專利名稱：一種促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物及該藥物的制備方法。背量技術(shù)細(xì)胞衰老是指細(xì)胞不可逆撤離細(xì)胞周期、喪失增殖能力后進(jìn)入的一種相對穩(wěn)定的 狀態(tài)，衰老的細(xì)胞不再增殖，但保持代謝活性。目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞衰老有增殖衰老(Implicative senescence)與早熟衰老(Premature senescence)兩種形式，早熟衰老是指細(xì)胞在非端 粒信號的刺激下發(fā)生，與端粒長短以及增殖代次無關(guān)，故稱早熟衰老。在Pten、BRAFE600、 K-rasV12、SUV39hl等基因模型中已證實細(xì)胞早熟衰老是細(xì)胞內(nèi)在抗癌機制，在腫瘤的形成 過程中起著重要的屏障作用，可以防止腫瘤發(fā)生；早熟衰老同時參與抗癌藥物的作用，細(xì)胞 衰老作為一種腫瘤治療效應(yīng)機制正受到廣泛關(guān)注，腫瘤細(xì)胞衰老靶向基因治療和化學(xué)制劑 研究也在積極探索之中。目前尚無促腫瘤細(xì)胞衰老的中藥報道，開發(fā)具有促腫瘤細(xì)胞衰老 作用的中藥具有重要意義，可以為腫瘤臨床提高有效的抗腫瘤藥物，抑制腫瘤細(xì)胞的惡性 增殖，縮小或穩(wěn)定腫瘤包塊，提高腫瘤患者的生存質(zhì)量，延長腫瘤患者生存期。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于為腫瘤患者提供具有促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物。本發(fā)明的目的之二在于提出該藥物的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物由以下重量份的原 料藥制備而成藤梨根10-30份、龍葵10-30份、蛇莓10-20份、白術(shù)6_16份、茯苓10-30份、 薏苡仁10-30份、槲寄生9-30份、半枝蓮10-40份。本發(fā)明藥物優(yōu)選下述重量份的原料藥制成藤梨根30份、龍葵15份、蛇莓15份、 白術(shù)12份、茯苓15份、薏苡仁30份、槲寄生15份、半枝蓮30份。本發(fā)明藥物的顆粒劑制作方法，依次采用以下步驟制備(1)原料藥一起加水加壓煎煮二次，第一次加水適量，浸泡30分鐘后，提取，濾過， 濾渣再用適量水提取，二次提取時間適當(dāng)，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾液濃縮成 浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25 ； (2)在攪拌下緩慢加入適量95%乙醇，冷藏M小 時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測定其相對密度為 1. 25-1. 30 ； (3)加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。本發(fā)明經(jīng)試驗證明具有促腫瘤細(xì)胞衰老的作用。本發(fā)明藥物在促腫瘤細(xì)胞衰老同 時，還具有明確抑制腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞克隆形成和促腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。本發(fā) 明藥物由藤梨根、龍葵、蛇莓、白術(shù)、茯苓、薏苡仁、槲寄生、半枝蓮組成，這一類藥物的合理 應(yīng)用切中了腫瘤發(fā)病的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，充分發(fā)揮了傳統(tǒng)中醫(yī)藥的優(yōu)勢，從而達(dá)到抗腫瘤的 目的。
具體實施例方式下面通過試驗例進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物(以下簡稱“藤龍補中顆?！?的有益效果?！苍囼灷?〕藤龍補中顆粒促人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞衰老的作用

圖1是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞衰老的影響圖，A為對照組，B為藤龍補中顆粒組。試驗以檢測衰老相關(guān)半乳糖苷酶(SA-β -gal)活性和細(xì)胞形態(tài)的方式鑒定細(xì)胞 衰老，圖1結(jié)果顯示5mg/ml藤龍補中顆粒作用5天后LS-174-T細(xì)胞形態(tài)變得大而扁平，出 現(xiàn)SA-β -ga 1活性陽性，衰老細(xì)胞數(shù)與對照組比較差異顯著，提示藤龍補中顆粒有促人結(jié) 腸癌LS-174-T細(xì)胞衰老的作用。〔試驗例2〕藤龍補中顆粒對人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞周期的影響圖2是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞周期的的影響圖，A為對照組，B為藤龍補中顆粒組。上圖結(jié)果顯示5mg/ml藤龍補中顆粒作用5天后LS-174-T細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞顯著 增加，S期、G2/M期細(xì)胞顯著減少，與對照組比較差異顯著；細(xì)胞周期結(jié)果與細(xì)胞衰老結(jié)果 一致，提示藤龍補中顆?？梢源貺S-174T細(xì)胞衰老，阻滯LS-174T細(xì)胞周期于G0/G1期?！苍囼灷?〕藤龍補中顆粒促人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞衰老分子機制圖3是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞衰老信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響圖，A為p53_p21信號 通路，B為pl6-RB信號通路；圖中d0、d5分別表示第一天和第五天，con為對照組，TLBZD為 藤龍補中顆粒組。上圖結(jié)果顯示終濃度5mg/ml藤龍補中顆?？梢源龠M(jìn)p21WAF-l/CIP_l和 pl6INMa/CDKN2A表達(dá)，不影響p53、RB在LS-174T細(xì)胞中的表達(dá)，可以抑制RB磷酸化，提 示藤龍補中顆粒促腫瘤細(xì)胞衰老可能與促p21WAF-l/Cipl、pl6INMa/CDKN2A表達(dá)、抑制RB磷酸化相關(guān)。〔試驗例4〕藤龍補中顆粒對人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞增殖的影響圖4是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞增殖的影響圖。上圖結(jié)果顯示終濃度lmg/ml-20mg/ml藤龍補中顆?？梢圆煌潭纫种芁S-174-T 細(xì)胞增殖，呈劑量依賴性和時間依賴性，提示藤龍補中顆粒具有抗腫瘤的作用。〔試驗例5〕藤龍補中顆粒對人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞克隆形成的作用圖5是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞克隆形成能力的影響圖。上圖結(jié)果顯示隨藤龍補中顆粒濃度加大克隆形成數(shù)明顯降低，20mg/ml藤龍補中 顆粒作用12天已無克隆形成，2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml藤龍補中顆?？寺⌒纬梢?制率分別為8. 93%、15. 00%,51. 00%和97. 90%，與對照組比較差異顯著，提示藤龍補中 顆粒具有抑制腫瘤細(xì)胞克隆形成的作用?！苍囼灷?〕藤龍補中顆粒對人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞凋亡的影響圖6是藤龍補中顆粒對LS-174-T細(xì)胞凋亡的影響圖，A對照組，B為10mg/ml藤龍 補中顆粒組、C為20mg/ml藤龍補中顆粒組。上圖結(jié)果顯示10mg/ml、20mg/ml藤龍補中顆粒作用72h后LS-174-T細(xì)胞凋亡率 分別為(11. 43士2. 76)%, (19. 93士3. 15) %，與對照組比較差異顯著，提示藤龍補中顆粒可 以促腫瘤細(xì)胞凋亡。以下通過實施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的顆粒劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明以下實施例所用藤梨根為獼猴桃科植物中華獼猴桃Actinidia chihensis planch.的干燥根。本發(fā)明以下實施例所用龍葵為茄科植物龍葵Solanum nigruml.帶花、果的干燥地 上部分。本發(fā)明以下實施例所用蛇莓為薔薇科植物蛇莓Duchesneaindica(Andr.)R)cke的干燥全草。本發(fā)明以下實施例所用白術(shù)為菊科植物白術(shù)Atractylodesmacroc^phala Roidz. 的干燥根莖。本發(fā)明以下實施例所用茯苓為多菌科真菌茯苓Poriacocos (Sctw. )ffolf的干燥 菌核。本發(fā)明以下實施例所用薏苡仁為禾本科植物薏苡Coixlacryma-jobi L. var. mayuen (Roman. ) Stapf的干燥成熟種仁。本發(fā)明以下實施例所用槲寄生為桑寄生科植物槲寄生ViscumcoloratumOtomar.) Nakai的干燥帶葉莖枝。本發(fā)明以下實施例所用半枝蓮為唇形科植物半枝蓮kutellariabartata D. Don 的干燥全草。實施例1稱取藤梨根3000g、龍葵lOOOg、蛇莓1500g、白術(shù)1200g、茯苓1500g、薏苡仁 3000g、槲寄生lOOOg、半枝蓮3000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水6倍，浸泡30分鐘后，提 取，濾過，濾渣再用4倍量水提取，二次提取時間2小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過， 濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入3倍量95%乙醇， 冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在60°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時 測定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例2稱取藤梨根2500g、龍葵2000g、蛇莓lOOOg、白術(shù)lOOOg、茯苓lOOOg、薏苡仁 2000g、槲寄生900g、半枝蓮4000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水9倍，浸泡30分鐘后，提 取，濾過，濾渣再用3倍量水提取，二次提取時間3小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過， 濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入2倍量95%乙醇， 冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在50°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時 測定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例3稱取藤梨根1500g、龍葵1000g、蛇莓1200g、白術(shù)1600g、茯苓1500g、薏苡仁 3000g、槲寄生1500g、半枝蓮3000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水7倍，浸泡30分鐘后，提 取，濾過，濾渣再用4倍量水提取，二次提取時間2小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過， 濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入5倍量95%乙醇， 冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在70°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時 測定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例4稱取藤梨根1900g、龍葵2500g、蛇莓1800g、白術(shù)600g、茯苓1800g、薏苡仁1200g、槲寄生2000g、半枝蓮lOOOg，一起加壓煎煮2次，第一次加水8倍，浸泡30分鐘后，提取，濾 過，濾渣再用5倍量水提取，二次提取時間3小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾液 濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入6倍量95%乙醇，冷藏 M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在60°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測定 其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例5稱取藤梨根3000g、龍葵lOOOg、蛇莓1600g、白術(shù)1000g、茯苓2000g、薏苡仁 2000g、槲寄生1000g、半枝蓮3000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水10倍，浸泡30分鐘 后，提取，濾過，濾渣再用6倍量水提取，二次提取時間1小時，合并所有濾液，冷藏M小 時，濾過，濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入4倍量 95%乙醇，冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在80°C下減壓濃縮，成浸膏，在 50-60°C時測定其相對密度為1.25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例6稱取藤梨根^00g、龍葵1200g、蛇莓1500g、白術(shù)1500g、茯苓2000g、薏苡仁 3000g、槲寄生1200g、半枝蓮lOOOg，一起加壓煎煮2次，第一次加水9倍，浸泡30分鐘后，提 取，濾過，濾渣再用6倍量水提取，二次提取時間2小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過， 濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入5倍量95%乙醇， 冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在50°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時 測定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例7稱取藤梨根2200g、龍葵1500g、蛇莓1800g、白術(shù)1600g、茯苓2000g、薏苡仁 3000g、槲寄生3000g、半枝蓮4000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水12倍，浸泡30分鐘 后，提取，濾過，濾渣再用6倍量水提取，二次提取時間2小時，合并所有濾液，冷藏M小 時，濾過，濾液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入6倍量 95%乙醇，冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在60°C下減壓濃縮，成浸膏，在 50-60°C時測定其相對密度為1.25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例8稱取藤梨根1200g、龍葵1100g、蛇莓1000g、白術(shù)600g、茯苓1000g、薏苡仁1500g、 槲寄生1500g、半枝蓮1200g，一起加壓煎煮2次，第一次加水6倍，浸泡30分鐘后，提取，濾 過，濾渣再用3倍量水提取，二次提取時間1小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾液 濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入3倍量95%乙醇，冷藏 24小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在70°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測定 其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例9稱取藤梨根2000g、龍葵2500g、蛇莓1000g、白術(shù)800g、茯苓1500g、薏苡仁2000g、 槲寄生2000g、半枝蓮3600g，一起加壓煎煮2次，第一次加水8倍，浸泡30分鐘后，提取，濾 過，濾渣再用4倍量水提取，二次提取時間3小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾液 濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入5倍量95%乙醇，冷藏 24小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在50°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。實施例10稱取藤梨根3000g、龍葵300g、蛇莓1200g、白術(shù)900g、茯苓1500g、薏苡仁3000g、 槲寄生1500g、半枝蓮2000g，一起加壓煎煮2次，第一次加水10倍，浸泡30分鐘后，提取， 濾過，濾渣再用5倍量水提取，二次提取時間2小時，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾 液濃縮成浸膏，在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25，在攪拌下緩慢加入4倍量95%乙醇，冷 藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味，并在60°C下減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測 定其相對密度為1. 25-1. 30，加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。
權(quán)利要求
1.一種促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物，其特征在于由下列重量份的原料藥制成藤梨 根10-30份、龍葵10-30份、蛇莓10-20份、白術(shù)6_16份、茯苓10-30份、薏苡仁10-30份、 槲寄生9-30份、半枝蓮10-40份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于它由以下重量份的原料藥制備而成藤梨 根30份、龍葵15份、蛇莓15份、白術(shù)12份、茯苓15份、薏苡仁30份、槲寄生15份、半枝蓮 30份。
3.制備權(quán)利要求1或2所述藥物的顆粒劑的制作方法，按比例稱取原料藥后，依次包括 了以下步驟(1)原料藥一起加水加壓煎煮二次，第一次加水適量，浸泡30分鐘后，提取，濾過，濾渣 再用適量水提取，二次提取時間適當(dāng)，合并所有濾液，冷藏M小時，濾過，濾液濃縮成浸膏， 在常溫時測定其比重為1. 20-1. 25 ；(2)在攪拌下緩慢加入適量95%乙醇，冷藏M小時，分取上清液，回收乙醇至無醇味， 并減壓濃縮，成浸膏，在50-60°C時測定其相對密度為1. 25-1. 30 ；(3)加入適當(dāng)輔料，制粒，整粒，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述藥物的顆粒劑的制備方法，其特征是所述適量的第一次加水 量為6-12倍，第二次加水量為3-6倍，二次提取時間均為1-3小時，加入適量乙醇的量為 2-6倍，減壓濃縮適當(dāng)溫度條件為40-80°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物，由以下重量份的原料藥制成藤梨根10-30份、龍葵10-30份、蛇莓10-20份、白術(shù)6-16份、茯苓10-30份、薏苡仁10-30份、槲寄生9-30份、半枝蓮10-40份。本發(fā)明為腫瘤患者提供了具有促腫瘤細(xì)胞衰老的抗腫瘤藥物。另外本發(fā)明還公開了該藥物的顆粒劑的制備方法。
文檔編號A61K9/16GK102038888SQ20091019756
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月22日
發(fā)明者史秀峰, 安紅梅, 沈克平, 胡兵 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院