專利名稱：人參二醇組皂甙及其組合物在血液病治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血液病臨床治療，主要是把人參皂甙中的人參二醇組皂甙及其組合物應(yīng)用于血液病的臨床治療。
目前國內(nèi)外對(duì)難治性血液病，因其病因復(fù)雜尚無特殊療法，長期用強(qiáng)的松和雄激素的常規(guī)療法有眾所周知的副作用，而重組生長因子療法價(jià)格昂貴，無法常規(guī)使用，且對(duì)很多難治性血液病無效。人參作為抗衰老強(qiáng)壯劑和補(bǔ)氣血藥物已有千余年歷史，人參提取物即人參總皂甙，對(duì)神經(jīng)、心血管、內(nèi)分泌、免疫和抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究已有不少報(bào)道，但對(duì)血液方面的實(shí)驗(yàn)研究很少，尤其是人參二醇組皂甙及其組合物，也未見有這方面的臨床報(bào)道。
本發(fā)明的目的是提供一種含人參皂甙，尤其是人參二醇組皂甙的組合物，應(yīng)用于血液病的臨床治療。
本發(fā)明提供的組合物，是由人參皂甙，尤其是人參二醇組皂甙和藥用載體和/或藥用賦形劑組成，應(yīng)用于血液病的治療。
本發(fā)明將人參皂甙，尤其是人參二醇組皂甙及其組合物，應(yīng)用于血液病的治療，療效優(yōu)于現(xiàn)有的常規(guī)藥物，且在治療中無毒副反應(yīng)，本發(fā)明提供的組合物，對(duì)造血細(xì)胞具有刺激增殖作用，對(duì)再生障礙性貧血患者的造血祖細(xì)胞具有刺激增殖作用，對(duì)白血病祖細(xì)胞有增殖的抑制和刺激的雙向作用，有較強(qiáng)的促進(jìn)化療藥殺傷白血病細(xì)胞的作用。
本發(fā)明提供的人參皂甙，尤其是人參二醇組皂甙的組合物，克服了現(xiàn)有治療血液病藥物存在的毒副作用大，價(jià)格昂貴等不足之處，為血液病治療提供了新的途徑，拓展了人參皂甙的臨床應(yīng)用范圍。同時(shí)減輕了患者因毒副作用帶來的痛苦，尤其因?yàn)樵摻M合物成本較低，也減輕了血液病患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
本發(fā)明通過以下實(shí)施例作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1人參二醇組皂甙組合物的一種配方處方人參二醇粉 30克糊 精 470克制 成 1000粒制備取人參須根粗粉(20目篩)適量，以適當(dāng)濃度乙醇進(jìn)行滲漉提取至無色，收集提取液，靜置24小時(shí)以上，取上清液回收乙醇至無醇味，將藥液濃縮至適當(dāng)濃度，上柱，以柱層析分離法進(jìn)行分離提取，以低度乙醇進(jìn)行分離，收集分離提取液，經(jīng)真空干燥數(shù)小時(shí)后，得結(jié)晶狀，淡黃色人參二醇精品。稱取精品30克，碾成極細(xì)粉，過80目篩，與糊精混合均勻，裝入膠囊即可，每粒膠囊0.5克(含人參二醇純品30毫克)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合衛(wèi)生部藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定和中國藥典95版。
實(shí)施例2人參二醇組皂甙對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞作用研究人參作為藥用已有幾千年的歷史，其有效成分主要是由20多種單體皂甙組成的人參總皂甙，各成分的藥理作用不盡相同。人參皂甙按單體皂甙元所含羥基量不同分為人參二醇組皂甙(Pananxadiol Saponin；PDS)，人參三醇組皂甙(Panaxtrol Saponin；PTS)兩大類。本研究采用造血祖細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)，比較PDS對(duì)小鼠骨髓造血祖細(xì)胞(簡稱CFU-E、BFU-E)和粒單系祖細(xì)胞(簡稱CEU-GM)的作用。
材料與方法1、動(dòng)物NIH小鼠，雄性，體重18-22克。
2、PDS按實(shí)施例1方法制備。
3、CFU-E、BFU-E、CFU-GM按唐佩弦《造血細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)》培養(yǎng)。
4、PDS體外刺激試驗(yàn)將PDS工作液加入小鼠骨髓造血祖細(xì)胞CFU-E、BFU-E、CFU-GM培養(yǎng)體系中，終濃度分別為1、5、10、20、50μg/ml，設(shè)立對(duì)照組，培養(yǎng)7天后觀察結(jié)果。
5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果用t檢驗(yàn)方法，分析PDS組與對(duì)照組之間的差異。
結(jié)果(1)PDS對(duì)小鼠骨髓CFU-E的作用表1顯示將不同PDS加入8份小鼠骨髓培養(yǎng)CFU-E的情況，結(jié)果表明當(dāng)PDS濃度為1、5、10和20ug/ml時(shí)CFU-E集落產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)，提高率分別為26.1％、58.5％、29.0％和25.8％。
表1 PDS對(duì)小鼠骨髓CFU-E的作用
(2)PDS對(duì)小鼠骨髓BFU-E的作用表2顯示將不同濃度的PDS加入8份小鼠骨髓培養(yǎng)BFU-E情況，結(jié)果表明當(dāng)PDS濃度為1、5、10和20 ug/ml時(shí)BFU-E集落產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)，提高率分別為27.0％、64.7％、36.7％和29.4％，高濃度不抑制。
表2 PDS 對(duì)小鼠骨髓BFU-E的作用
(3)PDS對(duì)小鼠骨髓CFU-GM的作用表3顯示將不同濃度的PDS加入8份小鼠骨髓培養(yǎng)CFU-GM情況，結(jié)果表明PDS濃度為1、5、10、20和50 ug/ml時(shí)，CFU-GM集落產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)，提高率分別為32.3％、54.0％、38.2％、36.5％和28.6％。
表3 PDS對(duì)小鼠骨髓CFU-GM的作用
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PDS體外對(duì)小鼠骨髓CFU-E、BFU-E、CFU-GM均有明顯的刺激增殖作用，與對(duì)照組相比分別提高58.5％、64.7％和54.0％，且高濃度不抑制。
實(shí)施例3人參二醇對(duì)正常人骨髓造血祖細(xì)胞的作用材料與方法1、標(biāo)本取非血液病患者正常肋骨骨髓，骨髓涂片為正常髓象。
2、紅系祖細(xì)胞(CFU-E、BFU-E)，粒單祖細(xì)胞(CFU-GM)培養(yǎng)方法與實(shí)施例1相同。
3、多向祖細(xì)胞(CFU-Mix)培養(yǎng)取IMDM混合培養(yǎng)體系中含4×105/ml骨髓單個(gè)核細(xì)胞、0.3％瓊脂、25％人AB型血清、10-5mol/L 2-ME和L-谷氨酰胺，每ml培養(yǎng)體系含重組的造血生長因子如下紅細(xì)胞生成素(EPO)2U、粒/單-集落刺激因子(GM-CSF)20ng，以0.25 ml/孔(四個(gè)復(fù)孔)接種至培養(yǎng)板上，置于37℃，含5％CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱孵育，于14天后計(jì)數(shù)CFU-Mix集落。
4、PDS對(duì)CFU-E、BFU-E、CFU-GM和CFU-Mix刺激試驗(yàn)將PDS工作液加入培養(yǎng)體系中，終濃度分別為2.5、10、20、50、100和200ug/ml時(shí)，并設(shè)立無PDS的對(duì)照組，于培養(yǎng)7、14天后觀察結(jié)果。
5、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析處理用t檢驗(yàn)。
結(jié)果(1)PDS對(duì)正常人骨髓CFU-E的作用表1顯示將不同濃度的PDS加入10份正常人骨髓標(biāo)本培養(yǎng)CFU-E的結(jié)果。當(dāng)PDS濃度為2.5、10、20、50、100和200 ug/ml時(shí)，CFU-E集落產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組，具有顯著性差異。提高率分別為24.8％、25.3％、33.9％、54.9％、44.0％、32.4％。
表1 PDS對(duì)正常人骨髓CFU-E的增殖作用(n=10)
(2)PDS對(duì)正常人骨髓BFU-E的增殖作用表2顯示將不同濃度的PDS、加入10份正常人骨髓標(biāo)本培養(yǎng)BFU-E結(jié)果。當(dāng)PDS濃度為2.5、10、20、50、100和200 ug/ml時(shí)，BFU-E集落產(chǎn)率均明顯高于對(duì)照組，具有顯著差異。提高率分別為26.5％、28.1％、30.4％、48.7％、42.3％、和35.6％。表2 PDS對(duì)正常人骨髓BFU-E的增殖作用(n=10)
(3)PDS對(duì)正常人骨髓CFUGM的增殖作用(n=10)表3顯示將不同濃度的PDS加入10份正常人骨髓標(biāo)本培養(yǎng)CFU-GM結(jié)果。當(dāng)PDS濃度為10、20、50、100、和200 ug/ml時(shí)，CFU-GM集落產(chǎn)率均明顯高于對(duì)照組，具有顯著差異。提高率分別為15.2％、25.9％、27.6％、27.3％和27.1％。
表3 PDS對(duì)正常人骨髓CFU-GM的增殖作用(n=10)
(4)PDS對(duì)正常人骨髓CFU-Mix的增殖作用表4顯示將不同濃度的PDS加入8份正常人骨髓標(biāo)本培養(yǎng)CFU-Mix結(jié)果。PDS濃度為10、20、50 ug/ml時(shí)，CFU-Mix集落產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組，具有顯著差異。提高率分別為22.4％、48.9％和31.6％。
表4 PDS對(duì)正常人骨髓CFU-Mix的增殖作用(n=8)
本研究結(jié)果表明1、PDS對(duì)正常人骨髓紅系、粒系、巨核系三種系列的造血祖細(xì)胞均有明顯的刺激增殖作用，這種增殖效應(yīng)類似于造血生長因子。2、根據(jù)以前的研究結(jié)果應(yīng)用高濃度的造血生長因子培養(yǎng)造血祖細(xì)胞時(shí)即使再增加該生長因子濃度也不能提高集落產(chǎn)率，PDS則能與生長因子起協(xié)同作用而顯著地提高集落產(chǎn)率。這種協(xié)同作用在臨床上可能更有意義，因?yàn)榻^大多數(shù)血液病患者體內(nèi)并不缺乏造血生長因子，有的患者還高于正常人。3、10-50ug/ml濃度的PDS是體外刺激造血祖細(xì)胞增殖的恰當(dāng)濃度，同時(shí)也可為臨床試驗(yàn)用藥劑量提供參考。
實(shí)施例4人參二醇組皂甙對(duì)再生障礙性貧血患者造血祖細(xì)胞的體外增殖作用病例30例診斷為再生障礙性貧血(AA)患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)按中華血液學(xué)雜志，19878(8)封四和463《再生障礙性貧血診斷與療效標(biāo)準(zhǔn)》。其中男17例，女13例，中位年齡32歲(7-66)，急性再障(AAA)8例，慢性再障(CAA)22例。又按祖細(xì)胞集落數(shù)，患者外圍血單個(gè)核細(xì)胞(PBMNC)對(duì)正常CFU-GM的抑制試驗(yàn)及紅系祖細(xì)胞對(duì)甲睪的敏感性分為雄激素反應(yīng)型(AA1)15例，免疫介導(dǎo)型(AA2)8例及干細(xì)胞缺少型(AA3)7例三種類型。
藥物PDS按常規(guī)提取，用培養(yǎng)基配成1 mg/ml工作液，正壓過濾，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 造血祖細(xì)胞培養(yǎng)法PDS以25μg/ml為終濃度加入再障患者骨髓體外培養(yǎng)體系中，并設(shè)立不加PDS的對(duì)照組。
結(jié)果(1)PDS對(duì)雄激素反應(yīng)型再障(AA1)15例骨髓CFU-E、BFU-E和CFU-GM的作用，結(jié)果表明PDS組CFU-E、BFU-E和CFU-GM集落產(chǎn)率均明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)，提高率分別為38.1％、47.6％和23.8％(見表1)。
表1
(2)PDS對(duì)免疫介導(dǎo)型再障(AA2)8例骨髓CFU-E、BFU-E和CFU-GM的作用，結(jié)果表明PDS組CFU-E、BFU-E和CFU-GM集落產(chǎn)率與對(duì)照組相比無明顯差異(p＞0.05)，提高率分別為13.3％、11.1％和12.9％(見表2)。
表2
(3)PDS對(duì)干細(xì)胞缺少型再障(AA3)7例骨髓CFU-E、BFU-E和CFU-GM的作用，結(jié)果表明PDS組CFU-E、BFU-E和CFU-GM集落產(chǎn)率與對(duì)照組相比無明顯差異(p＞0.05)，提高率分別為3.8％、0％和6.0％(見表3)。
表3
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PDS對(duì)再障患者的造血祖細(xì)胞也有刺激增殖作用。而免疫介導(dǎo)型因存在抑制系統(tǒng)，干細(xì)胞缺少型因祖細(xì)胞太少，均使PDS的作用不能表達(dá)。當(dāng)其病情好轉(zhuǎn)時(shí)，PDS體外試驗(yàn)亦趨向敏感。
實(shí)施例5人參二醇組皂甙及其組合物對(duì)難治性血液病的療效觀察病例慢性再障性貧血(CAA)23例，其中男11例，女12例，年齡11-72歲，中數(shù)患病時(shí)間6(1-13)年。過去治療藥物包括中藥、雄性激素、腎上腺糖皮質(zhì)類激素、HGF、環(huán)胞菌素A以及輸血和抗生素等支持治療。17例經(jīng)以上治療無效，另6例血紅蛋白和白細(xì)胞有上升，但血小板仍處于低水平。
血小板減少性紫癜(ITP)33例，病程2.5(1-8)年。成人組男9例，女19例，中數(shù)年齡43(22-71)歲。兒童組5例均為男性，年齡8(6-13)歲。多數(shù)患者均經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療初期有反應(yīng)，以后無效。兒童病例均經(jīng)強(qiáng)的松、長春新堿及硫唑嘌呤等單獨(dú)或聯(lián)合治療均無效。
治療結(jié)果(1)再生障礙性貧血期17例，治療有效率70.6％(12/17)。治療前平均血小板31.6×109/L，血紅蛋白51.3g/L和白細(xì)胞2.8×109/L；人參二醇組皂甙治療后提高到64.7×109/L,90.3g/L和4.06×109/L，具有顯著差異(p＜0.01)，血小板、血紅蛋白和白細(xì)胞的提高率分別為144.0％、20.1％和36.3％。其中基本治愈5例、緩解4例、進(jìn)步3例、無效5例(5例中2例治療前靠輸血維持，治療后已經(jīng)一年未再輸血，血象已有上升，但是未到“進(jìn)步”標(biāo)準(zhǔn))。
(2)再障性貧血恢復(fù)期(再障治療后血紅蛋白和白細(xì)胞有上升，但血小板仍低下者)6例，本組有效率為100％(6/6)。其中基本治愈4例、緩解1例、進(jìn)步1例。4例經(jīng)人參二醇組皂甙治療后血小板達(dá)到正常，而血紅蛋白和白細(xì)胞也較原水平升高，1例血小板由治療前15.0×109/L升至96.0×109/L。
(3)血小板減少性紫癜33例，治療有效率為84.8％(28/33)。
成人組28例，治療前平均血小板為36.2×109/L，人參二醇組皂甙治療后提高到82.4×109/L，提高率為127％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著差異(p＜0.01)。其中基本治愈和顯效10例、良效9例、進(jìn)步7例、無效2例，有效率為92.8％(26/28)，顯效中1例同時(shí)伴有HbsAg陽性，經(jīng)人參二醇組皂甙治療8個(gè)月后，乙肝三系轉(zhuǎn)陰、血小板達(dá)到正常，隨訪二年10個(gè)月未復(fù)發(fā)，符合治愈標(biāo)準(zhǔn)。
兒童組5例，治愈有效率為40％(2/5)，其中顯效和良效各1例、無效3例。
(4)56例中由乙型肝炎誘發(fā)的再生障礙性貧血和血小板減少性紫癜17例，治愈有效率為88.2％(15/17)。均有HbsAg陽性或其他抗體陽性，其中再生障礙性貧血7例，經(jīng)人參二醇組皂甙治療其中基本治愈2例、進(jìn)步3例、無效2例，有效率71.4％(5/7)；血小板減少性紫癜10例，經(jīng)人參二醇組皂甙治療其中基本治愈和顯效6例、良效3例、進(jìn)步1例，有效率達(dá)100％。17例中有2例經(jīng)人參二醇組皂甙治療后，HbsAg從陽性轉(zhuǎn)為陰性。
本研究結(jié)果表明人參二醇組皂甙具有刺激造血祖細(xì)胞增殖的類生長因子作用。臨床應(yīng)用獲得令人滿意的療效，總有效率為82.1％(46/56)。體內(nèi)療效與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符合。CAA和成人ITP在血液病中均為多發(fā)病和難治性疾病，病因復(fù)雜。人參二醇組皂甙能使CAA和ITP外周血明顯上升，尤以血小板升高明顯。28例成人ITP經(jīng)人參二醇組皂甙治療，有效率為98.2％。ITP系自身免疫性疾病，人參二醇皂甙可能增加正常免疫力或抑制自身抗體。17例乙型肝炎引起的CAA和ITP有HbsAg陽性或其他抗體陽性，15例獲得良好療效，其中2例HbsAg由陽性轉(zhuǎn)陰性。提示人參二醇對(duì)免疫系統(tǒng)有良好的作用。
實(shí)施例6人參二醇組皂甙對(duì)人CD34+造血干/祖細(xì)胞的作用材料和方法1．取外科手術(shù)無血液病患者的肋骨，用常規(guī)方法分離，獲得骨髓單個(gè)核細(xì)胞。
2．取單個(gè)核細(xì)胞用免疫磁珠單克隆抗體標(biāo)記法獲得CD34+細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析純度高達(dá)90％以上。
3．PDS的提取方法與實(shí)施例1相同。
4．造血祖細(xì)胞培養(yǎng)CD34+細(xì)胞1×104/ml，培養(yǎng)體系含白介素-3(IL-3)、GM-CSF、EPO。37℃ 5％CO2培養(yǎng)14天。觀察BFU-E、CFU-E、CFU-E、CFU-E和CFU-Mix集落數(shù)。以不加PDS組為對(duì)照。結(jié)果見表7表7PDS對(duì)CD34+造血干/祖細(xì)胞的增殖作用(X+SD,n=5)
以前的研究僅能針對(duì)較晚期的造血祖細(xì)胞。而隨著造血干細(xì)胞的分離純化方法進(jìn)展，CD34+造血干/祖細(xì)胞是目前所能研究的最早期的造血細(xì)胞，已顯示出巨大的臨床應(yīng)用價(jià)值，CD34+造血干/祖細(xì)胞移植已成為根治惡性血液病及某些實(shí)體瘤的方法，可重建造血功能，還可用于遺傳病和腫瘤的基因治療。本研究觀察PDS對(duì)造血干/祖細(xì)胞的增殖作用。結(jié)果顯示PDS不但刺激較晚期的造血祖細(xì)胞增殖，而且對(duì)CD34+細(xì)胞形成各類定向造血祖細(xì)胞集落具有明顯的作用。PDS促進(jìn)CD34+細(xì)胞形成BFU-E、CFU-E、CFU-GM和CFU-Mix集落數(shù)分別增加186.0±10.1％、123.1±11.4％、151.0±11.2％和127.0±1.8％，提高率顯著高于PDS對(duì)較晚期的造血祖細(xì)胞。提示PDS不但具有促進(jìn)CD34+細(xì)胞增殖，而且能夠誘導(dǎo)其定向分化的雙向作用，并且對(duì)越早期的造血細(xì)胞，作用越明顯。這些結(jié)果提示對(duì)于骨髓移植和化療后的病人應(yīng)用PDS治療可與造血生長因子起協(xié)同作用，對(duì)提高療效和恢復(fù)造血將是很有效的，對(duì)于難治性血液病，病變?cè)诟?祖細(xì)胞階段者則能通過促進(jìn)早期CD34+造血干/祖細(xì)胞增殖和分化而恢復(fù)造血功能。
5-50μg/ml的PDS濃度是刺激CD34+細(xì)胞集落形成的最佳濃度，當(dāng)濃度高達(dá)100μg/ml時(shí)不但沒有出現(xiàn)抑制現(xiàn)象，而且仍能提高集落數(shù)，也說明PDS質(zhì)量和純度良好。
實(shí)施例7人參二醇刺激造血祖細(xì)胞增殖的作用機(jī)理研究PDS如何促使造血祖細(xì)胞增殖的作用機(jī)理尚未明了。轉(zhuǎn)錄因子c-Fos、c-Jun和GATA-2在血細(xì)胞生成中起重要作用，它們的主要功能是介導(dǎo)造血細(xì)胞對(duì)生長因子的反應(yīng)，參與細(xì)胞增殖及分化有關(guān)基因的調(diào)控。由于PDS刺激造血的作用類似于生長因子，故借鑒研究生長因子的方法，探討PDS在造血細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳遞途徑。
材料和方法1、人細(xì)胞株培養(yǎng)和PDS刺激處理 選用人粒系細(xì)胞株HL-60、紅系細(xì)胞株K562、巨核系細(xì)胞株CHRF-288和Meg-01作靶細(xì)胞。常規(guī)培養(yǎng)在含10％小牛血清的IMDM培養(yǎng)基中，分為2組實(shí)驗(yàn)組分別加PDS 5ug/ml，對(duì)照組不加PDS，培養(yǎng)1個(gè)月，細(xì)胞作饑餓處理，去血清孵育24小時(shí)，然后分別加入PDS 25 ug/ml，細(xì)胞與藥物作用2小時(shí)后，提取核蛋白。
2、提取核蛋白 核蛋白提取方法按Dinam報(bào)道的加以改良，細(xì)胞經(jīng)冷PBS洗滌后，懸浮在緩沖液A中，含蛋白酶抑制劑抑蛋白酶肽(Leupeptin)、木瓜蛋白酶抑制肽(antipain)、亮抑制肽(aprotinin)和胃蛋白酶抑制劑(pepstatin)(Sigma)，均為10ug/ml濃度，經(jīng)振蕩后破碎細(xì)胞膜，收集細(xì)胞核，懸浮在緩沖液C中，超聲粉碎器破碎細(xì)胞核，離心沉淀12000 rpm，20分鐘，取上清，測定蛋白濃度。
3、蛋白免疫印跡分析(Western Blot)10ug核蛋白加入SDS凝膠加樣緩沖液25ul煮沸后，經(jīng)SDS-PAGE膠電泳分離后。將蛋白條樣用電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維濾膜上，加特異性抗人c-Fos、c-Jun和GATA-2抗體(Santa Cruz)0.5ug/ml，室溫結(jié)合反應(yīng)1小時(shí)，加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(1∶2000稀釋)，ECL發(fā)光劑(Amersham)作用1分鐘，曝光1-10分鐘，顯影后用光密度掃描儀分析結(jié)果，同樣實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍。結(jié)果 PDS處理細(xì)胞后核內(nèi)c-Fos、c-Jun和GATA-2轉(zhuǎn)錄因子含量1．c-FosHL-60、K562、CHRF-288和Meg-01四株細(xì)胞經(jīng)PDS刺激處理后，Western Bolt顯示核蛋白與c-Fos抗體結(jié)合反應(yīng)帶，經(jīng)光密度掃描分析處理后，四株細(xì)胞的C-FOS轉(zhuǎn)錄蛋白含量高于未經(jīng)處理的細(xì)胞為1.5-2.0倍。
2．c-JunHL-60、K562、CHRF-288和Meg-01四株，HL-60細(xì)胞表達(dá)c-Jun，且PDS刺激處理前后無變化。而K562、CHRF-288和Meg-01三株細(xì)胞表達(dá)很低，PDS處理后明顯增加，經(jīng)光密度掃描分析處理后，三株細(xì)胞的c-Jun轉(zhuǎn)錄蛋白含量高于未經(jīng)處理的細(xì)胞，為2.0-3.0倍。
3．GATA-2HL-60、K562、CHRF-288和Meg-01四株細(xì)胞經(jīng)PDS刺激處理后，Western Bolt顯示核蛋白與GATA-2抗體結(jié)合反應(yīng)帶，CHRF-288和Meg-01二株細(xì)胞的GATA-2轉(zhuǎn)錄蛋白含量是未經(jīng)處理的細(xì)胞1.4-1.8倍。
生長因子、細(xì)胞因子和其他細(xì)胞外信號(hào)分子可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化以及功能和行為的改變。這種細(xì)胞對(duì)外環(huán)境的反應(yīng)具有重要的生物學(xué)意義，需要經(jīng)過一系列復(fù)雜的信號(hào)傳遞和基因調(diào)控程序，包括信號(hào)分子與表面受體和配體的結(jié)合，進(jìn)而觸發(fā)特定的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞途徑，并啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。因此，細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞途徑作為連結(jié)細(xì)胞表面和細(xì)胞核內(nèi)目的基因的橋梁。
經(jīng)PDS刺激處理后，HL-60、K562、CHRF-288和Meg-01細(xì)胞的c-Fos蛋白含量高于未經(jīng)處理細(xì)胞。K562、CHRF-288和Meg-01細(xì)胞的c-Jun表達(dá)明顯增加。而GATA-2僅在PDS處理的巨核細(xì)胞CHRF-288和Meg-01蛋白含量高于未經(jīng)處理細(xì)胞。這些結(jié)果提示PDS分別通過誘導(dǎo)c-Fos、c-Jun和GATA-2轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白而刺激造血細(xì)胞增殖，從分子水平證明PDS的類生長因子效應(yīng)。紅系、粒系和巨核系三種系列細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白本身表達(dá)高低的不同，以及對(duì)PDS的敏感性程度不同，這是由于系列的特異性所致。
權(quán)利要求
1.人參二醇組皂甙與藥用載體和/或藥用賦形劑組成的組合物在血液病治療中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，尤其在難治性血液病治療中的應(yīng)用。
全文摘要
一種組合物,是由人參二醇組皂甙與藥用載體和/或藥用賦形劑組成,本發(fā)明是將該組合物應(yīng)用與血液病的治療,尤其是應(yīng)用于難治性血液病的治療。本發(fā)明提供的組合物,對(duì)造血細(xì)胞具有刺激增殖作用,對(duì)再障性貧血患者的造血祖細(xì)胞具有刺激增殖作用,對(duì)白血病祖細(xì)胞有增殖的抑制和刺激作用,有較強(qiáng)的促進(jìn)化療藥殺傷白細(xì)胞的作用。該組合物應(yīng)用于血液病的治療,療效優(yōu)于現(xiàn)有治血液病的藥物,且無毒副作用,價(jià)格較低,為血液病的治療提供了新途徑,并拓展了人參皂甙尤其是人參二醇組皂甙的臨床應(yīng)用范圍。
文檔編號(hào)A61K31/7028GK1300594SQ9912683
公開日2001年6月27日 申請(qǐng)日期1999年12月17日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月17日
發(fā)明者高瑞蘭, 馬逢順, 金錦梅, 許家鸞, 牛泱平, 苗青 申請(qǐng)人:浙江省中醫(yī)院