專利名稱：：治療肩周炎的中藥組合物和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及以中藥材為原料的藥物組合物，具體是一種治療肩周炎的中藥組合物及其質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：肩周炎是肩關(guān)節(jié)周圍肌肉、肌腱、滑囊和關(guān)節(jié)囊等軟組織的慢性無菌性炎癥。炎癥導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)外粘連，從而影響肩關(guān)節(jié)的活動(dòng)。其病變特點(diǎn)是疼痛廣泛、功能受限廣泛、壓痛廣泛。肩周炎的全稱是肩關(guān)節(jié)周圍炎，本病好發(fā)于50歲左右的人，中醫(yī)認(rèn)為，肩周炎乃風(fēng)寒濕邪侵襲肩周筋脈所引起的慢性疾病。內(nèi)因營衛(wèi)虛弱，筋骨衰頹，外邪乘虛而入，傷及肩周筋脈，致使氣血不通而痛。若過力勞傷，血瘀氣滯均可導(dǎo)致肩痛凝滯，肩痛日久，則筋脈失'養(yǎng)，而見肩部肌肉萎陷，關(guān)節(jié)僵硬。在中國藥品監(jiān)督管理局頒布的新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)中藥第23冊(國家標(biāo)準(zhǔn)WS3-314(Z-046)-99(Z))中公開了一種祛痹舒肩丸的處方及其制備工藝，處方為桂枝450g、羌活450g、黃芪675g、骨碎補(bǔ)450g、淫羊藿675g、威靈仙675g、秦艽450g、當(dāng)歸450g、三七135g、黃精675g、巴戟天270g、延胡索(醋制)315g、夏天無180g、地龍675g，制備工藝如下羌活、夏天無、桂枝、秦艽、威靈仙照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2005年版一部附錄)，用75%乙醇滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮，制成干膏粉，備用。地龍加75%乙醇浸漬二次，每次72小時(shí)，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.30(25X:)的稠膏，備用。黃精、骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黃芪、當(dāng).歸、巴戟天加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對i度為1.25(25。C)的稠膏，加乙醇使含醇量為75%，靜置48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，制成干膏粉，備用。三七、延胡索粉碎成細(xì)粉，過篩,備用。取上述干膏粉和、三七、延胡索細(xì)粉，混勻，再加入稠膏，制丸，干燥，打光，制成1000g,即得。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了lg產(chǎn)品中含延胡索乙素不低于0.10mg。祛痹舒肩丸為濃縮小丸，由于處方中延胡索(醋制)以藥材細(xì)粉直接入藥，工藝相對落后，使制劑一次服用劑量過大，每次要服用7.5g，每天二次，一天服用15g，降低了患者的依從性，為了減少服用劑量和提高藥品的質(zhì)量，有必要改進(jìn)原有的制備方法，制備一種新的治療肩周炎的中藥制劑。國家標(biāo)準(zhǔn)WS3-314(Z-046)-99(Z)還公開了測定祛痹舒肩丸產(chǎn)品中延胡索乙素含量的方法是一種薄層掃描法。薄層掃描法測定偏差較大是本領(lǐng)域公認(rèn)的常識，因此有必要尋找新的測定產(chǎn)品中含有延胡索乙素的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服原有祛痹舒肩丸用量過大，服用不便的缺點(diǎn)，達(dá)到降低服用量，提高產(chǎn)品的質(zhì)量，增加療效的目的；本發(fā)明的另一目的是提供測定產(chǎn)品中延胡索乙素含量的方法，來有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的稱取下列重量份的中藥材桂枝450份羌活450份黃芪675份骨碎補(bǔ)450份淫羊藿675份威靈仙675份秦艽450份醋制延胡索315份當(dāng)歸450份黃精675份巴戟天270份夏天無180份地龍675份三七135份其中羌活、夏天無、桂枝、秦艽、威靈仙用75%乙醇采用滲漉法制得干膏粉1，具體方法同祛痹舒肩丸的制備方法；地龍用75%乙醇采用浸漬法制得稠膏2，具體方法同祛痹舒肩丸的制備方法；黃精、骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黃芪、當(dāng)歸、巴戟天采用水提醇沉法制得干膏粉3，具體方法同祛痹舒肩丸的制備方法；三七粉碎成細(xì)粉，全部通過80目篩，得三七細(xì)粉；醋制延胡索采用水提乙醇沉淀法或用體積濃度為6585%的乙醇回流提取法或用體積濃度為6585°/。的乙醇滲漉法提取，濃縮制得稠膏4，取上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合得中藥組合物，lg中藥組合物干品中含延胡索乙素0.130.22mg。中藥組合物可添加或不添加藥學(xué)上允許的常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、黏合劑等用常規(guī)的中藥制劑工藝制備成任何一種常用的中藥口服劑型，如丸劑、膠襄劑、片劑、散劑、顆粒劑等。醋制延胡索的水提醇沉法及乙醇回流提取法均采用中藥提取的常規(guī)法，在此不予敘述，本發(fā)明優(yōu)選采用乙醇滲漉法提取，具體是取醋制延胡索粉碎成全部通過816目(粒徑2363"m991um)的粗粉，用體積濃度為6585%乙醇浸泡6小時(shí)以上后開始滲漉，乙醇用量為醋制延胡索重量的610倍，滲漉速度為26ml/min，收集滲漉液，回收乙醇，并濃縮至40。C時(shí)溫度測定相對密度為1.201.40的稠膏4。醋制延胡索的滲漉法提取工藝條件是通過下面的正交試驗(yàn)來確定的。取延胡索粉末，每份400g，精密稱量，共9份，用選定濃度的乙醇潤濕2h后裝柱,浸泡6h,用選定的各條件試驗(yàn)收集滲漉液，漉液回收乙醇后、濃縮、干燥得固形物，采用下面的高效液相色譜法測定固形物中延胡索乙素的含量，計(jì)算延胡索乙素轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表l、表2。表l、滲漉法提取延胡索乙素正交試驗(yàn)方案和結(jié)果序號粉末粗細(xì)(目)乙醇濃度(％)乙醇倍數(shù)滲漉速度(ml/min)延胡索乙素轉(zhuǎn)移率(%)延胡索乙素含量(％)固形物得率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2、滲漉法提取正交試驗(yàn)方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)果表明，醋制延胡索粉碎成全部通過8、12、16目的粗粉，用體積濃度為65%、75%、85%乙醇浸泡6小時(shí)以上后開始滲漉，乙醇用量為醋制延胡索重量的6、8、10倍，滲漉速度為2、4、6ml/niiri均能有效地提取延胡索乙素，但各因素對延胡索乙素提取效果的影響程度是不同的，以乙醇濃度>乙醇倍數(shù)>粉末粗細(xì)>滲漉速度，即乙醇濃度對提取效果的影響最大，其次是乙醇用量，再次是粉末粗細(xì)和滲漉速度。各因素對提取固形物提取率的影響程度為乙醇濃度>滲漉速度>乙醇倍數(shù)>粉末粗細(xì)。以延胡索乙素轉(zhuǎn)移率為主要指標(biāo)，綜合考慮固形物提取率的影響，用延胡索通過8目(篩孔內(nèi)徑2363um)的粗粉，IO倍量的75%乙醇以4ml/min的速度滲漉為最佳提取方案。取延胡索藥材測定，延胡索乙素轉(zhuǎn)移率可達(dá)94.2%,而固形物量5.8%，可認(rèn)為延胡索乙素已基本提盡。說明本工藝是可行的，并具有簡便、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)科學(xué)的特點(diǎn)。以下通過藥效試驗(yàn)來說明本發(fā)明所提供的治療肩周炎的中藥組合物的有一、抗炎實(shí)驗(yàn)(一)對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響i目的比較大鼠連續(xù)口服本發(fā)明的中藥組合物與原祛痹舒肩丸對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響，來評價(jià)其抗炎作用。2材料2.1試藥祛痹舒肩丸按國家標(biāo)準(zhǔn)WS3-314(Z-046)>99(Z)規(guī)定的處方及其制備工藝制備，30g/瓶，批號20080201。試驗(yàn)組藥采用下面實(shí)施例1的產(chǎn)品。2.2動(dòng)物SD大鼠60只，SPF級，體重180220g，雄性。試驗(yàn)前在溫度24-26°C，濕度60-70%下適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。3方法將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。正常對照組給予等體積生理鹽水；醋酸潑尼松組給予醋酸潑尼松10mg/kg;祛痹舒肩丸組2.8g/kg;試驗(yàn)組小劑量組0.35g/kg、中劑量組0.7g/kg、大劑量組1.4g/kg;藥物用生理鹽水稀釋，給藥容量均為0.2mL/10g體重。連續(xù)灌胃給藥7天，末次給藥后30min，用游標(biāo)卡尺測定每只大鼠右足足趾厚度后，于每只大鼠右足足趾皮下注入1%角叉菜膠混懸液O.lmL致炎。致炎后每膈1小時(shí)各測一次足趾腫脹度，連續(xù)6次，記錄結(jié)果。按下式計(jì)算腫脹率腫脹率-(致炎后足趾厚度一致炎前足趾厚度)/致炎前足趾厚度X100X。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spssl3.0軟件ANOVA程序，組間比較進(jìn)行單因素方差分析。4結(jié)果如表3所示，試驗(yàn)組大、中、小劑量組與對照組比較，致炎后2h、3h腫脹率明顯減輕(PO.01或0.05)，作用與祛痹舒肩丸相似。醋酸潑尼松組與對照組比較，致炎后2h、3h、4h腫脹率明顯減輕(P<0.01或0.05)。_表3中藥組合物對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹率的影響(S")_<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與對照組比較*P<0.05;**P<0.015結(jié)論本發(fā)明的組合物降低角叉菜膠致大鼠足趾腫脹率的作用與原祛痹舒肩丸類似，但劑量明顯減少，僅為原祛痹舒肩丸的l/8l/2。本實(shí)驗(yàn)表明大鼠連續(xù)灌胃給藥后23h，可明顯降低角叉菜膠致大鼠足趾腫脹率。(二)對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響1目的比較小鼠連續(xù)口服本發(fā)明的中藥組合物與原祛痹舒肩丸，對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響，來評價(jià)其抗炎作用。2材料2.1試藥試驗(yàn)組采用實(shí)施例1的樣品；祛痹舒肩丸按國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的處方及其制備工藝制備，30g/瓶，批號20080201。2.2動(dòng)物MH小鼠60只，SPF級，體重1822g，雌雄各半，試驗(yàn)前在溫度24-26°C，濕度60-70%下適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。3方法將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為正常對照組、阿司匹林組、祛痹舒肩丸組、試驗(yàn)組小、中、大劑量組，每組10只。正常對照組給予等量生理鹽水；阿司匹林組給予阿司匹林0.4g/kg;祛痹舒肩丸組4g/kg;試驗(yàn)組小劑量組0.5g/kg、中劑量組lg/kg、大劑量組2g/kg;藥物用生理鹽水稀釋，給藥容量均為0.2mL/10g體重。連續(xù)灌胃給藥7天；各組末次給藥后lh，將O.lmL二甲苯涂于小鼠右耳耳廓兩面致炎，左耳不涂為對照，致炎后lh處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，于同一部位用直徑7mm的打孔器打下左右耳片，稱重，以左右耳片重量之差作為腫脹度，計(jì)算腫脹抑制百分率。抑制率(％)=(l-給藥組兩耳片重量差/對照組兩耳片重量差)X100%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spssl3.0軟件ANOVA程序，組間比較進(jìn)行單因素方差分析。4結(jié)果如表4所示，試驗(yàn)組大、中、小劑量組與對照組比較，可明顯抑制小鼠耳廓腫脹(P〈0.01)。阿司匹林組與對照組比較，也可明顯抑制小鼠耳廓腫脹(PO.01)。表4中藥組合物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(；化)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與對照組比較*P<0.05:"PO.Ol本發(fā)明中藥組合物可明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹，作用優(yōu)于原祛痹舒肩丸，且劑量也可明顯降低。本實(shí)驗(yàn)表明小鼠連續(xù)灌胃祛痹舒肩制劑后，可明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹，具有抗炎作用。二、鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)(一)對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響1目的比較小鼠連續(xù)口服本發(fā)明的中藥組合物與原祛痹舒肩丸后，對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響，來評價(jià)鎮(zhèn)痛作用。2材料2.1試藥試驗(yàn)組采用下面實(shí)施例1的樣品；祛痹舒肩丸按國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的處方及其制備工藝制備，30g/瓶，批號20080201。2.2動(dòng)物NIH小鼠60只，SPF級，體重1822g，雌雄各半，試驗(yàn)前在溫度24-26°C，濕度60-70%下適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。3方法將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。正常對照組給予等量生理鹽水；阿司匹林組給予阿司匹林0.4g/kg;祛痹舒肩丸組4g/kg;試驗(yàn)組小劑量組0.5g/kg、中劑量組1g/kg、大劑量組2g/kg;藥物用生理鹽水稀釋，給藥容量均為0.2mL/10g體重；連續(xù)灌胃給藥7天。各組末次給藥后lh,分別腹腔注射0.8%冰醋酸0.1mL/10g體重，以誘發(fā)扭體反應(yīng)(伸展后肢，腹部收縮內(nèi)凹，同時(shí)軀體扭曲)，計(jì)算注射醋酸后15min內(nèi)每只小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)，按下式計(jì)算抑制率抑制率(％)=(l-給藥組扭體反應(yīng)次粉對照組扭體反應(yīng)次數(shù))X100%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spssl3.0軟件ANOVA程序，組間比較進(jìn)行單因素方差分析。4結(jié)果如表5所示，試驗(yàn)組小劑量組與對照組比較，可明顯減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)(P<0.05)。阿司匹林組與對照組比較，也可明顯減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)(PO.Ol)。表5中藥組合物對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(lis)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與對照組比較*P<0.05;"PO,Ol5結(jié)論試驗(yàn)組小劑量組可明顯減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，具有一定的鎮(zhèn)痛作用作用優(yōu)于舊制劑祛痹舒肩丸，且劑量也可明顯降低。(二)對熱板致小鼠痛閨的影響1目的比較小鼠連續(xù)口服本發(fā)明的中藥組合物與原祛痹舒肩丸后，對熱板致小鼠痛閾變化的影響來評價(jià)鎮(zhèn)痛作用。2材料2.1試驗(yàn)組采用下面實(shí)施例1的樣品；祛痹舒肩丸按國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的處方及其制備工藝制備，30g/瓶，批號20080201。2.2動(dòng)物NIH小鼠60只，SPF級，體重1822g，雌性，試驗(yàn)前在溫度24-26°C，濕度60-70%下適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。3方法給藥前將雌性小鼠放于(55±0.5)'。熱板儀上，以鼠舔后足作為痛反應(yīng)指標(biāo)，選用潛伏期530s小鼠60只。將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只。正常對照組給予等量生理鹽水；阿司匹林組給予阿司匹林0.4g/kg;祛痹舒肩丸組4g/kg;試驗(yàn)組小劑量組0.5g/kg、中劑量組lg/kg、大劑量組2g/kg;藥物用生理鹽水稀釋，給藥容量均為0.2mL/10g體重；連續(xù)灌胃給藥7天。末次給藥前及給藥15，30,60，90，120min分別測定各鼠痛反應(yīng)的潛伏期(痛閾)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spssl3.0軟件ANOVA程序，組間比較進(jìn)行單因素方差分析。4結(jié)果iw衣o/71/J、，lA祖^tLT丌U里^i5^乂口min巧/vj""aiuL儀，n力業(yè)處"Pi'j、epwffl閾值(P<0.05)。阿司匹林組藥后60min與對照組比較，也可明顯延長小鼠痛閾值(P<0.05)。_表6中藥組合物對熱板致小鼠痛閾的影響(7")_組別w給藥前給藥后ss15min30min60min90min120min對照組1012.9±3.514.2±3.110.8±3.212.6±1.812.6±4.912.4±6.0阿司匹林組1014.2±2.413.1±4.311.0±2.719.4±5.6*10.0±5.315.3±5.2祛痹舒肩丸組1016.1±4.818.4±10.214.3±6.915.9±8.118.0±10.819.0±11.2試小1013.3±3.112.0±5.212.2±4.114.5±7.014.9±10.020.4±11.8驗(yàn)中1014.5±3.011.5±4.811.6±3.420.2±6."16,4±6.017.7±13.5組大1016.4±4.713.0±3.313.4±3.719.0±2.716.2±4.917.7±6.2注與對照組比較*P<0.05本實(shí)驗(yàn)表明小鼠連續(xù)灌胃本產(chǎn)品，在給藥后60min中劑量組可明顯延長小鼠痛閾值，具有一定的鎮(zhèn)痛作用。大劑量組藥后60min也可延長小鼠痛閾值，但無統(tǒng)計(jì)意義。試驗(yàn)組作用稍優(yōu)于原祛痹舒肩丸，且劑量也可明顯降低。結(jié)論通過上述的抗炎、鎮(zhèn)痛作用4項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明所提供的治療肩周炎的中藥組合物具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，效果優(yōu)于原祛痹舒肩丸，且劑量可降低，僅為原制劑的1/81/2，降低服用劑量而提高了療效，達(dá)到了預(yù)期的研究目的。為實(shí)施本發(fā)明的另一目的，所采用的技術(shù)方案是建立HPLC法控制本發(fā)明所提供的治療肩周炎的中藥組合物質(zhì)量的方法，具體是用高效液相色譜法測定中藥組合物中延胡索乙素的含量，具體按如下步驟進(jìn)行A.色譜條件色譜柱為ds柱，流動(dòng)相是PH值為4.0的乙腈0.1。/。磷酸溶液體積比為20:80的溶液，流速為l.Omlmin"，檢測波長為280nm，柱溫為室溫；B.對照品溶液的制備精密稱取延胡索乙素對照品，用甲醇溶解配制成0.2000mgml"濃度，為照品溶液；C.供試品溶液的制備精密稱取中藥組合物2.5g，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液甲醇體積比為l:20的溶液50inl，超聲IO分鐘以上，放冷，搖勻，濾過，殘?jiān)眉状枷礈?次，每次10ml，合并濾液和洗液，低溫蒸干，殘?jiān)铀甽Oml使溶解，加濃氨試液調(diào)pH值至1112，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓ㄈ葜?0ml，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；D.分別取對照品溶液與供試品溶液各以20uL進(jìn)樣，理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，用外標(biāo)法定量計(jì)算lg中藥組合物干品中含延胡索乙素該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為有效控制質(zhì)量的方法。下面通過具體試驗(yàn)例證明HPLC法測定產(chǎn)品中延胡索乙素含量的有益效果。圖1為制備本發(fā)明的中藥組合物的工藝流程圖下面結(jié)合實(shí)施例和附圖進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備治療肩周炎的中藥組合物如圖1所示，稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg取羌活、夏天無、桂枝、秦艽、威靈仙用75。/。乙醇220L滲漉，漉液回收乙醇，減壓濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度L30的稠膏，真空干燥，粉碎過80目篩，得千膏粉l，稱重得1945g;取地龍，粉碎成8目粗粉，裝入浸漬容器，浸漬2次，每次加275%乙醇浸漬48小時(shí)，過濾，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮成稠膏2，相對密度1.32(25'C下測)，稠膏稱重386g,稠膏水分16.6。/。，折合含固形物322g;取黃精、骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黃芪、當(dāng)歸、巴戟天加水煎煮二次，每次加水250L煎煮2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25的稠膏(25'C下測)，加乙醇使含醇量為75%，靜置48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥，粉碎過80目篩，得干膏粉3，稱重得1908g;取三七粉碎成細(xì)粉，過80目篩，得三七細(xì)粉備用，稱重得1350g;取延胡索，粉碎成全部通過8目篩的粗粉，混合均勻，先用75Q/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒，密閉浸漬12小時(shí)，用75。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為4ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度1.30的稠膏4備用，稠膏4稱重242g,稠膏水分22.0%，折合干品為189g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合得組合物，干燥干品共計(jì)5714g，用高效液相色譜法測定lg中藥組合物干品中含延胡索乙素0.176mg,具體測定方法見實(shí)施例9。實(shí)施例2制備治療肩周炎的中藥組合物稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，用水煎煮二次，每次加水32L煎煮2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至40。C時(shí)測定的相對密度1.25稠膏，稱重450g，加95%的乙醇1700ml使含醇量為75%，靜置24小時(shí)，過濾，減壓回收乙醇，濾液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度L30稠膏4，稠膏稱重343g，稠膏水分22.0in/。，折合含固形物268g。將上述干膏粉1、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合得中藥組合物干品共計(jì)5793g，測定lg中藥組合物干品中含延胡索乙素0.13mg。實(shí)施例3制備治療肩周炎的中藥組合物稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，加75%的乙醇回流提取二次，每次20L2小時(shí)，合并醇提液，濾過，回收乙醇，濾液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度為1.30的稠膏4備用，稠膏稱重295g，稠膏水分21.0%，折合含固形物233g。上述干膏粉1、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合得中藥組合物干品共計(jì)5758，測定的lg中藥組合物干品中含延胡索乙素0.14mg。分裝為散劑，每袋3g，口服每次3g，每天3次。實(shí)施例4制備治療肩周炎的中藥組合物稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，粉碎成全部通過8目篩的粗粉，混合均勻，先用75n/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒，密閉浸漬12小時(shí)，用75。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為4ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至4(TC時(shí)測定的相對密度1.30的稠膏4備用，稠膏4稱重250g，稠膏水分23.6%，折合千品為193g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合得組合物，干燥干品共計(jì)5718g，用高效液相色譜法測定lg中藥組合物干品中含延胡索乙素0.22mg。實(shí)施例5制備用于治療肩周炎的丸劑稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，粉碎過8目篩，混合均勻，先用75n/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒,密閉浸漬6小時(shí)，用65。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為4ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度1.30稠膏4備用，稠膏稱重240g，稠膏水分20.0%，折合含固形物192g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合，加入淀粉200g在捏合機(jī)中混合制成丸塊，用中藥小丸機(jī)制成丸粒，取煉蜜200g作黏合劑補(bǔ)丸，8(TC干燥，選丸，打光，得中藥濃縮丸干品共計(jì)6000g，高效液相色譜法測定lg中藥濃縮丸干品中含延胡索乙素0.22mg。分裝為每瓶3g，口服每次l瓶，每天3次。實(shí)施例6制備用于治療肩周炎的片劑干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，粉碎過8目篩，混合均勻，先用85。/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒，密閉浸漬12小時(shí)，共用85。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為2ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度1.30稠膏4備用，稠膏稱重245g，稠膏水分18.3%，折合含固形物200g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合，加入淀粉300g，制成顆粒，8(TC干燥，整粒，加入硬脂酸鎂6g，滑石粉18g混合均勻，高效液相色譜法測定lg顆粒干品中含延胡索乙素0.176mg，壓片，素片每片重0.34g，得中藥半浸膏片共計(jì)17000片，測定的每片中含延胡索乙素0.06mg，包衣，即得。臨床劑量為口服每次8片，每天三次。實(shí)施例7制備用于治療肩周炎的膠囊劑干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦充4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg取延胡索，粉碎過8目篩，混合均勻，先用75。/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒,密閉浸漬12小時(shí)，用75。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為6ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度1.30稠膏4備用，稠膏稱重246g，稠膏水分23.0°/。，折合含固形物190g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合，加入淀粉300g，混合均勻，制成顆粒，8(TC干燥，整粒，得顆粒重6000g，高效液相色譜法測定lg顆粒干品中含延胡索乙素0.20mg,所制得顆粒經(jīng)檢査合格后，用全自動(dòng)膠囊填充機(jī)填充，得18000粒硬膠囊(每粒填充藥物0.32)g，測定的每粒囊中含延胡索乙素0.07mg，臨床劑量為口服每次8粒，每天三次。實(shí)施例8制備用于治療肩周炎的顆粒劑稱取桂枝4.5Kg、羌活4.5Kg、黃芪6.75Kg、骨碎補(bǔ)4.5Kg、淫羊藿6.75Kg、威靈仙6.75Kg、秦艽4.5Kg、當(dāng)歸4.5Kg、三七1.35Kg、黃精6.75Kg、巴戟天2.7Kg、醋制延胡索3.15Kg、夏天無1.8Kg、地龍6.75Kg干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉同實(shí)施例l;取延胡索，粉碎過8目篩，混合均勻，先用75。/。乙醇3L濕潤，裝入滲漉筒，密閉浸漬12小時(shí)，用75。/。乙醇35L滲漉，滲漉速度為4ml/min，回收乙醇，漉液濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度1.30稠膏4備用。稠膏稱重250g，稠膏水分23.0%，折合含固形物193g。將上述干膏粉l、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉、稠膏4混合，加入淀粉300g，混合均勻，制成顆粒，8(TC干燥，整粒，得干顆粒6000g，高效液相色譜法測定lg顆粒干品中含延胡索乙素0.17mg，包裝。分裝為每袋3g，口服每次1袋，每天3次。實(shí)施例9高效液相測定實(shí)施例1的產(chǎn)品中的延胡索乙素的含量1、測定A、色譜條件色譜柱為DikmaDiamonsilC18柱(4.6mmX250纖，5um)，C18保護(hù)柱。流動(dòng)相是用三乙胺調(diào)節(jié)PH至4.0的乙腈0.1%磷酸溶液體積比為20:80的溶液，流速為1.0ml*min-l，檢測波長為280nm，柱溫為室溫。B、對照品溶液的制備精密稱取干燥的延胡索乙素對照品10.00mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.2000rngml-l對照品溶液。C、供試品溶液的制備取中藥組合物，研細(xì)，精密稱取粉末2.58，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液甲醇體積比為120溶液50ml，超聲10分鐘，放冷，搖勻，濾過，殘?jiān)眉状枷礈?次，每次10ml，合并濾液和洗液，低溫蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加濃氨試液調(diào)pH為11.5，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，定容?0ml，用0.45um的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。陰性供試液的制備按中藥組合物的處方組成除去延胡索后，根據(jù)樣品制備工藝制備陰性對照，按供試品溶液的制備方法制成不含延胡索的陰性對照溶液。以上三種溶液進(jìn)樣量各為20"1，理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。測定，記錄色譜圖。用外標(biāo)法定量計(jì)算得lg中藥組合物干品中含延胡索乙素為0.176mg。從記錄的色譜圖可見供試品色譜圖中與對照品色譜圖中相應(yīng)位置上有一相同保留時(shí)間的色譜峰，延胡索乙素峰與其他組分峰分離度良好，陰性對照無干擾。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系考察上述色譜條件下，精密吸取上述對照品溶液0.2，0.4，0.5，0.8，1.0，1,2，1.6，2.0ml，分別置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，分別進(jìn)樣20"L。以對照品峰面積積分值Y(mAUmin)對進(jìn)樣量X(Ug)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=15.727X-0.393，相關(guān)系數(shù)為r=0.9998(n=8)。可見延胡索乙素在(0.08000.8000)ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。3.精密度試驗(yàn)分別吸取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20ul。所測得延胡索乙素峰面積積分值的RSD為1.63%(n=6)，表明精密度良好。4.重復(fù)性試驗(yàn)取同批樣品，平行操作制備成6份供試品溶液后按樣品測定項(xiàng)下方法測定，平均含量為0.1462mgg-l，RSD為2.2%(n-6)，表明重復(fù)性良好。5.穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于制備后0，1，2，4，8h重復(fù)進(jìn)樣，測得延胡索乙素峰面積積分值的RSD為2.49%(n=5)，表明供試品溶液8h內(nèi)穩(wěn)定。6.加樣回收率試驗(yàn)取上述己知含量的樣品，共6份，精密稱定，每份精密加入一定量的對照品，并測定。結(jié)果見表?；厥章蕼y定結(jié)果(n=6)樣品中含量加入量實(shí)測總回收率平均回收率RSD(yg)量"g)(%)(%)(%)0.36570.10000.462997.20.36190.10000.459897.90.36210.37040.20000.20000.55850.564298.296.998.71.90.36850.40000.7713100.70.36030.40000.7664101.5從該試驗(yàn)證明用HPLC法測定產(chǎn)品中延胡索乙素的含量，經(jīng)方法學(xué)研究表明此方法具有樣品預(yù)處理簡單，回收率好，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好及專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，作為祛痹舒肩丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，能夠更有效地控制該制劑的質(zhì)量。權(quán)利要求1、一種治療肩周炎的中藥組合物，由下述中藥材制成桂枝450份羌活450份黃芪675份骨碎補(bǔ)450份淫羊藿675份威靈仙675份秦艽450份醋制延胡索315份當(dāng)歸450份黃精675份巴戟天270份夏天無180份地龍675份三七135份其中羌活、夏天無、桂枝、秦艽、威靈仙用75％乙醇采用滲漉法制得干膏粉(1)，地龍用75％乙醇采用浸漬法制得稠膏(2)，黃精、骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黃芪、當(dāng)歸、巴戟天采用水提醇沉法制得干膏粉(3)，三七粉碎成細(xì)粉，全部通過80目篩，得三七細(xì)粉，其特征在于醋制延胡索采用水提醇沉法或用體積濃度為65～85％的乙醇回流提取法或用體積濃度為65～85％的乙醇滲漉法提取，濃縮制得稠膏(4)，上述干膏粉(1)、稠膏(2)、干膏粉(3)、三七細(xì)粉、稠膏(4)混合得中藥組合物，1g中藥組合物干品中含延胡索乙素0.13～0.22mg。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于所述的醋制延胡索的乙醇滲漉法提取，具體是取醋制延胡索粉碎成全部通過816目的粗粉，用體積濃度為6585%乙醇浸泡6小時(shí)以上后開始滲漉，乙醇用量為醋制延胡索重量的610倍，滲漉速度為26ml/min，收集滲漉液，回收乙醇，并濃縮至40'C時(shí)測定的相對密度為1.20-1.40的稠膏(4)。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于中藥組合物可添加或不添加藥學(xué)上允許的常規(guī)輔料，用常規(guī)的中藥制劑工藝制備成常用的中藥口服劑型。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥組合物，其特征在于中藥口服劑型是丸劑、膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑中的任何一種。5、一種如權(quán)利要求1所述的治療肩周炎的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于用高效液相色譜法測定中藥組合物中延胡索乙素的含量，具體按如下步驟進(jìn)行A.色譜條件色譜柱為U柱，流動(dòng)相是PH值為4.0的乙腈0.1%磷酸溶液體積比為20:80的溶液，流速為1.Oml'min—1,檢測波長為280nm，柱溫為室溫；B.對照品溶液的制備精密稱取延胡索乙素對照品，用甲醇溶解配制成0.2000mg'mr濃度，為對照品溶液；C.供試品溶液的制備精密稱取中藥組合物2.5g，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液甲醇體積比為1:20的溶液50ml，超聲10分鐘以上，放冷，搖勻，濾過，殘?jiān)眉状枷礈?次，每次10ml，合并濾液和洗液，低溫蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加濃氨試液調(diào)pH值至1112，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓ㄈ葜?0ml，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；D.分別取對照品溶液與供試品溶液各以20uL進(jìn)樣,理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，用外標(biāo)法定量計(jì)算lg中藥組合物干品中含延胡索乙素全文摘要治療肩周炎的中藥組合物和質(zhì)量控制方法，涉及以中藥材為原料的藥物組合物及質(zhì)量控制方法。它是由原祛痹舒肩丸處方藥制成。羌活、夏天無、桂枝、秦艽、威靈仙用滲漉法制干膏粉1；地龍用浸漬法制得稠膏2；黃精、骨碎補(bǔ)、淫羊藿、黃芪、當(dāng)歸、巴戟天用用水提醇沉法得干膏粉3；三七粉碎成細(xì)粉；醋制延胡索采用水提醇沉法或乙醇回流法或用乙醇滲漉法得稠膏4與干膏粉1、稠膏2、干膏粉3、三七細(xì)粉混合即得，用高效液相色譜法測定1g中藥組合物中含延胡索乙素0.13～0.22mg。本產(chǎn)品抗炎、鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于原祛痹舒肩丸，且服用量可降低，為原產(chǎn)品的1/8～1/2；高效液相色譜法測定產(chǎn)品中含延胡索乙素的方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。文檔編號A61K36/88GK101380419SQ20081019915公開日2009年3月11日申請日期2008年10月16日優(yōu)先權(quán)日2008年10月16日發(fā)明者姚麗梅,莊義修,李亞萍,杜淑清,強(qiáng)申申請人:廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院