專利名稱：蓬莪術(shù)環(huán)二烯的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請是中國專利申請200510043886.9的分案申請。本發(fā)明涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯衍生物，涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物的制備方法，涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物的醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)：
中藥莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulis Val.廣西莪術(shù)C.kwangsinensis S.G.Lee et C.F.Liang.和溫郁金C.wenyujin Y.H.Chen et C.Ling(習(xí)稱“溫莪術(shù)”)的干燥根莖，其揮發(fā)油主要化學(xué)成分為單萜、倍半萜類化合物，其中倍半萜和含氧倍半萜類衍生物為主要有效成分。
莪術(shù)揮發(fā)油一直是采用水蒸氣蒸餾法提取，由于莪術(shù)油含有較多的淀粉粒，在長時間的加熱蒸餾過程中易與水蒸氣、揮發(fā)油一起被蒸出，造成提取的揮發(fā)油中含有大量的泡沫，油水易形成乳濁液，難于分層，給下一步莪術(shù)揮發(fā)油的精制帶來難度。又因為揮發(fā)油中主要有效成分是大量的倍半萜衍生物，加熱時間過長會引起其發(fā)生分解與轉(zhuǎn)化，如蓬莪術(shù)環(huán)二烯發(fā)生周環(huán)反應(yīng)，蓬莪術(shù)環(huán)二烯(Furanodiene)轉(zhuǎn)變成莪術(shù)烯(Curzerene)。
蓬莪術(shù)環(huán)二烯是莪術(shù)揮發(fā)油中的主要成分，但目前尚沒有能夠大量制備該化合物的方法，且蓬莪術(shù)環(huán)二烯不穩(wěn)定，遇熱容易分解，變黃。
鑒于此，本發(fā)明人提供了大量制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯的制備方法；提供了質(zhì)量穩(wěn)定的蓬莪術(shù)環(huán)二烯的衍生物，提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯衍生物的制備方法，提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯其衍生物的醫(yī)藥用途。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯的衍生物。
本發(fā)明提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯衍生物的制備方法。
本發(fā)明提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯的制備方法。
本發(fā)明提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物在制備解熱、消炎藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物在制備抗病毒藥方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的蓬莪術(shù)環(huán)二烯衍生物如式I所式
式I 其中R可以是

其中n＝0～15； R可以是

其中Ra＝氫、烷基、烷氧基或鹵素，烷氧基為CH3O(CH2)n，n＝1～5； R可以是

其中Rb＝氫、烷基、烷氧基或鹵素，烷氧基為CH3O(CH2)n， n＝1～5。
R可以是CH3(CH2)n-，其中n＝0～15； 其優(yōu)選為2-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯，2-(3-甲基苯甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯，2-(吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯，2-乙基蓬莪術(shù)環(huán)二烯，2-(叔丁基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯，2-丁基蓬莪術(shù)環(huán)二烯，2-(正辛基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯。
本發(fā)明提供的衍生物以蓬莪術(shù)環(huán)二烯為原料，經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)制備而成。蓬莪術(shù)環(huán)二烯可以從含有蓬莪術(shù)環(huán)二烯的莪術(shù)中提取，采用超臨界CO2法萃取，優(yōu)選條件萃取壓力為10-50MPa，萃取溫度為20-90℃，解析斧的溫度為20-90℃，壓力為3-30MPa，當(dāng)系統(tǒng)達到選定的壓力、溫度時，調(diào)節(jié)CO2的流量為20-80kg/hr，萃取時間為2-10小時，用1～8倍量醇類溶劑洗滌，得白色針狀晶體，即為蓬莪術(shù)環(huán)二烯；前述超臨界方法得到的萃取物也可以經(jīng)過柱層析，可獲得純度高于98％的蓬莪術(shù)環(huán)二烯對照品，優(yōu)選為以硅膠柱色譜層析，干柱法制備，用石油醚除去不含氧的單萜及倍半萜類化合物，將色帶進行切柱收集，用乙酸乙酯萃取，回收溶劑，殘留物用甲醇重結(jié)晶，即得蓬莪術(shù)環(huán)二烯白色針狀結(jié)晶對照品。
本發(fā)明將超臨界CO2萃取技術(shù)應(yīng)用于提取、分離蓬莪術(shù)環(huán)二烯單體，純度高，可操作性強，是一項集提取、分離、濃縮為一體的新技術(shù)，具有提取效率高、操作周期短，分離程度高，避免有效成分發(fā)生分解與轉(zhuǎn)化，沒有環(huán)境污染，CO2可循環(huán)使用等一系列優(yōu)點。
以下以具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但并不限于此。

具體實施例方式 制備例1制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯 取莪術(shù)藥材1.5kg，粉碎成粗粉(過2號篩)，投入HA221-50-06型超臨界萃取裝置中，以壓力28Mpa，60℃，CO2流量為25kg/hr的條件萃取1.5小時，解析釜I、II的壓力分別為10、6Mpa，溫度分別為50、45℃，解析得到黃色或棕色油狀提取物120g，萃取得率8.0％。將萃取物冰箱放置，析出結(jié)晶加入甲醇洗滌，得白色針狀晶體，mp.69～71℃。經(jīng)UV、IR、NMR、MS等波譜技術(shù)鑒定，分子式C15H20O，分子量216.32，結(jié)構(gòu)為蓬莪術(shù)環(huán)二烯。
IR(KBr)3052，3027(＝CH)，2968，2928，2890，2856，1622(C＝C)，1552(C＝C，F(xiàn)uran)，1445，1385(CH3，CH2)，1256，1131，1076(C-O-C Furan)，1026，986，893，847，778，754cm-1。
UV(MeOH)λmax＝215nm(ε＝104)。
1H-NMR(400MHz，C6D6)δ＝7.16(s；1H，2-H)，4.94(t，J＝15.6Hz；1H，9-H)，4.86(t，J＝7.2Hz；1H，5-H)，3.86(d，J＝15.6Hz；1H，11-Hb)，3.61(d，J＝15.6Hz；1H，11-Ha)，3.19(d，J＝7.2Hz；2H，4-Hb)，2.22(m；1H，7-Ha)，2.12(m；1H，8-H)，1.90(s；3H，3-CH3)，1.82(m；1H，7-Hb)，1.62(s；3H，6-CH3)，1.37(s；3H，10-CH3) 13C-NMR(100MHz，C6D6)δ＝137.2(s；C-2)，122.6(s；C-3)，9.6(s；C-3-CH3)，119.7(s；C-3α)，25.4(s；C-4)，128..7(s；C-5)，129.3(s；C-6)，17.1(s；C-6-CH3)，40.4(s；C-7)，27.8(s；C-8)，129.9(s；C-9)，135.1(s；C-10)，16.9(s；C-10-CH3)，42.0(s；C-11)，150.7(s；C-11α)。
MS(EI，70eV，m/z.P％)216(34；

，C15H20O)，201(11)，159(25)，145(30)，143(13)，133(12)，131(17)，119(11)，117(11)，115(10)，109(26)，108(100)，107(23)，105(23)，93(39)，91(35)，81(14)，79(24)，77(24)，65(11)，53(13)，51(6)。
蓬莪術(shù)環(huán)二烯結(jié)構(gòu)如下
制備例2制備蓬莪術(shù)環(huán)二烯對照品 取莪術(shù)藥材1.5kg，粉碎成粗粉(過2號篩)，投入HA221-50-06型超臨界萃取裝置中，以壓力28Mpa，60℃，CO2流量為25kg/hr的條件萃取1.5小時，解析釜I、II的壓力分別為10、6Mpa，溫度分別為50、45℃，解析得到黃色或棕色油狀提取物120g，取100～200目硅膠60g，干法裝柱，2g油狀提取物上樣，以300ml石油醚洗脫，洗脫液流干后，硅膠分為兩層明顯色帶，截取紅色帶硅膠，加乙酸乙酯100ml，超聲30min，過濾，重復(fù)3次，合并濾液，回收乙酸乙酯，殘留物加甲醇微熱使其溶解，放冷析出白色針狀，重結(jié)晶三次，得蓬莪術(shù)環(huán)二烯對照品，純度為98.4％。
制備例3制備2-乙酰基蓬莪術(shù)環(huán)二烯 在裝有回流冷凝管和滴液漏斗的三頸瓶中加入0.10mol的蓬莪術(shù)環(huán)二烯化合物，0.15mol三氯化鋁，40ml二硫化碳。將0.10mol乙酰氯用二硫化碳適量稀釋于滴液漏斗中，在機械攪拌下緩緩加入到三頸瓶中(約1-2滴/秒)。加完后，在室溫下攪拌2小時，反應(yīng)2小時，反應(yīng)完成后，在冰浴下，緩緩的往三頸瓶中滴加1∶1(v/v)水稀釋的濃鹽酸約20ml，使溶液分層，當(dāng)三頸瓶里的固體充分溶解后，冷卻，轉(zhuǎn)移到500ml的分液漏斗中用氯仿多次萃取，棄去水層，合并氯仿層，加入50ml10％NaOH水溶液50ml洗滌，再用50ml水洗，重復(fù)二次，加無水硫酸鎂干燥過夜，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿和二硫化碳，減壓蒸餾，得156-165℃餾分，為淡黃色液體，產(chǎn)率55.5％。
制備例4制備2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯 制備方法同制備例3，以3-甲基苯甲酰氯取代乙酰氯，制備2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯。
制備例5制備2-(2-吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯 制備方法同制備例3，以吡啶-2-2-甲酰氯取代乙酰氯，制備2-(2-吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯。
試驗例一蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物對內(nèi)毒素所致發(fā)熱家兔體溫影響的影響 1、材料按制備例1、制備例3、制備例4、制備例5制備。
2.方法 取健康家兔24只，體重2-2.5kg，實驗前分別測肛溫2次，以均值作為正常體溫，然后自耳緣靜脈注射內(nèi)毒素，待體溫比正常體溫升高超過0.7-1.2℃時，隨機分為4組，分為空白對照組(生理鹽水1ml/100g)、安乃近組(25mg/kg)、蓬莪術(shù)環(huán)二烯小劑量組(11mg/kg)、蓬莪術(shù)環(huán)二烯大劑量組(22mg/kg)。各組均腹腔注射給藥，安乃近組肌肉注射，對照組給予等量生理鹽水，于給藥后每1h測體溫1次。共測3次，計算各組動物在給藥后不同時間內(nèi)的體溫。結(jié)果見表1。
方法如上，以2-乙酰基蓬莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表2； 方法如上，以2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表3； 方法如上，以2-(吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表4； 表1 蓬莪術(shù)環(huán)二烯對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響(x±s)
與正常對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01； 結(jié)果表明蓬莪術(shù)環(huán)二烯有很好的降低發(fā)熱家兔體溫的作用。
表2 2-乙酰基蓬莪術(shù)環(huán)二烯對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱實驗(x±s)
與正常對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01； 結(jié)果表明，2-乙酰基蓬莪術(shù)環(huán)二烯有很好的降低發(fā)熱家兔體溫的作用。
表3 2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱實驗(x±s)
與正常對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01； 結(jié)果表明，2-(3-甲基苯甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯有很好的降低發(fā)熱家兔體溫的作用。
表42-(吡啶-2-甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響(x±s)
與正常對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01； 結(jié)果表明2-(吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯有很好的降低發(fā)熱家兔體溫的作用。試驗例二蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物的抗炎作用的影響 1、材料按制備例1、制備例3、制備例4、制備例5制備。
2.方法 Wistar大鼠40只，雄性，體重160～200g。隨機分為4組，空白對照組(生理鹽水1ml/100g)、地塞米松組(4mg/kg)、蓬莪術(shù)環(huán)二烯小劑量組(21mg/kg)、蓬莪術(shù)環(huán)二烯大劑量組(42mg/kg)。于大鼠左踝部做環(huán)形標(biāo)記，鼠足容積測定器測量大鼠左踝部環(huán)形標(biāo)記以下正常體積。左足底皮下注射1％角叉菜膠0.1ml，30min后各組大鼠腹腔注射給予相應(yīng)劑量藥物，給藥后4h測量大鼠左踝部環(huán)形標(biāo)記以下體積，按公式腫脹率＝(腫脹后體積-正常體積)/正常體積×100％計算腫脹率。結(jié)果采用組間t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表5 方法如上，以2-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表6； 方法如上，以2-(3-甲基苯甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表7； 方法如上，以2-(吡啶-2-甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表8； 表5蓬莪術(shù)環(huán)二烯對角叉菜膠致大鼠足腫脹率的影響(x±s)
結(jié)果與空白對照組比較＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，蓬莪術(shù)環(huán)二烯具有明顯的抗炎作用。與空白對照組比較，蓬莪術(shù)環(huán)二烯二組均能減小大鼠足跖腫脹率(p＜0.05，p＜0.01)，且隨劑量的增加炎癥緩解程度增大。
表62-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯對角叉菜膠致大鼠足腫脹率的影響(x±s)
與空白對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，2-乙酰基蓬莪術(shù)環(huán)二烯具有明顯的抗炎作用。與空白對照組比較，2-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯二組均能減小大鼠足跖腫脹率(p＜0.05，p＜0.01)，且隨劑量的增加炎癥緩解程度增大。
表7 2-(3-甲基苯甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯對角叉菜膠致大鼠足腫脹率的影響(x±s)
與空白對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，2-(3-甲基苯甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯具有明顯的抗炎作用。與空白對照組比較，2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯二組均能減小大鼠足跖腫脹率(p＜0.05，p＜0.01)，且隨劑量的增加炎癥緩解程度增大。
表82-(吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯對角叉菜膠致大鼠足腫脹率的影響(x±s)
與空白對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，2-(吡啶-2-甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯具有明顯的抗炎作用。與空白對照組比較，2-(吡啶-2-甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯二組均能減小大鼠足跖腫脹率(p＜0.05，p＜0.01)，且隨劑量的增加炎癥緩解程度增大。
試驗例三蓬莪術(shù)環(huán)二烯及其衍生物對小鼠流感病毒性肺炎的影響 1、材料按制備例1、制備例3、制備例4、制備例5制備。
2.方法取50只昆明種小鼠，體重18-22g，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液滴鼻感染，每只50μl/只。從感染前1d開始腹腔注射給藥，蓬莪術(shù)環(huán)二烯大劑量組(66mg/kg)、蓬莪術(shù)環(huán)二烯小劑量組(33mg/kg)、利巴韋林(70mg/kg)，每天1次，連續(xù)5d，病毒對照組和正常對照組均給予等體積生理鹽水。第6d稱取小鼠體重后解剖，用濾紙吸干肺臟表面液體后置天平稱重，按肺重除以體重逐個計算肺指數(shù)(Lung Index，LI)和各組肺指數(shù)抑制率。結(jié)果采用組間t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果見表9 方法如上，以2-乙?；g(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表10； 方法如上，以2-(3-甲基苯甲?；?莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表11； 方法如上，以2-(吡啶-2-甲?；?莪術(shù)環(huán)二烯取代蓬莪術(shù)環(huán)二烯，結(jié)果見表12； 表9蓬莪術(shù)環(huán)二烯對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用(x±s)
與正常對照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01；與病毒對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，與正常對照組相比，病毒對照組小鼠的LI明顯增加(P＜0.01)；給予不同劑量的蓬莪術(shù)環(huán)二烯后，動物L(fēng)I均低于病毒對照組，其治療效果隨藥物劑量的增加，LI值也相應(yīng)的減少，呈現(xiàn)較顯著的劑量相關(guān)性(P＜0.05)。
表10 2-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用(x±s)
與正常對照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01；與病毒對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，與正常對照組相比，病毒對照組小鼠的LI明顯增加(P＜0.01)；給予不同劑量的2-乙?；钶g(shù)環(huán)二烯后，動物L(fēng)I均低于病毒對照組，其治療效果隨藥物劑量的增加，LI值也相應(yīng)的減少，呈現(xiàn)較顯著的劑量相關(guān)性(P＜0.05＝。
表11 2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用(x±s)
與正常對照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01；與病毒對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，與正常對照組相比，病毒對照組小鼠的LI明顯增加(P＜0.01)；給予不同劑量的2-(3-甲基苯甲?；?蓬莪術(shù)環(huán)二烯后，動物L(fēng)I均低于病毒對照組，其治療效果隨藥物劑量的增加，LI值也相應(yīng)的減少，呈現(xiàn)較顯著的劑量相關(guān)性(P＜0.05)。
表12 2-(吡啶-2-甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用(x±s)
與正常對照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01；與病毒對照組比較＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01 結(jié)果表明，與正常對照組相比，病毒對照組小鼠的LI明顯增加(P＜0.01)；給予不同劑量的2-(吡啶-2-甲酰基)蓬莪術(shù)環(huán)二烯后，動物L(fēng)I均低于病毒對照組，其治療效果隨藥物劑量的增加，LI值也相應(yīng)的減少，呈現(xiàn)較顯著的劑量相關(guān)性(P＜0.05＝。
權(quán)利要求
1.蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備解熱藥物的應(yīng)用。
2.蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備抗炎藥物的應(yīng)用。
3.蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備抗病毒的藥物中的應(yīng)用。
4.蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備治療流感病毒性肺炎的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
蓬莪術(shù)環(huán)二烯的新用途，具體涉及蓬莪術(shù)環(huán)二烯在制備解熱、抗炎或抗病毒的藥物中的應(yīng)用，及制備治療流感病毒性肺炎的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/343GK101675923SQ20091015223
公開日2010年3月24日 申請日期2005年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月23日
發(fā)明者孫秀燕 申請人:煙臺大學(xué)