專利名稱：：3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯鈉鹽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及3,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽及其用途。技術(shù)背景癌癥是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病。在全球，癌癥每年大約奪去600萬人的生命，并有1000萬人處于死亡的邊緣。世界衛(wèi)生組織預(yù)測21世紀(jì)癌癥將成為人類的"第一殺手"。根據(jù)全國性死因回顧調(diào)査表明，20年來中國的癌癥發(fā)病和死亡率逐年上升，每5個因病死亡的人中，就有l(wèi)個是死于癌癥，每200個家庭中，有l(wèi)個家庭因有癌癥病人而遭受磨難。在過去的幾十年中出現(xiàn)了多種癌癥治療方法，主要包括手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療、激素治療、基因治療和免疫治療。其中，手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療已成為主要手段?；瘜W(xué)治療指運用化學(xué)藥物來治療癌癥?；瘜W(xué)藥物治療是腫瘤診療中發(fā)展最快的一個領(lǐng)域，大量的針對不同靶點的新藥開始應(yīng)用于臨床，對藥物作用機制及藥代動力學(xué)研究的進(jìn)展，也使臨床給藥途徑與方式更加適合于殺傷腫瘤細(xì)胞、保護(hù)正常組織。目前化學(xué)治療的藥物主要有影響核酸生物合成的藥物(抗代謝物)，如氟尿嘧瞎、6-羥基嘌呤、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、羥基脲；直接破壞DNA并阻止其復(fù)制的藥物如烷化劑類；抗腫瘤抗生素類如順鉑及卡鉑；干擾轉(zhuǎn)錄過程阻止RNA合成的藥物，如放線菌素D、阿霉素、其他抑制轉(zhuǎn)錄過程的抗生素；影響蛋白質(zhì)合成的藥物，如長春堿類、鬼臼毒素類、三尖杉酯堿、L-門冬酰胺酶；激素類，如腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素、雄激素、他莫西芬、氨魯米特。目前常用抗癌化療與放療的方法可造成對人體不利的嚴(yán)重毒副反應(yīng)。許多天然藥物的干擾微管蛋白聚合或解聚特性，被認(rèn)為是具有抗腫瘤的活性，包括長春新堿，紫杉烷和大環(huán)內(nèi)酯類抗腫瘤藥。微管在細(xì)胞分裂中具有重要作用，開發(fā)微管蛋白結(jié)合因子是基于他們具有干擾細(xì)胞增殖的能力。微管蛋白的解聚因子，如秋水仙素和長春新堿，具有抗有絲分裂的作用，導(dǎo)致腫瘤血管閉合。但是這個使腫瘤血管閉合的作用只能在藥量接近MTD(最高耐受劑量)時產(chǎn)生。最新被發(fā)現(xiàn)的血管生成抑制因子Endostatin，對新生血管生成有抑制作用，而對已形成的血管并沒有明顯作用，對腫瘤血管也沒有明顯的耙向作用。近幾年發(fā)現(xiàn)的一類新型的微管蛋白解聚因子能解決這個問題，它能在低于MTD的劑量下就能使血管閉合(ExpertOpinInvestigDrugs.2004Sep;13(9)1171-82)。LoYcVincent等人在2005年提到了一類具有類似屬性的新型微管蛋白解聚因子,作為血管靶點因子(VTAs)能破壞微管蛋白骨架，文獻(xiàn)數(shù)據(jù)顯示血管靶點因子能選擇性誘導(dǎo)腫瘤血管的衰退，部分通過VE-cadherin信號通道。這類微管蛋白解聚因子選擇性的破壞腫瘤血管，并阻止新生腫瘤血管形成，而且對正常血管系統(tǒng)沒有影響。同時它能抑制微管蛋白的聚合、選擇性的導(dǎo)致腫瘤血管功能紊亂和結(jié)構(gòu)的破壞、誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡，使得腫瘤細(xì)胞失去營養(yǎng)和氧氣的支持，而發(fā)揮其殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。GillianM.Tozer等人于2005年曾在具影響力的雜志NatureRevCancer中報道，指出該類化合物不但影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，也影響內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，快速改變血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)，引起內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，打斷血管中內(nèi)皮細(xì)胞的連接，從而迅速導(dǎo)致腫瘤血管功能紊亂和結(jié)構(gòu)的破壞。由于一般正常血管都是通過平滑肌細(xì)胞支撐的，這一類化合物只作用于沒有平滑肌細(xì)胞支持的血管，對平滑肌支持的血管沒有影響，從而迅速并有選擇性的導(dǎo)致腫瘤血管功能紊亂和結(jié)構(gòu)的破壞，進(jìn)而能選擇性的作用于腫瘤細(xì)胞，對正常細(xì)胞的毒性大大降低(NatRevCancer.2005Jun;5(6)423-35、J.Clin.Invest"November1，2005;115(11):2992-3006)。這類藥物目前被認(rèn)為是抗腫瘤最有前景的藥物之一。目前國外同時在開展研究的該類藥物只有CombretastatinA-4進(jìn)入臨床研究，由于通過雙鍵連接，在Combretastatin中芪類單元的最有效破壞腫瘤血管是順式構(gòu)型，而反式構(gòu)型的芪類化合物對腫瘤沒有抑制作用。由于存在順反異構(gòu)，極易發(fā)生異構(gòu)化等反應(yīng)，反式結(jié)構(gòu)不但沒有藥效，同時也會帶來一定的毒副作用(CombretastatinA-4LD50為500mg/kg)，使得CombretastatinA-4在保存和實際應(yīng)用中帶來了很大的困難。本發(fā)明中3，4，5，4，-四甲氧基-ci，e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽為合成的化合物，其結(jié)構(gòu)式如式(I):它是由本公司自己創(chuàng)新、研制的一種全新化學(xué)物質(zhì)、全新結(jié)構(gòu)的腫瘤血管抑制劑，不同于CombretastatinA-4，兩個苯環(huán)是通過單鍵連接，使得3，4，5,4'-四甲氧基-a，P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽和(:01111^&31^1^-4結(jié)構(gòu)的不同、構(gòu)象、結(jié)合力、逆反等作用都不同，極大的提高了藥物的穩(wěn)定性(光能使CombretastatinA-4異構(gòu)為反式構(gòu)型。因此需要避光保存)，也提高了對微管蛋白的作用功能。3，4,5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽具有良好的水溶性，它通過定向打靶，針對性地作用于是腫瘤血管，對非腫瘤血管沒有作用，這比直接抑制腫瘤細(xì)胞生長的傳統(tǒng)化療藥物有更大的優(yōu)勢；克服了傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物的毒副作用大，會導(dǎo)致耐藥的局限。對其在抗腫瘤的研究表明，3，4，5,4'-四甲氧基-a,e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽不但對腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用，聯(lián)合用藥的試驗表明，3,4，5，4，-四甲氧基-ct,e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽對于化療藥物具有顯著的增效作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于提供式(I)化合物，化學(xué)名為3，4，5，4'-四甲氧基-a，P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽。o式(I)中Na也可以為H、K或NH4等金屬、銨鹽或有機胺。本發(fā)明的另一個目的在于提供含有式(I)化合物的藥物組合物，以式(I)化合物為藥效成分，添加藥學(xué)上可接受的輔料，可以獲得本發(fā)明的藥物組合物。本發(fā)明的再一個目的在于提供式(I)化合物和含有式(I)化合物的藥物組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一個目的在于提供式(I)化合物和含有式(I)化合物的藥物組合物在制備聯(lián)合抗腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明所指的腫瘤可為實體腫瘤例如肉瘤和癌(例如纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝臟腫瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維耳姆斯氏瘤、頸癌、子宮癌、睪丸癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤、黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤)，也可為血液瘤例如白血病(例如急性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞白血病、急性髓母細(xì)胞白血病、急性前髓細(xì)胞白血病、急性髓單核細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞細(xì)胞白血病、急性紅白血病、慢性白血病、慢性髓細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病)、真性紅細(xì)胞增多、淋巴瘤(何杰金氏病、非何杰金氏病)、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥、重鏈病。優(yōu)選地，為肉瘤、肝癌、肺癌、黑色素瘤、白血病、人食管癌、胃腺癌。研究表明，3，4,5，4，-四甲氧基-ci，g-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽通過抑制微管蛋白的聚合、選擇性的導(dǎo)致腫瘤血管功能紊亂和結(jié)構(gòu)的破壞、誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡，使得腫瘤細(xì)胞失去營養(yǎng)和氧氣的支持，而發(fā)揮其殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。3，4，5，4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽還可以聯(lián)合其他治療方法，如化學(xué)治療、外科手術(shù)、放射治療、免疫療法、抗血管生成療法或者基因療法，顯著增加對腫瘤的治療效果。優(yōu)選地，所述另外的治療為使用抗腫瘤藥物的化學(xué)療法。更優(yōu)選地，所述另外的治療為使用細(xì)胞毒素和抗增殖、抑制血管生成的藥物的治療，優(yōu)選的藥物包括順鉑、氟尿嘧啶、阿霉素、瘤可寧、美法侖、紅豆杉醇、依立替康(irinotecan，CPT-ll)、阿瓦斯汀(Avastin)、ZD6126(N-acetylcochinol-O-phosphate)和脈管轉(zhuǎn)點蛋白(vascularendothelial-cadherin)的抗體anti-VE-cadherin(BV13)或againstVE-cadherin(E4G10)等。在與DDP聯(lián)合用藥對S180腫瘤模型實驗中(實施例)，3，4，5，4'-四甲氧基-01,(3-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽顯示了與DDP的聯(lián)合用藥對抑制S180腫瘤有很好的協(xié)同作用。以3,4，5,4，-四甲氧基-a，e-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽為藥效成分，添加藥學(xué)上可接受的藥用輔料并通過本領(lǐng)域的常規(guī)方法可以制備用于本發(fā)明的藥物組合物。本藥物組合物的劑型可以是口服給藥的劑型諸如片劑、膠囊(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊和微囊)、粉劑、顆粒劑和糖漿劑；非口服給藥的劑型諸如注射劑、凍千制劑、栓劑、丸劑、凝膠劑和貼劑。除這些常規(guī)劑型外，還可以將口服的速釋固體制劑(例如片劑、顆粒劑等)和用于口服或非口服給藥的緩釋制劑(片劑、顆粒、精細(xì)顆粒、丸劑、膠囊、糖漿、乳劑、懸浮液、溶液)用于本發(fā)明，通過常規(guī)方法也可以制備這些制劑。本發(fā)明中的制劑可以是包衣或未包衣的形式，視需要而定。本發(fā)明優(yōu)選的是將3,4,5,4'-四甲氧基-a,P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽用于注射給藥和口服的劑型。本發(fā)明中的藥用輔料包括用于固體制劑的賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、包衣劑等，或用于半固體制劑、液體制劑的溶劑、增溶劑、懸浮劑、等滲劑、緩沖劑、潤膚劑、乳化劑等，此外，也可以根據(jù)需要使用其它藥用添加劑諸如防腐劑、抗氧化劑、著色劑、甜味劑和矯味劑等。下列實施例只用于說明發(fā)明，而對本發(fā)明的保護(hù)范圍無任何的限制。具體實施方式3,4,5,4，-四甲氧基-a,P-二苯乙垸-3，-0魂酸酯鈉鹽的制備實施例13，4，5，4，-四甲氧基-a,P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽的制備3,4，5，4，-四甲氧基-a,e-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司提供，其他試劑材料如無特別說明均為市售產(chǎn)品。3，4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽的制備方法具體描述如下1、3，4,5-三甲氧基芐醇的制備250ml的三頸瓶中，加入3，4,5-三甲氧基苯甲醛15g(76.45mmol)，200ml的無水乙醇，加熱4(TC溶解，再加入硼氫化鈉1.48g(38.23mmo1)，加熱回流45min后，TLC檢測，反應(yīng)完全后，冷卻至室溫，加入去離子水10ml(555.8mmo1)，淬滅后，抽濾，濾渣用20ml無水乙醇洗滌，合并濾液后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，加入lOOml二氯甲烷溶解，用2N氫氧化鈉溶液50mlx2洗滌，再用去離子水50mlx2洗滌，加入適量的無水硫酸鎂干燥過夜。過濾，用20ml二氯甲烷洗滌濾渣，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，得3，4，5-三甲氧基芐醇，無色油狀物14.05g，收率92.72%。得到的產(chǎn)物不需要進(jìn)一步純化，即可進(jìn)行下一步反應(yīng)。若想得到純品可以減壓蒸餾，收集BP216—218'C/12mmHg的餾分。2、3,4，5-三甲氧基芐溴的制備3，4，5-三甲氧基芐醇14.05g(70.89mmo1)，用100ml二氯甲烷溶解，加入到250ml的三頸瓶中，三溴化磷6.73ml(70.89mmo1)溶于25ml二氯甲烷中，室溫反應(yīng)50min后，冰浴冷卻，緩慢滴加18ml去離子水18ml(l.Omol)，淬滅反應(yīng)。然后再用100mlx2去離子水洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，用20ml二氯甲烷洗滌濾渣，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，真空干燥，得3,4,5-三甲氧基芐溴，淡黃色固體16.05g，收率84.44%。得到的產(chǎn)物不需要進(jìn)一步純化，即可進(jìn)行下一步反應(yīng)。若想得到純品可以用乙酸乙酯正己烷=1:3重結(jié)晶，得到白色片狀晶體。3、3，4,5-三甲氧基芐溴-三苯基溴化磷的制備3，4，5-三甲氧基芐溴16.05g(61.47mmol)溶于150ml甲苯中，加入到250ml的三頸瓶中，加入三苯基磷16.12g(61.47mmo1)，立即溶解，加熱回流lhr，有白色固體析出，冷卻到室溫，抽濾，濾餅用30ml甲苯洗滌，真空干燥后，得3,4，5-三甲氧基節(jié)溴三苯基溴化磷，白色粉末固體27.81g，收率為86.44%得到的產(chǎn)物不需要進(jìn)一步純化，即可進(jìn)行下一步反應(yīng)。若想得到純品可以用丙酮洗滌固體，得白色粉末固體。4、芐基保護(hù)異香蘭素的制備250ml三頸瓶中，加入異香蘭素15g(98.59mmo1)，200ml無水乙醇，加熱到40。C溶解，加入碳酸鉀9g(65.07mmo1)，攪拌下加入氯化節(jié)15ml(130.13mmol)，加熱回流lhr，TLC檢測反應(yīng)完全后，冷卻到5(TC，趁熱過濾，濾液放入冰箱中冷卻過夜，晶體析出，抽濾，濾餅用30ml無水乙醇洗滌，真空干燥后，得芐基保護(hù)異香蘭素，白色針狀晶體19.72g，收率為82.56%。得到的產(chǎn)物不需要進(jìn)一步純化，即可進(jìn)行下一步反應(yīng)。若想得到純品可以用無水乙醇重結(jié)晶，得到白色柱狀晶體。5、(Z)和(E)-3,4,5-三甲氧基-3，-芐氧基-4，-甲氧基二苯乙烯的制備250ml三頸瓶中，加入3,4,5-三甲氧基芐溴三苯基溴化磷20.00g(38.21mmo1)，150ml四氫呋喃，攪拌懸浮液，芐基保護(hù)異香蘭素10.00g(41.27mmo1)溶于70ml四氫呋喃，放入100ml的滴液漏斗中。反應(yīng)瓶中加入固體叔丁醇鉀7.46g(66.49mmo1)，反應(yīng)體系變?yōu)檠t色，室溫攪拌5min，緩慢滴加芐基保護(hù)異香蘭素的溶液，再室溫攪袢20min，TLC檢測反應(yīng)完全后，倒入500ml的分液漏斗中，加入140ml去離子水后，溶液分層，加入乙醚300mlx2萃取，合并乙醚層，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾餅用50ml乙醚洗滌，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，得油狀物25g，加入20ml無水乙醇固化，抽濾得淡黃色固體12.50g，收率為80.48%。6、(Z)和(E)-3，4,5-三甲氧基-3，-芐氧基-4，-甲氧基二苯乙烯的重結(jié)晶50ml的圓底燒瓶中，加入順反異構(gòu)體12.50g(30.75mmo1)，加入20ml無水乙醇，加熱部分固體溶解后，室溫攪拌，抽濾，濾餅用10ml的無水乙醚洗滌后，紅外燈干燥，得純順反異構(gòu)體9.27g，淡黃色粉末固體，收率為74.16%。7、3，4,5-三甲氧基-3，-羥基-4，-甲氧基二苯乙烷的制備250ml的三頸瓶中，加入純(Z)和(E)-3，4,5-三甲氧基-3，-芐氧基-4，-甲氧基二苯乙烯5.14g(12.56mmo1)，溶于100ml乙酸乙酯和60ml無水乙醇中，淡黃色溶液，加入5Q/。鈀炭0.50g后，攪拌下通氫氣，室溫攪拌lhr，過濾，得無色濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，得油狀物4.05g，3，4，5-三甲氧基-3，-羥基-4，-甲氧基二苯乙烷粗品，收率為100%。8、3,4，5-三甲氧基-3，-羥基-4，-甲氧基二苯乙烷的精制500ml的圓底燒瓶中，加入3，4，5-三甲氧基-3，-羥基-4，-甲氧基二苯乙烷粗品4.05g(12.72mmo1)，用20ml無水乙醇溶解，若有不溶物，過濾除去，室溫靜止，有晶體析出，放置過夜，溶劑揮發(fā)完全，大量白色晶體析出。過濾，濾餅用乙醇洗滌，白色晶體3.56g，收率為100%。9、成鹽反應(yīng)在250ml圓底燒瓶中加入3，4,5-三甲氧基-3，-羥基-4，-甲氧基-二氫化二苯乙烯10mmo1，N、N-二甲基苯胺75mmo1，并加入與N、N-二甲基苯胺等體積的CH2C12，在冰鹽水浴中攪拌(-5-10。C)，然后逐滴加入氯磺酸12.5mmo1。加完后在鹽水浴中繼續(xù)攪拌lh。然后移去鹽水浴，在室溫下攪拌24h。用10mo1/1的NaOH在攪拌下將反應(yīng)液調(diào)pH至lO，冷卻(或冰柜中冷卻)后過濾。并用無水乙醚洗。干燥后將固體產(chǎn)物溶解在甲醇中過柱。溶劑抽干后得3,4，5，4，-四甲氧基-a,P-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽。白色固體(易吸水)。物理性質(zhì)鑒定1HNMR(D20):S2.79(d，lH,J=13.7Hz，H-la，)，2.80(d，lH，J=13.7Hz,H-la)，3.67(s，3H，4，=OCH3),3.74(s,6H，3，5國OCH3)，3.75(s，3H，4-OCH3)，6.55(s，2H，H-2，6)，6.58(d，lH，J=8.36Hz,H-5，)，6.85(d,lH,J=8.36Hz，H-6，)，7.33(d,lH,J=1.8Hz,H-2，).13CNMR(D20):5152.27，148.05，148.00，143.35，139.54，135.14，134.71，122.32，120.63,114.33，108.03，106.21，61.01，56.30，56.09，37.590，36.70;IR(KBr):"539s，3433m，3001w，2939m，2841m，1589s，1508s，1446m，1422m，1330m，1262m，1242s，1174m，1131s，1014m，619m，cm畫l.ESIMS:m/z:398.427(M+).Calc.421.46forC18H2208SNa.3,4,5,4，-四甲氧基-ot,B-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽的安全性評價實施例23，4,5,4，-四甲氧基-a,J3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽的LDs。測定l.實驗動物選用KM小鼠，上海斯萊克實驗動物中心提供，雌雄各半，共設(shè)6組，每組10只；用苦味酸標(biāo)記。2.3，4，5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽(AS)溶液的配置:AS由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司提供，按照實施例1所述方法制備。配制成等比藥液用0.9X的NaCl溶液溶解，配制成336mg/7ml、316.96mg/7ml、299.32mg/7ml、282.52mg/7ml、266.84mg/7ml、252mg/7ml濃度的藥液。3.給藥劑量以0.5ml/20g的劑量，從低劑量往高劑量給藥。4.給藥方式尾靜脈注射。5.實驗方法:給藥后0.25h、0.5h、lh、2h、4h、24h分別觀察一次，以后每天觀察1次，持續(xù)14天，第15天處死未死亡的小鼠，記錄死亡率。表l劑量一死亡率數(shù)據(jù)表(n=3)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注-n為實驗重復(fù)次數(shù)四、實驗結(jié)果AS的LD5。=1077mg/kg，LD5()(Feiller校正)95%的置信區(qū)間為1033mg/kg￡LD50Sl134.7mg/kg說明3,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽毒性很低，具有很好的臨床用藥安全性。3,4,5,4，-四甲氧基-ouB-二苯乙垸-3，-0羞酸酯鈉鹽在Sl柳腫瘤模型藥效學(xué)試驗實施例93,4，5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽對S180腫瘤作用1、實驗樣品(1)樣品3，4，5，4'-四甲氧基-a,p-二苯乙垸-3，-0-硫酸酯鈉鹽(AS)，由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司提供，按照實施例1方法制備。用生理鹽水溶解配制為所需濃度。(2)對照品注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞制藥股份有限公司，批號04123021。配制時用生理鹽水溶解。2、動物和瘤株(1)S180肉瘤荷瘤KM小鼠。(2)KM小鼠50只，雌性，體重18-22g，由浙江省中醫(yī)學(xué)院提供。3、實驗方法(1)S180荷瘤KM小鼠，無菌條件下抽取腹水，按照l:3的比例用生理鹽水稀釋，按0.2ml/只給KM小鼠右前肢腋下皮下接種。次日將小鼠隨機均分為5組，每組10只。(2)接種腫瘤第3天開始按體重給藥，靜脈0.5ml/20g，連續(xù)11天，給藥后第11天處死，取瘤塊稱重，計算抑瘤率。(3)給藥劑量(mg/kg./d)及給藥途徑AS:50mg/kg，尾靜脈注射給藥AS:100mg/kg，尾靜脈注射給藥AS:200mg/kg，尾靜脈注射給藥CTX:30mg/kg，尾靜脈注射給藥另設(shè)空白對照組，尾靜脈注射0.9%NaCl0.5ml。(4)結(jié)果判定根據(jù)以下公式對照組瘤重一給藥組瘤重抑瘤率=-X100%對照組瘤重二、實驗結(jié)果實驗期間各組均未見死亡。AS用藥抑制S180肉瘤實驗的實驗結(jié)果見表1。表1、AS用藥抑制S180肉瘤荷瘤鼠腫瘤實驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)果分析-3，4，5，4'-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽對S180腫瘤有很好抑制作用。3,4,5,4，-四甲氧基-a,B-二苯乙烷-3，-O魂酸酯鈉鹽聯(lián)合DDP在S180腫瘤模型藥效學(xué)試驗實施例103,4，5，4，-四甲氧基-a，p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽聯(lián)合DDP對SI80腫瘤作用一、實驗內(nèi)容1、實驗樣品(1)3,4,5，4，-四甲氧基-a，l3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽(AS)，由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司提供，按照實施例1方法制備。用生理鹽水溶解配制為所需濃度。(2)順鉑注射用順鉑(DDP)，齊魯制藥有限公司，批號5120282DC。配制時用生理鹽水溶解(3)對照品注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞制藥股份有限公司，批號04123021。配制時用生理鹽水溶解。2、動物和瘤株(1)S180肉瘤荷瘤KM小鼠。(2)KM小鼠70只，雌性，體重18-22g，由浙江省中醫(yī)學(xué)院提供。3、實驗方法(1)S180荷瘤KM小鼠，無菌條件下抽取腹水，按照l:3的比例用生理鹽水稀釋，按0.2ml/只給KM小鼠右前肢腋下皮下接種。次日將小鼠隨機均分為7組，每組10只。(2)接種腫瘤第3天開始按體重給藥，靜脈0.5ml/20g，連續(xù)11天，給藥后第11天處死，取瘤塊稱重，計算抑瘤率。(3)給藥劑量(mg/kg./d)及給藥途徑AS:50mg/kg，尾靜脈注射給藥AS:100mg/kg，尾靜脈注射給藥AS:200mg/kg，尾靜脈注射給藥DDP:lmg/kg，尾靜脈注射給藥AS+DDP:50mg/kg+lmg/kg，尾靜脈注射給藥CTX:30mg/kg，尾靜脈注射給藥DDP:lmg/kg，尾靜脈注射給藥另設(shè)空白對照組，尾靜脈注射0.9%NaCl0.5ml。(4)結(jié)果判定根據(jù)以下公式-對照組瘤重一給藥組瘤重抑瘤率=--xioo%對照組瘤重二、實驗結(jié)果實驗期間各組均未見死亡。AS以及AS與DDP聯(lián)合用藥抑制S180肉瘤實驗的實驗結(jié)果見表2。表2、AS與DDP聯(lián)合用藥抑制S180肉瘤荷瘤鼠腫瘤實驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>結(jié)果分析3，4,5，4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽與DDP的聯(lián)合用藥對抑制S180腫瘤有較好的協(xié)同作用。3,4,S,4，-四甲氧基-ot,^二苯乙烷-3，-0魂酸酯鈉鹽與DDP聯(lián)合用藥對Lewis肺癌小鼠模型抑瘤率實驗實施例103，4,5，4，-四甲氧基-a，卩-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽聯(lián)合DDP對Lewis肺癌小鼠模型的腫瘤抑制作用一、實驗內(nèi)容1、實驗樣品(1)3，4,5，4，-四甲氧基-a,p-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽(AS):原料藥，由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司提供，按照實施例1方法制備。批號061025。用生理鹽水溶解配制為所需濃度(2)順鉑注射用順鉑(DDP)，齊魯制藥有限公司，批號5120282DC;配制時用生理鹽水溶解。(3)對照品注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞制藥股份有限公司，批號04123021;配制時用生理鹽水溶解。2、動物和瘤株(1)Lewis肺癌荷瘤C57BL/6J小鼠(2)C57BL/6J小鼠70只，雌性，體重17-21g。由浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司動物房提供。3、實驗方法(1)Lewis肺癌荷瘤C57BL/6J小鼠，無菌條件下取瘤，磨碎，用生理鹽水按照1:3(重量:體積)的比例稀釋，按0.21111/只給小鼠右前肢腋下皮下接種。次日將小鼠隨機均分為7組，每組10只。(2)動物接種待腫瘤生長致可觸及后開始按體重給藥，靜脈0.5ml/20g,連續(xù)11天，根據(jù)體重給藥，接種后第19天處死，取瘤塊稱重，計算抑瘤率。(3)給藥劑量(mg/kg./d)及給藥途徑如表3:表3給藥劑量(mg/kg./d)及給藥途徑<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>(4)結(jié)果判定根據(jù)以下公式對照組瘤重一給藥組瘤重抑瘤率=-xioo%對照組瘤重二、實驗結(jié)果實驗期間各組均未見死亡。AS以及AS與DDP聯(lián)合用藥抑制Lewis肺癌腫瘤實驗的實驗結(jié)果見表4。表4、<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>四、結(jié)果判定3，4，5，4，-四甲氧基-a，l3-二苯乙烷-3，-0-硫酸酯鈉鹽對Lewis肺癌小鼠模型的有較好的腫瘤抑制作用，其與DDP對Lewis肺癌小鼠模型的聯(lián)合治療對抑制腫瘤生長有一定的協(xié)同作用。3,4,5,4，-四甲氧基-a，P-二苯乙烷-3，-O-硫酸酯鈉鹽通過定向打耙，針對性地作用于腫瘤血管，對所有的實體瘤均有抑制腫瘤的效果，對于同類藥物CombretastatinA-4也有各種適應(yīng)證的研究報道，因此可利用以上實驗作出各種改變，適用的所有實體瘤均在本發(fā)明要求的權(quán)利范圍之內(nèi)。以上對本發(fā)明實施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。權(quán)利要求1.具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯鈉鹽id="icf0001"file="A2007100634720002C1.gif"wi="85"he="54"top="48"left="60"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2、含有權(quán)利要求1所述的式(I)化合物的藥物組合物。3、式(I)化合物或含有式(I)化合物的藥物組合物在制備抗腫瘤和/或抑制腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(1)。4、權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中Na為H、K或NH4、銨鹽、有機胺及其他金屬鹽或有機鹽替代。5、權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述的腫瘤為實體瘤。6、權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述實體瘤為肉瘤和癌。7、權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述肉瘤和癌為纖維肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝臟腫瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、維耳姆斯氏瘤、頸癌、子宮癌、睪丸癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤、黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤或成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤。8、權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤為肉瘤。9、權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其中所述腫瘤為肺癌。10、式(I)化合物或含有式(I)化合物的藥物組合物與抗腫瘤治療劑的組合在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>11、權(quán)利要求io所述的應(yīng)用，其中所述抗腫瘤治療劑為化療藥物。12、權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其中所述化療藥物為順鉬、氟尿嘧啶、阿霉素、瘤可寧、美法侖、紅豆杉醇、依立替康、阿瓦斯汀、N-acetylcochinol--phosphate或脈管鈣黏蛋白的抗體anti-VE-cadherin或againstVE-cadherin。13、權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其中所述化療藥物為順鉬。全文摘要本發(fā)明涉及式(I)化合物，3，4，5，4’-四甲氧基-α，β-二苯乙烷-3’-O-硫酸酯鈉鹽及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。文檔編號A61P35/00GK101235003SQ20071006347公開日2008年8月6日申請日期2007年2月1日優(yōu)先權(quán)日2007年2月1日發(fā)明者周丹萍,寧李,李亦平,陳立鉆申請人:浙江賽爾生物醫(yī)學(xué)研究有限公司