專利名稱：：苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3r)-去-o-甲基毛狄潑老素、其衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是一類從中國紅樹植物海芒果(Cerberamanghas)中分離得到的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0甲基毛狄潑老素[(3R)-des-Omethyllasiodiplodin]、其衍生物及其制備方法和用途。該類化合物對胰脂肪酶具有明顯的抑制活性，可作為一類研制新的預(yù)防或治療肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病藥物的先導(dǎo)化合物，也可作為治療臨床常見多發(fā)的肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病藥物中應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：在近20年中，全世界尤其是發(fā)達(dá)國家人群中肥胖的發(fā)病率日益增多。肥胖發(fā)生的原因是多方面的，如遺傳因素、環(huán)境因素、飲食習(xí)慣等，其中高脂飲食是導(dǎo)致肥胖的重要原因。由于經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活水平的提高，運(yùn)動(dòng)不足和攝食能量相對過剩逐漸成為現(xiàn)代人生活方式的主要問題，代步工具的發(fā)達(dá)等導(dǎo)致現(xiàn)代人的能量消耗減少，而人類背離傳統(tǒng)飲食模式的速度越來越快，新的飲食模式和西方化的食物特點(diǎn)是具有高飽和脂肪含量和較低纖維含量，以致食品能量密度過大，能量攝入過多。這導(dǎo)致了眾多現(xiàn)代人機(jī)體能量的攝入超過了能量消耗。過剩的能量一部分作為脂肪貯存在脂肪組織中，一段時(shí)間后它的積累導(dǎo)致肥胖以及肥胖相關(guān)疾病，比如糖尿病、癌癥、心臟病、高脂血癥和脂肪肝等的發(fā)生。如何合理有效地解決肥胖給人類健康帶來的影響是醫(yī)藥界面臨的重要研究課題。治療肥胖癥的藥理方法集中于開發(fā)增加能量消耗的藥物或減少能量攝取的藥物。而減少能量攝取的主要方法就是減小身體消化和吸收食品，尤其是脂肪。胰脂肪酶是腸道中脂肪消化吸收所必需的酶。食物中的脂肪在胰脂肪酶作用下被水她為單酰甘油和游離脂肪酸后，在腸道被吸收，然后在體內(nèi)重新合成脂肪，造成脂肪堆積，最終可導(dǎo)致肥胖以及相伴的高脂血癥、糖尿病等代謝性疾病的發(fā)生。應(yīng)用脂肪酶抑制劑可有效抑制腸道中脂肪酶對脂肪的分解催化作用，達(dá)到減少脂肪吸收、控制和治療肥胖的目的。因而開發(fā)和應(yīng)用有效的脂肪酶抑制劑受到人們的關(guān)注。目前用于治療肥胖的脂肪酶抑制劑主要來源于植物提取物和化學(xué)合成。從植物中提取抑制脂肪酶活性成分的報(bào)道較多，但效果并不充分，即使某植物的提取物有效果，可是其中的活性成分以及其量并不確定。目前市場暢銷的脂肪酶抑制劑是賽尼可，賽尼可具有活性強(qiáng)，穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，但是其存在著包括難以控制的腸道癥狀、油^使和嘔吐腹?jié)q等缺點(diǎn)。因此尋找新的胰脂肪酶抑制劑對肥胖、糖尿病等代謝性疾病具有重要的意義。在開發(fā)利用我國的海洋生物資源，從中尋找具有生物活性及藥用前景的海洋天然產(chǎn)物的過程中，我們發(fā)現(xiàn)，紅樹林植物海芒果的石油醚粗提物在體外篩選實(shí)驗(yàn)中對胰脂肪酶具有明顯的抑制活性。進(jìn)一步的生物活性跟蹤研究，導(dǎo)致了苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的發(fā)現(xiàn)。體外胰脂肪酶抑制活性篩選實(shí)驗(yàn)表明，(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素及其衍生物對胰脂肪酶具有顯著的抑制作用。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見該類化合物在此方面的生物活性研究報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容6本發(fā)明的目的在于提供一種從我國紅樹植物海芒果中提取分離得到的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0曱基毛狄潑老素及其衍生物。本發(fā)明的另一目的是提供上述苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物的制備方法。本發(fā)明的還一目的是提供上述苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-物中應(yīng)用或可作為預(yù)防或治療肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病藥物的先導(dǎo)化合物。本發(fā)明的再一目的是提供一種胰脂肪酶抑制劑，該胰脂肪酶抑制劑為本發(fā)明的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素或其才汙生物。本發(fā)明的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物具有如下通式的化學(xué)結(jié)構(gòu)式其中，R1為氫、CK4的烷基或C2C4的烷酰基；R2為氫、C1C4的烷基或C2C4的烷?；?。當(dāng)Rl和R2同時(shí)為氫時(shí)，即為(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素。所述C1C4的直鏈或支鏈的烷基是指含有1~4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如曱基、乙基、丙基或丁基等；優(yōu)選甲基。所述烷酰基是指含有24個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷?；?，例如乙酰基、丙?；蚨□；?；優(yōu)選乙?；１景l(fā)明提供了(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物的提取制備方法，步驟如下將我國紅樹植物海芒果用醇提取，減壓濃縮提取液得粗浸膏。將該浸膏溶于0.7-1.5NNaCl溶液中，混懸均勻后用石油醚萃取，濃縮石油醚萃取液得到石油醚浸膏。石油醚浸膏經(jīng)100-200目硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫；其中，石油醚/乙酸乙酯體積比60:40洗脫部分經(jīng)200-300目硅膠柱層析，以石油醚/丙酮梯度洗脫；其中，石油醚/丙酮體積比80:20洗脫部分經(jīng)SephadexLH-20凝膠柱層析，以氯仿/曱醇體積比l:i洗脫并純化得到(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素。進(jìn)一步的，該化合物通過酯化反應(yīng)、烷基化反應(yīng)或成醚反應(yīng)，得到其相應(yīng)的衍生物。其中，所述的用于提取的醇為甲醇或乙醇。本發(fā)明對苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物進(jìn)行了胰脂肪酶抑制活性測試，表明這些化合物具有明顯的胰脂肪酶抑制作用。可用于制備預(yù)防或治療肥胖癥及相關(guān)代謝性疾病的藥物。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。1H、13CNMR用Varianlnova400型核磁共振儀測定；MS(ESIMS及HRESIMS)用Q-TOFMicroLC-MS-MS型質(zhì)語儀測定；所使用的硅膠均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；各種溶劑均由國藥集團(tuán)試劑有限公司生產(chǎn)，均為分析純。如無特殊i兌明，以下實(shí)施例中涉及到的液/液之間比值均為體積百分比。實(shí)施例1:苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素的制備(1)提取中國紅樹植物海芒果干重3.1kg，用曱醇10L滲漉提取4次，提取液合并后減壓濃縮，所得浸膏混懸于1000ml1NNaCl溶液，以石油醚1000ml反復(fù)萃取混懸液3次，所得萃取液合并后減壓濃縮得到石油醚浸膏11g。(2)分離石油醚浸膏11g經(jīng)100-200目娃:膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯100:0—95:5—90:10—70:30—50:50—30:70—0:100梯度洗脫，每個(gè)梯度用量1000ml;其中，石油醚/乙酸乙酯體積比60:40洗脫部分1.2g經(jīng)石油醚/丙酮卯:10—80:20—70:30梯度洗脫，每個(gè)梯度用量200ml;其中，石油醚/丙酮體積比80:20洗脫部分經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱層析，以氯仿/曱醇體積比1:1洗脫并純化，得到(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素20mg。(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)如下C16H2204;[a]23D+8.0(c,0.12，CH3OH);'H畫R(300MHz,CDC13)S.:6.24(d，J=2.6Hz,H國5')，6,21(d,J=2.6Hz，H-3')，5.18(m，H-3)，3.26,2.51(m,H-IO)，1.40~2.49(H-4~9),1.37(d，/=7.0Hz,3-Me);13CNMR(75MHz,CDC13)5:20.0(3-Me)，21.1(C-4)，24.0，24.6,27.2,30.7,31.0，33.5(C-IO):975.2(C-3)，101.3(C-13)，105.3(C-la)，110.9(C-ll),149.4(C畫10a),160.2(C-12),165.2(C-14),171.9(C-l);ESI-MS附/z279[M+H]+。實(shí)施例2:(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的甲基化物(R^和R^均為曱基)的制釜稱取實(shí)施例1中制備的(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素樣品5.0mg于25mL圓底燒瓶中，加入溶有2.5倍當(dāng)量碘曱烷的NaOH溶液2mL，并加入適量相轉(zhuǎn)移催化劑四丁基溴化銨，在10mL水/二氯曱烷兩相體系中加熱回流4小時(shí)，即得(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的曱基化物(R,=R2=CH3)。(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素曱基化物波語數(shù)據(jù)如下C18H2804;&NMR(300MHz，CDC13)6.24(d，《/-2.6Hz，H畫5')，6.21(d，/=2.6Hz,H-3')，5.18(m,H-3),3.65，3.61(均為s,2xOCH3)，3.26,2.51(m，H-10),1.40~2.49(H畫49)，1.37(d,/=7.0Hz,3-Me)。實(shí)施例3:(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的乙?；?Rl和R^均為乙?；?的制備稱取實(shí)施例1中制備的(3R)-去-O-曱基毛狄潑老素樣品5.0mg溶于4mL吡啶溶液中，加入2mL醋酐溶液，室溫反應(yīng)過夜，得(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的乙?；?R,=R2=COCH3)。(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素乙?；锊ㄕZ數(shù)據(jù)如下C2()H2806;&NMR(300MHz，CDC13)6.24(d,/=2.6Hz，H國5')，6.21(d，2.6Hz,H曙3')，5.18(m，H-3),3.26，2.51(m，H-IO)，2,28，2.26(均為s，2xCOCH3)1.40~2.49(H-4~9)，1.37(d，《/=7.0Hz,3-Me)。實(shí)施例4:(3RV去-0-曱基毛狄潑老素的部分甲基化物(R,為H,%為甲基)的制備稱取實(shí)施例1中制備的(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素樣品5.0mg于25mL圓底燒瓶中，加入1.2倍當(dāng)量的碘曱烷無色油狀液體及適量無水碳酸鉀固體混合物，在10mL無水丙酮中加熱回流4小時(shí)，即得(3R)-去-O-甲基毛狄潑老素的部分曱基化物(R,=H，R2=CH3)。(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素部分曱基化物波譜數(shù)據(jù)如下C18H2804;&畫R(300MHz,CDC13)6.24(d，《/=2.6Hz，H-5')，6.21(d，■/=2.6Hz，H-3'),5.18(m,H-3),3.61(s,OCH3)，3.26，2.51(m，H-10),1.40~2.49(H-49)，1.37(d,J=7.0Hz,3-Me)。實(shí)-瞼實(shí)施例1:(3RV去-0甲基毛狄潑老素的胰脂肪酶抑制活性測定胰脂肪酶抑制活性的測定以賽尼可作為陽性對照，方法如下首先底物對硝基苯乙酸(p-Nitrophenylacetate,sigma公司)用磷酸緩沖液(25mM，pH6.8)配成1.35mM;豬胰脂肪酶(sigma公司)用磷酸緩沖液配成10mg/ml;(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素用磷酸緩沖液配制成不同濃度的溶液。然后在96孔板中依次加入50|il酶溶液、50[il底物溶液以及l(fā)Ofil不同濃度的受試樣品，混勻。37。C下反應(yīng)10分鐘，在492nm下檢測每孔的吸光度。根據(jù)在492nm下的吸光度計(jì)算受試樣品對胰脂肪酶的抑制率(%)，并將酶活性抑制率(%)達(dá)到50°/。時(shí)抑制劑的濃度測定為IC5o值。抑制率(％)可以根據(jù)下式進(jìn)行抑制率(％)=[(A畫B)-(C-D)]/(A-B)xl00上式中，A表示反應(yīng)后空白孔在492nm下的吸光度，B表示反應(yīng)前空白孔在492nm下的吸光度，C表示反應(yīng)后樣品孔在492nm下的吸光度，D表示反應(yīng)前樣品孔在492nm下的吸光度。表1胰脂肪酶抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>結(jié)果見表l。結(jié)論從表l可以看出，(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素對胰脂肪酶具有強(qiáng)的抑制作用，其IC50僅為4.73|iM。抑制胰脂肪酶可以抑制脂肪在小腸的分解，從而抑制脂肪的吸收。由于脂肪4聶入過多可能導(dǎo)致肥胖，以及與肥胖相關(guān)的糖尿病、高脂血癥、脂肪肝等代謝失調(diào)性疾病。所以作為胰脂肪酶抑制劑，(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素可用于預(yù)防或治療胖癥、糖尿病、高脂血癥和脂肪肝等疾病。權(quán)利要求1、一種由如下通式表示的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-O-甲基毛狄潑老素及其衍生物其中，R1為氫、C1～C4的直鏈或支鏈烷基或C2～C4的直鏈或支鏈烷?；?；R2為氫、C1～C4的直鏈或支鏈烷基或C2～C4的直鏈或支鏈烷?；?、根據(jù)權(quán)利要求1所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物，其特征在于，R1和R2同時(shí)為氫、曱基或乙?；?。3、一種如權(quán)利要求1所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物的制備方法，其包括以下步驟a)苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素的提取制備將海芒果用醇滲漉提取，減壓濃縮提取液得粗浸膏；將該浸膏溶于NaCl溶液，混懸均勻后用石油醚萃取，濃縮石油醚萃取液得到石油醚浸膏；石油醚浸膏經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析，后經(jīng)凝膠SephadexLH-20純化得到苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素；b)苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素烷基化物的制備向上述步驟a)中制備的(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素中加入溶有碘曱烷的NaOH溶液中，在相轉(zhuǎn)移催化劑作用下，在水/有機(jī)溶劑兩相體系中加熱回流以制得(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素的曱基化物；或者向上述步驟a)中制備的(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素中加入碘甲烷油狀液體和無水碳酸鉀固體混合物，在無水丙酮中加熱回流以制得(3R)-去-O-曱基毛狄潑老素的部分甲基化物；以及c)苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素烷?；锏闹苽鋵⑸鲜霾襟Ea)中制備的(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素在吡咬溶液中與烷?；噭┓磻?yīng)，獲得其烷?；铩?、根據(jù)權(quán)利要求3所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類(3R)-去-0-甲基毛狄潑老素及其衍生物的制備方法，其特征在于用曱醇或乙醇滲漉提取。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物的制備方法，其特征在于所述NaCl溶液的當(dāng)量為0.7~1.5N。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素及其衍生物的制備方法，其特征在于所述石油醚浸膏經(jīng)100-200目硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫；其中，石油醚/乙酸乙酯體積比60:40洗脫部分，經(jīng)200-300目硅膠柱層析，以石油醚/丙酮梯度洗脫；其中，石油醚/丙酮體積比80:20洗脫部分，經(jīng)SephadexLH-20凝膠柱層析，以氯仿/曱醇體積比1:1洗脫并純化得到(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0甲基毛狄潑老素及其衍生物在制備預(yù)防或治療肥胖癥、糖尿病、高脂血癥和脂肪肝等代謝失調(diào)性疾病藥物中的應(yīng)用。8、一種胰脂肪酶抑制劑，該胰脂肪酶抑制劑為權(quán)利要求1所述的苯并大環(huán)內(nèi)酯類化合物(3R)-去-0-曱基毛狄潑老素或其衍生物。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一類從中國紅樹林植物海芒果中提取、分離獲得的化合物(3R)-去-O-甲基毛狄潑老素[(3R)-des-O-methyllasiodiplodin]、其衍生物及其制備方法和用途。本發(fā)明的(3R)-去-O-甲基毛狄潑老素及其衍生物結(jié)構(gòu)式如下所示，當(dāng)R1和R2同時(shí)為氫時(shí)，即為(3R)-去-O-甲基毛狄潑老素。該化合物及其衍生物經(jīng)體外檢測表明具有明顯的胰脂肪酶抑制活性，可望在制備預(yù)防或治療肥胖癥、糖尿病、高脂血癥和脂肪肝等代謝失調(diào)性疾病藥物中應(yīng)用。本發(fā)明還可為研制新的預(yù)防或治療代謝失調(diào)性疾病藥物提供先導(dǎo)化合物，對開發(fā)利用中國的海洋生物資源具有重要意義。文檔編號A61K31/365GK101676281SQ20081020007公開日2010年3月24日申請日期2008年9月18日優(yōu)先權(quán)日2008年9月18日發(fā)明者張小東,亮李,王賀瑤,郭躍偉申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所