專利名稱：多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多聯(lián)滅活疫苗病毒 (抗原)液濃縮工藝。
背景技術(shù)：
滅活疫苗是目前預(yù)防控制動(dòng)物病毒性傳染病(如禽流感等)的必 要手段。每羽份滅活疫苗中抗原量的多少?zèng)Q定疫苗免疫效果的好或
差,提高滅活疫苗中抗原的量是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)滅活疫苗的關(guān)鍵；另一方面， 在生產(chǎn)多聯(lián)滅活病毒疫苗時(shí)，需要加入多種抗原(3或4種)，與油 項(xiàng)按固定比例混合乳化制成疫苗，在相同的免疫劑量下，每羽份疫苗 中每種抗原的含量要減少，這樣會(huì)降低疫苗的免疫效果，因此，在保 證不減少抗原量的條件下，必須降低每種抗原的體積，才能使多聯(lián)疫 苗達(dá)到單聯(lián)疫苗的免疫效果。
抗原濃縮是解決該問題的唯一途徑?？乖瓭饪s有許多方法，如化 學(xué)法(PEG沉淀法)、超速離心法和超濾法等。其中，超濾法是近年 出現(xiàn)的一種濃縮技術(shù)。目前，超濾法用于病毒的濃縮還不多見，尤其 是適用工廠化的工藝技術(shù)還不成熟，絕大多數(shù)僅限于實(shí)驗(yàn)研究階段。 限制工廠化應(yīng)用的主要原因是1.病毒顆粒小，從幾百到幾十個(gè)納 米之間，最小的只有20納米，需要根據(jù)病毒顆粒的大小選擇合適孔 徑的超濾膜，才能達(dá)到能完全截留病毒的目的；2.疫苗抗原液成分 復(fù)雜，含有大量的不溶性和可溶性雜蛋白，比較粘稠，容易污染超濾 膜，降低濃縮效率，減少設(shè)備的使用壽命。用細(xì)胞培養(yǎng)獲得的抗原液
含有大量的細(xì)胞碎片，通過離心，相對(duì)比較容易去除；但用雞胚繁殖 病毒所獲得的抗原液含有大量的雜蛋白和顆粒，抗原液中可溶性蛋白 多，相對(duì)粘稠，更容易堵塞超濾膜，造成膜污染；3.疫苗抗原液容 易受到雜菌污染， 一方面是在病毒液收獲的過程中容易受到大腸桿菌 的污染；另一方面，雞胚可能帶有一些隱性感染的細(xì)菌，如沙門氏菌。 如果不除去其中污染的細(xì)菌和雜蛋白，在病毒液被濃縮的過程中，細(xì) 菌和雜蛋白也被濃縮。用這樣抗原液生產(chǎn)出來的疫苗免疫動(dòng)物后，會(huì) 給動(dòng)物帶來嚴(yán)重的負(fù)反應(yīng)，甚至引起免疫動(dòng)物的死亡。正是由于以上 3個(gè)主要的原因，目前的獸用多聯(lián)滅活疫苗的抗原液的濃縮工藝還不 成熟，尤其不能用于工廠化，多數(shù)停留在實(shí)驗(yàn)室階段，而且主要是停 留在濃縮效果方面的研究，很少涉及到濃縮前的樣品處理和濃縮后的 設(shè)備清洗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有抗原濃縮工藝所存在的缺陷，提供一 種濃縮效率高，濃縮后病毒液品質(zhì)好，適用于工業(yè)化生產(chǎn)的多聯(lián)滅活 疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下 一種多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮 工藝，包括如下工藝過程
(1) 采用分離因數(shù)在8000g 10000g的液一固連續(xù)離心機(jī)對(duì)液 體進(jìn)行離心分離，液體在離心機(jī)內(nèi)駐留的時(shí)間大于15秒，出料口接 密閉的物料罐I，經(jīng)過離心的液體流進(jìn)物料罐I內(nèi)；
(2) 采用微濾裝置去除病毒液中的細(xì)菌，微濾裝置的出口通過 管道與物料罐II連接；
(3) 將過濾后殘留的溶液用高速離心機(jī)進(jìn)行離心分離，將分離
后的上清液加入到物料罐II中；
(4) 使用超濾濃縮裝置對(duì)病毒液進(jìn)行濃縮，超濾濃縮裝置中選 用中空纖維或板框式膜包做為超濾柱，將多個(gè)相同的中空纖維柱或膜 包并聯(lián)在一起，增加濃縮的效率，并對(duì)物料罐II進(jìn)行冷卻，溫度為 4°C 10°C;
(5) 病毒濃縮結(jié)束后，對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行清洗。 如上所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其中，在步
驟(5)中清洗液一固連續(xù)離心機(jī)時(shí)，首先清除轉(zhuǎn)鼓或碟片中的殘?jiān)?然后開動(dòng)機(jī)器，用大量的自來水清洗，然后通入蒸汽消毒，封閉連續(xù) 離心。
如上所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其中，在步 驟(5)中清洗高速離心機(jī)時(shí)，先用清水清洗離心管，然后用雙蒸水 沖洗，之后倒置干燥。
如上所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其中，在步 驟(5)中清洗過濾和濃縮裝置時(shí)，啟動(dòng)裝置，把進(jìn)料和出料口的閥 門全部打開，關(guān)閉濾液閥門，先沖洗膜表面殘留的蛋白，然后打開濾 液閥門，關(guān)閉部分出料閥門，保證膜的內(nèi)外壓力差為0.25 0.30Pa， 正向沖洗；然后，用無菌水配置0.025%的胰蛋白液，通過真空泵將 胰酶液抽到裝置中，關(guān)閉進(jìn)、出料閥門，使胰酶浸泡整個(gè)濃縮柱，靜 置一段時(shí)間后，用胰酶消化殘留的蛋白；隨后啟動(dòng)反向沖洗系統(tǒng)沖洗; 關(guān)閉反向沖洗系統(tǒng)，啟動(dòng)正向濃縮系統(tǒng)，用無菌水沖洗；最后向過濾 和濃縮裝置通入蒸汽消毒，然后分別用質(zhì)量濃度為0.1%和0.2%的氫 氧化鈉溶液浸泡濃縮裝置和過濾裝置。如上所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其中，步驟
(2)中微濾裝置的微濾柱膜的孔徑為0.22微米。
如上所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其中，步驟 (4)中濃縮后使病毒液的體積降為原來的.1/2 1/4。
本發(fā)明具有如下特點(diǎn)
1. 濃縮效率高，在樣前處理階段，采用連續(xù)離心；濃縮階段采 用多個(gè)并聯(lián)濃縮柱和大功率真空泵；整個(gè)體系，從樣前處理到病毒濃 縮都采用密閉管道連接。
2. 濃縮后病毒液品質(zhì)好，濃縮前對(duì)病毒液進(jìn)行了除雜蛋白和細(xì) 菌處理；經(jīng)過樣前處理的病毒液不含有不溶性顆粒蛋白和細(xì)菌，使?jié)?縮后的病毒液品質(zhì)好，同時(shí)濃縮裝置中不含有細(xì)菌。
3. 裝置使用壽命長(zhǎng)，首次在系統(tǒng)清洗階段使用胰酶消化殘留蛋 白，改進(jìn)了清洗方法，提高清洗的效率，延長(zhǎng)裝置使用壽命。
4. 發(fā)明工藝適用工廠化，本發(fā)明的整個(gè)系統(tǒng)都采用管道密閉連 接；生產(chǎn)工藝適合工廠化生產(chǎn)，能直接進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所提供的工藝主要包括以下三個(gè)階段-(一)樣前處理階段
樣前處理是病毒液濃縮的第一個(gè)環(huán)節(jié)。樣品前處理的好壞直接影 響病毒濃縮的效果、濃縮病毒液的品質(zhì)和濃縮設(shè)備的使用壽命，所以 樣前處理非常重要。在樣前處理階段，需要達(dá)到以下目的1)除去 病毒液中不溶性雜蛋白；2)去處病毒液中可能含有的細(xì)菌；3)能夠
工廠化生產(chǎn)。目前我國(guó)對(duì)病毒濃縮樣前處理工藝的研究還不多，而且
多數(shù)處于實(shí)驗(yàn)室階段；在實(shí)際生產(chǎn)中，多數(shù)采用多層紗布過濾的方法， 效果不好；特別是在除菌環(huán)節(jié)，有的除菌方法不適合工廠化生產(chǎn)，有 的除菌方法截留病毒，丟失抗原， 一直沒有很好地解決。
本發(fā)明采用不同方法組合，成功地解決了這些問題，特別是除菌 問題。
1. 液一固連續(xù)離心機(jī)法(立式管狀離心機(jī)或碟片離心機(jī))去除 病毒液中雜蛋白
采用分離因數(shù)在8000g 10000g的液一固連續(xù)離心機(jī)?？刂七M(jìn)料 的速度，保證液體在離心機(jī)內(nèi)駐留的時(shí)間大于15秒，出料口接一密 閉的不銹鋼罐(物料罐1)。經(jīng)過離心的液體源源不斷地流進(jìn)罐內(nèi)。 如果使用立式管狀離心機(jī)，根據(jù)病毒液含雜蛋白的量，需要定期停機(jī)， 取出轉(zhuǎn)鼓，去除內(nèi)部的濾餅，否則影響離心效果；
2. 微濾法去除病毒液中的細(xì)菌
采用微濾裝置。微濾柱膜的孔徑為0.22微米。開啟微濾裝置， 不斷過濾病毒液，細(xì)菌被截留，病毒在濾液中。出口通過管道與物料 罐2連接(可選帶有制冷夾層罐)。經(jīng)過一段時(shí)間的過濾，病毒液的 體積不斷縮小，達(dá)到微濾裝置的死體積(即微濾裝置固有體積，一般 為3 5升)時(shí)，停止過濾，用真空泵從進(jìn)料口抽出病毒的濃縮液。此 時(shí)殘留的病毒濃縮液含有大量的雜蛋白、細(xì)菌和病毒；
3. 高速離心法去除殘留病毒濃縮液中的細(xì)菌和雜蛋白 將未過濾含菌的殘留病毒濃縮液用高速離心機(jī)離心，8000gxl5
分鐘，去處雜蛋白和細(xì)菌。將上清液加入到物料罐2中。至此，樣前 處理結(jié)束。經(jīng)過處理的病毒液為不含細(xì)菌和不溶性雜蛋白，而且此工 藝完全可以工廠化
(二) 病毒液濃縮階段 本步驟是病毒濃縮的中間環(huán)節(jié)，目的是為了去除病毒液中的部分
水份，使病毒液的體積降為原來的1/2~1/4。此步驟中需要超濾濃縮 裝置。盡管超濾技術(shù)已經(jīng)很成熟，但將該技術(shù)用于病毒濃縮規(guī)模化生 產(chǎn)卻很少。本發(fā)明根據(jù)病毒種類不同，選用一定孔徑大小的中空纖維 或板框式膜包做為超濾柱(中空纖維造價(jià)低)。將幾個(gè)相同的中空纖 維柱或膜包并聯(lián)在一起，增加濃縮的效率。根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)需求，可向 生產(chǎn)廠家訂制。本發(fā)明采用大功率的真空泵，加快液體在濃縮系統(tǒng)中 的循環(huán)速度，達(dá)到0.25 0.35米/秒。這樣一方面可以提高濃縮的效 率，另一方面可以減少膜污染，增加超濾柱的使用壽命。本發(fā)明采用 的病毒液罐(物料罐2)裝有冷卻裝置，在濃縮期間保證病毒的抗原 性不會(huì)因?yàn)闇囟壬叨黄茐?。在濃縮期間會(huì)產(chǎn)生一定的熱量，使病 毒液溫度升高(有時(shí)可達(dá)40'C)，嚴(yán)重破壞病毒的抗原性，即免疫效 果，因此，必須使用冷卻裝置，降低病毒液的溫度，保證不破壞病毒 的抗原性。病毒液在密閉濃縮系統(tǒng)內(nèi)不斷循環(huán)和濃縮，濾液通過濾液 排放口排出，棄掉。經(jīng)過此步驟，無菌病毒液被濃縮，達(dá)到了濃縮的 目的。
(三) 濃縮裝置的清洗階段 本步驟是病毒濃縮的最后環(huán)節(jié)。病毒濃縮結(jié)束后，整個(gè)系統(tǒng)的清
洗非常重要。如果清洗不干凈，其影響主要的體現(xiàn)在以下2方面1) 容易造成細(xì)菌的大量繁殖，會(huì)污染疫苗的半成品。病毒液含有大量的 不溶性和可溶性蛋白，營(yíng)養(yǎng)非常豐富；如果混有細(xì)菌，極易造成細(xì)菌 的大量繁殖；2)殘留的蛋白會(huì)固定濃縮柱的內(nèi)表面，堵塞膜的過濾孔， 降低濃縮裝置的使用壽命。因此，濃縮結(jié)束后，需要對(duì)所用過的設(shè)備，
特別是對(duì)離心機(jī)和濃縮設(shè)備需要進(jìn)行全面地徹底地清洗。現(xiàn)有清洗工 藝只是采用清水正向和反向沖洗，不能有效清洗干凈，尤其是當(dāng)濃縮
柱被蛋白污染嚴(yán)重的時(shí)候，效果就更不好；如果延長(zhǎng)反向沖洗的時(shí)間， 會(huì)破壞濃縮柱的表面結(jié)構(gòu)，減少濃縮柱使用壽命。本發(fā)明增加胰酶消 化蛋白和蒸汽消毒步驟，縮短反向沖洗時(shí)間，提高了清洗的效果，延 長(zhǎng)濃縮柱的使用壽命，而且能達(dá)到滅菌的效果。在設(shè)備停用期間，為 防止細(xì)菌生長(zhǎng)，本發(fā)明使用一定濃度的氫氧化鈉代替一定濃度的甲醛 充滿整個(gè)微濾和濃縮系統(tǒng)，抑菌效果更好。 本發(fā)明中裝置清洗的具體步驟如下-
1. 離心機(jī)的清洗連續(xù)離心結(jié)束后，首先清除轉(zhuǎn)鼓或碟片中的 殘?jiān)缓箝_動(dòng)機(jī)器，用大量的自來水清洗，大約10分鐘，然后通 入蒸汽消毒，封閉連續(xù)離心機(jī)；高速離心機(jī)的離心管用清水洗干凈后， 用雙蒸水沖洗，然后倒置干燥。注意下次使用前一定進(jìn)行高壓滅菌 后再使用。
2. 過濾和濃縮裝置的清洗采用相同的步驟清洗過濾和濃縮裝 置。啟動(dòng)裝置，把進(jìn)料和出料口的閥門全部打開，關(guān)閉濾液閥門，先 沖洗膜表面殘留的蛋白，沖洗10分鐘，然后打開濾液閥門，關(guān)閉部 分出料閥門，保證膜的內(nèi)外壓力差為0.25 0.30Pa，正向沖洗10分 鐘。用溫度為37"的無菌水配置0.025%的胰蛋白液，通過真空泵將 胰酶液抽到裝置中，關(guān)閉進(jìn)、出料閥門，使胰酶浸泡整個(gè)濃縮柱，靜 置10分鐘，用胰酶消化殘留的蛋白。然后啟動(dòng)反向沖洗系統(tǒng)沖洗約 IO分鐘；關(guān)閉反向沖洗系統(tǒng)，啟動(dòng)正向濃縮系統(tǒng)，用無菌水沖洗10 分鐘。用流通量變化檢測(cè)沖洗效果。如果流通量降低10%以上，說 明沒有沖洗干凈，濃縮裝置中還留有蛋白，需要重復(fù)上述過程，特別
是隨著使用次數(shù)的增多，應(yīng)該延長(zhǎng)胰酶消化的時(shí)間。最后過濾和濃縮
裝置通入蒸汽消毒20分鐘，然后分別用質(zhì)量濃度為0.1 %和0.2%的 氫氧化鈉溶液浸泡濃縮裝置和過濾裝置。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
例一雞胚尿囊病毒液濃縮
1. 收獲病毒將繁殖病毒的雞胚從37"C培養(yǎng)箱中取出，放到4'C
過夜。取出雞胚，用真空泵吸出雞胚尿囊液(注意不要吸出卵黃液)
到IO升的玻璃瓶中。然后將裝滿病毒液的玻璃瓶放到一2(TC條件過 夜，取出放到4-C條件下融化和靜置(不超過24小時(shí))。
2. 樣前處理
2.1連續(xù)離心啟動(dòng)連續(xù)離心機(jī)(立式柱狀離心機(jī)或碟片離心 機(jī))，通過蠕動(dòng)泵將已經(jīng)融化的病毒液不斷地泵入離心機(jī)中，控制病 毒液進(jìn)入的速度。出液口與不銹鋼罐(物料罐l)相連接，經(jīng)過離心 的病毒液不斷進(jìn)入物料罐I中。如果使用立式柱狀離心機(jī)，當(dāng)濾餅達(dá) 到一定厚度后會(huì)影響離心的效果，因此，經(jīng)過一段時(shí)間離心，要停機(jī)， 清除濾餅后再離心。經(jīng)過離心的病毒液去除了絕大部分不溶性雜蛋 白。
2.2過濾除菌啟動(dòng)過濾除菌裝置，通過真空泵，物料罐I中的
病毒液不斷地通過過濾除菌裝置進(jìn)入到物料罐II中。隨著過濾時(shí)間 的延長(zhǎng)，病毒原液中含蛋白的濃度升高，過濾的效率降低，此時(shí)可以
向病毒原液中加入一定比例的PBS,稀釋病毒液，提高過濾效率。經(jīng) 過過濾除菌，病毒液中不含有雜菌。
2.3高速離心過濾到最后，過濾系統(tǒng)中會(huì)殘留有一定的病毒原
液。從進(jìn)料口排除剩余的病毒液。將病毒液裝入離心瓶中，高速離心去除雜菌(有時(shí)需多次重復(fù))。將離心的病毒液加入到物料罐II中。
經(jīng)過樣前處理，病毒液中的絕大多數(shù)雜蛋白被去除，并且不含有 雜菌。
3. 病毒濃縮
開啟濃縮裝置，通過真空泵將物料罐II中的病毒液帶入濃縮體 系中，控制進(jìn)、出閥門，保持濃縮柱內(nèi)外具有一定的壓力差，采用大 功率的真空泵，使循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的液體循環(huán)速度達(dá)到0.25 0.35米/秒。 去除病毒液中的部分水分，使?jié)饪s后病毒液的體積為原來的1/2~1/4， 達(dá)到濃縮病毒(抗原)的目的。經(jīng)過此步驟，無菌病毒液得到濃縮。
4. 病毒液收獲
將病毒液從出料口排除，分裝到一定體積的容器中(一般為500 毫升的玻璃瓶)，放到fC備檢驗(yàn)，測(cè)定病毒的效價(jià)及檢驗(yàn)是否含有 雜菌。
5. 連續(xù)離心機(jī)、過濾裝置及濃縮裝置的清洗
濃縮結(jié)束后，盡快清洗離心機(jī)、過濾裝置和濃縮裝置，以延長(zhǎng)儀 器設(shè)備的使用壽命。
5.1連續(xù)離心機(jī)的清洗離心結(jié)束后，首先人工清除轉(zhuǎn)鼓中的濾 餅，盡量去除干凈；啟動(dòng)離心機(jī)，用蠕動(dòng)泵加入大量的清水沖洗10 分鐘，然后改用3(TC的溫水沖洗10分鐘；通蒸汽進(jìn)行消毒10分鐘。 5.2濃縮裝置和過濾裝置的清洗
用溫水配置0.025%的胰酶液，分別通過各自的真空泵將胰酶液帶 入到過濾柱和濃縮柱中，要保證胰酶液充滿過濾柱和濃縮柱，關(guān)閉進(jìn)、 出閥門，保持10分鐘后排出胰酶；用溫水正向沖洗10分鐘，然后方 向沖洗10分鐘，再正向沖洗10分鐘。 6.濃縮裝置和過濾裝置的保存
過濾裝置中可能會(huì)殘留有一定數(shù)量的雜菌，為了殺滅或抑止細(xì)
菌，過濾裝置用0.2%的氫氧化鈉溶液浸泡；而濃縮裝置中不含有細(xì)
菌，但為了防止殘留的蛋白腐敗，用0.1%的氫氧化鈉溶液浸泡。下 次使用前，放出氫氧化鈉溶液，用無菌水沖洗，直到流出的水的PH 值達(dá)到7.0左右。
例二細(xì)胞培養(yǎng)病毒液濃縮
1. 收獲病毒收獲細(xì)胞培養(yǎng)的病毒，反復(fù)凍融3次。
2. 樣前處理啟動(dòng)連續(xù)離心機(jī)(立式柱狀離心機(jī)或碟片離心 機(jī))，通過蠕動(dòng)泵將已經(jīng)融化的病毒液不斷地打入離心機(jī)中，控制病 毒液進(jìn)入的速度。出液口與不銹鋼罐(物料罐l)相連接，經(jīng)過離心 的病毒液不斷進(jìn)入物料罐2中。經(jīng)過樣前處理，去除病毒液中細(xì)胞碎 片。(因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)的病毒液中不含有細(xì)菌，所以可以省略除菌步驟， 如果不能確定是否混有細(xì)菌，可以使用除菌步驟) 以下步驟同例一的相應(yīng)步驟。
3. 病毒濃縮同例一3。病毒(抗原)的目的。經(jīng)過此步驟，無菌 病毒液得到濃縮。
4. 病毒液收獲同例一4。
5. 連續(xù)離心機(jī)、過濾裝置及濃縮裝置的清洗同例一5。
6. 濃縮裝置和過濾裝置的保存同例一6。
權(quán)利要求
1. 一種多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，包括如下工藝過程(1)采用分離因數(shù)在8000g～10000g的液—固連續(xù)離心機(jī)對(duì)液體進(jìn)行離心分離，液體在離心機(jī)內(nèi)駐留的時(shí)間大于15秒，出料口接密閉的物料罐I，經(jīng)過離心的液體流進(jìn)物料罐I內(nèi)；(2)采用微濾裝置去除病毒液中的細(xì)菌，微濾裝置的出口通過管道與物料罐II連接；(3)將過濾后殘留的溶液用高速離心機(jī)進(jìn)行離心分離，將分離后的上清液加入到物料罐II中；(4)使用超濾濃縮裝置對(duì)病毒液進(jìn)行濃縮，超濾濃縮裝置中選用中空纖維或板框式膜包做為超濾柱，將多個(gè)相同的中空纖維柱或膜包并聯(lián)在一起，增加濃縮的效率，并對(duì)物料罐II進(jìn)行冷卻，溫度為4℃～10℃；(5)病毒濃縮結(jié)束后，對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行清洗。
2. 如權(quán)利要求1所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝， 其特征在于在步驟(5)中清洗液—固連續(xù)離心機(jī)時(shí)，首先清除轉(zhuǎn)鼓或碟片中的殘?jiān)?，然后開動(dòng)機(jī)器，用大量的自來水清洗，然后通入 蒸汽消毒，封閉連續(xù)離心。
3. 如權(quán)利要求1所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其特征在于在步驟(5)中清洗高速離心機(jī)時(shí)，先用清水清洗離心管，然后用雙蒸水沖洗，之后倒置干燥。
4. 如權(quán)利要求1或2或3所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其特征在于在步驟(5)中清洗過濾和濃縮裝置時(shí)，啟 動(dòng)裝置，把進(jìn)料和出料口的閥門全部打開，關(guān)閉濾液閥門，先沖洗膜 表面殘留的蛋白，然后打開濾液閥門，關(guān)閉部分出料閥門，保證膜的內(nèi)外壓力差為0.25 0.30Pa，正向沖洗；然后，用無菌水配置0.025% 的胰蛋白液，通過真空泵將胰酶液抽到裝置中，關(guān)閉進(jìn)、出料閥門， 使胰酶浸泡整個(gè)濃縮柱，靜置一段時(shí)間后，用胰酶消化殘留的蛋白； 隨后啟動(dòng)反向沖洗系統(tǒng)沖洗；關(guān)閉反向沖洗系統(tǒng)，啟動(dòng)正向濃縮系統(tǒng)， 用無菌水沖洗；最后向過濾和濃縮裝置通入蒸汽消毒，然后分別用質(zhì) 量濃度為0.1%和0.2%的氫氧化鈉溶液浸泡濃縮裝置和過濾裝置。
5. 如權(quán)利要求1所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝， 其特征在于步驟(2)中微濾裝置的微濾柱膜的孔徑為0.22微米。
6. 如權(quán)利要求1所述的多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝，其特征在于步驟(4)中濃縮后使病毒液的體積降為原來的1/2 1/4。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多聯(lián)滅活疫苗病毒(抗原)液濃縮工藝。該工藝在樣前處理階段，采用連續(xù)離心，濃縮前對(duì)病毒液進(jìn)行了除雜蛋白和細(xì)菌處理；濃縮階段采用多個(gè)并聯(lián)濃縮柱和大功率真空泵；并在系統(tǒng)清洗階段使用胰酶消化殘留蛋白，改進(jìn)了清洗方法，提高清洗的效率，延長(zhǎng)裝置使用壽命。本發(fā)明的整個(gè)系統(tǒng)都采用管道密閉連接；生產(chǎn)工藝適合工廠化生產(chǎn)，能直接進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/12GK101380467SQ20071014630
公開日2009年3月11日 申請(qǐng)日期2007年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月4日
發(fā)明者邵衛(wèi)星 申請(qǐng)人:邵衛(wèi)星