專利名稱：2,5,6－三取代嘧啶酮衍生物和含有所述衍生物的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體涉及一類新型2，5，6-三取代嘧啶酮化合物及其藥用鹽，其水合物和溶劑化物，其多晶和共晶，其同樣生物功能的前體和衍生物，其制備方法以及含有一個或多個此類化合物的組合物在治療和預防病毒性感染特別是人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)和甲、乙型流感病毒感染藥物中的應用。
背景技術：
艾滋病(AIDS)即獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired immune deficiency syndrome)是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)所導致的流行性傳染病。
逆轉(zhuǎn)錄酶(Reverse transcriptase，RT)在HIV從mRNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA的過程中起了決定性作用，因此成為抗艾滋病藥物設計的重要靶點之一。
在現(xiàn)有的抗HIV藥物研究中，非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)因其高效低毒等優(yōu)點而成為各國藥物化學家關注的熱點之一。目前，經(jīng)美國FDA批準上市的抗HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑有三種奈維拉平(Nevirapine)、德拉韋定(Delavidine)、依非韋倫(Efavitrenz)，另外α-APA089439、HBY097、TMC-125等正在進行臨床研究。經(jīng)典的NNRTIs只作用于HIV-1病毒，而對HIV-2病毒無效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種新型的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑2，5，6-三取代嘧啶酮類化合物。該系列化合物不僅具有良好的抗HIV-1病毒生物活性，而且對HIV-2 ROD病毒株也顯示出較好的抑制作用。
本發(fā)明所涉及的是具有通式I的2，5，6-三取代嘧啶酮類化合物，其N-氧化物、立體異構體形式、立體異構體混合物或藥學上可接受的鹽 式中-a1＝a2-a3＝a4-表示下式的二價基團，
-CH＝CH-CH＝CH- (a-1)-N＝CH-CH＝CH-(a-2)-N＝N-CH＝CH- (a-3)-N＝CH-N＝CH- (a-4)-N＝CH-CH＝N- (a-5)n為0，1，2，或3；且當-a1＝a2-a3＝a4-為(a-1)時，則n也可為4；R1選自氫；鹵素；氰基；硝基；羥基；氨基；三氟甲基；被一個或多個鹵素原子、氰基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基；或YR5。
R2選自被一個或多個鹵素原子、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C3-12環(huán)烷基、C3-12環(huán)烯基、C3-12雜環(huán)、芳基、五元或六員芳雜環(huán)；或YR5。
R3，R4分別獨自選自氫；鹵素；氰基；硝基；羥基；氨基；羧基；三氟甲基、被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、芳甲?；?、五元或六元芳雜環(huán)；或YR5；當R3和R4處于鄰位時，可以分別結合在一起形成如下形式的二價基團-CH2-CH2-CH2-CH2-(b-1)-CH＝CH-CH＝CH- (b-2)-N＝CH-CH＝CH- (b-3)-N＝N-CH＝CH-(b-4)-N＝CH-N＝CH-(b-5)-N＝CH-CH＝N-(b-6)X選自O，S，S(O)1，S(O)2，C＝O，R5N，或R6R7C。
Y選自O，S，NH。
R5選自氫；被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、芳甲?；?、五元或六元芳雜環(huán)。
R6，R7分別獨自選自氫；鹵素；氰基；羥基；硝基；三氟甲基；被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基取代或未取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、五元或六元芳雜環(huán)。
本發(fā)明所述具有通式I的化合物，可用下述兩種方法制備。所有的原料都是通過這些示意圖中描述的方法、通過有機化學領域普通技術人員熟知的方法制備的；或者可商購；或者通過與其類似的方法制備的。這些示意圖中應用的全部可變因素如下文的定義。
方法一以取代的硫尿嘧啶(A-4)為原料，在適宜的溶劑和堿性條件下，分別與各種鹵代物R2COCH2X反應生成本發(fā)明式I的目標化合物(A-5)，其反應式如下所示 其中(1)取代的硫尿嘧啶(A-4)按照文獻(G.Meng，F(xiàn).E.Chen，et al.Chem.Pharm.Bull.2003，51，779；M.Artico，J Med Chem，1997，42，619)方法制備，反應式如下所示 (2)X選自C＝O或R6R7C，取代基R1，R2，R3，R4，R6，R7，如上所定義。-a1＝a2-a3＝a4-獨自代表式(a-1)～(a-5)；n為0，1，2，或3； 且當-a1＝a2-a3＝a4-為(a-1)時，則n也可為4。
(3)取代的硫尿嘧啶(A-4)與各種鹵代物反應的物質(zhì)的量比為1∶1～1∶1.2，反應溫度控制在20～80℃之間，反應時間為8～36小時。
(4)反應所用的溶劑可以是甲苯、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、乙醇、水中的一種或它們的混合物；堿可以是醇納，碳酸鉀或三乙胺等。
本發(fā)明I式的化合物也可以經(jīng)過另一方法制得，即方法二
將中間體(B-3)與合適的商購或用已知的方法合成的原料化合物(B-4)在堿性條件下發(fā)生取代反應生成化合物(B-5)，隨后堿性水解制得式I的目標產(chǎn)物(B-6)，其反應式如下所示 其中(1)關鍵中間體(B-3)根據(jù)文獻(G.F.Sun，F(xiàn).E.Chen，et al.Arch.Pharm.Chem.LifeSci.2005，338，457)方法制備，反應式如下所示 X選自O，S，R5N，或R6R7C；取代基R1，R2，R3，R4，R6，R7，如上所定義；-a1＝a2-a3＝a4-獨自代表式(a-1)～(a-5)；n為0，1，2，或3；且當-a1＝a2-a3＝a4-為(a-1)時，則n也可為4。
(3)反應所用的溶劑可以是甲苯、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、乙醇、水中的一種或它們的混合物；堿可以是醇鈉，碳酸鉀或三乙胺等。
經(jīng)過實驗測試，由本發(fā)明提出的化學結構式I所包含的化合物，普遍具有較強的抗HIV-1病毒流行性、較少的細胞毒性和較高的選擇性指數(shù)。其中有部分化合物還具有一定的抗HIV-2的作用?？捎糜谥苽渲委熀皖A防病毒感染性特別是HIV、HBV和甲、乙型流感病毒感染藥物。即由I式化合物和通常的藥用載體組成藥物組合物用于治療和預防上述病毒感染性疾病。
具體實施例方式
通過下述實例將有助于理解本發(fā)明，但是不能限制本發(fā)明的內(nèi)容。
實施例12-[(取代烴基或烴氧基羰基甲基硫)-6-(取代芳甲基)-5-烴基尿嘧啶的合成反應的一般操作將5-烴基-6-(取代芳甲基)-2-硫尿嘧啶(3mmol)溶于10ml干燥的DMF溶液，加入K2CO3(3mmol)，室溫攪拌反應半小時，加入溴代物(3.3mmol)，40℃下繼續(xù)攪拌反應，TLC跟蹤約16小時原料點消失，停止反應，將反應液到入50ml冰水中，攪拌析出沉淀，過濾，用水洗滌沉淀，抽濾烘干，得粗品，柱層析或重結晶得純品。
以不同取代的5-烴基-6-(取代芳甲基)-2-硫尿嘧啶和不同的α-溴代酮或α-溴代烴基酸酯用上述方法分別制得式I的目標產(chǎn)物，部分結果如下 操作如上，四氫呋喃重結晶得白色粉末1a，收率58％；熔點227.5-228.9℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.08(t，3H J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.53(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，3.91(s，3H，OCH3)，4.14(s，2H，ArCH2)，4.37(s，2H，SCH2)，7.04(t，1H，J＝7.6Hz，ArH4)，7.10(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.15(d，2H，J＝7.6Hz，ArH3，5)，7.73(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.71(br，1H，CONH)。
操作如上，四氫呋喃重結晶得白色粉末1b；收率62％；熔點213.2-213.8℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.97(t，3H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.42(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，3.84(s，2H，ArCH2)，3.85(s，3H，OCH2)，4.49(s，2H，SCH2)，7.01(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，7.05-7.13(m，3H，ArH4，5，6)，7.43(d，1H，，J＝7.6Hz，ArH3)，7.80(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.70(br，1H，CONH)。
操作如上，2-丁酮重結晶得黃色粉末1c；收率21％；熔點204.3-205.2℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.94(s，3H，CH3)，3.82(s，2H，ArCH2)，3.87(s，3H，OCH3)，4.50(s，2H，SCH2)，7.02(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.04-7.12(m，3H，ArH3，5，6)，7.44(d，1H，ArH3)，7.80(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.73(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝2∶1)得白色針狀晶體1d；收率47％；熔點201.9-203.0℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.91(t，3H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.41(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，3.67(s，2H，ArCH2)，3.85(s，3H，OCH3)，4.64(s，2H，SCH2)，7.03-7.09(m，4H，ArH5，6，Ar’H3，5)，7.28(s，1H，ArH2)，7.32(d，1H，ArH4)，7.96(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.72(br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色粉末1e；收率70％；熔點180.8-181.3℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.91(s，3H，CH3)，3.66(s，2H，ArCH2)，3.86(s，3H，OCH3)，4.64(s，2H，SCH2)，7.02-7.11(m，4H，ArH5，6，Ar’H3，5)，7.26(s，1H，ArH2)，7.32(d，1H，ArH4)，7.96(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.73(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色粉末1f；收率；58％；熔點205-206.7℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.98(t，3H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.46(q，2H，J＝7.2 Hz，CH2CH3)，3.69(s，2H，ArCH2)，3.91(s，3H，OCH3)，4.69(s，2H，SCH2)，7.04(d，2H，J＝8.0Hz，ArH2，6)，7.11(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，7.31(d，2H，J＝8.4Hz，ArH3，5)，8.00(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.73(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶Acetone＝2∶1)得白色粉末1g；收率55％；熔點172.3-173.3℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.09(t，3H，J＝7.4Hz，CH2CH3)，2.57(q，2H，J＝7.4Hz，CH2CH3)，3.87(s，3H，OCH3)，3.88(s，2H，ArCH2)，4.46(s，2H，SCH2)，6.89(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.58(s，2H，ArH2，6)，7.66(s，1H，ArH4)，7.85(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.60(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色粉末1h；收率35％；熔點202.8-203.1℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.93(s，3H，CH3)，3.81(s，3H，OCH3)，3.94(s，2H，ArCH2)，4.51(s，2H，SCH2)，6.94(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.74-7.77(m，3H，ArH)，7.77(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.76(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色粉末1i；收率12％；熔點214.3-214.9℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.90(t，3H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.50(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，3.86(s，3H，OCH3)，4.55(s，2H，ArCH2)，5.5 1(s，1H，ArH)，7.06-7.14(m，12H，ArH，Ar’H3，5)，7.90(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.82(br，1H，CONH)。
操作如上，四氫呋喃重結晶得白色粉末1j；收率25.68％；熔點220.5-221.6℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.93(s，3H，CH3)，3.85(s，3H，OCH3)，4.52(s，2H，SCH2)，5.49(s，1H，ArCH)，7.04-7.12(m，12H)，7.87(d，2H，Ar’H2，6)，12.77(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色粉末1k；收率30％；熔點201.2-201.6℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.96(t，3H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，2.46(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，3.71(s，2H，ArCH2)，3.80(s，3H，OCH3)，4.69(s，2H，SCH2)，6.99(d，2H)，7.15(d，2H)，7.38(d，3H)，7.45(t，2H)，7.57(d，2H)，7.98(d，2H，Ar’H2，6)，12.68(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色粉末1l；收率33％；熔點201.7-202.6℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.90(t，3H，J＝7.6Hz，CH2CH3)，2.13(s，6H，ArCH3)，2.40(q，2H，CH2CH3)，3.32(s，2H，ArCH2)，4.67(s，2H，SCH2)，6.65(s，2H，ArH2，6)，6.74(s，1H，ArH4)，7.0(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.99(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，12.68(br，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得白色片狀晶體1m；收率38％；熔點197.3-197.7℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.90(s，3H，CH3)，2.13(s，6H，Ar(CH3)2)，3.54(s，2H，ArCH2)，3.84(s，3H，OCH3)，4.67(s，2H，SCH2)，6.63(s，2H，ArH2，6)，6.74(s，1H，ArH4)，7.04(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，8.00(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)。
操作如上，柱層析分離(CH2Cl2∶EA＝3∶1)得黃色晶體1n；收率38％熔點165.5-167.0℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.96(t，3H，J＝7.4Hz，CH2CH3)，2.17(s，6H，ArCH3)，2.45(q，2H，J＝7.4Hz，CH2CH3)，3.58(s，2H，ArCH2)，4.77(s，2H，SCH2)，6.66(s，2H，ArH2，6)，6.77(s，1H，ArH4)，7.59(t，2H，Ar’H3，5)，7.71(t，1H，ArH4)，8.06(d，2H，Ar’H2，6)，12.76(br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得灰白色粉末1o，收率64％；熔點185.0-185.4℃；1HNMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.82(s，3H，C5-CH3)，3.57(s，2H，ArCH2)，3.83(s，3H，OCH3)，4.65(s，2H，SCH2)，6.45-6.96(m，4H，ArH)，7.03(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H3，5)，7.96(d，2H，J＝8.8Hz，Ar’H2，6)，9.24(br，s，1H，ArOH)，12.54(br，s，1H，CONH)。
操作如上，二氧六環(huán)重結晶得白色粉末，收率20％；熔點194.3-195.3℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.97(s，3H，CH3)，4.14(s，2H，SCH2)，4.48(s，2H，ArCH2)，7.10-7.94(m，12H，ArH)，12.72(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色粉末1q，收率32％；熔點193.7-94.8℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.90(s，3H，J＝7.25Hz，CH3)，2.45(q，J＝7.25Hz，，2H，CH2)，3.77(s，3H，OCH3)，4.16(s，2H，SCH2)，4.39(s，2H，ArCH2)，6.84-7.96(m，11H，ArH)，12.73(s，br.1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得無色晶體1r，收率51％；熔點183.9-184.6℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.15(d，6H，J＝6.85Hz，，2CH3)，2.97(m，1H，J＝6.85Hz，，CH)，3.73(s，3H，OCH3)，4.16(s，2H，SCH2)，4.42(s，2H，ArH)，6.81-7.96(m，11H，ArH)，12.62(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1s，收率62％；熔點187.1-187.4℃；1H NMR(5 00MHz，DMSO-d6)δppm 1.17(d，6H，J＝6.81[z，，2CH3)，2.96(m，1H，J＝6.8Hz，，CH)，4.11(s，2H，SCH2)，4.44(s，2H，ArH)，6.96-7.90(m，11H ，ArH)，12.65(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1t，收率47％；熔點176.7-178.0℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.16(d，6H，J＝6.60Hz，，2CH3)，2.21(s，3H，PHCH3)，2.96(m，1H，J＝6.6Hz，CH)，4.19(s，2H，SCH2)，4.37(s，2H，ArH)，6.76-7.98(m，10H，ArH)，12.64(s，br，1H，CONH)。

操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1u，收率63％；熔點149.6-150.8℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.95(s，3H，CH3)，2.11(s，3H，CH3)，4.15(s，2H，SCH2)，4.42(s，2H，ArH)，7.14-7.78(m，7H，ArH)，12.74(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1v，收率69％；熔點183.0-183.4℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.97(s，3H，CH3)，3.42(s，3H，OCH3)，3.75(s，2H，SCH2)，4.28(s，2H，ArH)，7.20-8.14(m，7H，ArH)，12.78(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1w，收率52％；熔點163.2-163.8℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 0.99(t，3H，J＝7.0Hz，CH3)，1.96(s，3H，CH3)，3.76(s，2H，SCH2)，3.86(q，2H，OCH2，J＝7.0Hz，)，4.28(s，2H，ArH)，7.18-8.17(m，7H，ArH)，12.77(s，br，1H，CONH)。
操作如上，乙酸乙酯重結晶得白色晶體1x，收率31％；熔點138.5-141.7℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.15(d，6H，J＝6.85Hz，，2CH3)，3.00(m，1H，J＝6.85Hz，CH)，3.39(s，3H，OCH3)，3.78(s，2H，SCH2)，4.31(s，2H，ArH)，7.10-8.15(m，7H，ArH)，12.60(s，br，1H，CONH)。
操作如上，甲醇重結晶得白色固體1aa，收率31％；熔點183.2-183.7℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 3.86(s，2H，SCH2)，6.97(s，1H，CHCN)，7.42-8.08(m，13H，ArH，CH)，13.15(s，1H，CONH)。
操作如上，甲醇重結晶得白色固體1ab，收率33％；熔點195.6-196.8℃；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.87(s，3H，CH3)，4.68-4.84(m，2H，SCH2)，6.44(s，1H，CHCN)，7.34-8.03(m，12H，ArH)，13.10(s，1H，CONH)。
操作如上，甲醇重結晶得白色固體1ac，收率36％；熔點176.7-177.9℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.89(s，3H，CH3)，4.59(s，2H，SCH2)，6.51(s，1H，CHCN)，7.39-8.07(m，11H，ArH)，13.03(s，1H，CONH)。

操作如上，甲醇重結晶得白色固體1ad，收率38％；熔點156.0-157.6℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.95(s，3H，CH3)，4.75(s，2H，SCH2)，6.56(s，1H，CHCN)，7.39-8.11(m，10H，ArH)，13.01(s，1H，CONH)。
操作如上，甲醇重結晶得白色固體1ae，收率31％；熔點183.2-183.7℃；1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 3.86(s，2H，SCH2)，6.97(s，1H，CH)，7.42-8.08(m，12H，ArH)，13.15(s，1H，CONH)。
實施例2反應的一般操作在惰性氣體保護下，將取代的芳基硫酚(3mmol)和NaOH(3mmol)在30ml的EtOH中室溫攪拌15分鐘，加入關鍵中間體(B-3)，室溫下繼續(xù)攪拌反應，TLC跟蹤約12小時原料點消失，加入10％NaOH溶液(12ml)，室溫下繼續(xù)攪拌反應3小時，減壓濃縮，加30ml水，用稀鹽酸調(diào)pH＝5-6，CH2Cl2提取，干燥，濃縮，柱層析純化(PE/EA)或重結晶得純品。
以不同取代的(B-3)和不同取代的芳基硫酚用上述方法分別制得目標產(chǎn)物，部分結果如下 操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得白色粉末2a，收率46％；熔點178-181℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.01(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.38(q，2H，J＝7.3Hz，CH2)，4.53(s，2H，SCH2)，7.09-7.98(m，12H，ArH)，8.67(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得白色粉末2b；收率58％；熔點182-184℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 0.94(t，3H，J＝7.4Hz，CH3)，2.42(q，2H，J＝7.4，Hz，CH2)，4.45(s，2H，SCH2)，7.15-8.05(m，11H，ArH)，9.73(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得白色粉末2c；收率48％；熔點175-177℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 0.98(t，3H，J＝7.4Hz，CH3)，2.41(q，2H，J＝7.4Hz，CH2)，4.50(s，2H，SCH2)，7.10-7.94(m，11H，ArH)，9.16(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得黃色粉末2d；收率42％；.熔點166-168℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 0.99(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.45(q，2H，J＝7.3Hz，CH2)，4.53(s，2H，SCH2)，6.92-7.99(m，10H，ArH)，9.42(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得白色粉末2e；收率52％；熔點197-198℃；1HNMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.04(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.43(q，2H，J＝7.3Hz，CH2)，3.90(s，3H，OCH3)，4.51(s，2H，SCH2)，6.97-7.99(m，11H，ArH)，10.01(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得白色粉末2f；收率47％；熔點171-174℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.07(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.61(q，2H，J＝7.3Hz，CH2)，4.52(s，2H，SCH2)，6.92-7.45(m，9H，ArH)，9.81(s，1H，CONH)。
操作如上，柱層析分離(PE∶EA＝1∶1)得黃色粉末2g；收率39％；熔點153-155℃；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 1.05(t，3H，J＝7.3Hz，CH3)，2.58(q，2H，J＝7.3Hz，CH2)，3.89(s，3H，OCH3)，4.53(s，2H，SCH2)，6.89-7.38(m，11H，ArH)，10.12(br，1H，CONH)。
實施例3抗HIV生物活性測試體外細胞水平的抗HIV病毒活性由比利時Katholleke大學的Rega藥物研究所測定，主要包括對HIV感染的MT-4細胞的抑制活性及細胞毒性兩方面。方法描述如下使化合物在HIV感染的MT-4細胞中，于感染HIV不同時間，用MTT法測定藥物對HIV誘變的細胞病變的保護作用，計算使50％的細胞免于HIV誘導的細胞病變所需的濃度半數(shù)有效濃度IC50，毒性測定與抗HIV活性實驗平行進行，也是在MT-4細胞培養(yǎng)中，用MTT法測定使50％的未感染細胞發(fā)生細胞病變的濃度(CC50)，并計算選擇性指數(shù)SI＝CC50/IC50。
材料與方法各化合物的抗HIV活性由藥物對HIV在細胞中引起的細胞病變的抑制作用效率來監(jiān)控。采用MT-4細胞進行細胞培養(yǎng)。采用的病毒株有HIV-1病毒株IIIB及HIV-2病毒株ROD。
具體操作如下將化合物用DMSO或水溶解后用磷酸鹽緩沖食鹽水溶液稀釋，將3×105MT-4細胞用100μl各化合物不同濃度此溶液在37℃預培養(yǎng)1h，然后向該化合物中加入100μl適當?shù)牟《鞠♂屢?，將細胞?7℃培養(yǎng)1h。洗滌三次后，將細胞再次分別懸浮于含有或不含有化合物的培養(yǎng)介質(zhì)中。接著將細胞在5％CO2氛圍中，于37℃下再培養(yǎng)7天，并于感染后第三天用含有或不含有化合物的培養(yǎng)介質(zhì)替換補充培養(yǎng)液。每種培養(yǎng)液條件都重復操作兩次。對病毒的細胞病變作用每天都用反向光學顯微鏡監(jiān)控。典型來講，本實驗中所用的病毒稀釋液常常會在病毒感染后第五天導致細胞病變。藥物抑制濃度以藥物對病毒細胞病變作用產(chǎn)生50％抑制作用而同時對細胞無直接毒性的濃度(CC50)表示。需要強調(diào)的是，當化合物水溶性較差，需要用DMSO才能溶解時，DMSO比濃度相對于水來講，一般低于10％，(DMSO在MT-4細胞培養(yǎng)介質(zhì)中最終濃度小于2％)。因為DMSO能影響測試化合物的抗病毒活性，對含有相同濃度DMSO溶液抗病毒活性對比空白實驗也應該平行進行。另外，DMSO最終濃度(1/1000)遠遠低于影響HIV-1在T細胞中復制所需的濃度。
本發(fā)明用HEPT，DDI，Efavirenz作對照品，部分目標化合物對HIV的抑制活性結果見表1。
表1.抗HIV活性


NA無活性。
實驗結果表明，化學結構通式I中所包含的化合物普遍具有較強的抗HIV-1病毒活性，較小的細胞毒性和較高的選擇性指數(shù)；其中部分化合物還顯示出一定的抗HIV-2作用，有異于經(jīng)典的NNRTIs。
將上述任何一種化合物和常規(guī)藥用載體制成藥物組合物，可用于治療和預防HIV、HBV以及甲、乙型流感病毒感染的疾病。
權利要求
1.如通式I所示的2，5，6-三取代嘧啶酮類化合物、其N-氧化物、立體異構體形式、立體異構體混合物或藥學上可接受的鹽 式中-a1＝a2-a3＝a4-表示下式的二價基團-CH＝CH-CH＝CH-(a-1)-N＝CH-CH＝CH- (a-2)-N＝N-CH＝CH- (a-3)-N＝CH-N＝CH- (a-4)-N＝CH-CH＝N- (a-5)n為0，1，2，或3； 且當-a1＝a2-a3＝a4-為(a-1)時，則n也可為4；R1選自氫；鹵素；氰基；硝基；羥基；氨基；三氟甲基；被一個或多個鹵素原子、氰基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基；或YR5；R2選自被一個或多個鹵素原子、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-12烷基、C2-12烯基、C2-12炔基、C3-12環(huán)烷基、C3-12環(huán)烯基、C3-12雜環(huán)、芳基、五元或六員芳雜環(huán)；或YR5；R3，R4分別獨自選自氫；鹵素；氰基；硝基；羥基；氨基；羧基；三氟甲基、被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、芳甲?；?、五元或六元芳雜環(huán)；或YR5；當R3和R4處于鄰位時，可以分別結合在一起形成如下形式的二價基團-CH2-CH2-CH2-CH2-(b-1)-CH＝CH-CH＝CH- (b-2)-N＝CH-CH＝CH- (b-3)-N＝N-CH＝CH-(b-4)-N＝CH-N＝CH-(b-5)-N＝CH-CH＝N-(b-6)X選自O，S，S(O)1，S(O)2，C＝O，R5N，或R6R7C；Y選自O，S，NH；R5選自氫；被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷硫基取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、芳甲酰基、五元或六元芳雜環(huán)；R6，R7分別獨自選自氫；鹵素；氰基；羥基；硝基；三氟甲基；被一個或多個鹵素原子、氰基、三氟甲基取代或未取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烯基、C3-6雜環(huán)、芳基、芳甲基、五元或六元芳雜環(huán)。
2.一種如權利要求1所述化合物的鹽酸鹽，硫酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，以及藥學上可以接受的前體藥物和衍生物。
3.一種如權利要求1或2所述化合物的醫(yī)藥用途，其特征在于在制備治療和預防人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒和甲、乙型流感病毒感染藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體公開了一類如式I所示的2，5，6－三取代嘧啶酮化合物、其N－氧化物、立體異構體形式、立體異構體混合物和藥學上可接受的鹽，其水合物和溶劑化物，其多晶和共晶，其同樣生物功能的前體和衍生物，并提供含有一個或多個此類化合物的組合物在治療和預防病毒性感染特別是人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)和甲、乙型流感病毒感染藥物中的應用。
文檔編號A61P1/16GK101070307SQ20071004233
公開日2007年11月14日 申請日期2007年6月21日 優(yōu)先權日2007年6月21日
發(fā)明者陳芬兒, 王月平 申請人:復旦大學