專利名稱：高掛草提取物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種高掛草提取物的制備方法。
背景技術：
高掛草(裕固藥名為曲龍或槐撒石)為裕固族人常用草藥之一，用于治療人畜 包衣不下，治療效果較好。高掛草為松蘿科(Usneaceae)松蘿屬(fA"ea)的破 莖松蘿(Owe" Vain)的全株。
高掛草植物體絲狀，長15-30cm，成二叉式分枝，基部較粗，分枝少，先端 分枝多。表面灰黃綠色，具光澤，有明顯的環(huán)狀裂溝，橫斷面中央有韌性絲狀的 中軸，具彈性，可拉長，由菌絲組成，易與皮部分離；其外為藻環(huán)，常由環(huán)狀溝 紋分離或成短筒狀。菌層產(chǎn)生少數(shù)子囊果。子囊果盤狀，褐色，子囊棒狀，內(nèi)生 8個橢圓形子囊孢子。生于深山老林樹干上或巖壁上。
破莖松蘿在我國東北全草入藥，具有強心利尿，止咳平喘，通經(jīng)活絡，清熱 明目退云翳等功效，主治結膜炎，角膜云翳，耳鳴，白帶，風濕痛，瘰疬等。1995 年，國外有人報道從破莖松蘿中提取分離得到的松蘿酸和地弗地衣酸是其顯示解 熱鎮(zhèn)痛的主要有效成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高掛草提取物的制備方法。
本發(fā)明將粉碎后的高掛草中加入溶劑提??；提取液過濾、減壓回收得到總提 物，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，所得乙酸乙酯部分包括 8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物，即為高掛草提取物。
一種高掛草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括
1) 將粉碎后的高掛草藥材加入溶劑提?。?br> 2) 將高掛草藥材提取液過濾、減壓回收得到總提物，加水混懸，依次用石 油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正 丁醇部分；
3) 乙酸乙酯部位經(jīng)過反復硅膠柱層析，得到8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物。
上述方法中，加入的溶劑為60~98%的工業(yè)乙醇或甲醇，提取方法包括冷浸、 超聲或微波提取。
上述方法中，柱層析填料為層析用硅膠。
上述方法中，高掛草藥材與溶劑的體積比為1: 1 1: 10。
上述方法中，8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物，分別為石油醚:丙酮 (30:1)得到4-甲基-2， 6-二羥基苯甲醛，氯仿:丙酮(20: 1)得到(3-苔黑酚酸
甲酯，氯仿:甲醇(6:1)薄層制備分別得到(+)-松蘿酸和(-)-松蘿酸，石油醚:丙酮 (15:1)得到5cc,8a-過氧麥角多甾-6,22E-二烯-3"醇，氯仿:丙酮(30:l)得到5a,8oc-
過氧麥角多甾-6,9,22E-三烯-3y9醇，氯仿:丙酮(10:1 )得到苔色酸，氯仿:丙酮(30:1)
得到苔色酸甲酯，氯仿:丙酮(10:1)得到苔色酸乙酯，氯仿:丙酮(10:1)得到茶漬酸。
本發(fā)明的提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以廣泛用于預防和治療口腔 疾病的藥物或保健品中。 本發(fā)明的優(yōu)點在于
1) 利用簡單的方法，對高掛草不同極性部位進行抑菌活性篩選，找到活性 部位，經(jīng)過多次硅膠柱層析，闡明活性部位的組成。
2) 本發(fā)明所得提取物組成明確。
3) 本發(fā)明所得提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以廣泛用于預防和治 療口腔疾病的藥物或保健品中。
4) 本發(fā)明制得的提取物得率高，同時工藝流程短，設備及操作簡單，成本 低廉，適合較大規(guī)模的制備。
具體實施例方式
高掛草提取物的制備方法步驟如下
1) 將粉碎后的高掛草藥材(過20-80目篩)中加入60~98%的工業(yè)乙醇或甲
醇，冷浸、超聲或微波提取，提取時間為30分鐘至7天，料液比為l: 1~1: 10;
2) 將高掛草藥材提取液過濾、減壓回收得到總提物，加水混懸，依次用石
油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正
丁醇部分；
43) 對已經(jīng)確定的活性部位即乙酸乙酯部分進行反復硅膠柱層析；石油醚: 丙酮(30:1)得到化合物(l)，氯仿:丙酮(20: 1)得到化合物(2)，氯仿:甲醇(6:1) 薄層制備分別得到化合物(3)和化合物(4)，石油醚:丙酮(15:1)得到化合物(5), 氯仿:丙酮(30:1)得到化合物(6)，氯仿:丙酮(10:1)得到化合物(7)，氯仿:丙酮
(30:1)得到化合物(8)，氯仿:丙酮(10:1)得到化合物(9)，氯仿:丙酮(10:1) 得到化合物(IO)。
4) 綜合應用多種光譜及波譜技術(IR， UV, HR-ESIMS, EI-MS, 1D/2D NMR) 對純化得到的化合物結構進行了鑒定，分別為8個酚酸類化合物和2個甾體類化 合物，分別為4-甲基-2， 6-二羥基苯甲醛(1)， p-苔黑酚酸甲酯(2)， (+)-松蘿酸(3) 和(-)-松蘿酸(4)， 5a,8a-過氧麥角多甾-6,22E-二烯-3"醇(5)， 5a,8a-過氧麥角多甾 -6,9(ll),22E-三烯-3;S醇(6)，苔色酸(7)，苔色酸甲酯(8)，苔色酸乙酯(9)，茶漬酸 (10)，測定結果可靠。
下面結合實施例對本發(fā)明作詳細說明。 實施例l:高掛草(破莖松蘿)有效部位的制備
破莖松蘿(2.5 kg)，室溫下用95%工業(yè)乙醇浸泡七次，每次七天，減壓濃縮 回收乙醇。將所得提取物(110g)加水溶解，用石油醚，乙酸乙酯，分別萃取，得 石油醚部分4g，乙酸乙酯部分60g，正丁醇部分50g。乙酸乙酯部位經(jīng)過反復硅 膠柱層析，得到8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物，分別為石油醚:丙酮 (30:1)得到4-甲基-2， 6-二羥基苯甲醛50mg (1)，氯仿:丙酮(20: 1)得到(3-苔黑酚酸甲酯10mg(2)，氯仿:甲醇(6:1)薄層制備分別得到10mg (+)-松蘿酸(3) 和4mg(-)-松蘿酸(4)，石油醚:丙酮(15:1)得到12mg5a,8a-過氧麥角多甾-6,22E-二烯-3〃醇(5)，氯仿:丙酮(30:1)得到15mg5a,8a-過氧麥角多甾-6,9(11),22E-三 烯-3"醇(6)，氯仿:丙酮ao:l)得到50mg苔色酸(7)，氯仿:丙酮(30:1)得到100mg 苔色酸甲酯(8)，氯仿:丙酮(10:1)得到50mg苔色酸乙酯(9),氯仿:丙酮(10:1) 得到50mg茶漬酸(10)?；瘜W結構如下1 R^CH3， R2=H, R3=OH, R4=CHO
2 R^CH3， R2=COOCH3， R3=OH， R4=CH3
7 R廣OH, R2=COOH， R3=CH3, R4=H
8 R產(chǎn)OH, R2=COOCH3, R3=CH3, R4=H
9 R廣OH, R2=COOCH2CH3, R3=CH3,
10 R^CHg, R3=OH, R^H, R2=
=H
實施例2:高掛草(破莖松蘿)乙酸乙酯部位抑菌活性研究
1 .實驗方法將2種口腔菌(Jc""o附y(tǒng)c^ W"oras ATCC 27044和 S&印toco"i^ ATCC 25175)和4種普通菌(Sto/ /ococcws tmreiw ATCC
6538、五"/zen'cWa co/z' ATCC 8739、萬w7/iw仰6"fc ATCC 9372、尸sratfomortay "m^"仍"ATCC 9027)的標準菌種挑選單個菌落接種于TSB (Tryticase soy broth
6Becton Dickinson and Co.， CockeysviUe， Md.)培養(yǎng)基內(nèi)，于5%的(302培養(yǎng)箱中 37'C培養(yǎng)18 24h。將樣品溶解于TSB培養(yǎng)基中，按兩倍稀釋的方法lOO^L加 入到96孔板上，使樣品濃度在2500-1.22ppm之間，再加入100|aL培養(yǎng)好的各 種菌液，使菌濃度為lxl08CFU/mL， C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 24h，用bio-tek ELX808酶標儀測定OD61Qnm. OD61()nmS0.05的最小樣品濃度為最小抑菌濃度 (MIC)。 口腔菌以triclosan為陽性對照，普通菌以青霉素G為陽性對照，陰性 對照為不加藥品的各菌液，空白為加樣品不接種的藥液，試驗重復兩次。 2.實驗結果(見表l)
由實施例1得到的高掛草乙酸乙酯部位對2種口腔菌(Jc^wmj;c" v^cmm ATCC 27044和5^eptococciw wwtow ATCC 25175)和4種普通菌(5top /ococcra awreKS ATCC 6538、五sc/zerz'c/n'a co/z' ATCC 8739、 B鎖7/船s由z'fc ATCC 9372、 尸ww^womw flerag/"ora ATCC 9027)均具有較好的抑制作用。
表1高掛草乙酸乙酯部位(GGC)最小抑菌濃度實驗結果 _MIC(ppm) results_ rrr>positive control
spcciss_triclosan penicillin G
v4c"7 o，ces w'5Tcw船ATCC 27044 5fr印tococcws ATCC 2517539.13.9
oral bacterium78.17.8
SVop^yfococcKs awrews ATCC 6538625125
normalATCC 873962562.5
bacteriumw緣j ATCC 9372312.5125
i^ewtfo,noy aerwg/wora ATCC 90271250>250
權利要求
1、一種高掛草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括1)將粉碎后的高掛草藥材加入溶劑提?。?)將高掛草藥材提取液過濾、減壓回收得到總提物，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收分別得石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分；3)乙酸乙酯部位經(jīng)過反復硅膠柱層析，得到8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物。
2、 如權利要求1所述的方法，其特征在于溶劑為60~98%的工業(yè)乙醇或甲醇， 提取方法包括冷浸、超聲或微波提取。
3、 如權利要求1所述的方法，其特征在于柱層析填料為層析用硅膠。
4、 如權利要求l所述的方法，其特征在于高掛草藥材與溶劑的體積比為1:1~1: 10。
5、 如權利要求l所述的方法，其特征在于8個酚酸類化合物和2個甾體類 化合物，分別為石油醚:丙酮(30:1)得到4-甲基-2， 6-二羥基苯甲醛，氯仿:丙酮(20: 1)得到P-苔黑酚酸甲酯，氯仿:甲醇(6:1)薄層制備分別得到(+)-松蘿酸 和(-)-松蘿酸，石油醚:丙酮(15:1)得到5a,8a-過氧麥角多甾-6,22E-二烯-3"醇， 氯仿:丙酮(30:1)得到5cx,8a-過氧麥角多甾-6,9,22E-三烯-3A醇，氯仿:丙酮(10:1) 得到苔色酸，氯仿:丙酮(30:1)得到苔色酸甲酯，氯仿:丙酮(10:1)得到苔色酸 乙酯，氯仿:丙酮(10:1)得到茶漬酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高掛草提取物的制備方法。本發(fā)明將粉碎后的高掛草中加入溶劑提取；提取液過濾、減壓回收得到總提物，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，所得乙酸乙酯部分包括了8個酚酸類化合物和2個甾體類化合物。本發(fā)明制得的提取物得率高，同時工藝流程短，設備及操作簡單，成本低廉，適合較大規(guī)模的制備。提取物具有抑制口腔微生物的活性，可以廣泛用于預防和治療口腔疾病的藥物或保健品中。
文檔編號A61K36/09GK101461828SQ20071030729
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月18日 優(yōu)先權日2007年12月18日
發(fā)明者師彥平, 戚歡陽, 靳元鵬 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所