專利名稱：紫菜藻膽蛋白在制備用于抗氧化及提高免疫力的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，具體地講，本發(fā)明涉及紫菜藻膽蛋白在制備用于抗氧化及提高免疫力的藥物中的應用。

背景技術：
活性氧在生物體內發(fā)揮著不同的作用，一方面它們與能量供給、細胞生長調節(jié)、細胞間信號傳遞以及重要生物分子的合成有重要關系，另一方面它們的存在對生物分子也會有相當的損害，通過加成、消除、取代以及提取等反應，可以攻擊細胞膜脂質，使其中的多不飽和脂肪酸脫去烯丙基，產生脂氧自由基，進而形成過氧化脂質，分解后產生丙二醛(MDA)，與含有游離氨基酸的蛋白質、磷脂肽乙醇胺及核酸等物質形成Schiff堿；Schiff堿攻擊蛋白質，會使蛋白質的多肽鏈斷裂，或使蛋白質交聯(lián)，生成以異常鍵連接的大分子，致使蛋白質變性，影響其功能；Schiff堿攻擊核酸，一方面可直接攻擊堿基使其互相結合，或生成過氧化物，造成堿基破壞，另一方面還可以從戊糖部分提取氫，會造成DNA主鏈斷裂?？傊绊懮矬w功能的各個方面。
在生物體內，存在著多種清除活性氧的體系以維持體內活性氧的產生和清除。首要防御手段是避免氧分子(O2)發(fā)生單電子還原反應，通過細胞色素氧化酶的催化作用，使氧分子(O2)直接還原為水。其后是超氧化物歧化酶(SOD)催化·O2或H2O歧化為O2與過氧化氫(H2O2)，過氧化氫酶催化過氧化氫形成水與O2以及谷光甘肽過氧化物酶或谷光甘肽轉硫酶催化LOOH成為LOH。除了以上的抗氧化酶以外，生物體內還存在一些小分子抗氧化劑，例如維生素E、維生素C、谷光甘肽、尿酸、胡蘿卜素、血漿銅藍蛋白以及硒、錳、鋅等微量元素。在正常情況下，由于體內各個抗氧化體系的存在，體內氧自由基的產生和清除是平衡的。一旦氧自由基產生過多或抗氧化體系出現故障，體內氧自由基代謝出現失衡，或稱氧化應激態(tài)，此時外加一些抗氧化劑協(xié)助體內維持氧代謝的平衡對防止疾病的發(fā)生和保持機體的健康是十分有益的。
過去研究的焦點主要集中在一些具有抗氧化性的維生素，如維生素E，維生素C，維生素A和β一胡蘿卜素等。近年來隨著回歸自然的風潮和一些人們逐漸關注一些植物來源的物質，如黃酮類、萜類、多酚類、烯酸、多糖、多肽等。而天然抗氧化劑也以從單純作為油脂和含脂食品的抗氧化劑，發(fā)展到作為具有保護人體細胞組織，保護心腦血管、循環(huán)系統(tǒng)，抗癌及延緩衰老等功能的藥物和食品添加劑。尋找高效低毒的天然抗氧化劑也是目前抗氧化劑和自由基生物學研究的主要方向和待解決的問題之一。
紫菜屬于紅藻門(Rhodophyta)、原紅藻綱(Protoflorideophyceae)、紅毛菜科(Bangiaceae)、紫菜屬(Porphyra)，是我國三大經濟海藻之一。作為一種營養(yǎng)價值較高的海藻，紫菜富含糖、蛋白質、脂肪、無機鹽和維生素，作為食品和用于治病，在我國已有上千年的歷史，民間早有用其去火、降血壓以及治療一些淋巴結核病等。


發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是采用高效低毒的天然抗氧化劑獲得用于抗氧化及提高免疫力的藥物。
本發(fā)明所要解決的技術問題可通過如下技術方案實現 一種用于抗氧化及提高免疫力的藥物，所述藥物包含紫菜藻膽蛋白和藥物學上常用的輔料。
所述藥物可為口服液、粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑或丸劑。
所述藥物可為糖漿劑。
本發(fā)明藥物中所用的原料紫菜藻膽蛋白粗提液是選取紫菜作為原料，通過2006年7月5日公開的中國發(fā)明專利申請2004100990370中的制備方法制備的上清液，具體步驟如下 (1)、進行高速搗碎，高速搗碎以間隙搗碎方式進行，以免溫升超過4℃以上，高速搗碎轉速為10000～12000轉/分，后以5000轉/分低速離心15分鐘的方法得到紫菜最初提取液； (2)、將上述所提取溶液加硫酸銨至20％飽和度，接著以10000轉/分中速離心15分鐘后取上清液，繼續(xù)加硫酸銨至50％飽和度，再以10000轉/分中速離心15分鐘后取沉淀； (3)、將沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸鹽緩沖液溶解，加硫酸銨至10％飽和度，中速離心取上清液，繼續(xù)加硫酸銨至40％飽和度，中速離心取沉淀，中速離心都取為10000轉/分，中速離心時間均是15分鐘； (4)、再將沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸鹽緩沖液溶解后以15000轉/分，高速離心30分鐘，得到上清液； 以上步驟都在4℃下進行。
本發(fā)明藥物可增大主要免疫器官；可顯著提高小鼠血清SOD及GSH-PX的活力，顯著降低其肝組織MDA的生成。
本發(fā)明原料還具有以下優(yōu)點 1、藻膽蛋白來源豐富，我國是紫菜生產大國，年產量20億張左右，目前市場上大多是自然涼干的紫菜，銷售價格在每千克20-30元，而每噸飼料級螺旋藻干粉6-8萬元人民幣(60-80元/千克)，曾一度高達每kg 30美元(約240元/千克)，是紫菜的十倍，因此本發(fā)明所用原料來源廣泛，無需加工，成本相對于螺旋藻便宜的多； 2、藻膽蛋白提取方便，根據之前制備流程(發(fā)明專利申請?zhí)?004100990370)，目前從紫菜提取高純度藻膽蛋白工藝簡單，成本低廉，得率較高； 3、藻膽蛋白作為天然提取物具有無毒無副作用的特點；
具體實施例方式 為了使本發(fā)明實現的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體例，進一步闡述本發(fā)明。
實施例1 按照制劑學糖漿劑的常規(guī)工藝制備本發(fā)明藥物口服劑，所得口服劑命名為口服液1#，其中原料與輔料的配比如下 紫菜藻膽蛋白粗提液10g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸餾水加至1000ml 本實施例中所用的原料紫菜藻膽蛋白粗提液是選取紫菜作為原料，通過2006年7月5日公開的中國發(fā)明專利申請2004100990370中的制備方法制備的上清液，具體步驟如下 (1)、進行高速搗碎，高速搗碎以間隙搗碎方式進行，以免溫升超過4℃以上，高速搗碎轉速為10000～12000轉/分，后以5000轉/分低速離心15分鐘的方法得到紫菜最初提取液； (2)、將上述所提取溶液加硫酸銨至20％飽和度，接著以10000轉/分中速離心15分鐘后取上清液，繼續(xù)加硫酸銨至50％飽和度，再以10000轉/分中速離心15分鐘后取沉淀； (3)、將沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸鹽緩沖液溶解，加硫酸銨至10％飽和度，中速離心取上清液，繼續(xù)加硫酸銨至40％飽和度，中速離心取沉淀，中速離心都取為10000轉/分，中速離心時間均是15分鐘； (4)、再將沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸鹽緩沖液溶解后以15000轉/分，高速離心30分鐘，得到上清液； 以上步驟都在4℃下進行。
實施例2 按照與實施例1相同的方法制備本發(fā)明藥物口服劑，所得口服劑命名為口服液2#，所不同的是原料與輔料的配比如下 紫菜藻膽蛋白粗提液20g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸餾水加至1000ml 實施例3 按照與實施例1相同的方法制備本發(fā)明藥物口服劑，所得口服劑命名為口服液3#，所不同的是原料與輔料的配比如下 紫菜藻膽蛋白粗提液30g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸餾水加至1000ml 為了驗證本發(fā)明藥物口服液的有益效果，采用小鼠進行了如下藥效試驗 1、本發(fā)明藥物口服液對體重以及胸腺、肝臟、脾臟組織的影響 將昆明系小鼠隨機分為5組。其中4組小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，連續(xù)40d，另1組注射生理鹽水作為空白對照組。每3天稱體重1次，根據體重調整D-半乳糖用量；從第11d開始，空白對照組小鼠灌胃生理鹽水，模型組各鼠分別灌胃蒸餾水及本發(fā)明口服液1#、2#及3#，劑量為10ml/kg·d，1次/日，連續(xù)30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌藥后1h，取小鼠胸腺、肝臟、脾臟組織，測定各項指標，結果如下 表1本發(fā)明藥物口服液對各組的體重以及胸腺、肝臟、脾臟組織的影響 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 結果顯示本發(fā)明藥物口服液對小鼠體質量沒有明顯作用，與模型對照組比較，各劑量組的肝臟指數、胸腺指數和脾臟指數都有所增加，其中脾臟指數在口服液2#組差異顯著(p＜0.05)。胸腺指數在口服液1#組與口服液2#組差異顯著(p＜0.05)。同時，口服液2#和口服液3#也能夠使已經由D-半乳糖降低了免疫力的小鼠的肝臟指數得到極其顯著的增強(p＜0.01)，但只有采用口服液3#時肝指數才能高于正常水平。因此表明，本發(fā)明藥物口服液可以在一定程度上刺激小鼠免疫器官的發(fā)育，有增強機體免疫力的功能。
2.本發(fā)明藥物口服液對血清中超氧化歧化酶(SOD)活力的影響 同上，將昆明系小鼠隨機分為5組。其中4組小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，連續(xù)40d，另1組注射生理鹽水作為空白對照組。每3天稱體重1次，根據體重調整D-半乳糖用量；從第11d開始，空白對照組小鼠灌胃生理鹽水，模型組各鼠分別灌胃蒸餾水及本發(fā)明口服液1#、2#及3#，劑量為10ml/kg·d，1次/日，連續(xù)30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌藥后1h，挖眼取血，滴入事先備好含100U肝素鈉的離心管中，離心取血清。按SOD試劑盒說明書操作；對SOD活力進行測試，結果如下 表2本發(fā)明藥物口服液對SOD活力的影響 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 結果顯示本發(fā)明藥物口服液1#、2#及3#對應的SOD活力均比模型對照組及空白對照組高，其中采用口服液1#和2#時活力提高顯著，采用藥物口服液3#時提高極其顯著。
3.本發(fā)明藥物口服液對肝組織丙二醛(MDA)含量的影響 同上，將昆明系小鼠隨機分為5組。其中4組小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，連續(xù)40d，另1組注射生理鹽水作為空白對照組。每3天稱體重1次，根據體重調整D-半乳糖用量；從第11d開始，空白對照組小鼠灌胃生理鹽水，模型組各鼠分別灌胃蒸餾水及本發(fā)明口服液1#、2#及3#，劑量為10ml/kg·d)，1次/日，連續(xù)30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌藥后1h，取小鼠肝組織，稱重。加生理鹽水，冰浴勻漿，離心取上清制成10％的肝組織勻漿液。按照MDA試劑盒說明書操作；對MDA含量進行測試，結果如下 表3本發(fā)明藥物口服液對MDA生成的影響 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 結果顯示與模型對照組相比，采用本發(fā)明藥物口服液2#和3#時，MDA含量都有極其顯著的降低。表明本發(fā)明藥物口服液2#和3#可有效降低小鼠肝臟組織MDA的生成。
4.本發(fā)明藥物口服液對血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性的影響 同上，將昆明系小鼠隨機分為5組。其中4組小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，連續(xù)40d，另1組注射生理鹽水作為空白對照組。每3天稱體重1次，根據體重調整D-半乳糖用量；從第11d開始，空白對照組小鼠灌胃生理鹽水，模型組各鼠分別灌胃蒸餾水及本發(fā)明口服液1#、2#及3#，劑量為10ml/kg·d)，1次/日，連續(xù)30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌藥后1h，挖眼取血，滴入事先備好含100U肝素鈉的離心管中，離心取血清。按GSH-PX試劑盒說明書操作；對GSH含量進行測試，結果如下 表4本發(fā)明藥物口服液對GSH-PX活力的影響 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 結果顯示本發(fā)明藥物口服液1#、2#和3#對應的血清中GSH-PX活性均較模型對照組高，特別是采用口服液3#時，酶活性提高極為顯著，由此可知，本發(fā)明藥物口服液3#可提高小鼠血清中GSH酶的活力。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等同物界定。
權利要求
1.紫菜藻膽蛋白在制備用于抗氧化及提高免疫力的藥物中的應用。
2.一種用于抗氧化及提高免疫力的藥物，其特征在于所述藥物包含紫菜藻膽蛋白和藥物學上常用的輔料。
3.根據權利要求2所述的藥物，其特征在于所述藥物為口服液、粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑或丸劑。
4.根據權利要求2所述的藥物，其特征在于所述藥物為糖漿劑。
全文摘要
本發(fā)明一方面涉及紫菜藻膽蛋白在制備用于抗氧化及提高免疫力的藥物中的應用，另一方面涉及包含紫菜藻膽蛋白的藥物。本發(fā)明藥物經藥效試驗表明可增大主要免疫器官；顯著提高血清SOD及GSH-PX的活力；明顯降低其肝組織MDA的生成；對DPPH的清除率高；對紅細胞溶血和肝勻漿脂質過氧化的抑制率高。本發(fā)明藥物具有抗氧化活性及提高免疫力的功效。
文檔編號A61P39/06GK101711860SQ20091019568
公開日2010年5月26日 申請日期2009年9月15日 優(yōu)先權日2009年9月15日
發(fā)明者何培民, 時旭, 蔡春爾, 王源 申請人:上海海洋大學