10，000級，但這不是必須的)的100級生物安全櫥中將符合釋放標準的趨化性造血干細胞產物裝載入無菌IOcc注射器中。將該趨化性造血干細胞產物懸浮于補充有HAS的IOml PBS中，并根據(jù)釋放標準標記該容器。將該臨床實驗設計為具有四個劑量隊列，每一個隊列由5個受治療者組成。第一組接受約切IO6個⑶；34+細胞、第二組約IOx IO6個⑶；34+細胞、第三組約20x IO6個⑶34+細胞以及第四組約30x IO6個⑶34+細胞。將隊列2_4中沒有足夠的⑶34+細胞量以滿足所指定的隊列劑量的受治療者以其最大可能的CD34+細胞劑量添加到前一個隊列當中。將已裝載的灌注注射器及沖洗注射器與四通旋塞閥連接，并蓋上；施加安全罩以防止泄露。將該遞送裝置密封在雙層無菌袋中，并置于安全運輸盒中，用于運輸至心臟導管插入術場所。在釋放趨化性造血干細胞產物以及分配隊列后，將該趨化性造血干細胞產物運送至導管插入術場所。在一些實施方案中，血管內施用趨化性造血干細胞，即，通過直接的梗死相關動脈灌注。在一些實施方案中，腸胃外地將趨化性造血干細胞產物施用到心肌中。實施例9 冠脈內灌注趨化性造血干細胞產物在從細胞處理場所獲得已釋放趨化性造血干細胞產物用于灌注的通知后(參見上文)，安排受治療者/患者在與該趨化性造血干細胞產物到達相符的時間到達導管插入術場所。在即將灌注趨化性造血干細胞產物之前，進行心肌酶(腦利鈉肽(BNP)、肌鈣蛋白和CPK MB)、全血細胞計數(shù)、全化學檢查(腎和肝功能測試)以及EKG。記錄根據(jù)紐約心臟病學會(NYHA)功能分類系統(tǒng)的心臟衰竭期的臨床評估。在接收趨化性造血干細胞產物和用于灌注的最終質量保證釋放(通過傳真)后， 受治療者進行如上詳述的心臟導管插入術。實施冠狀動脈造影術，以評估梗死相關動脈的開放性(意思是開放，沒有阻塞)以及在心肌梗死(TIMI)血管造影流中的血栓溶解。將在導線之上的球囊導管放置于梗死相關動脈的支架部分?？墒褂镁哂兄辽偌s0. 36mm的內直徑、與趨化性造血干細胞產物相容的任何合適的球囊導管。在放置后，移除球囊導線。從運輸盒中移出趨化性造血干細胞產物遞送裝置。遞送裝置在無菌袋中，并且具有與灌注注射器(含有趨化性造血干細胞產物)和沖洗注射器相連的安全保護部件。該裝備由灌注注射器(含有IOml趨化性造血干細胞產物)和沖洗注射器(含有6ml沖洗溶液)組成，其中兩者均與無菌四通旋塞閥相連。輕微地振蕩整個遞送裝置，以將CD34+細胞重懸于灌注溶液中。沖洗注射器用于消除該裝置中的所有氣泡(以預防空氣栓塞)，并隨后通過旋塞閥將該遞送裝置與球囊擴張導管相連。通過如下進行的灌注將趨化性造血干細胞產物遞送至受治療者。首先，在沖洗注射器(6ml溶液)和球囊導管中央腔室之間的旋塞閥打開的狀態(tài)下，在15秒內將Iml沖洗溶液灌注(在移除防護之后)至導管的中央腔室。然后，在兩個大氣壓下使球囊在支架內膨脹，以避免對冠狀動脈內皮的損傷，然后調節(jié)旋塞閥以允許趨化性造血干細胞產物灌注至膨脹的球囊遠端(在移除防護之后)。在球囊膨脹后，用手在約30秒至約45秒的時間內(計時并記錄)從灌注注射器灌注約3cc至約kc。使球囊保持膨脹總共約2分鐘至約 3分鐘(包括灌注時間)，以允許CD34+細胞粘附以及避免回流。在灌注之間，使球囊保持收縮3分鐘，以允許恢復血流(再灌注)。一般地，需要3次灌注以清空灌注注射器。第三， 在完成灌注趨化性造血干細胞產物以及球囊縮小后，調節(jié)旋塞閥上的閥以允許從沖洗注射器填充灌注注射器。最后，使球囊膨脹(約2分鐘至約3分鐘)，在約30秒至約45秒的時間內灌注現(xiàn)在在灌注注射器中的細1沖洗溶液，以將任何殘留CD34+細胞從注射器和導管沖洗至IRA循環(huán)。然后移除導管。在灌注趨化性造血干細胞產物后第一個M小時期間進行灌注相關的缺血(血流不足)評估。獲得在約12小時和約M小時的EKG，約M小時中約每8小時的心肌酶(BNP、 肌鈣蛋白和CPK iffi)分析化學。在灌注趨化性造血干細胞產物后，立即進行心律失常評估 (24小時Holter監(jiān)測儀)。在灌注趨化性造血干細胞產物后，受治療者出院前，進行常規(guī)經胸廓心回波描記術以評估全部和部分的左心室功能。其他的安全性評估隨訪包括在施用產物后1周和2周的訪問。訪問評估包括全面的病史以及體格檢查、EKG、全血細胞計數(shù)、全化學檢查(腎和肝功能測試)、以及血清心臟標志物的測定(BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。在第1周和第2周記錄NYHA功能分級的臨床評估。在灌注趨化性造血干細胞產物后第4周，獲得EKG和心肌酶(BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。應用MHolter檢測儀評估心率失常。記錄NYHA功能分級的臨床評估。還進行了采用癥狀限制性Bruce方案的平板運動試驗(Treadmill exercise testing)。在灌注趨化性造血干細胞產物后約3個月和約6個月，進行M小時Halter監(jiān)測。 記錄NYHA功能分級的臨床評估。在灌注趨化性造血干細胞產物后約6個月，記錄采用Bruce 方案的癥狀限制性平板運動試驗。在灌注趨化性造血干細胞產物后約12個月的安全性評估包括全面的病史以及體格檢查、EKG、全血細胞計數(shù)、全化學檢查(腎和肝功能測試)、以及血清心臟標志物的測定 (BNP、肌鈣蛋白和CPK MB)。進行M小時Halter監(jiān)測，并記錄NYHA功能分級的臨床評估。統(tǒng)計分析在一些實施方案中，使用配對設計，其中每一受治療者作為其自身的對照。分析每一受治療者4個數(shù)值型心功能(即，心肌收縮力、收縮期末容量、舒張期末容量和灌注)在治療前后的差異。應用線性回歸分析評估增加的劑量水平的顯著性。零假設是回歸線的斜率(劑量水平作為自變量，以及“之后”減去“之前”的差作為因變量)等于O。對于劑量和心功能改善之間0. 5的高度相關，拒絕錯誤零假設的指數(shù)(power)是0. 05 α顯著水平上的 0. 68。應用該回歸線斜率的95%置信區(qū)間來評估劑量水平升高的醫(yī)學顯著性。如果回歸線的斜率沒有顯著地不同于0，但回歸線的截距不同于0，則合并所有的治療組，并進行配對 t-測試，以評估總治療效果。零假設是差異的平均值等于0。比較治療組的基線臨床和人口統(tǒng)計學特征，對連續(xù)變量應用Mudent t測試，以及對分類變量應用卡方檢驗。應用卡方檢驗比較治療組之間不利事件的發(fā)生率。為測量療效， 應用Mudent t測試，在治療組和對照組之間比較心功能和局部心肌灌注的基線及第6月隨訪值的配對差異。應用箱形圖(box plot graph)檢查治療組療效變化的分布。在事后分析(post-hoc analysis)中，通過結合對照和500萬個細胞隊列受治療者，并應用Student t測試將它們與1000萬個及1500萬個細胞隊列受治療者比較，從而檢查劑量閾值對治療反應的影響。另外，檢查細胞特征對結果測量值的影響。對于目標變量對中的每一個，計算Pearson積矩相關系數(shù)(r)與相應的ρ值。對于應用尾檢驗(tailed test)測試零假設，將1類(α )誤差設置為0. 05。由于實際上探究了次級端點的分析，沒有將用于多重比較的校正報告為α誤差。沒有對所分析的任何變量中的漏失值歸責，并且在撤出點對從研究中撤出的患者進行檢查。應用SAS版本9. 1 (Carey, North Carolina)執(zhí)行所有的統(tǒng)計程序和分析。對符合要求但沒有接受CD34+細胞的并行組(未治療對照)進行與治療組相同的評估，并且評估心功能/灌注的顯著改善。每一研究點改變治療組和未治療對照的自然增長量。應用拋硬幣法確定初始(治療或未治療)受治療者在每一位點的順序。比較治療組和未治療組之間的結果。核心實驗室對治療或未治療而言是不清楚的。進行評估以確定在臨床結果與細胞含量(CD34+)和/或體外集落生長(CFU-GM、 CFU-GEMM.BFU-E)、CXCR_4運動性、以及CXCR-4和/或VEGF表面抗原表達之間是否存在關聯(lián)。[參見圖4和以下討論]如計劃的那樣，總共20名受治療者接受本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物。有4個劑量隊列(約5x 106、約IOx 106、約20x IO6和約30x IO6個⑶34+細胞)。如果任何受治療者的趨化性造血干細胞產物對該指定的隊列而言是不夠的，則將該受治療者以其最大可能劑量重新分配到在前的隊列。具有少于切IO6個可用于灌注的CD34+細胞的受治療者從該研究中除去，不進行重復導管插入術并且不計為該20個受治療者研究組的一部分。此外，如果本發(fā)明的趨化性造血干細胞不滿足釋放標準，則該受治療者不接受細胞產物，并且不計為研究候選者，由下一個受治療者替換。在任何隊列劑量組中，如果受治療者經歷了認為(可能)是細胞產物灌注所導致的急性(意思是灌注后馬上至約7天)非預期毒性，劑量遞增停止，并將3名其他受治療者增加至這一劑量水平。如果沒有觀察到其他非預期毒性，則恢復劑量遞增；然而沒有超出總共20個受治療者。如果在該劑量水平發(fā)生了另一毒性，則將所有隨后的受治療者均增加至前一個更低的劑量水平。直到來自前一個劑量隊列的所有受治療者均完成產物施用兩周后的隨訪評估，才將本發(fā)明的趨化性造血干細胞產物施用至更高劑量隊列的受治療者。實施例10 初步研究的實驗結果進行了一系列初步的臨床前研究，以試圖實現(xiàn)以下目標(1)優(yōu)化小量骨髓采集(MMH)的生產過程；(2)評估內邊界MMH產物和外邊界造血干細胞產物的穩(wěn)定性；(3)評估導管的內徑容差和安全性；(4)評估細胞產物與計劃在該研究中使用的導管的相容性；(5)評估用最終造血細胞產物上清液代表最終造血細胞產物用于穩(wěn)定性測試的合適性。研究1 優(yōu)化小量骨髓采集(MMH)的生產過程評估了關鍵生產變量對于從代表性骨髓產物生產有活力的CD34+細胞的影響?？偣擦?6)位45歲以上(基于45-67的范圍)的供者志愿供者和三位30歲以下(基于21-28 的范圍)的志愿供者供者同意貢獻平均45ml (基于31ml-5^il)骨髓，并提供了對于該程序的書面知情同意書。所使用的骨髓抽吸技術與對于臨床級MMH(參見上文實施例3)實施的技術是相同的。如表2所示，從志愿供者收集的小量骨髓采集(“MMH”)衍生的細胞中有核細胞(NC)和CD34+細胞的細胞計數(shù)顯示出與年齡相關。
表 2 {共飾聽MMH捕麵赫白憤口向
權利要求
1.一種在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中治療或修復梗死區(qū)損傷的方法，該方法包括以下步驟(a)通過導管腸胃外地施用無菌藥物組合物至該受治療者，所述藥物組合物包含(i)作為第一治療劑的梗死區(qū)灌注改善量的未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體CD34+造血干細胞富集群，所述富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+ 細胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細胞富集群提供至少0. 5x IO6個表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞；( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)，以及 (iii)任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑；以及(b)在至少一個梗死區(qū)相對于對照改善灌注，其中，當通過該導管并在體外測試時，在含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的⑶34+細胞富集群中至少70%的細胞是⑶34+細胞，以及其中，在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群后至少約24小時，當通過該導管并在體外測試時，該含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持所述CXCR-4介導的趨化活性；(2)至少約70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落；其中，施用步驟(a)發(fā)生在一個或多個灌注日期，以及其中，第一灌注日期包含由第一時間和第二時間定義的特定時間間隔，其中，所述第一時間是在梗死區(qū)中峰值炎癥細胞因子級聯(lián)產生之后，以及第二時間是在梗死區(qū)中心肌疤痕形成之前。
2.根據(jù)權利要求1所述所述的方法，其中，所述梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有0.5x IO6個表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括該梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進行性下降。
6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括至少一個缺血的心肌組織梗死周圍區(qū)的灌注過少。
7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的心肌冬眠。
8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，進一步包括步驟在第二灌注日期施用冷凍并解凍的無菌藥物組合物的第二等分試樣，所述冷凍并解凍的第二等分試樣包含(i)冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有至少0.5x IO6個表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群；以及( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)；其中，當通過該導管并在體外測試時，在所述解凍該第二等分試樣后至少約24小時， 所述第二等分試樣冷凍并解凍的含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持CXCR-4介導的趨化活性；(2)含有至少70%CD34+細胞;(3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。
9.根據(jù)權利要求8所述的方法，其中，所述方法進一步包括步驟任選地在第三灌注日期施用冷凍并解凍的無菌藥物組合物的第三等分試樣，所述的第三等分試樣包含冷凍并解凍的分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，所述富集群含有至少0. 5x IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群；( )穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20% (ν/ν)；其中，當通過該導管并在體外測試時，在從解凍所述的第三等分試樣后至少約24小時，所述的第三等分試樣冷凍并解凍的含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群，(1)保持CXCR-4介導的趨化活性；(2)含有至少70%CD34+細胞;(3)至少70%有活力；以及(4)能在體外形成造血集落。
10.根據(jù)權利要求8所述的方法，其中，所述第二灌注日期是第一灌注日期后約30天。
11.根據(jù)權利要求9所述的方法，其中，所述第三灌注日期是第一灌注日期后約60天。
12.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。
13.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。
14.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的 ⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少24小時。
15.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述方法進一步包括將該組合物血管內遞送至梗死相關動脈的步驟。
16.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述方法進一步包括通過導管將該組合物遞送至心肌的步驟。
17.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述導管是流量控制導管。
18.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述導管是球囊擴張導管。
19.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述導管具有至少約0.36mm的內直徑。
20.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時間間隔的第一時間是梗死后至少約5天。
21.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時間間隔的第二時間是梗死后少于約14天。
22.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述第一灌注日期特定時間間隔的第一時間是梗死后至少約5天，以及第一灌注日期特定時間間隔的第二時間是梗死后少于約14天。
23.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述任選的第二治療劑是至少一種促進心肌細胞生長的相容劑。
24.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述任選的第二治療劑選自如下所述地構成的組，即，所述組由血管緊張素轉化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、抗心律失常劑、抗心絞痛劑、 酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。
25.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動劑神經調節(jié)蛋白1。
26.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，所述方法比成分(i)加上(ii)或單獨的成分 (iii)更能減少梗死區(qū)損傷。
27.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述方法改善梗死區(qū)中的微血管血流。
28.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述方法減少梗死損傷的面積。
29.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述方法減少梗死量。
30.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述方法增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。
31.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，與對照相比較，所述方法增加對至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)中的冬眠心肌的灌注。
32.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內皮生長因子。
33.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胎盤生長因子。
34.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括兒茶酚胺。
35.根據(jù)權利要求34所述的方法，其中，所述兒茶酚胺是去甲腎上腺素。
36.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括內皮素-1。
37.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括前列腺素 ^α。
38.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑是血管緊張素II。
39.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括佛波酯。
40.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括神經肽Y。
41.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括活性轉化生長因子β 1。
42.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括蛋白。
43.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括甘油二酯。
44.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括 salusin-α 0
45.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括 salusin-β 。
46.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胰島素樣生長因子-1。
47.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括肌抑素。
48.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括粒細胞集落刺激因子。
49.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括巨噬細胞集落刺激因子。
50.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括噻唑烷二酮。
51.根據(jù)權利要求50所述的方法，其中，所述噻唑烷二酮是羅西格列酮。
52.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑。
53.一種治療由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者的梗死區(qū)損傷的藥物組合物，其包含(a)梗死損傷改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，其中，所述梗死區(qū)改善量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體CD34+ 造血干細胞富集群，所述富集群含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群，從而使得所述分離的自體⑶34+造血干細胞富集群提供至少0. 5x IO6個表達 CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞；(b)穩(wěn)定量的血清，其中，所述穩(wěn)定量的血清為超過20%(ν/ν)，以及(c)治療有效量的至少一種促進心肌細胞生長的相容劑；其中，通過導管將該組合物腸胃外地施用至受治療者；其中，當通過導管并在體外測試時，在所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群中至少70%的細胞是CD34+細胞，以及其中，在從受治療者獲得含有表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群后至少約M小時內，當通過該導管并在體外測試時，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群(1)保持該CXCR-4介導的趨化活性；(2)至少70%有活力；以及(3)能在體外形成造血集落。
54.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述的梗死區(qū)灌注改善量的趨化性造血干細胞產物包含至少IOx IO6個分離的自體⑶34+造血干細胞富集群，其含有0. IO6個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能⑶34+細胞亞群。
55.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述組合物比成分(i)加上(ii)或單獨的成分(iii)更能減少梗死區(qū)損傷。
56.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括所述梗死區(qū)的凋亡心肌細胞喪失。
57.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，與對照相比較，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的不利心室重建。
58.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括急性心肌梗死后的心肌功能的進行性下降。
59.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括至少一個缺血的心肌組織梗死周圍區(qū)的灌注過少。
60.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述梗死區(qū)損傷包括梗死周圍邊界區(qū)中的心肌冬眠。
61.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從采集自所述受治療者的骨髓抽吸物的細胞成分純化得到。
62.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的分離的CD34+細胞富集群從周圍血純化得到。
63.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少48小時。
64.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群(a)能在體外形成造血集落；以及(b)在從受治療者獲得含有在(a)中表達CXCR-4的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少72小時。
65.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞亞群的CD34+細胞富集群，在從受治療者中獲得該含有在(a)中表達 CXCR-4的潛能細胞亞群的⑶34+細胞富集群之后，保持至少2%的CXCR-4介導的趨化活性至少24小時。
66.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中通過導管將所述組合物血管內遞送至梗死相關動脈。
67.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中通過導管將所述組合物遞送至心肌。
68.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中與對照相比較，所述組合物改善梗死區(qū)中的微血管血流。
69.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中與對照相比較，所述組合物增加至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)的灌注。
70.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中與對照相比較，所述組合物增加對至少一個心肌組織缺血梗死周圍區(qū)中冬眠心肌的灌注。
71.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中與對照相比較，所述組合物減少梗死損傷的面積。
72.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中與對照相比較，所述組合物減少梗死量。
73.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑選自如下所述地構成的組，即，所述所述組由血管緊張素轉化酶抑制劑、β阻滯劑、利尿劑、 抗心律失常劑、抗心絞痛劑、酪氨酸激酶受體激動劑、血管活性劑、抗凝劑、纖維蛋白溶解劑、以及降膽固醇劑組成。
74.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括酪氨酸激酶受體激動劑神經調節(jié)蛋白1。
75.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括選自由VEGF-A、VEGF-B, VEGF-C和VEGF-D組成的組的血管內皮生長因子。
76.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胎盤生長因子。
77.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括兒茶酚胺。
78.根據(jù)權利要求77的藥物組合物，其中，所述兒茶酚胺是去甲腎上腺素。
79.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括內皮素-1。
80.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括前列腺素F2a。
81.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑是血管緊張素II。
82.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括佛波酯。
83.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括神經肽Y。
84.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括活性轉化生長因子β 1。
85.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括蛋白。
86.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括甘油二酯。
87.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括 salusin- α。
88.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括 salusin- β。
89.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括胰島素樣生長因子-1。
90.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括肌抑素。
91.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括粒細胞集落刺激因子。
92.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括巨噬細胞集落刺激因子。
93.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括噻唑烷二酮。
94.根據(jù)權利要求93的藥物組合物，其中，所述噻唑烷二酮是羅西格列酮。
95.根據(jù)權利要求53的藥物組合物，其中，所述至少一種促進心肌細胞生長的相容劑包括腫瘤壞死因子樣細胞凋亡弱誘導劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療梗死區(qū)損傷的藥物組合物以及在由自然疾病過程導致的急性心肌梗死后血運重建的受治療者中治療或修復梗死區(qū)損傷的方法，通過導管腸胃外地施用無菌藥物組合物至該受治療者，其含有作為第一治療劑的治療有效量未擴增的無菌分離的趨化性造血干細胞產物，以及任選地治療有效量的至少一種相容第二治療劑。該改善梗死量的無菌分離的趨化性造血干細胞產物包含分離的自體CD34+細胞富集群，其含有表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能細胞的亞群，從而使得所述分離的自體CD34+造血干細胞富集群提供至少0.5x 106個表達CXCR-4且具有CXCR-4介導的趨化活性的潛能CD34+細胞。
文檔編號A61K35/16GK102245189SQ200980148759
公開日2011年11月16日 申請日期2009年12月2日 優(yōu)先權日2008年12月3日
發(fā)明者安德魯·佩科拉, 羅伯特·普雷蒂 申請人:阿莫塞特公司