一種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物及其制備工藝和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物及其制備工藝和應(yīng)用，所述的罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物，它是在室溫條件下，將罐子草的新鮮嫩葉磨漿后用濃度為92%-100%（v/v）的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍干燥，即得。本發(fā)明的提取物能明顯降低機(jī)體尿液及腎組織中草酸和鈣含量，從而達(dá)到預(yù)防腎結(jié)石的目的。
【專利說明】—種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物及其制備工藝和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥材提取【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物及其制備工藝和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]腎結(jié)石是泌尿系統(tǒng)常見疾病，發(fā)病率為3.4% -4.8%，發(fā)病率隨年齡增加，危險性也增大。腎結(jié)石成分以草酸鈣和磷酸鈣結(jié)石為主，占全部尿路結(jié)石的80% -84%，其中草酸鈣結(jié)石占58.8%。目前腎結(jié)石治療主要運(yùn)用體外沖擊波碎石術(shù)(ESWL)和腔內(nèi)泌尿外科手術(shù)，但難以根治腎結(jié)石，其術(shù)后復(fù)發(fā)率為78%-80%。我國在應(yīng)用中醫(yī)藥治療和預(yù)防結(jié)石病復(fù)發(fā)方面有著悠久的歷史，但該方面的基礎(chǔ)研究尚有待進(jìn)一步深入研究并開發(fā)。
[0003]罐子草，灌木，高0.3-1.2m。莖四棱形或稀六棱形，被平貼的糙伏毛或上升的糙伏毛，葉對生或有時3枚輪生；葉柄長0.5-lcm，密被平貼糙伏毛；葉片堅紙質(zhì)，卵形至卵狀披針形，長5.5-11.5cm，寬2.3_3cm，先端漸尖，基部鈍或圓形，全緣，具緣毛，兩面被糙伏毛、微柔毛及透明腺點(diǎn)；基出脈5。稀疏聚傘花序組成圓錐花序，頂生；花萼長約2.3cm，長壇形，外面被刺手狀有柄星狀毛及微柔毛，裂片4，長三角形或卵狀三角形，長約1.1cm ;花瓣4，深紅色至紫色，卵形，長約2cm ;雄蕊8，花藥具長喙，藥隔基部微膨大，末端具刺毛2 ;子房半下位，4室，先端具一圈短剛毛，上半部被疏微柔毛。蒴果長卵形，為宿存萼所包，宿存萼長壇狀，中部略上縊縮，長1.4-2cm，被刺毛狀有柄星狀毛?；ü?-9月。生于海拔250_800m的山坡、山谷、水邊、路旁、疏林中或灌木叢中。分布于長江流域以南及臺灣、廣西、貴州等地。
[0004]目前，罐子草被用于濕熱瀉痢、淋痛、久咳、勞嗽、咯血、月經(jīng)不調(diào)、白帶等方面的疾病，尚無文獻(xiàn)報道罐子草或其提取物具有預(yù)防腎結(jié)石的功效。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種以罐子草作為原料制備的預(yù)防腎結(jié)石罐子草提取物及其制備工藝和應(yīng)用。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究并不懈探索，最終獲得了如下技術(shù)方案:
一種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物，所述的罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物。需要說明的是，本發(fā)明所述的中藥材罐子草選用野牡丹科植物朝天罐Osbeckiaopipara C.Y.Wuet C.Chen 的新鮮嫩葉。
[0007]—種上述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，該工藝包括如下步驟:將罐子草新鮮嫩葉磨漿后用濃度為92%_100% (v/v)的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍干燥，即得。
[0008]優(yōu)選地，如上所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其中所述的浸提步驟為:將罐子草新鮮嫩葉磨漿后用濃度為92%-100% (v/v)的乙醇溶液超聲振蕩0.5-1.5h，然后在室溫下放置36_720h。優(yōu)選室溫下放置浸提48_96h。
[0009]優(yōu)選地，如上所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其中所述的濃縮步驟在42 °C以下進(jìn)行。
[0010]優(yōu)選地，如上所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其中乙醇溶液的用量為罐子草新鮮嫩葉質(zhì)量的3-8倍(v/w)。
[0011]本發(fā)明通過設(shè)計試驗(yàn)觀察小鼠負(fù)重游泳時間，檢測小鼠負(fù)重游泳后血漿中乳酸的含量，證實(shí)了罐子草提取物具有提高小鼠運(yùn)動耐力、降低運(yùn)動后小鼠血清血中乳酸的作用。本發(fā)明試驗(yàn)還證明罐子草提取物組小鼠運(yùn)動后肝糖元含量明顯高于正常對照組，血清尿素氮明顯低于正常對照組，說明罐子草提取物有較好維持肝糖元含量，提高動物對運(yùn)動負(fù)荷的適應(yīng)能力。
[0012]腎結(jié)石的形成是腎內(nèi)一定大小的晶體潴留或粘附到腎小管上皮細(xì)胞，草酸鈣晶體(CaOX)是腎結(jié)石中最常見的晶體。乙二醇是草酸的前體，進(jìn)入體內(nèi)后轉(zhuǎn)化成羥乙酸，后者既可在羥乙酸氧化酶的作用下直接轉(zhuǎn)化為草酸，也可經(jīng)乳酸脫氧酶的催化轉(zhuǎn)化成乙醛酸，乙醛酸又可以直接在非酶作用下轉(zhuǎn)化為草酸。因此，給動物喂食乙二醇進(jìn)入體內(nèi)代謝后最終轉(zhuǎn)化為草酸，經(jīng)尿排出，增加尿中草酸的濃度，加服氯化銨，腎內(nèi)結(jié)石形成率提高。本發(fā)明通過腎結(jié)石動物模型試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，能明顯降低腎結(jié)石小鼠尿液及腎組織中草酸和鈣含量，從而達(dá)到預(yù)防腎結(jié)石的目的，其抑制結(jié)石的形成可能是通過抑制草酸鈣結(jié)晶的生長和聚集，減少草酸鈣晶體在腎中的形成和沉積從而抑制草酸鈣結(jié)石的形成。

【具體實(shí)施方式】
[0013]以下是本發(fā)明罐子草乙醇浸提物干粉的制備實(shí)施例和效果試驗(yàn)例，對本發(fā)明做進(jìn)一步說明和闡述。但是，本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受限于以下實(shí)施例，凡是基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0014]實(shí)施例1罐子草乙醇浸提物的制備
稱取1.16kg罐子草的新鮮嫩葉，清洗干凈，磨漿，所得漿液中加入6L體積百分濃度為95%的乙醇溶液，超聲振蕩lh，頻率26.4kHz,隨后在室溫下放置72h后進(jìn)行過濾，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，過100目篩，得罐子草乙醇浸提物干粉。
[0015]對比例I罐子草提取物的制備
將1.0kg罐子草新鮮嫩葉，清洗干凈，用6L體積百分濃度為95%的乙醇溶液加熱回流提取2h，過濾，重復(fù)提取2次，合并2次濾液，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，過100目篩，得罐子草提取物干粉。
[0016]實(shí)施例2罐子草乙醇浸提物對小鼠草酸鈣腎結(jié)石模型的抗結(jié)石試驗(yàn)研究
ICR小鼠，雄性，體質(zhì)量28-32g，隨機(jī)分為如下四組:正常對照組、模型對照組、試驗(yàn)I組、試驗(yàn)II組，每小組12只。除正常對照組小鼠每天自由飲用正常水外，其他各組均自由飲用成石水(含1%乙二醇+1%氯化銨)，連續(xù)飲用6周，同時并進(jìn)行如下灌胃給藥干預(yù):以體質(zhì)量為基準(zhǔn)，正常對照組和模型對照組灌胃純化水，劑量為0.lml/10g ;試驗(yàn)I組灌胃對比例I制備的罐子草提取物干粉，試驗(yàn)II組灌胃本發(fā)明實(shí)施例1制備的罐子草乙醇浸提物，劑量均為0.76g/kg/d，每天上午9點(diǎn)和下午5點(diǎn)左右各灌胃一次，共給藥6周。于實(shí)驗(yàn)第6周末次給藥后，收集4h尿液，采用甲基百里酚藍(lán)法測定尿鈣含量，以及采用高錳酸鉀退色法測定草酸含量。第6周末次給藥后24h處死全部小鼠，取腎臟稱重，用生理鹽水進(jìn)行組織勻漿，測定腎鈣、草酸含量。
[0017]小鼠造模后，精神萎靡，畏寒卷縮，毛色變黃，呈聳毛狀，體質(zhì)量增長明顯抑制，腎臟指數(shù)(腎臟/體質(zhì)量比)增加，部分動物死亡。而試驗(yàn)II組組與模型對照組相比，癥狀有很大改善，但對腎臟指數(shù)的影響不顯著，具體結(jié)果見表I。
[0018]表I各組小鼠體質(zhì)量和腎臟重量比較

pmm^腎耐旨數(shù)繃Ij 樣本量(

(g)(m?/g)
正顆挪擔(dān)12 38.8±2.I16.1±1.0
模型對照10 30.4土1.8"19.仕 1.1**
試驗(yàn) I 組11 31.?±1.620.3±0.9
試驗(yàn) II 組12 33.1±2.0*19.2±1.4
與正常對照組比較，*Ρ < 0.05，蛛P < 0.01 ；
與模型對照組比較，?Ρ < 0.05，--Ρ < 0.01。
[0019]另外，腎組織形態(tài)學(xué)和腎組織草酸鈣結(jié)晶觀察發(fā)現(xiàn)，模型對照組和試驗(yàn)I組的動物腎臟水腫，表面蒼白，質(zhì)地變硬，腎臟表面可見散在白色小點(diǎn)。而試驗(yàn)II組動物的癥狀較輕，表面紅潤，質(zhì)地正常。值得注意的是，通過表2的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，試驗(yàn)II組的尿液和腎臟的鈣含量、草酸含量明顯低于模型對照組0° < 0.05或產(chǎn)< 0.01)，也顯著低于試驗(yàn)I組{P < 0.05)，這說明罐子草乙醇浸提物對小鼠草酸鈣腎結(jié)石模型具有非常顯著的抗結(jié)石作用，而通過乙醇加熱回流提取的罐子草提取物沒有表現(xiàn)出抗結(jié)石的生物活性，這可能是高溫破壞了相應(yīng)的活性成分所致。
[0020]表2各組小鼠尿液、腎臟的鈣和草酸含量比較
Wm Wm^Wm^^Wm.^


B.(mmol/L)(mmol/L) (mmol/g) (|imol/g)
正 SIS120.69 +0.120.08 !±0^0340.45tCLll0.86+0.41
模型組101.84 土 0.47**0.132±0.021**0.64±0.15*1.55±0.48**
試驗(yàn)丨組11 1.?1±0.300.139±0.0190.58±0.1S1.61+0.37
試驗(yàn)IIIi120.95±0.23*'s0.093±0.020'!>0.50*0.12—*0.97±0.35>!—'
模型組與正常組比較，*Ρ < 0.05,>< 0.01 ；
試驗(yàn)組與模型組比較，V <0.05，yyZ7 <0.01。
【權(quán)利要求】
1.一種預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物，其特征在于:所述罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其特征在于該工藝包括如下步驟:在室溫條件下，將罐子草的新鮮嫩葉磨漿后用濃度為92%-100%v/v的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍干燥，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其特征在于，所述浸提步驟為:將罐子草的新鮮嫩葉磨漿后用濃度為92%-100%v/v的乙醇溶液超聲振蕩0.5-1.5h，然后在室溫下放置36-720h。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其特征在于:所述濃縮步驟在42 °C以下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述預(yù)防腎結(jié)石的罐子草提取物的制備工藝，其特征在于:所述乙醇溶液的用量為罐子草新鮮嫩葉質(zhì)量的3-8倍v/w。
6.權(quán)利要求1所述的罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物在制備預(yù)防腎結(jié)石的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K36/80GK104127454SQ201410422184
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月26日
【發(fā)明者】武希芬 申請人:崔銀方