專利名稱：：一種治療畜禽疾病的多聚核苷酸微囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于獸用生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種在治療畜禽疾病上應(yīng)用的多聚核苷酸緩釋微囊及其制備方法。是以多聚核苷酸為原料、乙基纖維做為囊材制備的多聚核苷酸緩釋微囊。
背景技術(shù)：
：隨著我國(guó)加入WTO，國(guó)內(nèi)畜禽養(yǎng)殖業(yè)將面臨更大的挑戰(zhàn)。據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)資料顯示，在過去的20年間，我國(guó)肉類生產(chǎn)量增加了4倍多，其中畜禽年養(yǎng)殖量近50億羽，生豬近6億頭，生產(chǎn)能力有了很大提高，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)供需平衡已供大于求。然而目前畜禽疫病造成的嚴(yán)重?fù)p失已成為制約我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要障礙和瓶頸。畜禽病毒性疾病如雞傳染性法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎等疾病的群體陽性率高達(dá)90%以上，豬呼吸及繁殖障礙綜合癥、豬瘟及其它病毒性疾病的群體陽性率也很高，畜禽死亡率高達(dá)30%-40%。作為與畜禽養(yǎng)殖業(yè)關(guān)聯(lián)密切的獸藥、飼料行業(yè)，由于行業(yè)管理尚不規(guī)范，一些企業(yè)在詞料和動(dòng)物藥品中濫加抗生素和抗病毒藥物，甚至國(guó)家明令禁止的、毒副作用大的、有殘留的藥物仍然使用，造成病毒和病源菌的耐藥性大大增強(qiáng)，甚至出現(xiàn)超強(qiáng)毒株，畜禽混合、繼發(fā)感染發(fā)生頻繁，病癥加重，常規(guī)方法治療已經(jīng)很難得到理想的效果。隨著行業(yè)管理的規(guī)范化，一些抗病毒藥物已不再允許使用，如利巴韋林、金剛烷胺等藥物，因此在治療畜禽的病毒性疾病方面面臨著新的問題。目前該類藥物在獸用藥物中劑型主要為注射液，鑒于畜禽特殊的生理結(jié)構(gòu)及生理反應(yīng)，注射給藥常常會(huì)造成一定的應(yīng)激，影響畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育；因此通常飲水給藥或拌料給藥為較好的給藥方式，現(xiàn)有藥物從劑型和給藥方式上均不能滿足畜禽用藥。因此研究一種用于治療畜禽病毒性疾病的新型免疫增強(qiáng)劑迫在眉睫。目前尚未檢索到有關(guān)多聚核苷酸緩釋微囊在畜禽上的應(yīng)用的相關(guān)專利。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題基于上述情況，本發(fā)明旨在提供一種能夠用于治療畜禽病毒性疾病的藥物及其制備方法和其在畜禽臨床上的應(yīng)用。技術(shù)方案本發(fā)明目的的實(shí)現(xiàn)用乙基纖維做為囊材，多聚核苷酸做為原料，利用液中干燥法將其制成多聚核苷酸緩釋微囊。包括1)多聚核苷酸溶液制備稱取等質(zhì)量的聚肌苷酸和聚胞苷酸各0.5g，分別放入預(yù)熱至45°C±1°C的50ml氯化鈉-磷酸鹽緩沖液(pH7.2)[取磷酸氫二鈉1.546g、磷酸二氫鈉(NaH2PCV2H20)0.262g，氯化鈉8.768g，加水溶解并稀釋至1000ml]中，攪拌充分溶解，保持該溫度30min;將兩種溶液混合，并保持45。C士rC、40min，冷卻至室溫得到的溶液即為10mg/ml的多聚核苷酸溶液。2)多聚核苷酸-乙基纖維軟材制備準(zhǔn)確量取13ml多聚核苷酸溶液加入到10.0g乙基纖維中制備軟材，45。C烘干12h，研碎后即為含有13mg/g多聚核苷酸的乙基纖維干粉。3)多聚核苷酸微囊制備稱取過400目篩的含多聚核苷酸的乙基纖維粉末0.75g、硬脂酸鎂0.3g，加入到冰浴的丙酮中，緩慢攪拌(200rpm)，待乙基纖維完全溶于丙酮中形成均勻的混懸液；在攪拌的條件下將上述混懸液緩慢加入到含質(zhì)量比2%Span-80表面活性劑的液體石蠟中，充分混合后，逐漸升溫至35'CirC，在400rpm的條件下使丙酮慢慢揮發(fā)，保持2-3h;然后升溫至56'C，保持1-2小時(shí)；減壓抽濾，所得固體用正己烷洗滌多次，加壓干燥，得流動(dòng)性好的淡黃色粉狀微囊。多聚核苷酸微囊可以在制備治療雞傳染性法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎、豬呼吸及繁殖障礙綜合癥和豬傳染性胃腸炎方面藥物中得到應(yīng)用。有益效果核酸是構(gòu)成一切生物體細(xì)胞和病毒遺傳基因的重要物質(zhì)，有核糖核酸(DNA)和脫氧核糖核酸(RNA)之分。RNA由4種(3-D-呋喃核苷酸通過磷酸鍵連結(jié)，而DNA是由4種(3-D-脫氧呋喃核苷酸組成。對(duì)核苷酸的堿基或糖基部分進(jìn)行修飾，或者同時(shí)對(duì)堿基和糖基進(jìn)行雙重修飾所得的核苷或核苷酸類似物是核酸的抗代謝產(chǎn)物，能取代病毒正常的核酸前體或抑制核酸合成酶，阻斷病毒核酸的合成，對(duì)病毒有選擇性的抑制作用。這類具有抗病毒活性的核苷或核苷酸類似物統(tǒng)稱為核苷類抗病毒藥，對(duì)病毒性疾病的治療起著十分重要的作用。多聚核苷酸具有廣譜抗病毒活性，在人類主要用于治療皰疹病毒、呼吸道病毒感染和乙型肝炎等。近年來，越來越多的獸醫(yī)臨床應(yīng)用證明，多聚核苷酸對(duì)雞新城疫、雞傳染性法氏囊病等急性傳染病的預(yù)防和治療具有確實(shí)的療效。多聚核苷酸為水溶性物質(zhì)，若將其做成微囊通?？蛇x的囊材都特別昂貴，且不穩(wěn)定。借鑒目前已有的多聚核苷酸溶液，本發(fā)明采用乙基纖維作為囊材將其制成多聚核苷酸緩釋微囊。乙基纖維為半降解材料，對(duì)機(jī)體無害且價(jià)格低廉，進(jìn)入體內(nèi)后會(huì)發(fā)生膨脹，有效藥物可通過囊材外壁緩慢釋放，從而達(dá)到緩釋的目的。本發(fā)明取代了多聚核苷酸注射液，避免了藥物注射對(duì)畜禽造成的應(yīng)激，同時(shí)本發(fā)明采取緩釋技術(shù)，藥物可透過囊材緩慢、均勻釋放藥物，有效地延長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，減少了投藥量和投藥次數(shù)，提高了治愈率，降低了養(yǎng)殖成本。本發(fā)明技術(shù)成本低、操作簡(jiǎn)單、適用于大規(guī)模生產(chǎn)，同時(shí)作為一種生物藥品，本發(fā)明藥物沒有副作用，4無藥物殘留。試驗(yàn)證明，多聚核苷酸微囊高、中劑量組死亡率顯著低于感染對(duì)照組的死亡率。多聚核苷酸微囊高、中劑量組治愈率較高，均為80%，兩組的有效率均為100%。經(jīng)對(duì)健康豬的安全性試驗(yàn)(推薦劑量10倍給藥)表明，使用期間未見臨床異常表現(xiàn)，對(duì)健康豬無明顯影響，說明本發(fā)明藥物是安全的。具體實(shí)施例方式1)多聚核苷酸溶液制備稱取聚肌苷酸(250g/桶，江門市群科藥業(yè)有限公司)和聚胞苷酸(250g/桶，江門市群科藥業(yè)有限公司)各0.5g，分別放入預(yù)熱至45°C±1'C的50ml氯化鈉-磷酸鹽緩沖液(pH7.2)[取磷酸氫二鈉1.546g、磷酸二氫鈉(NaH2P04*2H20)0.262g，氯化鈉8.768g，加水溶解并稀釋至1000ml]中，攪拌充分溶解，保持該溫度30min;將兩種溶液混合，并保持45。C士rC、40min，冷卻至室溫得到的溶液即為10mg/ml的多聚核苷酸溶液。2)多聚核苷酸-乙基纖維軟材制備量取13ml上述多聚核苷酸溶液加入到10.0g乙基纖維(醫(yī)藥級(jí)，粘度10Cps，山東瑞泰化工(集團(tuán))有限公司)中制備軟材，45。C烘干12h，研碎后即為含有13mg/g多聚核苷酸的乙基纖維干粉。3)多聚核苷酸微囊制備稱取過400目篩的含多聚核苷酸的乙基纖維粉末7.5g、硬脂酸鎂3g，加入到冰浴的丙酮中，緩慢攪拌(200rpm)，待乙基纖維完全溶于丙酮中形成均勻的混懸液；在攪拌的條件下將上述混懸液緩慢加入到含2%Span-80表面活性劑的液體石蠟中，充分混合后，逐漸升溫至35"C士rC，在400rpm的條件下使丙酮慢慢揮發(fā)，保持2-3h;然后升溫至56。C，保持l-2小時(shí)；減壓抽濾，所得固體用正己垸洗滌多次，加壓干燥，得流動(dòng)性好的淡黃色粉狀微囊10.2g，含藥量為0.7%-0.9%。動(dòng)物試驗(yàn)用本發(fā)明藥物治療哺乳仔豬傳染性胃腸炎。豬傳染性胃腸炎是豬的一種高度接觸性傳染病。雖然發(fā)生于生長(zhǎng)期豬、育肥豬和成年豬時(shí)，一般只表現(xiàn)數(shù)天厭食、嘔吐和較嚴(yán)重腹瀉，不會(huì)造成大的死亡，但一旦感染哺乳仔豬，就會(huì)引起嚴(yán)重腹瀉和很高死亡率(最高達(dá)100%)，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成很大損失。1、試驗(yàn)藥品多聚核苷酸微囊，主要成分多聚核苷酸，推薦使用劑量為1mg/kg'bw;對(duì)照藥物為多聚核苷酸注射液(規(guī)格lmg/ml)，推薦使用劑量0.02ml/kg'bw，每隔3日使用一次。2、試驗(yàn)動(dòng)物天津市郊某養(yǎng)豬場(chǎng)約有400頭2周齡仔豬自然發(fā)病，仔豬典型癥狀是先出現(xiàn)嘔吐，而后是水樣腹瀉，體重迅速下降，明顯脫水。嚴(yán)重腹瀉仔豬糞便中常含有未消化的凝乳塊，氣味腥臭。該豬場(chǎng)有多年豬傳染性胃腸炎流行病史。根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、微生物學(xué)及血清學(xué)檢查等綜合診斷為豬傳染性胃腸炎。3、試驗(yàn)設(shè)計(jì)隨機(jī)選取該豬場(chǎng)體重為6士lkg、2周齡和病理狀態(tài)基本一致的患豬100頭作為試驗(yàn)動(dòng)物，均分為5個(gè)試驗(yàn)組。試驗(yàn)一組為多聚核苷酸微囊高劑量組(2mg/kg*bW);試驗(yàn)二組為多聚核苷酸微囊中劑量組(lmg/kg'bw);試驗(yàn)三組為多聚核苷酸微囊低劑量組(0.5mg/kg*bw);試驗(yàn)四組為多聚核苷酸注射液藥物對(duì)照組；試驗(yàn)五組為不給藥對(duì)照組；另選擇體重為6土lkg、2周齡健康豬40頭，均分為兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為試驗(yàn)六組(不發(fā)病不給藥組)和試驗(yàn)七組(安全劑量組)。確診當(dāng)日按各組劑量口服或肌肉注射給藥。各試驗(yàn)組豬飼料完全相同，其他管理各組均保持一致。分組見表14、試驗(yàn)方法按表1對(duì)各組豬給藥進(jìn)行治療，每天觀察患豬臨床變化、治愈、好轉(zhuǎn)、死亡等情況，并進(jìn)行記錄。表l多聚核苷酸微囊對(duì)仔豬傳染性胃腸炎的治療試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>5、療效判定標(biāo)準(zhǔn)死亡率試驗(yàn)期間出現(xiàn)典型豬傳染性胃腸炎臨床癥狀并死亡的豬占該組豬的比例。治愈率試驗(yàn)結(jié)束后精神、食欲、臨床癥狀完全恢復(fù)正常的豬占該組豬的比例。有效率試驗(yàn)結(jié)束后精神、食欲、臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)的豬占該組豬的比例。6、數(shù)據(jù)的分析處理用生物統(tǒng)計(jì)進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果病豬治療結(jié)果見表2表2臨床試驗(yàn)結(jié)果H死亡率(％)治愈率(％)~~有效率(％)~<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>死亡率各用藥組相比較，多聚核苷酸微囊高、中劑量組死亡率為零。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，多聚核苷酸微囊高、中劑量組死亡率顯著低于感染對(duì)照組的死亡率(p<0.01)。治愈率與有效率多聚核苷酸微囊高、中劑量組治愈率較高，均為80%。上述兩組的有效率均為100%。多聚核苷酸微囊低劑量組的治愈率、有效率相對(duì)較低。療效對(duì)比多聚核苷酸微囊低劑量組、藥物對(duì)照組的死亡率均顯著低于感染對(duì)照組，但與多聚核苷酸微囊高、中劑量組相比療效相對(duì)較低。安全性試驗(yàn)經(jīng)對(duì)健康豬的安全性試驗(yàn)(推薦劑量10倍給藥)表明，使用期間未見臨床異常表現(xiàn)，對(duì)健康豬無明顯影響，說明本發(fā)明藥物是安全的。本發(fā)明藥物可用于治療畜禽各種病毒性疾病，如雞傳染性法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎、豬呼吸及繁殖障礙綜合癥、豬傳染性胃腸炎等病。根據(jù)上面動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果得出，用藥方式為口服給藥，使用劑量1mg/kg'bw，每隔3天一次。權(quán)利要求1、一種治療畜禽疾病的多聚核苷酸微囊，其特征是以多聚核苷酸為原料，乙基纖維為囊材制備的多聚核苷酸緩釋微囊。2、權(quán)利要求1所述的一種治療畜禽疾病的多聚核苷酸微囊的制備方法，包括1)多聚核苷酸溶液制備稱取聚肌苷酸和聚胞苷酸各0.5g，分別放入預(yù)熱至45°C±1"C的50ml氯化鈉-磷酸鹽緩沖液中，攪拌充分溶解，保持該溫度30min;將兩種溶液混合，并保持45。C士rC、40min，冷卻至室溫得到的溶液即為10mg/ml的多聚核苷酸溶液，其中氯化鈉-磷酸鹽緩沖液為pH7.2，取磷酸氫二鈉1.546g、磷酸二氫鈉NaH2P04*2H200.262g，氯化鈉8.768g，加水溶解并稀釋至1000ml制備而成；2)多聚核苷酸-乙基纖維軟材制備量取13ml多聚核苷酸溶液加入到10.0g乙基纖維中制備軟材，45"C烘干12h，研碎后即為含有13mg/g多聚核苷酸的乙基纖維干粉；3)多聚核苷酸微囊制備稱取過400目篩的含多聚核苷酸的乙基纖維干粉0.75g、硬脂酸鎂0.3g，加入到冰浴的丙酮中，200rpm攪拌，待乙基纖維完全溶于丙酮中形成均勻的混懸液；在攪拌的條件下將上述混懸液緩慢加入到含質(zhì)量比2%Span-80表面活性劑的液體石蠟中，充分混合后，逐漸升溫至35°C±rC，在400rpm的條件下使丙酮慢慢揮發(fā)，保持2-3h;然后升溫至56X:，保持1-2小時(shí)；減壓抽濾，所得固體用正己垸洗滌，加壓干燥，得淡黃色粉狀微囊即為多聚核苷酸微囊。3、權(quán)利要求1所述多聚核苷酸微囊在制備治療雞傳染性法氏囊病、雞傳染性支氣管炎、雞傳染性喉氣管炎、豬呼吸及繁殖障礙綜合癥和豬傳染性胃腸炎方面藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明一種治療畜禽疾病的多聚核苷酸微囊及其制備方法，屬于獸藥制備的
技術(shù)領(lǐng)域：
。稱取聚肌苷酸和聚胞苷酸，分別放入預(yù)熱的氯化鈉-磷酸鹽緩沖液中，制得多聚核苷酸溶液，加入到乙基纖維中制備軟材，并制得干粉；將干粉、硬脂酸鎂加入到冰浴的丙酮中，攪拌并緩慢加入到含2％Span-80表面活性劑的液體石蠟中利用液中干燥法制得多聚核苷酸微囊。本發(fā)明有效延長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間，減少了用藥次數(shù)，達(dá)到了長(zhǎng)效緩釋的目的。試驗(yàn)證明，多聚核苷酸微囊高、中劑量組死亡率顯著低于感染對(duì)照組的死亡率。治愈率較高，均為80％，兩組的有效率均為100％。安全性試驗(yàn)證明本發(fā)明藥物是安全的。文檔編號(hào)A61K9/50GK101474165SQ20091002816公開日2009年7月8日申請(qǐng)日期2009年1月20日優(yōu)先權(quán)日2009年1月20日發(fā)明者呂英軍,蘇建東,鮑恩東申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué);南京農(nóng)大新獸藥開發(fā)工程技術(shù)有限公司