專利名稱：：用于治療惡性血液病的方法和組合物的制作方法用于治療惡性血液病的方法和組合物
背景技術(shù)：
：N-6環(huán)丙基PMEDAP("cpr-PMEDAP")已經(jīng)顯示出在體外細胞培養(yǎng)中對多種腫瘤細胞系有效產(chǎn)生抗增殖作用和誘導分化作用(Naessensetal.，"Biochem.Pharmacol.1999Jul15;58(2):311-23)。但是，當在近親交配的Sprague-Dawley大鼠惡性血液病的體內(nèi)才莫型中4吏用cpr-PMEDAP和其它N6-取4戈的PMEDAP化合物時(Valerianovaetal."AnticancerRes.2001May-Jun;21(3B):2057-64)，由于"高毒性"，因此作者推斷"在2，6-二氨基嘌呤環(huán)的6位取代的非環(huán)核苷膦酸酯似乎不是用于治療惡性血液病的有前途的藥物。已經(jīng)公開了各種cpr-PMEDAP的雙和單氨基酸酰胺酯(和它們作為抗增殖劑的應(yīng)用)。參見W005/066189。W002/08241公開了用于篩選甲氧基膦酸核苷酸類似物前藥的方法，該類似物前藥以低毒性用于治療惡性血液病。惡性血液病一般定義為血細胞和/或它們的祖細胞的增殖障礙，其中這些細胞以不可控的方式增殖。在解剖學上，惡性血液病分為兩個主要組淋巴瘤-主要但不是唯一地存在于淋巴結(jié)的淋巴細胞的惡性腫塊，和白血病-典型來源于淋巴或骨髓細胞并主要影響骨髓和外周血的胂瘤。所述淋巴瘤可再分為霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。后一組包含幾個不同的實體，該實體在臨床上(例如進展的淋巴瘤、緩慢進展淋巴瘤)，組織學上(例如濾泡型淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤)或基于癌細胞起源上(例如B淋巴細胞、T淋巴細胞)是可區(qū)分的。白血病和相關(guān)的惡性疾病包括急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。其它的惡性血液病包括漿細胞病，包括多發(fā)性骨髓瘤和骨髓增生異常綜合征。雖然釆用新穎的藥劑，例如伊馬替尼(Gleevec)、硼替佐米(Velcade)和利妥昔單抗(Rituxin)已經(jīng)改善了幾種惡性白血病的結(jié)果，但是仍然存在著對新穎、有效的治療方法的尚未滿足的醫(yī)藥需求。例如，對于患有頑固性/復發(fā)性NHL患者而言存在著未被滿足的醫(yī)藥需求，如在過去五年間美國NHL的發(fā)病率已經(jīng)大量增加。白血病具有較少的患者數(shù)目。但是，正如5年的低存活率所說明的，仍然存在著大量未被滿足的醫(yī)藥需求，例如對治療急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CLL)的醫(yī)療需求。存在著對具有高于現(xiàn)有治療方式的具有改善治療窗的多特異性或廣泛活性的抗代謝藥劑的需求，所述藥劑可以單獨的單一治療藥物使用或與其他治療藥物組合使用。大多數(shù)抗代謝藥物干擾涉及DNA合成的酶，例如與胸苷或噪呤生物合成有關(guān)的酶，和/或并入到新合成的DNA中。核堿基、核苷以及核苷酸類似物是有效的細胞毒藥物的重要類別，并且廣泛用于治療白血病和淋巴瘤病。這些藥劑中的一些，5-氟尿嘧啶、卡培他濱以及特別是吉西他濱還用于治療實體瘤。三種腺苷類似物氟達拉濱、克拉屈濱和氯法拉濱表明分別用于CLL、毛細胞白血病和兒童ALL。噪呤類似物噴司他丁(2，-脫氧肋間型霉素)，即腺苷脫氨酶抑制劑，具有抗淋巴惡性腫瘤的臨床活性。奈拉濱是脫氧鳥苷類似物ara-G的前藥，其能抵抗嘌呤核苷磷酸化酶的分解代謝，并且已經(jīng)證明抗T細胞惡性腫瘤的活性。在嘧啶類似物中，已經(jīng)評價了阿糖胞苷(ara-C);它在許多惡性血液病中具有活性，并且是用于治療急性髓性白血病的藥劑之一。但是，現(xiàn)有的治療藥物在關(guān)于例如使用的安全性、有效性以及舒適性方面具有局限性。很常見的是，起初治療很成功，但隨后在一段時間惡性血液病經(jīng)常復發(fā)。因此，仍然存在對具有優(yōu)于現(xiàn)有的這類化合物的改善治療窗和/或值得稱贊的實用性的新穎核苷/核苷酸的需求。申請人尋找到適用于治療惡性血液病的化合物，該化合物具有改善的PK和負荷、改善的治療窗和/或較低的藥物抗性。特別地，期望鑒定化合物將富集于血細胞，尤其是PBMC。預(yù)期所述化合物在靶細胞中富集，從而通過減少患者其它組織與化合物接觸拓寬治療窗。W005/066189公開了具有結(jié)構(gòu)1的化合物本發(fā)明涉及化合物1。它還涉及其非對映體，其中在磷原子上取代的雙氨基酸是L氨基酸，并且該非對映體實質(zhì)上沒有D氨基酸。迄今為止，式1化合物已經(jīng)作為游離堿使用。但是，由于該游離堿是吸濕性的，所以申請人確定用該游離堿進行制劑不是商業(yè)上最佳的。因此，申請人尋找到化合物1的一種形式，該形式有助于治療劑型的生產(chǎn)過程。申請人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在所述cpr-PMEDAP雙酰胺化物(bisamidate)類化合物氨基酸酯的羧基上的烷基酯的性質(zhì)有助于優(yōu)先使該化合物分布到PBMC中。出人意料地，發(fā)現(xiàn)給予雙(乙基)酯(即化合物l)可引起cpr-PMEDAP在PBMC中高于在血漿中的高度優(yōu)先分布。所述分布遠遠優(yōu)于由與雙(異丙基)酯密切相關(guān)的其它方面所獲得的分布。此外，可以確定化合物1的有機酸鹽與游離堿相比吸濕性較低，由此有助于生產(chǎn)含化合物l的產(chǎn)品。最后，可以確定通過在制劑中納入碳水化合物可以提高這些鹽的穩(wěn)定性(特別是非腸道制劑)。因此，本發(fā)明的一個實施方案是化合物1的有機酸鹽和/或它的互變異構(gòu)體以及溶劑化物。發(fā)明概述本發(fā)明的另一個實施方案是包含(a)化合物1的有機酸鹽和/或它的互變異構(gòu)體以及溶劑化物和(b)碳水化合物的組合物，由此提高該鹽的儲存穩(wěn)定性。本發(fā)明的另一個實施方案是用于治療患有惡性血液病患者的方法，該方法包含給予所述患者治療有效量的所述化合物和/它的鹽、互變異構(gòu)體以及溶劑化物。本發(fā)明的另外的實施方案是在容器中包含所述化合物和/或它的鹽、互變異構(gòu)體以及溶劑化物的組合，該容器適用于所述化合物的非腸道給藥。本發(fā)明的另外的實施方案是包含在無菌水溶液中制備所述化合物的有機酸鹽和碳水化合物以及儲存該溶液超過約1小時的時間的方法。本發(fā)明的另外的實施方案是含有碳水化合物和所述化合物的有機酸鹽的無菌水溶液以及公開(disclosure)(例如患者插頁)的包裝組合物，該公開說明所述溶液任選儲存超過約1小時的時間，用于制備本發(fā)明的鹽的適合的有機酸典型為包含至少一個羧基，包括氨基酸(天然的或合成的)例如谷氨酸和天冬氨酸，以及CH6烷基和CH6芳基和Cw6雜芳基羧酸，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、戊二酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯曱酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧苯甲酸以及其任何衍生物(不包括其中羧基均為非游離的酯)，所述衍生物具有同樣的根源(例如"乙酰乙酸")，并在"PhysicalConstantsofOrganicCompounds"pp3-12到3-523MerckIndex74thEd.1993的表中公開。對二元有機羧酸特別關(guān)注。在組合中使用一種以上的有機羧酸是在本發(fā)明的范圍內(nèi)的。所述鹽以與如下實施例1中所顯示的類似步驟進行制備。典型地，有機酸與化合物1的摩爾比約為1:1。但是，就聚合有機酸而言，比例與l摩爾化合物l對酸基數(shù)目的比值一樣大，例如化合物l對二元羧酸鹽的鹽的比值為2:1。但是，比例是變化的，范圍可降到1:l或更少，這取決于酸官能團的富集程度和它被酸性官能團取代的程度。不論其用于牲畜或是人類，化合物1的合適的制劑均任選地包含一種或多種可接受的載體。該載體必須是"可接受的"意味著與其它制劑成分是相容的并且在生理上對患者無害。制劑將任選地包含賦形劑，例如那些在"HandbookofPharmaceuticalExcipients"(1986)中提到的賦形劑。所述賦形劑任選地包括抗壞血酸和其它抗氧化劑、螯合劑，例如EDTA、碳水化合物例如糊精、甘露醇或葡萄糖、緩沖液(例如檸檬酸鹽)、堿金屬鹽、助流劑、填充劑和其它常用于片劑、膠嚢、溶液或其它適用于或欲用于治療使用的組合物。典型地，所述制劑不包含常用的壓片賦形劑，原因是它們通常配制用于非腸道使用。理想地所述制劑是無菌的。此外，非腸道制劑實質(zhì)上是等滲的。所述制劑的pH任選地范圍是約為5-10,—般為約6-9，典型為約5-6?；衔?的有機酸鹽的非腸道(無菌水)溶液任選地包含穩(wěn)定量的碳水化合物，典型為糖(單、雙或多糖)、糖苷或糖醇(多羥糖醇)。多糖應(yīng)在非腸道注射或輸注時可生物降解，并且包括葡萄糖和淀粉，典型為3-IO單位。代表性的碳水化合物包括己糖、醛糖、己醛糖、丙醛糖(例如甘油醛)、丁醛糖(赤蘚糖)、戊醛糖(例如阿拉伯糖)、酮糖、己酮糖(果糖)、戊酮糖(例如核酮糖)、麥芽糖、蔗糖、乳糖、核糖、木糖、來蘇糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖和塔羅糖。常用于非腸道制劑的特別關(guān)注的碳水化合物是例如甘露醇和葡萄糖。碳水化合物的光學性質(zhì)不是至關(guān)重要的，但是期望其構(gòu)型是這樣的，即在非腸道給藥時該碳水化合物可生物降解。例如，5%葡萄糖(溶液的重量；pH約4.2,未緩沖的)使得化合物1的琥珀酸鹽在40t:儲存60小時沒有明顯降解。在另一方面，在同樣條件下儲存在pH2、7和9的緩沖溶液中引起化合物1大量降解分別約為重量的100%，18%和76%。碳水化合物的穩(wěn)定量是變化的，并將取決于預(yù)期儲存條件和所需的儲存期限、緩沖液的選擇、pH、化合物1的量以及本領(lǐng)域技術(shù)人員所能理解的其它因素。通常，將使用溶液重量的約0.5%-5%。典型地，碳水化合物的最佳量將由常規(guī)實驗確定，但是該量一般將不超過(連同緩沖液、氯化鈉等一起)能提供溶液等滲性的量。但是，如果期望在輸注前或輸注時稀釋非腸道用組合物，那么高滲濃縮物是可以接受的。所述非腸道溶液任選地在pH約4-6緩沖(典型地用檸檬酸鹽緩沖液)。碳水化合物的存在使化合物1的鹽在水溶液中穩(wěn)定儲存(包括給藥時間)至少約60小時，至1周，1個月或1年，或任何中間期，這取決于上述碳水化合物濃度方面的因素，例如儲存溫度等。治療組合物任選地通過非腸道方式(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、鞘內(nèi)和硬膜外)給藥，原因是這些是最方便用于惡性腫瘤治療的給藥方式。靜脈輸注是普遍選擇的給藥方法。制劑以單位劑量或多劑量容器呈現(xiàn)，例如密封的安瓶、小瓶或軟質(zhì)輸液袋。所述容器任選地為玻璃或硬質(zhì)塑料，但是典型為由聚烯烴(聚乙烯)或軟質(zhì)聚氯乙烯制造的半硬質(zhì)或軟質(zhì)容器。所述容器典型為單室的。這些容器具有至少一個完整的無菌口以有助于無菌入口進入到設(shè)備的容器中以接近內(nèi)容物(通常為注射器或靜脈輸液器械(intravenoussetspike))。所述口提供增溶溶液(如果需要)的無菌入口和非腸道溶液的出口。任意地向容器提供小蓋(overpouch)(通常為聚烯烴)。制劑作為溶液或干燥形式存在于容器中。如果主要以無水的形式、例如凍干的形式儲存，那么在即將使用前該制劑將僅需要添加無菌液體載體，例如注射用水。溶液包括張度劑(tonicityestablishingagent)，例如氯化鈉或糖，例如甘露醇或葡萄糖。碳水化合物或糖的一個意想不到的優(yōu)點是增加了化合物1的鹽在儲存的水溶液中的穩(wěn)定性。所述容器中充滿了無菌溶液或被充滿然后根據(jù)公知的方法例如通過加熱或化學藥劑滅菌。一般而言，制劑的無菌溶液是無菌注入到軟質(zhì)容器，然后任選地凍干。用于生產(chǎn)本發(fā)明容器產(chǎn)品的合適的技術(shù)可參考Avisetal.，PharmaceuticalDosageForms:ParenteralMedicationsvols.1和3(1984)。非腸道容器將包含如下所描述的化合物1或其適當部分的每日劑量或單位每日亞劑量。通過碳水化合物而穩(wěn)定的化合物1、化合物1的有機酸鹽或其水溶液可任選地用于治療任何肺瘤，不僅包括惡性血液病而且包括各種實體瘤，例如頭和頸、肺、腎、肝、骨、腦等實體瘤，特別是子宮和子宮頸癌和發(fā)育異常、黑素瘤以及乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺(小細胞癌和非小細胞癌)和胰腺癌。本發(fā)明的制劑可以單一藥物治療或與其它藥劑組合給藥用于治療惡性血液病。本發(fā)明的組合物任選地是基本上與其它抗肺瘤藥劑同時給予患者、或所述藥劑與本發(fā)明的制劑組合，然后同時給予患者。與化合物1一起有益的典型的抗肺瘤藥劑(以治療有效量進行組合或同時給藥)包括任何在當前治療惡性腫瘤中使用的治療藥物，包括那些用于治療在上述
背景技術(shù)：
中提到的惡性血液病的藥物。這些配對藥劑(a)基本上同時，但是以不同的給藥途徑給藥，(b)與本發(fā)明的制劑組合并且同時給藥，或(c)在交替期給藥(例如在不用化合物1治療的休息期)。一般而言，如果組合使用，那么本發(fā)明的制劑在治療上與選自不同種類的其它抗腫瘤藥劑組合，例如單克隆抗體。NHL的治療藥物典型地包括環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿、潑尼松和利妥昔單抗。如果組合使用，化合物1在治療當中與一種或多種上述的藥劑一起或取代上述藥劑給藥?；衔飈還可與利妥昔單抗組合給藥。為了治療CLL，化合物1作為單一藥物治療給藥或與其它藥劑、例如環(huán)磷酰胺和/或利妥昔單抗組合給藥。適合與化合物1一起使用的其它治療藥劑包括依托泊苷、美法侖、亞硝基脲、白消安、鉑絡(luò)合物、非經(jīng)典烷化劑例如丙卡巴肼、抗代謝類例如葉酸、嘌呤、腺苷類似物、嗜啶類似物、長春花生物堿(vincaalkyloides)等?；诠穯未谓o藥的毒理學結(jié)果，可以合理假定化合物1的劑量在l-3mg/kg/天或更高至約10mg/kg/天時在狗中有效(當使用化合物1的有機酸鹽時，劑量將考慮到所加入鹽的重量而進行調(diào)整)。假定化合物在人類的PK分布與在犬中觀察到的相似，那么目前的結(jié)果建議化合物1的人類有效劑量(體表面積經(jīng)因子0.54校正)為0.54-1.62mg/kgiT或更高，其作為單一劑量間隔約1-14天重復給藥，通常每周或每2周給藥，典型為每周2次給藥，除了別的因素以外還取決于患者的病癥和對輸注的耐受性。因為個體癌癥的獨特性質(zhì)、患者的病癥、患者的耐受性以及其它本領(lǐng)域腫瘤學家公知的原因，在合適的劑量中應(yīng)該預(yù)料到相當大的變化，所以有效劑量的范圍將比核心實驗?zāi)Ｐ痛蟆Ｒ虼?，預(yù)期劑量范圍約在0.5-5.4mg/kg/天是合適的。單次給藥是合適的，但是預(yù)期多次給藥周期是典型的，其為在周期之間有約10-30天、通常為23天的休息期，這仍然取決于如對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見的患者的病癥和對治療藥物的耐受性。上述所有的文獻和專利引用作為參考特別地并入本文。本發(fā)明已主題。下述實施例例舉了本發(fā)明，但無意于限制本發(fā)明。實施例1cPrPMEDAP(l.64g，5mmo1)、Ala-乙基酯、HC1(4.62g，30mmo1)和TEA(8.36ml，60mmol)的混合物經(jīng)10ml無水他咬處理，并加熱到60匸成為均勻的溶液。加入含Aldrithiol-2(7.78g，35mmol)和三苯基膦(9.18g，35mmol)的lOnil無水吡咬溶液。所得的混合物在60C加熱過夜。冷卻后，將亮黃色溶液傾入飽和的碳酸氬鈉水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。有機層經(jīng)鹽水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥。除去溶劑后，使用100°/。乙酸乙酯、然后轉(zhuǎn)換為10-15%MeOH/DCM洗脫所需的產(chǎn)物，經(jīng)快速色譜純化粗剩佘物(1.12g，產(chǎn)率43°/0。琥珀酸鹽形成將中性前藥(2.60g)溶解在含琥珀酸(583mg)的乙醇溶液(15ml)中。加入50%v/v正庚烷/乙醇(20ml)后，通過過濾分離所需的鹽(2.26g;M.P.130°C)。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例2表1顯示化合物1和它的代謝產(chǎn)物，cpr-PMEDAP(9-(2-膦酰甲氧基乙基)-N6-環(huán)丙基-2，6-二氨基嘌呤)，PMEG(9-(2-膦酰甲氧基乙基)鳥嘌呤)和PMEDAP(9-(2-膦酰甲氧基乙基)-2，6-二氨基嘌呤)的抗增殖ECs。。還測定了許多用于治療惡性血液病的化合物，包括DNA聚合酶抑制劑(ara-C)、DNA聚合酶/核糖核苷酸還原酶抑制劑(克拉屈濱、克羅拉濱、氟達拉濱、吉西他濱)、腺苷脫氨酶抑制劑(脫氧肋間型霉素)、DNA甲基化抑制劑(地西他濱)、DNA烷化劑(多柔比星)和有絲分裂抑制劑(長春新堿)。除了多柔比星和長春新堿的所有化合物均是核苷類似物；ara-C、吉西他濱和地西他濱是胞嘧啶類似物，并且其余的是腺苷類似物。認為cpr-PMEDAP和PMEG分別是腺苷和鳥苷類似物。使用人類和犬的淋巴母細胞(經(jīng)T-細胞絲裂原植物凝集素(PHA)或B-細胞絲裂原美洲商陸絲裂原(PWM)刺激)，兩種來源于急性淋巴性白血病患者的T淋巴細胞系(CEM和Molt-4)，兩種來源于急性髓性白血病患者的髓細胞系(KG-1和HL-60)，兩種來源于Burkitt's淋巴瘤的B淋巴細胞系(Daudi和Raji)，來自非霍奇金淋巴瘤的B淋巴細胞系(RL),來自皮膚T細胞淋巴瘤的T細胞淋巴細胞系(PM-1)和來自組織細胞淋巴瘤的單核細胞系(U937)來測定化合物。化合物1在多數(shù)淋巴母細胞和白血病/淋巴瘤細胞系中顯示出抗增殖活性。它的ECs。范圍為27-1043nM，這與普遍用于治療惡性血液病的兩個核苷類似物，即克羅拉濱(25-418nM)和ara-C(23-1820nM)相似。在核苷類中，吉西他濱是最有效的(3.4-18nM)，而脫氧肋間型霉素是最低效的(>200，000nM)。在所有化合物中，長春新堿(0.6-5.3nM)顯示出最強的效力。化合物1的活性在人類和犬細胞中沒有明顯差異。此外，在PHA-胚細胞(主要為T細胞)和PWM-胚細胞(主要為B細胞)之間或在T細胞淋巴細胞系和B細胞'淋巴細胞系之間沒有發(fā)現(xiàn)差異。因此，與另一個鳥苷類似物-奈拉濱不同，化合物1對T細胞和B細胞淋巴瘤均有效，而所述奈拉濱僅有效對抗T細胞淋巴瘤。在大多數(shù)所測定的細胞類型中，與cpr-PMEDAP(化合物1的水解產(chǎn)物)相比，化合物1明顯更為有效，這表明氨基磷酸酯前藥能增加藥物進入細胞，并且該前藥部分在細胞內(nèi)裂解。與脫烷基化產(chǎn)物PMEDAP相比，PMEG(cpr-PMEDAP的去脫氨基產(chǎn)物)明顯更為有效，這與假設(shè)一致，即PMEGpp是化合物1的抗增殖活性的活性分子。表l.在人類淋巴母細胞、犬淋巴母細胞以及來源于白血病/淋巴瘤患者的人類細胞系中抗增殖EC5。(nM)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>通過外周血單核細胞(PBMC)與T細胞絲裂原PHA(l|ug/mL)孵育3天，隨后與10U/mL白介素-2再孵育4天產(chǎn)生PHA-淋巴母細胞。通過B細胞(使用與CD19結(jié)合的磁珠從PBMC中純化)與PWM(20|ug/mL)孵育7天產(chǎn)生PWM-淋巴母細胞。將淋巴母細胞(150,000細胞/微量滴定孔)和白血病/淋巴瘤細胞系(30，000細胞/孔)與化合物的5倍系列稀釋液孵育3天。如下步驟進行BrdU含量測定將淋巴母細胞在微孔滴定板(150,000細胞/孔)中與化合物的5倍系列稀釋液孵育3天。在第3天，經(jīng)10juMBrdU標記3小時，并使用酶聯(lián)免疫實驗(ELISA)對合并進入細胞DNA中BrdU的量進行定量?；蛘?，細胞與lmg/mLXTT試劑(3，3'-[1[(苯基氨基)羰基]-3，4-四唑]-雙(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸鈉水合物)和1。/。PMS(吩漆硫酸曱酯)孵育2小時，并對顏色變化(線粒體脫氬酶使黃色XTT分解為橘色甲lt鹽)定量。所述實驗數(shù)據(jù)用于生成S型劑量效應(yīng)曲線，并且使用Windows的GraphPadPrism軟件4.00版(GraphPadSoftware,SanDiegoCaliforniaUSA)計算50%有效濃度(EC5。)值。重復測定2-20次直到平均值(SEM)的標準誤低于平均值的50%。在大多數(shù)情況下，重復測定2-20次直到平均值的標準誤低于平均值的50%。"-變量數(shù)據(jù)(SEM〉0.5平均ECs。)。N.D;未測定實施例3前藥在狗PBMC和血漿之間的分布按0.2mg/kg給狗IV輸注cpr-PMEDAP不同的前藥30分鐘。前藥1-4是單酰胺化物(磷也被苯氧基取代)，而最后兩個化合物是雙(酰胺化物)?；衔顰和B實質(zhì)上是在磷原子手性中心分離的對映體，而單AlatBU是該位點的消旋體。丙氨酸是L異構(gòu)體。將血液收集到EDTA鉀中，并離心分離。使用CPT管(檸檬酸鈉)收集外周血單核細胞(PBMC)。.為了分析，通過向用于前藥分析的IOOjliL血漿中加入含內(nèi)標(D4AP和TDF)的100|uL乙腈使血漿樣品沉淀。經(jīng)離心沉淀蛋白后，將100juL轉(zhuǎn)移到另一個管進行干燥，然后在含O.2%甲酸的100|uL水中復溶。取20juL等份試樣注射到柱中用于LC/MS/MS分析。使用150x2.0mm,4jumSynergiFusion-RP80A柱(Phenomenex)和存在0.2%的甲酸下用從0.5至99%乙腈的多級線性梯度以0.25mL/min進行分析。使用SciexAPI-4000質(zhì)譜在電噴霧離子化的陽離子MRM模式下檢測待測物。分析樣品GS-327260、-8369、-0573和-0438。.PBMC樣品在70%MeOH中裂解。來自100%血清中重懸的每一個時間點的單獨等分部分的細胞用于建立每個樣品的細胞量。細胞樣品標準化為15x106細胞/樣品。已經(jīng)觀察到不同程度的溶血。將含提取細胞物質(zhì)的70。/。Me0H分為用于直接分析和去磷酸化的兩種方法，并分別干燥。.在干燥后，用于直接分析的樣品在含內(nèi)標(TDF和D4AP)的20%乙腈中重懸，并分析GS-327260，-8369。注射20iuL用于使用50x2.0mm，4)umSynergiHydro-RP80A柱(Phe謹enex)和存在0.2%的甲酸下經(jīng)0-95%乙腈的多級線性梯度以1.QmL/min進行LC/MS/MS分析。使用SciexAPI-4000質(zhì)謙在電噴霧離子化的陽離子MRM模式下檢測待測物。.在干燥后，用于磷酸化的樣品在制造商提供的緩沖液中經(jīng)1U小牛腸磷酸酶(堿性磷酸酶，Sigma)處理2小時。然后，樣品調(diào)整到60%無水乙腈，并在含內(nèi)標(TDF和D4AP)的60%乙腈中重懸，并如用于直接PBMC分析所描述的分析cpr-PMEDAP。表比格犬30分鐘靜脈輸注前藥后暴露于cpr-PMEMP(CPMEDAP)的血漿和PBMC的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>權(quán)利要求1.下列化合物的有機酸鹽和/或它的互變異構(gòu)體和溶劑化物2.權(quán)利要求l的鹽，其中所述有機酸是琥珀酸。3.包含權(quán)利要求1的鹽和碳水化合物的無菌水溶液。4.方法，其包含給予患有胂瘤的患者治療有效劑量的權(quán)利要求1的鹽。5.組合，其包含(a)適用于非腸道藥物產(chǎn)品的容器和置于其中的(b)有效劑量的所述化合物和/或它的互變異構(gòu)體和溶劑化物。6.權(quán)利要求5的組合，其中所述化合物是基本上等滲的水溶液形式。7.權(quán)利要求5的組合，其中所述化合物是含至少一種有機酸的鹽。8.權(quán)利要求7的組合，其中所述有機酸是琥珀酸。9.權(quán)利要求5的組合，其中所述容器包含無菌口。10，權(quán)利要求5的組合，其中所述容器是小瓶或軟質(zhì)袋。11.用于治療患有惡性血液病患者的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的所述化合物和/或它的鹽、互變異構(gòu)體和溶劑化物。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述惡性血液病是多發(fā)性骨髓瘤或骨髓增生異常綜合征。13.權(quán)利要求11的方法，其中所述惡性血液病是白血病或淋巴瘤14.j又利要求11的方法，其中給予所述化合物的有機酸鹽,15.權(quán)利要求11的方法，其中所述化合物是經(jīng)非腸道給予的。16.組合物，其包含所述化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>和/或它的鹽、互變異構(gòu)體和溶劑化物，以及至少一種用于治療惡性血液病的其它藥劑。17.方法，其包括在無菌水溶液中制備所述化合物的有機酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>和碳水化合物，并儲存所述溶液超過約1小時的時間18.包裝的組合物，其包含(a)碳水化合物和(b)所述化合物的有機酸鹽和/或它的互變異構(gòu)體和溶劑化物的無菌水溶液以及說明該溶液任選儲存超過約1小時的時間的公開。19.試劑盒，包含(a)適用于非腸道藥物產(chǎn)品的容器，(b)治療有效量的所述化合物和/或它的鹽、互變異構(gòu)體和溶劑化物；(c)使用所述化合物和容器的用法說明書。20.具有下列結(jié)構(gòu)的化合物和/或它的鹽、互變異構(gòu)體和溶劑化物在生產(chǎn)用于治療惡性血液病藥物中的用途，21.如在本文所公開的所述化合物或方法。全文摘要使用式(1)化合物和/或它的鹽、互變異構(gòu)體或溶劑化物治療惡性血液病。在實施方案中，提供化合物1的有機酸鹽廣泛用于腫瘤治療，并且在進一步的實施方案中所述鹽用碳水化合物進行穩(wěn)定。文檔編號A61P35/00GK101442994SQ200780017637公開日2009年5月27日申請日期2007年5月16日優(yōu)先權(quán)日2006年5月16日發(fā)明者A·S·雷,D·B·圖馬斯,H·C·雷瑟,L·S·宗,W·A·李,W·J·沃特金斯申請人:吉里德科學公司