專利名稱：：新型s-dabo類hiv-1逆轉錄酶抑制劑的制備及其用途的制作方法新型S-DABO類HIV-1逆轉錄酶抑制劑的制備及其用途
技術領域：
本申請涉及以非核苷類HIV-1(人類免疫缺陷病毒-l)逆轉錄酶抑制劑3，4-二氫-2-烷氧基-6-芐基尿嘧啶類(DABO)和l-[(2-羥基乙氧)甲基]-6-苯硫基胸腺嘧啶類(HEPT)為先導物，參照與該類化合物作用的HIV-1逆轉錄酶(HIV-1RT)底物構象，設計、合成了一系列新型的S-DABO類化合物，并進行了生物活性測試。非核苷類HIV-l型逆轉錄酶抑制劑目前已經發(fā)展到30多種結構各異的化合物，其中奈韋拉平(Neviapine)、地拉韋啶(Delavirdine)及依非韋倫(Efavirenz)3個化合物已經用于臨床，還有多種非核苷類逆轉錄酶抑制劑(NNRTIs)正處于臨床試驗階段。其中DABO類化合物自1992年首次被發(fā)現以來，即成為非核苷類HIV-1型逆轉錄酶抑制劑中一類重要的化合物，活性濃度已達皮摩爾級別，顯示出很好的發(fā)展前景。為進一步提高該類化合物的活性及選擇性，降低化合物毒性及耐藥性，本發(fā)明人以硫尿嘧啶衍生物為基礎，在嘧啶環(huán)2，C4,C5位上進行犖構改造，連接上具有不同立體和電性效應的基團，得到了一系列新型的S-DABO類化合物，經活性測試顯示出很好的HIV-1逆轉錄酶抑制活性。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域。
背景技術：
：艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS),是由于感染人類免疫缺陷病毒(HIV)所導致的以CD4+T淋巴細胞減少為特征的免疫衰竭，患者常于感染后10-15年因并發(fā)各種機會性感染或惡性腫瘤而死亡。自1981年美國發(fā)現首例艾滋病患者以來，HIV病毒已在全球范圍內迅速蔓延，根據聯合國艾滋病規(guī)劃署和世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計數據，截至2007年底，全球艾滋病病毒感染人數已經達3320萬(306O"3610萬)。自1995年我國首次發(fā)現艾滋病感染病例，近年來感染人數增加迅速，根據國務院防治艾滋病工作委員會辦公室、衛(wèi)生部、聯合國艾滋病中國專題組2007年11月聯合舉行《中國艾滋病防治聯合評估報告(2007年)》專題新聞發(fā)布會發(fā)布的數據顯示，目前我國艾滋病病毒感染人數已達70萬(55萬85萬)人，其中艾滋病病人8.5萬(8萬9萬)人。這直接威脅著人類的生命和健康，成為當今最危險的流行病之一。到目前為止，還沒有能治愈艾滋病的藥物，而且國內臨床上所用的抗艾滋病藥物幾乎全部是進口藥，價格十分昂貴。因此，研發(fā)具有自主產權的高效低毒的價格便宜的抗HIV藥物是擺在我國政府和科學家面前的一個十分迫切和重要的課題。目前發(fā)現的HIV有HIV-1和HIV-2兩種類型，其中，HIV-1是艾滋病的主要致病原?，F有的藥物主要是針對HIV-1，按其作用機制分為五類核苷類逆轉錄酶抑制劑，非核苷類逆轉錄酶抑制劑，蛋白水解酶抑制劑，融合抑制劑及整合酶抑制劑?，F在臨床應用的這些藥物可以在一定程度上延緩病人病情的惡化，但不能徹底清除患者體內的病毒，大部分病人一直生活在病毒低水平復制的狀態(tài)中，長期用藥患者易產生耐藥性，而且一旦停止用藥，病人體內的病毒水平很快又恢復到甚至超過用藥前的水平。同時這些藥物在殺傷病毒的同時，也破壞了身體內正常的生理機能，使病人產生很大的藥物反應。且這些藥物價格不菲，很多患者沒有能力負擔。目前，抗病毒組合療法(又稱雞尾酒療法)是臨床上較為有效的療法。該療法是讓病人同時服用作用于不同靶點的多種藥物，主要為HIV-1逆轉錄酶抑制劑和蛋白水解酶抑制劑，從而對病毒的復制產生更有效的抑制。其療效明顯優(yōu)于單藥處方，并能延緩藥物抗藥性的產生。但它用藥劑量大，藥物與藥物之間相互作用而產生的副作用往往使病人難以忍受；更重要的是昂貴的價格使得病人特別是發(fā)展中國家的病人無法承擔。在HIV的復制循環(huán)中，逆轉錄酶(RT)在完成RNA指導的DNA合成、RNA水解反應和DNA指導的DNA合成過程中起著十分重要的作用，且為病毒所特有。因此，HIV逆轉錄酶是抗艾滋病藥物發(fā)展中的一個重要生物靶點。目前臨床上所用藥物中，主要為核苷類逆轉錄酶抑制劑(NRTIs)和非核苷類逆轉錄酶抑制劑兩類。核苷類逆轉錄酶抑制劑是合成DNA的天然底物的衍生物，通過阻斷病毒RNA的逆轉錄，即阻止病毒雙鏈DNA形成，病毒失去復制的模板而起作用。它們首先進入被感染的細胞，然后磷酸化，形成具有活性的三磷酸化合物。這些三磷酸化合物是HIV逆轉錄酶的競爭抑制劑，當插入長的DNA鏈時，可導致病毒DNA合成受阻，從而抑制病毒復制，長期大劑量使用可使004+細胞計數升高。屬于NRTIs的抗人免疫缺陷綜合征病毒藥物共有9個品種，即齊多夫定(AZT)、去羥肌苷(ddl)、扎西他濱(ddC)、司他夫定(d4T)、拉米夫定(3TC)、阿巴卡韋(abacavir)、泰諾福韋(tenofovir)及復合制劑雙肽芝-combivir(AZT+3TC)和三協(xié)維-trivizir(AZT+3TC+ABC)。它們作用于逆轉錄酶與天然底物核苷結合的活性部位，但這些核苷類藥物也抑制宿主細胞DNA的多聚酶活性，因此具有依賴劑量的特異毒性。非核苷類逆轉錄酶抑制劑(NNRTIs)是一組與核苷無關、化學結構完全不同的特異性抑制HIV-1逆轉錄酶的化合物，一般對HIV-2無活性。這組化合物的共同特點是可高度抑制HIV-1，但并不抑制HIV-2和其他逆轉錄病毒；不是HIV-1逆轉錄酶底物競爭抑制劑，而是通過與酶活性點附近的p66疏水區(qū)結合，并取代聚合酶結合位點的具有催化作用的天門冬氨酸殘基，而達到抑制HIV-1復制的作用；不抑制其他的DNA聚合酶，故毒性很小，有很高的抗病毒選擇指數，不足之處在于體內外使用迅速產生耐藥毒株。這類藥物多半與核苷類藥物聯合應用。屬于NNRTIs的抗人免疫缺陷綜合征藥物目前有3個，即奈韋拉平(Neviapine)、地拉韋啶(Delavirdine)及依非韋倫(Efavirenz)，其抑制HIV-1的作用很強，但對HIV-2和猴艾滋病毒(SIV)均無抑制活性。這類藥物易產生耐藥性，只需一個核苷酸變異，即產生耐藥，且與其他NNRTIs產生交叉耐性。由于抑制HIV-1作用強，依非韋倫被選為一線藥物，與其他NRTIs聯合用藥。非核苷類逆轉錄酶抑制劑具有結構多樣、高效、低毒以及與其他藥物的協(xié)同作用等特性,加之酶的結構清楚，藥物作用位點明確，因而一直是尋找新的抗艾滋病毒藥物的重要方向之一。3，4-二氫-2-烷氧基-6-芐基-4-羰基嘧啶(DABO)類化合物作為NNRTIs的典型代表之一，自1992年發(fā)現以來就成為抗HIV-1RT的研究熱點，近年來合成了一系列新的衍生物，并顯示出較強的抗病毒活性，同時生物活性結果顯示，這類化合物對HIV-2也具有一定的抑制作用。
發(fā)明內容發(fā)明人以非核苷類逆轉錄酶抑制劑HEPT類和DABO類化合物為先導化合物，結合本實驗課題組已取得研究成果，按照藥物合理設計中先導化合物優(yōu)化的方法，將其各自的結構和活性關系聯系起來，根據生物電子等排原理等設計了一類新型S-DABO化合物，根據所設計化合物的結構，完成了該類化合物方便的制備、分離、純化及活性測定方法。本發(fā)明是在保持DABO這一類化合物基本結構特征，結合本研究組對該類化合物的研究結果，對嘧啶環(huán)不同部位進行了化學修飾，比如C5位的鹵代，適當延長C2取代基鏈長度及C4-NH2取代都會提高化合物活性。我們所進行的新的結構設計，其目的是在保持或加強瞎啶環(huán)N3或C4位有利于與靶點酶上氨基酸殘基形成氫鍵、在C6位上保持有利于與酶中親月旨性基團作用的苯環(huán)外，又在C2及C5位上進行了具有不同電性和立體效應基團的結構變換以取得更好的與酶結合能力。所設計的目標化合物將上述結構和活性關系較好地體現在同一個分子中，因此，新化合物有可能會產生更好的抗HIV-1RT活性。最終活性實驗數據與我們預測的結果有較好的吻合，5位鹵代、適當延長或修飾2位側鏈及C4-NH2取代，都能較大的提高該類化合物抗HIV-1RT的活性，其中活性最好的化合物ICso值達到0.18nM,相比目前臨床上所用的奈韋拉平，活性提高了23倍。通過與靶點酶對接比較研究，合成的新化合物的構象更有利于與HIV-1逆轉錄酶結合，從而又發(fā)現了新一類高活性的HIV-1逆轉錄酶抑制劑。根據實驗結果，可以看出該類化合物通過7i電子重疊、氫鍵及位阻作用，能更好地與HIV-1逆轉錄酶的疏水性口袋周圍的氨基酸Tyr181、Tyrl88、Trp229，Phe227、Val179、Val106、Pro236、Pro95、Lysl01等相互作用，從而影響酶的構象而產生對酶的高度抑制。本發(fā)明還進一歩涉及了此類新化合物的合成以及作為HIV-1逆轉錄酶抑制劑的應用的研究。本發(fā)明的部分化合物可按照路線l,路線2和路線3的合成路線制備，通過此路線將有助于理解本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明的內容。路線l試劑與條件(a)R=H，CH3;C6H5CH2CN，Zn/THF，回流。(b)NH2CSNH2，Na/EtOH,回流。。)含不同基團的鹵代物，甲醇鈉，室溫。路線2試劑與條件(d)X2,Pb02,HOAC,室溫，反應過夜。路線3試劑與條件(e)POCl3，室溫，反應過夜。(f)NH3'H20，80-卯。C，12-24小時。具體實施方式為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應當理解為對本發(fā)明的限制。如無特殊說明，下述實施例中"減壓旋干溶劑"一般指"水泵減壓條件下用旋轉蒸發(fā)儀蒸干溶劑。'實施例l化合物1:3-氧代-4-苯基丁酸乙酯Ethyl3-oxO"4-phenylbutyrate將活化后的Zn粉(18g,依次用3N的鹽酸、H20、無水EtOH、無水Et20洗滌三次，然后真空抽干干燥)，混懸于干燥的THF(125ml)中加熱回流，滴入20滴BrCH2COOEt,45分鐘后(溶液出現綠色物質)一次性加入C6H5CH2CN(3.12ml，27mmo1),滴加BrCH2COOEt(6.6ml，60mrno1),1小時后滴加完畢再回流10分鐘。用THF(125X3ml)稀釋，力卩K2C03(50%，54ml)水溶液快速攪拌45分鐘，靜置分層，傾倒出上層有機溶劑，用THF(2X100ml)洗滌剩下殘余物，合并有機相加入鹽酸(10%，50ml)室溫攪拌45分鐘，用NaHC03調PH"7靜置分層。取上層有機層旋干THF得紅色混合物，加CH2Cl2(300ml)稀釋，加飽和NaHC03溶液(200ml)洗滌，然后用無水Na2S04干燥。取有機層旋干得紅褐色油狀物3-氧代~4-苯基丁酸乙酯5.28g，產率95%。MS(ESI)207[M+H]+，229[M+Na]+實施例2化合物2:2-甲基-3-氧代-4-苯基丁酸乙酯Ethyl-2-methyl-3-oxo~Plienylbutanoate將活化后的Zn粉(13g,依次用3N的鹽酸、H20、無水EtOH、無水Et20洗滌三次，然后真空抽干干燥)，混懸于干燥的THF(45ml)中加熱回流，滴入20滴溴代乙酸乙酯，45分鐘后(溶液出現綠色物質)一次性加入芐腈(1.3ml,10mmol)，滴加BrCH(CH3)COOEt(5.5ml,50rnrno1),1小時后滴加完畢再回流10分鐘。用THF(45X3ml)稀釋，加K2C03(50%,15ml)水溶液快速攪拌45分鐘，靜置分層，傾倒出上層有機溶劑，用THF(2X50ml)洗滌剩下殘余物，合并有機相加入鹽酸(10%,12ml)室溫攪拌45分鐘，用NaHC03調PH"7靜置分層。取上層有機層旋干THF得黃綠色混合物，加CH2C12(150ml)稀釋，加飽和NaHC03溶液(100ml)洗滌，然后用無水Na2S04干燥。取有機層旋干得黃綠色油狀物2-甲基-3-氧代-4-苯基丁酸乙酯1.87g，產率85%。MS(ESI)ffi/z:221[M+H]+實施例3化合物3:6-節(jié)基硫尿嘧啶6-benzyl-2-thioxO"2，3-dihydropyrimidiii-4(lH)~one將金屬鈉(4g,174mmol)溶于無水EtOH(90ml)中，加入SO(NH2)2(9.28g,120腿o1)，和化合物l(1.64g，8.0mmo1)，反應混合物加熱回流6小時。在40-50'C減壓旋至幾乎全干，剩余物溶于水(80ml)中。加入濃鹽酸(14ml)析出沉淀，加HOAC調節(jié)直到pH&4，用抽濾漏8斗過濾出沉淀，用10XEtOH溶液洗滌，干燥后得白色固體1.53g，產率86.5%。MS(ESI)/m/z:219[M+H]+實施例4化合物4:5-甲基-6-芐基硫尿嘧啶6-benzyl-5-methyl-2-thioxo~2j3-dihydropyrimidin~4(lH)~one將金屬Na(lg，43.5mmol)溶于無水EtOH(20ml)中，力口入SO(NH2)2(1.8g,23mmol)，和化合物2(0.4g，1.8mmol)，反應混合物加熱回流2小時。在40-5(TC減壓旋至幾乎全干，剩余物溶于水(20ml)中。加入濃鹽酸(4ml)析出沉淀，加HOAC調節(jié)直到pH"4，用抽濾漏斗過濾出沉淀，用10XEtOH溶液洗滌，干燥后得白色固體256mg,產率61%。MS(ESI)ot/z:233[M+H]+，255[M+Na]+實施例5化合物1a:2-芐基硫-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-2-(benzylthio)pyrimidi]i~4(3H)~one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入C6HsCH2Br(132ul，1.1mmol)，常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，旋干溶劑，加H20(30ml)溶解，此時可能出現渾濁，然后滴加HOAC調PH"7，析出白色固體，靜置58小時，過濾，得白色固體。通過硅膠柱色譜純化(CH2C12:EtOAc=5:1),最后得純品250mg,產率80%,Rf=0.45(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp188.8-190.5。C。MS(ESI)jw/z:309.0[M+l〗+，331[M+Na]+NMR(300固z,CDC13)S:3.84(s,2H，C6H5CH2)，4.38(s，2H，CH2S)，5.94(s,1H，C5-H)，7.11-7.51(m，10H，Ar墨H).13C蘭R(75MHz,CDC13)S:34.61(C6H5CH2S)，43.96(C6H5CH2),108.46(C-5)，126.84,127.51,128.51,128.63，129.14，129.45,136.51，136.70(C-arom)，160.21(C-6)，165.32(C-2),167.94(CM).Anal.(C18H16N2OS),C,H,N，O，S.實施例6化合物1b:2-苯乙基硫-6-芐基嘧啶酮6~beiizyl-2-(phenethylthio)pyrimidiii~4(3H)~one.將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol),溶解后加入C6H5(CH2)2Br(200ul，1.5mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體248mg，產率77%，Rf=0.37(CH2C12:EtOAc=3:1),mp139-140°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+l〗十，345.0[M+Na]十'HNMR(300MHz，CDC13)S:2,95-3.00(t,2H，SCH2),3.37-3.42(t，2H，SCH2CH2)，3.86(s，2H,C6H5CH2),6.01(s，1H，tVH)，7.18-7.34(m，IOH，Ar-H)，12.75(brs，1H,N3-H).13C腹R(75MHz，CDC13)&31.78(CH2S),35.73(C6H5CH2)，44.00(C6H5￡H2CH2S)，108.41(C-5)，126.59，126.86,128.53，128.58，128.62，129.42，137.05，139.74(C-arom)，160.61(C-6)，165.35(C-2)，168.01(C-4).Anal.(C19H18N2OS)，C，H,N，O，S.實施例7化合物lc:2-(3-苯基)丙基硫-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-2-(3~phenylpropylthio)pyrimidin~4(3H)~one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加入CfiH5(CH2)3Br(152ul，1.2mmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體254mg,產率88%,Rf=0.5(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp149-150T。MS(ESI)m/t:337.1[M+l]+，359.0[M+Na]+'H畫R(500MHz,CDC13)S:2.00-2.06(m，2H,CH2CH2CH2)，2.72-2.75(t，2H，C6H5CH2CH2)，3.17-3.20(t,2H,CH2CHiS)，3.81(s,2H,C6H5CH2)，6.00(s,1H,C5-H),7.18-7.33(m,10H，Ar-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:30.09(CH2S),30.61(SCH2￡H2),34.67(QLCH2CH2S)，43.98(C6H5CH2)，108.23(C-5)，126.05，126.82,128.43，128.47，129.43，137.10,140.99(C-arom)，160.68(C-6),165.24(C-2),167.98(CM).Anal.(C20H20N2OS)，C,H，N，O，S.實施例8化合物1d:2-(2-甲基)芐基硫-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-2-(2-niethylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)~one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加A(o-CH3)C6H4CH2Br(145ul，1.2mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體254mg,產率88%，Rf=0.47(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp170-172°C。MS(ESI)/m/z:323.1[M+l]+&NMR(300MHz,CDC13)S:2.36(s，3H,C6H4CH3)，3.98(s，2H，C6H5CH2)，4.67(s，2H，CH2S)，6.10(s，1H，C5-H)，7.00-7.63(m，9H，Ar-H),12.96(brs,1H，N3-H).13C畫R(75MHz,CDC13)S:19.37(C6H4CH3)，33.09(CH2S)，43.87(C6H5CH2),108.38(C-5)，126.15，126.92,128.01，128.66，129.52，130.27，130.46，133.67，136.83，136.99(C-arom)，160.68(C-6),165.33(C-2)，167.82(C-4).Anal.(C19Hi8N2OS),C,H,N,0,S.實施例9化合物1e:2-(3-甲基)芐基硫-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-2-(3-methyl-benzylthio)pyrimidin-4(3H)-oiie將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加A(i-CH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mrno1)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體190mg,產率59%,Rf=0.47(CH2C12:EtOAe2:1),mp148.5-149.5。C。MS(ESI)wi/z:323.1[M+l]+'H蘭R(300MHz,CDC13)S:2.33(s,3H，C6H4CH3)，3.87(s，2H,C6H5CH2),4.39(CH2S),6.00(s,1H，C5-H)，7.07-7.36(m，9H，Ar-H),13.20(brs，1H，N3-H).13C腿R(75MHz,CDC13)S:21.34(C6H4CH3),34.70(CH2S),44.01(C6H5CH2)，108.39(C-5)，126.25，126.87，128.33,128.43，128.65，129.47,129.89，136.31，137.06，138.22(C-咖m),160.49(C-6)，165.63(C-2),168.05(C-4).Anal.(C19H18N2OS),C，H,N，O,S.實施例10化合物1f:2-(3-甲氧基)芐基硫-6-節(jié)基嘧啶酮6"benzyl-2-(3-methoxybenzy他io)pyrimidin>4(3H)-o]ie將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加A(/w-OCH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體243mg,產率78%，Rf=0.37(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp159-160°C。MS(ESI):338.9[M+l]+，361[M+Na]+^腿R(500MHz,CDC13)S:3.79(s，3H，OCH3)，3.87(s,2H,C6H5CH2)，4.40(s,2H,CH2S)，5.99(s，1H，C5-H)，6.80-7.35(m，9H,Ar陽H).13CNMR(125MHz,CDC13)5:34.75(CH2S)，43.93(C6H5CH2)，55.22(OCH3)，108.39(C-5)，114.66，121.51，128.67，129.46，129.57，136.94,137.88，160.40(C-arom)，159.70(C-6)，165.47(C-2)，168.00(C-4).Anal.(C19H18N202S)，C，H，N，O,S.11實施例11化合物1g:2-(4-叔丁基)芐基硫-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-2-(4-tert-butylbenzylthio)pyrimidin-4(3H>one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入(p-t-Bu)C6H4CH2Br(170ul，1.2腿ol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體288mg，產率79%，Rf=0.4(CH2C12:EtOAc=3:l),mp169-170。C。MS(ESI)m/z:365.0[M+l]+，387.0[M+Na]+'H麗R(500MHz,CDC13)S:1.34(s，9H，(CH3)3C)，3.87(s，2H，C6H5CH2),4.39(s,2H,CH2S)，6.00(s，1H，C5-H)，7.06-7.56(m，9H,Ar-H).13C薩R(125MHz,CDC13)S:31.30((￡H3)3C),34.40(CH2S)，34.51恥44.01((CH3)3Q:108.46(C-5)，125.47，126.83，128.64，128.89,129.49，133.36,137.10，150.55(C-咖m)，160.50(C-6)，165.35(C-2)，167.91(C4).Anal.(C22H24N2OS)，C,H，N,O,S.實施例12化合物1h:2-(2-萘基)甲基硫-6-芐基嘧啶酮6"benzyl曙2-(naphthalen-2-ylmethylthio)pyrimidiii"4(3H)-oiie將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml),加入化合物3(218mg，1mmol)，溶解后加入j9-溴甲基萘(130rng,l.OSmmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得純品220mg,產率65%，Rf=0.38(CH2C12:EtOAc=3:1)，mp213-214°C。MS(ESI)to/z:359.1[M+l]+，381.2[M+Na〗+麗R(500MHz,DMSO-<4)S:3.84(s，2H,C6H5CH2),4.55(s，2H,CH2S)，6.02(s,1H,Cs-H)，7.23-7.33(m,5H，Ar-H)，7.45-7.53(m，3H，Ar-H),7.80-7.87(m,4H，Ar-H).13CN證(75MHz,Pyridine-d5)5:34.73(CH2S)，43.75(C6H5CH2),107.61(C-5),126.15,126.43，126.79,127.53，127.85,127.96，128.02，128.51，128,75,129.62，132.93，133.61,138.38(C-arom)，162.91(06)，165.06(C-2)，167.06(C-4).Anal.(C22Hi8N2OS),C，H,N，O，S.實施例13化合物1i:2-(l-苯基)乙基硫-6-芐基嘧啶酮6-benzyl誦2-(l-phenylethylthio)pyrimidin誦4(3H)-one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物3(218mg,1mmol)，溶解后加入C6H5(CH3)CHBr(220ul,1.15mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體209mg，產率65%,Rf=0.56(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp213-214°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+lf，H醒R(500MHz,CDC13)S:1.72-1.74(d，3H，QbCH),3.86(s,2H，C6H5CH2),5.11-5.15(q，1H，CH3￡H),6.00(s，1H,C5-H),7.24-7.38(m,IOH，Ar-H).13C腿R(125MHz,CDC13)S:22.01(CH3CH)，44.00(CH3￡HS),44.63(C6H5CH2),108.32(C-5),126.85，127.54,128.50,128.64，129.49,137.13,141.97(C-arom),160.37(C-6)，165.72(C-2),168.14(C-4).AnaL(C19H18N2OS)，C，H，N，O，S.實施例14化合物1j:2-(乙氧甲基硫)-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-2-(ethoxymethylthio)pyrimidin~4(3H)~one將金屬Na(175mg)溶于無水MeOH(12ml)，加入化合物3(218mg,1mmol),溶解后加入C2H5OCH2Cl(285ul，3mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體146mg，產率53%，Rf=0.38(CH2Cl2:EtOAc=、2:1),mp130-131°C。MS(ESI)m/z:277.3[M+l]+!HNMR(500MHz,CDC13)S:1.18-1.21(t，3H,CH2CH3)，3.54-3.59(q，2H，OCH2CH3),3.86(s，2H，CH2C6H5)，5.44(s，2H，SCH20)，6.02(81H,C5-H)，7.267.35(m，5H，Ar-H)，12.80(brs,1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)8:14.69(CH2￡H3),43.91(C6H5CH2)，65.40(SCH20)，72.25(0￡H2CH3)，109.00(C-5)，126.89，128.63,129.48，136.92(C-arom)，159.67(C-6)，165.18(C-2)，168.05(C-4).Anal.(C14H16N202S),C，H,N,O,S.實施例15化合物1k:2-(芐氧甲基硫)-6-芐基嘧啶酮6"benzyl-2-(benzyloxyinethylthio)pyrimidin~4(3H)"One將金屬Na(46mg)溶于無水MeOH(3ml)，加入ft合物3(43.6mg,0.2mmol),溶解后加入C6H5CH20CH2C1(56ul，4mmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體34mg，產率50%，Rf=0.55(CH2C12:EtOAc=2:l)，mp132-133°C。MS(ESI)m/z:339.0[M+l]+，361.0[M+Na]+JHNMR(300MHz，CDC13)S:3.78(s，2H,CH2C6H5)，4.60(s,2H，OCH2C6H5),5.46(s，2H，SCH20)，6.01(s，1H,Cs-H)，7.26-7.55(m，IOH，Ar-H)，12.40(brs，1H,NrH).13CNMR(125MHz,CDC13)&43.87(CH2C6H5)，71.19(SCH20),71.54(OCH2C6H5)，109.19(C-5)，126.93，128.12，128.40，128.53，128.67，129.31,129.47，136.47,136.86(C-arom),159.33(C-6),164.77(C-2)，167.99(C-4).Anal.(Ci9H18N202S)，C，H,N,O，S.實施例16化合物11:2-烯丙基硫-6-芐基嘧啶酮2-(allylthio)-6"benzylpyrimidin"4(3H)-one將金屬Na(32mg)溶于無水MeOH(6ml)，加入化合物3(218mg，1mmol),溶解后加ACH2=CHCH2Br(176ul,2.2mmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體159mg,產率61%，Rf=0.55(CH2C12:EtOA(=2:1)，mp132-133'C。MS(ESI)m/z:259.2[M+l]+，291.2[M+Na]+JH畫R(500MHz,CDC13)5:3.83-3.84(d，4H，CH2S，CH2C6H5,信號有重疊)，5.11-5.26(q，2H,CH-賜，5.85-5.92(m，1H,CH=CH2)，6.00(s，1H,C5-H)，7.26-7.35(m,5H，Ar國H)，13.26(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)8:33.31(SCH2),43.97(CH2C6H5)，108.34(C-5),118.79(CH=￡H2)，132.39(￡H=CH2),126.86，128.61,129.48，137.00(C-arom)，160.23(C-6),165.74(C-2),168.15(C-4).Anal.(C14H14N2OS),C，H，N,O，S.實施例17化合物2a:2-芐基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-5-metIiyl-2-(benzylthio)pyi*imidin-4(3H)-one將金屬Na(120mg)溶于無水MeOH(10ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加AC6H5CH2Br(145ul，1.2mrno1)，常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，旋干溶劑，加H20(30ml)溶解，此時可能出現渾濁，然后滴加HOAC調PH^7，析出白色固體，靜置58小時，過濾，得白色固體。通過硅膠柱色譜純化，最后得白色固體95mg，產率30%，Rf=0.58(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp176.5-177.5°C。MS(ESI)m/z:323.0[M+l]+，345.0[M+Na]十畫R(300MHz,CDC13)S:2.04(s,1H，C5-CH3)，3.96(s，2H，C6H5gH2),4.38(s，2H,CH2S),7.23-7.32(m，IOH，Ar-H)，12.44(brs，1H，N3-H).13C薩R(75MHz,CDC13)S:10.73(C5-CH3)，34.54(C6H5CH2)，41.04(C6H5CH2S),116.58(C-5)，126.50，127.41，128.51，128.98,129.09，136,97,137.70(C-arom)，155.90(C-6),162.07(C-2),165.30(C-4).Anal.(C19H18N2OS)，C,H，N,O,S.化合物2b:2-苯乙基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-2-(benzyl也io)-5-methylpyrimidin隱4(3H)-one將金屬Na(69mg)溶于無水MeOH(5ml),加入化合物4(70mg,0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH2)2Br(47ul，0.36mrno1)，常溫下反應，經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體53mg,產率52%,Rf=0.58(CH2Cl2:EtOAc=2:1),mp156.5-157.5°C。MS(ESI):337.5[M+l]+，359.4[M+Na]+力NMR(500MHz,CDC13)S:2.14(s，3H,C5-CH3),2.95-2.982H，SCH2)，3.35-3.382H，SCH2CH2)，3.98(s,2H,C6H5CH2)，7.16-7.32(m,10H,Ar-H).13CN證(125MHz,CDC13)S:10.72(C5-CH3),31.81(CH2S),35.83(C6H5CH2)，41.05(C6H5GH2CH2S),116.59(C-5)，126.50,126.53,128.49，128.51,128.59,128.91,137.95,139.88(C-arom)，156.15(C-6),162.06(C-2)，165.06(C-4).Anal.(C20H20N2OS),C，H，N，O,S.實施例19化合物2c:2-(3-苯基)丙基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6"beiizyl-5-inethyl垂2-(3-phenylpropy他io)pyrimidin-4(3H)-one將金屬Na(69mg)溶于無水MeOH(5ml),加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH2)3Br(55ul，0.36mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體66mg，產率62%，Rf=0.47(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp152-153。C。MS(ESI)i/z:351.4[M+l]+，373.4[M+Na]+，HNMR(300MHz,CDC13)S:2.12(s,1H,C5-(H3)，1.94-2.05(p，2H，CH2CH2CH2),2.67-2.72(t，2H，C6H5CH2CH2)，3.11-3.16(t，2H，CH2CH2S),3.91(s，2H，C6H5CH2),7.15-7.31(m，10H，Ar-H).13CNMR(75MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3)，30.06(CH2S),30.81(SCH2￡H2)，34.72(CH2CH2CH2S),41.01(C6H5CH2),116.32(C-5)，126.00，126.43，128.40，128.44,128.95，137.95，141.07(C墨arom)，156.23(C-6)，162.03(C-2),165.34(C-4).Anal.(C21H22N2OS)，C,H，N，O,S.實施例20化合物2d:2-(2-甲基)芐基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6陽benzyl曙5-methyl-2-(2-methylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)"One將金屬Na(150mg)溶于無水MeOH(10ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加入(o-CH3)CeH4CH2Br(148ul，1.1mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體249mg，產率74%,Rf=0.60(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp173-174°C。MS(ESI)m/z:337.2[M+l]+，359.1[M+Na]+NMR(500MHz,CDC13)S:1.93(s,3H,C5-CH3),2.36(s，3H，C6H4CH3)，3.98(s，2H，C6H5CH2),4.41(CH2S),7.05-7.33(m,9H，Ar-H).13C畫R(125MHz,CDC13)5:10.74(C5-CH3)，19.33(C6H4CH3)，32.84(CH2S)，41.05(C6H5CH2),116.56(C-5),126.14,126.51，127.86，128.50，128.99,130.13，130.45，134.27,136.97,137.92(C-咖m)，156.11(C-6)，162.06(C-2)，165.28(C-4).Anal.(C20H20N2OS)，C,H，N，O，S.實施例21化合物2e:2-(3-甲基)芐基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-5_methyl-2_(3-methylbenzylthio)pyrimidin-4(3H)~one將金屬Na(225mg)溶于無水MeOH(15ml)，加入化合物4(232mg，1mmol),溶解后加A(w-CH3)C6H4CH2Br(162ul,1.2mmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體225mg，產率67^,Rf-0.48(CH2Cl2:EtOA(^2:l),mp198-199.5°C。MS(ESI)、m/z:337.1[M+l]+，359.1,Na]十力NMR(300MHz,DMSCW6)S:1.95(s，3H，C5-CH3),2.22(s，3H，CfiliiCHs),3.90(s，2H,C6H5CH2)，4.29(CH2S),7.02-7.31(m,9H，Ar-H)，12.54(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,Pyridine-rf5)S:10.79(C5-CH3)，21.00(C6H4CH3),34.34(C6H5CH2)，40.93(CH2S)，115.84(C-5),126.45，126.52,128.17,128.63,128.69,129.24，123.00，138.04,138.13,138.86(C-arom),157.88(C-6)，161.22(C-2)，164.67(C-4).Anal.(C20H20N2OS)，C，H，N，O，S.實施例22化合物2f:2-(3-甲氧基)芐基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-5-methyl-2-(3-methoxybenzylthio)pyrimidin-4(3H)"Oiie16將金屬Na(30mg)溶于無水MeOH(2ml),加入化合物4(46.4mg，0.2mmol),溶解后加入(加-OCH3)C6H4CH2Br(34ul，0.24mrno1),審溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體30mg,產率43%，Rf=0.6(CH2C12:EtOAc=2:1)，mp162-163。C。MS(ESI)i/z:353.0[M+l]+，374.9[M+Na]+&NMR(300MHz,CDC13)S:2.10(s,3H，CrCH3),3.77(s,3H，C6H線)，3.96(s,2H,OCH3)，4.37(s，H，CH2S)，6.79-6.89(m，3H,Ar-H)，7.14-7.32(m，6H，Ar-H).13C薩R(75固z，CDC13)S:10.74(C5-CH3)，34.67(C6H5CH2),41.09(CH2S)，55.21(OCH3)，121.44(C-5),113.09，114.54,116.64，126.50，128.50,139.55,137.82，138.30，159.67(C-arom),155.93(C-6)，162.03(C-2),165.24(CM).Anal.(C2oH20N202S)，C，H，N，O,S.實施例23化合物2g:2-(4-叔丁基)芐基硫一5-甲基-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-5-methyl-2-(4-tert-butylbenzylthio)pyrimidin~4(3H)~one將金屬Na(45mg)溶于無水MeOH(3ml),加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入(^t-Bu)C6H4CH2Br(47ul,0.332mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體63mg，產率55X，Rf-0.48(CH2Cl2:EtOA(^2:l),mpl88-189。C。MS(ESI)m/z:379.0[M+l〗+，401.0M+Na]+.，HNMR(300MHz，CDC13)S:1.34(s9H,(CH3)3C)，1.70(s3H,C5-CH3),3.972H,C6H5CH2)，4.36(s,2H，CH2S)，7.20-7.34(m，9H，Ar-H).13CNMR(75MHzCDC13)&10.72(C5《H3)，31.30((QH3)3C),34.33)，34.50(CH2S),41.00((CH3)3￡)，116.64(C-5),125.46,126.47，128.49，128.80,128.98,133.69,137.89,155.95(C-arom)，150.45(C-6)，161.88(C-2)，164.87(C4).Anal.(C23H26N2OS),C，H，N，O,S.實施例24化合物2h:2-(2-萘基)甲基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-5-methyl-2-(naphthalen-2-ylmethy他io)pyrimidin-4(3H)-one將金屬Na(30mg)溶于無水MeOH(2ml)，加入化合物4(46.4mg,0.2mmol),溶解后加入》-溴甲基萘(50mg，0.22mrno1),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體55mg，產率74%，Rf=0.48(CH2C12:EtOAc=3:1)，mpl卯.5-191.5°C。MS(ESI)/m/z:373.1[M+l+，395.1[M+Na]十力NMR(500MHz,DMS(W6)S:1.96(s，3H，C5-CH3)，3.92(s,2H，C6H5CH2)，4.52(s，2H，CH2S),7.19-7.26(m,5H,Ar-H),7.43-7.50(m，3H，Ar-H)，7.76-7.89(m,4H,Ar-H),12.61(brs,1H，N3-H).13CNMR(125MHz，)S:10.79(C5-CH3),34.55(C6H5CH2)，40.96(CH2S)，115.86(C-5)，126.13，126.40,126.53,127.56,127.84,127.94,128.00,128.47，128.71，129.25，132.93，133.62,135.89，138.84(C-arom),157.85(C-6)，161.32(C曙2)，164.72(C-4).Anal.(C23H20N2OS)，C，H，N，O，S.實施例25化合物2i:2-(l-苯基)乙基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶酮6>benzyl-5-methyl-2-(l-phenylethyltIiio)pyrimidin~4(3H)~one將金屬Na(45mg)溶于無水MeOH(3ml)，加入化合物4(70mg，0.3mmol)，溶解后加入C6H5(CH3)CHBr(63ul,0.33mmol),常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體50mg，產率50%,Rf=0.44(CH2C12:EtOAc=2:1),mp165-166°C。MS(ESI)zw/z:337.0[M+l]+，359.0[M+Na〗+NMR(300MHz,CDC13)S:1.67-1.70(d，3H，Qi3CH)，2.03(s,3H,C5-CH3)，3.94(s,2H,C6H5CH2)，5.02-5.10(q，1H，CH3￡H)，7.22-7.35(m,10H,Ar-H).13C醒R(75MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3),22.06(CHaCH)，40.96(C6H5CH2),44.73(CH3￡HS)，U6.65(C-5),126.45，127.41，128.46，128.52，128.98，137.91,142.08(C-arom)，155.75(C-6)，161.93(C-2)，164.88(CM).AnaL(C20H2oN2OS)，C，H，N，O，S.實施例26化合物2j:2-(乙氧甲基硫-5-甲基6-芐基嘧啶酮6~benzyl-2-(ethoxymethylthio)-5-inethylpyrimidin-4(3H)-one將金屬Na(60mg)溶于無水MeOH(10ml)，加入化合物4(88mg，O.38mmol)，溶解后加AC2H5OCH2Cl(152ul,1.55mrno1)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體36mg，產率33%，Rf=0.31(CH2C12:EtOAc=3:1)，mp129-130°C。MS(ESI)/m/z:291.0,1]+，312.9[M+Na]+力NMR(500MHz,CDC13)S:1.17-1.20(t,3H，CH2CH3),2.13(s，1H，C5-CH3)，3.53-3.57(q,2H,OCH2CH3),3.95(s，2H,CH2C6H5)，5.38(s,2H，SCH20),7.22-7.32(m，5H,Ar-H),11.99(brs,1H，N3-H)."C腿R(125MHz,CDC13)5:10.78(C5-CH3)，14.70(CH2￡H3)，40.97(C6H5CH2),65.19(SCH20),72.32(0￡H2CH3),117.40(C-5)，126.50,128.47，128.56，128.91，129.18，137.84(C-arom)，155.36(C-6),161.90(C-2)，164.82(C-4).Anal.(C15H18N202S)，C，H，N，O,S.實施例27化合物2k:2-(芐氧甲基硫)-5-甲基6-芐基嘧啶酮6-benzyl-2-(benzyloxymethylthio)-5-methylpyrimidin~4(3H)-one將金屬Na(60mg)溶于無水MeOH(10ml)，加入化合物4(88mg,0.38rnrno1)，溶解后加AC6H5CH2OCH2Cl(162ul，0.75mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測,待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體50mg，產率38%,Rf=0.42(CH2C12:EtOAc=3:l),mp153-155°C。MS(ESI);w/z:353.0[M+l]+,391.0[M+K]+NMR(500MHz,CDC13)S:2.14(s，3H，C5-H)，3.95(s,2H,CH2C6H5),4.59(s，2H,OCH2C6H5)，5.43(s，2H，SCH20),7.12-7.52(m,10H，Ar-H)，11.57(brs，1H，N3-H).13'CNMR(125MHz,CDC13)S:10.80(C5-CH3)，40.95(CH2C6H5),71.08(SCH20)，71.75(OCH2C6H5),117.63(C-5)，126.53，127.87，128.36，128.43,128.63,128.90，129.33,136.55，137.76(C-arom),154.97(C-6),161.84(C-2)，164.49(04).Anal.(C20H20N2O2S)，C，H，N,O，S.實施例28化合物2I:2-烯丙基-5-甲基-6-芐基嘧啶酮2-(allylthio)~6~benzyl-5-niethylpyrimidin~4(3H)-one將金屬Na(115mg)溶于無水MeOH(10ml)，加入化合物4(109Ag,0.5rnrno1),溶解后加入CH2=CHCH2Brl(85ul，1.1mmol)，常溫下反應。經TLC監(jiān)測，待原料點消失后，處理方法同上。最后得白色固體72mg，產率53%，Rf=0.50(CH2Cl2:EtOAc=3:1),mp150.5-151.5°C。，MS(ESI)im/z:273.0[M+l]+畫R(500MHz,CDC13)S:2.12(s，2H，C5-CH3)，3.94(s,2H，CH2C6H5),3.79-3.80(d，2H，CH2S)，5.11-5.24(q，2H，CH=Cfl2),5.84-5.91(m，1H,CH=CH2),7.23-7.33(m，5H,Ar-H),12.61(brs，1H，N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:10.68(C5-CH3)，33.31(CH2C6H5),41.05(SCH2),118.45(C-5),116.49(CH=￡H2)，132.80(￡H=CH2)，126.47，128.44,128.95,137.91(C-arom)，155.81(C-6),162.6(C-2)，165.4(C-4).Anal.(C15H16N2OS)，C，H，N,O,S.實施例29化合物3a:2-芐基硫-5-碘-6"芐基嘧啶酮6"benzyl-2-(benzy他io)-5-iodopyrimidin-4(3H)-one將la(31mg，1mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)攪拌，然后加入l2(16mg,0.06腿o1)，常溫下反應。經TLC檢測，原料點消失后，加水40ml，析出沉淀，靜置，然后過濾得黃褐色固體，用CH2Cl2溶解固體，過濾得濾液，旋去部分溶劑，通過制備性薄層板分離，得白色固體40mg，產率92%，Rf=0.37(CH2Cl2:Et2O-2:1)，mp175-177。C。MS(ESI)iii/z:435.0M+1]+'HNMR(500MHz,CDC13)S:4.23(s，2H，C6H5CH2)，4.37(s，2H，CH2S)，7.11-7.51(m，10H,Ar-H),12,00(brs,1H，N3-H).13CNMR(75MHz,CDC13)S:34,99(C6H5CH2),47.12(C6H5CH2S)，85.64(C-5)，126.87，127.64，128.50,128.62，129.02，136.28,137.00(C-arom),159.63(C-6)，161.82(C-4)，168.62(C-2).Anal.(C18H15N2OSI)，C,H,N,O，S,I.實施例30化合物3b:2-苯乙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6"benzyl-5-iodO"2-(phenethylthio)pyrimidin~4(3H)-one將lb(50m&0.16mmol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入PbO2(24mg，0.1mmol)攪拌OOOO.，然后加入12(25111&0.1mmol),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體25mg，回收原料19mg，產率70%，Rf=0.65(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp175-177。C。MS(ESI)wi/z:449.2[M+l]+，471.2[M+Na]+'HNMR(500MHz,CDC13)S:2.93-2.96(t，2H,SCH2),3.34-3.37(t，2H,SCH2CH2),4.24(s,2H,C6H5CH2)，7.13-7.40(m,1OH,Ar-H),11.60(brs，1H,N3-H).13CNMR(125MHz，CDC13)S:32.19(CH2S)，35.55(C6H5CH2)，47.16(C6H5￡H2CH2S)，85.61(C-5),126.68，126.87,128.47，128.57,129.24，137.10，139.46(C-arom)，159.94(C-6)，161.69(C-2),168.66(CM).Anal.(Ci9H17N2OSI)，C，H,N，O，S，I.實施例31化合物3c:2-(3-苯基)丙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-5-iodO"2-(3-phenylpropylthio)pyrimidin"4(3H)-one將lc(34mg，0.1腿ol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)攪拌，然后加入l2(16mg，0.06mmo1),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體18mg,回收原料5mg，產率45%，Rf=0.67(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp155-156°C。MS(ESI)m/z:463.1[M+l]+，485.1[M+Na]+NMR(500MHz,CDC13)S:1.93-2.00(p，2H,CH2CH2CH2)，2.67-2.70(t,2H,C6H5CH2CH2),3.10-3.13(t，2H，CH2CH2S)，4.17(s，2H，C6H5CH2),7.13-7.37(m，10H,Ar-H),11.65(brs,1H,N3-H).13CNMR(125MHz,CDC13)S:30.46(CH2S)，30.60(CeH5CH2)，34.64(SCHafilfc),47.10(￡H2CH2CH2S),85.26(C-5),126.11，126.81，128.40，128.44，128.46，129.30,137.12，140.82(C-咖m)，160.07(C-6)，161.74(C-2)，168.62(C-4).Anal.(C2oHl9N2OSI)，C，H，N,O,S，I.實施例32化合物3d:2-(2-甲基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6"benzyl-2-(2-methylbenzylthio)-5-iodopyrimidin"4(3H)"One將Id(420.13mmol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入Pb02(19mg,0.08mmol贈拌，然后加入l2(20m&0.08mmo1),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體20mg,回收原料15mg，產率53%,Rf=0.63(CH2C12:Et20:HOAC-2:1:0.01),mp176-178'C。MS(ESI)ifi/z:449.1[M+l]+,471.1[M+Nal+力NMR(300MHz,CDC13)S:2.34(s,3H，C6H4CH3)，4.23(s,2H,0^5012)，4.38(s，2H，CH2S),7.03-7.40(m，9H,Ar-H)，11.72(brs，1H,N3-H).13C醒R(75MHz,CDC13)S:19.28(CeH4CH3)，33.36(CH2S)，47.13(C6H5CH2)，85.60(C-5)，126.22，126.87，128.01，128.48,129.31，130.07,130.54，133.54，136.94，137.04(C-arom)，159.82(C-6)，161.82(C-2),168.58(C-4).Anal.(Ci9H17N2OSI)，C，H，N,O，S,I.實施例33化合物3e:2-(3-甲基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6-benzyl-5-iodo-2-(3-methylbenzylthio)pyrimidin"4(3H)-onele(64.5mg，0.13mmol)溶于冰HOAC(2ml)中，完全溶解后加入Pb02(31mg，0.13mmol)攪拌，然后加入l2(33mg,0.13mmo1)，常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體78mg,產率78%,Rf=0.67(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp182-183。C。MS(ESI)im/z:449.1[M+l]+&醒R(300MHz,CDC13)S:2.31(s，3H，C6H4CH3),4.21(s,2H，CeH5CH2)，4.34(s，2H,CH2S)，7.02-7.24(m,4H，Ar陽H)，7.26-7.40(m，5H,Ar-H),12.04(brs，1H，N3-H).13C腿R(75MHz,CDC13)S:21.33(C6H4CH3)，35.03(C6H5CH2),47.10(CH2S),85.54(C-5)，126.10，126.85,128.48,128.52，129.30,129.69,136.07,136.31，136.99，138.35(C-arom)，159.88(C-6),162.06(C-2),168.63(C-4).AnaL(c19h17n2osi)，c，h,n,o，s，i.實施例34化合物3f:2-(3-甲氧基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6~beiizyl~2-(3~methoxybenzylthio)~5~iodopyrimidiii~4(3H)~one將If(34mg,0.1mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg，0.06mmol)攪袢，然后加入l2(16mg，0.06mmol),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體70mg,產率76%,Rf=0.45(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01),mp161.5-163°C。MS(ESI)/z:465.0[M+l]+NMR(500MHz,CDC13)S:3.79(s,3H,OCH3),4.21(s,2H，C6H5CH2)，4.35(s，2H，CH2S)，6.82-6.87(m，3H，Ar-H),7.16-7.19(m，1H,Ar-H),7.26-7.39(m,5H,Ar-H)，12.08(brs，1H，N3-H).13CNMR(125固acdc13)&35.06(ch2s)，47.11(C6H5ch2>,55.23(och3),85.59(c-5)，113.23,114.57，121.36,126.85，129.29,129.64，136.94,137.62(C-arom)，159.76(C-6)，162.05(C-2)，168.66(C-4).Anal.(C19H17N202SI)，C，H，N,O,S,I.實施例35化合物3g:2-(4-叔丁基)芐基硫一5-碘-6-芐基嘧啶酮6"benzyl-2-(4畫tert-butylbenzylthio)-5-iodopyrimidin-4(3H)-one將lg(36mg,0.1腿ol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(15mg,0.06mmol)攪拌，然后加入l2(16mg，0.06mmo1),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體23mg，回收原料15mg，產率48%，Rf=0.66(CH2C12:Et20:HOAC-2:1:0.01),mp180-181°C。MS(ESI)/m/z:491.3[M+l]十，513.2[M+Na]十畫R(500MHz,CDC13)S:1.32(s,9H,(CH3)3C)，4,24(s，2H，C6H5CH2),4.34(s，2H，CH2S),7.17-7.40(m，9H，Ar-H)，11.42(brs，1H，NrH).13CN證(125固z，CDC13)S:31.29((￡H3)3C)，34.53(C6H5CH2),34.75(CH2S)，47.13((CH3)3￡)，85.70(C-5),125.57，126.85，128.50，128.77，129.33，133.07,137.04，150.72(C-arom)，159.69(C-6)，161.54(C-2)，168.53(C-4).Anal.(C22H23N2OSI),C,H，N，O，S,I.實施例36化合物3h:2-(2-萘基)甲基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6~benzyl-5~iodo~2-(naphthalen-2-ylmethylthio)pyrimidin-4(3H)~one將lh(50mfe0.14腿ol)溶于冰HOAC(1.5ml)中，完全溶解后加入PbOz(20mg,0.08mmol)攪拌，然后加入12(21111&0.0811111101),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體40mg,回收原料15mg,產率85%,Rf=0.51(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp205-206°C。MS(ESI)m/::483.3[M-l]-'H腿R(500MHz,DMSO-A)S:4.33(s，2H，C6H5CH2)，4.67(s，2H，CH2S)，7.18-7.34(m,3H，Ar誦H)，7.45-7.60(m,5H，Ar-H)，7.82-7.92(m,4H，Ar隱H)，8.71(brs，1H，N3-H).13CNMR(75MHz,Pyridine-c5)8:34.88(C6H5CH2)，47.01(CH2S),87.28(C-5)，126.23，126.48，126.86，127.96,128.02，128.56，128.68，129.59，132.97，133.61，135.36，135.57,138.04(C-arom)，161.32(C-6),162.07(C-2)，167.39(C4).AnaL(C22H|9N2OSI)，C,H，N,O,S，I.實施例37化合物3i:2-(l-苯基)乙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶酮6"benzyl-5-iodo-2-(l-phenylethylthio)pyrimidin-4(3H)"One將li(32mg，0.14mmol)溶于冰HOAC(1ml)中，完全溶解后加入Pb02(14mg,0.06mmol)攪拌，然后加入l2(15mg,0.06mmol),常溫下反應。經TLC檢測，待原料點消失后，處理方法同上，得白色固體42mg,產率94%，Rf=0.68(CH2C12:Et20:HOAC=2:1:0.01)，mp178-179。C。MS(ESI)w/z:449.0[M+l]+，471.0[M+Na]+N證(500MHz,CDC13)5:1.66-1.68(d，3H，CH3CH)，3.86(q，2H,C6H5CH2),4.99-5.03(q,1H，CH3￡H)，7.26-7.37(m，10H,Ar鄰，11.80(brs，1H,N3-H).23"C畫R(125MHz,CDC13)S:22.03(CIi3CH)，45.30(C6H5CH2)，47.13(CH3￡HS),85.53(C-5),126.82，127.40，127.68，128.46，128.62，129.36，137.11，141.56(C-arom),159.65(C-6),161.卯(C-2)，168.70(C-4).Anal.(C19H17N2OSI),C，H，N,O，S，I.實施例38化合物4e:2-(3-甲基)芐基硫-4-氯-6-芐基嘧啶2-(3-methylbenzyltliio)-4-beiizyl-6~chIoropyrimidine將化合物le(80mg，0.25mmol)溶于POCh(0.35ml)中反應過夜，經TLC檢測，待原料點消失后，加入碎冰，然后加入水(20ml)，用CH;jCl2(15X3ml)萃取，合并有機層，經無水NaS04干燥，通過硅膠柱色譜純化，得淡黃色油狀物80mg,產率94%,Rf=0.5("-hexane:EtOAc=10:1)。MS(ESI)m/z:363.3[M+l]+,365.2[M+3]+'HNMR(300MHz，DMSOA)8:2.25(s，3H，C6H4CH3),4.05(s，2H,C6H5CH2)，4.33(CH2S)，7.03-7.32(m，10H，Ar-H，C5-H，信號有重疊)，13CNMR(75MHz，DMSO-rf6)S:21.39(C6H4CH3)，34.79(CH2S)，43.01(QHsCHz),116.43(C-5),126.53，127.26,128.30,128.75，129.08,129.44，129.67,130.06，137.66,137.76,137.97(C-arom)，160.67(C-4)，171.45(C-6)，172.34(C-2).Anal.(C19H17N2SC1),C,H，N，S,CI.實施例39化合物5d:2-(2-甲基)芐基硫-4-氨基-6-芐基嘧啶2-(2-metfaylbenzyltfaio)-6-l>enzylpyrimidin~4~amJne將化合物4d(68mg，0.20mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)，加濃NHyH20(4ml)，于密封管中90'C反應llh，減壓常溫下旋干溶劑，通過制備薄層色譜分離純化，得白色固體60mg，產率94%，Rf=0.40(PE:EtOAc=2:1)，mp101.5-103.5°C。MS(ESI)/m/z:322.1[M+l]+4NMR(500MHz,CDC13)5:2.43(s，3H,C6H4CH3)，3.93(s，2H，C6H5CH2),4.41(CH2S),4.85(s,2H，C4-NH2),5.85(s，1H，C5-H)，7.11-7.39(m,9H，Ar-H).13C醒R(125MHz,CDC13)S:19.40(C6H4CH3),33.20(CH2S),43.78(C6H5CH2),99.44(C-5)，125.95，126.68,127.31，128.60,129.46,130.05,130.32，135.71,136.97,137.84(C-arom)，162.95(C-4),168.54(C-6)，170.69(C-2).Anal.(C19H19N3S)，C，H，N，S.實施例40化合物5e:2-(3-甲基)芐基硫-4-氨基-6-芐基嘧啶2-(3-me也ylbenzylthio)-6陽benzylpyrimidin-4-amiiie將化合物4e(27mg,0.11mmol)溶于二氧六環(huán)(3ml)，加濃NH3'H20(4ml)，于密封管中90'C反應llh，減壓常溫下旋干溶劑，通過制備薄層色譜分離純化，得白色固體24mg，產率95%，Rf=0.48(PE:EtOAc=2:l)，mp126-128°C。MS(ESI)wi/z:322.0[M+l]+!HNMR(500MHz,CDC13)S:2.34(s,3H，C6H4CH3)，3.92(s，2H，C6H5CH2)，4.38(CH2S),4.77(s，2H，C4-NH2)，5.85(s,1H，C5-H)，7.06-7.35(m，9H,Ar-H).13C畫R(125MHz,CDC13)S:21.37(C6H4CH3),35.00(CH2S),43.78(C6H5CH2),99.38(C-5)，126.13,126.68，127.71，128.24,128.59,129.44，129.80,137.83，137.96,138.21(C-arom),162.89(CM),168.58(C-6)，170.63(C-2).AnaL(C19Hi9N3S)，C，H，N，S.實施例41化合物5h:2-(2-萘)甲基硫-4-氨基-6-芐基嘧啶6~benzyl-2-(naphthalen-2-yImethylthio)pyrimidin>4~ainine將化合物4h(60mg，0.16mmol)溶于二氧六環(huán)(2ml)，加濃NH3'H20(3ml)，于密封管中90X:反應20h,減壓常溫下旋干溶劑，通過制備薄層色譜分離純化，得白色固體40mg,產率70%，Rf=0.52(PE:EtOAc=2:1)，mp151.5-152.5C。MS(ESI)w/z:358.0[M+l]+4NMR(500MHz，CDC13)8:3.93(s，2H，C6H5CH2),4.57(s，2H，CH2S)，4.77(s，2H,C4-NH2),5.85(s，1H，C5-H),7.26-7.33(m，5H，Ar-H)，7.45-7.50(m，2H，Ar陽H)，7.54-7.56(m，1H,Ar-H)，7.79-7.8l(m，4H,Ar-H).13CNMR(125MHz，CDC13)S:35.26(CH2S)，43.79(C6H5CH2)，99.48(C-5)，125.64,126.00，126.69,127.38，127.54，127.63，127.73，128.06，128.60，129.44，132.55，133.35,135.88，137.80(C-arom),162.92(C-4)，168.62(C-6),170.45(C-2).Anal.(C22H19N3S)，C,H，N，S.實施例42化合物5i:2-(1-苯基)-乙基硫-4-氨基-6-芐基嘧啶6"benzyl陽2-(l-phenylethylthio)pyrimidin-4-amine將化合物4i(40mg，0.12mmol)溶于二氧六環(huán)(2ml)，加濃NHyH20(3ml),于密封管中80'C反應22h，減壓常溫下旋干溶劑，通過制備薄層色譜分離純化，得白色固體22mg，產率58%，Rf=0.46(PE:EtOAc=2:1)，mpll5-116。C。MS(ESI)m/z:322.0[M+l]+，HNMR(500MHaCDC13)s:1.74-1.75(43H,CHaCH)，3.89(s,2H，C6H5CH2),4.85(s,2H，C4-NH2)，5.07-5.10(q，1H,CH3￡H)，5.82(s，1H，C5-H)，7.24-7.46(m，認，Ar-H).13C腿R(125MHz，CDC13)5:22.45(CH3CH)，43.77(CH3￡HS)，43.82(C6H5CH2)，99.38(C-5)，126.64，126.91,127.53，128.32，128.56，129.44，137.91，134.70(C-咖m)，162.95(C陽4)，168.47(C國6)，170.48(C-2).Anal.(C19HI9N3S)，C,H,N，S.實施例43對所合成的化合物進行HIV-1逆轉錄酶的生物活性評價一實驗原理1.逆轉錄酶逆轉錄酶是以單鏈RNA為模板，合成雙鏈DNA的DNA聚合酶。是多功能酶，擁有分別以RNA或DNA為模板合成聚合酶及核糖核酸酶H活性。2.核苷酸微孔板共價鍵交聯核酸分子雜交按作用環(huán)境分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸固定在固相支持物上，另一條核酸反應鏈游離在溶液中。本實驗將作為引物的0ligo(dThs的5'端磷酸化后與NUNC公司的96孔氨基板的表面發(fā)生共價交聯，從而使反應在固相支持物上進行。CovaLinkTMNH:是一種在聚苯乙烯的表面附有NH2基團的微孔板。在微孔表面大約含有10"個NH2基團/cm2,蛋白質和多肽可以通過C端或N端結合到微孔板上，核苷酸的5'端磷酸化后可以結合到微孔板表面上，使得整個反應在固相支持物上進行。3.反應原理以oligo(dT)u為引物，polyA(mRNA3'端聚腺苷酸)為模板，dTTP和生物素標記的dUTP為底物，在逆轉錄酶的作用下，摻入合成DNA。生物素標記的dUTP和堿性磷脂酶(ALP)標記的鏈親合素(SA)特異性結合，而與鏈親和素共軛的堿性磷脂酶與PNPP能發(fā)生顯色反應，在405nm可根據吸光度的大小，判定逆轉錄酶的反應活性。二材料與方法2.1材料與儀器HIV-1逆轉錄酶HIV-1RT為基因工程重組酶；AMV逆轉錄酶(AMV-RT)由SIGMA公司提供；膦甲酸鈉(PFA，由江蘇正大天晴制藥有限公司生產，批號0406012);奈韋拉平26(NVP，上海迪賽諾制藥有限公司，批號DH027-4-0409016)。01igo(dT)15(5，末端磷酸化的寡聚胸苷，由大連寶生物工程有限公司合成)；96孔酶標板(CovaLinkNH，丹麥NUNC公司)；biotin-ll-dUTP性物素標記的三磷酸脫氧尿苷，上海申友)，其它試劑均為進口試劑。酶標儀(Bio-Rad，BenchmarkPlus,USA)。2.2實驗方法2.2.101igo(dT)15包被板的制備將01igo(dT)15溶于100mM的1-甲基-咪唑的鹽酸緩沖液中(pH=7.4)，加入96孔酶標板中，與水溶性碳化二亞胺混勻，于5(TC水浴中反應4小時，反應結束后用洗液(50mmol/LTris-HCl，pH7.5)洗三遍，除去未結合的Oligo(dT)15，將包被后的96孔板置4'C保存。2.2.2HIV-1RT活性檢測反應系統(tǒng)總體積為100ul，含50mmol/LTris-HCl,pH=8.3，3mmol/LMgCl2，75mmol/LKC1，5mmol/LDTT,0.13mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)，10ug/mlpoly(A)，0.75^biotin-ll"dUTP,1.5^iMdTTP及適量酶，37'C水浴1小時，用洗液(50mmol/LTris-HCl,pH=7.5，0.15mol/LNaCl，0.05mmol/LMgCl2，0.02%Tween20)洗三次，除去未結合的游離底物；每孔加入100ul1%BSA，室溫封閉30分鐘，阻止生物素與鏈親和素蛋白的非特異性結合，洗板；每孔加入50nl的SA-ALP稀釋液(100ng/ml)，37。C水浴1小時，洗板；每孔加入50nlPNPP(1mg/ml，pH=9.5)，37'C水浴30分鐘；每孔加入0.5mol/L的NaOH終止反應，酶標儀測定405nm波長處A值，以確定HIV-1RT的活性；同時設置不加酶的陰性對照，計算實驗孔A暫陰性孔A值(P/N值)。三實驗結果(見表l)表l<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>bNA:表示沒有活性。eIC50值范圍為100-400pM。由上實驗結果可看出，在C5位上為鹵素取代基時，整個系列的化合物對HIV-1逆轉錄酶的抑制率最高，同時適當延長C2側鏈的長度，C4位NH2取代OH后活性都可以提高化合物活性。上述所得新化合物的活性與目前臨床上使用的奈韋拉平(NVP)相比相當或者高出23倍?？蛇M一步研究此類化合物的構效關系，以合成出活性更高的抗HIV-1逆轉錄酶的化合物，而具有很好的發(fā)展應用前景。權利要求1.通式I化合物上述通式中R含1-4個碳結構的烷基。R1OH，SH，NR’R”.R2H，F，Cl，Br，I，CF3，NO2，CN，R，RO，(CH2)nOH，(CH2)nCOOR，(CH2)nCOOH，(CH2)nOCOR，(CH2)nOCOH，(CH2)nNR’R”，(CH2)nCONR’R”，(CH2)nNR’COR，R3R，RO，CN，OH，NH2，CF3，F，Cl，Br，I，NO2.R4(CH2)nCOCH2COCH2COOR，RO(CH2)n，Ph(CH2)nO(CH2)n，R’，R”H，R，(CH2)nPh.XO，S，N.n0，1，2，3，4.某些所保護化合物舉例2-苯乙基硫-6-芐基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-6-芐基嘧啶，2-(芐氧甲基硫)-6-芐基嘧啶，2-烯丙基硫-6-芐基嘧啶，2-苯乙基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-5-甲基-6-芐基嘧啶，2-(芐氧甲基硫)-5-甲基6-芐基嘧啶，2-芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-苯乙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(3-苯基)丙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(2-甲基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(3-甲基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(3-甲氧基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(4-叔丁基)芐基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(2-萘基)甲基硫-5-碘-6-芐基嘧啶，2-(1-苯基)乙基硫-5-碘-6-芐基嘧啶2.合成上述通式中化合物的條件及試劑為路線l，路線2，路線3所描述的方法。3.權力要求上述化合物作為HIV-1逆轉錄酶抑制劑的應用。路線l<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>試劑與條件(a)R=H，CH3;C6H5CH2CN，Zn/THF，回流。(b)NH2CSNH2，Na/EtOH,回流。(c)含不同基團的鹵代物，甲醇鈉，室溫。路線2試劑與條件(d)X2,Pb02，HOAC，室溫，反應過夜。路線3R3R3&<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>試劑與條件(e)P0Cl3,室溫，反應過夜。(f)NH3.H20,80-90°C,12-24小時。全文摘要本發(fā)明涉及以非核苷類HIV-1逆轉錄酶抑制劑3，4-二氫-2-烷氧基-6-芐基-4-羰基嘧啶類(DABO)和1-[(2-羥乙氧基)甲基]-6-苯硫基胸腺嘧啶(HEPT)為先導化合物，結合本課題組的研究結果，按照藥物合理設計基本原理，將其各自結構和活性關系聯系起來并融合在一個分子中，設計出一類新型S-DABO化合物，見通式I，式中各個基團的定義如權利要求書所述。本發(fā)明重點在嘧啶環(huán)C2、C4、C5位上，通過各種不同基團的修飾，所得到的新化合物的構象更有利于與HIV-1逆轉錄酶結合，經過抗HIV-1RT的活性測試，發(fā)現具有較高活性，其中一化合物活性高于目前臨床上使用的奈韋拉平23倍，這類化合物很有可能成為潛在的新一類抗艾滋病的藥物。文檔編號A61P31/18GK101597263SQ200810110478公開日2009年12月9日申請日期2008年6月5日優(yōu)先權日2008年6月5日發(fā)明者劉俊義,華覃申請人:首都醫(yī)科大學