專(zhuān)利名稱(chēng)：：黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療瘧疾的藥物中應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物，具體涉一種黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療瘧疾的藥物中應(yīng)用，尤其是一種黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物中應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：瘧疾是地球上發(fā)生最頻繁的寄生蟲(chóng)病，是由按蚊進(jìn)行傳播、具有潛在致命危險(xiǎn)的疾病。每年全球有5億左右的瘧疾病例，導(dǎo)致超過(guò)100萬(wàn)人死亡，絕大部分發(fā)生在非洲。世界衛(wèi)生組織指出，瘧疾平均每30秒殺死一個(gè)5歲以下的兒童。通常，瘧疾由瘧原蟲(chóng)引起，帶有瘧原蟲(chóng)的雌按蚊叮咬人體后，將瘧原蟲(chóng)注入人體，經(jīng)1020天會(huì)發(fā)生典型的瘧疾臨床癥狀，可分為四期發(fā)冷期、發(fā)熱期、出汗期和間歇期。瘧疾的反復(fù)發(fā)作后，病人會(huì)出現(xiàn)貧血、肝脾腫大，甚至出現(xiàn)腦型、超高熱型、厥冷型和胃腸型等兇險(xiǎn)癥狀，嚴(yán)重的會(huì)危及生命。由于已有抗瘧藥物的耐藥性不斷增加，瘧疾的發(fā)病率日益增加，亟待具有新型治療作用的抗瘧藥物的發(fā)現(xiàn)。紅細(xì)胞內(nèi)期的瘧原蟲(chóng)在其酸性食物泡內(nèi)水解宿主的血紅蛋白以獲得自身生命所需的能量和氨基酸。生物學(xué)研究表明，在瘧原蟲(chóng)的食物泡內(nèi)包涵一系列的水解酶，如天冬氨酸蛋白酶(plasm印sins)，半胱氨酸蛋白酶(falcipains)，和金屬蛋白酶(falcilysins)。這些酶已成為瘧疾化學(xué)治療的潛在的靶標(biāo)。半胱氨酸蛋白酶是分子量約為21000-30000的蛋白質(zhì)，在pH4_6.5時(shí)具有最高水解活性，它的活性部位具有半胱氨酸殘基。瘧原蟲(chóng)的半胱氨酸蛋白酶屬于木瓜蛋白酶家族。已知的瘧原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶有四個(gè)亞型，falcipain-l(瘧原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶-l)，falcipain-2A(瘧原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶-2A)，falcipain-2B(瘧原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶-2B)，falcipain-3(癥原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶-3)。其中，F(xiàn)alcipain1是第一個(gè)表達(dá)得到的癥原蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶，生物學(xué)研究表明，它對(duì)瘧原蟲(chóng)的無(wú)性生殖階段并無(wú)影響，但能顯著的影響卵囊的功能。Falcipain-2A，falcipain-2B具有97%的同源性，僅在氨基酸序列的7位有所不同。通過(guò)寡核苷酸探針的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，falcipain-2BmRNA的表達(dá)水平比f(wàn)alcipain-2A低。然而falcipain-2A和falcipain-2B在癥原蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)體晚期其表達(dá)的時(shí)間依賴(lài)性和峰值極為相似，這表明兩種不同的亞型具有相似的生物學(xué)功能。Falcipain-3與falcipain-2在催化域有66.6%的同源性，但是它們表達(dá)的階段有所不同。Falcipain-2在營(yíng)養(yǎng)體階段表達(dá)達(dá)到最高峰，而falcipain-3在更為成熟的瘧原蟲(chóng)階段表達(dá)達(dá)到高峰。在這幾種亞型中，對(duì)于falcipain-2的研究最多，因此其抑制劑的開(kāi)發(fā)亦受到更為廣泛的關(guān)注。中醫(yī)中藥治療瘧疾已有很長(zhǎng)的歷史，比如在《素問(wèn)*剌虐論》中就提出了用針灸預(yù)防治療瘧疾，在中草藥方面，除了聞名世界的青蒿外，威靈仙、水蜈蚣、鴉膽子、常山、鵝不食草、檳榔、翻白草、石龍芮等也在民間用來(lái)治療瘧疾。從中藥青蒿中發(fā)現(xiàn)的活性化合物青蒿素用于治療瘧疾取得了很好的效果，廣泛用于臨床，為中草藥治療瘧疾開(kāi)辟了一條新的道路。本發(fā)明人通過(guò)多年的基礎(chǔ)研究積累了2000多種，并建立了天然產(chǎn)物庫(kù)，通過(guò)對(duì)庫(kù)中化合物進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)了抗瘧作用的黃酮類(lèi)化合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于從中藥黃酮類(lèi)化合物中尋找具有抗虐活性的化合物。本發(fā)明提供了一種黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療瘧疾的藥物中應(yīng)用。本發(fā)明所述的黃酮苷類(lèi)化合物，具有以下結(jié)構(gòu)通式之一種<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(B)式中&為香豆酰基、反式香豆酰基或咖啡?；?；R2為香豆?；?、反式香豆?；?、咖啡?；?yàn)闅?。這兩類(lèi)黃酮苷類(lèi)化合物分布在植物界的許多種植物中，可以從植物中分離得到，也可以用化學(xué)合成的方式獲得。所述的黃酮類(lèi)化合物為Ste,alustrosideA、Ste,alustrosideD、銀椴苷、山奈酚3-0-13-(6"-咖啡?；咸堰拎擒?或山奈酚3-(2，4-di-E-p-香豆?；罄钐擒?。本發(fā)明所述的黃酮類(lèi)化合物銀椴苷與Falcipain-2蛋白酶結(jié)合活性測(cè)定結(jié)果證明銀椴苷與FP-2蛋白有明顯的結(jié)合，結(jié)果顯示5個(gè)黃酮苷類(lèi)化合物對(duì)falcipain-2酶均具有抑制作用，均有較好的體外抗瘧原蟲(chóng)活性。顯示這5個(gè)化合物具有抗瘧疾作用，可用于制備治療瘧疾的藥物組合物。本發(fā)明另一目的是提供一組以所述黃酮苷類(lèi)化合物為活性成分，用于治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物組合物。本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療有效量的黃酮類(lèi)化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。其中活性成分在藥物組合物中的重量為5-95%。所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水燈；填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如明膠、聚乙烯吡咯烷酮；濕潤(rùn)劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣、碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣、聚乙二醇等、另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。本發(fā)明化合物可以組合物的形式通過(guò)口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其職稱(chēng)常規(guī)的固體制劑如片劑、顆粒劑、膠囊等或制成液體制劑如水或油懸浮劑、糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水貨油性懸浮劑等。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。圖1陽(yáng)性對(duì)照與FP-2蛋白相互作用的傳感圖圖2銀椴苷與FP-2蛋白相互作用的傳感圖圖l和圖2表示化合物與FP-2結(jié)合的動(dòng)力學(xué)曲線圖，其中各條線由上到下代表的化合物濃度依次為1X10—5M、5X10—6M、2.5X10—6M、1.25X10—6M、6.25X10—7M、3.125X10—7M和0。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:Ste,alustrosideA、D的制備長(zhǎng)苞冷杉干燥的地上部分22kg粉碎成粗粉，用200L的80%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮成25L稠浸膏。浸膏加10L水稀釋后分別以氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，收集各萃取部分，分別濃縮成浸膏。其中乙酸乙酯萃取部分的浸膏300g，以甲醇溶解過(guò)濾后進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇梯度洗脫(io:ii:iov/V)，用薄層色譜檢查洗脫流分，具有相同單一斑點(diǎn)的流分合并，濃縮，得流分1-10，其中第1流分經(jīng)進(jìn)一步硅膠色譜純化，得到黃色無(wú)定形粉末，結(jié)構(gòu)鑒定為StenopalustrosideD，共58mg，第2流分經(jīng)進(jìn)一步硅膠色譜純化，得到另一個(gè)黃色無(wú)定形粉末，結(jié)構(gòu)鑒定為StenopalustrosideA，共76mg。StenopalustrosideA的結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>D的結(jié)構(gòu)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>實(shí)施例2:銀椴苷的制備取干燥蜀葵花5kg，用90%乙醇回流提取2次，每次2h，然后用50%乙醇回流提取2次，每次lh。提取液合并，減壓濃縮，浸膏加適量水，分別用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇依次萃取。醋酸乙酯萃取部分50g經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿一甲醇(1:11:5V/V)系統(tǒng)梯度洗脫，反復(fù)常壓及減壓硅膠柱色譜分離，凝膠S印hadexLH—20柱純化，得到8個(gè)流分，其中第2流分濃縮干燥后為成黃色粉末狀，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為銀椴苷，共53mg。銀椴苷的結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>實(shí)施例3:山奈酚3-0-13-(6"-咖啡?；咸堰拎擒?的制備西藏冷杉干燥的地上部分10kg粉碎成粗粉，用150L的75X乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮成15L稠浸膏。浸膏加8L水稀釋后分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，收集各萃取部分分別濃縮成浸膏。其中氯仿萃取部分的浸膏1638，以甲醇溶解過(guò)濾后進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(1:11:5V/V)梯度洗脫，用薄層色譜檢查洗脫流分，具有相同單一斑點(diǎn)的流分合并，濃縮，得流分l-14，其中第8流分經(jīng)進(jìn)一步硅膠色譜純化，得到黃色無(wú)定形粉末，結(jié)構(gòu)鑒定為山奈酚3-0-13-(6"-咖啡?；咸堰拎擒?，共86mg。山奈酚3-0-13-(6"_咖啡?；咸堰拎擒?的結(jié)構(gòu)式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>實(shí)施例4:山奈酚3-(2，4-di-E_p-香豆?；罄钐擒?西藏冷杉干燥的地上部分10kg粉碎成粗粉，用150L的75%乙醇回流提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮成15L稠浸膏。浸膏加8L水稀釋后分別以石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，收集各萃取部分并濃縮成浸膏。其中乙酸乙酯萃取部分的浸膏109g，以甲醇溶解過(guò)濾后進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(i:ii:10V/v)梯度洗脫，用薄層色譜檢查洗脫流分，具有相同單一斑點(diǎn)的流分合并，濃縮，得流分l-6，其中第5流分濃縮干燥后得到黃色無(wú)定形粉末，結(jié)構(gòu)鑒定為山奈酚3-(2，4-di-E-p-香豆?；罄钐擒?，共38mg。山奈酚3-(2，4-di-E_p-香豆?；罄钐擒?的結(jié)構(gòu)式如下實(shí)施例5本發(fā)明化合物銀椴苷與Falcipain-2蛋白酶結(jié)合活性測(cè)定Falcipain-2蛋白酶與銀椴苷結(jié)合活性的篩選和動(dòng)力學(xué)常數(shù)的測(cè)定基于SPR(表面等離子共振)原理，使用的儀器是Biacore3000(BiacoreAB，Uppsala，Sweden)。(1)Falcipain-2質(zhì)粒(pQE30-Fa12)的構(gòu)建根據(jù)Falcipain-2cDNA序列設(shè)計(jì)引物，正向和反向引物分另U為5，CGTGGATCCCAAATGAATTATGAAG3，和5，ATATGTCGACTTATTCAATTAATGGAATG3，，包含BamHI和SalI酶切位點(diǎn)，通過(guò)PCR擴(kuò)增Falcipain-2片段，將酶切后的PCR產(chǎn)物和表達(dá)載體pQE30連接后鑒定正確，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌M15(Qiagen)進(jìn)行表達(dá)。(2)Falcipain-2(FP-2)蛋白的表達(dá)與純化將構(gòu)建好的質(zhì)粒pQE30-Fa12轉(zhuǎn)入大腸桿菌M15中得到表達(dá)工程菌，將工程菌培養(yǎng)于含100g/mL氨芐青霉素和50g/mL卡那霉素的10mLLB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過(guò)夜(蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L)。然后按1:100轉(zhuǎn)接入1L含氨芐青霉素和卡那霉素的新鮮LB培養(yǎng)基中，37°CT，220轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)。當(dāng)0D600達(dá)到約0.8時(shí)，加入IPTG至終濃度0.5mM，同時(shí)將溫度降到25t:培養(yǎng)12小時(shí)進(jìn)行蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。4000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘收集菌體，收集好后放于-8(TC超低溫冰箱保存過(guò)夜。將菌體用20mL的緩沖液1(20mMTris-Cl，O.5MNaCl，and10mM咪唑，pH8.0)懸起，將懸浮液冰浴上超聲波破碎(300W，工作30分鐘，一次5秒，中間間隔10秒)。破碎后得到的細(xì)胞勻漿在4°C，以10000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，棄上清，用20mL的緩沖液2(6M胍HCl20mMTris_Cl250mMNaCl20mM咪唑，pH8.0)溶解沉淀，室溫下溫和攪拌1小時(shí)，10000轉(zhuǎn)/分離心30min，并將上清上樣到用綁定緩沖液(Bindingbuffer)2(6MguanidineHCl，20mMTris-Cl，250mMNaCl，pH8.0)平衡好的Ni"-NTA柱上，先后用沖洗緩沖液1(8M尿素，20mMTris-Cl，500mMNaClpH8.0)和沖洗緩沖液2(8M尿素，20mMTris-Cl，30mM咪唑)各30ml洗去非特異性結(jié)合的雜蛋白，再用洗脫緩沖液(8M尿素，20MmTris-Cl，1M咪唑)10ml洗去目的蛋白，用SDS-PAGE檢測(cè)蛋白的分子量和純度。(3)FP-2包涵體蛋白的復(fù)性將純化得到的蛋白加入10mMDTT，37。C下溫浴45分鐘后，將蛋白溶液稀釋到10g/ml進(jìn)行透析(透析液100mMTris-Cl，lmMEDTA，20%甘油，250mML-精氨酸，lmM谷胱甘肽，lmM氧化型谷胱甘肽(GSSG)，pH8.0)過(guò)夜。將透析好的蛋白濃縮即可用作酶抑制活性的測(cè)定。(4)FP-2蛋白的偶聯(lián)徹底清洗Biacore3000機(jī)器后，用PBS緩沖液(10mM4_羥基哌嗪乙磺酸，150mMNaCl，3mMEDTAand0.005%(v/v)表面活性劑P20，pH7.4)平衡機(jī)器至基線平穩(wěn)。0.2MN-乙基-N'_二甲基氨丙基碳二亞胺和50mMMN-羥基琥珀酰亞胺(EDC/NHS)1:1混和，以5iiL/min進(jìn)樣7分鐘以活化芯片表面。FP-2蛋白用10mM乙酸鈉，pH4.2，稀釋至終濃度為69iig/ml，以5iiL/min流速進(jìn)樣。最后，用1M鹽酸乙醇胺，pH8.5以5yL/min流速進(jìn)樣7分鐘，封閉芯片表面，最終FP-2蛋白的偶聯(lián)量為9300RU左右。(5)化合物篩選底物Z-Phe-Arg-pNAHC1(BachemAG)作為陽(yáng)性對(duì)照。銀椴苷(實(shí)施例2制得)用100%匿SO溶解，母液濃度為10mM。用HBS-EP緩沖液稀釋化合物，至終濃度為1PM和10iiM，DMSO的終濃度為0.1%。根據(jù)銀椴苷與芯片上FP-2蛋白的結(jié)合的RU(ResponseUnit，共振單位)值，判斷化合物是否具有結(jié)合活性。有結(jié)合活性的化合物可進(jìn)行詳細(xì)的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證明銀椴苷與FP-2蛋白有明顯的結(jié)合。[OOM](6)動(dòng)力學(xué)測(cè)定銀椴苷用工作緩沖液HBS-EP(含O.1%匿SO)，分別配成不同的濃度梯度，以30iU/min進(jìn)樣lmin，解離2min，然后用相同緩沖液穩(wěn)定2min。得到銀椴苷與FP-2蛋白相互作用的傳感圖，再用Biacore分析軟件中的l:1(Langmuir)結(jié)合模型或穩(wěn)態(tài)模型進(jìn)行擬合，得到確切的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)常數(shù)。⑥試驗(yàn)結(jié)果表1陽(yáng)性對(duì)照和銀椴苷與FP-2蛋白結(jié)合常數(shù)的測(cè)試結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例6本發(fā)明化合物對(duì)falcipain-2蛋白酶百分抑制活性的測(cè)定(1)Falcipain-2(FP-2)蛋白的表達(dá)與純化和FP-2包涵體蛋白的復(fù)性參見(jiàn)實(shí)施例5(2)本發(fā)明化合物對(duì)FP-2酶抑制活性的測(cè)定在197iiL的100mMNaOAc，10mMDTT，pH5.5的buffer體系中加入FP-2蛋白(終濃度10g/ml)和溶于匿SO的待測(cè)化合物(實(shí)施例1-4制得)溶液，分別為StenopalustrosideA、StenopalustrosideD、銀椴苷、山奈酚3-0-P-(6"-咖啡?；咸堰拎擒?、山奈酚3-(2，4-di-E-p-香豆?；罄钐擒?的溶液，終濃度10M和0M(陰性對(duì)照)，室溫下孵育30min后用MDSpectraMaxM5酶標(biāo)儀于excitation(激發(fā)波長(zhǎng))355nm;emission(發(fā)射波長(zhǎng))460nm處連續(xù)測(cè)15min內(nèi)的RFU值，計(jì)算出反應(yīng)速率Km，以下列公式得出待測(cè)化合物在IOM下百分抑制率，計(jì)算公式為(對(duì)照組Km值-實(shí)驗(yàn)組Km值)/對(duì)照組Km值X100%(3)化合物活性測(cè)試結(jié)果表2.黃酮苷類(lèi)化合物對(duì)falcipain-2抑制率數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例7本發(fā)明化合物對(duì)falcipain-2蛋白酶半數(shù)有效抑制濃度(IC5。)的測(cè)定選取10M抑制率在50%以上的化合物測(cè)IC5。，選擇實(shí)施例1-4制得StenopalustrosideA、銀椴苷、山奈酚3_0_P-(6"-咖啡?；咸堰拎擒?的溶液，實(shí)驗(yàn)方法和體系如實(shí)施例6。根據(jù)化合物在不同濃度下FP-2酶活的反應(yīng)速率Km，計(jì)算化合物在不同濃度下對(duì)FP-2酶活的抑制率，使用Sigmoidal公式用origin軟件進(jìn)行擬合得到化合物的ICs。值，結(jié)果見(jiàn)表3。表3.黃酮苷類(lèi)化合物對(duì)falcipain-2酶活抑制IC5。<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果顯示上述黃酮苷類(lèi)化合物對(duì)falcipain-2酶均具有抑制作用，提示上述化合物具有抗瘧疾作用。實(shí)施例7黃酮苷類(lèi)化合物體外抗瘧活性測(cè)定抗癥活性可以通過(guò)測(cè)量癥原蟲(chóng)LDH活性來(lái)確定(Jain，M.;Khan，S.I.;Tekwani，B丄；Jacob，M.R.;Singh，S.;Singh，P.P.;Jain，R.Synthesis,antimalarial,antileishmanial，andantimicrobialactivitiesofsome8_quinolinamineanalogues.Bioorg.Med.Chem.2005，13，4458-4466.)。在含10iiL連續(xù)稀釋測(cè)試樣本的96孔板的每個(gè)孔中加入感染了D6orW2株P(guān).falciparum的紅細(xì)胞混懸液(200iiL，在RPMI1640培養(yǎng)集中加入10%人血清和601g/mL阿米卡星，使瘧原蟲(chóng)血癥達(dá)到2%，紅細(xì)胞壓積達(dá)到2%)，然后用90%N2，5%02，and5%C02組成的混合氣體沖洗板，在培育房?jī)?nèi)培育72小時(shí)，溫度保持在37°C。LDH活性用MalstatTM試劑(FlowInc.，Portland,OR)測(cè)定，測(cè)定程序參照Makler禾口Hinrichs的程序(M.T.MaklerandD.J.Hinrichs,MeasurementofthelactatedehydrogenaseactivityofPlasmodiumfalciparumasanassessmentofparasitemia.J.Am.J.Trop.Med.Hyg.1993,48(2):205-210)。即將20iiL培育的混合物同100iiLheMalstat試劑混合，在室溫下培育30分鐘.然后加入20微升NBT/PES的混合物(NBT/PES比例為1:1)(Sig腿，St.Louis，MO)，在黑暗條件下培育1小時(shí)。之后，加入100iiL5%醋酸溶液終止這一反應(yīng)，并用650nm來(lái)檢測(cè)板.藥物對(duì)照組中加入青蒿素和氯喹。從劑量-效應(yīng)曲線中計(jì)算出IC5。。測(cè)定化合物抗瘧活性的選擇性指標(biāo)時(shí)，也要測(cè)定他們?cè)隗w外對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的毒性.測(cè)試在96孔組織培養(yǎng)板中進(jìn)行(J.Mustafa,S.I.Khan，G.Ma，L.A.WalkerandI.A.Khan，SynthesisandAnticancerActivitiesofFattyAcidAnalogsofPodophyllotoxin.Lipids.2004，39(2):167-172.)。在96孔板中以25，000個(gè)/孔的密度種植非洲綠猴腎異倍體細(xì)胞并培育24小時(shí).加入不同濃度的(實(shí)施例l-4制得化合物)樣品，分別為StenopalustrosideA、StenopalustrosideD、銀椴苷、山奈酚3-0-13-(6"-咖啡酰基葡萄吡喃糖苷)、山奈酚3-(2，4-di-E-p-香豆?；罄钐擒?的DMS0溶液，濃度依次為528.8ng/ml、1586.4ng/ml、4760g/ml，繼續(xù)培育48小時(shí)。利用NeutralRedassay方法測(cè)定存活細(xì)胞數(shù)，從劑量-效應(yīng)曲線中計(jì)算出IC5。.用阿霉素作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。黃酮苷類(lèi)化合物的對(duì)D6和W2的IC5。值如下表菌輸cm，2StenopatetrosideA跳6StenopalustosMeD68,4165銀機(jī)苷'123106山奈鼢3-0-P-(6"-咖啡?；咸堰拎菂`)55.891.3山奈鼢3-a4-di-E-p-香.W酰基鼠個(gè)糖苷.)45.1術(shù)鍾P^爾、"土《26,4160胃筒M<26,4《26,4結(jié)果顯示，5個(gè)黃酮苷類(lèi)化合物均有較好的體外抗瘧原蟲(chóng)活性。權(quán)利要求一種黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療瘧疾的藥物中應(yīng)用，其特征在于所述黃酮苷類(lèi)化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式之一種式中R1為香豆?；?、反式香豆?；蚩Х弱；籖2為香豆?；?、反式香豆?；⒖Х弱；?yàn)闅洹?.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的黃酮苷類(lèi)化合物從植物中提取或化學(xué)合成得到。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物。4.一種治療瘧疾的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物含有如權(quán)利要求l中所述的黃酮苷類(lèi)化合物活性成分和藥學(xué)上可以接受的載體。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于活性成分在藥物組合物中的重量含量為5-95%。全文摘要本發(fā)明提供了一種黃酮苷類(lèi)化合物在制備治療瘧疾的藥物中應(yīng)用，尤其是在制備治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物中應(yīng)用。所述黃酮苷類(lèi)化合物具有以下結(jié)構(gòu)通式之一種式中R1為香豆?；⒎词较愣辊；蚩Х弱；?；R2為香豆酰基、反式香豆?；?、咖啡?；?yàn)闅?。試?yàn)表明，該黃酮苷類(lèi)化合物與FP-2蛋白有明顯的結(jié)合明顯的作用。因此，可用于制備治療瘧疾的藥物組合物。它含有黃酮苷類(lèi)化合物活性成分和藥學(xué)上可以接受的載體，活性成分在藥物組合物中的重量含量為0.1-99.5％。藥物劑型可以是片劑、顆粒劑、膠囊、水或油懸浮劑、糖漿、注射液、或懸浮劑等。文檔編號(hào)A61K31/7048GK101693037SQ20091019747公開(kāi)日2010年4月14日申請(qǐng)日期2009年10月21日優(yōu)先權(quán)日2009年10月21日發(fā)明者單磊,盧偉強(qiáng),張衛(wèi)東,張壽德,李洪林,王立言,蘇娟,陳瞳,黃瑾申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué);華東理工大學(xué);