專利名稱：：杏香兔耳風(fēng)總黃酮提取物及其提取方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及杏香兔耳風(fēng)總黃酮提取物及其提取方法和用途。
背景技術(shù)：
：杏香兔耳風(fēng)為一民間常用藥，為菊科植物杏香兔耳風(fēng)(力'/W"^/V^"mCh/^.)的干燥全草。杏香兔耳風(fēng)性味甘、微苦、性涼，歸肺、肝經(jīng)。具有清熱補虛，涼血止血，利濕解毒等功效。主治虛勞骨蒸，肺麥咳血，婦女崩漏，濕熱黃疸，水腫，癰疽腫毒，瘰疬結(jié)核，趺打損傷，毒蛇咬傷等。臨床上用杏香兔耳風(fēng)制劑及民間驗方配伍治療宮頸糜爛、子宮內(nèi)膜炎、熱癤、鵝口瘡等疾病。杏香兔耳風(fēng)作為少常用中藥，在許多方面尚屬空白，有待進一步開發(fā)利用，以期發(fā)揮其最大作用。到目前為止，文獻報道的化合物包括倍半萜內(nèi)酯類，三菇類，有機酸類、黃酮類等，杏香兔耳風(fēng)制劑包括杏香兔耳風(fēng)片、復(fù)方杏香兔耳風(fēng)顆粒等。目前巿售兔耳風(fēng)制劑的制備工藝方法陳舊，均是杏香兔耳風(fēng)經(jīng)過簡單提取后的制劑，有效成分含量低，曰服劑量大。為減小服用劑量、提高藥效，本發(fā)明釆用新方法對杏香兔耳風(fēng)進行提取分離，得到更高純度的提取物，提高了有效成分含量，減小服用劑量，提高療效。對于天然產(chǎn)物的提取分離，大孔樹脂吸附法是一種非常有效的工業(yè)化生產(chǎn)方法，本方法從提取溶劑選取(選擇不同濃度的乙醇溶劑并考察用弱堿性溶液調(diào)節(jié)pH值)、脂溶性雜質(zhì)的去除到洗脫劑的選擇進行優(yōu)化，在每步最優(yōu)條件下進行提取分離，總黃酮類成分轉(zhuǎn)移率、純化物中總黃酮含量均高于所見文獻報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種杏香兔耳風(fēng)總黃酮提取物及其提取方法和用途。本發(fā)明目的是通過如下措施實現(xiàn)一種杏香兔耳風(fēng)總黃酮的提取方法，包括以下工藝步驟①取干燥，粉碎的兔耳風(fēng)藥材，用6-15倍量濃度為5%-90%的乙醇溶液30-IO(TC回流提取2-4次。過濾，濾液濃縮。②取提取物濃縮液，用石油醚萃取2-4次，保留水層上大孔樹脂柱吸附；或直接取提取物濃縮液上柱。③用0%-15%乙醇溶液洗脫大孔樹脂柱至洗脫液無色，后用10%-95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，蒸干至浸膏狀，真空干燥，粉碎，得兔耳風(fēng)提取物。步驟①所述的5%-95%的乙醇提取溶液可用pH值為7.5-10的氨水、氫氧化鈣、碳酸鈉等弱堿性溶液配制。步驟②所述的大孔樹脂可為中低極性的大孔樹脂如D-101樹脂等。步驟③中所述的提取物中總黃酮的含量在50%-95%之間。所述兔耳風(fēng)提取物在治療急慢性宮頸炎的藥物中的應(yīng)用以總黃酮為活性成分，配以藥用輔料，用公知的方法制備成藥劑學(xué)上的任何一種劑型。本發(fā)明工藝簡單、操作方便安全、轉(zhuǎn)移率約從37%提高至87%、提取率約提高135%，可重復(fù)性好，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實施例方式實施例1:取兔耳風(fēng)藥材lkg,粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為9的氫氧化鈣溶液配制的體積分數(shù)為5%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液，重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用10%乙醇洗脫5個體積，收集10%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為55%。實施例2:取兔耳風(fēng)藥材lkg,粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為8的氫氧化鉤溶液配制的體積分數(shù)為10%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液，重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用30%乙醇洗脫5個體積，收集30%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為67%。實施例3:取兔耳風(fēng)藥材lkg,粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為8的氨水配制體積分數(shù)為30%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取三次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用大量蒸餾水洗脫至洗脫液無色，用30%乙醇洗脫5個體積，收集30%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為69%。實施例4:取兔耳風(fēng)藥材lkg,粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為9的氨水配制體積分數(shù)為50%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液，重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用5%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用50%乙醇洗脫5個體積，收集50%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為79%。實施例5:取兔耳風(fēng)藥材lkg，粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為9的碳酸鈉配制體積分數(shù)為70%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液，重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用10%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用70%乙醇洗脫5個體積，收集70%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為84%。實施例6:取兔耳風(fēng)藥材lkg,粉碎，過20目篩，加以12000ml用pH值為8的碳酸鈉配制體積分數(shù)為95%的乙醇溶液，回流提取2小時，過濾并保存濾液，重復(fù)操作3次。合并三次濾液，濾液濃縮至約含黃酮2mg/ml，用石油醚萃取二次，保留水層。母液上處理好(以95%乙醇浸泡12h后裝柱，再以95%乙醇洗脫2-4個體積，后以蒸餾水洗脫至洗脫液無醇味)的大孔樹脂柱，流速lml/min。用15%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無色，用95%乙醇洗脫5個體積，收集95%乙醇的洗脫液，濃縮并蒸干，得兔耳風(fēng)純化物，總黃酮含量約為90%。實施例7:兔耳風(fēng)提取物抗炎活性的篩選釆用水提取法得到提取物F1(lg提取物相當(dāng)于生藥材6.7g)、堿性醇溶液提取法得到提取物F2(1g提取物相當(dāng)于生藥材4.2g)、大孔樹脂分離純化法得到純化物F3(lg提取物相當(dāng)于生藥材18.2g)。采用角叉菜膠致大鼠足腫脹試驗?zāi)Ｐ蛯ζ溥M行藥理活性篩選。取Wistar大鼠50只，隨機分組，實驗組大鼠分別給予水提取法得到提取物Fl,堿性醇溶液提取法得到提取物F2、和大孔樹脂分離純化法得到純化物F3，其中Fl330mgkg_1、F2540mg.kg—1，F(xiàn)3120mg.kg-1;陽性藥物對照和溶媒對照組大鼠分別給予阿斯匹林100mgkg—^P同體積蒸餾水，10mlkg^容積灌胃給藥，12小時(士2小時)1次，連續(xù)4次。末次給藥后立即以1%角叉菜膠0.lml注射于大鼠右后足跖皮下致炎；測定大鼠致炎前和致炎后l、2、4、6、8小時的足跖容積，計算大鼠足跖腫脹率(°/。)和腫脹抑制率(%)。實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準偏差表示，計量資料的組間顯著性檢驗釆用單因素方差分析，兩兩比較釆用t檢驗，P<0.05為有顯著性差異，P<0.01為有非常顯著性差異。實驗結(jié)果見表l。實驗結(jié)果，陽性對照藥物阿斯匹林在所試劑量下表現(xiàn)了明顯的抗炎活性，藥后1-8小時與對照組比較差異有顯著性和高度顯著(P〈0.01或0.05),作用高峰時間在藥后2-8小時。試驗，所試臨床等效劑量的不同工藝提取兔耳風(fēng)成分給藥后均表現(xiàn)了不同程度的抗炎活性，其中F2和F3在藥后2-8小時與對照組比較差異有顯著性和高度顯著(P〈0.01或0.05)，F(xiàn)l在藥后4-8小時與對照組比較差異有顯著性(P<0.05)。試驗結(jié)果，兔耳風(fēng)F3成分試驗所用劑量較低，抗炎作用較強且穩(wěn)定。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1、杏香兔耳風(fēng)總黃酮提取物，其特征在于該提取物中總黃酮的含量在50％-95％之間。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的兔耳風(fēng)總黃酮提取物，其特征在于該總黃酮提取物可以和藥學(xué)上可接受的載體制成臨床上可接受的制劑。3、一種如權(quán)利要求l所述的兔耳風(fēng)總黃酮提取物的制備方法，其特征在于其包括如下步驟①取干燥，粉碎的兔耳風(fēng)藥材，用6-15倍量濃度為5%-90%的乙醇溶液，30-10(TC回流提取2-4次，過濾，濾液濃縮；②取提取物濃縮液，用石油醚萃取2-4次去除葉綠素等雜質(zhì)，保留水層上大孔樹脂柱吸附；或直接取提取物濃縮液上柱；③用0%-15%乙醇溶液洗脫大孔樹脂柱至洗脫液無色，后用10%-95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，蒸干至浸膏狀，真空干燥，粉碎，得兔耳風(fēng)提取物。4、如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于步驟②所述的大孔樹脂為中低極性的大孔樹脂。5、如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂優(yōu)選D-lOl樹脂。6、如權(quán)利要求3所述的兔耳風(fēng)總黃酮提取物的制備方法，其特征在于步驟①中所述的乙醇溶液為用pH值為7.5-10的氨水、氫氧化鈣、碳酸鈉等弱堿溶液配制。7、兔耳風(fēng)總黃酮提取物和其制劑在制備治療急慢性宮頸炎的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，提供了杏香兔耳風(fēng)總黃酮提取物及其提取方法和用途。本發(fā)明采用杏香兔耳風(fēng)為原料，以不同pH值的弱堿性溶液配制的乙醇為提取溶劑，采用回流提取，后經(jīng)過石油醚萃取除雜，最后經(jīng)大孔樹脂分離和富集，得到總黃酮類成分純度在50-95％之間。本發(fā)明工藝簡單、操作方便安全、可重復(fù)性好，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明還提供了總黃酮類成分或總黃酮與藥學(xué)上可接受的載體制成的制劑在制備治療急慢性官頸炎藥物中的應(yīng)用。文檔編號A61P15/00GK101380347SQ200810228069公開日2009年3月11日申請日期2008年10月14日優(yōu)先權(quán)日2008年10月14日發(fā)明者周國勤,瑞楊,王淑君,寧邱申請人:沈陽藥科大學(xué)