專利名稱：人工表面活性物質(zhì)混合液及其制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種含有肺表面活性物質(zhì)的混合液的配比，及其 制備方法與其在藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肺表面活性物質(zhì)(Pulmonarysurfaetant，PS)主要是由肺泡II型細(xì)胞 合成和分泌的一種脂蛋白復(fù)合物，是維持正常呼吸功能的重要物質(zhì)。PS是一種 復(fù)合磷脂，含85% 90%磷脂，8% 10%蛋白質(zhì)，5%中性脂肪及少量的無機(jī) 鹽。在磷脂中，磷脂酰膽堿(Phosphatidyleholine，PC)占60 % 50 %，磷脂酰甘油 (Phosphatidylglycerol, PG)占 5% 10%，還包括磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol, PI)、神經(jīng)鞘磷脂(Sphingomyelin，SPH)、磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylsersne，PSe) 等。PC是磷脂中的主要成分，其中又以雙飽和磷脂酰膽堿，即二棕?cái)R酰磷脂酰膽堿 (Dipalmitoylphosphatidyleholine, DPPC)為主，其約占磷脂總量的50%，是最主要的表 面活性物質(zhì)。因水分子對其他極性分子有一定的親和力，而對非極性分子有排斥作用，在肺 泡液體表面DPPC分子的非極性部分(飽和脂肪酸)受排斥向外排列形成單分子層。這種 結(jié)構(gòu)減少了原在表面的液體分子，從而降低了表面張力。PS中的蛋白成分包括非特異性及特異性蛋白。肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白 (surfactant-associated protein, SP)是肺特異性蛋白質(zhì)，目前已知的有四種，即SP_A、B、 C、D。PS中該特異性蛋白雖僅占1 2%，但具有重要的生理功能。在周期性呼吸運(yùn)動(dòng)中， 單純的DPPC不能迅速從液體底層中吸附到表層，進(jìn)入表層的DPPC分子也不能很快地散開 形成單分子層，而PS蛋白可促進(jìn)磷脂向液體表層的吸附和分布。疏水蛋白SP-B和SP-C促 進(jìn)磷脂吸附及擴(kuò)散分布的功能最強(qiáng)。它們獨(dú)立發(fā)揮生理效應(yīng)，互相無協(xié)同作用。與SP-C相 比，SP-B的功能更強(qiáng)一些。親水蛋白SP-A也有類似的生理功能，但作用比SP-B和SP-C弱。急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)是指嚴(yán) 重感染、創(chuàng)傷、休克等肺內(nèi)外襲擊后出現(xiàn)的以肺泡毛細(xì)血管損傷為主要表現(xiàn)的臨床綜合征， 屬于急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)是嚴(yán)重階段或類型。其臨床特征呼吸頻速 和窘迫，進(jìn)行性低氧血癥，X線呈現(xiàn)彌漫性肺泡浸潤。新生兒呼吸窘迫綜合征(Neonatal respiratory distress syndrome, NRDS)又禾爾月市透明膜病(Hyaline membrane disease, HMD)，發(fā)病率和死亡率都很高，是早產(chǎn)兒圍產(chǎn)期死亡的重要原因，由于早產(chǎn)兒肺泡II型細(xì) 胞分泌肺表面活性物質(zhì)PS缺乏所致。臨床表現(xiàn)為生后不久即出現(xiàn)進(jìn)行性呼吸困難和呼吸 衰竭；病理以肺泡壁上附有嗜伊紅透明膜和肺不張為特征。1980年P(guān)S首次被臨床應(yīng)用后，根據(jù)來源不同，將PS藥物分為4類第一類天然 型PS (Natural Pulmonary Surfaetant)從動(dòng)物肺或人羊水中提取。主要從豬肺和小牛肺 灌洗液或肺勻漿中制備；第二類改進(jìn)的天然型PS在天然型PS中補(bǔ)充適當(dāng)比例的某些PS 主要成分，使天然型藥物更加有效；第三類人工型，由人工合成的PS主要磷脂成分或其它 代用品按一定比例配制而成，其主要特點(diǎn)是不含PS蛋白質(zhì)；第四類合成的“天然”型PS由人工合成的PS主要磷脂成分加一定比例的用基因工程生產(chǎn)的PS蛋自質(zhì)配制而成。根據(jù)臨床研究結(jié)果，天然型PS和改進(jìn)型PS療效肯定、起效快、對NRDS的療效特別顯著。附圖簡述

圖1.不同配方差示掃描熱量圖不同配方加入不同濃度的SP_B、KL4后差示掃描 熱量圖對比研究。圖2.不同配方體外表面張力測定研究

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種用于治療NRDS和ARDS得含有肺表面活性物質(zhì)的混合液的配比， 及其制備方法與其在藥物中的應(yīng)用。所述的混合液由天然蛋白SP-B或SP-C或其具有表面活性的多肽，脂質(zhì)，表面活性 齊U，緩沖液組成；其特征在于由下述配方組成的溶液天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v脂質(zhì)1 90% w/v表面活性劑0. 01 10% w/v緩沖液組成余量上述的天然蛋白SP-B(SP-C)為人或哺乳類動(dòng)物的天然肺表面活性蛋白質(zhì)。上述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽為人或哺乳類動(dòng)物SP-B(SP-C)的具有表面活 性的部分氨基酸序列，可由天然產(chǎn)物裂解獲得或人工合成獲得。上述的多肽優(yōu)選人表面活性多肽KL4。序列結(jié)構(gòu)為賴氨酸_亮氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨 酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-賴氨酸 (KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK)。上述的脂質(zhì)為天然脂質(zhì)或人工合成脂質(zhì)。選自二硬脂酸磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酸 磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、膽固醇、神經(jīng)鞘氨醇，神經(jīng)磷脂，神經(jīng)酰胺，腦苷脂，腦硫脂，神 經(jīng)節(jié)苷脂，葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇，4-羥雙氫(神經(jīng))鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板 激活因子、磷脂酰甘油，磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇-4-磷酸、磷脂酰肌醇-4、 5-二磷酸鹽、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。磷脂酰乙醇胺-NH2末端基團(tuán)、包括己酰胺基團(tuán)、 十二烷基酰胺基團(tuán)、磷脂酰巰乙胺、丁二?；鶊F(tuán)、戊二?；鶊F(tuán)、十二烷羧基基團(tuán)、生物素基 團(tuán)、磷脂酰乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血磷脂膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘 油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸膽堿、氧化的脂質(zhì)、生物素化的脂質(zhì)、縮醛磷脂、 聚合的磷脂、鹵代磷脂、聚PEG化磷脂的一種或多種以任何比例混合的混合物。上述的脂質(zhì)優(yōu)選二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，棕櫚酰油酰甘油(POPG)的一種或 兩種以任何比例混合的混合物。上述的表面活性劑為離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑。上述的表面活性劑優(yōu)選油酸、硬脂酸的一種或兩種以任何比例混合的混合物。上述的緩沖液為任意人體可接受的離子型緩沖液。緩沖液選自磷酸鹽，鹽酸鹽，碳 酸鹽，硼酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸_乙酸鈉，Tris緩沖液的一種或多種種以任何比例混合的混 合物。
上述的混合液，用于新生兒及成人呼吸窘迫綜合癥和與表面物質(zhì)缺乏或功能異常 有關(guān)的其它疾病。
實(shí)施例
實(shí)施例1肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-BIg磷酸鹽緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液加入 1 %的SP-B和油酸，加入混合凍干的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終 濃度達(dá)到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分裝備用。實(shí)施例2肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g油酸4gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸鹽緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液加 入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合凍干的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶 解即得，使終濃度達(dá)到 SP-BO. 5-l%,SP-C0. 5-1%, DPPC 20-30%、P0PG5_15%，分裝備用。實(shí)施例3肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g油酸5gKL4IgTris緩沖液緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、P0PG、油酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液加 入1 %的KL4,加入混合凍干的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度達(dá) 至Ij KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分裝備用。實(shí)施例4肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5g
SP-BIg 磷酸鹽緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、POPG按上述比例溶 入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液加入 1 %的SP-B和棕櫚酸，加入混合凍干的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使 終濃度達(dá)到 SP-B1-2%、DPPC 20-30 %、P0PG5-15%，分裝備用。實(shí)施例5肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5gSP-B0. 5gSP-C0. 5g磷酸鹽緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、P0PG、棕櫚酸按上述比 例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液 加入0. 5%的SP-B和0. 5%的SP-C，加入混合凍干的DPPC、POPG成份，40°C溫浴攪拌至完 全溶解即得，使終濃度達(dá)到SP-B 0. 5-1 %、SP-C 0. 5-1 %、DPPC 20-30 %、POPG 5-15%,分裝備用。實(shí)施例6肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC23gPOPG8g棕櫚酸5gKL4IgTris緩沖液緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、P0PG、棕櫚酸按上述比 例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液 加入1 %的KL4,加入混合凍干的DPPC、P0PG成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度 達(dá)到 KL4 1-2%, DPPC 20-30%、P0PG5-15%，分裝備用。實(shí)施例7肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方卵磷脂28g棕櫚酸5gTris緩沖液緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將卵磷脂、棕櫚酸按上述比例 溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖液加 入混合凍干的DPPC、棕櫚酸成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，分裝備用。實(shí)施例8肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC28g卵磷脂9g棕櫚酸5g
Tris緩沖液 加至IOOg 制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、卵磷脂、棕櫚酸按上述 比例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖 液加入混合凍干的DPPC、卵磷脂成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終濃度達(dá)到DPPC 28%、卵磷脂9%，分裝備用。實(shí)施例9肺表面活性物質(zhì)的混合液及其制備配方DPPC28g卵磷脂9g棕櫚酸5gKL4l-2gTris緩沖液 加至IOOg制備將氯仿甲醇=2 1 (ν/ν)比例制成溶劑；將DPPC、卵磷脂、棕櫚酸按上述 比例溶入到溶劑中混勻，快速蒸發(fā)除掉有機(jī)溶劑，低溫冷凍干燥得粉末狀磷脂；磷酸鹽緩沖 液加入的KL4，加入混合凍干的DPPC、卵磷脂成份，40°C溫浴攪拌至完全溶解即得，使終 濃度達(dá)到KL4l-2 %、DPPC 20-30 %、卵磷脂5-15 %，分裝備用。實(shí)施例10.實(shí)施例1至實(shí)施例9所制備的肺表面活性物質(zhì)的混合液用于新生兒及成人呼吸窘 迫綜合癥和與表面物質(zhì)缺乏或功能異常有關(guān)的其它疾病。
權(quán)利要求
1.一種人工表面活性物質(zhì)混合液，其特征在于該制劑是由天然蛋白SP-B(SP-C)或其 具有表面活性的多肽，脂質(zhì)，表面活性劑，緩沖液組成。
2.權(quán)利要求1所述的混合液，其特征在于由下述配方組成的溶液配方天然蛋白SP-B(SP-C)或表面活性多肽 0. 01 10% w/v月旨質(zhì)1 90% w/v表面活性劑0. 01 10% w/v緩沖液組成余量
3.權(quán)利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)為人或哺乳類動(dòng)物的天然肺表面活性蛋白質(zhì)。
4.權(quán)利要求2所述的天然蛋白SP-B(SP-C)的多肽為人或哺乳類動(dòng)物SP-B(SP-C)的具 有表面活性的部分氨基酸序列，可由天然產(chǎn)物裂解獲得或人工合成獲得。
5.權(quán)利要求4所述的多肽優(yōu)選人表面活性多肽KL4。
6.權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)為天然脂質(zhì)或人工合成脂質(zhì)。所述脂質(zhì)選自二硬脂酸磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酸磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、膽固醇、 神經(jīng)鞘氨醇，神經(jīng)磷脂，神經(jīng)酰胺，腦苷脂，腦硫脂，神經(jīng)節(jié)苷脂，葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇， 4_羥雙氫(神經(jīng))鞘氨醇；L-a-磷酸卵磷脂、血小板激活因子、磷脂酰甘油，磷脂酰乙醇胺、 磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇-4-磷酸、磷脂酰肌醇-4、5- 二磷酸鹽、心磷脂，磷脂酸，溶血磷脂。 磷脂酰乙醇胺-NH2末端基團(tuán)、包括己酰胺基團(tuán)、十二烷基酰胺基團(tuán)、磷脂酰巰乙胺、丁二酰 基團(tuán)、戊二酰基團(tuán)、十二烷羧基基團(tuán)、生物素基團(tuán)、磷脂酰乙二醇、生物素化的磷脂帽。溶血 磷脂膽堿、溶血磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰甘油、溶血磷酸甘油酯、溶血磷脂酸、烷基磷酸膽 堿、氧化的脂質(zhì)、生物素化的脂質(zhì)、縮醛磷脂、聚合的磷脂、鹵代磷脂、聚PEG化磷脂的一種 或多種以任何比例混合的混合物。
7.權(quán)利要求6所述的脂質(zhì)優(yōu)選二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，棕櫚酰油酰甘油(POPG) 的一種或兩種以任何比例混合的混合物。
8.權(quán)利要求2所述的表面活性劑為離子型表面活性劑和非離子型表面活性劑。
9.權(quán)利要求8所述的表面活性劑優(yōu)選油酸、硬脂酸的一種或兩種以任何比例混合的混 合物。
10.權(quán)利要求2所述的緩沖液為任意人體可接受的離子型緩沖液。
11.權(quán)利要求10所述的緩沖液為磷酸鹽，鹽酸鹽，碳酸鹽，硼酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸-乙 酸鈉，Tris緩沖液的一種或多種種以任何比例混合的混合物。
12.權(quán)利要求1-11所述的混合液，用于新生兒及成人呼吸窘迫綜合癥和與表面物質(zhì)缺 乏或功能異常有關(guān)的其它疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及人工表面活性物質(zhì)混合液及應(yīng)用。本發(fā)明公開的人工表面活性物質(zhì)混合液由天然蛋白SP-B(SP-C)或其具有表面活性的天然多肽，脂質(zhì)，表面活性劑，緩沖液組成，適用于新生兒及成人呼吸窘迫綜合癥和與表面物質(zhì)缺乏或功能異常有關(guān)的其它疾病。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102049040SQ20091021033
公開日2011年5月11日 申請日期2009年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月30日
發(fā)明者王大璋, 王梅, 郝心宇 申請人:北京隆旗生物科技有限公司