專利名稱：：脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及阿糖胞苷的衍生物，尤其涉及脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物；本發(fā)明還涉及脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的制備方法、該綴合物制備成藥質(zhì)體的方法以及脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物在抗腫瘤和制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的耙向制劑材料中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：許多藥物在體內(nèi)需要多次穿越生物膜才能到達靶部位(器官、組織、細胞和細胞器)。在影響藥物跨膜的諸多因素中，親水親油平衡性或油水分配系數(shù)是影響明顯的理化因素。水溶性強的藥物和體液相容，不易穿過由脂質(zhì)雙層構(gòu)成的生物膜。脂溶性強的藥物雖容易進入脂質(zhì)雙層，但與體液不相容難以在體液中轉(zhuǎn)運，最終或積存脂肪組織或被代謝為水溶性物質(zhì)。目前的解決辦法是借助藥物傳遞系統(tǒng)來改善藥物吸收、分布及獲得靶向性。所述藥物傳遞系統(tǒng)主要有脂質(zhì)體、納米粒、微球和微囊。這些藥物傳遞系統(tǒng)存在一些共同問題①用藥量難以控制。②存在包封率低、易滲漏，載藥量不穩(wěn)定。③藥物在到達靶體之前一旦離開傳遞系統(tǒng)，傳遞系統(tǒng)將失去作用。為解決這些問題，出現(xiàn)了藥質(zhì)體。藥質(zhì)體既不是單純的前藥，也不是單純的藥物載體，而是前藥和載體的有機結(jié)合體。藥質(zhì)體不存在包封率、滲漏和穩(wěn)定性問題。藥質(zhì)體具有較好的水中擴散性和生物膜滲透性，對需要穿過生物膜(包括吸收、分布、靶向等過程)發(fā)揮藥效的治療，如抗病毒治療、腫瘤治療和基因治療非常有意義。阿糖胞苷是臨床上常用的抗白血病藥物，它在體內(nèi)能干擾DNA的合成從而抑制白血細胞的繁殖。阿糖胞苷在血液中易被嘧啶核苷脫氨酶迅速脫氨而失效。為維持有效的血藥濃度，需多次和連續(xù)給藥，易造成骨髓抑制和消痩作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是克服抗腫瘤藥物阿糖胞苷的4位氨基易代謝失活導(dǎo)致其半衰期短、水溶性強導(dǎo)致的跨膜能力弱和生物利用度低等缺陷，提供一種脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物，該脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物具有跨膜能力強、生物利用度高、半衰期長、并具有兩親性等優(yōu)點。本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物，為通式(I)所示的結(jié)構(gòu)其中R選自-(CH2)sCH3、-(CH2)12CH^-(CH2)16CH3;AA選自Val、Met、Arg、Tyr或Glu殘基。本發(fā)明采用人體內(nèi)存在的脂肪酸和氨基酸對阿糖胞苷進行修飾,修飾時利用脂肪酸的鏈長度調(diào)節(jié)脂溶性和跨膜能力，利用氨基酸調(diào)節(jié)水溶性，制備不同油水分配系數(shù)阿糖胞苷一氨基酸一脂肪酸綴合物，獲得高抗腫瘤劑活性的藥質(zhì)體。為了提高強極性的阿糖胞苷的生物利用度低的問題,本發(fā)明在阿糖胞苷的4-N上引入親脂基團使其具有合適的油水分配系數(shù)。為延緩阿糖胞苷4-氨基的代謝，在4位氨基引入脂肪?；Ｋ玫降闹觉０被０⑻前站Y合物的羥基和氨基酸的氨基構(gòu)成親水端，脂肪酸的烷基構(gòu)成親脂端，具有兩親性。借助藥劑學(xué)手段，這種兩親性分子可制成藥質(zhì)體，有效提高了阿糖胞苷的水溶度及跨膜能力。本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種制備上述脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的方法。本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種制備上述脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的方法，包括(1).在二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)、l-羥基苯并三氮唑(HOBt)和N-甲基嗎啉(NMM)存在下將脂肪酸引入到氨基酸甲酯的a-氨基，制備脂肪酰一氨基酸甲酯；(2).在堿水溶液中將脂肪酰一氨基酸甲酯水解,制備脂肪酰一氨基酸；(3)在l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺(EDC)和HOBt存在下將脂肪?！被嵋氲桨⑻前盏?位氨基上；或者在EDC和HOBt存在下將H,OHBoc-Glu-(OBzl)-OH引入到阿糖胞苷的4位氨基上，接著在4N氯化氫-乙酸乙酯溶液中脫Boc,再在EDC和HOBt存在下與脂肪酸縮合，然后在Pd/C存在下氫解。其中，步驟(1)和步驟(3)中所述的脂肪酸優(yōu)選為葵酸、肉豆蔻酸或硬脂酸；步驟(1)中所述的氨基酸甲酯優(yōu)選為纈氨酸甲酯、蛋氨酸甲酯、酪氨酸甲酯、精氨酸甲酯或谷酸甲酯。步驟(1)中所述的堿優(yōu)選為濃度為2N的NaOH。將本發(fā)明脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物按照以下薄膜分散法，可制備得到藥質(zhì)體，該方法包括取適量磷脂(磷脂的用量根據(jù)藥物的用量而定，本領(lǐng)域技術(shù)人員可視具體情況而操控)及所需藥物至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入所需量的PBS磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L)，30°C超聲分散20min,得具乳光的藥質(zhì)體溶液，粒徑200-500nm，Zeta-Potential-20-30mV。體內(nèi)和體外試驗表明，本發(fā)明化合物及其藥質(zhì)體都具有良好的抗腫瘤活性。圖1.脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的合成路線圖。I)DCC,HOBt和NMM;II)2NNaOH水溶液；III)EDC，HOBt和吡淀;IV)4N氯化氫-乙酸乙酯溶液;V)氫氣和鈀/碳。在la陽c，3a-l，3'a-l，5a-c，6a隱o中，R=-(CH2)8CH3,-(012)120^3或-(CH2)16CH3;在2a^d,3a國l禾Q3，a-l中AA=Val,Met，Arg或Tyr殘基；在6a-o中，AA=Val,Met,Tyr，Arg或Glu殘基。為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。具體實施方式實施例1制備葵酰纈氨酸甲酯(3a)將0.69g(4mmol)葵酸，0.91g(4.4mmo1)DCC和0.54g(4mmo1)HOBt溶于冷的無水THF中，冰浴攪拌20min后加入0.67g(4mmo1)HCl'H-Val-OMe和0.5mlNMM調(diào)pH值89，室溫攪拌1天，TLC(氯仿/甲醇，20:l)顯示HCl-H-Val-OMe消失。濾出二環(huán)己基脲(DCU)，濾液減壓濃縮至干，殘留物用20ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5XNaHC03水溶液洗、飽和NaCl水溶液洗、5XKHS04水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗至中性。乙酸乙酯層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得1.01g(89%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.60-62。C;[a]D252o=-15.3(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)308.1[M+H]+，571.3[2M+H]+，593.2[2M+Na]+。實施例2制備葵酰蛋氨酸甲酯(3b)按照實施例1的操作，從0.69g(4mmol)葵酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.8g(4mmo1)HChH-Met-OMe和0.5mlNMM制得1.17g(92。/。)標(biāo)題化合物,為無色固體。Mp.50-52。C;[a]D2520=-19.5(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)318.0[M+H]+，635.1[2M+H]+，657.1[2M+Na]+。實施例3制備葵酰酪氨酸甲酯(3c)按照實施例1的操作，從0.69g(4mmol)葵酸、0.91g(4.4mmol)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.93g(4mmo1)HCl'H-Tyr-OMe和0.5mlNMM制得1.09g(80。/。)標(biāo)題化合物,為無色固體。Mp.27-29。C;[a]D2520=-17.7(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)350.0[M+H]+,699.2[2M+H〗+。實施例4制備葵酰精氨酸甲酯(3d)按照實施例1的操作，從0.69g(4mmol)葵酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.9g(4mmo1)HCl'H-Arg-OMe和0.5mlNMM制得1.09g(80。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.35-37。C;[a]D2520=-3.1(c二l.O，甲醇)；ESI-MS(m/e)343.2[M+H]+，685.2[2M+H]+，721.3[2M+K]+。實施例5制備肉豆蔻酰纈氨酸甲酯(3e)按照實施例1的操作，從0.912g(4mmol)肉豆蔻酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.67g(4mmo1)HCl.H-Val-OMe和0.5mlNMM制得L23g(90%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.50-52。C;[a]D2520=-23.8(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)342.2[M+H]+，364.1[M+Na]+，683.4[2M+H]+，705.3[2M+Na]+。實施例6制備肉豆蔻酰蛋氨酸甲酯(3f)按照實施例1的操作，從0.912g(4mmol)肉豆蔻酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.67g(4mmo1)HCl'H-Val-OMe和0.5mlNMM制得1.37g(92%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.59-61。C;[a]D2520=-14.6(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)374.1[M+H]+,396.1[M+Na]+，747.2[2M+H]+，769.2[2M+Na〗+。實施例7制備肉豆蔻酰酪氨酸甲酯(3g)按照實施例1的操作，從0.912g(4mmol)肉豆蔻酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.93g(4mmo1)HClH-Tyr-OMe和0.5mlNMM制得1.36g(84%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.85-87。C;[a]D2520=-12.4(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)428.1[M+Na]+,833.3[2M+Na]+。實施例8制備肉豆蔻酰精氨酸甲酯(3h)按照實施例1的操作，從0.912g(4mmol)肉豆蔻酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.9g(4mmo1)HClH-Arg-OMe和0.5mlNMM制得1.29g(81%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.69-71。C;[a]D252()=-5.9(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)398.7[M+H]+，819.7[2M+Na]+。實施例9制備硬脂酰纈氨酸甲酯(3i)按照實施例1的操作，從1,14g(4mmol)硬脂酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.67g(4mmo1)HCl'H隱Val-OMe和0.5mlNMM制得1.49g(94。/o)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.54-55。C;[a]D252o二-28.1(c:1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)398.3[M+H]+,795.4[2M+H]+。實施例10制備硬脂酰蛋氨酸甲酯(3j)按照實施例1的操作，從1.14g(4mmol)硬脂酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.8g(4mmo1)HCl'H-Met-OMe和0.5mlNMM制得1.6g(93%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.53-55T;[a]D2520=-18.5(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)430.6[M+H〗+。實施例11制備硬脂酰酪氨酸甲酯(3k)按照實施例1的操作，從1.14g(4mmol)硬脂酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.93g(4mmo1)HCl'H-Tyr-OMe和0.5mlNMM制得1.6g(87。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.66-68。C;[a]D252o二-14.4(c二1.0，甲醇)；ESI陽MS(m/e)484.1[M+Na]+,945.8[2M+Na]+。實施例12制備硬脂酰精氨酸甲酯(31)按照實施例1的操作，從U4g(4mmol)硬脂酸、0.91g(4.4mmo1)DCC、0.54g(4mmo1)HOBt、0.9g(4mmo1)HCl.H-Arg-OMe和0.5mlNMM制得1.36g(75%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l30-132。C;[a]D2520=-31.7(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)455.8[M+H]+。實施例13制備葵酰纈氨酸(3，a)將0.86g(3mmol)葵酰纈氨酸甲酯溶于甲醇，冰浴攪拌下滴加2NNaOH的水溶液至反應(yīng)液pH-ll，反應(yīng)4h，TLC(氯仿/甲醇，20:l)顯示葵酰纈氨酸甲酯消失。用2NHCl將反應(yīng)液pH調(diào)至7，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，殘留物放入水中并用2NHCl調(diào)pH至2,用乙酸乙酯萃取不溶物質(zhì)，用飽和NaCl將乙酸乙酯層洗至中性。乙酸乙酯層用無水Na2S04干燥、過濾、濾液減壓濃縮得0.71g(87。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.56-58。C;〖a]D2520=-13.8(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)269.0[M-H]-,541.3[2M-H]。實施例14制備葵酰蛋氨酸(3，b)按照實施例13的操作，從0.95g(3mmo1)葵酰蛋氨酸甲酯制得標(biāo)題化合物0.73g(80。/o)，為無色固體。Mp.46-47。C;[a]D2520=-13.3(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)302.1[M-H]-，303.5[M],605.2[2M-H]o實施例15制備葵酰酪氨酸(3'c)按照實施例13的操作，從1.05g(3mmo1)葵酰酪氨酸甲酯制得0.85g(85。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.25-27。C;[a]D2520=-4.4(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)334.3[M-H]-，335.4[M]，669.6[2M-H]，670.5[2M]。實施例16制備葵酸一精氨酸(3'd)按照實施例13的操作，從1.03g(3mmo1)葵酰精氨酸甲酯制得0.78g(79M)標(biāo)題化合物,為無色固體。Mp.32-34。C;[a]D2520=-3.2(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)327.4[M-H]-，328.5[M]，655.5[2M-Hr。實施例17制備肉豆蔻酰纈氨酸(3，e)按照實施例13的操作，從1.02g(3mmo1)肉豆蔻酰纈氨酸甲酯制得標(biāo)題化合物0.9g(92。/。)，為無色固體。Mp.53-55。C;[a]D2520=-15.1(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)326.2[M-H]\327.4[M]，653.3[2M-H]-，654.2[2M]。實施例18制備肉豆蔻酰蛋氨酸(3，f)按照實施例13的操作，從L12g(3mmd)肉豆蔻酰蛋氨酸甲酯制得1.02g(95%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.60-62。C;[a]D2520=-17.8(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)358.2[M-H]-，359.3[M],717.3[2M-H].，718.2[2M]。實施例19制備肉豆蔻蔻酪氨酸(3，g)按照實施例13的操作，從1.22g(3mmd)肉豆蔻蔻酪氨酸甲酯制得標(biāo)題化合物1.06g(90。/。)，為無色固體。Mp.48-50。C;[a]D2520=-2.3(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)390.2[M-Hr，782.2[2M]。實施例20制備肉豆蔻酰精氨酸(3，h)按照實施例13的操作，從1.19g(3mmo1)肉豆蔻酰精氨酸甲酯制得1.07g(93%)標(biāo)題化合物,為無色固體。Mp.60-62°C;[a]D2520=-3.1(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)383.6[M-H]-,384.6[M],768.5[2M-H]-。實施例21制備硬脂酸酰纈氨酸(3M)按照實施例13的操作，從1.19g(3mmo1)硬脂酸酰蛋氨酸甲酯制得l.lg(96%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.74-76。C;[a]D2520=-17.7(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)383.2[M-H]墨，384.2[M]。實施例22制備硬脂酸酰蛋氨酸(3'j)按照實施例13的操作，從1.29g(3mmo1)硬脂酸酰蛋氨酸甲酯制得U8g(95%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.50-52。C;[a]D2520=-33.7(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)414.6[M+H]+，830.3[2M+H]+。實施例23制備硬脂酸酰酪氨酸(3'k)按照實施例13的操作，從1.38g(3mmo1)硬脂酸酰酪氨酸甲酯制得1.22g(91%)標(biāo)題化合物,為無色固體。Mp.70-72。C;[a]D2520=-5.0(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)446.4[M-H]-，894.3[2M-町。實施例24制備硬脂酸酰精氨酸(3'1)按照實施例13的操作，從1.36g(3mmo1)硬脂酸酰精氨酸甲酯制得1.14g(86%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.95-97。C;[a]D2520=-8.5(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)441.6[M+H]+。實施例25制備葵酰纈氨酰阿糖胞苷(6a)將542mg(2mmo1)葵酰纈氨酸，573mg(3mmo1)l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(HC1'EDC)，405mg(3mmol)HOBt溶于15ml無水吡啶，室溫下反應(yīng)1小時，將558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽加入反應(yīng)液，于45'C水浴中反應(yīng)20小時。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去吡啶，用過量乙醚洗殘留物，蒸干乙醚，氯仿溶解，用0.01N鹽酸洗、飽和NaCl洗。濃縮氯仿層，無水Na2S04干燥。柱層析分離(展開劑乙酸乙酯丙酮=6:1)。得248mg(25。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.98-100。C;[a]D252()=36.6(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.78;ESI-MS(m/e)497.5[M+H]+，519.3[M+Na]+，993.5[2M+H]+，1015.3[2M+Na]+。實施例26制備葵酰蛋氨酰阿糖胞苷(6b)按照實施例25的操作，從606mg(2mmo1)葵酰蛋氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得391mg(37%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.84-86。C;[a]D252o=45.7(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.68;ESI-MS(m/e)529.3[M+H]+，552[M+Na]+，1058.4[2M+H]+，1080.8[2M+Na]。實施例27制備葵酰酪氨酰阿糖胞苷(6c)按照實施例25的操作，從670mg(2mmo1)葵酰酪氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得337mg(30%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.ll4-116。C;[a]D252()=65.4(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.81;ESI-MS(m/e)561.6[M+H]+。實施例28制備葵酰精氨酰阿糖胞苷(6d)按照實施例25的操作，從656mg(2mmo1)葵酰精氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得299mg(27%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.98-100。C;[a]D252。=61.4(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.76;ESI-MS(m/e)554[M+H]+。實施例29制備肉豆蔻酰纈氨酰阿糖胞苷(6e)按照實施例25的操作，從654mg(2mmo1)肉豆蔻酰纈氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得277mg(25%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l02-104。C;[a]D2520=29.1(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.9;ESI-MS(m/e)553.7[M+H]+，575.6[M+Na]+，576.5[M+Na+H]+，591.4[M+K]+。實施例30制備肉豆蔻酰蛋氨酰阿糖胞苷(6f)按照實施例25的操作，從718mg(2mmo1)肉豆蔻酰蛋氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得339mg(29%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.84-86。C;[a]D252Q=45.9(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP-0.88;ESI-MS(m/e)585.7[M+H]+，586.7[M+2H]2+。實施例31制備肉豆蔻酰酪氨酰阿糖胞苷(6g)按照實施例25的操作，從782mg(2mmo1)肉豆蔻酰酪氨酸，573mg(3mmo1)HC1.EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得309mg(25%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l56-158。C;[a]D252()=52.2(c=1.0,甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.9;ESI-MS(m/e)617.4[M]，618.4[M+H]+，640[M+Na]十，1234.2[2M]，1235.1[2M+H]+。實施例32制備肉豆蔻酰精氨酰阿糖胞苷(6h)按照實施例25的操作，從768mg(2mmo1)肉豆蔻酰精氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得305mg(25%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l24-126。C;[a]D2520=67.8(c二l.O，甲醇)；油水分配系數(shù)logP二0.45;ESI-MS(m/e)609.9[M]，610.9[M+H]+，624.8[M+Na+H]2+。實施例33制備硬脂酰纈氨酰阿糖胞苷(6i)按照實施例25的操作，從766mg(2mmo1)硬脂酰纈氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得341mg(28%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l34-136。C;[a]D2520=47.7(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP=0.91;ESI-MS(m/e)609.9[M+H]+，631.9[M+Na]+，1220[2M+2H]2+。實施例34制備硬脂酰蛋氨酰阿糖胞苷(6j)按照實施例25的操作，從830mg(2mmo1)硬脂酰蛋氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得321mg(25%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l25-127。C;[a]D252()=51.3(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP^^1.09;ESI-MS(m/e)641.6[M+H]+，642.6[M+2H]2+，643.5[M+3H]3+，663[M+Na]+。實施例35制備硬脂酰酪氨酰阿糖胞苷(6k)按照實施例25的操作，從894mg(2mmo1)硬脂酰酪氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC,405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得296mg(22%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l94-196°C;[a]D252()=33.9(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP:0.97;ESI-MS(m/e)673.1[M+H]+，674[M+2H]2+，695.4[M+Na]+。實施例36制備硬脂酰精氨酰阿糖胞苷(61)按照實施例25的操作，從880mg(2mmo1)硬脂酰精氨酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmo1)HOBt和558mg(2mmol)阿糖胞苷鹽酸鹽制得360mg(27%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.ll4-116°C;[a]D2520=34.9(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP-0.61;ESI-MS(m/e)665.8[M+H]+。實施例37制備Boc-Glu(OBzl)-阿糖胞苷(5)將674mg(2mmol)Boc墨Glu(OBzl)-OH、573mg(3mmo1)HC1EDC、405mg(3mmo1)HOBt溶于10ml無水吡啶，室溫攪拌1小時，加入559mg(2mmo1)阿糖胞苷鹽酸鹽，于45。C水浴反應(yīng)20小時。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去吡啶，用過量乙醚洗殘留物，蒸干乙醚，氯仿溶解，用0.01NHC1、飽和NaCl洗。濃縮氯仿層，無水Na2S04干燥。柱層析分離(展開劑乙酸乙酯丙酮=6:1)。制得674mg(60。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.74-76。C;[a〗D2520=-30.0(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)563.2[M+H]+，585.2[M+Na]+,1125.9[2M+H]+。實施例38制備谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷(5，)將674mg(1.2mmol)Boc-谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷溶于3ml乙酸乙酯中，再向其中加入lml氯化氫-乙酸乙酯(4N)溶液。0。C攪拌30min，TLC(氯仿:甲醇-5:1)顯示Boc-谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷消失。反應(yīng)液減壓濃縮至干，殘留物用5ml乙醚溶解，再減壓濃縮至干。該操作反復(fù)三次。得到554mg(100%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.54陽56。C;[a]D2520=11.3(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)462.9[M〗，464[M+2H]2+。實施例39制備葵酰谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷(5a)將344mg(2腿o1)葵酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmol)HOBt溶于15ml無水吡啶，室溫下反應(yīng)1小時，將924mg(2mmo1)谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷加入反應(yīng)液，于45。C水浴中反應(yīng)20小時。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去吡啶，用過量乙醚洗殘留物，蒸干乙醚，氯仿溶解，用0.01NHCl洗和飽和NaCl洗。濃縮氯仿層，無水Na2S04干燥。柱層析分離(展開劑乙酸乙酯丙酮=6:1)。得246mg(20。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.43-45。C;[a]D2520=13.9(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)616.9[M+H]+，640.8[M+Na+H]2+。實施例40制備肉豆蔻酰谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷(5b)按照實施例39的操作，從456mg(2mmol)肉豆蔻酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmol)HOBt和924mg(2mmo1)谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷制得282mg(21。/o)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.81-83。C;[a]D2520=18.5(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)673.0[M+H]+，695.2[M+Na]+，710.7[M+K]+，1366.6[2M+Na]+。實施例41制備硬脂酰谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷(5c)按照實施例39的操作，從569mg(2mmol)硬脂酸，573mg(3mmo1)HC1'EDC，405mg(3mmol)HOBt和924mg(2mmo1)谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷制得277mg(19。/o)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.47-48。C;[a]D252o=23.3(c=1.0，甲醇)；ESI-MS(m/e)729.4[M+H]+，1457.5[2M+H]+。實施例42制備葵酰谷氨酰阿糖胞苷(6m)將616mg(lmmo1)葵酰谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷用少量乙醇溶解，加入適量鈀炭，連接氫氣發(fā)生裝置，反應(yīng)5小時。濾去鈀炭，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得269mg(51%)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.77-79。C;[a]D252()=64.1(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP二-0,28;ESI-MS(m/e)582.0[M-H]-，1188.7[2M+Na-H]。實施例43制備肉豆蔻酰谷氨酰阿糖胞苷(6n)按照實施例42的操作，從672mg(lmmol)肉豆蔻酰谷氨酰(OBzl)阿糖胞苷制得309mg(53。/o)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l29-131。C;[a]D2520=29.1(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP二0.25;ESI-MS(m/e)581.6[M-H]\實施例44制備硬脂酰谷氨酰阿糖胞苷(6o)按照實施例42的操作，從728mg(lmmo1)硬脂酰谷氨酰(OBzl)-阿糖胞苷制得306mg(48。/。)標(biāo)題化合物，為無色固體。Mp.l74-176。C;[a]D2520=30.8(c=1.0，甲醇)；油水分配系數(shù)logP二0.5;ESI-MS(m/e)637.7[M-H]-，638,7[M]。試驗例1本發(fā)明化合物(6a-o)及藥質(zhì)體對人白血病細胞HL-60增殖的抑制作用試驗一、試驗材料1、人白血病細胞株HL-60(從Sigma購買得到)用RPMI1640培養(yǎng)液(含10%滅活的胎牛血清，青鏈霉素的濃度最終各為100單位/ml)定期傳代培養(yǎng)。2、藥物配制藥質(zhì)體組的陽性對照是將阿糖胞苷制成lxiO-Sg/ml(0.03584)ttmol/ml)濃度的脂質(zhì)體(阿糖胞苷脂質(zhì)體的制備薄膜分散制備，取適量磷脂至圓底燒瓶中以氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入所需量的阿糖胞苷和PBS磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L)，30°C超聲分散20min，其余15個阿糖胞苷脂質(zhì)前藥(6a-o)制成與其等物質(zhì)的量濃度的藥質(zhì)體(藥質(zhì)體的制備方法薄膜分散制備，取適量磷脂及所需阿糖胞苷脂質(zhì)前藥至圓底燒瓶中以氛仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入所需量的PBS磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L)，30eC超聲分散20min。此法可得具乳光的藥質(zhì)體溶液，粒經(jīng)200500nm，Zeta-Potential-20-30mV)，臨用前再稀釋2，10，20和100倍，使阿糖胞苷的終濃度為1.00pg/ml，0.50/ig/ml,0.10/xg/ml,0.05/ig/ml和0.01/xg/ml五個濃度。本組的陰性對照是空白脂質(zhì)體(空白脂質(zhì)體的制備同藥質(zhì)體制備，不加阿糖胞苷)。游離藥物組的陽性對照是將阿糖胞苷溶于含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液中制成lxlO—Sg/ml(0.03584/miol/ml)濃度的溶液，其余15個阿糖胞苷脂質(zhì)前藥(6a-o)溶于含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液中制成與其等物質(zhì)的量濃度的溶液。臨用前再稀釋2，10,20和100倍，使阿糖胞苷的終濃度為1.00/ig/ml，0.50pg/ml，0.10/xg/ml,0.05/xg/ml和0.01/ig/ml五個濃度。本組的陰性對照是含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液。二、試驗方法將HL-60細胞制成5xl04/ml細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100/il。實驗設(shè)不含腫瘤細胞組、陰性對照組、陽性對照組及各種藥物試驗組。按藥質(zhì)體和游離藥物分別加入上述不同濃度的陽性對照藥及所合成的化合物共16個藥物，每個濃度重復(fù)3孔，37°C5%C02培養(yǎng)48h，每孔加MTT5mg/ml25]ul37"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。將96孔板1000r/min離心10min，棄去上液，每孔加二甲亞砜100/il，振蕩器振搖10min，自動酶標(biāo)儀測定光密度OD值(測量波長570nm，參比波長630nm)。HL-60細胞存活率=[(抗癌藥物組OD值-不含細胞組OD值)/(細胞對照組光密度值-不含細胞組OD值)]xlOO。/。并計算半數(shù)抑制濃度(IC50)。三、試驗結(jié)果表1的數(shù)據(jù)表明標(biāo)題化合物的兩種劑型對HL-60細胞系的IC5。與陽性對照Ara-C相當(dāng)，對抗該種腫瘤細胞的活性均較好，化合物的藥質(zhì)體與其溶液比較并無顯著規(guī)律。該結(jié)果說明，本發(fā)明化合物(6a-o)具有很好的抗白血病細胞HL-60的活性，在細胞水平，藥質(zhì)體劑型與溶液型活性沒有明顯規(guī)律。表1本發(fā)明化合物(6a-o)及藥質(zhì)體對HL-60細胞株作用的IC5()<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>試驗例2本發(fā)明化合物(6a-o)及藥質(zhì)體對人宮頸癌細胞Hda增殖的抑制作用試驗一、試驗材料1、人宮頸癌細胞株Hela(從Sigma購買得到)用DMEM培養(yǎng)液(含10%滅活的胎牛血清，青鏈霉素的濃度最終各為100單位/ml)定期傳代培養(yǎng)。2、藥物配制藥質(zhì)體組的陽性對照是將阿糖胞苷制成2.5xl0—"g/ml(0.896/miol/ml)濃度的脂質(zhì)體，其余6a-o阿糖胞苷脂質(zhì)前藥按照實施例45的操作制成與其等物質(zhì)的量濃度的藥質(zhì)體，臨用前再稀釋5，10，50和100倍，使阿糖胞苷的終濃度為50.0/ig/ml,10.0)Ug/ml，5.0/Ag/m1,1.0/ig/ml和0.5pg/ml五個濃度。本組的陰性對照是空白脂質(zhì)體(制劑學(xué)工作同前)。游離藥物組的陽性對照是將阿糖胞苷溶于含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液中制成2.5xl0、/ml(0.896Mmol/ml)濃度的溶液，其余15個阿糖胞苷脂質(zhì)前藥溶于含4%DMS0的PBS磷酸鹽緩沖液中制成與其等物質(zhì)的量濃度的溶液。臨用前再稀釋5，10，50和100倍，使阿糖胞苷的終濃度為/ig/ml五個濃度。本組的陰性對照是含4%DMSO的PBS磷酸鹽緩沖液。二、試驗方法將Hela細胞制成5xl04/ml細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔10(^1。實驗設(shè)不含腫瘤細胞組、陰性對照組、陽性對照組及各種藥物試驗組。按藥質(zhì)體和游離藥物分別加入上述不同濃度的陽性對照藥及所合成的化合物共16個藥物，每個濃度重復(fù)3孔，37°C5%C02培養(yǎng)48h,每孔加MTT5mg/ml25/zl37。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。棄去上液，每孔加磷酸鹽緩沖液100Ml清洗，再加二甲亞砜lOO/d/孔，振蕩器振搖10min，自動酶標(biāo)儀測定光密度OD值(測量波長570nm，參比波長630nm)。Hela細胞存活率=[(抗癌藥物組OD值-不含細胞組OD值)/(細胞對照組光密度值-不含細胞組OD值)]xlOO。/。并計算半數(shù)抑制濃度(ICso)。三、試驗結(jié)果表2的數(shù)據(jù)表明標(biāo)題化合物的兩種劑型對Hda細胞系的ICso小于陽性對照Ara-C，化合物的藥質(zhì)體與其溶液比較，化合物的溶液IC5。小于藥質(zhì)體組。該結(jié)果說明，本發(fā)明化合物6a-o具有比阿糖胞苷更優(yōu)的抗宮頸癌細胞Hela細胞系的活性，在該細胞水平化合物的藥質(zhì)體劑型抗腫瘤活性低于溶液型。表26a-o及藥質(zhì)體對Hda細胞株作用的IC:<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>試驗例3阿糖胞苷脂質(zhì)前藥及藥質(zhì)體6a-o對S,8o腹水小鼠的治療作用一、動物模型建立取腹腔接種S咖腹水瘤第8天的昆明種小鼠一只，脫頸椎處死，用75%酒精消毒后置于超凈臺內(nèi)，用鑷子夾起腹部中線偏右的皮膚并用小剪刀剪一小口至可見乳白色腹水流出。將吸管由開口處輕輕插入腹腔吸出腹水。吸得的腹水加到裝有約3ml滅菌生理鹽水的20ml的試管中，使體積增至約10ml。用吸管輕輕吹氣，使腹水與生理鹽水混勻。試管加蓋，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。棄去上清液后，加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細胞均勻浮起，試管加蓋，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，棄去上清液。試管底部有的乳白色的膠狀物。腹水中若混有血液，離心后上清液里會出現(xiàn)一條紅色豎線，可用吸管輕輕吸出棄去。往試管底部的乳白色膠狀物中加9ml滅菌生理鹽水，用吸管輕輕吹氣，使瘤細胞均勻浮起。取100ul該懸浮液加至9.9ml滅菌生理鹽水中，混勻，得100倍稀釋液，混勻，加蓋，放入冰中待用。取100ul上述瘤細胞稀釋液置入Eppendoff小管中，加100ul臺盼蘭染液，混勻。取少許該混勻液加至計數(shù)板的計數(shù)池內(nèi)，于顯微鏡下計算4個大格中被染上藍色的存活瘤細胞的個數(shù)。將原液中的存活瘤細胞稀釋成2.0xl(^個/ml，用于接種。在無菌條件下用lml腹水瘤細胞接種液，用2%碘酒棉球和75%酒精棉球在雄性昆明種小鼠(20士2g)右側(cè)腹下消毒。并注入0.2ml瘤細胞液，緩緩抽出針頭。按此方法給每批昆明種小鼠接種，隨機分組，放入動物室飼養(yǎng)。二、藥物配制本實驗設(shè)藥物混懸劑和藥質(zhì)體兩種劑型，混懸劑治療組為各化合物的CMC-Na混懸液，陽性對照為阿糖胞苷的CMC-Na溶液，陰性對照為CMC-Na溶液；藥質(zhì)體治療組為各化合物的藥質(zhì)體，分散體系為生理鹽水溶液，陽性對照是阿糖胞苷的脂質(zhì)體，陰性對照為空白脂質(zhì)體；另外還設(shè)有阿糖胞苷生理鹽水溶液組及生理鹽水組。各組藥物以7.8mmol/L等摩爾濃度配制，藥質(zhì)體制備方法同細胞評價用藥，分散體系為生理鹽水；藥物混懸液制備稱取藥物并研碎，用0.5。/。CMC-Na制成混懸液。三、試驗方法將右側(cè)腋下接種有腹水瘤的小鼠隨機分組，每組10只，共36組。各組小鼠正常詞養(yǎng)，每天腹腔注射上述藥物。7天后將各組荷瘤小鼠處死，取瘤稱重，按抑瘤率=[(對照組平均瘤重一治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重]xlOOX計算抑瘤率。獲得的數(shù)據(jù)以(X±SD)表示，組間用雙樣本等方差的t檢驗。四、試驗結(jié)果試驗結(jié)果表明，阿糖胞苷脂質(zhì)前藥(6a一)及藥質(zhì)體對S^腹水小鼠的腫瘤有顯著的抑制作用(見表3，表4)。表36a-o的藥質(zhì)體對S^腹水小鼠的治療作用<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>n=10,*)與空白脂質(zhì)體組瘤重比較，PO.01;#)與阿糖胞苷生理鹽水溶液組瘤重比較,P<0.05<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>n=10，*)與空白CMC-Na組瘤重比較,P<0.0權(quán)利要求1.通式(I)的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物id="icf0001"file="A2007100636720002C1.gif"wi="69"he="40"top="33"left="67"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R選自-(CH2)8CH3、-(CH2)12CH3或-(CH2)16CH3；AA選自Val、Met、Arg、Tyr或Glu殘基。2、一種制備權(quán)利要求l脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的方法，包括(1).在二環(huán)己基羰二亞胺、1-羥基苯并三氮唑和N-甲基嗎啉存在下將脂肪酸引入到氨基酸甲酯的&氨基，得到脂肪酰一氨基酸甲酯；(2).在堿水溶液中將脂肪酰一氨基酸甲酯水解,制備脂肪酰一氨基酸；(3).在l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺和1-羥基苯并三氮唑存在下將所制備的脂肪酰一氨基酸引入到阿糖胞苷的4位氨基上；或者在l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺和l-羥基苯并三氮唑存在下將Boc-Glu-(OBzl)-OH引入到阿糖胞苷的4位氨基上，接著在4N氯化氫-乙酸乙酯溶液中脫Boc,再在l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺和1-羥基苯并三氮唑存在下與脂肪酸縮合，然后在Pd/C存在下氫解，即得。3、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于步驟(1)和步驟(3)中所述的脂肪酸為葵酸、肉豆蔻酸或硬脂酸；步驟(1)中所述的氨基酸甲酯為纈氨酸甲酯、蛋氨酸甲酯、酪氨酸甲酯、精氨酸甲酯或谷酸甲酯。4、按照權(quán)利要求2的方法，其特征在于步驟(2)中所述的堿是濃度為2N的NaOH。5、一種制備權(quán)利要求1脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的藥質(zhì)體的方法，包括將磷脂和脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物用氯仿溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，加入PBS磷酸鹽緩沖液，30°C超聲分散20分鐘，得具乳光的藥質(zhì)體溶液。6、一種脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的藥質(zhì)體，其特征在于，是由權(quán)利要求5的方法制備得到的產(chǎn)品。7、權(quán)利要求1的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。8、權(quán)利要求6的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的藥質(zhì)體在制備抗腫瘤藥物中的用途。9、權(quán)利要求1的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物在制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的靶向制劑材料中的用途。10、權(quán)利要求6的脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的藥質(zhì)體在制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的靶向制劑材料中的用途。全文摘要本發(fā)明公開了脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物、其制備方法及其在抗腫瘤中的應(yīng)用。本發(fā)明還公開了該脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物的藥質(zhì)體、其制備方法以及該藥質(zhì)體在抗腫瘤和制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的靶向制劑材料中的用途。本發(fā)明脂肪酰氨基酰阿糖胞苷綴合物較阿糖胞苷相比，其跨膜能力更強、生物利用度高、半衰期長、并具有兩親性。體內(nèi)和體外試驗表明，本發(fā)明化合物及其藥質(zhì)體具有優(yōu)秀的抗腫瘤活性。文檔編號A61K47/16GK101240002SQ20071006367公開日2008年8月13日申請日期2007年2月7日優(yōu)先權(quán)日2007年2月7日發(fā)明者劉伯陽,崔國輝,彭師奇,明趙申請人:首都醫(yī)科大學(xué)