廢糖蜜用于發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種廢糖蜜的發(fā)酵利用方法，尤其是一種廢糖蜜海洋微生物發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糖蜜是生產(chǎn)蔗糖的副產(chǎn)物，如果將糖蜜應(yīng)用于發(fā)酵工業(yè)，將大大降低玉米等使用量，能夠節(jié)約成本，并且減少了糖蜜處理的難度和降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
[0003]四氫嘧啶羥化酶是四氫嘧啶合成羥基四氫嘧啶的關(guān)鍵酶，四氫嘧啶是嗜鹽或者耐鹽微生物在受到外界高鹽濃度脅迫時(shí)合成的能夠抵御外界高滲透壓的一種相容性溶質(zhì)，羥基四氫嘧啶作為四氫嘧啶的衍生物，除了和四氫嘧啶一樣能夠抵御外界高滲透壓對(duì)細(xì)菌細(xì)胞的脅迫，還能夠提高細(xì)菌對(duì)高溫的耐受性，其應(yīng)用更廣，對(duì)帕金森等疾病也具有一定的治療作用，在生物工業(yè)和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有應(yīng)用前景。
[0004]因此，利用糖蜜來(lái)發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶，能夠降低生產(chǎn)成本和開辟了糖蜜處理的新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種利用廢糖蜜為主要碳源發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法。
[0006]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的一種通過(guò)海洋微生物發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法，包括以下步驟。
[0007]將能夠產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的海洋微生物菌種接種在試管中活化18-26h，然后接種到搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，將搖瓶中的菌種接種到種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為3-5%，然后種子罐培養(yǎng)24h后以5-10%的接種量接入發(fā)酵罐發(fā)酵。發(fā)酵罐發(fā)酵36小時(shí)，在發(fā)酵過(guò)程中流加糖蜜。將發(fā)酵液離心收集細(xì)胞然后將收集到的濕細(xì)胞加入為其20倍的水中釋放2-10分鐘，然后離心，收集液體，即為粗酶液，根據(jù)用途將粗酶液進(jìn)一步純化分離結(jié)晶。
[0008]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所用的糖蜜為糖廠生產(chǎn)蔗糖的下腳料。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例1
(I)菌種活化，選用德國(guó)菌種保藏中心的ih 1morms ο I onga ieDSM 258 It作為發(fā)酵菌種，選用營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基作為試管和三角瓶培養(yǎng)的活化培養(yǎng)基，比例如下(g/L):5g酵母膏，5g蛋白胨，2M NaCl，pH調(diào)整到7.2。試管裝液量6ml，500ml錐形瓶裝液量100ml。
[0010](2)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)，糖蜜20g，豆柏粉，5g，葡萄糖lg，硫酸鎂0.0lg，硫酸亞鐵，0.005g, 2M NaCl，pH 調(diào)整到 7.2。
(3)將保存于-80度冰箱的種子取出到試管中活化20h，240轉(zhuǎn)/秒搖床培養(yǎng)。然后接種于錐形瓶中，240轉(zhuǎn)/秒搖床搖瓶培養(yǎng)24h。
[0011](4)將搖瓶培養(yǎng)的種子接入35升種子罐發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20h后接種到350升發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵36h，發(fā)酵12小時(shí)后通過(guò)補(bǔ)料方式流加糖蜜10-30升。
[0012](5)將步驟四得到的發(fā)酵液通過(guò)高速離心機(jī)10000轉(zhuǎn)離心收集菌體，然后將菌體置入儲(chǔ)藏罐加入20倍水，攪拌2-5分鐘，離心收集液體即為粗酶液。粗酶液進(jìn)一步純化為目的酶制劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法，包括以下步驟: (1)發(fā)酵培養(yǎng)基主要包括將廢糖蜜、豆柏粉、硫酸鹽； (2)將能夠產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的海洋微生物菌種接種在試管中活化18-26h，然后接種到搖瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，將搖瓶中的菌種接種到種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)，接種量為3-5%，然后種子罐培養(yǎng)24h后以5-10%的接種量接入發(fā)酵罐發(fā)酵； (3)發(fā)酵罐發(fā)酵過(guò)程中流加糖蜜，發(fā)酵時(shí)間為36小時(shí)； (4)將發(fā)酵液離心收集細(xì)胞然后將收集到的濕細(xì)胞加入為其20倍的水中釋放2-10分鐘，然后離心，收集液體，即為粗酶液，根據(jù)用途將粗酶液進(jìn)一步純化分離結(jié)晶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法，其特征在于:所述糖蜜的添加量為5-15%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一種利用廢糖蜜發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法，其特征在于:糖蜜作為主要碳源發(fā)酵前添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中，并且發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)補(bǔ)料方式繼續(xù)流加廢糖蜜。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用廢糖蜜作為主要原料生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶的方法，主要包括以糖蜜作為主要碳源，添加豆粕粉作為氮源，高密度發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶。本發(fā)明用廢糖蜜代替了玉米粉和部分豆粕粉等原料，使得發(fā)酵生產(chǎn)四氫嘧啶羥化酶成本大大降低。
【IPC分類】C12N9-02
【公開號(hào)】CN104560902
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310483668
【發(fā)明人】朱道辰, 陳焱, 朱淑靜, 洪好
【申請(qǐng)人】鎮(zhèn)江拜因諾生物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年10月16日