專利名稱：：一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及從海洋軟體動(dòng)物器官中獲得的一種表面活性物質(zhì)組合物-"莫爾尤菲"及其制備方法，以及在制備治療肺表面活性物質(zhì)缺失癥藥物中的應(yīng)用,屬于制藥工業(yè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：肺泡上皮細(xì)胞分泌的肺表面活性物質(zhì)不足將導(dǎo)致嚴(yán)重的肺部病理現(xiàn)象，如呼吸紊亂、肺不張、水腫等引起肺炎、心肺肺動(dòng)脈瓣閉鎖不全等。有一種觀點(diǎn)認(rèn)為愛斯基摩人肺部疾病患病率低的原因是他們富含w-3不飽和脂肪酸的飲食習(xí)慣，例如其中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)具有良好的保健和預(yù)防疾病的功能。EPA和DHA如果在游離狀態(tài)下很容易被氧化變質(zhì)，但是如果同時(shí)維生素E存在，則可以變得穩(wěn)定，參見SongJ.H.,JhoulY.，MiyazawaT.，Biosci.Biotechnol.Biochem.1997,01,N12。己有研究結(jié)果表明外源性補(bǔ)充EPA可增加磷脂類成分的數(shù)量而降低中性粒細(xì)胞中白三烯水平。流行病學(xué)調(diào)査也揭示了co-3多不飽和脂肪酸(PUFA)對(duì)于小兒哮喘和支氣管炎等肺部疾病具有預(yù)防和治療作用，參見NagakuraT.,NatsudaS.etal.Eur，Respir.J,2000;16:861-865.。眾所周知孕婦服用富含碘的藥劑可以逆轉(zhuǎn)胎兒的智力缺陷，該藥劑中就含有魚油脂肪酸。治療慢性肺性心臟病患者時(shí)使用的"Tekom"制劑中也包含著高含量的co-3PUFA酯類，參見UA36137A,16.04.2001，其缺點(diǎn)是非常容易氧化變質(zhì)。有報(bào)道從軟體動(dòng)物-貽貝組織中分離到生物大分子組合物，這種組合物包含含氮化合物、糖類、脂類等成分，具有抗氧化、肝保護(hù)、類促甲狀腺素等生物活性，參見UA60504A,15.10.2003。還有輻射防護(hù)藥物"Bipolan"，由貝類軟體動(dòng)物中制備獲得，其中的成分有游離氨基酸、氨基糖及其衍生物、糖肽類及類胰島素物質(zhì)等。還有報(bào)道海洋生物提取物中包含多種磷脂、脂肪酸、金屬元素和黃酮類成分，但上述提取物的使用尚未見報(bào)道。臨床霧化吸入鏈霉素合并氫化可的松和葡萄糖5天有可能糾正肺表面活性物質(zhì)紊亂疾病，然而，抗生素和激素目前并不建議使用。現(xiàn)代分析顯示人體肺表面活性物質(zhì)是脂類和蛋白的混合物，由肺泡II型上皮細(xì)胞合成分泌在肺泡液中，覆蓋在肺泡之上降低表面張力。作為主要成分的不飽和脂質(zhì)對(duì)于表面活性功能是非常重要的。新生兒的肺表面活性物質(zhì)包括二棕櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、磷脂酰乙醇胺(PEA)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰甘油酯(PG),鞘磷脂(SM),磷酯酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)。在脂肪酸磷脂中，棕櫚酸和DHA是兩種最重要的脂肪酸。肺表面活性物質(zhì)是一個(gè)混合物，其中DPPC是最基本組分，約占41%，膽固醇約9%,另外還有蛋白質(zhì)-9%,PEA-5%.PG禾BPS-4%,PI-2%,SM-1%,FA-1%。肺表面活性物質(zhì)的最主要作用是降低肺泡表面膜的氣-液界面張力，該膜中存在一種類脂單分子層，其中含有約40-50%的DPPC。DPPC有一端是兩條飽和的?；?，另一端的不飽和脂肪酸脂密集排列在單分子層上，對(duì)于保持膜的穩(wěn)定性非常重要。DPPC是能夠降低肺表面張力的最主要的因素，此外，PC(磷脂酰膽堿)、PEA、PG以及PI則增強(qiáng)了表面活性物質(zhì)的分配和附著，參見BerezovskyV.A.,Vrachebnoedelo，1984,N41,P.107-111。上述成分可用于成人和兒童的呼吸窘迫綜合癥，該疾病的特點(diǎn)是肺表面活性物質(zhì)缺失，如新生兒透明膜病或肺泡II型上皮細(xì)胞合成肺表面活性物質(zhì)功能障礙。肺表面活性物質(zhì)損失可能由組織缺氧引起，也可能由組織氧過多或呼吸道感染引起。這種疾病可能發(fā)生在任何年齡段，特別是依靠使用呼吸機(jī)康復(fù)的患者，參見CarrieI,ClementM,deJavelDetal.JLipidRes"2000,Mar.,41(3):473-480。目前，替代療法已經(jīng)證明可以糾正呼吸窘迫綜合征。與人體肺表面活性物質(zhì)成分類似的外源性物質(zhì)可作為替代療法使用。從牛肺(參見RU,2198670,Cl，20.02.2003)和羊水參見(RU,2066197,Cl,10.09.1996)中提取的外源性表面活性物質(zhì)在兒童呼吸窘迫綜合癥的治療中已經(jīng)顯示了可喜的效果，并尚未發(fā)現(xiàn)任何毒副反應(yīng)。目前的類表面活性物質(zhì)藥物均是以DPPC或磷脂為主要成分，還有氨基酸、醇類、脂肪酸和糖類?，F(xiàn)有的藥物有合成的如"Ecxosurf"(美國(guó))(參見USA51108661992)、"Alek"(英國(guó))；半合成的如"Survanta"(美國(guó))；天然提取的如"Curosurf"(美國(guó))。但并非所有以上藥物都顯示良好的生物有效性。有研究報(bào)道一些含有水化大豆卵磷脂(phospholipon-90H)的藥物具有表面活性，但事實(shí)上，這類藥物降低表面張力的能力并沒有人們想象的那么好。因此，對(duì)于天然來源的、有效的、與肺表面活性物質(zhì)類似的磷脂組合物的研究是相當(dāng)迫切的?，F(xiàn)有研究表明一些必需脂肪酸(EFA)的缺失會(huì)引起多種疾病的發(fā)生，這些疾病可組織中一些關(guān)鍵磷脂、co-6和co-3不飽和脂肪酸-花生四烯酸(AA)、DGA的水平的下降引起，參見Ukr.Biochem.Journ.,2004,v.76,N3,P.91-97。臨床研究揭示，如肺部疾病、肺表面活性物質(zhì)缺失癥等一些疾病，可能與組織中co-3不飽和脂肪酸和一些關(guān)鍵磷脂的缺失有關(guān)。已有研究證實(shí)組織中co-3關(guān)鍵脂肪酸的缺失對(duì)多種疾病的發(fā)生具有重大影響，肺表面活性物質(zhì)的缺失是這些肺部疾病的臨床表現(xiàn)。在正常情況下，食物中的co-3不飽和脂肪酸磷脂會(huì)快速出現(xiàn)在肺泡磷脂膜中，膜中的w-3不飽和脂肪酸磷脂含量顯著增加，而且并不會(huì)引起花生四烯酸(AA)水平的下降，AA是生物膜中最重要的co-6脂肪酸磷脂。到目前為止，發(fā)明人已經(jīng)創(chuàng)造出一種從魷魚中提取獲得的具有表面活性的物質(zhì)，用于治療成人和兒童呼吸窘迫綜合癥。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明該物質(zhì)能夠降低起泡的劇烈程度，調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)肺表面活性物質(zhì)的反應(yīng)，并能夠?qū)狗尾康亩拘該p傷，而且不引起任何不良反應(yīng)，參見UA,76074,C2,15.06.2006。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲(Mollyufil)以及制備方法，本發(fā)明還提供該表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。發(fā)明綜述本發(fā)明的特點(diǎn)在于使用新的方法從海洋貝類生物組織中獲得一種天然的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，所述莫爾尤菲特征是一種以"-3多不飽和脂肪酸磷脂為主要成分，還包含縮醛磷脂、短肽和氨基酸等組分。所述組合物的特征還在于具有良好的表面活性，可用于表面活性系統(tǒng)紊亂的疾病的替代治療。本發(fā)明的組合物的制備方法能確保該組合物制備過程中是對(duì)表面活性物質(zhì)的富集和盡可能的剔除抗原物質(zhì)。發(fā)明詳述一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，該表面活性物質(zhì)是從海洋貝類生物組織中提取制得的，其成分包括"-3多不飽和脂肪酸復(fù)合磷脂60~85%，總膽固醇0.5~2.5%，短肽0.01-1.5%,糖類0.1~2.5%，游離脂肪酸0.1~2.8%，維生素E0.01~0.5%，肝素0.1~0.5%，由?；撬?、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸組成的氨基酸(I)0.045-0.08%，剩余物質(zhì)為除氨基酸(I)外的其他氨基酸(II)。以上均為重量百分比。所述的"-3多不飽和脂肪酸復(fù)合磷脂是30-50%的磷脂酰膽堿(PC)和7.0-12.8%的磷脂酰乙醇胺(PEA)，30-45%縮醛磷脂(乙醇胺縮醛磷脂和膽堿縮醛磷脂)，其余為鞘磷脂、磷脂酰甘油脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸。上述由?；撬?、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸組成的氨基酸(I)中，各組分的重量比為?；撬?精氨酸谷氨酸甘氨酸=20~30:2.5~5.0:11.0-25.0:12.0-20.0。優(yōu)選的，上述組合物莫爾尤菲中還含有肝素0.1~0.5%。重量百分比。優(yōu)選的，上述組合物莫爾尤菲中還含有維生素E含量0.010.5M。重量百分比。一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法，步驟如下將凍存的海洋貝類生物的生物組織搗碎，室溫下進(jìn)行溶劑提取，提取液過濾，將濾液減壓濃縮蒸去有機(jī)溶劑，再加入凈化劑進(jìn)行萃取處理，收集上層液并濃縮至一定體積，脫色處理,然后減壓濃縮，得到表面活性物質(zhì)(SAS)，再加入蒸餾水和肝素，最后低壓冷凍干燥得到凍干粉。優(yōu)選的，上述制備方法中，在脫色處理后,先加入維生素E，使維生素E在終產(chǎn)品組合物中的重量百分比為0.01~0.5%，然后再減壓濃縮，這樣可以保護(hù)組合物在制備過程中不受氧化破壞。優(yōu)選的，所述貝類生物為軟體動(dòng)物門瓣鰓綱的海洋貝類生物；具體選自貽貝、牡蠣、珍珠貝或文蛤等；所述生物組織為除貝殼外全部組織。優(yōu)選的，所述溶劑提取中使用的提取溶劑可以為丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇等低級(jí)醇類、和/或這些溶劑與水的混合溶劑，優(yōu)選的溶劑為乙醇。上述溶劑使用量為生物組織原料溶劑=1:(520)，重量體積比。優(yōu)選使用生物組織原料溶劑=1:IO重量體積比。優(yōu)選的，溶劑提取不少于2次，提取溶劑調(diào)節(jié)為酸性后效果更佳，可去除糖類、色素、膽固醇氧化產(chǎn)物及其酯等雜質(zhì)部分；優(yōu)選的，提取溶劑用有機(jī)酸調(diào)節(jié)酸性，優(yōu)選的，可以為乙酸、甲酸、鹽酸；優(yōu)選的，調(diào)節(jié)提取溶劑酸性為pH值不低于4。優(yōu)選的，使用的凈化劑可以為乙醇、正己垸和乙酸乙酯的混合液；優(yōu)選的，該混合液的體積比為10:(15~25):(0.7-1.4)。優(yōu)選的，加入肝素，使組合物中肝素的重量百分比為0.1~0.5%。這樣的組合及比例是經(jīng)過試驗(yàn)優(yōu)選而得，使得本發(fā)明組合物便于臨床試用，并充分考慮了它的穩(wěn)定性及療效。本發(fā)明的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，其醫(yī)藥用途在于，用于制備治療可逆轉(zhuǎn)肺表面活性物質(zhì)缺失癥的藥物。用本發(fā)明的組合物莫爾尤菲制成的藥物，可以用于治療肺表面活性物質(zhì)缺失癥，使用時(shí)將莫爾尤菲藥物用10ml滅菌生理鹽水溶解，灌注l-2天，每天l-2次，持續(xù)使用情況根據(jù)臨床需要而定。對(duì)海洋貝類生物中獲得的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲與從哺乳動(dòng)物肺中提取的表面活性物質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果見表l表1莫爾尤菲(Mollyufil)主要成分定性定量分析表(％:重量比)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2列出了在實(shí)驗(yàn)性V-E缺乏癥中莫爾尤菲對(duì)必需脂肪酸(EFA)缺失所致疾病的效果，以及對(duì)CCU所致鼠肝微粒體酶的抗氧化能力的影響。表2莫爾尤菲對(duì)于EFA缺失鼠各臟器微粒體的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*-與對(duì)照相比具有顯著性差異(p<0.05，方差分析)DPG:二磷酸甘油酸；LPC:溶血性磷脂酰膽堿；LPE:溶血性磷脂酰乙醇胺表3莫爾尤菲對(duì)V-E缺乏癥的鼠肺微粒體中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(11=7,M±m(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>-與正常對(duì)照組相比具有顯著性差異(pO.05);'-與正常對(duì)照組和V-E缺乏癥組相比都具有顯著性差異(pO.05);"-與V-E缺乏癥組相比具有顯著性差異(p0.05)_表4鼠肺細(xì)胞微粒體中的磷脂含量(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>-與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(p0.05)，"-與V-E缺乏癥組相比有顯著性差異(p〈0.05)表5莫爾尤菲對(duì)CCl4作用下的鼠肝勻漿中丙二醛的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>'-與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(pO.05)r-與CC14處理組相比有顯著性差異(p0.05)POL:超氧化物歧化酶表6莫爾尤菲對(duì)V-E缺乏癥大鼠的肺微粒體抗氧化能力的影響(11=7，M±m(xù))<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>;-與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(p<0.05);"-與CCU處理組相比有顯著性差異(p0.05)表7莫爾尤菲的特性表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表9莫爾尤菲對(duì)實(shí)驗(yàn)性PUFA缺乏癥大鼠縮醛磷脂中脂肪酸含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明提供一種從海洋軟體動(dòng)物組織中獲取表面活性物質(zhì)組合物的制備方法，并獲得到的一種新型的海洋貝類糖脂蛋白組合物。本發(fā)明的特點(diǎn)在于1、利用了海產(chǎn)貝類作為原料；2、獲得了富含(0-3脂肪酸磷脂的新型組合物，磷脂主要是二棕櫚酸磷脂酰膽堿，還有縮酸磷脂(乙醇胺縮醛磷脂和膽堿縮酸磷脂)、富含精氨酸、甘氨酸、?；撬?、谷氨酸、游離氨基酸、還有能夠增強(qiáng)表面活性的調(diào)節(jié)肽和短鏈肽，以及相當(dāng)數(shù)量的膽固醇酯、游離脂肪酸、糖類成分的組合物；3、本發(fā)明的制備方法涉及從海洋貝類組織中提取獲得表面活性物質(zhì)組合物，該方法中涉及的提取、分離、純化過程有助于增強(qiáng)本產(chǎn)品的表面活性；4、在本發(fā)明制備方法中采用了正己垸、醋酸乙酯混合液進(jìn)行凈化處理，有助于增強(qiáng)本產(chǎn)品的表面活性；5、從哺乳動(dòng)物肺臟提取SAS收率最高為1.5%，從海產(chǎn)烏賊中提取收率則為1%，而本發(fā)明涉及的從海洋貝類組織中提取得到的SAS收率可達(dá)到5%;6、本發(fā)明制備方法獲得的組合物的優(yōu)越性還體現(xiàn)在含有一系列的co-3脂肪酸磷脂，最主要為DPPC(含有棕櫚酸35-50%、DHA20%、EPA10-15%);7、本發(fā)明制備方法獲得的組合物中還含有調(diào)節(jié)短肽、氨基酸，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明本產(chǎn)品無毒副反應(yīng)，也無免疫原性，在給予本產(chǎn)品后lh、ld、3d、7d肺中巨噬細(xì)胞與對(duì)照組相比并無顯著性差異，這與其他同類產(chǎn)品相比而言是一個(gè)優(yōu)越性的特點(diǎn)。本發(fā)明制備方法獲得的新型表面活性組合物具有以下特點(diǎn)1、本發(fā)明獲得的莫爾尤菲富含0)-3脂肪酸磷脂，可以用于糾正肺表面活性物質(zhì)缺失癥，還具有膜保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)作用，能夠補(bǔ)充EPA和DHA，調(diào)節(jié)與組織中前列腺素合成密切相關(guān)的花生四烯酸的含量；2、本發(fā)明獲得的組合物莫爾尤菲中的肝素可改善微循環(huán)，維生素E對(duì)于本產(chǎn)品的低分散的結(jié)構(gòu)可起到穩(wěn)定作用；3、本發(fā)明獲得的莫爾尤菲中含量較高的磷脂和縮醛磷脂增強(qiáng)了表面活性；4、本發(fā)明獲得的組合物莫爾尤菲中不另外添加色素或蛋白；5、本發(fā)明獲得的莫爾尤菲短期使用即可快速改善肺泡膜中磷脂量、肺泡巨噬細(xì)胞和肺表面活性物質(zhì)數(shù)量。PUFA可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，能夠影響淋巴細(xì)胞和吞噬細(xì)胞一系列基因的信號(hào)轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，它是構(gòu)建一種重要的脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑-類二十烷酸的底物，它們包括前列腺素、環(huán)前列腺素、白三烯、血栓素等，參與了免疫調(diào)節(jié)、炎癥、凝血、痙攣和血管滲漏等過程。三類前列腺素和血栓素的區(qū)別在于分子側(cè)鏈中的雙鍵數(shù)目不同。由亞油酸合成的類二十垸酸有3個(gè)雙鍵，由花生四烯酸合成的有4個(gè)雙鍵，由a-亞油酸合成的有5個(gè)雙鍵。本發(fā)明的貝類表面活性物質(zhì)中的co-3脂肪酸磷脂可影響類花生酸在組織中的生物合成。在機(jī)體發(fā)育生長(zhǎng)過程中，EFA缺乏可導(dǎo)致多種疾病支氣管肺發(fā)育不良、兒童大腦和心臟疾病等。在用w-3脂肪酸磷脂藥物來治療EFA缺乏癥的研究中，使用標(biāo)記的花生四烯酸揭示了藥物的作用機(jī)理，是即作為花生四烯酸的一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，拮抗花生四烯酸向前列腺素(PGE2)的轉(zhuǎn)化，所以減少了類二十烷酸的生物合成。本發(fā)明的貝類表面活性物質(zhì)組合物可以用于制備藥物。co-3脂肪酸磷脂中的DPPC、縮醛磷脂是最主要的成分。它們可以有效降低表面張力，穩(wěn)定磷脂結(jié)構(gòu)的六邊形結(jié)構(gòu)，并增強(qiáng)表面活性劑類磷脂復(fù)合物的表面活性。這些組分包括肽類、富含精氨酸、甘氨酸、?；撬?、谷氨酸的游離氨基酸、維生素E和肝素等。本發(fā)明的制備方法的特點(diǎn)還在于能夠同時(shí)去除不需要的雜質(zhì)(色素)、蛋白質(zhì)等部分，經(jīng)過凈化后而獲得的貝類表面活性物質(zhì)可用于恢復(fù)肺表面活性系統(tǒng)的功能，治療呼吸窘迫綜合癥。本發(fā)明的發(fā)明點(diǎn)是海洋生物貽貝中表面活性物質(zhì)(基于"-多不飽和脂肪酸的磷脂-表面活性樣復(fù)合物)的分離及其用于治療缺乏表面活性物質(zhì)的肺病(尤其是新生兒的相關(guān)疾病)的藥用制劑的制備。與眾所周知的由魚油中游離脂肪酸EPA和DHA組成的"-多不飽和脂肪酸藥物相比，該組分具有許多優(yōu)點(diǎn)，下面結(jié)合具體實(shí)施例及實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)此進(jìn)行充分說明。具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行闡述，但并不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例l:冷凍的海產(chǎn)貽貝組織100g，絞肉機(jī)絞碎，置于帶攪拌的提取容器中，加入IO倍體積的乙醇，提取2小時(shí)，過濾，濾液真空回收溶劑，濾出的原料用酸性乙醇(乙酸調(diào)pH^4)再提取1小時(shí)。合并提取液，過濾，真空蒸發(fā)溶劑，用乙醇再溶解，并加入正己烷和乙酸乙酯的混和物，乙醇正己垸乙酸乙酯的體積比為10:20:1，分出正己垸-乙酸乙酯層，真空濃縮至1/10體積，加入活性碳，用0.2um的微孔濾膜過濾除去殘留的蛋白組分，在乙酸乙酯濾液中加入維生素E，使維生素E在終產(chǎn)品組合物中的重量百分比為0.2%，減壓濃縮，其中添加0.1%的肝素，冷凍干燥，得到藥用制劑，產(chǎn)量5g(5n/。)。實(shí)施例2:IOO克冷凍烏賊，絞肉機(jī)絞碎，置于帶攪拌的提取容器中，加入10倍體積的乙醇，提取2小時(shí)，過濾，濾液真空回收溶劑，濾出的原料用酸性乙醇(乙酸調(diào)pH^4)再提取1小時(shí)，合并提取液，過濾，真空蒸發(fā)溶劑，用乙醇再溶解，并加入丙酮和乙酸乙酯的混和物，乙醇正己垸乙酸乙酯的體積比為10:20:1，分出丙酮-乙酸乙酯層，真空濃縮至1/10體積，加入活性碳，用0.2um的微孔濾膜過濾除去殘留的蛋白組分，在丙酮-乙酸乙酯濾液中加入維生素E，使維生素E在終產(chǎn)品組合物中的重量百分比為0.5%，減壓濃縮，其中添加0.1%的肝素，冷凍干燥，得到藥用制劑，產(chǎn)量lg(1%)。實(shí)施例3:源于海產(chǎn)貽貝的磷脂組合物莫爾尤菲的藥效實(shí)驗(yàn)。給大鼠分別詞喂常規(guī)餌料和添加有莫爾尤菲的餌料以揭示生物體內(nèi)類二十垸酸的形成。類二十垸酸在生物體內(nèi)來源于它們的前體物-co-6和co-3多不飽和脂肪酸，這些前體物脫離膜磷脂后進(jìn)入代謝轉(zhuǎn)化過程。實(shí)驗(yàn)測(cè)定按下列步驟來進(jìn)行(1)中毒造模破壞動(dòng)物肺臟的表面活性系統(tǒng)，使之若不進(jìn)行專業(yè)治療將會(huì)導(dǎo)致死亡；(2)采用吸入方式對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥；(3)觀察動(dòng)物狀態(tài)(死亡數(shù)量、表面活性系統(tǒng)狀態(tài)指數(shù))；大鼠(體重195.6±4,5g)和小鼠(體重23.4土l,7g)進(jìn)行吸入給藥，間隔1小時(shí)、1天、3天和7天分別給藥。動(dòng)物分4組，每組10只，考察"莫爾尤菲"的毒理學(xué)數(shù)據(jù)。氣霧的組分濃度為33333.0mg/m3-666mg/m3，大鼠持續(xù)吸入4小時(shí)，小白鼠吸入2小時(shí)，吸入前后動(dòng)物處于普通實(shí)驗(yàn)室條件。給藥后14天內(nèi)觀察動(dòng)物狀態(tài)和死亡數(shù)量。結(jié)果大鼠的死亡劑量為11200.0±606.4mg/m3，小白鼠為8000±542.0mg/m3。吸入給藥情況下，"莫爾尤菲"屬于三級(jí)危險(xiǎn)化合物，是一種較安全的藥用物質(zhì)。通過吸入給藥對(duì)"莫爾尤菲"進(jìn)行藥理學(xué)評(píng)價(jià)。氣霧劑的給藥濃度為大鼠致死劑量的1/10的倍數(shù)，大鼠的體重為135.6士4.5g，給藥間隔1小時(shí)、l天、3天和7天，試驗(yàn)分四組，每組10只動(dòng)物。吸入時(shí)每個(gè)隔艙的氣霧劑濃度為1120.0±254.3mg/m3,維持吸入4小時(shí)。上述實(shí)驗(yàn)條件下沒有一只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡，給藥后和觀察過程中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的狀態(tài)良好，動(dòng)物器官和系統(tǒng)未發(fā)現(xiàn)有明顯的異常。應(yīng)用"莫爾尤菲"的動(dòng)物存活數(shù)明顯高于對(duì)照。在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中，用CCU急性致毒，該藥用物質(zhì)的應(yīng)用降低了毒物的毒性效應(yīng)，對(duì)動(dòng)物存活有促進(jìn)效果，降低了脂過氧化(LP)強(qiáng)度，調(diào)節(jié)了CCU的毒性效應(yīng)。"莫爾尤菲"對(duì)肺巨噬細(xì)胞的功能活性和形態(tài)未造成任何變化，表明其相對(duì)于肺臟的細(xì)胞免疫反應(yīng)沒有任何抗原特性，肺巨噬細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能上也未見明顯變化，這是本發(fā)明制備方法創(chuàng)造優(yōu)化的結(jié)果，使得最終產(chǎn)品中的蛋白量可忽略不計(jì)的(0.1-0.5%)，這是一個(gè)非常有利的因素。使用本發(fā)明涉及的制備方法具有以下優(yōu)良效果-7、簡(jiǎn)化了獲得目標(biāo)產(chǎn)品的方法；2、來源于貽貝組織的肺表面活性物質(zhì)"莫爾尤菲"的產(chǎn)量為5%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于牛肺來源的表面活性物質(zhì)1.0%的產(chǎn)量；3、有效降低表面張力，而且其所含有的縮醛磷脂作為抗氧化劑能抑制脂質(zhì)過氧化；4、維生素E能保護(hù)磷脂類成分和肺表面活性蛋白被氧化；5、所添加的肝素能改善血液微循環(huán)。采用本發(fā)明的制備方法獲得的貝類表面活性物質(zhì)組合物具有以下優(yōu)良效果h通過降低表面張力增加了動(dòng)物肺臟的表面活性；入整個(gè)試驗(yàn)期間，與對(duì)照相比，肺泡巨噬細(xì)胞的數(shù)量未有任何變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為其進(jìn)一步應(yīng)用于臨床病人治療的發(fā)明提供了證據(jù)。"莫爾尤菲"可用于肺表面活性系統(tǒng)功能紊亂的急性毒性病例的治療。正常動(dòng)物應(yīng)用來源于海洋生物的表面活性物質(zhì)未顯現(xiàn)出任何變化，然而在中毒條件下，肺功能需正?；?；它降低了起泡過程的強(qiáng)度，補(bǔ)充了表面活性物質(zhì)，使表面活性物質(zhì)的細(xì)胞反應(yīng)正?；?，減緩中毒過程的進(jìn)程。所獲得的藥用物質(zhì)確保了肺表面活性的增加和抗原特性的降低。本發(fā)明的目的是從貝類的組織中獲得表面活性藥用物質(zhì)"莫爾尤菲"，該藥用物質(zhì)包括"-3多不飽和脂肪酸磷脂、縮醛磷脂、調(diào)節(jié)肽、氨基酸、維生素E和肝素。所制備的生物活性組合物具有適應(yīng)原和抗氧化特性，用本方法生產(chǎn)的表面活性物質(zhì)"莫爾尤菲"可以通過補(bǔ)充所缺乏的表面活性物質(zhì)，來恢復(fù)紊亂的肺表面活性系統(tǒng)功能。權(quán)利要求1、一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，其特征在于表面活性物質(zhì)是從海洋貝類生物組織中提取制得的，其成分包括ω-3多不飽和脂肪酸復(fù)合磷脂60～85％，總膽固醇0.5～2.5％，短肽0.01～1.5％，糖類0.1～2.5％，游離脂肪酸0.1～2.8％，維生素E0.01～0.5％，肝素0.1～0.5％，由?；撬帷⒕彼?、谷氨酸、甘氨酸組成的氨基酸(I)0.045-0.08％，剩余物質(zhì)為除氨基酸(I)外的其他氨基酸(II)；所述的ω-3多不飽和脂肪酸復(fù)合磷脂是30-50％的磷脂酰膽堿(PC)和7.0-12.8％的磷脂酰乙醇胺(PEA)，30-45％縮醛磷脂(包括乙醇胺縮醛磷脂和膽堿縮醛磷脂)，其余為鞘磷脂(SM)、磷脂酰甘油脂(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰絲氨酸(PS)；以上均為重量百分比；所述由牛磺酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸組成的氨基酸(I)，各組分的重量比為?；撬帷镁彼帷霉劝彼帷酶拾彼幔?20～30)∶(2.5～5.0)∶(11.0～25.0)∶(12.0～20.0)。2、如權(quán)利要求1所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，其特征在于所述組合物中還含有肝素0.1~0.5%重量百分比。3、如權(quán)利要求1所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲，其特征在于所述組合物中還含有維生素E0.010.5。/。重量百分比。4、一種表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法，步驟如下將凍存的海洋貝類生物的生物組織搗碎，室溫下進(jìn)行溶劑提取，提取液過濾，將濾液減壓濃縮蒸去有機(jī)溶劑，再加入凈化劑進(jìn)行萃取處理，收集上層液并濃縮至一定體積，脫色處理,然后減壓濃縮，得到表面活性物質(zhì)(SAS)，再加入蒸餾水和肝素，最后低壓冷凍干燥得到凍干粉。5、如權(quán)利要求4所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法,其特征在于在脫色處理后，先加入維生素E，然后再減壓濃縮。6、如權(quán)利要求4所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法,其特征在于所述貝類生物為軟體動(dòng)物門瓣鰓綱海洋貝類生物；所述生物組織為除貝殼外全部組織。7、如權(quán)利要求4所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法，其特征在于所述溶劑提取中使用的提取溶劑可以為丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇等低級(jí)醇類、和/或這些溶劑與水的混合溶劑，所述溶劑使用量為生物組織原料溶劑=1:(520)，重量體積比，優(yōu)選使用生物組織原料溶劑=1:10重量體積比。8、如權(quán)利要求4所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法,其特征在于所述提取溶劑用有機(jī)酸調(diào)節(jié)為酸性，優(yōu)選pH值不低于4。9、如權(quán)利要求4所述的表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的制備方法，其特征在于所使用的凈化劑為乙醇、正己烷和乙酸乙酯的混合液；優(yōu)選的，該混合液的體積比為乙醇正己烷乙酸乙酯=10:(15~25):(0.7-1.4)。10、權(quán)利要求l表面活性物質(zhì)組合物莫爾尤菲的應(yīng)用，用于制備治療可逆轉(zhuǎn)肺表面活性物質(zhì)缺失癥的藥物。全文摘要本發(fā)明涉及一種表面活性物質(zhì)莫爾尤菲及其制備方法與應(yīng)用，屬于制藥工業(yè)
技術(shù)領(lǐng)域：
。該組合物是通過對(duì)雙殼貝類軟體動(dòng)物的組織進(jìn)行提取、純化等步驟制備而得，組合物中富含多不飽和脂肪酸組成的復(fù)合海產(chǎn)磷脂，其中包括縮醛磷脂、活性短鏈肽和氨基酸等。本發(fā)明組合物具有表面活性物質(zhì)的表面活性特性，可用于制備在肺缺乏表面活性物質(zhì)時(shí)進(jìn)行替代治療的藥物，并且無免疫原性。文檔編號(hào)A61P11/00GK101112393SQ20071001505公開日2008年1月30日申請(qǐng)日期2007年6月22日優(yōu)先權(quán)日2007年6月22日發(fā)明者劉可春,別列別杰夫·吉納迪,契克曼·伊萬,康尼維特·娜塔麗婭,考米沙林科·謝爾蓋,考赳米拉·奧麗娜,莫伊謝耶娃·柳米拉,達(dá)特森科·卓婭,韓利文申請(qǐng)人:山東省科學(xué)院生物研究所