專利名稱：納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)和制備方法及應(yīng)用的制作方法
納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)和制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料和納米技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種用于細(xì)胞內(nèi)傳遞 抗癌藥物的傳遞系統(tǒng)(納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng))的制備方法。
背景技術(shù)：
當(dāng)前，惡性腫瘤已經(jīng)成為造成人類死亡的第二大疾病。臨床以手術(shù)切除、聯(lián) 合化療、免疫治療和放療等為主要治療手段，其中放療和化療的單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用顯著提高 了惡性腫瘤的治療效果。
大多數(shù)的放化療藥物，在有效殺傷腫瘤細(xì)胞的同時也會破壞正常的組織細(xì)胞。為了提 高藥物的靶向性和降低藥物的毒性，聚合物膠束作為藥物載體引起了人們廣泛的興趣，聚 合物膠束載藥范圍廣、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、具有優(yōu)良的組織滲透性、體內(nèi)滯留時間長，能使藥物有 效地到達(dá)靶點(diǎn)，而且粒徑較小，具有納米材料的特性，是一種很有潛力的藥物載體。相比 而言，小分子表面活性劑形成膠束的熱動力學(xué)穩(wěn)定性不如聚合物膠束，因而其使用受到限 制。近年來，兩親性聚合物膠束體系在藥物傳遞方面的應(yīng)用己有廣泛的研究。這些聚合物 膠束一般由均聚物或共聚物組成。聚合物的分子量較大，在體內(nèi)必須先經(jīng)過逐步的降解過 程才能代謝，而有些聚合物的降解產(chǎn)物會對人體產(chǎn)生新的毒副作用。
樹枝狀聚合物(Dendrimer)是當(dāng)前正在蓬勃發(fā)展的一類三維、高度有序的新型合成 聚合物。它在結(jié)構(gòu)上具有高度的幾何對稱性、精確的分子結(jié)構(gòu)、大量的表面官能團(tuán)、分子 內(nèi)存在空腔以及分子鏈增長具有可控性等特點(diǎn)。與傳統(tǒng)聚合物相比樹枝狀聚合物單分散 性好，分子尺寸和表面化學(xué)都可以在合成過程中得到完全控制。藥物分子結(jié)合至聚合物內(nèi) 部的空腔或聚合物表面后可以通過擴(kuò)散作用和降解作用實(shí)現(xiàn)對藥物分子的控制釋放。因 此，樹枝狀聚合物是一種非常有潛力的藥物載體，目前國內(nèi)外很多研究小組都在開展這方 面的研究工作。
聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物(polyamidoamine,PAMAM)是研究較為廣泛和成熟的一 種樹枝狀聚合物，現(xiàn)在已經(jīng)有商品化的產(chǎn)品。在應(yīng)用于藥物載體時多采用6代以上的聚合 物，這類聚合物末端基團(tuán)數(shù)多，載藥量高。但是高代聚合物制備繁瑣、毒性相對較大且價(jià) 格昂貴(6代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的價(jià)格大約是1代的6.6倍)。低代數(shù)的PAMAM 分子量較低，容易被人體代謝，毒性很小。但在單獨(dú)作為藥物載體時存在著分子量低、分 子尺寸小的缺點(diǎn)，限制了低代數(shù)PAMAM自身作為藥物載體的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是解決低代樹枝狀聚合物不能作為藥物載體單獨(dú)使用的問題。 提供一種納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)和制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明提供的用于細(xì)胞內(nèi)傳遞抗癌藥物的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)，包括納米聚 合物膠束載體和包封于其中的抗癌藥物，其中所述的納米聚合物膠束載體是由如下(a)和(b) 兩部分組成的(a)樹枝狀大分子，其中所述的樹枝狀大分子是聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物， 和(b)連接在樹枝狀大分子上的生物分子配基，其中所述的生物分子配基是膽酸、膽固醇、 色氨酸、苯丙氨酸。
所述的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物是1-5代(優(yōu)選l-3代)的聚酰胺一胺型樹枝狀聚 合物。
生物分子配基與聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的摩爾比是l: l一8: 1。 一種上述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法，經(jīng)過以下步驟 第一、聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的制備
以乙二胺為核，與丙烯酸甲酯進(jìn)行Michael加成反應(yīng)，得加成產(chǎn)物；之后再與乙二胺
經(jīng)酰胺化反應(yīng)制得酰胺化產(chǎn)物。具體過程是
將丙烯酸甲酯加到乙二胺的甲醇溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到-0.5代聚酰胺一 胺型樹枝狀聚合物；將上述-0.5代產(chǎn)物加到乙二胺的甲醇溶液中，反應(yīng)60小時。純化后 得到0代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
重復(fù)以上步驟，可得到1_5代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
其中，加料溫度為0。C，反應(yīng)溫度為20-25。C，加成產(chǎn)物與乙二胺的摩爾比為1: 18，
酰胺化產(chǎn)物與丙烯酸甲酯的摩爾比為1: 2;
第二、生物分子修飾聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的制備
在膽酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環(huán)已基碳二亞胺，反應(yīng)24小時，提純 后得膽酸活化酯。將膽酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液 中，反應(yīng)24小時，純化后得到膽酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物；
或者，
在色氨酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環(huán)已基碳二亞胺，反應(yīng)24小時，提 純后得色氨酸活化酯。將色氨酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物 溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到色氨酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物；
或者，
在苯丙氨酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環(huán)己基碳二亞胺，反應(yīng)24小時，
提純后得苯丙氨酸活化酯。將苯丙氨酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀 聚合物溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到苯丙氨酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合 物；
或者，
將氯甲酸膽固醇酯加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液中，反應(yīng)24小 時，純化后得到膽固醇修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物； 第三、納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)的制備
將抗癌藥物加入到上步制得的生物分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液中，得 到納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)。
一種上述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)在細(xì)胞內(nèi)傳遞抗癌藥物的應(yīng)用
將以上所述的包封有抗癌藥物的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)與細(xì)胞接觸以使所述 抗癌藥物傳遞至所述細(xì)胞中。
所述的抗癌藥物是氨甲蝶呤、喜樹堿。
所述的細(xì)胞是3T3、 HepG2和Hela。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果
本發(fā)明采用低代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物，通過對其進(jìn)行簡單的表面修飾，可得到
粒徑100nm左右的聚合物膠束。實(shí)驗(yàn)證明此膠束對抗癌藥物具有很好的細(xì)胞投遞作用。 本發(fā)明避免了制備高代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物所需的大量合成及后續(xù)純化工作，該藥 物傳遞系統(tǒng)制備簡單，在生物體內(nèi)的毒副作用小。可用于癌癥的治療。 本發(fā)明同已有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)
1. 本發(fā)明所制備的藥物載體可提高對抗癌藥物的細(xì)胞傳遞能力；
2. 本發(fā)明所制備的聚合物膠束沒有有機(jī)溶劑；
3. 本發(fā)明所制備的藥物載體毒性小，降解產(chǎn)物無毒；
4. 本發(fā)明所制備的藥物載體制備簡單，成本低廉，易于推廣應(yīng)用。


圖1為本發(fā)明膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物形成的膠束的透射電鏡圖； 圖2為本發(fā)明膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物膠束的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所用 細(xì)胞為3T3細(xì)胞；
圖3為本發(fā)明膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物膠束對氨甲蝶呤在細(xì)胞內(nèi)的傳遞
效果，所用細(xì)胞為HepG2細(xì)胞；
圖4為本發(fā)明膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物膠束對喜樹堿在細(xì)胞內(nèi)的傳遞效 果，所用細(xì)胞為Hela細(xì)胞。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1.
第一、108ml丙烯酸甲酯與9.8ml的乙二胺在甲醇中反應(yīng)24小時。減壓蒸餾除去溶劑 和剩余的原料，得到-0.5代聚酰胺_胺型樹枝狀聚合物。之后再在甲醇中與大過量的乙二 胺反應(yīng)，減壓蒸餾除去溶劑和剩余的原料，得到O代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。重復(fù)以 上操作，可以獲得1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
第二、將lgN-羥基琥珀酰亞胺、1.5gDCC、 3g膽酸加入到由100ml四氫呋喃和15ml 乙腈組成的溶液中，室溫反應(yīng)24小時。將反應(yīng)混合物過濾除去二環(huán)已基脲，依次用飽和 碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液、水洗滌，真空干燥后用硅膠層析柱提純，得活化酯。
將0.30g活化酯加入到含0.43g 1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的DMF溶液中。室溫 反應(yīng)24小時。將反應(yīng)液倒入30ml蒸餾水中，得到白色乳濁液，向其中加入4%的氫氧化 鈉溶液，析出固體。把固體用蒸餾水洗至中性，再用四氫呋喃洗滌。用30ml甲醇溶解固 體，加入無水硫酸鎂干燥24小時，旋干溶液，得到O.llg膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝 狀聚合物。
實(shí)施例2.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物和活化酯。
將0.45g活化酯加入到含0.33g 1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的無水甲醇溶液中。 室溫下反應(yīng)24小時。然后將反應(yīng)液旋干，再用水、堿液、四氫呋喃洗滌。得膽酸修飾的 聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物白色固體0.47g。
實(shí)施例3.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物和活化酯。
將0.37g活化酯加入到含0.53g 1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的無水甲醇溶液中。 室溫下反應(yīng)48小時。然后將反應(yīng)液放入透析袋中透析純化。蒸餾除去溶劑后，得到0.73g 膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
實(shí)施例4.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物和活化酯。將0.45g活化酯加入到含0.33g l代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的無水甲醇溶液中。 室溫下反應(yīng)48小時。然后將反應(yīng)液放入透析袋中透析純化。蒸餾除去溶劑后，得到0.68g 膽酸修飾的聚酰胺_胺型樹枝狀聚合物。
實(shí)施例5.
同實(shí)施例1合成3代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物和活化酯。
將0.22g活化酯加入到含0.38g 3代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的無水甲醇溶液中。 室溫反應(yīng)48小時后透析純化、干燥，得到白色固體0.56g膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝 狀聚合物。
實(shí)施例6.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
將0.07g N-羥基琥珀酰亞胺和0.13g DCC加入到含0.10g苯丙氨酸的DMF溶液中， 室溫?cái)嚢?小時。將上述溶液加入到含0.43g 1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的DMF溶液 中。室溫下反應(yīng)72小時。加入乙醚，離心，沉淀物透析純化，干燥后得到苯丙氨酸修飾 的聚酰胺 一 胺型樹枝狀聚合物。
實(shí)施例7.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
將0.07gN-羥基琥珀酰亞胺和0.13gDCC加入到含0.123g色氨酸的DMF溶液中，室 溫?cái)嚢?小時。將上述溶液加入到含0.43g 1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的DMF溶液中。 室溫下反應(yīng)72小時。加入乙醚，離心，沉淀物透析純化，干燥后得到色氨酸修飾的聚酰 胺一胺型樹枝狀聚合物。
實(shí)施例8.
同實(shí)施例1合成1代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。
將0.27g氯甲酸膽固醇酯加入到含O.lml三乙胺和0.43g 1代聚酰胺—胺型樹枝狀聚合 物的DMF溶液中。室溫下反應(yīng)24小時。加入乙醚，離心，沉淀物透析純化，干燥后得到 膽固醇修飾的聚酰胺 一 胺型樹枝狀聚合物。
實(shí)施例9.
同實(shí)施例3合成膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。配制濃度為0.5mg/ml的膽 酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的Tris-HCl (15mM， pH=7.4)溶液，室溫振蕩，得 到聚合物膠束。
實(shí)施例10.
同實(shí)施例4合成膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。配制濃度為0.5mg/ml的膽 酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的Tris-HCl (15mM， pH=7.4)溶液，65。C水浴振蕩 3h，得到聚合物膠束。膠束的粒徑約為100nm。結(jié)果見附圖1。
實(shí)施例11.
同實(shí)施例10配置不同濃度的膽酸修飾的聚酰胺—胺型樹枝狀聚合物膠束溶液。過濾 除菌。25mg噻唑蘭(MTT)溶于5mlPBS中，過濾除菌，制成MTT溶液。
將3T3細(xì)胞種到96孔板中，每孔100iil，約104個細(xì)胞，培養(yǎng)24h,然后加入上面所 配置的不同濃度的膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物膠束溶液100)^1，每組三個孔， 繼續(xù)培養(yǎng)24h。
每孔加入l(Hd MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，最后吸出孔中的液體，用PBS洗幾次，加 入150nl的DMSO，避光震蕩10min。酶標(biāo)儀檢測，測得聚合物膠束的體外毒性在lOO^g/ml 及其以下時沒有毒性，結(jié)果見附圖2。
實(shí)施例12.
同實(shí)施例4合成膽酸修飾的聚酰胺—胺型樹枝狀聚合物。用DMEM培養(yǎng)基配制溶液， 其中膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物濃度為100pg/ml，氨甲蝶呤的濃度為5(Hig/ml。
將HepG2細(xì)胞種到96孔板中，每孔IOOW，約104個細(xì)胞，培養(yǎng)24h，然后加入上述 溶液100nl，每組三個孔，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
每孔加入10pl MTT溶液，培養(yǎng)4h，用PBS洗滌后加入150^1的DMSO，避光震蕩 10min。酶標(biāo)儀檢測，測得聚合物膠束對氨甲蝶呤的細(xì)胞傳遞效果可使氨甲蝶呤的藥效 提高約24.7%。結(jié)果見附圖3。
實(shí)施例13.
同實(shí)施例4合成膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物。用DMEM培養(yǎng)基配制溶液， 其中膽酸修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物濃度為100pg/ml，喜樹堿的濃度為8pg/ml。
將Hela細(xì)胞種到96孔板中，每孔100^1，約104個細(xì)胞，培養(yǎng)24h，然后加入上述溶 液100pl，每組三個孔，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
每孔加入lOpl MTT溶液，培養(yǎng)4h，用PBS洗滌后加入150|al的DMSO,避光震蕩 10min。酶標(biāo)儀檢測，測得聚合物膠束對喜樹堿的細(xì)胞傳遞效果使喜樹堿的藥效提高36.3 %。結(jié)果見附圖4。
權(quán)利要求
1、一種用于細(xì)胞內(nèi)傳遞抗癌藥物的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)，其特征在于包括納米聚合物膠束載體和包封于其中的抗癌藥物，其中所述的納米聚合物膠束載體是由如下(a)和(b)兩部分組成的(a)樹枝狀大分子，其中所述的樹枝狀大分子是聚酰胺-胺型樹枝狀聚合物，和(b)連接在樹枝狀大分子上的生物分子配基，其中所述的生物分子配基是膽酸、膽固醇、色氨酸、或苯丙氨酸。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)，其特征在于生物分子配基與聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的摩爾比是l: l一8: 1。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)，其特征在于聚酰胺一胺型 樹枝狀聚合物為l-5代產(chǎn)物。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)，其特征在于聚酰胺一胺型 樹枝狀聚合物優(yōu)選為1-3代產(chǎn)物。
5、 一種權(quán)利要求1所述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)的制備方法，其特征在于該方法經(jīng)過以下步驟第一、聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的制備以乙二胺為核，與丙烯酸甲酯進(jìn)行Michael加成反應(yīng)，得加成產(chǎn)物；之后再與乙二胺經(jīng)酰胺化反應(yīng)，得酰胺化產(chǎn)物，具體過程是將丙烯酸甲酯加到乙二胺的甲醇溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到-0.5代聚酰胺一 胺型樹枝狀聚合物；將上述-0.5代產(chǎn)物加到乙二胺的甲醇溶液中，反應(yīng)60小時，純化后 得到0代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物；重復(fù)以上步驟，可得到l一5代聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物其中，加料溫度為0°C， 反應(yīng)溫度為20-25°C，加成產(chǎn)物與乙二胺的摩爾比為1: 18，酰胺化產(chǎn)物與丙烯酸甲酯的摩爾比為1: 2;第二、生物分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物的制備在膽酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N,N-二環(huán)已基碳二亞胺，反應(yīng)24小時，提純 后得膽酸活化酯；將膽酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液 中，反應(yīng)24小時，純化后得到膽酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物；或者，在色氨酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N，N-二環(huán)已基碳二亞胺，反應(yīng)24小時，提 純后得色氨酸活化酯；將色氨酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物 溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到色氨酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物；或者，在苯丙氨酸溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺，反應(yīng)24小時， 提純后得苯丙氨酸活化酯；將苯丙氨酸活化酯溶液加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀 聚合物溶液中，反應(yīng)24小時，純化后得到苯丙氨酸分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合 物；或者，將氯甲酸膽固醇酯加入到上步制得的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液中，反應(yīng)24小 時，純化后得到膽固醇修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物； 第三、納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)的制備將抗癌藥物加入到上步制得的生物分子修飾的聚酰胺一胺型樹枝狀聚合物溶液中，得 到納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是在上述整代的酰胺化反應(yīng)中將半代 樹枝狀聚合物反應(yīng)物的甲醇溶液滴加到乙二胺的甲醇溶液中。
7、 一種權(quán)利要求1所述的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)在細(xì)胞內(nèi)傳遞抗癌藥物的應(yīng) 用，其特征在于將權(quán)利要求1所述的包封有抗癌藥物的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)與 細(xì)胞接觸以使所述抗癌藥物傳遞至所述細(xì)胞中。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征是所述的抗癌藥物是氨甲蝶呤、喜樹堿。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征是所述的細(xì)胞是3T3、 HepG2和Hela。
全文摘要
一種用于細(xì)胞內(nèi)傳遞抗癌藥物的納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)和制備方法及其應(yīng)用。屬于生物醫(yī)用材料和納米技術(shù)領(lǐng)域。所述的傳遞系統(tǒng)包括納米聚合物膠束載體和包封于其中的抗癌藥物，即將內(nèi)源性生物分子修飾到低代聚酰胺-胺型樹枝狀聚合物上，制備納米聚合物膠束藥物傳遞系統(tǒng)。本發(fā)明采用低代聚酰胺-胺型樹枝狀聚合物，通過對其進(jìn)行簡單的表面修飾，可得到粒徑100nm左右的聚合物膠束。實(shí)驗(yàn)證明此膠束對抗癌藥物具有很好的細(xì)胞投遞作用。本發(fā)明避免了制備高代聚酰胺-胺型樹枝狀聚合物所需的大量合成及后續(xù)純化工作，該藥物傳遞系統(tǒng)制備簡單，在生物體內(nèi)的毒副作用小?？捎糜诎┌Y的治療。
文檔編號A61K9/00GK101181225SQ200710150588
公開日2008年5月21日 申請日期2007年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者奡 于, 悅 張, 王永健 申請人:南開大學(xué)