工程化抗體恒定結(jié)構(gòu)域分子的制作方法
【專利摘要】本申請(qǐng)描述的是工程化抗體恒定結(jié)構(gòu)域分子，例如CH2或CH3結(jié)構(gòu)域分子，所述工程化抗體恒定結(jié)構(gòu)域分子包含至少一個(gè)突變，或者包含在所述CH2結(jié)構(gòu)域的環(huán)區(qū)域中移入的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)或其功能片段。本申請(qǐng)所述的CH2結(jié)構(gòu)域分子是小的、穩(wěn)定的、可溶的，表現(xiàn)出很少毒性乃至沒(méi)有毒性并且能夠結(jié)合抗原。
【專利說(shuō)明】工程化抗體恒定結(jié)構(gòu)域分子
[0001] 本申請(qǐng)為國(guó)際申請(qǐng)日2009年1月30日、國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2009/032692于2010 年9月21日進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段、申請(qǐng)?zhí)?00980110221. 1、發(fā)明名稱"工程化抗體恒定結(jié)構(gòu) 域分子"的分案申請(qǐng)。
[0002] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0003] 本申請(qǐng)要求享有2008年1月31日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)第61/063, 245號(hào)的優(yōu)先 權(quán)，通過(guò)引用將其整體并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004] 本發(fā)明涉及抗體，特別地涉及在特定位置突變的抗體恒定結(jié)構(gòu)域和/或從特異性 結(jié)合目的抗原的異源抗體移入一個(gè)或多個(gè)可變鏈環(huán)的抗體恒定結(jié)構(gòu)域。
【背景技術(shù)】
[0005] 常規(guī)抗體是包含至少四條多肽鏈的大型多亞基蛋白復(fù)合物，所述四條多肽鏈包括 兩條輕鏈和兩條重鏈?？贵w的重鏈和輕鏈含有結(jié)合抗原的可變（V)區(qū)和提供結(jié)構(gòu)支撐和效 應(yīng)物功能的恒定（C)區(qū)。抗原結(jié)合區(qū)包含兩個(gè)分離的結(jié)構(gòu)域，重鏈可變結(jié)構(gòu)域（V H)和輕鏈 可變結(jié)構(gòu)域（')?；パa(bǔ)決定區(qū)（CDR)為抗體可變結(jié)構(gòu)域中的短氨基酸序列，它提供抗原特 異性。抗體分子的重鏈和輕鏈各提供三個(gè)⑶R(⑶R1、⑶R2和⑶R3)，因此能夠與抗原接觸 的每個(gè)抗體具有六個(gè)CDR，產(chǎn)生抗原特異性。
[0006] 典型的抗體如IgG分子具有大約150kD的分子量。治療應(yīng)用可能受限，因?yàn)榭贵w 相對(duì)較大的尺寸能夠限制組織滲透或表位進(jìn)入。
[0007] 已在鑒定了蛋白酶消化后天然存在的抗體的許多較小的抗原結(jié)合片段（例如， Fab、Fab'和F(ab'）2)。這些抗體片段具有范圍在大約50kD至100kD的分子量。已使用重 組的方法來(lái)產(chǎn)生替代的抗原結(jié)合片段，稱為單鏈可變片段（scFv)，它是由通過(guò)合成的肽接 頭相接合的\和V H構(gòu)成。scFv分子具有大約25-30kD的分子量。
[0008] 盡管在人類和大多數(shù)其他的哺乳動(dòng)物中的天然存在的抗體的抗原結(jié)合單元一 般已知是由一對(duì)可變區(qū)組成，但是駱駝科（camelid)物種表達(dá)大比例的缺乏輕鏈序列 的全功能、高特異性抗體。駱駝科重鏈抗體作為通過(guò)其恒定區(qū)二聚的單一重鏈的同源 二聚體而存在（美國(guó)專利第5, 840, 526號(hào)和第6, 838, 254號(hào)；以及美國(guó)專利申請(qǐng)公開(kāi) 號(hào)2003-0088074)。這些駱駝科重鏈抗體的可變結(jié)構(gòu)域稱為VhH結(jié)構(gòu)域，它們?cè)诒环蛛x 為V H鏈的片段時(shí)保留了高特異性結(jié)合抗原的能力（Hamers-Casterman等人· Nature 363:446-448, 1993 ;Gahroudi 等人· FEBS Lett. 414:521-526, 1997)。
[0009] 結(jié)合抗原的單VH結(jié)構(gòu)域稱作結(jié)構(gòu)域抗體（dAb)，也已將其從由免疫小鼠的基因組 DNA擴(kuò)增的小鼠 VH基因文庫(kù)中鑒定出來(lái)（Ward等，Nature 341:544-546,1989)。還已描述 了能夠高親和力結(jié)合抗原的人類單免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域多肽（參見(jiàn)例如，PCT
【發(fā)明者】迪米特爾·S·迪米特羅夫 申請(qǐng)人:美國(guó)政府健康及人類服務(wù)部