專利名稱：作為尿激酶抑制劑的二唑化合物的制作方法
作為尿激酶抑制劑的喁二唑化合物
本發(fā)明涉及用于抑制尿激酶-纖維蛋白溶酶原-激活劑(uPA)的具 有較高生物利用率和口服給藥性的新化合物，以及其作為治療活性物 質(zhì)用于治療與尿激酶或/和尿激酶-受體有關(guān)的疾病，例如腫瘤和轉(zhuǎn)移 灶的用途。本發(fā)明特別是涉及含有p惡二唑基團(tuán)的化合物。
尿激酶型的纖維蛋白溶酶原激活劑(uPA)在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移灶形 成中扮演關(guān)鍵角色(Schmitt等人，J. Obst. Gyn. 21 (1995)， 151-165)。 uPA在多種不同種類的肺瘤細(xì)胞中表達(dá)(Kwaan， Cancer Metastasis Rev. 11 (1992)， 291- 311 )，并結(jié)合在與腫瘤相關(guān)的 uPA-受體(uPAR)上，在那，纖維蛋白溶酶原被激活成纖維蛋白溶酶。 纖維蛋白溶酶能夠分解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的不同組分，如纖連蛋白、層 粘連蛋白和IV型膠原蛋白。其還激活幾種其它的ECM分解性酶，特別 是基質(zhì)-金屬蛋白酶。高量的與腫瘤相關(guān)的uPA與癌患者較高的轉(zhuǎn)移危 險(xiǎn)相關(guān)(Harbeck等人，Cancer Research 62 (2002), 4617-4622)。 因此，抑制uPA的蛋白分解活性是抗轉(zhuǎn)移療法的良好出發(fā)點(diǎn)。
幾種活性和選擇性的尿激酶抑制劑已有描述。例如，EP 1 098 651 中公開了苯甲脒型的uPA抑制劑，W0 01/96286和W0 02/14349中公 開了芳基胍型的uPA抑制劑。這些合成的抑制劑的共同特征是由脒基 或/和胍基組成的堿性基團(tuán)。
不過，已知的尿激酶抑制劑具有以下缺點(diǎn)，其在口服使用時(shí)吸收 較差，因此在這種施用類型下在體內(nèi)只能產(chǎn)生較小的藥理學(xué)作用。因 此，多數(shù)情況下每周一次，不過至多兩次經(jīng)數(shù)小時(shí)時(shí)間間隔將藥劑靜 脈內(nèi)向患者給藥。這與患者的高負(fù)擔(dān)相關(guān)聯(lián)，因?yàn)檫@與大量的時(shí)間消 耗和頻繁的就診相關(guān)聯(lián)，并且以患者較高程度的合作為前提。
此外，在靜脈內(nèi)施用的情況下存在感染的危險(xiǎn)，特別是在血管旁 (paravasal)出現(xiàn)的浸出物(Infusat)會(huì)發(fā)生強(qiáng)烈的局部炎癥，直
至組織壞死，這需要漫長的后續(xù)治療和觀察。
肌內(nèi)和皮下施用途徑也不提供優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樵诖饲闆r下在刺入點(diǎn)經(jīng) 常會(huì)出現(xiàn)劇痛以及發(fā)生炎癥直至組織壞死，這同樣需要漫長的后續(xù)治療。
如已經(jīng)闡述的，含有脒和胍的尿激酶抑制劑在口服施用時(shí)僅表現(xiàn) 出很小的藥理學(xué)作用?；钚晕镔|(zhì)治療效果的前提條件是其生物利用率。 因此在口服給藥后必須從胃腸道吸收。這種膜透入的重要機(jī)理是被動(dòng)
擴(kuò)散(Gangvar S.等，DDT (1997) 148-155)。該文獻(xiàn)部分認(rèn)為，活性 物質(zhì)的親脂性對(duì)于通過胃腸道膜屏障的被動(dòng)擴(kuò)散扮演重要角色。因此， 在EP 0 708 640中描述了用于抗腸蟲病作用的五脒，其將脒官能改性 成偕胺肟、偕胺將酯和鳴二唑，其中優(yōu)選偕胺肟酯和噶二唑用作為合 適的改性。
不過，另一方面表明，親脂性程度單獨(dú)是不夠的(Hansch等人， J. Am. Chem. Soc. 86 (1964) 1616- 1626)，并且化合物親脂性的 提高不是預(yù)言膜透入的合適參數(shù)。這樣，不能確定親脂性和膜滲透之 間的直接關(guān)系(Conradi等人，Pharm. Res. 9 (1992) 435-439)。
因此，親脂性的提高在個(gè)別情況下可以提高膜滲透，然而并非必 然地造成提高的口服生物利用率。因此，對(duì)阿加曲班而言，堿性基團(tuán) 轉(zhuǎn)變成偕胺肟作為前藥導(dǎo)致滲透能力改善，但還額外地導(dǎo)致活性損失 (Rewinkel, Adang Cur. Pharm. Design 5 (1999) 1043-1075)。因 此不能不加考慮地預(yù)見，是否和怎樣的改性可以改善一種活性物質(zhì)在 胃腸道中的膜透入。更少地可預(yù)見，所述改性對(duì)活性物質(zhì)的藥性會(huì)有 怎樣的影響。
本發(fā)明的目的是提供用于抑制尿激酶的新藥物，其在口服給藥時(shí) 在有機(jī)體內(nèi)具有明顯提高的生物利用率和活性。
根據(jù)本發(fā)明，該目的是通過一種藥物實(shí)現(xiàn)的，所述藥物含有一種 或多種通式I的化合物作為活性物質(zhì)
<formula>formula see original document page 11</formula>
Z表示-R4， -OR4或-NH-R4，
y表示-or2或-nhr2，
W分別獨(dú)立地表示-H，分支或直鏈的-d-Ce-烷基，-C2-C6-烯基或 -C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)， 112表示-H， -R1， -COR1， -COOR'或-C0N(R1)2， 113表示H或-0-R8，
rs表示-h， -c廣c「烷基，-(:廣(:6-烯基或-(:2-Ce-炔基，未經(jīng)取代或
經(jīng)取代的，或-C0I^或-C00R6,或者具有例如2-50個(gè)-C「C廠烯氧基，
例如乙烯氧基的低聚或多聚烯氧基，
r表示-H, -d-C6-烷基，-(:2-(:6-烯基或-(:2-(:6-炔基，未經(jīng)取代或 經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，
rs表示-h， -d-c6-烷基，-c2-c6-烯基或-C「C6-炔基，未經(jīng)取代或 經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，
rs表示-h，分支或直鏈的-d-c6-烷基，-(:2-(:6-烯基或-(:2-(:6-炔基， 未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，
r'表示h，分支的或直鏈的、線性的、單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)的烷基， 烯基，炔基，羧基烷基，羧基烯基，羧基炔基，芳基，雜芳基，羧基
芳基，羧基烷基芳基，羧基雜芳基，-(CO)NRY或-COO-R4，
其中每個(gè)環(huán)狀基團(tuán)可以帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，例如選自-d-C「 烷基，-0R6 (例如-0H或-d-C廣烷氧基)，卣素，特別是C1， =0， -N02， -CN， -C00R6， -N(R6)2, -NR6COR6， -NR6C0N (R6) 2和-OCOR6，
并且其中每個(gè)烷基、烯基和炔基可以是直鏈或分支的，并且可以 帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，例如選自鹵素(F， Cl， Br， I), -0R6， -0C0R6, -N(R6)2, -NR6COR6， C00R6， -NR6C0N (R6) 2或者環(huán)狀基團(tuán)，
其中，如果Y = 0H并且E表示Am或Gua，則113或1(8可以不是11， 或者該化合物的鹽以及任選藥學(xué)常見的載體、稀釋劑或/和助劑。 優(yōu)選該藥物是可口服給藥的藥劑。特別優(yōu)選該藥物用于抑制尿激 酶-纖維蛋白溶酶原激活劑。 優(yōu)選通式II的化合物<formula>formula see original document page 13</formula>
其中
X， Y， R4， W和117如上定義， 或者其鹽。
基團(tuán)E優(yōu)選存在于化合物I和II的苯基環(huán)的對(duì)位。特別優(yōu)選其中 E表示N-0xa或0xa的通式I化合物。
在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物具有喁二唑基團(tuán)。令人驚訝 地發(fā)現(xiàn)，這種化合物是特別可口服使用的。
在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物在位置Y以及f或 IT具有至少一個(gè)酯，更優(yōu)選兩個(gè)酯基團(tuán)化。化合物，其在絲氨酸基上 和/或在基團(tuán)E上，特別是在脒、胍或p惡二唑基團(tuán)化上具有酯基團(tuán)，在 高口服利用率的同時(shí)令人驚訝地表現(xiàn)出高的效果。
所述化合物可以以鹽，優(yōu)選以生理相容性酸的鹽，例如無機(jī)酸的 鹽，特別優(yōu)選以鹽酸鹽或者以合適的有機(jī)酸的鹽存在。所述化合物可 以以光學(xué)純的化合物或者以對(duì)映體或/和非對(duì)映體的混合物存在。
環(huán)狀基團(tuán)可以含有一個(gè)或多個(gè)飽和、不飽和或芳族環(huán)。環(huán)狀基團(tuán) 優(yōu)選的實(shí)例是環(huán)烷基，芳基，烷基芳基，雜芳基和二環(huán)基團(tuán)。特別優(yōu) 選單環(huán)或二環(huán)基團(tuán)。環(huán)狀基團(tuán)含有優(yōu)選4至30個(gè)，特別是5-10碳原
子和雜原子作為環(huán)原子，以及任選一個(gè)或多個(gè)如上所述的取代基。雜
環(huán)體系優(yōu)選含有一個(gè)或多個(gè)0、 S或/和N原子。優(yōu)選的二環(huán)的環(huán)體系 是具有-CO-基團(tuán)的那些。環(huán)狀基團(tuán)最優(yōu)選的實(shí)例是金剛烷基或千基。
烷基、烯基和炔基優(yōu)選含有至多6個(gè)，特別是至多4個(gè)碳原子。 R1優(yōu)選是H或任選地經(jīng)取代的C廣C廣烷基，例如-CH3或d-C6-烷基芳基， 以致可以是C0-X-NR5，例如甘氨?；?、丙氨?；?、苯丙氨?；蚋弑?丙氨?；?Homophenylalanylrest)。在基團(tuán)化X中，W特別優(yōu)選是 CH3，以致X表示-CH(CH3)-。
R'特別優(yōu)選是C0R1，以致Y表示酯基團(tuán)。在基團(tuán)化Y中，R'特別 優(yōu)選表示分支的烷基，特別是表示叔丁基。
f特別優(yōu)選是-0-R8，其中R8又優(yōu)選表示-COR6，因此基團(tuán)化W優(yōu) 選包含酯基團(tuán)。在此R6還優(yōu)選表示分支的烷基，特別是表示叔丁基。 此外，W優(yōu)選表示環(huán)狀基團(tuán)，特別是表示金剛烷基。
R4特別優(yōu)選是對(duì)氯節(jié)基(C1-C6H5-CH2-)。R5優(yōu)選是-H或d-Cf烷基， 特別是CH3。
還優(yōu)選其中結(jié)構(gòu)單元Z表示W(wǎng)的化合物，其中W表示具有環(huán)狀取 代基，例如任選地經(jīng)取代的苯基或二環(huán)基團(tuán)的烷基，比如
特別優(yōu)選的化合物是這樣的，其中114表示經(jīng)取代或未經(jīng)取代的 d-Cr"烷基-芳基-基團(tuán)，例如爺基，其任選地可以在間位或?qū)ξ唤?jīng)囟素 或/和-冊(cè)2取代，其中囟素選自F、 Cl、 Br和I，特別優(yōu)選Cl和Br。
最優(yōu)選表I中所示的化合物和WX-711和WX-781以及它們的鹽。
只要這里沒有其它定義，則合適的取代基分別是卣素(特別是F， Cl， Br或I) ， d-Cr烷基，OW(特別是OH， OCOR6， COOR6， N(R6)2， NrC0R6或NR6CON(R6)2)。
本發(fā)明的化合物可以任選地與合適的藥學(xué)助劑或載體物質(zhì)一起用
于制備藥物。在此可以與其它活性物質(zhì)(例如其它尿激酶抑制劑，比 如抗體和/或肽)組合給藥，也可以與化療藥物和細(xì)胞生長抑制劑或/
和抑制細(xì)胞生長的活性物質(zhì)組合給藥。
通式I和/或II的本發(fā)明化合物同樣也可以以前藥方式進(jìn)行使用 和應(yīng)用。
更一般而言，前藥是相應(yīng)的藥學(xué)活性物質(zhì)的藥學(xué)非活性衍生物， 其在口服給藥后自發(fā)或酶促地轉(zhuǎn)換或轉(zhuǎn)變而釋放藥學(xué)有效的物質(zhì)。
所述藥物對(duì)人和動(dòng)物可以局部、直腸或腸胃外，例如靜脈內(nèi)，皮 下，肌內(nèi)，腹腔內(nèi)，舌下，經(jīng)鼻或/和吸入給藥，劑型例如為片劑，糖 衣劑，膠嚢，丸劑，栓劑，溶液，乳液，懸浮液，脂質(zhì)小體，吸入噴 劑或透皮體系，如青藥，特別優(yōu)選口服，例如作為緩釋/延遲配方給藥。
本發(fā)明化合物適于防治與uPA或/和尿激酶-纖維蛋白溶酶原-激 活劑受體(uPAR)的病理學(xué)過表達(dá)相關(guān)的疾病。它們例如能夠高效抑制 惡性腫瘤的生長或/和擴(kuò)散以及肺瘤的轉(zhuǎn)移。這方面的實(shí)例是腫瘤疾 病，例如乳癌，肺癌，膀胱癌，胃癌，宮頸癌，卵巢癌，腎癌，前列 腺癌和軟組織肉瘤，特別是與高轉(zhuǎn)移率相關(guān)的腫瘤。在此，所述化合 物任選地可以與其它腫瘤藥劑或者與其它治療方式，例如輻射或/和外 科手術(shù)一起使用。
此外，本發(fā)明的化合物對(duì)于其它與uPA相關(guān)或/和uPAR相關(guān)的疾 病也是有效的。這類疾病的實(shí)例比如肺動(dòng)脈高血壓和/或心臟病(例如 W0 02/00248),胃和腸疾病，比如炎性腸病，惡化前的結(jié)腸腺瘤 (Colonadenome)，炎性疾病，比如膿毒性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎，或其它疾病，如骨質(zhì)疏松，膽脂瘤，皮膚和眼病以及病 毒或細(xì)菌感染，在此明確涉及到在EP-A-0 691 350， EP-A-1 182 207 和US-專利5，712，291中提及的疾病。
通式I的化合物例如可以如
圖1中的合成示意圖那樣來制備。
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的uPA抑制劑不僅具有改善的生物利用 率，而且對(duì)原發(fā)性腫瘤還具有明顯改善的活性。
本發(fā)明的物質(zhì)可以單獨(dú)使用或與其它有生理作用的物質(zhì)組合使
用，例如與放療藥或與細(xì)胞毒性或/和抑制細(xì)胞生長的藥劑，例如化療
藥，比如順鉑，阿霉素，5-氟尿嗜啶，紫杉酚衍生物，或/和其余的化 療試劑，例如選自烷基化的試劑，抗代謝物，抗生素，表葉毒素和長 春花-生物堿，組合使用。同樣可以與輻射療法或/和外科手術(shù)組合。
通過本發(fā)明，通過給藥有效量的至少一種通式I化合物來提供一 種對(duì)生物(特別是人)抑制尿激酶的方法。待給藥的劑量取決于待治 療的疾病的種類和嚴(yán)重程度。例如日劑量為0. 01-100 mg/kg活性物質(zhì)。
最后，本發(fā)明涉及通式I的尿激酶-纖維蛋白溶酶原-激活劑的新 抑制劑。
通過以下的圖和實(shí)施例更詳細(xì)地解釋本發(fā)明。 圖1展示W(wǎng)X-770的合成示意圖和衍生物的合成。 圖2展示W(wǎng)X-770在大鼠中的口服利用率。 圖3展示W(wǎng)X-770體外代謝激活成WX582。
圖4展示本發(fā)明化合物WX770在BN-472-大鼠-腫瘤模型中的有效性。
圖5展示轉(zhuǎn)化成鳴二唑。
圖6展示用大豆磷脂酰膽堿(對(duì)照物)，皮下給藥WX-340以及口服 給藥WX-771 (圖6A)以及WX-781 (圖6B)以及WX-780 (圖6C)，劑量 為0.2 mg/kg或2 mg/kg，進(jìn)行治療的腫瘤生長動(dòng)力學(xué)。
圖7展示對(duì)原發(fā)性肺瘤尺寸和重量的影響。
圖8展示抗轉(zhuǎn)移效果。
圖9展示對(duì)有機(jī)體重量的影響。
實(shí)施例1: WX-770的合成
Boc-^Me-Ala-4-硝基苯曱酰胺(1)
向Boc-薩曱基-L-丙氨酸(30. 00 g， 147. 8 mmol)在干燥四氫呋喃 (980 mL)的溶液中加入yV"羥基琥珀酰亞胺(23. 77 g， 206.7 mmol)和 ^ 〃-二環(huán)己基碳二亞胺(33. 10 g, 160. 7mmo1)，并在室溫下攪拌1. 5 h。然后加入4-硝基節(jié)胺(22.78 g, 149.9 mmol;從鹽酸鹽通過用堿 液處理得到)，使反應(yīng)物(Ansatz)攪拌過夜(DC對(duì)照物CHCl3/MeOH 5:1)。將不溶物過濾掉，固體用THF洗滌，并濃縮濾液。殘留物通過 在硅膠上用氯仿/曱醇99: 1進(jìn)行層析而純化，得到作為固體的1 (52.8 g, quant.)。
^Me-Ala-4-硝基苯甲酰胺鹽酸鹽(2)
在- 78。C下，向l (51.90 g, 153. 8 mmol)在乙酸乙酯(l. 5 L)的 溶液中加入氯化氬在乙酸乙酯(1. 5 L)中的飽和溶液，并在解凍的冷浴 中攪拌過夜(DC-對(duì)照物CHCl3/MeOH 5: 1)。使氮?dú)鈱?dǎo)入該溶液一段時(shí) 間，以便排掉過量的氯化氫。然后濃縮至干燥，并用乙醚浸漬殘留物， 將固體過濾掉，并干燥(30.48 g， 83%)。
4-氯節(jié)基磺酰氯(3)
化合物3由4-氯節(jié)基氯制得。首先通過傳統(tǒng)的格氏反應(yīng)由其制備 4-氯千基-溴化鎂，然后在強(qiáng)烈放熱反應(yīng)中與疏酰氯反應(yīng)，根據(jù) Bhattacharya, S. N.; Eaborn， C; Walton, D. R. M. J. Chem. Soc. 1968， 1265-1267。該產(chǎn)物至少以較少的量也可購得。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser (ftBu)-0H (5)
在氬氣下將^"叔丁基-D-絲氨酸(16. 30 g， 101.2 mmol)懸浮于干 燥二氯曱烷(150 mL)中，加入三乙胺(20.45 g， 202. 5mmo1)，然后在 強(qiáng)力攪拌下滴加三曱基氯硅烷(21. 87 g, 202. 5mmo1)。觀察到輕微的 升溫，接下來將該混合物加熱至回流1. 5 h。在水冷卻下向3的澄清 溶液中加入氯節(jié)基磺酰氯(4， 19. 36g， 86. l薩ol)，在升溫的冷浴中 攪拌過夜(DC-對(duì)照物CHCl3/MeOH5:l)。使反應(yīng)物真空濃縮，殘留物 吸收在乙醚中。用5°/。的碳酸氬鈉溶液多次萃取，用1M硫酸使合并的 水相達(dá)到pH 2，用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物，合并的有機(jī)相被干燥(MgS0J 和濃縮(28.65 g, 80%)。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser(^tBu)-Cl (6)
向5 (15.60 g， 44. 7隨ol)在干燥二氯曱烷(425 mL)的溶液中加 入亞石克酰氯(10. 55 g， 89.4 mmol)和干燥DMF (1.1 mL)，并在室溫下 攪拌3 h (GC-對(duì)照物)。將溶劑排出，沒有進(jìn)一步純化即使用該粗制 的酰氯6 (17. 00 g， q磁t.)。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser (0-tBu)-戶Me-Ala-4-硝基苯甲酰胺(7) 向2 (12.24 g， 44. 7 mmol)在干燥二氯甲烷(150 mL)中的溶液中 加入二異丙基乙基胺(ll. 54 g， 89.5 mraol)，并攪拌，直到形成澄清 溶液。在冰冷卻下滴加6 (16.46 g， 44.7 mmol)在二氯曱烷(50 mL) 中的溶液，并在室溫下攪拌2 h (DC-對(duì)照物CHCl3/MeOH 9:1)。用 5%硫酸氫鉀溶液和5。/。碳酸氫鈉溶液洗滌該有機(jī)溶液，干燥(MgS0j并濃 縮。殘留物用戊烷/乙酸乙酯3:2在硅膠上進(jìn)行層析。得到無色固體 的7 (14. 73 g, 58%)。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser-A^Me-Ala-4-硝基苯甲酰胺(8) 7 (14.70 g， 25.8 mmol)在三氟乙酸(260 mL)中的溶液與苯硫基甲
烷(3.20 g， 25.8 mmol)混合，并在室溫下攪拌過夜(DC-對(duì)照物 CHCl3/MeOH5: 1)。反應(yīng)物在真空和高真空中濃縮。粗制產(chǎn)物通過用CHC13 -> CHCl3/MeOH 5: 1在硅膠上柱層析而純化(產(chǎn)率10. 37 g， 78%)。 (4-氯芐基磺?；?-D-Ser-滬Me-Ala-4-氨基苯曱酰胺鹽酸鹽(9
HC1)
向8 (5. 00 g，9. 8mmol)在甲醇(50mL)的溶液中加入,巴/炭(濕 的，含有50%水；0,50 g)，并氫化過夜(氫氣球)。3 h后再加一次催 化劑(O. 05 g) (DC對(duì)照物CHCl3/MeOH 5:1)。將催化劑過濾掉，用
曱醇洗滌，將濾液濃縮至干燥。
游離胺9 (3. 86g, 7. 9 mmol)在冰冷卻下懸浮于4 M氯化氫的二噁 烷(7.8mL)溶液中，然后加入甲醇(10mL)，直到產(chǎn)生澄清溶液。30 min 后，在冰冷卻下再加一次4 M HC1的二噍烷(7. 8 mL)溶液，并在O'C下 再攪拌lh。將反應(yīng)溶液濃縮，并且固體在真空中干燥(4. 19g， 82%)。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser-A^Me-Ala-4- (f氰基氨基)-苯甲酰胺
(10)
向9 (HCl-鹽！ ！ ！ ) (3. 96g， 7. 6麵ol)在干燥乙醇(60 mL)的 溶液中加入無水、真空加熱的乙酸鈉(1.53g， 19. lmmol)。懸浮液與 溴化氰(O. 88 g， 8.4 mmol)在干燥乙醇(30 mL)中的溶液混合，并在 室溫下攪拌過夜。反應(yīng)產(chǎn)物在冰浴中冷卻，抽吸不溶物，殘留物用少 量乙醇洗滌，并濃縮濾液。殘留物在硅膠上用氯仿/甲醇9: 1進(jìn)行層析 純化(l. 90 g， 49%)。
(4-氯芐基磺?；?-D-Ser-AHvIe-Ala-4-(滬羥基胍基)-苯甲酰胺
(11)
在水冷卻下，向12 (1.90 g， 3.7 mmol)在干燥乙醇(38 mL)中的溶 液中混入幾基胺鹽酸鹽(O. 26 g， 3.7 ramol)和乙基二異丙基胺(O. 48 g， 3. 7mmo1),并在室溫下攪拌過夜。第二天再加一次0. 2摩爾當(dāng)量的羥基 胺鹽酸鹽和乙基二異丙基胺。24 h后將反應(yīng)產(chǎn)物濃縮，殘留物在硅膠上 用氯仿/曱醇9:1 ->5:1 (含有1 %乙酸)進(jìn)行層析。將產(chǎn)物級(jí)份濃縮， 最后的剩余物乙酸用甲苯共蒸餾除去。將殘留物懸浮在乙醚和四氫呋喃
的混合物中并充分?jǐn)嚢?。抽吸固體，并真空干燥(1.0 g， 50%)。
(4-氯千基磺?；?-D-Ser (C0-t-Bu) -^Me-Ala-4-(舲叔丁基羰基 氧基胍基)-苯甲酰胺(12， WX-770)
向200 mg 11 (0. 37 mmol)在2 ml NMP和2 ml新戊酸中的溶液 中加入5當(dāng)量新戊酰氯(228 jal; 1.85 mmol)，并在RT下攪拌過周 末。在此形成由約60°/。產(chǎn)物、20%原料和20%分別被新戊酸酯單取代的 原料所組成的混合物。再加入5當(dāng)量新戊酰氯后，反應(yīng)在又過2天后 中斷。根據(jù)HPLC，形成了較高純度的產(chǎn)物。反應(yīng)混合物用20 ml乙酸 乙酯稀釋，并用每次20ml 5% NaHC03萃取三次和用濃NaCl-Lsg.萃取 一次。有機(jī)相在Na2S04上干燥，溶劑在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上抽除。所得的油 狀物溶于5 ml二氯曱烷中，在攪拌下緩慢滴入50 ml 二異丙基醚中。 使絮狀沉淀在冰箱中進(jìn)一步結(jié)晶，離心分離，并在高真空中干燥。產(chǎn) 率為115 mg (0. 16 mmol; 44 %)。
WX-771， WX-780以及WX-781的抗腫瘤效果和抗轉(zhuǎn)移效果 尿激酶型(uPA)的纖維蛋白溶酶原-激活劑，其細(xì)胞受體(uPAR)和 其抑制劑(PAI-1)是纖維蛋白溶酶激活級(jí)聯(lián)的主要組分。纖維蛋白溶酶 在組織改造和在細(xì)胞遷移過程，以及通過激活其它酶(例如基質(zhì)金屬 蛋白酶(MMPs))在與胂瘤相關(guān)的蛋白分解活性中扮演重要角色。這樣， 例如在乳癌情況下，這些成分高的表達(dá)率促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移擴(kuò)散 和新血管生成。因此，抑制與腫瘤相關(guān)的蛋白分解活性是開發(fā)用于癌 癥患者的抗腫瘤或抗轉(zhuǎn)移活性物質(zhì)的新思路。
進(jìn)行試驗(yàn)來研究WX-771、 WX-780以及WX-781的抗腫瘤效果和抗 轉(zhuǎn)移效果。
使用褐色的挪威大鼠中的BN-47 2轉(zhuǎn)移性乳腫瘤作為測試體系。所 使用的腫瘤組織類型例如在Kort等人，J. Natl. Cancer Inst. 72 (1984) 709-713中有描述。大鼠采用Harlan Nederland, NL 5960-AD Horst， The Netherlands,是六到八周齡，且128 g至170 g重。
固體物質(zhì)
WX-340:
為了比較的目的，共同研究(4-氯-節(jié)基磺酰基-D-Ser-Gly-4-胍基 -苯甲酰胺鹽酸鹽)，其皮下注射情況下的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移效果是已知 的。為了給藥，將0. 75 mg WX-340溶于20 ml 5%重量/體積D-甘露醇 (Manitol)水溶液中，并通過皮下注射以劑量0.2 rag活性物質(zhì)/kg 大鼠進(jìn)行給藥。
對(duì)照物
作為對(duì)照物，給藥磷脂酰膽堿載體，是通過將400 mg大豆磷脂酰 膽堿加入20 ml磷酸鹽緩沖的鹽溶液和400 |a 1無水乙醇中而得到 的。該懸浮液的0.8 ml作為對(duì)照物向大鼠口服給藥。
WX-771:
將7. 5 mg WX-771加入20 ml也用作對(duì)照物的大豆-磷脂酰膽堿溶 液中。為了使給藥為2 mg/kg， 口服給藥0. 8 ml所述懸浮液。對(duì)于第 二組，將該儲(chǔ)備溶液以1 : IO稀釋，從而實(shí)現(xiàn)在同樣給藥0. 8 ml/大 鼠時(shí)，劑量為0. 2 mg/kg。
WX-780:
將7. 5 rag WX-780加入20 ml相應(yīng)于上述對(duì)照物懸浮液的大豆-磷脂酰膽堿懸浮液中。為了使給藥劑量為2mg/kg,向大鼠給藥0.8ml 所述懸浮液。為了使給藥劑量為0.2 mg/kg，將該儲(chǔ)備溶液以1 : 10 稀釋，在此另外給藥0.8 ml/大鼠。
WX-781:
將7. 5 mg WX-781加入20 ml相應(yīng)于上述對(duì)照物懸浮液的大豆-磷脂酰膽堿懸浮液中。為了使給藥劑量為2mg/kg，向大鼠口服給藥0.8 ml。為了使給藥劑量為0. 2mg/kg，將該儲(chǔ)備溶液以1 : IO稀釋，在 此另外口服給藥0. 8 ml/大鼠。
結(jié)果
研究表明，WX-771、 WX-780以及WX-781在日劑量單位為0.2或 2 mg/kg 口服給藥達(dá)三周情況下表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移作用。 結(jié)果表示在圖6至9中。
權(quán)利要求
1. 藥物，其含有一種或多種通式I的化合物作為活性物質(zhì)其中E表示以下基團(tuán)，B表示-SO2-或-CO-，X表示-NR1-或-CHR1-，Z表示-R4，-OR4或-NH-R4，Y表示-OR2或-NHR2，R1分別獨(dú)立地表示-H，分支或直鏈的-C1-C6-烷基，-C2-C6-烯基或-C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，R2表示-H，-R1，-COR1，-COOR1或-CON(R1)2，R3表示H或-O-R8，R8表示-H，-C1-C6-烷基，-C2-C6-烯基或-C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或-COR6或-COOR6，或者具有例如2-50個(gè)-C2-C4-烯氧基，例如乙烯氧基的低聚或多聚烯氧基，R4表示-H，-C1-C6-烷基，-C2-C6-烯基或-C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，R5表示-H，-C1-C6-烷基，-C2-C6-烯基或-C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，R6表示-H，分支或直鏈的-C1-C6-烷基，-C2-C6-烯基或-C2-C6-炔基，未經(jīng)取代或經(jīng)取代的，或者環(huán)狀基團(tuán)，R7表示H，分支或直鏈的、線性的、單環(huán)、二環(huán)或多環(huán)的烷基，烯基，炔基，羧基烷基，羧基烯基，羧基炔基，芳基，雜芳基，羧基芳基，羧基烷基芳基，羧基雜芳基，-(CO)NR1R4或-COO-R4，其中每個(gè)環(huán)狀基團(tuán)可以帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，例如選自-C1-C3-烷基，-OR6(例如-OH或-C1-C3-烷氧基)，鹵素，特別是Cl，＝O，-NO2，-CN，-COOR6，-N(R6)2，-NR6COR6，-NR6CON(R6)2和-OCOR6，并且其中每個(gè)烷基、烯基和炔基可以是直鏈或分支的，并且可以帶有一個(gè)或多個(gè)取代基，例如選自鹵素(F，Cl，Br，I)，-OR6，-OCOR6，-N(R6)2，-NR6COR6，COOR6，-NR6CON(R6)2或者環(huán)狀基團(tuán)，其中，如果Y＝OH并且E表示Am或Gua，則R3或R8可以不是H，或者該化合物的鹽以及任選藥學(xué)常見的載體、稀釋劑或/和助劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求l的藥物，其特征在于，其含有一種或多種通式 II的化合物其中X, Y, R4, 115和R'如權(quán)利要求1中的定義， 或者該化合物的鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其中114表示
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其中R4表示取代或未取代的 d-C廠烷基-芳基-基團(tuán)，特別是千基，其任選地可以在間位或?qū)ξ唤?jīng)鹵 素或/和-N02取代，其中面素選自F、 Cl、 Br和I。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4之一的藥物，其中所述化合物選自 <formula>formula see original document page 5</formula>
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5之一的藥物，其特征在于，其是可口服給 藥的藥劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6之一的藥物的用途，用于制備用來防治與 尿激酶和/或尿激酶受體病理學(xué)過表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物組合物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的用途，用于腫瘤治療或預(yù)防。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8的用途，用于治療或預(yù)防轉(zhuǎn)移灶形成。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的用途，用于治療原發(fā)性腫瘤。
11. 根據(jù)權(quán)利要求7至IO之一的用途，其中制備可口服給藥的組 合物。
12. 根據(jù)權(quán)利要求7至11之一的用途，其中所述組合物以片劑、 糖衣劑、膠嚢、丸劑、溶液、乳液或/和懸浮液的形式制得。
13. 式I的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>其中E、 B、 X、 Z、 Y和R5如權(quán)利要求1中的定義,
14.式II的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>其中X、 Y、 R4、 W和R'如權(quán)利要求1中的定義。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的化合物，選自<formula>formula see original document page 7</formula>或其鹽。
16.通過給予有效量的至少一種根據(jù)權(quán)利要求13至15之一的化 合物而對(duì)生物進(jìn)行尿激酶抑制的方法。
17. 通過給予有效量的根據(jù)權(quán)利要求13至l5之一的至少一種化 合物而對(duì)人進(jìn)行尿激酶抑制的方法。
18. 根據(jù)權(quán)利要求13至15之一的化合物作為前藥的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于抑制尿激酶-纖維蛋白溶酶原-激活劑(uPA)的具有較高生物利用率和口服給藥性的新化合物，以及其作為治療活性物質(zhì)用于治療與尿激酶或/和尿激酶-受體相關(guān)的疾病，例如腫瘤和轉(zhuǎn)移的用途。本發(fā)明特別是涉及含有二唑基團(tuán)的化合物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101378744SQ200680031728
公開日2009年3月4日 申請(qǐng)日期2006年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日
發(fā)明者J·齊默曼, K·克馳, S·斯佩爾 申請(qǐng)人:威麗克斯股份公司