專利名稱：用作DGAT抑制劑的嘧啶并-[4,5-b]-噁嗪的制作方法
用作DGAT抑制劑的嘧啶并-[4,5-b]^惡嗪
本發(fā)明涉及抑制乙酰CoA(乙酰輔酶A): 二?；视王；D移酶 (DGAT1)活性的化合物、該化合物的制備方法、含有該化合物作為活性 成分的藥物組合物、治療與DGAT1活性有關的疾病的方法、所述化合 物作為藥物的用途，及涉及所述化合物在制備用于抑制溫血動物如人的 DGATl的藥物中的用途。特別地，本發(fā)明涉及用于治療溫血動物如人患 有的II型糖尿病、胰島素抵抗、糖耐量受損和肥胖的化合物，更特別地， 本發(fā)明涉及這些化合物在制備用于治療溫血動物如人患有的II型糖尿 病、胰島素抵抗、糖耐量受損和肥胖的藥物中的用途。
乙酰CoA:人們在細胞的微粒體中發(fā)現(xiàn)了二?；视王；D移酶 (DGAT)。其能催化磷酸甘油途徑的最后反應，該途徑被認為是細胞中 甘油三酯合成的主要途徑，通過促進二酰基甘油與脂酰CoA的?；?， 從而形成甘油三酯。盡管還不清楚DGAT對于甘油三酯合成是否為限速 的，但其在該途徑中僅催化負責產生該類型分子的步驟[Lehner&Kuksis (1996) "Biosynthesis of triacylglycerols" Prog. Lipid Res. 35: 169-201]。
目前已經克隆出兩種DGAT基因，并進行了表征。盡管這兩種經編 碼的蛋白質不具有序列同源性，但它們催化相同的反應。由于DGATl基 因與乙酰CoA:膽固醇?；D移酶(ACAT)基因相似，人們從基因檢索 數(shù)據(jù)庫中將其識別出來[Cases等人(1998) "Identification of a gene encoding an acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase ， a key enzyme in triacylglycerol synthesis" Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 13018-13023]。在 許多哺乳動物組織中發(fā)現(xiàn)了 DGATl活性，包括脂肪細胞。
由于以前缺少分子探針，人們對DGATl的調節(jié)了解很少。DGATl 已知在脂肪細胞分化中會被明顯的上調。
對基因敲除小鼠的研究表明，DGATl活性的調節(jié)因子對II型糖尿 病和肥胖的治療很有價值。DGATl敲除的小鼠(Dgatr")可以生育并且 可以合成甘油三酯，這一點可以通過正常的禁食狀態(tài)血清甘油三酯水平 和正常的脂肪組織組成得到證實。與基礎狀態(tài)下的野生型小鼠相比， Dgatr"小鼠的脂肪組織較少，并且能抗飲食誘導的肥胖。常規(guī)飲食和高 脂肪飲食情況下的Dgatr"小鼠的代謝率比野生型小鼠的代謝率高~
20% [Smith等人(2000) "Obesity resistance and multiple mechanisms of triacylglycerol synthesis in mice lacking DGAT" Nature Genetics 25: 87-90] 。 Dgatl"-小鼠生理活性的增加部分是由于它們能量消耗的增加。 所述Dgatr"小鼠的胰島素敏感性也增強，葡萄糖代謝清除率增加了 20%。 Dgatl小小鼠的瘦素(leptin)水平降低了 50%,與脂肪量減少50% 一致。
當Dgatl+小鼠與ob/ob小鼠雜交，這些小鼠表現(xiàn)出ob/ob顯型[Chen 等人(2002) "Increased insulin and leptin sensitivity in mice lacking acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase" J. Clin. Invest 109:1049-1055],這i兌 明Dgatl"顯型需要完整的瘦素途徑。當Dgatr"小鼠與刺豚鼠雜交，會 發(fā)現(xiàn)體重減少，葡萄糖含量正常，胰島素水平與野生型小鼠、刺豚鼠或 ob/ob/Dgatr"小鼠相比減少了 70%。
將脂肪組織從Dgatl+小鼠移植到野生型小鼠體內后，會使后者能抗 飲食誘導的肥胖和具有改善的葡萄糖代謝[Chen等人(2003) "Obesity resistance and enhanced glucose metabolism in mice transplanted with white adipose tissue lacking acyl CoA: diacylglycerol acyltransferase " J. Clin. Invest 111 : 1715-1722]。
因此，目前還需要開發(fā)出新的DGAT抑制劑。
國際專利申請WO2004/047755 (Tularik and Japan Tabacco)公開了 稠合二環(huán)含氮雜環(huán)化合物，其是DGAT-1的抑制劑。WO2004/047755中 公開的許多化合物含有側鏈，這些側鏈包括二取代的單環(huán)烷類，特別是 環(huán)己烷。申請人出人意料地發(fā)現(xiàn)相應的含二環(huán)烷類和三環(huán)烷類的化合物 也可以作為DGAT抑制劑，這些化合物可能具有改善的藥代動力學特 性，特別是具有較低的代謝清除率和較長的半衰期。這些改善的特性對 于人類患者來說，可以有利地實現(xiàn)較低的和/或每天一次的給藥劑量，并 且由此可能帶來副反應和/或患者依從和/或低成本方面的益處。
因此，本發(fā)明涉及通式(I)化合物或其鹽<formula>complex formula see original document page 7</formula>(I)
其中
R1選自氬，曱基和三氟曱基； 112為氫，氯或氟；
環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基或(8-12C)三環(huán)烷二基； W是羧基或羧酸類似物(mimic )或生物電子等排體(bioisostere); R4和115各自獨立地為氫或曱基； n是O或1。
本發(fā)明另一方面涉及如上所述通式(I)化合物或其鹽，其中n是1， 環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基。
在本說明書中，術語(7-10C)二環(huán)烷二基包括二環(huán)[2.2.1]庚烷二基、 1,4-二環(huán)[2.2.2]辛烷二基、1,5-二環(huán)[3.2.1]辛烷二基、1,5-二環(huán)[3.2.2]壬烷 二基、1,5-二環(huán)[3.3.2]癸烷二基。
在本說明書中，術語(8-12C)三環(huán)烷二基包括金剛烷基。
應當理解的是，當nK)時，則W基團直接與環(huán)A相連。當n-l時， 基團-C(R"(R"(RS)直接與環(huán)A相連。
本發(fā)明中使用的羧酸類似物或生物電子等排體包括在The Practice of Medicinal Chemistry, Wermuth CG. Ed.: Academic Press: New York, 1996, 203頁中定義的基團。這樣基團的特定例子包括-S03H, S(0)2NHR13, -S(0)2NHC(0)R13, -CH2S(0)2R13, -C(0)NHS(0)2R13, -C(O)NHOH,畫C(O)NH CN, -CH(CF3)OH, C(CF3)2OH, - (0)(0印2和如下次級-通式(&)-(1')代表的基 團 <formula>complex formula see original document page 8</formula><formula>complex formula see original document page 9</formula>
其中，R"是(1-6C)烷基，芳基或雜芳基；和R"是氫或(1-4C)烷基?？梢?理解的是，在上述次級-通式(a)至(i')中，可能存在酮-烯醇互變異構現(xiàn)象， 次級-通式(a)至(i')應當包括這些化合物的所有互變異構體。
(l-6C)烷基的實例包括曱基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、戊基、 異戊基、l-2-二甲基丙基和己基；(l-6C)烷氧基的實例包括曱氧基、乙氧 基、丙氧基、異丙氧基、叔丁氧基和戊氧基；(l-6C)烷硫基的實例包括 曱硫基、乙硫基、丙硫基、異硫丙基和丁硫基；卣素的例子包括氯、溴、 碘和氟；三卣代甲基的例子包括三氟曱基。
通式(I)化合物可以形成穩(wěn)定的酸或堿鹽，在這種情況下，可能適 合以化合物鹽的形式給藥，藥學上可接受的鹽可以由常規(guī)方法制備，如下面所述的那些方法。
合適的藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽如甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、
a-甘油磷酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、酒 石酸鹽和(較不優(yōu)選的)氳溴酸鹽。同樣合適的鹽還包括與磷酸和碌u酸形 成的鹽。在另一個方面，合適的鹽為與堿性鹽，如與I族(堿金屬)或 II族(堿土金屬)形成的鹽，有機胺鹽如三乙胺、二乙醇胺、嗎啉、N-甲基哌啶、N-乙基哌啶、普魯卡因、二節(jié)基胺、N,N-二芐基乙胺、三-(2-羥基乙基)胺、N-甲基d-葡萄糖胺和氨基酸如賴氨酸。根據(jù)帶電荷官能 團的數(shù)目和陽離子或陰離子的化合價，所述化合物中可以含有多于一個 的陽離子或陰離子。
然而，為了有利于制備過程中將鹽分離出來，優(yōu)選在所用溶劑中溶 解度較小的鹽，而不管其是否為藥學可接受的鹽。
在本發(fā)明中，應當理解的是通式(I)或其鹽可以存在互變異構現(xiàn)象， 說明書中給出的通式結構圖僅代表一種可能的互變異構形式。應當理解 的是，本發(fā)明涵蓋能抑制DGAT1活性的任何互變異構形式，且本發(fā)明 并不限于通式結構圖中給出的任何一種互變異構形式。
各種形式的前藥也是本領域已知的。這種前藥衍生物的例子參見
a) Design of Prodrugs, H. Bundgaard編輯,(Elsevier, 1985)和Methods in Enzymology, Vol. 42, 309-396頁，K. Widder等編輯(Academic Press, 1985);
b) A Textbook of Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen 和H. Bundgaard編輯,笫5章"Design and Application of Prodrugs",由H. Bundgaard編輯，113-191頁(1991);
c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews ， 8, 1-38(1992);
d) H. Bundgaard等人,Journal of Pharmaceutical Sciences, 77， 285 (1988); 和
e) N. Kakeya等人，Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984)。 這些例舉的前藥可在體內分裂成為本發(fā)明的化合物。含羧基的本發(fā)
明化合物體內可分裂的酯為如藥學可接受的酯，其在人體或動物體內分 裂成為母體酸。對于羧基的合適的藥學可接受的酯包括(1-6C)烷基酯， 如曱基或乙基酯；(l-6C)烷氧基曱基酯,如甲氧基甲基酯；(l-6C)烷?；?基甲基酯，如新戊酰氧基甲基酯；2-苯并[c]呋喃酮基酯；(3-8C)環(huán)烷氧
基羰基氧基(1-6C)烷基酯，如l-環(huán)己基羰基氧基乙基酯；1,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基酯，例如5-甲基-l,3-二氧戊環(huán)-2-基曱基酯；(l-6C)烷氧基羰基氧基 乙基酯，例如l-甲氧基羰基氧基乙基酯；甲酰胺基曱基酯和其單-或二 -N-((1-6C)烷基)變體，如N,N-二甲基甲酰胺基甲基酯和N-乙基曱酰胺基 甲基酯；并且可以在本發(fā)明化合物的任何一個羧基處形成上述酯。含有 羥基的本發(fā)明化合物的在體內可分裂的酯為例如藥學可接受的酯，其在 人體或動物體內經分裂形成母體羥基。針對羥基的合適的藥學上可接受 的酯包括(l-6C)烷酰基酯，如乙酰酯；苯甲酰酯，其中所述苯基可以經 氨基曱基或N-取代的單-或二-(l-6C)烷基氨基甲基取代，例如4-氨基甲 基苯曱酰酯和4-N,N-二甲基氨基曱基苯曱?；?。
本領域技術人員能夠理解的是，通式(I)的某些化合物含有不對稱取 代的碳原子，因此可能存在(可能分離得到)光學活性和外消旋形式。 某些化合物可能表現(xiàn)為多晶型形式。應該理解本發(fā)明涵蓋任何外消旋 的、光學活性的、多晶型的或立體異構的形式，或它們的混合物，這些 形式具有適用于抑制DGAT1活性的性質，本領域已知如何制備光學活 性形式(如，通過重結晶技術拆分外消旋形式，以光學活性原料經合成 得到，通過手性合成，酶法拆分，生物轉化或利用通過手性固定相通過 色譜分離)和如何通過后述標準實^^測定對DGAT1活性的抑制效果。
可以理解的是，通式(I)的某些化合物和其鹽可以以溶劑合物和非溶 劑化的形式存在，如水合物形式。應當理解的是，本發(fā)明涵蓋了能抑制 DGAT1活性的所有溶劑合物形式，包括通式(I)化合物的溶劑合物形式 和鹽。因此，另一方面，本發(fā)明涉及通式(I)和其鹽及其溶劑合物。溶劑 合物的特定實施例為實施例1的乙酸溶劑合物。
如上所述，我們已經發(fā)現(xiàn)了許多具有很好的DGAT1抑制活性的化 合物。他們總體上都具有很好的物理和/或藥代動力學性質。下述化合 物具有優(yōu)選的藥學和/或物理和/或藥代動力學性質。
本發(fā)明的特定方面包括通式(I)化合物，或其鹽，特別是其藥學可接 受的鹽，其中上述任何基團/取代基具有如上所述的定義，或任何下述的 定義(根據(jù)需要，可以參考前述或后述任何的定義、發(fā)明內容和實施方 案)
本發(fā)明的一個實施方案涉及通式(I)化合物，另一個實施方案公開了 通式(I)化合物的藥學可接受的鹽。進一步的實施方案公開了通式(I)化合物的前藥。再一實施方案公開了通式(I)化合物前藥的藥學上可接受的鹽。
一個方面，W是氫。另一個方面，W是曱基。再一方面，W是三 氟甲基。
一個方面，W是氫。另一個方面，R"是氯。再一方面，R"是氟。
一方面，W是羧基。另一方面，113是羧酸類似物或生物電子等排體。
一方面，R"是氫。另一個方面，W是甲基。
一方面，W是氬。另一個方面，RS是甲基。
另一方面，114是曱基和115是氬。
另一方面，R"和R5都是氫。
一方面環(huán)A是(7C)二環(huán)烷二基。
另 一方面環(huán)A是(8C)二環(huán)烷二基。
另 一方面環(huán)A是(9C)二環(huán)烷二基。
另 一方面環(huán)A是(10C)二環(huán)烷二基。
另 一方面環(huán)A是(8-10C)二環(huán)烷二基。
另一方面環(huán)A是(8-9C)二環(huán)烷二基(即，二環(huán)辛烷二基或二環(huán)壬烷二基)。
另一方面環(huán)A是(8-12C)三環(huán)烷二基。 另一方面環(huán)A是金剛烷基。 另一方面，W和I^都是氫。 一方面，n是O。 另 一方面n是1。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中
W選自氫、曱基和三氟甲基；
W為氫、氯或氟；
環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基；
W是羧基；
W是氫或甲基；
W是氫或曱基；
n是O或1。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中 W選自氫、甲基和三氟甲基；
W是氫、氯或氟；
環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基；
R3是羧基；
W是氬或甲基；
W是氬或甲基；
n是1。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中:
R1選自氫、曱基和三氟曱基；
W是氫、氯或氟；
環(huán)A是(7- IOC)二環(huán)烷二基；
W是羧基；
W是氫或曱基；
R5是氫；
n是1。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中:
W選自氳、甲基和三氟曱基；
W是氫、氯或氟；
環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基；
W是羧基；
W是氫或曱基；
R5是氫；
n是l。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中
W是氫；
R2是氫；
環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基或(8-12C)三環(huán)烷二基；
W是羧基；
W是氫或甲基；
R5是氫；
n是O或1。
本發(fā)明另一方面涉及通式(I)化合物或其鹽，其中 W是氫；
R2是氫；
環(huán)A是(8-9Q二環(huán)烷二基或金剛烷基；
R3是羧基；
W是氬或甲基；
R5是氫；
n是0或1。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為每個實施例給出的化合物，或其鹽，特別是 藥學上可接受的鹽，其各自構成了本發(fā)明的一個方面。進一步，本發(fā)明 也包括兩個或更多個實施例公開的化合物或它們藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為如下的任何一個，或其鹽
(4畫[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r惡嗪-6-基)苯基]二環(huán) [2.2.2]辛-1-基}乙酸；和/或
{3-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-71^-嘧啶并[4,5-1)][1,4]18惡嗪-6-基)苯基]-1-金剛烷基}乙酸；
3- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r惡嗪-6-基)苯基]金剛 烷-l-羧酸；
2-(4-[4-(4-氨基-7，7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r惡嗪-6-基)苯基]二 環(huán)[2.2.2]辛-1-基}丙酸；
{5-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b] [1,4]哺嗪-6-基)苯基]二 環(huán)[3.2.2]壬-1-基}乙酸；
4- [4-(4-氨基-7，7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]喝嗪-6-基)苯基]二環(huán) [2.2.2]辛烷-1-羧酸.
方法
通式(I)化合物和其藥學上可接受的鹽可采用適于制備化學相關化 合物的任何已知方法進行制備。當采用這些方法制備通式(I)化合物或其 藥學上可接受的鹽時，其為本發(fā)明的一個方面。
本發(fā)明的另一方面也公開了通式(I)或其藥學上可接受的鹽可采用 如下方法a)制備(其中，所有變量與上述針對通式(I)化合物的定義相 同，或其經保護的變體，除非另有說明)
a)通式(n)化合物與通式(m)化合物或其鹽進行反應，其中W為酯
基，如曱氧羰基；
其中，L是離去基團，如溴；之后，如果需要，可進行如下步驟
i) 將酯113水解成相應的羧酸；和/或
ii) 形成鹽。
可以理解的是，通式(I)化合物，或其鹽可通本領域已知的技術作為 溶劑合物形式分離出來，見實施例1。因此，形成溶劑合物是上述方法 任選的最終步驟。
乙醇水溶液中加;A來進行，優(yōu)選在催化劑(二二鹽酸)的存在下。通式
(II)的中間體可以通過在催化劑如氯化鋁的存在下將通式(IV)化合物用 2-溴異丁酰溴酰化得到。
<formula>complex formula see original document page 15</formula>
通式(IV)化合物，其中R4=曱基和R5=H,可以利用如碘曱烷在合適的堿如二異丙基氨基化鋰的存在下通過烷基化相應化合物得到，其中
R4=H。通式(IV)化合物，其中114和115都是甲基，可以采用相似的方法 通過連續(xù)的兩個烷基化反應制備。
通式(IV)化合物，其中113為酯和！14=115= 和11=1,可以通過通式(V) 化合物轉變?yōu)辂}酸鹽，然后與三曱基曱硅烷基重氮曱烷反應和隨后與乙 醇反應而由同系化(homologation)得到?；蛘?，可以采用本領域已知 的其它同系化方法，例如將通式(V)化合物或它們相應的酯轉化為相應 的N-曱氧基-N-曱酰胺，然后用如氬化鋁鋰還原得到相應的醛。這些醛 接著經魏悌烯(Wittig)反應得到通式(VI)的烯醇醚，該烯醇醚可隨后經如 氯鉻酸吡啶镥鹽氧化成通式(IV)化合物，其中113為酯，R4=R5=H。另一 個同系化程序為通式(V)化合物或其酯經還原成相應的醇，通過例如甲 苯磺?；?甲苯磺?；?對甲苯磺?；?將醇轉化為離去基團，然后通過 氰化物經替換反應得通式(VII)的腈，可以采用常規(guī)方法將該腈水解和酯 化。實施例7對該方法進行了說明。
<formula>complex formula see original document page 16</formula>(V) (VI) (VII)
通式(V)化合物，其中W是氪，環(huán)A是二環(huán)[2.2.2]辛烷-l,4-二基， 可以采用N.B Chapman, S.Sotheeswaran和KJ. Toyne J.Org. Chem., 1970, 35， (4), 917中描述的方法進行制備，按照方案1中所示的反應順序， 然后酯水解方案1
二酯二環(huán)-辛烷(Vm)可以采用多種方法進行制備，例如根據(jù)J. Org. Chem., 1970， 35, (4), 917 (參加方案2)中描述的方法,或根據(jù)Synthes 是1996, 71頁(參見方案3)中描述的方法進行制備。
方案3
或者，通式(V)化合物，其中W是氫，可以采用方案4所述的方法 進行制備，或者釆用與之類似的方法(例如，改變方案4中列出的條件， 如換成氫化催化劑(如鈀碳)或其它試劑以引入triflate(基三氟曱磺酸鹽) 基團(如三氯甲烷磺酸酐)。<formula>complex formula see original document page 18</formula>
方案4。 或者，通式(V)化合物，其中W是氫，氯或氟，可以根據(jù)方案5中 所示的方法制備成其酯衍生物，或其類似物。
方案5
通式(V)化合物，其中環(huán)A為是除二環(huán)[2.2.2]辛烷-l，4-二基外的其它 基團，可以直接由類似方法進行制備。制備這樣化合物的合適方法也公
開在隨附的實施中。
對于上述方法中使用的必要起始物質，如果無法商業(yè)購得，則可以 選擇現(xiàn)有常規(guī)有機化學方法進行制備，釆用與已知的合成類似的方法， 選擇結構相似化合物，選擇在上述給出的參考文件中都有公開或描述的
方法，或者選擇與上述方法類似的方法，或選擇在實施例中公開的方法。
讀者可以進一步參考Advanced Organic Chemistry (《高等有機化學》)， 第5版，Jerry March和Michael Smith, John Wiley & Sons 2001出版， 來選擇反應條件和試劑。
可以理解的是，通式(I)化合物的某些中間體可具有新穎性，這些化 合物也是本發(fā)明的發(fā)明內容。特別地，通式(II)化合物為本發(fā)明的另一方 面。本發(fā)明另一方面提供通式(IV)的化合物。與該發(fā)明內容相關的一個 實施方案中公開了(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-l-基)乙酸曱基酯。
也可以理解的是，本發(fā)明提到的某些反應需要/必須對化合物中的任 何敏感基團進行保護。本領域技術人員知道什么情況下需要或必須進行 保護，同樣也知道采用什么樣的方法來保護。常用的保護基可按照常規(guī) 操作進行保護(為了說明，請參見T.W.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley和Sons, 1991》
可以采用文獻中或本領域已知的和適合除去目標保護基的常規(guī)方 法來去保護基，選擇這樣的方法的標準是其能有效除去保護基團，同時 對分子中的其它基團產生最小的影響。
因此，如果反應物中含有例如氨基，羧基或羥基的基團，則需要對 本發(fā)明提到的某些反應中的這些基團進行保護。
針對羥基的合適的保護基團實例為例如?；?，如烷酰基如乙酰、芳 ?；绫郊柞；?、曱硅烷基如三甲基曱硅烷基或芳基曱基如苯甲基。針
因此，例如?；鶊F如烷?；蚍减；梢酝ㄟ^例如用合適的堿如堿金 屬的氫氧化物(如氫氧化鋰或氬氧化鈉)水解而除去?；蛘?，可以通過 例如用氟化物或酸的水溶液除去曱硅烷基如三曱基甲硅烷基或SEM;或 者可以通過例如在催化劑(如鈀碳催化劑)的存在下的氫化反應除去芳 曱基基團如苯甲基基團。
合適的氨基保護基團有例如酰基如烷?；缫阴；煌檠趸驶?曱氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基；芳基曱氧基羰基如苯甲氧基
羰基，或芳?；绫郊柞；?。針對上述保護基團的脫保護條件需要根據(jù) 所選保護基團的不同而變化。因此，例如酰基如烷?；蛲檠趸然?芳?；梢酝ㄟ^例如用合適的堿如堿金屬的氫氧化物(如氫氧化鋰或氬 氧化鈉)水解而除去?；蛘?，可以通過例如用合適的酸如鹽酸、硫酸、 磷酸或三氟乙酸處理來除去?；缡宥⊙趸驶?，而且可以通過例如在
催化劑(如鈀碳催化劑)的作用下的氫化反應，或者通過用Lewis酸如 三(三氟醋酸)硼(boron tris(trifluoroacetate))處理而除去芳基甲氧基 羰基如苯曱氧基羰基。針對伯氨基的合適的選擇性保護基團有，如鄰苯 二曱?；?，該基團可以通過用烷基胺如二曱基氨基丙胺或2-羥基乙胺或 肼處理而除去。
針對羧基的合適的保護基團有，例如酯化基團例如甲基或乙基基 團，其可例如通過用堿如氬氧化鈉水解除去，或者例如叔丁基，其可通 過例如用酸如有機酸(如三氟乙酸)處理除去，或者例如苯曱基，其可 通過例如在催化劑(如鈀碳催化劑)的作用下的氬化反應除去。
樹脂可以用作保護基團。
上述保護基團可以在合成過程中任何方便的階段用化學領域內公 知的常規(guī)技術除去，或者在后續(xù)的某一反應步驟或者后處理中除去。 熟練的有機化學工作者能夠使用或采用上述參考文獻中包含和引
口口 o
除去任何保護基團和制備藥學上可接受的鹽都是普通有機化學工 作者用標準的技術能完成的工作。而且，這些步驟的細節(jié)均在上文中公開。
當需要本發(fā)明所述化合物的光學活性形式時，可通過使用光學活性 原料(例如，通過合適的反應步驟經非對稱誘導制得)實施上述方法來 獲得，或通過使用標準步驟拆分所述化合物或中間體的外消旋體獲得， 或通過非對稱異構體(在已制得時)的色譜分離來獲得。酶技術也可用 于制備所述具有光學活性的化合物和/或中間體。
類似地，當需要本發(fā)明所述化合物的純結構異構體(regioisomer) 時，可將純結構異構體作為原料，通過實施上述方法的一種來獲取，或 通過標準步驟拆分所述位置異構體或中間體的混合物來獲取。
本發(fā)明的另一方面涉及通過上文所述或在實施例中描述的方法獲
得的通式(I)所示化合物。
本發(fā)明另一方面涉及一種藥物組合物，該組合物包含上文所述的通 式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，并與藥學上可接受的賦形劑或載體 結合。
本發(fā)明所述的組合物可以是適合口服的形式(例如片劑、錠劑、硬 或軟膠嚢、水性或油性懸浮液、乳劑、可分散粉末或微粒、糖漿或酏劑)、 適合局部使用的形式(例如霜劑、藥膏、凝膠、或者水性或油性溶液或 懸浮液)、適合吸入給藥的形式(例如作為細粉末或液體氣霧劑)、適 合吹入給藥的形式(例如作為細粉末)或適合腸胃外給藥的形式(例如 靜脈滴注、皮下、肌肉或肌肉定量給藥的無菌水或油溶液或直腸定量給 藥的栓劑)。通常，優(yōu)選釆用口服給藥的組合物。
本發(fā)明所述化合物可以使用本領域公知的、常規(guī)的制藥學上可接受 的賦形劑，通過常規(guī)的步驟制得。因此，以口服使用為目的的組合物可 以包含，例如， 一種或多種色素、甜^^木劑、調，朱劑和/或防腐劑。
對于片劑，合適的藥學上可接受的賦形劑包括，例如惰性稀釋劑如 乳糖、碳酸鈉、磷酸釣或碳酸鈣，?；瘎┗虮澜鈩┤缬衩椎矸刍蚝Ｔ逅?br> (algenic acid);粘合劑如淀粉；潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石； 防腐劑如乙基或丙基對-羥基苯曱酸酯，及抗氧化劑如抗壞血酸。片劑可 以是未包衣的或可以是包衣的，以改善片劑在消化道內的分解及后續(xù)的 活性成分的吸收或改善片劑的穩(wěn)定性和/或外觀，后一種情況，使用本領 域內公知的常規(guī)包衣劑和常規(guī)方法進行包衣。
口服使用的組合物可以是硬明膠膠嚢形式，其中所述活性成分與惰 性固體稀釋劑混合，所述惰性固體稀釋劑為如碳酸鈣、磷酸釣或高嶺土； 也可以是軟明膠膠嚢形式，其中所述的活性成分與水或油混合，所述油 如花生油、液體石蠟或橄欖油。
水懸浮液通常包含細粉末狀(如微米或亞微米顆粒)的活性成分及 一種或多種懸浮劑如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、 藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、西黃蓍膠或阿拉伯膠；分散劑或潤濕劑如 卵磷脂或某種環(huán)氧烷烴與脂肪的縮合產物酸(例如聚氧乙烯基硬脂酸 酯)，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪族醇的縮合產物，例如十七環(huán)氧乙烷十六 烷醇(heptadecaethyleneoxycetanol),或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇 衍生出的偏酯(partial ester)如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯的縮合產物，
或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪族醇的縮合產物，例如十七環(huán)氧乙烷十六烷醇， 或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生出的偏酯如聚氧乙烯山梨醇單油 酸酯的縮合產物，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生出的偏酯如聚 氧乙烯山梨糖醇單油酸酯的縮合產物。所述水懸浮溶液也可以包含一種 或多種防腐劑(如乙基或丙基對-羥基苯甲酸酯)、抗氧化劑(如抗壞血 酸)、著色劑、香味劑和/或甜味劑(如蔗糖、糖精或阿斯巴甜)。
油性懸浮劑可通過將活性成分懸浮在植物油(如花生油、橄欖油、 芝麻油或椰子油)中或懸浮在礦物油(如液體石蠟)中制得。上述油性 懸浮劑也可以包含增稠劑如蜂蠟、硬石蠟或十六烷醇?？杉尤肴缜懊嫣?到的甜味劑以及香味劑以得到較好口感的口服制劑。這些組合物可通過 加入抗氧化劑如抗壞血酸來防止腐壞。
適合通過加入水制備成水懸浮液的可分散的粉末或微粒通常包含 所述活性成分及分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑。合適的 分散劑或潤濕劑及懸浮劑如上文中給出的示例。還可以加入如甜味劑、 香味劑和著色劑等添加劑。
本發(fā)明所述的藥物組合物也可以是水包油型乳液形式。油相可以是 植物油如橄欖油或花生油，或礦物油如液體石蠟，或任何這些油的混合 物。合適的乳化劑可以是，例如，天然樹膠如阿拉伯膠或黃芪膠，天然 磷脂如大豆、卵磷脂，由脂肪酸與己糖醇酐衍生出的酯或偏酯(如山梨 糖醇單油酸酯)及所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產物如聚氧乙烯基山梨糖
醇單油酸酯。該乳化劑也可以包含甜味劑、香味劑和防腐劑。
可以通過加入甜P未劑如甘油、丙二醇、山梨糖醇、阿斯巴甜或蔗糖 來配制糖漿或酏劑，該糖漿或酏劑也可以包含緩和劑、防腐劑、香味劑 和/或著色劑。
所述藥物組合物還可以是無菌可注射的水或油懸浮液形式，其可以 釆用已知的方法、使用上文提及的一種或多種適合的分散劑或潤濕劑和 懸浮劑來配制。無菌可注射制劑也可以是在無毒非腸道可接受的稀釋劑
或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。
可通過吸入給藥的組合物可以是常規(guī)壓縮氣霧劑形式，該氣霧劑被 布置為以包含細顆粒固體或液體小滴的方式釋放活性成分?？梢允褂贸?規(guī)的氣霧推進劑如揮發(fā)性的氟化烴或烴，而氣霧裝置通常能釋放定量的 活性成分。關于配制的進一步信息，讀者可參見Pergamon Press于1990年出 版的Comprehensive Medicinal Chemistry(Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board)的第5巻，25.2章。
與 一種或多種賦形劑組合制備單劑型的活性成分的量需要根據(jù)要 進行治療的病體和特定的給藥方式而變化。例如，用于人類口服給藥的 制劑通常包含，例如，0.5mg至2g活性成分，該活性成分與適當?shù)?、?宜劑量的賦形劑混合，賦形劑的量占總組合物重量的大約5至大約98%。 單位劑量形式通常包含大約lmg至大約500mg的活性成分。關于給藥 途徑和劑量方案的進一步信息，讀者可參見Pergamon Press于1990年 出版的Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board)的第5巻，25.3章。
本發(fā)明進一步涉及前述通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，用于 通過治療手段處理人類或動物的方法。
我們已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述化合物抑制DGAT1活性，因此對它們的降 血糖作用感興趣。
本發(fā)明的進一方面特征是通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽作 為藥物的用途。
合宜地，本發(fā)明涉及通式(I)化合物，或其藥學上可接受的鹽用作抑 制溫血動物如人類的DGAT1活性的藥物。
特別地，本發(fā)明涉及通式(I)化合物，或其藥學上可接受的鹽用作治 療溫血動物如人類糖尿病和/或肥胖的藥物。
因此，本發(fā)明的進一方面涉及通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽 在制備用于抑制溫血動物如人類DGAT1活性的藥物中的用途。
因此，本發(fā)明的進一方面涉及通式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽 在制備用于治療溫血動物如人類糖尿病和/或肥胖的藥物中的用途。
本發(fā)明的進一方面涉及包含前述通式(I)化合物或其藥學上可接受 的鹽及藥學上可接受的賦形劑或載體的藥物組合物，該組合物用于抑制 溫血動物如人類的DGAT1活性。
本發(fā)明的進一方面涉及包含前述通式(I)化合物或其藥學上可接受 的鹽及藥學上可接受的賦形劑或載體的藥學組合物，該組合物用于治療 溫血動物如人類的糖尿病和/或l巴胖。
本發(fā)明的進一方面涉及抑制需要治療的溫血動物如人類的DGAT1活性的方法，該方法包含對所述動物施用有效劑量的前述通式(I)化合物 或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明的進 一 方面涉及治療需要治療的溫血動物如人類的糖尿病 和/或肥胖的方法，該方法包含對所述動物施用有效劑量的前述通式(I) 化合物或其藥學上可接受的鹽。
如前所述，對于治療性或預防性治療某種特定疾病狀態(tài)所需劑量的 大小需要根據(jù)所治療的病體、給藥途徑及所治療疾病的嚴重程度而變
化。例如，可釆用的每日劑量的范圍在l-50mg/kg。然而，日劑量需要 根據(jù)所治療的病體、特定的給藥途徑及所治療疾病的嚴重程度而變化。 因此，最佳劑量可由治療某特定病人的治療者決定。
如前所述，本發(fā)明所述的化合物因其能抑制DGAT1活性而引起人 們的關注。本發(fā)明所述的化合物因此可用于預防、延遲或治療多種疾病 狀態(tài)包括糖尿病、更為具體地為II型糖尿病(T2DM)及由其引起的并發(fā) 癥(如視網膜病、神經病和腎病)、糖耐量受損(IGT)、空腹血糖異常癥、 代謝性酸中毒、酮癥、代謝異常綜合征、關節(jié)炎、骨質疏松癥、肥胖癥 及肥胖相關疾病，(包括外周血管疾病，(包括間歇性跛行)，心力衰 竭和某些心肌疾病、心肌缺血、大腦缺血和再灌注、高血脂病、動脈硬 化癥、不孕癥和多嚢卵巢綜合征)；本發(fā)明所述的化合物也可以用于肌 肉萎縮、皮膚疾病如痤瘡、阿爾茨海默病、各種免疫調節(jié)疾病(如銀翹 病)、HIV感染、炎性腸道綜合征和炎性腸道疾病如克羅恩氏病和潰瘍 性結腸炎。
特別地，本發(fā)明所述的化合物對預防、延緩或治療糖尿病和/或肥胖 癥和/或肥胖相關疾病有重要作用。 一方面，本發(fā)明所述的化合物用于預 防、延緩和治療糖尿病。另一方面，本發(fā)明所述的化合物用于預防、延 緩和治療肥胖癥。另一方面，本發(fā)明所述的化合物用于預防、延緩和治 療月巴胖相關疾病。
本發(fā)明所述的對DGAT1活性的抑制可作為單獨的治療施用，也可 以針對要治療的病癥與 一種或多種其它物質和/或治療方法組合施用。這 種結合治療方法可以同時、相繼或分開施用該治療采用的各單獨組分。 同時治療方式可以以單獨片劑或分開的多片劑方式給藥。例如，這種結 合治療方式有益于代謝性綜合征的治療[定義為腹部肥胖癥(通過人種和 性別具體界定點對應的腰圍來測量)附加如下情況的任意兩種高甘油三酯血癥(〉150mg/dl; 1.7mmol/l );低HDLc(男性<40mg/dl或 <1.03mmol/l,女性〈50mg/dl或1.29mmol/l)或對低HDL (高密度脂蛋白) 的治療；高血壓(SBP^130mmHg DBP^85mmHg)或對高血壓的治療；及 高血糖病(空腹血糖^100mg/dl或5.6mmol/l或糖耐量受損或預先存在的 糖尿病)-國際糖尿病聯(lián)盟&從IAS/NCEP錄入]。 上述結合治療方法可以包括如下主要類別
1) 抗肥胖癥治療如通過影響食物攝取、營養(yǎng)吸收或能量消耗而導 致體重減輕，如奧利司他、西布曲明及類似物；
2) 胰島素分泌促進劑包括磺脲(如格列本脲、格列吡嗪)，餐時 血糖調節(jié)劑(如瑞格列奈、那格列奈)；
3 )改善腸促胰島素作用的藥劑(如二肽酰肽酶IV抑制劑和GLP-I 激動劑)；
4) 胰島素增敏劑包括過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR) y激 動劑(如吡格列酮和羅格列酮)，和具有PPARa和Y聯(lián)合活性的藥劑；
5) 調節(jié)肝臟血糖平衡的藥物(如二甲雙胍、果糖l, 6二磷酸酯抑 制劑、糖原合成激酶抑制劑、糖原合成酶激酶抑制劑、葡萄糖激酶激活 劑)；
6) 用于降低小腸吸收血糖的藥劑(如阿卡波糖)；
7) 防止血糖經腎臟再吸收的藥劑(SGLT抑制劑)；
8) 治療長期高血糖并發(fā)癥的藥劑(如醛糖還原酶抑制劑)；
9) 抗血脂異常藥劑如HMG-CoA還原酶抑制劑(如他汀類藥物)； PPARa-激動劑(貝特類藥，如吉非羅齊)；膽酸螯合樹脂(考來烯胺)； 膽固醇吸收抑制劑(植物固醇酯，合成抑制劑)；膽酸吸收抑制劑(IBATi) 及尼克酸和類似物(煙酸和緩釋配方)；
10) 抗高血壓藥如p-阻斷劑(如阿替洛爾，普萘洛爾)；ACE抑制劑 (如賴諾普利)；釣拮抗劑(如硝苯地平)；血管緊張素受體拮抗劑(如
坎地沙坦)，a-拮抗劑和利尿劑(如呋塞米，卡噻嗪)；
11) 止血調節(jié)劑如抗血栓形成劑、纖維蛋白溶解活化劑和抗血小板 藥劑；凝血酶拮抗劑；Xa因子抑制劑；Vila因子抑制劑；抗血小板劑
(如阿司匹林，氯吡格雷)；抗凝血劑(肝磷脂及低分子量類似物，水 蛭素)及華法林；
12) 拮抗胰高血糖素活性的藥劑；以及13)抗炎活性劑，如非類固醇抗炎活性藥物(如阿司匹林)和類固 醇抗炎活性劑(如可的松)。
通式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽除用在治療性藥物中，也可 以在體外和體內測試系統(tǒng)的開發(fā)和標準化中用作藥理學工具，用于評估 DGAT1活性抑制劑對實驗動物體的效果，作為開發(fā)新型治療藥物研究 的一部分，所述實驗動物如貓、狗、兔、猴、大鼠和小鼠。
如前所示，所有的化合物及它們相應的藥學上可接受的鹽可用于抑 制DGAT1。通過下面的酶實驗對通式(I)所示化合物及相應的藥學上 可接受的酸加成鹽在抑制DGAT1上的能力的說明
人酶實驗
鑒別DGAT1抑制劑的體外實驗使用在昆蟲細胞膜中表達的人 DGAT1作為酶源(Proc. Natl. Acad. Sci. 1998, 95， 13018-13023 )。簡單 地講，用含人DGAT1編碼序列的重組桿狀病毒感染sf9細胞，48小時 后收集。細胞經勻漿溶解，在4。C在0.25M蔗糖、10mMTrisHCl(三(羥 甲基)氨基曱烷鹽酸鹽)、lmMEDTA (乙二胺四乙酸)中以100,000g 離心1小時分離出細胞膜。收集含有膜組分的團塊(pellet)，在緩沖液 中重懸浮，并保存在-8(TC。
DGAT1活性通過對Coleman纟會出的方法(Methods in Enzymology 1992， 209, 98-102)進行改進來測試。將l-10pM的化合物在總測試體 積為200|iiL的0.8pg膜蛋白質、5mM的氯化鎂和lOOpM 1,2-二油酰-311-甘油的混合物中培養(yǎng)。加入14C油酰輔酶A (最終濃度為30|iM)使反 應開始，并在室溫下孵化30分鐘。加入200nL2-丙醇:庚烷(7:1 )混合 物使反應停止。加入300)iL庚烷和pH值為9.5的100iLiL0.1M碳酸鹽緩 沖液將放射性甘油三酯分離至有機相中。利用液體閃爍照相法通過計算 上層庚烷層的可分量部分(aliquot)來量化DGAT1活性。
用該實鳥全方法，所述化合物通常表現(xiàn)出IC5o<l(HiM的活性，如 <l|iM,特別是〈100nM,更為特別是〈50nM。實施例1表現(xiàn)出19nM的 IC50,實施例4表現(xiàn)出40nM的IC5o活性。
本發(fā)明所述的化合物，特別是實施例1,可能具有前述的優(yōu)異藥動 學特性。這可以通過測量化合物在諸如大鼠(如Han Wistar大鼠)之類 的動物體內的半衰期來證明?；衔锿ㄟ^口服給藥，單獨地或者作為包 含高達5種化合物的貯片盒(cassette)的一個成分。典型的劑量為2.5
至5mg/kg(5ml/kg劑量體積)，采用在羥丙基甲基纖維素 (HPMC)/Tween(表面活性劑)中的懸浮液形式。給藥后，在0.25、 0.5、 1、 2、 3、 6、 12和24小時測量化合物的血漿水平，并通過HPLC/質譜進行 分析。
例如，在該測試中，實施例1具有9.8小時的半衰期。 通式(I)化合物及它們相應的藥學上可接受的酸的鹽對DGAT1的 抑制能力可進一步通過實施如下全細胞實驗1 )和2)來說明 1 ) 3T3細胞中甘油三酯合成的測定。
將小鼠脂細胞3T3細胞在置于含有介質的新生小牛血清中的6孔板 中培養(yǎng)融合。通過在含有10%胎牛血清、lpg/mL的胰島素、0.25pM地 塞米松和0.5mM異丁基甲基黃噤呤的介質中培養(yǎng)來分化細胞。48小時 后，將細胞在含有10%胎牛血清和lpg/mL的胰島素的介質中繼續(xù)培養(yǎng) 4-6天。對于該實驗，將介質換成不含血清的介質，并用溶解在DMSO 中的化合物(最終濃度為0.1。/。)預培養(yǎng)所述細胞30分鐘。通過向每個 孔中加入0.25mM乙酸鈉加上liiCi/mLMC乙酸鈉繼續(xù)培養(yǎng)兩小時來測量 脂肪的從頭生成(J. Biol. Chem., 1976， 251, 6462-6464)。在石粦酸鹽緩沖 的鹽水中洗滌所述細胞，并溶在1%的十二烷基硫酸鈉中。取出一等份 試樣，利用基于Lowry提出的方法(J. Biol. Chem.， 1951， 193, 265-275 ) 得到的蛋白質測定試劑盒(Perbio)測定蛋白質。使用庚烷:2-丙醇:水
(80:20:2 )的混合物將脂質萃取到有機相中，然后根據(jù)Coleman的方法 (Methods in Enzymology， 1992, 209， 98-104)等分水和庚烷。收集有機 相，在氮氣保護下蒸掉溶劑。將萃取物溶于異己烷:乙酸(99:1)中，根 據(jù)Silversand和Haux (1997年)提出的方法通過常規(guī)高效液相色譜
(HPLC)將脂質分離，高效液相色譜采用的條件為使用Lichrospher diol誦5、 4x250mm柱，梯度溶劑系統(tǒng):異己烷:乙酸(99:1 )和異己烷:丙誦2國 醇乙酸(85:15:1 )，流速為lmL/分鐘。將放射性標記加到甘油三酸酯 級分中，用連接到HPLC機器的放射性Flo-one檢測儀對該級分進行分 析。
2) MCF7細胞中甘油三酯合成的測量
將人乳腺上皮(MCF7)細胞在置于含有介質的胎牛血清中的6孔 板上培養(yǎng)融合。對于該實驗，將介質換成不含血清的介質，并用溶解在 DMSO中的化合物(最終濃度為0.1%)預培養(yǎng)所述細胞30分鐘。通過
向每個孔中加入50^M乙酸鈉加上3nCi/mL"C-乙酸鈉繼續(xù)培養(yǎng)3小時 來測量脂肪的從頭生成(J. Biol. Chem.， 1976, 251， 6462-6464)。在磷酸 鹽緩沖的鹽水中洗滌所述細胞，并溶在1%的十二烷基硫酸鈉中。取出 一等份試樣，利用基于Lowry提出的方法(J. Biol. Chem., 1951, 193, 265-275 )得到的蛋白質測定試劑盒(Perbio)測定蛋白質。使用庚烷:2-丙醇:水(80:20:2 )的混合物將脂質萃取到有機相中，然后根據(jù)Coleman 的方法(Methods inEnzymology, 1992， 209， 98-104)等分水和庚烷。收 集有機相，在氮氣保護下蒸掉溶劑。將萃取物溶于異己烷:乙酸(99:1 ) 中，根據(jù)Silversand和Haux (1997年)提出的方法通過常規(guī)高效液相色譜 (HPLC)將油脂分離，高效液相色譜釆用的條件為:使用Lichrospher diol-5、 4x250mm柱，梯度溶劑系統(tǒng)異己烷乙酸(99:1 )和異己烷: 丙-2-醇乙酸(85:15:1),流速為lmL/分鐘。將放射性標記加到甘油三 酸酯組分中，用連接到HPLC機器的放射Flo-one檢測儀(Packard)對 該組分進行分析。
在以上的其它藥物組合物、過程、方法、用途和藥物制備特征中， 也適用本發(fā)明化合物的備選和優(yōu)選實施方案。
實施例
本發(fā)明將通過如下的實施例來進行說明，其中，如非特別說明則定 義如下
(i) 溫度通常以攝氏度(。C)給出；操作在室境下進行，即溫度范 圍在18-25。C,而且在惰性氣體如氬氣下進行；
(ii) 有機溶劑在無水硫酸鎂中干燥；減壓(600-4000帕斯卡； 4.5-30mmHg)旋轉蒸出溶劑，浴溫最高為60°C;
(iii) 色譜純化通常是指快速柱色語法，如非特別說明在硅膠上進 行。柱色譜通常使用預先包裝的硅膠管(從4g最大至400g )如Redisep
(例如Presearch Ltd, Hitchin, Herts, UK出售的)或Biotage(Biotage UK Ltd, Hertford, Herts, UK),使用泵和級分收集系統(tǒng)來洗脫?；蛘?，使 用ISOLUTE預先包裝的硅膠管(10g至50g)(例如1ST，Dyffryn Business Park出售)進行色譜純化，這種情況下洗脫和級分收集均人工進行；
(iv) 通常，反應過程由TLC跟蹤，反應時間僅用于舉例說明；
(v) 給出的收率僅用于說明，并不一定是指通過改進后的步驟得到的；如需更多材料，則重復制備過程；
(vi) 通式(I)最終產品的結構由核(通常為質子)磁共振(NMR) 和質譜技術確認，核磁共振場強度(對于質子)為300MHz (通常使用 Varian Gemini 2000 )或400MHz (通常使用Bruker Avance DPX400 ), 除非另有指明；氬質子核磁共振中化學位移的值在S標度上測定，峰個 數(shù)如下所示s,單峰；d，雙峰；t,三重峰；m，多重峰；br，寬峰；q， 四重峰,quin,五重峰；
使用全氘代二甲基亞砜(DMSO-dJ作為溶劑，除非另有說明；
(vii) 化學符號具有通常意義；使用SI單位和符號；
(viii) 溶劑比例以體積:體積(v/v)給出；
(ix) 質譜(MS)數(shù)據(jù)(除非另有說明)通常在LCMS系統(tǒng)上產生， 其中，HPLC (高效液相色譜)部分通常包含Agilent 1100或Waters Alliance HT (2790 & 2795)設備，并在Phemonenex Gemini C 18 5pm, 50 x2mm柱(或類似物)上進行洗脫，該洗脫使用酸性洗脫液(例如，佳_ 用梯度為0-95%的水/乙腈，其具有5%的在水:乙腈為50:50 (v/v)的混 合物中的1%蟻酸；或使用相同的溶劑系統(tǒng)，但是用甲醇代替乙腈)或 使用堿性洗脫液(例如，使用梯度為0-95%水/乙腈，其具有5°/。的在乙 腈混合物中的0.1% 880氨水)；而且該MS組件通常包含Waters ZQ分 光計。產生了電噴霧的色譜圖(ESI)正和負基峰強度，和220-300nm的 UV全吸收色譜圖，并且給出了m/z的值；通常，只給出指明原始峰的 離子，除非另有說明，否則給出的值為(M+H)+;
(x)GC-MS通過下述方法中的一種測得a)i), a)ii)， b)i)或b)ii): a) i)利用電子轟擊電離(EI)的Waters GCT高分辨(Premier) 氣相色譜-質譜(GC-MS)分析方法
氣相色譜-質譜分析是在與HP6890GC溫箱(oven)相連的Waters GCT高分辨GC-MS系統(tǒng)上進行，其中HP6890GC安裝有Agilent 7683B 自動取樣器。GC柱是長度為30m, 0.25mm內徑的DB-5MS,且膜厚為 0.25pm (J &W Scientific, Folsom, CA， USA)。將樣品溶解在甲醇中， 濃度為 lmg/ml，且以分流比30:1注射lpl。氦載體氣體的流速設定為 l.Oml/min 。設定以下溫度GC注入器溫度為250°C，起始溫箱溫度為 50°C，質譜界面250。C,離子源溫度為200。C。在分析期間，GC溫箱溫 度在50。C維持4分鐘，然后將溫度以25。C/分鐘升高到280°C，然后以 5(TC/min.的速度升高到320°C,最后在該溫度保持2min。質譜利用了電 子轟擊電離(70eV),在0.2秒內掃描質量范圍40-800 amu。
ii)利用正化學電離(+CI)的Waters GCT高分辨氣相色譜-質譜 (GC-MS)分析方法
氣相色譜-質譜分析是在與HP6890GC溫箱相連的Waters GCT高分 辨GC-MS系統(tǒng)上進行，其中HP6890GC安裝有Agilent 7683B自動取 樣器。GC柱是長度為30m, 0.25mm內徑的DB-5MS,且膜厚為0.25pm (J & W Scientific, Folsom， CA, USA)。將樣品溶解在曱醇中，濃度為 lmg/ml，且以分流比30:1注射1^1。氦載體氣體的流速設定為 l.Oml/min 。設定如下溫度GC注射器溫度為250°C ，起始溫箱溫度為 50°C,質譜界面溫度250。C,離子源溫度為200。C。在分析期間，GC溫 箱溫度在5(TC維持2分鐘，然后將溫度以25。C/分鐘升高到280°C,然 后以50。C/min.的速度升高到320°C,最后在該溫度保持4min。利用甲烷 CI氣體在2.7 x 10—3Pa的壓力產生正離子化學電離(CI)。質譜在0.2 秒內掃描質量范圍40-800 amu。
b) i)利用電子轟擊電離(EI)的氣相色譜-質譜(GC-MS)分析方法 GP-2010:
氣相色譜-質譜分析是在安裝有AOC 20i自動取樣器的QP-2010 GC-MS系統(tǒng)上進行的，由'GCMS方案，軟件控制，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes, MK12 5RE, UK)。 GC柱長度為25m, 0.32mm內徑， 且膜厚為0.52|im (J &W Scientific, Folsom, CA， USA)。將樣品溶解在 曱醇中，濃度為 lmg/ml，且以分流比10:1注射lpl。氦載體氣體的流 速設定為1.8ml/min。設定如下溫度GC注射器溫度為250°C,起始溫 箱溫度為50°C，質譜界面溫度320。C,離子源溫度為20(TC。在分析期 間，GC溫箱溫度在50。C維持4分鐘，然后將溫度以25。C/分鐘升高到 280°C,然后以50。C/min.的速度升高到320°C,最后在該溫度保持4min。 質譜采用電子轟擊電離(70eV),以掃描速度1250 amu/sec掃描50-600 amu范圍。
ii)利用正化學電離(+CI)的氣相色譜-質譜(GC-MS)分析方法 氣相色譜-質譜分析是在安裝有AOC 20i自動取樣器的QP-2010 GC-MS系統(tǒng)上進行的，由'GCMS方案，軟件控制，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes， MK12 5RE， UK)。 GC柱長度為25m, 0.32mm內徑，
且膜厚為0.52pm (J &W Scientific, Folsom, CA, USA)。將樣品溶解在 甲醇中，濃度為 lmg/ml，且以分流比20:1注射lpl。氦載體氣體的流 速設定為1.9ml/min。設定如下溫度GC注射器溫度為250°C ，起始溫 箱溫度為50°C,質譜界面溫度320。C,離子源溫度為200°C。在分析期 間，GC溫箱溫度在5(TC維持4分鐘，然后將溫度以25。C/分鐘升高到 280°C，然后以50。C/min.的速度升高到320°C，最后在該溫度保持4min。 利用甲烷CI氣體在2.7x 10，a的壓力產生正離子化學電離(CI)。質 譜以掃描速度1250 amu/sec掃描50-600 amu范圍。
(xi) 固體探針(Solid Probe)質鐠分析使用電子轟擊電離(EI) QP-2010 才艮據(jù)如下方法實施
質譜分析在QP-2010設備上利用軟件，2.0版本(Shimadzu, Milton Keynes, MK12 5RE， UK)進行。將樣品溶解于甲醇中，濃度 lmg/ml; 離子源為200°C。用固體探針將樣品加到質譜儀中；探針溫度為 50-350°C。
(xii) 合適的微波反應器包括"史密斯反應器(Smith Creator )"， "CEM 4果測器(CEM Explorer) ，，， "Biotage Initiator sixty，，和"Biotage Initiator eight"。
(xiii) 下述簡寫可能在本發(fā)明的后續(xù)或前述章節(jié)中使用 Et2O/醚 乙醚
DMF 二甲基曱酰胺 二氯甲烷 甲醇 乙醇 水
四氬p夫喃 二曱基亞砜 乙酸乙酯
聚合物承載的羰基二咪唑
DCM MeOH EtOH H20 THF DMSO EtOAc PS陽CDI HC1 TFA DME MeCN
三氟乙酸
二曱氧基乙烷
乙腈n-BuLi 正丁基鋰
MTBE 甲基叔丁基醚
Eq 摩爾當量
v/w 體積/重量比
實施例1: H-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]-惡。秦-6-曱 基)苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-曱基}乙酸
向{4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]哺嗪-6-基)苯基]二 環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯(122mg， 0.28mmol)的MeOH (lOmL)和 THF(5mL)溶液中加入2M氬氧化鈉(0.7mL)。將反應混合物在室溫下攪 拌過夜，然后再加入2M氫氧化鈉(0.7mL),將反應混合物加熱至50°C, 保持5小時。將反應混合物冷卻，減壓除去溶劑，用2MHC1將殘留物 酸化至pH為2，過濾所得懸浮液并干燥。將產物在堿性反相制備HPLC 系統(tǒng)中純化，該系統(tǒng)中裝有NMP( 2mL)、水( 2mL)和1-2滴0.88氨水， 并用13-40%水(+1%NH3) -MeCN洗脫，得到題述化合物固體，40mg (0.0952mmo1， 34%)。
iHNMR 5 1.61 (s, 6H), 1.62 - 1.65 (m, 6H)， 1.77 - 1.80 (m, 6H), 1.94 (s, 2H), 6.90(s， 2H), 7.39 (d, 2H)， 7.64 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); C02g未見；MSm/eMH+421。
實施例1也可以:換如下方式制備
向(4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4F惡嗪-6-基)苯基]二 環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯(中間體10; 601mg， 1.38mmol)的MeOH (40mL) 和THF(40mL)溶液中加入2M氫氧化鈉溶液(3.5mL, 6.9mmo1)。將反應 混合物在60。C攪拌過夜，濃縮有機溶劑并將殘留物用2MHC1酸化至pH 2。過濾所得懸浮液，將所得固體通過反相色譜純化，該色譜裝有 DMSO/MeCN/H20(7:2:l)及幾滴濃氨水溶液，并用5-95%水(+0.5% NH3) -MeCN洗脫。分離得題述化合物的白色固體(302mg, 0.717mmo1, 52 % )。
將實施例1所得化合物(141mg)懸浮于水(7mL)中，并在室溫下攪拌過夜，從而將其從水中結晶出來。將懸浮液過濾，并在5(TC真空 干燥，得白色固體狀的晶體化合物(127mg)。該晶體被為是未水合的 形式。該晶體非水合物的x射線粉末衍射圖如圖l所示。
還可以按照下述方法將實施例l化合物以乙酸溶劑合物形式分離出 來將在水醋酸(3mL)中的{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并 [4,5-b][l,4r惡。秦-6-基)苯基]二環(huán)[2,2.2]辛-l-基)乙酸(400mg)在135。C加 熱(未得到完全溶液)。過濾混合物并冷卻濾液。過濾得沉淀物并在50°C 真空干燥，得白色固體狀的題述化合物U25mg) 。 ^NMR 1.61 - 1.65 (m, 6H), 1.61 Cs, 6H); 1.79 - 1.83 Cm, 6H), 1.92 0, 3H), 2.06 (s, 2H)， 6.90 (s, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.64 (d， 2H), 7.95 (s, 1H), 11.91 (s, 1H)。該晶體溶劑合物[包含與化合物比率大約為1: 1的乙酸]的X射線 粉末衍射圖如圖2所示。
中間體1: M-『4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并『4、5七1「1,41喏、嗪-6-基)苯基1二環(huán)「2.2.21辛-1-基}乙酸甲酯
向4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-曱酸曱酯(利用N.B Chapman, S.Sotheeswaran和K丄Toyne J.Org. Chem., 1970, 35, (4), 917中描述 的過程制得)(785mg, 3.21mmol)的甲醇(60mL)和THF (15mL) 溶液中加入2M氬氧化鈉((8.0mL， 16.06mmol)。將反應混合物在室 溫下攪拌過夜，蒸去曱醇并將殘留物用2MHCl酸化至pH值2，然后用 EtOAc(2x250mL)萃取。用鹽水(50mL)洗滌有機相，分離、干燥(MgS04) 并濃縮得淺紅色固體682mg (2.96mmol, 92%)。
丄H麗R 5 1.86 (s, 12H), 7.19 - 7.23 (m， 1H), 7.31 - 7.39 (m, 4H); MS m/e固-229。
ii) (4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酯
向水水冷卻的4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-羧酸(479mg, 2.07mmol)的 DCM(20mL)溶液中加入DMF(2-3滴)，然后再加入草酰氯(0.20mL, 2.14mmo1)。將反應混合物升溫至室溫，過夜，減壓蒸出溶劑，留下粗 制4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-碳酰氯，其可直接用于下一步驟。將該粗制
i) 4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-羧酸
產物再次溶解到MeCN和THF(10mL) 1:1比例的溶液中，然后將其逐滴 加入到冰水冷卻的2M三甲基硅烷基重氮曱烷(1.5mL, 3.0mmol)和三乙 胺(0.40mL， 2.60mmol)在MeCN和THF(20mL) ( 1:1)的溶液中。將所 得黃色反應混合物在0。C攪拌6小時，然后在室溫下靜置過夜。減壓除 去溶劑，將殘留物再次溶解于EtOAc(100mL)中，用水(50mL)、 NaHCO3(50mL)及鹽水(50mL)洗滌。將有機相干燥(MgS04),留下棕紅色 膠狀物。將所得物用12g 二氧化硅Crawford硅膠柱純化，使用Isco Companion 0-10%-20%EtOAc洗脫，得淺黃色膠狀的2-重氮-l-(4-苯基二 環(huán)[2.2.2]辛-l-基)乙酮(238mg; 0.933mmol， 45%),其靜置后變?yōu)槿闋罟?體；^NMRCCDCW^.SS- 1.91 (m, 12H), 5.38 (s, 1H), 7.15 - 7.21 (m 2H), 7.29 - 7.31 (m, 4H); MS m/e固+ 255。
將重氮酮(0.238mg, 0.933mmol)溶解在甲醇(10mL)中，然后放置在 超聲浴中。逐滴加入苯曱酸銀(43mg, 0.186mmol， 0.2當量)的三乙胺 (0.52mL, 3.73mmol, 4當量)溶液，再將反應混合物超聲1小時。減壓 蒸出甲醇，將殘留物溶解于EtOAc( 50mL)中，并用NaHC03 (40mL)、檸 檬酸(2M; 40mL)、鹽水(40mL)洗滌然后干燥(MgSO4)，濃縮得黃色油 (277mg),其通過靜置緩慢變成固體；MS GC-MS EI m/e MH+258。該原 料直接用在下一階段中。
iii) {4-[4-(2-溴-2-曱基丙?；?苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸曱酯<formula>complex formula see original document page 35</formula>向水水冷卻的(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-l-基)乙酸甲酯(536mg ， 2.07mmol)的DCM(30mL)溶液中加入氯化鋰(830mg， 6.22mmo1),然后 逐滴加入2-溴異丁酰溴(0.25mL， 2.07mmo1)。反應混合物在~ 0。C攪拌1 小時，然后倒于水水( 20mL)中。分離有機相，水相用DCM(3xl50mL) 洗滌，將有機相合并后用(MgS04)干燥，濃縮得黃色膠狀物。該膠狀物 在12g silicyle硅膠柱上純化，DCM載樣，0-10%-20%的異己烷-EtOAc 洗脫，得紅色固體的題述化合物648mg(1.59mmo1， 77%); ^ NMR (CDC13) S 1.65 - 1.69 (m, 6H), 1.84 - 1.88 (m, 6H), 2.03 (s， 6H), 2.18(s, 2H)，
3.66 (s, 3H), 7.36 (d, 2H)， 8.09 (d, 2H); MS m/e固+ 377 (M隱OMe)。 iv) (4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r惡嗪-6-基)苯基]
二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯
向{4_[4_(2-溴_2-甲基丙?；?苯基]二環(huán)[2.2,2]辛-1-基}乙酸甲酯
(648mg， 1.59mmol)的無水EtOH (15mL)溶液中加入5,6-二氨基嘧啶-4畫 醇(221mg， 1.75mmo1)，然后加入1M HCl(1.75mL)。反應混合物回流加 熱過夜后冷卻至室溫，蒸干。殘留物用2M氫氧化鈉處理，調節(jié)pH值 至ll，將混合物用EtOAc(4x50mL)萃取。合并有機相，干燥(MgS04), 濃縮得粗制酯產物。用2MHC1將水相酸化，再次用EtOAc(2 x 100mL) 萃取，合并有機萃取物，干燥(MgS04)，濃縮得一定量相應的酸{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7^嘧啶并[4，5-13][1,4]嗜嗪-6-基)苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基〉乙酸(40mg, 0.095mmol, 6%)。將所得酯干燥載樣在硅藻土中，用 12g 二氧化硅redisep硅膠柱，采用Isco Companion經DCM-MeOH 0-2%-5%洗脫，得題述化合物固體122mg(0.281mmo1, 17.6%);
iHNMRS 1.58 - 1.63 (m, 14H), 1.78國1.83 (m, 7H), 2.16 (s, 2H): 3.59 (s, 3H), 6.90 (brs, 2H), 7.39 (d, 2H), 7.64 (d, 2H)， 7.95 (s, 1H); MS m/e固+ 435。
中間體2:2-氧代-6-苯基-2H-吡喃-3-曱酸乙酯
參見A. vonKreisler等，德國專利DE 1812906。
向乙醇鈉(21%乙醇溶液；116mL, 358.33mmol)的無水DME(300mL) 溶液中加入(乙氧基亞曱基)丙二酸二乙酯(66mL, 325.75mmo1)。將反 應混合物加熱至回流，然后逐滴加入l-苯基乙酮(38mL, 325.75mmo1), 加熱保持l小時。將反應混合物冷卻至室溫，加入到5MHCl(500mL)的 攪拌溶液中，將所得黃色溶液用醚(3 x500mL)萃取。合并有機萃取物， 用鹽水(300mL)洗滌，干燥(MgS04)并濃縮得紅色油。加入乙酰氯(60mL) 后加入DMF( 2mL),將反應混合物加熱至7(TC兩小時，冷卻并濃縮得 深色殘留物，其通過靜置成結晶固體。將該晶體固體再次用無水EtOH(50mL)重結晶，得黃色固體狀的題述化合物(49.16g, 201.2mmo1, 62%); !H NMR (CDC13) S 1,39 (3H, t), 4.39 (2H， q)， 6.77 (1H, d), 7.47 - 7.53 (3H, m), 7.90(2H, d)， 8.29 (1H, d); GC隱MS EI m/e M+244。 中間體3; 4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-2-烯-1-曱酸乙酯<formula>complex formula see original document page 37</formula>
將2-氧代-6-苯基-2H-吡喃-3-羧酸乙基酯(中間體2; 49.1g, 201.2mmo1)溶解到曱苯中，在75巴壓力于200。C加熱15小時。濃縮溶 劑得淺黃色膠狀物(49g)。將該物質分成每份~ 10g的幾份，用330g Crawford硅膠管純化，載樣，用5%醚-95%異己烷洗脫，得無色油狀題 述化合物(26.4g, 103mmo1, 51%);
iHNMR(CDCl3) S 1.31 (3H, t), 1.58 - 1.61 (4H, m), 1.90國2.05 (4H, m), 4.23 (2H， q), 6.42 (1H, d), 6.59 (1H, d), 7.20 - 7.25 (1H, m), 7.32 - 7.40 (4H, m); GC畫MS CI m/e固+ 257。
中間體4:4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-曱酸乙酯<formula>complex formula see original document page 37</formula>
將4隱苯基二環(huán)[2.2.2]辛國2畫烯畫l-曱酸乙酉旨(中間體3; 26.3g, 102.5mmol)的無水乙醇(600mL)溶液和10%Pt碳(2.4mg)在氬氣球中室溫 條件下攪拌過夜。過濾反應混合物，減壓除去溶劑，得無色油，該油4艮 快變成白色固體(22.179g, 85.96mmo1, 84%); ^ NMR (CDC13) S 1.25 (3H, t), 1.83 - 1.96 (12H, m), 4.12 (2H, q), 7.15畫7.20 (1H, m), 7.28 - 7.31 (4H， m); GC畫MS EI m/e M+ 258。
中間體5: N-甲氧基-N-曱基-l-苯基二環(huán)[2,2,2]辛烷-4-甲酰胺 向冷卻至-20。C的l-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-4-甲酸乙酯(中間體4; 15g, 58.06mmol)和N,0-二曱基羥基胺鹽酸鹽(8.87g, 89.99mmol)混合物 的無水THF(130mL)溶液中逐滴加入異丙基氯化鎂(2m THF溶液； 87mL)， 30分鐘內加入，保持內部溫度為-10。C。將混合物在-10。C攪拌1 小時，然后加入20%氯化銨溶液淬滅反應。將混合物用EtOAc(2x200mL) 萃取，有機相分離、干燥并蒸干得白色固體。將得到的固體在330g Crawford硅膠管上純化，用DCM裝柱，20-40。/。EtOAc-異己烷洗脫，得 到白色固體的題述化合物(8.66g， 31.67mmo1, 55%); & NMR (CDC13) S 1.75 - 1.90 (6H, m), 2.01 - 2.06 (6H, m), 3.19 (3H, s), 3.70 (3H, s), 7.15 - 7.20 (1H, m), 7.28 - 7.36 (4H， m); GC畫MS EI+ m/e 243 (M-CH20), MH+未見。
中間體6:l-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-4-曱醛
氮氣下，向水水冷卻的1^-曱氧基-^曱基-1-苯基二環(huán)[2,2,2]辛烷-4-甲酰胺(中間體5; 8.49g, 31.05mmol)的無水THF(100mL)溶液中逐滴加 入氬化鋰鋁(1M THF溶液，62mL),將反應混合物在0。C攪拌1小時。 向其中小心加入水(25mL),然后加入EtOAc( 100mL)，再將混合物用C 鹽墊過濾，用EtOAc(50mL)洗滌。用鹽水(150mL)洗滌濾液，有機相分 離，干燥(MgS04)并濃縮，得無色油狀的題述化合物，其通過靜置變成 固體(6.92g, 32.28mmo1, 100%); ^NMR(CDCl3) 5 1.72 - 1.83 (6H, m), 1.87 - 1.94 (6H, m), 7.17畫7.22 (1H, m)， 7.31畫7.33 (4H, m)， 9.53 (1H: s); GC國MS Elm/e M+214。
中間體7:4-[2-曱氧基乙烯基]-l-苯基-二環(huán)[2.2.2]辛烷
<formula>complex formula see original document page 39</formula>氮氣下，向水水冷卻的、攪拌的(曱氧基曱基)三苯基氯化轔(17g, 49.57mmol)的無水THF(100mL)懸浮液中加入雙(三曱基甲硅烷基)氨 基化鋰(1MTHF溶液；50mL， 50mmo1),將反應混合在0。C攪拌30分鐘。 逐滴加入l-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-4-曱醛(中間體6; 10.52g, 49.08mmo1) 的THF(20mL)溶液，將反應混合物在0。C攪拌1小時，然后在室溫下攪 拌過夜。加入水(100mL)，且反應混合物在EtOAc(200mL)和鹽水(100mL) 間分配，有機相再次經100mL鹽水洗滌后分離，干燥(MgS04)并濃縮得 淺黃色膠狀物。將殘留物在330gPresearch硅膠管上純化，異己烷/DCM 載樣，用0-20°/。EtOAc-異己烷洗脫，得淺黃色油狀的題述化合物(12.6g, 50.19mmo1， 100%),其為E:Z異構體1:2的混合物。
E異構體:111 NMR (CDC13) S 1.60 - 1.65 (2H, m)， 1.82 - 1.88 (10H, m), 3.49 (3H, s), 4.74 (1H, d), 6.18 (1H, d), 7.12 - 7.18 (1H, m), 7.25 - 7.34 (4H, m); Z異構體！H NMR (CDC13) S 1.60曙1.65 (2H, m)， 1.82 - 1.88 (10H, m), 3.54(3H, s), 4.09 (1H, d), 5.71 (1H, d)， 7.12-7.18 (1H, m), 7.25 - 7.34 (4H, m); MS (兩種異構體相同):GC畫MS EI+ m/e 242 (M+)。
中間體8:2-(1-苯基-4-二環(huán)[2.2.2]辛基)乙酸甲酯
向攪拌的4-[2-曱氧基乙基]-l-苯基-二環(huán)[2.2.2]辛烷(中間體7; 12.6g， 51.99mmol)的DCM(200mL)溶液中逐份加入氯鉻酸吡啶鏡(33.6g， 155.97mmo1),并將反應混合物在室溫下攪拌2小時。再次加入氯鉻酸 吡咬鐳(12g, 55.99mmo1),繼續(xù)攪拌1小時。過濾反應混合物，將濾液 減壓濃縮，加入醚(200mL)，有機相用水洗滌(200mL)。向過濾所 得的固體中加入水(200mL)和醚(2x200mL),然后將混合物用C鹽 墊過濾。合并有機萃取物，干燥(MgS04)并濃縮得棕色膠狀物。所得的膠狀物在330g Crawford硅膠管上純化，DCM載樣，用5-10-20%EtOAc-異己烷洗脫，得霜乳狀固體的題述化合物(7.89 g, 30.53 mmol, 59%); ]H NMR (CDC13) 5 1.63 - 1.71 (6H, m), 1.83 - 1.93 (6H, m), 2.17 (2H, s), 3.67 (3H, s), 7.14 - 7.19 (1H, m), 7.29 - 7,32 (4H, m); GC-MS EI m/e M+258。
中間體9: {4-[4-(2-溴-2-曱基丙?；?苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸
曱酯<formula>complex formula see original document page 40</formula>向水水冷卻的(4-苯基-二環(huán)[2.2.2]辛基-l-基)乙酸曱酯(中間體8; 3.88g , 15.02mmol)的DCM(150mL)溶液中力。入氯化鋁(6.01g , 45.05mmol)，然后逐滴加入2-溴異丁酰溴(1.86mL， 15.02mmol)。將反 應混合物在~ 0。C攪拌30分鐘，然后倒于水水中(20mL)。分離出有機相， 用DCM(2xl50mL)洗滌水相，合并有才幾洗滌物，干燥(MgS04)并濃縮后 得黃色膠狀物。將所得的膠狀物在120g Crawford硅膠管上純化，DCM 載樣，用0-10-20o/o異己烷-EtOAc洗脫，得白色固體產品(5.18g, 12.72 mmol, 85%).丄HNMR(CDCl3) S 1.64 - 1.69 (6H, m), 1.83 - 1.88 (6H, m), 2.03 (6H, s), 2.18(2H, s), 3.66 (3H， s)， 7.36 (2H, d), 8.10 (2H, d); 固體^罙4十MS m/e M+ 407。
中間體10: {4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-71^嘧啶并[4，5-13][1,4]18惡嗪-6-基)苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸甲酯
注中間體10與中間體1為相同的化合物<formula>complex formula see original document page 40</formula>向5,6-二氨基嘧啶-4-醇(280mg, 2.2mmol)的水(8mL)、無水乙醇 (25mL)和1MHCl(2.2mL, 2.2mmol)溶液中加入(4-[4-(2-溴-2-曱基丙?；? 苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-l-基)乙酸曱酉旨(中間體9; 877mg， 2.15mmol)的無水
EtOH(80mL)溶液。將溶液加熱至IO(TC過夜，然后冷卻至室溫，蒸干， 將殘留物用2M氫氧化鈉處理，調整pH值至10。將所得懸浮液過濾得 黃色固體，該固體在12gpresearch硅膠管上純化，干燥載樣在硅石(2g) 中，用0-2.5-5% MeOH-DCM洗脫，得白色固體狀的題述化合物(601 mg, 1.38 mmol, 64%) &麗R S 1.59 - 1.63 (12H, m), 1.79 - 1.83 (6H, m), 2.16 (2H, s), 3.59 (3H, s)， 6.91 (2H, s), 7.39 (2H, d), 7.64 (2H, d), 7.95 (1H, s); MS m/e固+ 435。
實施例2: f3-r4-"-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并K5-bin.41喝嗪-6-基) 苯基-l-金剛烷基l乙酸
根據(jù)實施例1描述的步驟(第一制備)，使用{3-[4-(4-氨基-7,7-二 曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4r惡嗪-6-曱基)苯基]-l-金剛烷基)乙酸甲酉旨(中 間體13)制備得題述化合物，收率58%; ^NMR 5 1.67 (s, 6H), 1.69 (s, 6H), 1.78 (s, 2H), 1.88 (s, 4H), 2.12 (s, 2H), 2.20 (s, 2H), 6.96 (s, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.73 (d, 2H), 8.01 (s, 1H); MS m/e固+ 447。
中間體11: (3-苯基-l-金剛烷基)乙酸甲酯
向水水冷卻的3-苯基金剛烷-l-羧酸(735mg, 2.87mmol)的 DCM(50mL)溶液中加入DMF(2-3滴)，然后加入草酰氯(0.25mL)。將反 應混合物在0。C攪拌6小時，將溶劑減壓蒸干得粗制酰氯，該酰氯直接 使用。將所得物再次溶解于1:1比例的MeCN和THF(10mL)混合物中，
然后逐滴加入到水水冷卻的三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2M; 2.0mL)和三 乙胺(0.50mL， 3.58mmol)混合物的MeCN和THF(20mL) ( 1:1)溶液中。 將所得黃色反應混合物升溫至室溫過夜。減壓除去溶劑，將殘留物再次 溶解于EtOAc(50mL)中，并用水(50mL)、 NaHCO3(50mL)和鹽水(50mL) 洗滌。將有機相干燥(MgS04)，濃縮得棕紅色膠狀物(344mg)。將所得物 在12g Crawford硅膠管上純化，DCM載樣，用0-20%EtOAc洗脫。分 離得到黃色膠狀的2-重氮-l-(3-苯基-l-金剛烷基)乙酮(ethanone )(699 mg: 2.49 mmol， 87%)。 & NMR (CDC13) 3 1.74 (s， 2H), 1.83 (s， 4H)， 1.91 -1.94 (m, 6H), 2,27(s, 2H), 5.43 (s, 1H), 7.18 - 7,22 (m, 2H), 7.31 -7.38 (m, 4H); GC國MS CI m/e固+ 281 。
將重氮酮(699mg, 2.49mmol)溶解到甲醇(25mL)中，并靜置于超聲 浴中。向其中逐滴加入苯甲酸銀(114mg， 0.498mmol)的三乙胺(1.4mL, 9.96mmo1, 4當量)溶液，將混合物超聲1小時。蒸去甲醇后將殘留物溶 解于EtOAc(50mL),用NaHC03 (40mL)、檸檬酸(2M， 40mL)、鹽水(40mL) 洗滌，干燥(MgS04),濃縮得黃色油。將所得物在12g硅膠管純化，DCM 載樣，用10-20Q/。EtOAc-異己烷洗脫，得淺黃色膠狀的題述化合物 (421mg, 1.48mmol;從重氮酮計算的收率為59%); ^NMR (CDC13) S 1.64 -1,70 (m, 5H), 1.76 (s, 2H), 1.86 - 1.96 (m, 5H), 2.17 (s, 2H), 2.18腸 2.19 (m, 2H)，3.65(s, 3H), 7.15國7.20 (m, 1H)， 7.29畫7.37 (m, 4H); GC國MS EI m/e M+284。
中間體12: {3-「4-(2-溴-2-甲基丙?；奖交?-1-金剛坑基1乙酸甲酯<formula>complex formula see original document page 42</formula>
根據(jù)前述制備中間體9的步驟，采用(3-苯基-l-金剛烷基)乙酸甲酉旨， 分離出題述化合物，收率為35%: ^NMR(CDCl3)S 1.66(d, 4H)， 1.71 (s, 2H), 1.77 (s, 2H), 1.87 (s, 4H), 2.04 (s, 6H), 2.18 (s, 2H), 2.20 -2.22 (m, 2H), 3.65 (s, 3H)， 7.41 (d, 2H)， 8.12 (d, 2H); GC畫MS CI m/e固+ 433。
中間體13:〖3-r4-(4-氨基-7.7-二曱基-7H-嘧啶并r4.5-bl「1.41哺嗪-6-基) 苯基l -1 -金剛烷基}乙酸甲酯
根據(jù)前述制備中間體l(iv)的步驟，使用{3-[4-(2-溴-2-甲基丙酰基) 苯基]-1-金剛烷基}乙酸曱酯(中間體12)制備，分離出題述化合物，收 率44%: & NMR 5 1.62 (s, 6H), 1.65 - 1.69 (m, 6H), 1.71 (s, 2H), 1.83 (s, 4H), 2.15(s, 2H), 2,17 (s, 2H), 3.58 (s， 3H), 6,92 (s, 2H), 7.42 (d, 2H), 7.68(d, 2H)， 7.96 (s, 1H); MS m/e畫+461 。
實施例3: 3-「4-"-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并K5-bl「l,4r惡嗪-6-基) 苯基l金剛烷-l-甲酸
根據(jù)前述制備實施例l(第一制備)，使用3-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l，4]嗜嗪-6-基)苯基]金剛烷-l-甲酸曱酯(中間體15)制備， 得題述化合物，收率25%: ^NMR^ 1.62 (s, 6H), 1.70 - 1.72 (m, 2H), 1.83 - 1.88 (m, 7H), 2.16 - 2.19 (m, 2H), 6.92 (s, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.68 (d, 2H)， 7.96 (s, 1H); MS m/e顧+ 433。 中間體14: 3-「4-(2-溴-2-甲基丙?；?苯基l金剛烷-l-甲酸曱酯
根據(jù)前述制備中間體l(iii)的過程，使用3-苯基金剛烷-l-曱酸甲酯 制備(CAS編號27011陽58國l,Stepanov，F(xiàn). N.; Dovgan,N. L. Kiev. Politekh. Inst.， Kiev, USSR. Zhurnal Organicheskoi Khimii (1970)， 6(8)， 1623-7. 或Danilenko， G. L; Krayushkin, M.m.; Sevost'yanova， V. V. Inst. Org. Khim. im. Zelinskogo, Moscow, USSR. Izvestiya Akademii Nauk SSSR， SeriyaKhimicheskaya (1970), (2), 444-5)。分離出題述化合物，收率89%: H NMR (CDC13) 5 1.91國1.93 (m, 8H), 2.04 (s, 6H)， 2.23國2.27 (m, 6H), 4.52 (s, 3H), 7.42 (d, 2H), 8.13 (d, 2H); GC-MS CI m/e固+ 421。
中間體15: 3-r4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并r4.5-bin.4r惡嗪-6-基) 苯基l金剛烷-l-羧基甲酯
根據(jù)前述制備中間體l(iv)的過程制備，使用3-[4-(2-溴-2-甲基丙酰 基)苯基]金剛烷-l-羧基甲酯，分離出題述化合物，收率44%;所得化合 物在下一階段直接使用而不需要進行表征；MS m/e MH+ 447。
實施例4: 244-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-7^嘧啶并「4.5-1)1「1.41^嗪-6-基)苯基1二環(huán)『2.2.21辛-1-基1丙酸
將2-{4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]嗜嗪-6-基)苯基] 二環(huán)[2.2,2]辛-1-基}丙酸甲酯(中間體18; 220mg, 0.49mmo1)和三甲 基甲娃烷酸鐘(potassium trimethylsilanolate ) (315mg, 2.45mmol)混合 物的THF(5mL)溶液在100°C的微波環(huán)境下加熱35分鐘，然后在室溫下 攪拌2天。減壓除去溶劑，殘留物在2M HCl(20mL)和EtOAc(50mL)之 間分配，用EtOAc(50mL)進一步萃取水相。合并有機萃取物，干燥(MgS04) 并濃縮得膠狀物。將所得膠狀物溶解于DMSO/MeCN/H20(7:2:l)并用反 相色譜分離，用5-95%水-乙腈0.2%TFA洗脫，得白色固體狀的題述化 合物(45 mg, 0.104 mmol, 21%);H NMR S 1.01 (d, 3H)， 1.49畫1.55 (m, 3H), 1.62 (s, 6H), 1.64國1,69 (m, 3H), 1.78 - 1.81 (m, 6H), 2.12 (q, 1H)， 7.05 (s， 1H), 7.40 (d, 2H), 7.65 (d, 2H), 7.99 (s, 1H); MS m/e MH+ 435。
中間體16: 2-(4-笨基二環(huán)「2.2.21辛-l-基)丙酸曱酯
向冷卻至-78。C(CO2/丙酮)的二異丙基胺(0.9mL， 6.39mmol)的無水 THF(10mL)溶液中加入nBuLi(2M環(huán)己烷溶液；3.2mL, 6,4mmo1),將反 應混合物在-78。C攪拌5分鐘。向混合物中加入(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酉旨(中間體l(ii); 1.5g， 5.81mmol)的無水THF(2mL)溶液，混 合物立刻變成深棕/黑色。將混合物在-78。C攪拌~ 30分鐘，然后加入碘 甲烷(0.4mL, 6.39mmo1)，反應混合物在4小時內升溫至室溫。向混合物 中加入飽和氯化銨水溶液(50mL)，用EtOAc(2xl50mL)萃取混合物， 合并有機相，干燥(MgS04)，濃縮得粗制產物，該產物為題述化合物與 初始原料不可分的混合物，該產物^皮直接用于下一階段而未經表征。
中間體17: M-「4-(2-溴-2-甲基丙?；?苯基l二環(huán)r2.2.21辛-l-基)乙酸
甲酯
向水水冷卻的粗制(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-1-基)乙酸曱酯(中間體16; 961mg， 3.53mmol)的DCM(10mL)溶液中加入氯化鋁(1.4g, 10.58mmo1)， 然后逐滴加入2-溴異丁酰溴(0.45mL， 3.53mmo1)。將反應混合物在 0。C 攪拌 40分鐘，然后倒于冰水(~ 100mL)中。分離出有機相，用 DCM(3x50mL)洗滌水相，將有機洗滌物混合，干燥(MgS04)并濃縮得黃 色膠狀物。該膠狀物在120gsilicyle硅膠柱上純化，DCM載樣， 0-10%-20%異己烷-EtOAc洗脫，產物用10%EtOAc洗脫。合并混合的 級分，再根據(jù)前述方法用120g硅膠管純化，得白色固體狀題述化合物 (705 mgl.67mmol，470/0)。 & NMR (CDC13) S 1.09 (d, 3H), 1.50- 1.57 (m, 3H), 1.67 - 1.74 (m, 3H), 1.82 - 1.86 (m, 6H)， 2.03 (s, 6H), 2.27 (q, 1H), 3.67 (s, 3H), 7.37 (d, 2H), 8.11 (d, 2H); GC畫MS CI m/e MH+ 421。
中間體18: 244-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-71"1-嘧啶并[4,5-1)1「1.4118惡嗪-6-基1苯基)二環(huán)「2.2.21辛-1-基}丙酸甲酯
通過將4,5-二氨基-6-羥基嘧啶半硫酸鹽(semisulfate)( 5g)懸浮于 DMF(600mL)和MeCN (100mL)的混合溶液中、加入聚合物承載的碳酸 鹽并將混合物于室溫靜置24小時(偶爾攪拌)而將其轉化為游離堿。過濾 懸浮液，將濾液濃縮得桔黃色固體(1.76g)。將所得游離堿加入到{4-[4-(2-溴-2-曱基丙?；?苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}乙酸曱酯(中間體H; 705mg, 1.67mmol)的無水EtOH(20mL)溶液中，然后向其中加入1MHCl(2.0mL)。將懸浮液在輕微回流下加熱過夜。將混合物冷卻至室溫， 蒸干，用2MNaOH處理殘留物，將pH值調整至 10。過濾懸浮液得黃 色固體，用EtOAc(2xl00mL)萃取濾液，分離出有機萃取物，干燥(MgS04) 并濃縮得淺黃色膠狀物。將合并的產物在12g Crawford硅膠管純化，將 樣品干燥載樣于無活性二氧化硅中，用Isco companion的0-5% DCM-MeOH洗脫，得霜乳狀固體的題述化合物(220mg, 0.491mmo1, 29%); iHNMRS 1.02 (d,3H), 1.44 - 1.52 (m, 3H), 1.61 - 1.67 (m, 9H), 1.77- 1.79 Cm, 6H), 2.24(q， 1H), 3.60 (s， 3H), 6.89 (s， 2H)， 7.39 (d, 2H), 7.64 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); MS m/e固+ 449。
實施例5: f5-「4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并「4.5-bin.4卩惡嗪-6-基) 苯基1二環(huán)「3.2.21壬-1-基}乙酸
向(5-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]哺嗪-6-基)苯基]二 環(huán)[3.2.2]壬-1-基}乙酸曱酯(中間體25; 55mg， 0.12mmol)的MeOH (5mL)溶液中加入2M氫氧化鈉(0.3mL)，將反應混合物在室溫下攪拌過 夜，然后再50。C攪拌8小時，再在室溫下攪拌過夜。減壓除去溶劑，用 2MHCl酸化殘留物至pH2，將濾液用EtOAc(2x50mL)萃取，合并有 機萃取物，干燥(MgS04)并濃縮得黃色膠狀物。將該產物通過反相制備 HPLC純化，將樣品載樣于DMSO/MeCN/H20 (7:2:1)中，用每一相均用 含有0.2%TFA的5-95水-MeCN溶液洗脫，得淺黃色固體狀題述化合物 (31mg， 0.0714mmoL 59%);力N證S 1.34 - 1,56 (14H, m), 1.63 (6H, s)， 1.95 (2H, s), 7.15(2H, d), 7.63 - 7.66 (2H, m)， 8.02 (1H, s); MS m/e顧+ 435。
中間體19: 二環(huán)「3.2.21壬烷-l,5-二羧酸單曱基酯向攪拌的二環(huán)[3.2.2]壬烷-l,5-二羧酸二曱酯(2.02g， 8.41mmol)的曱 醇(20mL)和水(4mL)溶液中加入八水合氬氧化鋇(1.33g, 4.20mmo1)。將 反應混合物室溫下劇烈攪拌過夜。將反應混合物室溫下劇烈攪拌過夜。 將反應混合物用水(20mL)稀釋，用異己烷(2 x 100mL)洗滌，然后用2M HCl酸化水相至pH2，萃取至EtOAc(2 x 100mL)中。合并有機相，干 燥(MgS04)并濃縮得透明無色膠狀的題述化合物(931mg， 4.11mmo1， 49%),該產物緩慢變成白色固體；iHNMR(CDCl3)S 1.72 - 1.75 (m,2H), 1.87 - 1.92 (m, 12H), 3.65 (s, 3H); GC-MS EI m/e M+ 226。
中間體20: 5-溴二環(huán)「3.2.21壬烷-l-羧酸甲基酯
向攪拌的(中間體19; 3.43g， 15.16mmol)在丙酮(25mL)的懸浮液中 加入1M氫氧化鈉(16mL),將所得清澈的淺黃色溶液在室溫下攪拌10 分鐘。向溶液中加入硝酸銀(2.73g, 16.07mmol)的水(4mL)溶液，立刻形 成深棕色懸浮液，將其在室溫下攪拌60分鐘。過濾懸浮液，用水(1 OOmL)、 丙酮(100mL)和醚(100mL)的混合物洗滌。將該懸浮液在45。C真空環(huán)境中 干燥過夜得棕色固體(4.42g)。
氮氣下，向該銀鹽(4.24g, 12.73mmol)的40-60石油醚(50mL)懸浮液 中逐滴加入溴(0.65mL, 12.73mmo1)。將所得桔黃色懸浮液在室溫下攪拌 30分鐘，然后在60。C攪拌40分鐘。接著將反應混合物冷卻至室溫，過 濾懸浮液，固體用醚(3 x 100mL)洗滌后再用1M碳酸鉀(3 x 150mL)洗滌。 分離出有機相，用鹽水(100mL)洗滌，干燥(MgS04),濃縮得淺黃色油狀 題述化合物(1.22g， 4.67mmo1， 37%); !HNMR (CDC13) 5 1.69 - 1.75 (m, 2H), 1.83國2.00 (m, 6H), 2.43國2.50 (m, 6H), 3.65 (s, 3H); GC-MS CI m/e畫+ 261。
中間體21: 5-苯基二環(huán)「3.2.21壬烷-l-羧酸
氮氣下，向5-溴二環(huán)[3.2.2]壬烷-l-曱酸甲酉旨(中間體20; 1.22g,
4.67mmol)的無水苯(5mL)溶液逐滴加入水水冷卻的氯化鋁(2.3g, 17.28mmol)苯(5mL)懸浮液。將所得反應混合物在水浴中攪拌 30分鐘， 然后從冷水浴上移出，溫熱并攪拌至室溫過夜。將混合物在60。C加熱4 小時，然后冷卻至室溫，小心地將該混合物倒于水(30g)和濃HCl(5mL) 的混合物中。用醚(4 x lOOmL)萃取混合物，將萃取物合并，用鹽水(50mL) 洗滌，干燥(MgS04)得桔棕色膠狀物(821mg)。將粗制材料再次溶解于 MeOH(20mL)和2MNaOH(8mL)的混合物中，在室溫下攪拌過夜。將溶 劑除去，殘留物在氫氧化鈉和醚之間分配，然后將水相酸化并用EtOAc 萃取。將有機萃取物干燥、濃縮后得棕色膠狀的題述化合物(534mg， 2.18mmo1, 47%); & NMR S 1.34 - 1.38 (m, 6H), 1.61畫1.65 (m, 6H), 2.40 (s, 2H), 7.07 (d, 2H)， 7.16 - 7.20 (m, 1H), 7.24 - 7.28 (m, 2H), 11.87 (s, 1H); GC-MS EI m/e M+ 244 。
中間體22: 2-重氮-l-(4-苯基二環(huán)「3.2.21壬-l-基)乙酮
向5-苯基二環(huán)[3.2.2]壬烷-l-羧酸(中間體21; 534mg， 2.19mmol)的 DCM(10mL)溶液中加入DMF(2滴)，然后加入草酰氯(0.3mL, 3.28mmo1)。 將反應混合物在室溫下攪拌過夜，減壓條件下將溶劑蒸出，得粗制酰氯， 該物質可直接使用。
將所得粗制產物再次溶解于1:1比例的MeCN和THF(10mL)溶液 中，并逐滴加入到水水冷卻的(三甲基曱硅烷基)重氮甲烷(2M; 1.5mL, 3.0mmol)和三乙胺(0.4mL, 2.73mmol)在MeCN和THF(20mL) ( 1:1 )混 合物的溶液中。將反應混合物在0。C攪拌1小時，然后再在室溫下攪拌 5小時后將其靜置整個周末。減壓除去溶劑，將殘留物再次溶解于 EtOAc(250mL)中，用水(100mL)、飽和NaHC03水溶液(150mL)和鹽水 (150mL)洗滌。將有機相干燥(MgS04),濃縮得棕色膠狀物。該膠狀物在 40g Crawford硅膠管中純化，DCM載樣，用0-10% EtOAc-異己烷洗脫， 得桔黃色膠狀的題述化合物(252mg， 0.940mmo1， 43%); !HNMR(CDCl3) S 1.24 - 1.29 (1H, m), 1.43 - 1.47 (6H, m), 1.61 - 1.67 (6H, m), 5.28 (1H, s)， 7.05 - 7.24 (5H， m)。
中間體23: (5-笨基二環(huán)[3.2.21壬-l-基)乙酸甲酯
將2-重氮-l-(4-苯基二環(huán)[3.2.2]壬-l-基)乙酮(中間體22; 252mg, 0.94mmol)溶解于甲醇(10mL)中，逐滴加入苯酸銀(44mg, 0.19mmol)的 三乙胺(0.52mL， 3.76mmol)溶液，再將所得混合物在超聲浴中超聲1小 時。蒸去曱醇，將殘留物溶解于EtOAc(20mL)中，經C鹽墊過濾并用 NaHC03 (10mL)、 4寧檬酸水溶液(2M, 10mL)、鹽水(10mL)洗滌，然后干 燥(MgS04),濃縮得棕色膠狀物229mg,未作進一步表征直接用于下一 階段。
中間體24: {5-「4-〖2-溴-2-曱基丙?；奖交?二環(huán)「3.2.21壬-1-基}乙酸
甲酯
向水水冷卻的(5-苯基二環(huán)[3.2.2]壬-l-基)乙酸甲酯(中間體23; 229mg， 0.79mmol)的DCM(10mL)溶液中加入氯化鋁(318mg, 2.38mmo1), 然后逐滴加入2-溴異丁酰溴(O.lOmL, 0.79mmo1)。反應混合物在0。C攪 拌40分鐘后倒于水水(100mL)中。分離有機相，用DCM(3 x 50mL)洗滌 水相，合并有機洗滌物，干燥(MgS04),濃縮得黃色膠狀物。該所得物 在12gCmwford硅膠管上純化，DCM載樣，用0-10%-20°/。異己烷-EtOAc 洗脫，得淺黃色膠狀的題述化合物(85mg, 0.202mmo1， 26%); ^NMR (CDC13) S 1.09 (d, 3H), 1.50 - 1.57 (m, 3H), 1.67畫1.74 (m, 3H), 1.82 曙1.86 (m， 6H), 2,03 (s, 6H), 2.27 (q, 1H), 3.67 (s, 3H), 7.37 (d, 2H)， 8.11 (d, 2H); GC-MS CI m/e固+ 421 。 中間體25: {5-「4-(4-氨基-7.7-二甲基-7!1-嘧啶并[4.5-1)1『1.41-惡嗪-6-基)苯基1二環(huán)「3.2.21壬-1-基}乙酸曱酯
通過將4,5-二氨基-6-羥基嘧啶半硫酸鹽( 5g)懸浮于DMF(600mL)和 MeCN (100mL)的混合物中、加入聚合物承載的碳酸鹽并將混合物于室 溫下靜置24小時(偶爾攪拌)而將其轉化為游離堿。過濾懸浮液，將濾液 濃縮得桔黃色固體(1.76g)。
向{5_[4-(2-溴-2-甲基丙?；?苯基]二環(huán)[3.2.2]壬-1-基}乙酸曱酯(中 間體24; 80mg, 0.19mmol)的無水EtOH (20mL)溶液中加入5，6- 二氨基 嘧"定-4-醇(30mg， 0.21mmo1),然后再加入1M HC1 (0.21mL)。將懸浮液 在輕微回流下加熱(80°C )過夜，然后冷卻，除去溶劑后用2M NaOH (2mL) 處理殘留物。用EtOAc萃取水相(3 x 50mL)，合并有機萃取物，干燥 (MgS04),濃縮得淺黃色膠狀物。將該膠狀物在12g Crawford硅膠管中 純化，DCM載樣，用0-5-10%MeOH-DCM洗脫，得淺黃色膠狀的題述 化合物(55mg, 0.123mmol， 65%); !HNMR(CDCl3) 1.41畫1.61 (14H, m), 1.71 (6H, s), 2.07 (2H, s), 3.61 (3H, s)， 7.11 (2H, d), 7.51 (2H, d), 8.14 (1H, s); MS m/e固+ 449。
實施例6: 444-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并「4,5-bl「l,4r惡嗪-6-基) 苯基l二環(huán)「2.2.21辛烷-l-甲酸<formula>complex formula see original document page 51</formula>向4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4，5-b][l,4r惡嗪-6-基)苯基二 環(huán)[2.2.2]辛烷-1國甲酸曱酯(中間體27; 140mg, 0.33mmol)的MeOH (10mL)溶液中加入2MNaOH(0.82mL, 1.66mmo1)。將反應混物在室溫下攪拌過夜，然后加入EtOH ( 5mL)和1M NaOH (2mL),再將反應混合 物在50。C加熱5.5小時。減壓蒸餾除去有機溶劑，用2M HC1酸化殘留 物至pH 2。向其中加入EtOAc,過濾所得懸浮液，干燥得題述化合物 (97mg，2,39mmol，72%); !HNMRS 1.60 (s， 6H), 1.82 (s, 12H), 6.97 (s, 1H) 7.40 (d, 2H), 7.65 (d, 2H)， 7.95 (s， 1H), NH^未見；MS m/e固+ 407。
中間體26: 4-「4-(2-溴-2-甲基丙?；?苯基1二環(huán)「2.2.21辛烷-1-曱酸甲
酯
向水/IPA冷卻的4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-甲酸甲酯(按照N.B Chapman, S.Sotheeswaran和KJ. Toyne在J. Org. Chem.， 1970, 35, (4), 917描述的步驟得到)(412mg， 1.69mmol)的DCM(20mL)溶液中加入氯化 鋁(680mg, 5.06mmo1),然后逐滴加入2-溴異丁酰溴(0.21mL, 1.69mmo1)。將反應混合物在0。C下攪拌30分鐘，然后倒于水水(~ 50mL) 中。將水混合物用DCM(3 x 100mL)萃取，合并有機萃取物，用鹽水 (100mL)洗滌，干燥(MgS04)并濃縮得粗制產物。該產物在12g Redisep 硅膠管上純化，樣品用DCM載樣，用醚/異己烷(1 :9)洗脫，得桔色固體 狀題述化合物507mg (1.29mmo1,76%); ^ NMR (CDC13) 5 1.87 - 1.95 (m, 12H), 2,04 (s, 6H), 3.68(s, 3H)， 7.38 (d, 2H), 8.11 (d, 2H); GC-MS CI m/e顧+407。
中間體27: 4-「4-(4-氨基-7.7-二甲基-7H-嘧啶并r4.5-bin,4r惡嗪-6-基) 苯基l二環(huán)「2.2.21辛烷-1-甲酸甲酯
向4-[4-(2-溴-2-曱基丙酰基)苯基]二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-甲酸曱酯(中間 體26; 507 mg, 1.29 mmol)的無水EtOH (10mL)溶液中加入5,6-二氨基嘧啶-4-醇(179mg, 1.42mmol)，然后加入1M HCl(1.4mL)。將懸浮液在 回流下加熱過夜，再將反應混合物冷卻至室溫，蒸干。殘留物用2M碳 酸鉀溶液處理，調整pH值至10,然后用EtOAc(4x50mL)萃取混合物。 合并有機萃取物，干燥(MgS04)，濃縮得黃色膠狀題述化合物，將所得 化合物在12g Redisep硅膠管上提純，將樣品干燥載樣在Merck 二氧化 硅(去活性，-lg)中，用DCM-MeOHO-2。/o-5。/o洗脫，得題述化合物150mg (0,357 mmol, 27%); & NMR S 1.61 (s, 6H), 1.84 (s, 12H)， 3.61 (s, 3H), 6.98 (s, 2H), 7,41 (d, 2H), 7.66 (d, 2H), 7.95 (s, 1H); MS m/e MH+ 421。
實施例7:通過乙醇，對曱苯石黃酸鹽和腈同系化 (4-苯基二環(huán)「2.2.21辛-l-基)甲醇
氮氣下，向攪拌的氫化鋰鋁(20g， 527mmol)的THF(1.25L)溶液中加 入4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛烷-l-甲酸乙酯(207g, 801mmo1)的THF(850mL) 溶液，用水/水浴將溫度保持在20-25。C。攪拌反應混合物3小時，靜置 過夜，然后通過加入水(900mL)和水(300g)混合物將反應淬滅。將混合物 用濃鹽酸酸化至pH值1-2,然后用乙酸乙酯(3 x 1 L)萃取。將合并的有 機物干燥(MgS04)，蒸干得棕色固體狀的題述化合物(176g; 100Q/Q)。 & NMR (CDC13) 1.35 (1H, brd s), 1.40 - 1.52 (6H, m), 1.71 - 1.85 (6H, m), 3.25 (2H, s), 7.05 - 7.13 (1H, m), 7.17 - 7.30 4H, m)。
4-苯基二環(huán)「2.2.21辛-l-基曱基甲苯-4-磺酸酯 向攪拌的(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-l-基)曱醇(7.0g, 32.36mmol)的
DCM(70mL)溶液中加入嘧啶(4mL),然后再加入曱苯-4-磺酰氯(7.4g,
38.81mmol)的無水DCM(30mL)溶液，整個過程保持溫度在0-5。C。將反
應混合物在0。C攪拌過夜，回流2小時，然后冷卻至35。C。再次向混合物
中加入嘧咬(2mL)和甲苯-4-磺酰氯(3.9g)的DCM(10mL)溶液，將所得混合
物在回流下攪拌2小時。因還保留有一些初始原料，所以向混合物中加
入催化量的4-二甲基氨基吡啶，將混合物在回流下攪拌過夜。將混合物
冷卻，用DCM(200mL)稀釋，然后用水(100mL)、鹽酸(2M; 150mL)、水
(50mL)、飽和NaHC03水溶液(100mL)、水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌。將溶液干燥(MgS04)后，濃縮得粗制產物，該產物用二氧化硅柱色譜純
化(二氧化硅40-63微米)，用己烷:乙酸乙酯(19:1至4:1)洗脫，得淺黃
色固體狀的題述化合物(10.7 g, 89%)。
& NMR (CDC1》1.38 - 1.50 (6H, m), 1.68 - 1.79 (6H, m), 2.38 (3H, s)， 3.62 (2H, s), 7.05 - 7.13 (1H, m)， 7.15 - 7.25 (4H, m), 7.27 (2H, d), 7.73 (2H, d)。
(4-苯基二環(huán)「2.2.21辛-l-基)乙腈
氮氣下，將攪拌的4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-l-基曱基甲苯-4-磺酸酯 (2.5g， 6.75mmol)和氰化鈉(0.5g, 10.20mmol)混合物的DMSO (20mL)溶 液在IO(TC加熱5小時。在冷卻過夜后，將混合物倒入水(100mL)中，然 后用DCM(2 x 100mL)萃取，再用曱基叔丁基醚(3 x 100mL)萃取。DCM 和曱基叔丁基醚相各自合并，用水(50mL)洗滌，干燥(MgS04)。然后合 并有機相，將溶劑蒸出得粗制產物，該產物用二氧化硅柱色譜純化(二氧 化硅40-63微米)，用己烷:乙酸乙酯(19:1)洗脫，得白色固體狀的題 述化合物(1.4g; 93%)。
& NMR (CDC13) 1.58 - 1.69 (6H， m), 1.79 - 1.89 (6H, m)， 2.11 (2H, s), 7.07 - 7.13 (1H, m), 7.19 - 7.28 (4H, m)。 (4-笨基二環(huán)『2.2.21辛-l-基)乙酸
將KOH (l.Og， 17.52mmol)的水(1.0mL)溶液加入到(4-苯基二環(huán)[2.2.2] 辛-l-基)乙腈(0.5g)的乙二醇(10mL)懸浮液中，將混合物在165。C攪拌 6小時，冷卻，然后倒入至水(100mL)中。將混合物用濃鹽酸( 0.5mL) 酸化至pH為1,然后用乙酸乙酯(100mL,然后30mL)萃取。用水(2 x 50mL) 洗滌合并的萃取物，干燥(MgS04),濃縮得霜乳固體狀的題述化合物(0.5 g; 93%)。
& NMR (CDC13) 1.57 - 1.69 (6H， m), 1.75 - 1.85 (6H, m), 2.12 (2H， s), 7.07 - 7.14 (1H, m), 7.19 - 7.28 (4H, m)。 (4-苯基二環(huán)「2.2.21辛-l-基)乙酸甲酯 使用氯化鈣保護管，將新制備的鹽酸曱醇( 3M; 2mL, 6mmo1)
溶液加入到(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-l-基)乙酸(0.3g)的曱醇(3mL)溶液中，將
混合物攪拌4小時。蒸出溶劑得白色固體狀的題述化合物(0.25 g; 78%)。
& NMR (CDC13) 1.50 — 1.65 (6H， m), 1.71 — 1.83 (6H, m), 2.10 (2H,
s)， 3.58 (3H, s)， 7.03 - 7.12 (1H， m), 7.17 - 7.28 (4H, m)。
實施例8:中間體4， 4-苯基二環(huán)「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯的另一種合 成方法
步驟1: 4-甲氧基-2-氧代-二環(huán)「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯<formula>complex formula see original document page 55</formula>所有摩爾當量和體積均由起始原料計算得出。<formula>complex formula see original document page 55</formula>
氮氣下，在30分鐘內向攪拌的3-氧代丁酸乙酯(1當量)和Triton-B (水中的40wt0/()溶液，0.02當量)的叔丁醇(1.2 v/w)溶液中逐滴加入丙 烯酸叔丁基酯(2.00當量)；觀察到穩(wěn)定持續(xù)的放熱，其用水/水冷卻控制。 一旦放熱減輕，將溶液在室溫攪拌過夜。
反應混合物在水(4.0 v/w)和MTBE (12.0 v/w)之間分配。分離出的水 相進一步用MTBE(8.0 v/w)萃取，將合并的有機相經MgS04干燥，過濾 并真空濃縮得淺黃色油狀產物。
歩驟2: 4-乙?；?4-乙氣基羰基庚二酸
氮氣下，在0。C于兩小時內向攪拌的步驟1所得產物(l當量)的 DCM(2.6 v/w)溶液中加入TFA (2.6 v/w)的DCM(2.6 v/w)溶液，使溫度保 持在0。C。加入一結束，就將反應混合物溫熱至2(TC，并攪拌過夜。
將反應混合物真空濃縮，用曱苯(3 x0.6 v/w)凈化以確保除去殘存的 TFA。得霜乳狀固體產物。
歩驟3: l-乙?；?4-氧代環(huán)己烷甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 55</formula>
氮氣下，向攪拌的步驟2產物(1當量)在乙酸酐(2.5 v/w)的懸浮液中 加入乙酸鉀(0.02當量)。將反應混合物加熱至回流溫度(145°C )并在 該溫度攪拌2小時。將所得溶液真空濃縮，用曱苯凈化得棕色油。
將該棕色油滴入含有加熱至250。C沙的排空燒瓶中(壓力大約在 10mmHg);加入的速度與熱解物(pyrolysate)收集的速度相等。 一旦 加入過程結束，立即將真空抽至大約3mmHg的壓力，繼續(xù)保持高溫熱 解30分鐘。
將所得熱解物在106-110°C、 0.5mmHg下再次蒸餾，得無色油狀產物。
歩驟4: 4-甲氣基-2-氧代-二環(huán)「2.2.21辛烷-l-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 56</formula>在5。C下，在2小時內向攪拌的步驟3所得產物(l當量)和三甲基 原曱酸酯(4.00當量)的MeOH (9.4 v/w)溶液中鼓泡加入HCl氣體(大約 5當量)，保持槽罐溫度為5。C。 一旦過程結束，立即在氮氣下將反應混 合物加熱至回流并在回流下攪拌30分鐘。
將所得紫色溶液冷卻至大約30。C并真空濃縮。殘留物在飽和 NaHC03 (20 v/w)水溶液和MTBE (8 v/w)之間分配，進一步用MTBE (3 x 8v/w)萃取分離出的水層。合并的有機相用鹽水(12 v/w)洗滌，MgS04干 燥，過濾并真空濃縮得琥珀色油狀產物，該產物在靜置時部分結晶。
歩驟5: 4-甲氣基-2-三氟甲磺酰氣基二環(huán)『2.2.21辛-2-烯-l-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 56</formula>
氮氣下，向攪拌的無水二異丙基胺(l.ll當量)的無水THF(16.3 v/w) 溶液中加入2.5M丁基鋰(1.10當量)，將所得溶液攪拌30分鐘，整個過 程一直保持內部溫度《7(TC 。
將步驟4所得產物(l當量)的無水THF(6.3 v/w)溶液在反應溫度<-70匸條件下加入到容器中，將該批料在-70。C至-75。C溫度下再攪拌30 分鐘。
向反應混合物中加入三氟甲磺酸酐(1.10當量)的無水DCM(2.0 v/w) 溶液，將其在氮氣下攪拌1小時，保持槽罐溫度<-70",然后升溫至20°C 后進一步攪拌60分鐘。
向其中加入EtOAc(37 v/w)，將所得稀釋溶液用1M HC1 (2 x 7.1 v/w), 1MNaOH(2x7.1 v/w)和鹽水(3.6v/w)洗滌。將分離出的有機相 用MgS04干燥，過濾并真空濃縮得粗制產物。后者用薄墊色鐠純化(粗 制產物用5 w/w二氧化硅載樣)，2°/。—5%的EtOAc己烷溶液洗脫。合 并只包含純產物的級分，真空濃縮得所需的無色油狀產物。
歩驟6: 4-曱氧基-2-氧代二環(huán)「2.2.21辛烷-1-甲酸乙酯
<formula>complex formula see original document page 57</formula>向氮氣吹掃的壓力氫化容器中加入甲醇(10 v/w)、懸浮在甲醇(4 v/w)中的10%Pd/C催化劑(0.3 w/w)和溶解于曱醇(4v/w)中的步驟5所 得產物(l當量)。將反應器密封，用氮氣吹掃(x5),由氫氣吹掃(x3), 并用氫氣加壓至2巴。在25-30。C劇烈攪拌反應混合物2小時。
將反應器排空并用氮氣吹掃。取出內容物，并用C鹽過濾。用曱醇 (10 v/w)洗滌濾^f,合并濾液，將洗滌物真空濃縮。
水溶液洗;。將合并的水相用DCM(4 v/w)回萃，用MgS04干燥合并的 有機相，真空過濾、濃縮得粗制產物。將所得產物用快速色譜純化(產物 用8w/w硅石載樣)，用5%—10%EtOAc的己烷溶液洗脫。將含產物的 級分合并，真空條件下濃縮得黃色油狀的甲基和乙基酯(NMR)的混合物。
<formula>complex formula see original document page 57</formula>
氮氣下，在7。C溫度向攪拌的A1C13(3.74當量)苯(4v/w)懸浮液中加 入步驟6所得產物(1當量)的苯(1.8 v/w)溶液，保持內部溫度在7。C。 一 旦加入過程結束，將反應混合物在7。C溫度下攪拌40分鐘，然后升溫至 20 °C并在室溫下攪拌過夜。
將該批料加熱至60。C，并在該溫度下攪拌4小時，冷卻至室溫后倒 于水(12 w/w)中。用EtOAc(l x 12 v/w和2 x 20 v/w)萃取兩相混合物， 將合并的有機相用MgS04干燥，真空條件下過濾并濃縮得棕色糊狀的所 述產物酯的混合物(與起始原料的比例相同)。


圖1:實施例1晶體的X射線衍射圖(非水合物)
<image>complex image see original document page 59</image>圖2:作為乙酸溶劑合物的實施例1的晶體X射線衍射圖
<image>complex image see original document page 59</image>
權利要求
1.通式(I)的化合物或其鹽其中R1選自氫，甲基和三氟甲基；R2為氫，氯或氟；環(huán)A是(7-10C)二環(huán)烷二基或(8-12C)三環(huán)烷二基；R3是羧基或羧酸類似物或生物電子等排體；R4和R5各自獨立地為氫或甲基；n為0或1。
2. 根據(jù)權利要求1所述的化合物或其鹽，其中W是羧基。
3. 根據(jù)權利要求1或權利要求2所迷的化合物或其鹽，其中W和 W均為氬。
4. 根據(jù)權利要求1-3的任何一項所述的化合物或其鹽，其中的環(huán)A 是二環(huán)辛烷二基，二環(huán)壬烷二基或金剛烷基。
5. 根據(jù)權利要求1至4中任何一項所述的化合物或其鹽，其中的環(huán) A是二環(huán)辛烷二基。
6. 根據(jù)權利要求1所述的化合物或其鹽，其中 W為氫；R2為氫；環(huán)A是(8-9C)二環(huán)烷二基或金剛烷基；W為羧基；R4為氫或甲基；R5為氫；n為0或1。
7. 根據(jù)權利要求l、 2或3所述的化合物或其鹽，其為選自如下的一種或多種{4-[4-(4-氨基-7,7-二甲基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]惡嗪-6-基)苯基]二環(huán) [2.2.2]辛-1-基}乙酸;和/或{3-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-1)][1,4]惡嗪-6-基苯基]-1-金剛烷基}乙酸；3- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]惡嗪-6-基)苯基]金剛烷-l-羧酸；2- {4-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b] [ 1,4]惡嗪-6-基)苯基]二環(huán)[2.2.2]辛-1-基}丙酸；{5-[4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]惡嗪-6-基)苯基]二環(huán) [3.2.2]壬-1-基}乙酸；和4- [4-(4-氨基-7,7-二曱基-7H-嘧啶并[4,5-b][l,4]惡嗪-6-基)苯基]二環(huán) [2.2.2]辛烷-1-羧酸。
8. 根據(jù)權利要求1至7中任何一項所述的化合物或其藥學可接受的 鹽，用作藥物。
9. 根據(jù)權利要求8所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，用作治療 溫血動物如人類的糖尿病和/或肥胖的藥物。
10. 根據(jù)權利要求1至7中任何一項所述的化合物或其藥學上可接 受的鹽，用在通過治療處理人類或動物的方法中。
11. 根據(jù)權利要求IO所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，用在通 過治療處理人類或動物體糖尿病和/或肥胖的方法中。
12. 根據(jù)權利要求1至7中任何一項所述化合物或其藥學上可接受 的鹽在生產用于在溫血動物如人類中產生DGAT1活性抑制的藥物中的 用途。
13. 根據(jù)權利要求12所述的通式(I)化合物或藥學上可接受的鹽的 用途，用來生產用于治療溫血動物如人類的糖尿病和/或肥胖的藥物。
14. 藥物組合物，其包含根據(jù)權利要求1至7中任何一項所述的通 式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，結合藥學上可接受的賦形劑或載 體。
15. 用于制備根據(jù)權利要求1所述化合物的方法，該方法包含下述 步驟a)(其中所有關于通式(I)化合物的變量如權利要求1所定義，除非另 有說明) a)通式(II)化合物與通式(III)化合物或其鹽反應，其中W是酯基團， 如曱氧基羰基；<formula>see original document page 4</formula>(III)其中L是離去基團如溴基，而且如有必要后繼如下步驟:i) 將所述酯RS水解成相應的羧酸；和/或ii) 形成鹽。16.化合物(4-苯基二環(huán)[2.2.2]辛-1-基)乙酸甲酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)化合物或其鹽，其中A¹，和R¹-R⁵如說明書所定義，該化合物為DGAT-1抑制劑，因此，該化合物可用于治療例如肥胖。本發(fā)明還涉及制備通式(I)化合物的方法。
文檔編號A61K31/5383GK101346387SQ200680048727
公開日2009年1月14日 申請日期2006年12月19日 優(yōu)先權日2005年12月22日
發(fā)明者A·M·伯克, P·D·克米特 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司