抗-gcc抗體分子和其用于測(cè)試對(duì)gcc標(biāo)靶治療的易感性的用途
【專利摘要】本發(fā)明揭示結(jié)合GCC的抗體和抗體的抗原結(jié)合片段。本發(fā)明還提供用于鑒別應(yīng)接受利用本發(fā)明提供的所述抗-GCC抗體的GCC標(biāo)靶治療的患者的診斷方法。所述抗-GCC抗體分子可作為裸抗體分子和作為免疫偶聯(lián)物的組份來(lái)使用。因此，在另一方面中，本發(fā)明的特征在于包含本發(fā)明描述的抗-GCC抗體分子和治療劑或標(biāo)記的免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的特征還在于使用本發(fā)明描述的抗-GCC抗體分子和免疫偶聯(lián)物用于(例如)檢測(cè)GCC以及表達(dá)GCC的細(xì)胞或組織的方法。所述方法尤其可用于GCC介導(dǎo)疾病的診斷、預(yù)后、成像或分期。因此，在一些方面中，本發(fā)明的特征在于鑒別用GCC標(biāo)靶治療、例如抗-GCC抗體治療、例如包含與治療劑偶聯(lián)的抗-GCC抗體的免疫偶聯(lián)物來(lái)治療的個(gè)體的方法。
【專利說(shuō)明】抗-GCC抗體分子和其用于測(cè)試對(duì)GCC標(biāo)祀治療的易感性的 用途
[0001] 巧關(guān)申請(qǐng)案
[0002] 本申請(qǐng)案主張對(duì)2012年4月27日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/639, 376號(hào)的權(quán) 益和優(yōu)先權(quán)。美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/639, 376號(hào)的全部?jī)?nèi)容是W引用方式并入本文中。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003] 本發(fā)明涉及結(jié)合GCC的抗體分子和使用其選擇用GCC標(biāo)祀治療來(lái)治療的患者的方 法，所述GCC標(biāo)祀治療是（例如）含有偶聯(lián)到諸如治療劑等藥劑的抗-GCC抗體分子或其片 段的免疫偶聯(lián)物。

【背景技術(shù)】
[0004] 鳥巧酸環(huán)化酶C( "GCC")是在維持腸液、電解質(zhì)平衡和細(xì)胞增殖中發(fā)揮功能的 跨膜細(xì)胞表面受體，例如，參見(jiàn)卡里瑟斯（Carrithers)等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc. 化tl.Acad.Sci.USA) 100:3018-3020(2003)。GCC在小腸、大腸和直腸襯里的黏膜細(xì)胞處表 達(dá)（卡里瑟斯等人，結(jié)腸與直腸疾病值isColonRectum) 39:171-181 (1996))。在腸上皮細(xì) 胞發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)化后，維持GCC表達(dá)，且在所有原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸腫瘤中都有表達(dá)（卡 里瑟斯等人，結(jié)腸與直腸疾病39:171-181 (1996);比克炬UC)等人，歐洲癌癥雜志巧urJ Cancer) 41:1618-1627 (200巧；卡里瑟斯等人，胃腸病學(xué)（Gastroenterology) 107:1653-16 61(1994))。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明至少部分地基于新穎的抗-GCC抗體的發(fā)現(xiàn)。因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明 的特征在于如本文所掲示的抗-GCC抗體分子?？?GCC抗體分子可作為裸抗體分子和免疫 偶聯(lián)物的組份來(lái)使用。因此，在另一方面中，本發(fā)明的特征在于包含本文所述抗-GCC抗體 分子和治療劑或標(biāo)記的免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的特征還在于使用本文所述抗-GCC抗體分子 和免疫偶聯(lián)物（例如）檢測(cè)GCC和表達(dá)GCC的細(xì)胞或組織的方法。所述方法尤其可用于GCC 介導(dǎo)疾病的診斷、預(yù)后、成像或分期。因此，在一些方面中，本發(fā)明的特征在于鑒別用GCC標(biāo) 祀治療來(lái)治療的個(gè)體的方法，所述GCC標(biāo)祀治療是（例如）抗-GCC抗體治療，例如，包含與 治療劑偶聯(lián)的抗-GCC抗體的免疫偶聯(lián)物。本發(fā)明的特征還在于確定患有癌癥的個(gè)體是GCC 標(biāo)祀治療（例如，本文所述GCC標(biāo)祀治療）的潛在候選者的活體外或活體內(nèi)方法。
[0006] 抗-GCC抗體（例如，本文所述抗-GCC抗體）還可用于（例如）調(diào)節(jié)GCC蛋白質(zhì) 的活性或功能；和用于治療GCC介導(dǎo)疾病，如本文所述。在一些方面中，治療包括獲得了解 和/或評(píng)估樣品或個(gè)體W測(cè)定GCC表達(dá)水平，并且如果個(gè)體表達(dá)GCC，那么投與GCC標(biāo)祀治 療，例如，本文所述GCC標(biāo)祀治療。在其它方面中，所述方法的特征在于通過(guò)W下方式產(chǎn)生 個(gè)人化治療報(bào)告，例如，GCC標(biāo)祀治療報(bào)告：從個(gè)體獲得樣品并通過(guò)（例如）本文所述檢測(cè) 方法（例如，使用本文所述抗-GCC抗體）測(cè)定GCC表達(dá)水平，并且基于所述測(cè)定，選擇所述 個(gè)體的標(biāo)祀治療報(bào)告。
[0007] 在另一方面中，本發(fā)明的特征還在于編碼抗-GCC抗體分子氨基酸序列的經(jīng)分離 和/或重組核酸，W及包含所述核酸的載體和宿主細(xì)胞，和產(chǎn)生抗-GCC抗體分子的方法。本 文的特征還在于包含本文所述抗-GCC抗體（例如，免疫偶聯(lián)物）的反應(yīng)混合物和試劑盒， W及（例如）包含本文所述抗-GCC抗體W檢測(cè)GCC表達(dá)的活體外分析。
[0008] 本文所提到的所有出版物、專利申請(qǐng)案、專利和其它參考文獻(xiàn)都是全文W引用方 式并入本文中。
[0009] 根據(jù)說(shuō)明書和圖式W及權(quán)利要求書將明了本文所掲示本發(fā)明的其它特征、目的和 優(yōu)點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010] 圖1是用于產(chǎn)生本發(fā)明的人類GCC化GCC)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域巧CD)小鼠化(mFc)融合 蛋白化GCC-ECD-mFc)的蛋白質(zhì)表達(dá)載體的環(huán)狀圖。
[0011] 圖2A-2D繪示匯總來(lái)自經(jīng)篩選招募到C26001研究（GCC標(biāo)祀免疫偶聯(lián)物的I期臨 床試驗(yàn)）中的癌癥患者的多種腫瘤類型的GCC表達(dá)的經(jīng)組合/合計(jì)（頂端和細(xì)胞質(zhì)）H評(píng) 分分布的條形圖。圖2A繪示所篩選結(jié)腸直腸癌患者的經(jīng)組合合計(jì)H評(píng)分分布；圖2B繪示 所篩選胃癌患者的經(jīng)組合合計(jì)H評(píng)分分布；圖2C繪示所篩選膜臟癌患者的經(jīng)組合合計(jì)H評(píng) 分分布；圖2D繪示所篩選食道癌患者的經(jīng)組合合計(jì)H評(píng)分分布。
[001引圖3A-3C繪示匯總所篩選各個(gè)腫瘤特異性微陣列的GCC表達(dá)的經(jīng)組合/合計(jì)（頂 端和細(xì)胞質(zhì)）H評(píng)分分布的條形圖。圖3A繪示針對(duì)GCC表達(dá)進(jìn)行篩選的各個(gè)結(jié)腸直腸腫瘤 微陣列上的樣品的經(jīng)組合/合計(jì)H評(píng)分分布；圖3B繪示針對(duì)GCC表達(dá)進(jìn)行篩選的胃腫瘤微 陣列上的樣品的經(jīng)組合/合計(jì)H評(píng)分分布；圖3C繪示針對(duì)GCC表達(dá)進(jìn)行篩選的各個(gè)膜臟腫 瘤微陣列上的樣品的經(jīng)組合/合計(jì)H評(píng)分分布。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 鳥巧酸環(huán)化酶"GCC)(還稱為STAR、ST受體、GUC2C和GUCY2C)是在維持腸液、 電解質(zhì)平衡和細(xì)胞增殖中發(fā)揮功能的跨膜細(xì)胞表面受體（卡里瑟斯等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué) 院院刊100:3018-3020(2003);曼恩（Mann)等人，生物化學(xué)與生物物理學(xué)通訊炬iochem Bio地ysResCommun) 239:463-466 (1997);培培利（Pitar;L)等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊 100:2695-2699(2003));基因庫(kù)佑enBank)登錄號(hào)NM_004963,其各自是全文W引用方式并 入本文中）。該個(gè)功能是經(jīng)由鳥巧蛋白的結(jié)合來(lái)介導(dǎo)（威甘德（Wiegand)等人，歐洲生物化 學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)快報(bào)（陽(yáng)BSLett. )311:150-154 (1992))。GCC還是熱穩(wěn)定性腸毒素（ST，例 如具有氨基酸序列NTFYCCELCCNPACAGCY，SEQIDN0:1)的受體，所述腸毒素是由大腸桿菌 巧.coli)W及其它傳染性生物體產(chǎn)生的膚（拉奧，M.C. (Rao,M.C.)汽己基金座談會(huì)（Ciba Found.Symp.) 112:74-93 (1985);努普F.C.(KnoopF.C.)和歐文斯，M. (Owens,M.)藥理和 毒理方法雜志（J.Wiarmacol.Toxicol.Methods) 28:67-72 (1992))。ST對(duì)GCC的結(jié)合活化 引起腸?。ɡ?，腹瀉）的信號(hào)級(jí)聯(lián)。
[0014] 人類GCC的核巧酸序列（基因庫(kù)登錄號(hào)NM_004963;SEQIDN0:2);
[0015] Igaccagagagaagcgtggggaagagtgggctgagggactccactagaggctgtccatctg

【權(quán)利要求】
1. 一種抗-GCC抗體分子，其包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶Rl XDR2和⑶R3)，其分別包 含氨基酸序列SEQ ID NO :21、22和23或分別包含SEQ ID NO :33、34和35 ;和三個(gè)輕鏈互 補(bǔ)決定區(qū)（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO : 27、28和29或分別包 含 SEQ ID NO :39、40 和 41。
2. -種抗-GCC抗體分子，其與包含以下的抗-GCC抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到相同表位或結(jié)合到 所述表位：三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO : 21、22和23 ;和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO :27、28 和 29。
3. -種抗-GCC抗體分子，其與包含以下的抗-GCC抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到相同表位或結(jié)合到 所述表位：三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO : 33、34和35 ;和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶Rl、⑶R2和⑶R3)，其分別包含氨基酸序列SEQ ID NO :39、40 和 41。
4. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子是單克隆抗體。
5. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子是兔或兔源抗體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗體是兔單克隆抗體。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗-GCC抗體分子，其進(jìn)一步包含包含根據(jù)SEQ ID NO: 11或 SEQ ID NO : 15的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含根據(jù)SEQ ID NO : 13或SEQ ID NO : 17的 氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗-GCC抗體分子，其中所述重鏈⑶R1XDR2和⑶R3分別包 含根據(jù)SEQ ID NO :21、22和23的氨基酸序列，并且所述輕鏈CDR分別包含根據(jù)SEQ ID NO: 27、28和29的氨基酸序列。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗-GCC抗體分子，其中所述重鏈可變區(qū)包含根據(jù)SEQ ID NO: 11的氨基酸序列且所述輕鏈可變區(qū)包含根據(jù)SEQ ID NO : 13的氨基酸序列。
10. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體分子，其中所述抗-GCC抗體 分子偶聯(lián)到可檢測(cè)標(biāo)記。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記選自由以下組成的 群組：辣根過(guò)氧化物酶HRP ;堿性磷酸酶；半乳糖苷酶；葡萄糖淀粉酶；溶菌酶；糖氧化酶， 例如，葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖6-磷酸脫氫酶；雜環(huán)氧化酶，例如尿酸酶和黃 嘌呤氧化酶，其與諸如HRP、乳過(guò)氧化物酶或微過(guò)氧化物酶等采用過(guò)氧化氫來(lái)氧化染料前體 的酶偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋標(biāo)記；噬菌體標(biāo)記；和穩(wěn)定自由基。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是選自以下的熒光 團(tuán)：熒光黃或其衍生物、玫瑰紅或其衍生物、丹磺?；阈瓮?、熒光素酶、熒光素和2, 3-二 氫酞嗪二酮。
13. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的抗-GCC抗體分子，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是選自由以下組成 的群組的放射性試劑：32P、 3H、14C、188Rh、43K、52Fe、 57Co、67Cu、67Ga、68Ga、77Br、 81 RV81MKr、87MSr、 99Tc、mIn、 113M In、123I、125I、127Cs、129Cs、 131I、132I、197Hg、2〇3Pb 和 2tl6Bi 和 213Bi。
14. 一種經(jīng)分離核酸序列，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1、7、8和9中任一權(quán)利要求所述的抗體 分子。
15. -種細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求14所述的經(jīng)分離核酸序列。
16. -種產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1、7、8或9所述的抗體分子的方法，其包含在容許產(chǎn)生抗體 分子的條件下培養(yǎng)根據(jù)權(quán)利要求15所述的細(xì)胞，由此產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1、7、8或9所述的 抗體分子。
17. -種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求1、7、8或9所述的抗體分子的輕鏈和重鏈中的一者 或二者。
18. -種檢測(cè)生物樣品中的GCC分子的方法，其包含使所述生物樣品與根據(jù)權(quán)利要求1 到13中任一權(quán)利要求所述的抗體分子接觸和測(cè)定所述抗體分子是否結(jié)合到所述GCC分子。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述方法檢測(cè)方法包含免疫組織化學(xué)分析。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述生物樣品是源自懷疑患有表達(dá)GCC的 癌癥的患者的腫瘤生檢。
21. 根據(jù)權(quán)利要求18到20中任一權(quán)利要求所述的方法，其進(jìn)一步包含對(duì)所述生物樣品 中的GCC表達(dá)進(jìn)行定量的步驟。
22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中對(duì)GCC表達(dá)的所述定量包含所述生物樣品中的 頂端GCC表達(dá)、所述生物樣品中的細(xì)胞質(zhì)GCC表達(dá)或二者。
23. 根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的方法，其中所述定量步驟包含H-評(píng)分方法。
24. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述表達(dá)GCC的癌癥選自由以下組成的群組： 結(jié)腸直腸癌、胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)外胚層腫瘤和神經(jīng)內(nèi)分 泌腫瘤。
25. 根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細(xì)胞癌或腺癌。
25. 根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
26. 根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經(jīng)內(nèi) 分泌腫瘤。
27. -種試劑盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1到13中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體分子 和使用說(shuō)明書。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的試劑盒，其進(jìn)一步包含GCC標(biāo)靶治療劑。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述GCC標(biāo)靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
31. 根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類 IgGl抗體。
32. 根據(jù)權(quán)利要求29、30或31所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子包含三 個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDR1、CDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :67、68和69的氨基 酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶RU⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71 和72的氨基酸序列。
33. 根據(jù)權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子包含包含SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO :80的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
34. 根據(jù)權(quán)利要求29到33所述的試劑盒，其中所述治療性抗-GCC抗體分子偶聯(lián)到細(xì) 胞毒性劑。
35. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞毒性劑是奧里斯他汀分子。
36. 根據(jù)權(quán)利要求35所述的試劑盒，其中所述奧里斯他汀分子是單甲基奧里斯他汀E MMAE或單甲基奧里斯他汀F MMAF。
37. 根據(jù)權(quán)利要求34到36所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞毒性劑經(jīng)由含有馬來(lái)酰亞胺部 分的連接體偶聯(lián)到所述抗體。
38. 根據(jù)權(quán)利要求37所述的試劑盒，其中所述馬來(lái)酰亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來(lái)酰亞胺基己酰基（me)、馬來(lái)酰亞胺基己?；?L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對(duì)-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來(lái)酰亞胺基己酰基-L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對(duì)-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
39. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述GCC標(biāo)靶治療劑是特征在于式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶聯(lián)物：
其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶Rl、 ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決 定區(qū)（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整數(shù)。
40. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的試劑盒，其中m是3到5。
41. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的試劑盒，其中m是約4。
42. -種治療患有特征在于一或多個(gè)表達(dá)GCC的細(xì)胞的疾病的患者的方法，其包含： a. 通過(guò)例如根據(jù)權(quán)利要求18到26中任一權(quán)利要求所述的方法檢測(cè)從所述患者獲得的 生物樣品中的GCC蛋白質(zhì)表達(dá)；和 b. 如果所述生物樣品表達(dá)GCC，那么將GCC標(biāo)靶治療劑、例如本文所述的GCC標(biāo)靶治療 劑投與所述患者。
43. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述檢測(cè)步驟包含以下步驟： i) 使所述生物樣品與本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據(jù)權(quán)利要求1到13中任一 權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體分子、例如包含以下的抗-GCC抗體分子接觸：三個(gè)重鏈互補(bǔ)決 定區(qū)（CDR1、CDR2 和 CDR3)，其分別包含根據(jù) SEQ ID N0:21、22 和 23 或 SEQ ID N0:33、34 和35的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :27、28和29或SEQ ID NO :39、40和41的氨基酸序列；和 ii) 檢測(cè)所述抗-GCC抗體分子與GCC蛋白質(zhì)之間的復(fù)合物的形成。
44. 根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述檢測(cè)步驟是經(jīng)由免疫組織化學(xué)來(lái)執(zhí)行。
45. 根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，其中所述GCC標(biāo)靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
46. 根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
47. 根據(jù)權(quán)利要求45或46所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類IgGl 抗體。
48. 根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū) (CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈 互補(bǔ)決定區(qū)（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列。
49. 根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子進(jìn)一步包含包含根據(jù)SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含根據(jù)SEQ ID NO :80的氨基酸序列的輕鏈可變 區(qū)。
50. 根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子偶聯(lián)到細(xì)胞毒性劑。
51. 根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑是奧里斯他汀分子。
52. 根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述奧里斯他汀分子是單甲基奧里斯他汀E MMAE或單甲基奧里斯他汀F MMAF。
53. 根據(jù)權(quán)利要求50到53所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑是經(jīng)由含有馬來(lái)酰亞胺部 分的連接體偶聯(lián)。
54. 根據(jù)權(quán)利要求53所述的方法，其中所述馬來(lái)酰亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來(lái)酰亞胺基己酰基（me)、馬來(lái)酰亞胺基己酰基-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對(duì)-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來(lái)酰亞胺基己?；?L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對(duì)-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
55. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述GCC標(biāo)靶治療是特征在于式（1-4)、（1-5) 或（1-6)中任一者的免疫偶聯(lián)物：

其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決 定區(qū)（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整數(shù)。
56. 根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中m是約3到約5。
57. 根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中m是約4。
58. 根據(jù)權(quán)利要求42到57中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述特征在于一或多個(gè)表 達(dá)GCC的細(xì)胞的疾病選自由以下組成的群組：癌癥、炎癥性腸綜合癥、克隆氏病或帕金森氏 病。
59. 根據(jù)權(quán)利要求58所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的群組：結(jié)腸直腸癌、 胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)外胚層腫瘤和神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
60. 根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細(xì)胞癌或腺癌。
61. 根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
62. 根據(jù)權(quán)利要求59所述的方法，其中所述神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經(jīng)內(nèi) 分泌腫瘤。
63. 根據(jù)權(quán)利要求42到62所述的方法，其中所述生物樣品是細(xì)胞或組織生檢。
64. 根據(jù)權(quán)利要求63所述的方法，其中所述細(xì)胞或組織生檢是腫瘤生檢。
65. -種測(cè)定癌細(xì)胞對(duì)GCC標(biāo)靶治療劑的敏感性和/或評(píng)估個(gè)體是否是GCC標(biāo)靶治療 的潛在候選者的方法，所述方法包含以下步驟： i) 提供來(lái)自患有癌癥的患者的癌細(xì)胞樣品； ii) 使所述樣品與本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據(jù)權(quán)利要求1到13中任一權(quán)利 要求所述的抗-GCC抗體、例如包含以下的抗-GCC抗體接觸：三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R1、 CDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的氨基 酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID N0:27、28 和29或SEQ ID NO :39、40和41的氨基酸序列；和 iiii)檢測(cè)所述抗-GCC抗體分子與GCC蛋白質(zhì)之間的復(fù)合物的形成，由此測(cè)定所述癌 癥對(duì)所述GCC標(biāo)靶治療劑、例如本文所述的GC標(biāo)靶治療劑的敏感性，和/或測(cè)定個(gè)體是否 是用GCC標(biāo)靶治療、例如本文所述的GCC標(biāo)靶治療來(lái)治療的候選者。
66. 根據(jù)權(quán)利要求65所述的方法，其中所述檢測(cè)步驟是經(jīng)由免疫組織化學(xué)來(lái)執(zhí)行。
67. 根據(jù)權(quán)利要求65或66所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的群組：結(jié)腸 直腸癌、胃癌、小腸癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)外胚層腫瘤和神經(jīng)內(nèi)分泌腫 瘤。
68. 根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述肺癌是鱗狀細(xì)胞癌或腺癌。
69. 根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
70. 根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中所述神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺神經(jīng)內(nèi) 分泌腫瘤。
71. 根據(jù)權(quán)利要求65到70中任一權(quán)利要求所述的方法，其進(jìn)一步包含向所述患者投與 所述GCC標(biāo)靶治療劑、例如本文所述的GCC標(biāo)靶治療劑的步驟。
72. 根據(jù)權(quán)利要求71所述的方法，其中所述GCC標(biāo)靶治療劑包含抗-GCC抗體分子。
73. 根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是單克隆抗體。
74. 根據(jù)權(quán)利要求72或73所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子是人類IgGl 抗體。
75. 根據(jù)權(quán)利要求72、73或74中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗 體分子包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R1、⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO:67、68 和69的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶RU OTR2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71和72的氣基酸序列。
76. 根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述治療性抗-GCC抗體分子進(jìn)一步包含包含根 據(jù)SEQ ID NO :79的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含根據(jù)SEQ ID NO :80的氨基酸序列的輕 鏈可變區(qū)。
77. 根據(jù)權(quán)利要求72到76中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述抗-GCC抗體分子偶 聯(lián)到細(xì)胞毒性劑。
78. 根據(jù)權(quán)利要求77所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑是奧里斯他汀分子。
79. 根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中所述奧里斯他汀分子是單甲基奧里斯他汀 EMMAE或單甲基奧里斯他汀F MMAF。
80. 根據(jù)權(quán)利要求77、78或79中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑是經(jīng) 由含有馬來(lái)酰亞胺部分的連接體偶聯(lián)。
81. 根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中所述馬來(lái)酰亞胺連接體選自由以下組成的群 組：馬來(lái)酰亞胺基己?；╩e)、馬來(lái)酰亞胺基己?；?L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-對(duì)-氨基 苯甲基氨基甲酸酯和馬來(lái)酰亞胺基己酰基-L-纈氨酸-L-瓜氨酸-對(duì)-氨基苯甲基氨基甲 酸酯（vc)。
82. 根據(jù)權(quán)利要求65到71所述的方法，其中所述GCC標(biāo)靶治療劑是特征在于式（1-4)、 (1-5)或（1-6)中任一者的免疫偶聯(lián)物：
其中Ab是抗-GCC抗體分子，所述抗-GCC抗體分子包含三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶RU ⑶R2和⑶R3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :67、68和69的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決 定區(qū)（CDRUCDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :70、71和72的氨基酸序列，并且其 中m是1到8的整數(shù)。
83. 根據(jù)權(quán)利要求82所述的方法，其中m是約3到約5。
84. 根據(jù)權(quán)利要求83所述的方法，其中m是約4。
85. -種反應(yīng)混合物，其包含生物樣品和本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據(jù)權(quán)利 要求1到13中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC抗體、例如包含以下的抗-GCC抗體分子：三個(gè) 重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDR1、CDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO : 33、34和35的氨基酸序列；和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含 根據(jù)SEQ ID NO : 27、28和29或SEQ ID NO : 39、40和41的氨基酸序列。
86. 根據(jù)權(quán)利要求85所述的反應(yīng)混合物，其中所述生物樣品包含一或多個(gè)細(xì)胞。
87. 根據(jù)權(quán)利要求85所述的反應(yīng)混合物，其中所述生物樣品包含組織樣品。
88. 根據(jù)權(quán)利要求87所述的反應(yīng)混合物，其中所述組織樣品是經(jīng)石蠟包埋的組織樣 品。
89. 根據(jù)權(quán)利要求85所述的反應(yīng)混合物，其中所述生物樣品是原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤生 檢樣品。
90. 根據(jù)權(quán)利要求85所述的反應(yīng)混合物，其中所述生物樣品安裝在載玻片上。
91. 根據(jù)權(quán)利要求89所述的反應(yīng)混合物，其中所述腫瘤是結(jié)腸直腸腫瘤、胃腫瘤、小腸 腫瘤、食道腫瘤、胰臟腫瘤、肺腫瘤、軟組織肉瘤、神經(jīng)外胚層腫瘤或神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
92. 根據(jù)權(quán)利要求91所述的反應(yīng)混合物，其中所述肺腫瘤是鱗狀細(xì)胞癌或腺癌。
93. 根據(jù)權(quán)利要求91所述的反應(yīng)混合物，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌 肉瘤。
94. 根據(jù)權(quán)利要求91所述的反應(yīng)混合物，其中所述神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胃腸或支氣管肺 神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
95. 根據(jù)權(quán)利要求85所述的反應(yīng)混合物，其中懷疑所述生物樣品含有GCC蛋白質(zhì)。
96. 根據(jù)權(quán)利要求85到95中任一權(quán)利要求所述的反應(yīng)混合物，其進(jìn)一步包含適于檢測(cè) 所述抗-GCC抗體與GCC蛋白質(zhì)之間的復(fù)合物的形成的試劑。
97. -種產(chǎn)生個(gè)人化癌癥治療報(bào)告的方法，所述方法包含以下步驟： 使從懷疑患有表達(dá)GCC的癌癥的癌癥患者獲得的包含一或多個(gè)癌細(xì)胞的生物樣品與 本文所述的抗-GCC抗體分子、例如根據(jù)權(quán)利要求1到13中任一權(quán)利要求所述的抗-GCC 抗體分子、例如包含以下的抗-GCC抗體分子接觸：三個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R1、⑶R2和 CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO :21、22和23或SEQ ID NO :33、34和35的氨基酸序列； 和三個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)（CDRl、CDR2和CDR3)，其分別包含根據(jù)SEQ ID NO : 27、28和29或 SEQ ID NO :39、40和41的氣基酸序列； 通過(guò)例如根據(jù)權(quán)利要求18到26中任一權(quán)利要求所述的方法檢測(cè)所述生物樣品中所述 抗-GCC分子與GCC蛋白質(zhì)之間的復(fù)合物的形成； 對(duì)所述生物樣品中的GCC表達(dá)進(jìn)行定量； 將所述GCC表達(dá)水平與包含GCC標(biāo)靶治療、例如本文所述的GCC標(biāo)靶治療的數(shù)據(jù)庫(kù)比 較；和 基于所述GCC表達(dá)水平選擇GCC標(biāo)靶治療和任選地給藥方案。
98. 根據(jù)權(quán)利要求97所述的方法，其中所述表達(dá)GCC的癌癥是結(jié)腸直腸癌、胃癌、小腸 癌、食道癌、胰臟癌、肺癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)外胚層腫瘤或神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
99. 根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中所述肺腫瘤是鱗狀細(xì)胞癌或腺癌。
100. 根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其中所述軟組織肉瘤是平滑肌肉瘤或橫紋肌肉瘤。
101. 根據(jù)權(quán)利要求98所述的反應(yīng)混合物，其中所述神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是胃腸或支氣管 肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。
102. 根據(jù)權(quán)利要求97到101中任一權(quán)利要求所述的方法，其中所述檢測(cè)步驟是經(jīng)由免 疫組織化學(xué)來(lái)執(zhí)行。
103. 根據(jù)權(quán)利要求97到102中任一權(quán)利要求所述的方法，其中對(duì)GCC表達(dá)的所述定量 包含所述生物樣品中的頂端GCC表達(dá)、所述生物樣品中的細(xì)胞質(zhì)GCC表達(dá)或_者。
104. 根據(jù)權(quán)利要求97到103所述的方法，其中所述定量步驟包含H-評(píng)分方法。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK104395470SQ201380033309
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2013年4月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月27日
【發(fā)明者】海倫·艾利森·弗蘭克, 艾麗斯·A·麥克唐納, 特雷莎·L·奧基夫 申請(qǐng)人:米倫紐姆醫(yī)藥公司