專利名稱：治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥和涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的方法
治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥和 涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求在2005年2月1日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/648,383的優(yōu)先 權(quán)，其4^P內(nèi)容在此通過參考并入本文。發(fā)明背景技術(shù)領(lǐng)域積以及涉及用于治療腦部炎癥和用于治療與淀粉樣蛋白或者淀粉樣蛋白 樣在腦和體內(nèi)其它部位中沉積相關(guān)之炎癥的方法和藥物組合物。
背景技術(shù)：
斑塊形成疾病(plaque forming disease)的特征在于在腦中存在淀粉 樣蛋白斑塊沉積以及神經(jīng)元退化。淀粉樣蛋白沉積是通過肽聚集成不溶性 團(tuán)塊而形成的。所述肽自身依不同的疾病而變化，但是在大多數(shù)情況下， 所述聚集物具有p-折疊片層結(jié)構(gòu)并可用剛果紅染料染色。除了包括早發(fā)性 阿爾茨海默病、遲發(fā)性阿爾茨海默病和先兆性阿爾茨海默病在內(nèi)的阿爾茨 海默病(AD)之外，以淀粉樣蛋白沉積為特征的其他疾病是，例如，SAA 淀粉樣變性、遺傳性水島綜合征(hereditary Icelandic syndrome)、多發(fā) 性骨髓瘤和朊病毒病。動(dòng)物中最常見的朊病毒病是綿羊和山羊的搔癢病和 牛的牛海綿狀腦病(BSE) (Wilesmith and Wells, 1991 )。在人類中已鑒定 了 4種朊病毒病(i)庫魯病，(ii)克-雅氏病(CJD)， (iii) l施-沙病 (Gerstmann-Streussler國(guó)Sheinker Disease, GSS ),和(iv)致死性家族性失 眠癥(fatal familial insomnia, FFI) (Gajdusek, 1977; and Tritschler et al. 1992 )。朊病毒病涉及正常的細(xì)胞朊病毒蛋白(PrPC)轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的搔癢癥異 形體(scrapie isoform) (PrPSc )。分光測(cè)量證明PrPC轉(zhuǎn)變?yōu)樯ΠW癥異形 體(PrPSc)涉及重大的構(gòu)象轉(zhuǎn)換，這意味著朊病毒病，象其它的淀粉樣 蛋白生成疾病一樣，是蛋白質(zhì)構(gòu)象的異常。從PrPC向PrPSc的轉(zhuǎn)變伴隨
著a-螺旋二級(jí)結(jié)構(gòu)的減少(從42%至30% )和p-片層含量的顯著增加(從 3%至43%) ( Caughey et al， 1991; and Pan et al, 1993 )。這種重排與異常 的物理化學(xué)特性有關(guān)，所述物理化學(xué)特性包括在非變性去污劑中的不溶性 和對(duì)蛋白質(zhì)7K解的部分抗性。先前的研究已表明與人PrP的殘基106-126 (PrP 106-126)同源的合成肽表現(xiàn)出PrPSc的某些致病和物理化學(xué)特性 (Selvaggini et al， 1993; Tagliavini et al， 1993; and Forloni et al, 1993 )。所 述肽顯示出明顯的構(gòu)象多態(tài)性，其在不同環(huán)境中獲得不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)(De Gioea et al, 1994)。其在緩沖溶液中傾向于采用(3-片層構(gòu)象并聚集成淀粉 樣原纖維，該原纖維對(duì)蛋白酶的消化有部分抗性。最近，對(duì)抗體3F4和其 肽表位(PrP 104-113 )的復(fù)合物的X-射線晶體學(xué)研究提供了對(duì)該柔性區(qū)在 結(jié)構(gòu)上的了解，該柔性區(qū)被認(rèn)為是對(duì)于發(fā)生朊病毒病關(guān)鍵的構(gòu)象重排的組 分(Kanyo et al, 1999 )?；诜乐咕奂?或誘導(dǎo)解聚，對(duì)參與折疊-解折疊 和/或溶解-聚集過程的多種類型序列的鑒定可以開創(chuàng)治療斑塊形成疾病的 新方向(Silen and Agard， 1989; Frenkel et al， 1998; Horiuchi and Caughey, 1999 )。阿爾茨海默病(AD)是導(dǎo)致老年性癡呆的進(jìn)行性疾病。 一般地說，這 種病分成兩類遲發(fā)型，其在老年人(通常超過65歲)中發(fā)生；以及早發(fā) 型，其在老年期之前很早(例如，在35-60歲之間)發(fā)生。在這兩類疾病 中，病理學(xué)是相似的，但^1在3^早年齡就開始的情況，異常性傾向于更加 嚴(yán)重和廣泛傳播。該疾病的特征在于在腦中兩種類型的病變，老年斑和神 經(jīng)纖維纏結(jié)。老年斑是中性粒細(xì)胞組織異常的區(qū)域，可達(dá)150mm，在其中 心有細(xì)胞外淀粉樣蛋白沉積，其通過腦組織切片的顯微鏡分析可見。神經(jīng) 纖維纏結(jié)是由成對(duì)相互纏繞的兩條纖維組成的tau蛋白的細(xì)胞內(nèi)沉積。老年斑的主要成分是被稱為(5淀粉樣蛋白(Ap )或者p-淀粉樣肽(PAP 或者PA)的肽。p淀粉樣肽是被稱為淀粉樣蛋白前體蛋白(APP)的前體 蛋白質(zhì)的39-43個(gè)M酸的內(nèi)部片段。在APP蛋白質(zhì)內(nèi)的幾個(gè)突變已經(jīng)與 阿爾茨海默病的發(fā)生相互關(guān)^來(Goateeta1,(1991)，纈氨酸717突變?yōu)?異亮氨酸；Chartier Harlan et al, (1991)，纈氨酸717突變?yōu)楦拾彼幔?Murrell et al, (1991)，纈氨酸717突變?yōu)楸奖彼?；Mullan et al， (1992)，雙 突變，將賴氨酸595-甲硫氨酸596改變?yōu)樘於０?95-亮氨酸596 )。這樣的突變被認(rèn)為通過增加或者改變將APP加工為p-淀粉樣蛋白的過 程，尤其是將APP加工為更多量的長(zhǎng)形p-淀粉樣蛋白(即Api-42和
Api-43)的過程而引起阿爾茨海默病。其它基因比如早老蛋白基因，PS1 和PS2中的突變被認(rèn)為間接地影響加工APP而產(chǎn)生更多量的長(zhǎng)形P-淀粉 樣蛋白的過程(見Hardy, TINS 20， 154,1997 )。這些觀測(cè)結(jié)果指出P-淀粉 樣蛋白，尤其是它的長(zhǎng)形，是阿爾茨海默病的致病因素。還已經(jīng)知道具有自我聚集證據(jù)的其他外的肽或者蛋白質(zhì)，比如，但不 限于，amylin (Young et al， 1994);鈴蟾肽、蛙皮縮膽嚢素、膽嚢收縮素 八肽、章魚素、胃泌素相關(guān)五肽、胃泌素四肽、促生長(zhǎng)素抑制素(還原型)、 P物質(zhì)(substance P);以及肽、黃體化激素釋放激素、促生長(zhǎng)素抑制素 N-Tyr (Banks and Kastin， 1992 )。有關(guān)淀粉樣蛋白纖維的出版物指出圓柱狀P-片層是僅有的與一些x射 線和電子顯微鏡數(shù)據(jù)一致的結(jié)構(gòu)，并且阿爾茨海默Ap片段和變體的纖維 可能是由兩或三個(gè)同心圓柱狀P-片層所構(gòu)成的(Perutz et al., 2002 )。完整 的Ap肽含有42個(gè)殘基，'^這個(gè)數(shù)目的^l&使圓柱狀殼成核；該發(fā)現(xiàn)和 在缺少脯氨酸的情況下由Ap肽構(gòu)成的p-片層中許多可能的強(qiáng)靜電相互作 用可以解釋在阿爾茨海默病患者中發(fā)現(xiàn)的AP肽形成細(xì)胞外淀粉樣蛋白斑塊的傾向性。如果該解釋是正確的，那么淀粉樣蛋白就是由具有中央充水 腔的窄管(納米管)所組成的。淀粉樣蛋白斑塊在體外生長(zhǎng)的可逆性表明 在斑塊中和在溶液中的PA之間的穩(wěn)態(tài)平衡(Maggio and Mantyh, 1996 )。 卩A聚合對(duì)肽-4M目互作用以形成p-折疊片層原纖維的依賴性以及其他蛋白 質(zhì)對(duì)該反應(yīng)的刺激作用表明，淀粉樣蛋白的形成可以受到調(diào)節(jié)。已有許多 嘗試來尋找能夠干擾淀粉樣蛋白形成的物質(zhì)。研究最多的化合物中有抗 體，由p-破壞M酸如脯氨酸組成的肽，向識(shí)別基序加入帶電基團(tuán)，和應(yīng) 用N-甲基化JL^酸作為構(gòu)件(綜述見Gazit, 2002 )。由交替的D和L殘基構(gòu)成的環(huán)肽形成這種納米管，這些納米管通過它 們自身插入膜并使其去極化來殺死細(xì)菌(Perutz et al., 2002 )。有一些提議 某些淀粉樣蛋白纖維也許是引導(dǎo)物并通過同樣的機(jī)制殺死細(xì)胞。自身能插入螺旋轉(zhuǎn)折之間間隙的芳香族化合物比如剛果紅可以使圓柱 狀殼去穩(wěn)定化并啟動(dòng)這個(gè)過程，但是阻止將更加有效并且可能更容易實(shí)現(xiàn) (Perutz et al" 2002 )。在本文中對(duì)任何文件的引用并沒有意圖承i人此文件屬于現(xiàn)有技術(shù)，或 者作為考慮本申請(qǐng)任何權(quán)利要求專利性的材料。對(duì)于任何文件的內(nèi)容或曰
期的任何陳述是基于在提交申請(qǐng)時(shí)申請(qǐng)人可獲得的信息，但是并不等同于 承認(rèn)該陳述的正確性。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供用于抑制或者治療與在腦中和體內(nèi)其它部位中淀粉樣蛋白 沉積有關(guān)的炎癥以及涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的方法。該方法包 括給需要這些的患者施用有效量的野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不 展示抗體或者非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體。本發(fā)明還提供作為活性成分包含有效量的所述絲狀噬菌體的藥物組合物。本發(fā)明還提供通過使絲狀噬菌體與斑塊形成肽或者預(yù)先形成的淀粉樣 蛋白沉積接觸來抑制淀粉樣蛋白沉積形成或者來解聚預(yù)先形成的淀粉樣 蛋白S冗積的方法。


圖1是顯示顱內(nèi)應(yīng)用噬菌體/PBS至hAPP轉(zhuǎn)基因小鼠的腦的截面示意 圖。向5只轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)注射噬菌體。向?qū)?cè)半球注射PBS。在1小時(shí)、 2天和3天后處死小鼠。它們的腦被切成5 jim切片，并且用硫黃素-S (Thioflavine-S)染色以評(píng)估它們的斑塊負(fù)荷。圖2A和2B是顯示采用ThT分析通過絲狀噬菌體解聚(圖2A)和阻 止(圖2B) p-淀粉樣蛋白1-40聚集的圖。在圖2A (解聚試驗(yàn))中，p-淀 粉樣蛋白(58 nM)被單獨(dú)培育21天。在第21天時(shí)，加入不同濃度的噬 菌體并培育過夜。在圖2B(阻止試驗(yàn))中，p-淀粉樣蛋白(58nM)凈皮單 獨(dú)地或者與絲狀噬菌體一起培育7天，隨后將樣品加入ThT溶液并通過分 光熒光計(jì)測(cè)量淀粉樣蛋白的含量。用結(jié)合淀粉樣蛋白原纖維的硫黃素-T (Thioflavine-T )測(cè)量淀粉樣蛋白的含量并且在485 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其熒光 發(fā)射。圖3A-3K是在缺少或者存在絲狀噬菌體的條件下培育p-淀粉樣蛋白的 電子顯微鏡照片(放大倍數(shù)xl00K)。圖3A:在缺少噬菌體的條件下，在 PBS中的97 nM p-淀粉樣蛋白。對(duì)p-淀粉樣蛋白先使用小鼠單克隆抗體 10D5接著用山羊抗小鼠12mn金標(biāo)記抗體進(jìn)行染色。圖3B-3C: 97 nM p-淀粉樣蛋白與0.5 nM (lxl(T)噬菌體一起培育。對(duì)p-淀粉樣蛋白用小鼠
單克隆抗體10D5和偶聯(lián)12 mn金顆粒的第二抗體進(jìn)行染色。對(duì)噬菌體先 用多克隆兔抗噬菌體血清接著用山羊抗兔6nm金標(biāo)記抗體進(jìn)行標(biāo)記。在不 含有噬菌體或者不含有第一抗體的樣品中觀察不到第二抗體的信號(hào)。圖3D:對(duì)絲狀噬菌體(fd) (lxl(T個(gè)噬菌體)用兔多克隆血清進(jìn)行染色。 用6nm金顆粒標(biāo)記第二抗體。圖3E:在p淀粉樣蛋白附近的絲狀噬菌體。 如用抗噬菌體抗體的分散標(biāo)記所顯示(箭頭)，所述肽有可能增強(qiáng)噬菌體 的降解。當(dāng)單獨(dú)培育噬菌體時(shí)(樣品D)，該標(biāo)記不存在。圖3F-3G:在 37匸單獨(dú)培育10天后的p-淀粉樣蛋白(放大倍數(shù)F- x 30K, G- x IOOK )。 圖3H-3I: p淀粉樣蛋白被單獨(dú)培育10天，在第10天時(shí)加入絲狀噬菌體 并再保持16小時(shí)(H- x 30K, I- H的x 100K放大)。圖3J-3K:淀粉樣蛋 白原纖維和絲狀噬菌體間的界面。噬菌體沿著原纖維軸排列(xi00K)。圖4A-4C是電子顯微鏡照片，其中將球狀噬菌體加入預(yù)聚集的P-淀粉 樣蛋白并一起培育過夜。與球狀噬菌體在一起的P-淀粉樣蛋白(圖4A和 4B )。單獨(dú)的球狀噬菌體(圖4C )(放大倍數(shù)x 100K )。圖5A-5C是應(yīng)用MTT分析顯示絲狀噬菌體對(duì)于p-淀粉樣蛋白對(duì) LAN-1細(xì)胞毒性的抑制作用的圖。對(duì)于圖5A的預(yù)防性試驗(yàn)，以pA/噬菌 體1760:1的摩爾比將噬菌體加入25 jiM的p-淀粉樣蛋白中。將該混合物 加入所述細(xì)胞中。存活百分率針對(duì)于在缺少p-淀粉樣蛋白(處理-PBS)條 件下視為100。/。的細(xì)胞存活率而言。在圖5B和5C中，應(yīng)用兩種預(yù)聚集肽 (PA1-40和PA17-42 )測(cè)量噬菌體防護(hù)PA毒性的能力。這兩種肽(卩A 1-40 和PA 17-42)在37"C培育5天。在第6天，以1.2 nM的濃度將絲狀噬菌 體加入該預(yù)聚集的肽中并進(jìn)一步培育12小時(shí)，接著將其加入在前一天接種 于96孔板的細(xì)胞系中。讓細(xì)胞再生長(zhǎng)3天，然后加入MTT。 3小時(shí)后， 加入提M沖液并將該板在37匸培育過夜。在接下來的一天，在570 nm 波長(zhǎng)處對(duì)該板進(jìn)行讀值。圖6A和6B顯示被注入hAPP轉(zhuǎn)基因小鼠(SWE2576, Taconic) —個(gè) 半球的絲狀噬菌體(圖6B)和單獨(dú)注入另一半球的PBS (圖6A)。在處理 后3天處死小鼠，與經(jīng)PBS處理的半斜目比，另一半球的斑塊負(fù)荷減少 40%。圖7是顯示在鼻內(nèi)應(yīng)用后噬菌體在BALB/c小鼠中分布的圖。在給 BALB/c小鼠鼻部施用后1、 3和24小時(shí)在腦和嗅球中噬菌體分布之間的 比較表明，甚至在施用后l小時(shí)即有噬菌體存在(標(biāo)記噬菌體，uCi/mg)。
在該1小時(shí)時(shí)間點(diǎn)之后，它們的濃度降低。
具體實(shí)施方式
P-淀粉樣蛋白肽(PA)是阿爾茨海默病的兩種標(biāo)志之一。該肽在腦組 織中形成纖維狀毒性聚集物，其只能在強(qiáng)變性劑作用下溶解。由于這些神 經(jīng)毒性特性與肽聚集形式有關(guān)，在針對(duì)降低或者消除腦中淀粉樣蛋白纖維 狀沉積的程度來開發(fā)治療性方法的方面已投入了很大努力。在生理?xiàng)l件下，合成的PA采取聚集形式并且^現(xiàn)出來自神經(jīng)突的 改變，其促進(jìn)對(duì)海馬神經(jīng)元的神經(jīng)毒性作用。已證明PA的聚集依賴于pH、 肽的濃度、溫度和培育時(shí)間。本發(fā)明已驚奇地發(fā)現(xiàn)絲狀噬菌體本身有能力在體外防止PA聚集，以 及溶解已形成的聚集物。在本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)室中，使用絲狀噬菌體M13、 fl和fd，在結(jié)構(gòu)和遺 傳水平上對(duì)它們已有充分了解(Greenwood et al., 1991 )。本實(shí)驗(yàn)室首次證 明絲狀噬菌體展示出侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的特性，然而它們還保留載體的惰 性以及攜帶外源分子的能力(Frenkel and Solomon, 2002 )。絲狀噬菌體是一組在結(jié)構(gòu)上相關(guān)的病毒，其包含環(huán)狀單鏈DNA基因 組。它們?cè)谏a(chǎn)性感染期間不殺死它們的宿主。感染^^有F質(zhì)粒的大腸埃 希氏菌的噬菌體被統(tǒng)稱為Ff噬菌體。它們不感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞。所述絲狀噬菌體是長(zhǎng)約1至2微米和直徑為6 nm的柔性桿，在其DNA 核周圍具有蛋白質(zhì)亞基的螺旋殼。兩種主要的衣殼蛋白，蛋白質(zhì)pIII和主 要衣殼蛋白pVIII，在所展示蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)上有差異。pI11存在4-5拷貝， 但pVIII有約3000拷貝。約有50個(gè)殘基的主要衣殼蛋白pVIII亞基基本 上是a-螺旋并且(x-螺旋的軸與病毒粒子的軸呈現(xiàn)出一個(gè)小的角度。可在以 下三個(gè)部分中考慮蛋白質(zhì)殼外表面，由所述亞基的N-末端區(qū)域占據(jù)，富 含與周圍溶劑相互作用并給予病毒粒子低等電點(diǎn)的酸性殘基；殼內(nèi)部，包 括19個(gè)殘基長(zhǎng)的非極性側(cè)鏈，在此蛋白質(zhì)亞基主要是彼此之間相互作用； 和內(nèi)表面，由所迷亞基的C-末端區(qū)域占據(jù)，富含與DNA核心相互作用的 堿性殘基。幾乎所有蛋白質(zhì)側(cè)勤目互作用是在衣殼蛋白陣列中不同亞基之 間而不是在亞基內(nèi)部發(fā)生，這種事實(shí)使其對(duì)于研究在大分子裝配中a-螺旋 亞基間相互作用而言是一種有用的模式系統(tǒng)。絲狀噬菌體的獨(dú)特結(jié)構(gòu)使得它能夠侵入腦，盡管它的質(zhì)量約為16.3 MD以及可有助于其千擾PA纖維 化的能力，因?yàn)槭删w結(jié)構(gòu)類似于淀粉樣蛋白原纖維自身。綜上所述，本發(fā)明人已研究了絲狀噬菌體干擾P-淀粉樣蛋白肽聚集過 程的能力并JLiL現(xiàn)在體外以不同的時(shí)間間隔，以不同的比率將野生型絲狀 噬菌體與p-淀粉樣蛋白肽一起培育導(dǎo)致p-淀粉樣蛋白的阻止和/或解聚。此 外，所述絲狀噬菌體顯示出對(duì)細(xì)胞存活性的保護(hù)作用。在將所述絲狀噬菌體-p-淀粉樣蛋白原纖維與在載玻片上生長(zhǎng)的小M 細(xì)胞一起培育后獲得了最令人激動(dòng)的數(shù)據(jù)。如果p-淀粉樣蛋白確實(shí)活化了 小膠質(zhì)細(xì)胞，所述噬菌體將其溶解并且不活化小膠質(zhì)細(xì)胞。噬菌體技術(shù)提 供對(duì)于p-淀粉樣蛋白的抗聚集劑來說一個(gè)新的和實(shí)際上無限的資源，其防 止通過Fc受體而可能過度活化小膠質(zhì)細(xì)胞的抗體的有害影響。噬菌體作為基因和/或遞送載體具有超出動(dòng)物病毒的明顯優(yōu)點(diǎn)。它們是簡(jiǎn)單的系統(tǒng)，其大規(guī)模生產(chǎn)和純化是非常高效的并且比動(dòng)物病毒載體更加 便宜。此外，大片段DNA能夠有效地包裝于噬菌粒栽體。由于是針對(duì)原 核生物的感染、裝配和復(fù)制進(jìn)化而來，噬菌體既不能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中復(fù) 制也不對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞顯示天然向性。這使非特異性基因遞送的可能性最 小化。因?yàn)槭删w載體更低可能在動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生有復(fù)制能力的實(shí)體，所 以噬菌體載體潛在地比病毒更加安全(Monaci et al., 2001 )。本發(fā)明提供用于抑制或者治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者涉及已活 化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的方法。此外，本發(fā)明方法還抑制或者治療與除 腦之外的體內(nèi)其他部位中淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥，比如在多發(fā)性骨髄 瘤和腎淀粉樣變性的情況。本發(fā)明方法涉及向有此需求的患者引入/施用有效量的野生型絲狀噬 菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體。所述 絲狀噬菌體可以是任何絲狀噬菌體比如M13、 fl或者fd。盡管在以下的實(shí) 施例中采用M13噬菌體，由于它們具有相似的結(jié)構(gòu)以及由于其基因組有超 過95%的基因組一致性，因此預(yù)期任何其他絲狀噬菌體以相似方式運(yùn)作和 發(fā)揮功能。當(dāng)所述方法被用來抑制或者治療腦部炎癥時(shí)，優(yōu)選鼻內(nèi)施用所述絲狀 噬菌體從而通過受者的嗅覺系統(tǒng)向受者體內(nèi)引入所述活性成分。
本發(fā)明方法不但在斑塊形成疾病中抑制蛋白質(zhì)聚集成淀粉樣蛋白斑塊或者沉積物，而且在解聚預(yù)先形成的淀粉樣蛋白沉積比如PA原纖維中也 是有效的。所述絲狀噬菌體對(duì)于pA原纖維形成或者解聚的抗聚集或者解聚特性 可以通過眾所周知的硫黃素T (ThT)結(jié)合分析進(jìn)行測(cè)量。ThT熒光性的 顯著降低指示PA原纖維結(jié)構(gòu)形成中斷和預(yù)先形成的pA原纖維解聚。對(duì)于本說明書和所附權(quán)利要求來說，術(shù)語"患者"、"對(duì)象"和"受者" 可互相交換使用。它們包括作為預(yù)防性、試驗(yàn)性或者治療性處理對(duì)象的人 和其他哺乳動(dòng)物。對(duì)于本說明書和所附權(quán)利要求來說，術(shù)語"P淀粉樣蛋白肽"與"P-淀粉樣肽"、"PAP"、 "PA"和 "Ap，，意思相同。所有這些術(shù)語表示源于 淀粉樣蛋白前體蛋白的斑塊形成肽。本文中所用的"PrP蛋白"、"PrP"、"朊病毒(prion )，，表示在適宜條 件下能夠誘導(dǎo)導(dǎo)致斑塊形成疾病的聚集體形成的多肽。例如，正常的細(xì)胞 朊病毒蛋白質(zhì)(PrPC)在這樣的條件下轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的搔癢癥異形體 (PrPSc)，其導(dǎo)致斑塊形成疾病比如，但不限于，牛海綿狀腦病(BSE)、 或者瘋牛病、貓的海綿狀腦病、庫魯病、克-雅氏病(CJD )、l施-沙病(GSS ) 和致死性家族性失眠癥(FFI)。本文中所用的術(shù)語"解聚"表示通?？糠枪矁r(jià)鍵結(jié)合在一起的聚集蛋 白質(zhì)的溶解。術(shù)語"治療"的意思表示實(shí)質(zhì)性抑制、減緩或者逆轉(zhuǎn)疾病的發(fā)展、實(shí) 質(zhì)性改善疾病的臨床癥狀或者實(shí)質(zhì)性預(yù)防疾病臨床癥狀的出現(xiàn)。也在本文中應(yīng)用的術(shù)語"斑塊形成疾病"涉及特征在于在疾病比如但 不限于早發(fā)性阿爾茨海默病、遲發(fā)性阿爾茨海默病、先兆性阿爾茨海默病、 SAA淀粉樣變性、遺傳性冰島綜合征、衰老、多發(fā)性骨髓瘤中中由于聚集 蛋白質(zhì)(斑塊形成肽)比如但不限于p-淀粉樣蛋白、血清淀粉樣蛋白A、 胱抑蛋白C ( cystatin C )、 IgG K輕鏈或朊病4J^白質(zhì)形成斑塊的疾病，以 及已知侵染人的朊病毒病比如例如，庫魯病、克-雅氏病(CJD)、格-施-沙病(GSS)、致死性家族性失眠癥(FFI)，和侵染動(dòng)物的朊病毒病，比如， 例如，搔癢病和牛海綿狀腦病(BSE)
因?yàn)榕c本文上述疾病有關(guān)的大部分淀粉樣蛋白斑塊(也被稱為淀粉樣蛋白沉積他于腦內(nèi)，任何建議的治療形式必須證明有跨越血腦屏障(BBB) 的能力以及溶解淀粉樣蛋白斑塊的能力。正常地，能穿透BBB的分子大小 為2kDa左右。越來越多的證據(jù)表明在AD臨床過程早期就影響嗅覺缺陷和中樞嗅覺 通路的退行性變化。此夕卜，AD相關(guān)的解剖學(xué)模式表明嗅覺通路可能是AD t艮中的初始階段。嗅覺受體神經(jīng)元是雙極性細(xì)胞，其居于鼻腔的上皮村層。它們的軸突 橫越篩機(jī)仗并且投射到腦嗅球中嗅覺通路的第一突觸。此構(gòu)造使得它們成 為一個(gè)干道，病毒或者其它轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)通過此干道可以跨BBB進(jìn)入CNS。如先前所表明的，鼻內(nèi)施用(Ma也ison et al, 1998; Chou et al， 1997; Draghia et al， 1995)能夠使得病毒和大分子直接進(jìn)入腦脊液(CSF)或者 CNS。在文獻(xiàn)中已l艮道過利用嗅覺受體神經(jīng)元作為遞送點(diǎn)用于將腺病毒載體 遞送至腦。該方法據(jù)報(bào)道引起報(bào)告基因在腦中表達(dá)12天，并且沒有明顯的 毒性(Draghia et al， 1995 )。因此，才艮據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，通過此途徑將能夠解聚或者 防止與斑塊形成疾病有關(guān)的多肽聚集體形成或者能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活 化的絲狀噬菌體遞送至腦。因?yàn)樵谕庵芙M織中由細(xì)胞持續(xù)產(chǎn)生AP,其跨itiL腦屏障(BBB)在特 定神經(jīng)元類群中導(dǎo)致局限性毒性作用，所以該載體的鼻內(nèi)施用還可以通過 最小化可用于形成斑塊的外周Ap的量來防止所述疾病的JU艮。根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑包括野生型絲狀噬菌體或者在其表面不展示抗 體或者非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體作為活性成分。該藥物制劑也可以 是不同絲狀噬菌體的混合物。根據(jù)本發(fā)明的制劑可以以自身或者在混合有合適載體或者賦形劑的藥 物組合物中施用于有機(jī)體。本文所用的"藥物組合物"表示一種或多種本文所述的活性成分與其 他化學(xué)成分比如生理適合的載體和賦形劑的一種制劑。藥物組合物的目 在于輔助化合物向有機(jī)體的施用。本文中的術(shù)語"活性成分"表示可發(fā)揮生物學(xué)作用的制劑。在下文中，可互換使用的短語"生理可接受的載體"和"藥物可接受 的載體，，表示載體或者稀釋劑，其不引起對(duì)有機(jī)體的明顯刺激以及不消除 所施用化合物的生物學(xué)活性和特性。這些短語的意思包括輔劑。本文中的術(shù)語"賦形劑，，表示加到藥物組合物中的惰性物質(zhì)，以進(jìn)一 步促進(jìn)活性成分的施用。賦形劑的非限定性實(shí)例包括碳酸釣、磷酸釣、各 種糖和各種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。配制和施用藥物的技術(shù)可見"Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA的最新版本，其通過參考并入本文中。合適的施用途徑可以，例如，包括口服、直腸、透粘膜尤其是透鼻、 經(jīng)腸或者胃腸外遞送，包括肌內(nèi)、皮下和髓內(nèi)注射以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、 靜脈內(nèi)、皿內(nèi)、鼻內(nèi)或者眼內(nèi)注射。作為替代，可以以局部而非全身性方式施用制劑，例如，通過將制劑 直接注射入患者的腦'本發(fā)明的藥物組合物可以用本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)行配制，例如， 通過常規(guī)的混合、溶解、?；?、糖衣化、研磨、乳化、膠嚢化、包埋 (entrapping)或者凍千方法。因此，根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的藥物組合物可以以常規(guī)方式應(yīng)用 一種或多種 生理可接受的載體進(jìn)行配制，所述生理可接受的載體包括賦形劑和輔助 劑，其促進(jìn)將所述活性成分加工成可藥用制劑。適當(dāng)?shù)闹苿┤Q于所選的 施用途徑。對(duì)于注射，本發(fā)明的活性成分可配制于水溶液中，優(yōu)選在生理相容的 緩沖液比如Hank，s溶液、Ringer，s溶液、或者生理鹽水緩沖液中。對(duì)于透 粘膜施用，在所述制劑中使用對(duì)于待透過屏障合適的滲透劑。這樣的滲透 劑在本領(lǐng)域中是公知的。
配制為片劑、丸劑、糖衣劑、膠嚢劑、液體、皿、糖漿、骨劑(slurry)、 混懸劑等，用于患者的口服M。用于口服應(yīng)用的藥物制劑可以用固體賦 形劑進(jìn)行配制，任選地>^磨所得混合物，并且如果期望的話可以在加入合 適的輔助劑之后加工顆粒混合物，以獲得片劑或者糖衣劑核心。具體來說， 合適的賦形劑是填充劑比如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或者山梨醇；纖 維素制備物比如，例如，玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明 膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉；和/或生 理可接受的聚合物比如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果期望的話，可以添加 崩解劑，比如交聯(lián)聚乙烯基p比咯烷酮、瓊脂、或者海藻酸或其鹽比如海藻向糖衣劑核心提#適的包衣。為此目的，可應(yīng)用濃縮的糖溶液，其 可任選地包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯基吡咯烷酮、卡泊普凝膠(carb叩ol gel)、聚乙二醇、二氧化鈥、漆溶液(lacquer solution)和合適的有機(jī)溶 劑或溶劑混合物。可以向片劑或者糖衣劑包衣添加染料或者顏料，以識(shí)別 或者表征活性化合物劑量的不同組合?？煽诜┯玫乃幬锝M合物包括由明膠制成的推入配合式膠嚢以及由明 膠和增塑劑比如甘油或山梨醇制成的軟、密封膠嚢。推入配合式膠嚢可包 含與填充劑比如乳糖、粘合劑比如淀粉、潤(rùn)滑劑比如滑石或硬脂酸鎂以及 任選地穩(wěn)定劑相混合的活性成分。在軟膠嚢中，所述活性成分可以溶解于 或者懸浮于合適的液體中，比如脂肪油、液體石蠟、或者液體聚乙二醇。 另外，可以添加穩(wěn)定劑。用于口服施用的所有制劑應(yīng)當(dāng)3:對(duì)于所選施用途 徑合適的劑量。對(duì)于含服施用，所述組合物可以采用以常規(guī)方式配制的片劑或者錠劑 形式。對(duì)于鼻吸入施用，根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的活性成分以氣霧劑噴霧形式從加 壓包裝或者利用合適拋射劑例如二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙 烷或者二氧化碳的噴霧器中方便地遞送。對(duì)于加壓氣霧劑的情形，可以通過所提供的遞送計(jì)算量的閥來確定劑量單位?？梢耘渲朴糜诜峙淦鞯睦?明膠的膠嚢和藥筒，其包含所述化合物與合適的粉末基礎(chǔ)成分比如乳糖或 者淀粉的粉末混合物?？梢耘渲票疚乃龅闹苿┯糜谖改c外施用，例如，通過快速推注或者 持續(xù)輸注。用于注射的制劑可以以單位劑量形式存在，例如，在安瓿中或 者在多劑量容器中，并任選地含有外加防腐劑。所述組合物可以是溶于油 性或水性載體中的混懸劑、溶液或者乳劑，并且可以包含劑型配制劑(formulatory agent)比如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分軟劑。用于胃腸外施用的藥物組合物包括水溶形式的活性制劑的水溶液。另 外，所述活性成分的混懸劑可以制備成適當(dāng)?shù)挠突蛘?JC基注射混懸劑。合適的親脂性溶劑或者載體包括脂肪油比如芝麻油、或者合成脂肪酸酯比如 油酸乙酯、甘油三酯或者脂質(zhì)體。水性注射混懸劑可以包含增加混懸劑粘 度的物質(zhì)，比如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或者葡聚糖。任選地，所述混懸 劑還可以包含合適的穩(wěn)定劑或者增加所述活性成分溶解性的試劑，以允許 制備高濃縮溶液。作為替代，所述活性成分可以在粉末形式中，用于在使用之前與合適 的載體例如無菌無熱源水基溶液進(jìn)行配制。本發(fā)明的制劑還可以利用例如常規(guī)栓劑基礎(chǔ)成分比如可可脂或者其它 甘油酯配制成直腸用組合物比如栓劑或者保留灌腸劑。適于在本發(fā)明背景下使用的藥物組合物包括這些組合物，其中含有可 實(shí)現(xiàn)預(yù)期目的的有效量的所述活性成分。更具體地，治療有效量表示可有 效預(yù)防、緩解或者改善疾病癥狀或者延長(zhǎng)治療對(duì)M活的活性成分的量。確定治療有效量在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)，尤其是依照本文所提 供的詳細(xì)公開內(nèi)容。對(duì)于在本發(fā)明方法中應(yīng)用的任何制劑而言，治療有效量或劑量可以從 體外和細(xì)胞培養(yǎng)分析中進(jìn)行初步估計(jì)。例如，可以在動(dòng)物模型中確定劑量 以實(shí)現(xiàn)期望的循環(huán)抗體濃度或者效價(jià)。這樣的信息可被用來更準(zhǔn)確地確定 用于人的劑量。本文中所述活性成分的毒性和療效可以通過標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在體外、在 細(xì)胞培養(yǎng)或者實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中來確定。從這些體外和細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究 中獲得的數(shù)據(jù)可被用來確定人用的劑量范圍。所述劑量可以根據(jù)所采用的 劑型和所利用的施用途徑而變化?？梢杂舍t(yī)師個(gè)人考慮患者的狀況來選擇 確切的制劑、施用途徑和劑量。(見，例如，F(xiàn)ingl et al， in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p. 1 (1975))。
可以個(gè)別地調(diào)整劑量和間隔從而提供足以防止聚集或者^吏已有聚集體解聚的所述絲狀噬菌體的血漿或腦水平(最小有效濃度，MEC)。 MEC將 對(duì)于每種制劑而變化，但是可從體外數(shù)據(jù)進(jìn)行估計(jì)。實(shí)現(xiàn)MEC所必須的 劑量將依賴于個(gè)體特性和施用途徑。可釆用結(jié)合分析確定血漿濃度。還可以使用MEC值確定給藥間隔。應(yīng)該使用一定的給藥方案來施用 制劑，以在10-卯％、優(yōu)選在30-卯％和最優(yōu)選50-卯％的時(shí)間中維持血漿 水平高于所述MEC。取決于待治療病況的嚴(yán)重程度和反應(yīng)性，給藥可以是單次或者多次施 用，治療時(shí)程持續(xù)幾天至幾周或者直至實(shí)現(xiàn)治愈或者達(dá)到疾病狀態(tài)減輕。當(dāng)然，待施用組合物的量將取決于治療對(duì)象、疾病嚴(yán)重程度、施用方 式、主治醫(yī)師的判斷等。如果希望的話，本發(fā)明的組合物可以在包裝或者分配裝置中提供，比 如FDA批準(zhǔn)的試劑盒，其可以包含一種或多種含所述活性成分的單位劑 量形式。所述包裝可以包括，例如，金屬或者塑料薄片，比如泡罩包裝。 所述包裝或者分配裝置可附帶施用說明書。所述包裝或者分配器還可隨所 述容器提供由監(jiān)管藥物制造、使用或銷售的政府部門規(guī)定形式的公告，該 公告反映了所述組合物用于人用或者獸用的形式得到政府部門的批準(zhǔn)。該 公告，例如，可以是美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局對(duì)有關(guān)處方藥物的批準(zhǔn)標(biāo) 簽或者是所批準(zhǔn)的產(chǎn)品插頁。還可以制備包含有在藥物相容載體中配制的 本發(fā)明制劑的組合物，其置于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，以及?biāo)記其治療適應(yīng)癥，正 如以上所詳細(xì)描述的?，F(xiàn)已一般性描述了本發(fā)明，通過參考以下的實(shí)施例將更加易于理解本 發(fā)明，這些實(shí)施例是例證性的，并無限制本發(fā)明的意圖。實(shí)施例材料和方法噬菌體的生長(zhǎng)和純化M含50 ng/ml卡那霉素的2YT液體培養(yǎng)基中的轉(zhuǎn)化TG1培養(yǎng)物中 制備絲狀噬菌體(M13 )。通過離心沉淀細(xì)菌細(xì)胞，并移出澄清的上清液。 通過加入20%初始體積的溶于2.5M NaCl的20%聚乙二醇(分子量8000Da)并且在4"C下保持3小時(shí)來從該上清液中沉淀噬菌體。通過離心(卯OO rpm， l小時(shí))沉淀噬菌體，然后重懸在3%上清液體積的PBS中。通過 7000 rpm進(jìn)一步離心去除細(xì)菌殘余物，并且通過另外的聚乙二醇沉淀再次 濃縮噬菌體。沉淀物最后重懸于在0.001倍生長(zhǎng)培養(yǎng)基初始體積中的PBS 中。(Hart et al， 1994 )o噬菌體干擾0 -淀粉樣蛋白聚集通過以下三種方法分析噬菌體阻止PA聚集和解聚已形成聚合物的能力1. 石克黃素-T熒光分析釆用硫黃素-T (ThT)染料測(cè)量PA聚集，硫黃素-T (ThT)染料一旦 與淀粉樣蛋白原纖維結(jié)合就改變其發(fā)射光鐠(LeVine, 1993 )。為評(píng)估噬菌 體阻止聚集體形成的能力，8 nl的pAl-40 577 (Bachem)或者單獨(dú)(用 PBS稀釋至80 nl，終濃度為58 jiM)或者與絲狀噬菌體(72 nl的3 x 1012 個(gè)噬菌體/ml) —起在37"C培育14天。在加入溶于pH9 50 mM甘氨酸緩 沖液的980 nl ThT (2 nM) (Sigma)之后，測(cè)量每個(gè)反應(yīng)混合物(20 jil) 的熒光。應(yīng)用Perkin-Elmer model LS-50分光熒光計(jì)在激發(fā)波長(zhǎng)435 nm 處和發(fā)射波長(zhǎng)485 nm處測(cè)量熒光。如下所述檢測(cè)噬菌體的解聚活性在371C下培育PA (58 jiM) 21天 以促進(jìn)聚集。添加噬菌體(等體積的濃度為10"個(gè)噬菌體/ml溶液的噬菌 體)并與聚集的PA —起再培育17小時(shí)。如上所述利用ThT熒光估計(jì)聚 集程度。2. 電子顯微鏡(EM):/ -淀教祥歪總稱絲猶麼蘑體游箱互疾欲使用EM觀察PA的聚集水 平。為了防止PA形成，10 |*1所述肽(289 pM)或者單獨(dú)(添加20 jil的 PBS)或者與不同濃度的噬菌體(來自以下濃度的20 nl噬菌體lx 10" 個(gè)噬菌體/ml、 1 x 1(P個(gè)噬菌體/ml、和1 x 1(T個(gè)噬菌體/ml) —起在37t: 下培育9天。通過向預(yù)聚集的PA添加不同濃度的噬菌體來證明所述喧菌體的解聚 活性。溶解于PBS的20 nl的p-淀粉樣蛋白1-40 (193 nM)在37"C下培 育10天。在第10天時(shí)，10 pl的PBS或者不同濃度的噬菌體(lxlO"個(gè)
噬菌體/ml、 1 x 1012個(gè)噬菌體/1111)被加到樣品中并且再培育16小時(shí)。在阻止和解聚分析中，噬菌體和pA被附著于碳蒸發(fā)的包被formvar 的200#網(wǎng)上(carbon evaporated coated formvar 200# grids )。用不同大小 的金標(biāo)記抗體(Lin et al., 1999)對(duì)所述淀粉樣蛋白和噬菌體ii行免疫標(biāo)記 以容易地區(qū)分p-淀粉樣蛋白原纖維和可類似于淀粉樣蛋白纖維的噬菌體。 P-淀粉樣蛋白原纖維用單克隆抗體(mAb ) 10D5、和偶聯(lián)至12 nm金顆粒 的山羊抗小鼠第二抗體(Electron Microscopy Sciences, Washington, USA) 進(jìn)行染色。為標(biāo)記所述噬菌體，釆用抗噬菌體的兔多克隆血清，并將第二 抗體偶聯(lián)至6 nm金顆粒(Electron Microscopy Sciences )。用水性(2%重 量/體積)乙酸雙氧鈾(Sigma)對(duì)樣品進(jìn)行^染色。使用JEOL 1200 EX 電子顯^L鏡在30K和100K放大倍數(shù)下觀察所述網(wǎng)。/ "定教辟歪總稱惠厲必湮后虛窗體游賴互作厲向200 nl氯仿添加 200 nl噬菌體(10"個(gè)噬菌體/ml )。在室溫下3分鐘內(nèi)對(duì)該溶液渦旋振蕩6 次(每次10秒鐘)(Griffith et al， 1981 )。管子在13,200 rpm被離心1分鐘；將水相轉(zhuǎn)移到另一管子，并置于通風(fēng)櫥中以蒸發(fā)氯仿殘余物。通過電 子顯微鏡分析p-淀粉樣蛋白和球形噬菌體之間的相互作用。P -淀粉樣蛋白(97 nM)在37"C下培育13天。在第13天時(shí)，PBS或 者不同濃度的S-噬菌體(氯仿處理過的)(5 x 1013個(gè)噬菌體/ml， 5 x io11 個(gè)噬菌體/ml)被添加到樣品中并進(jìn)一步培育16小時(shí)。如前所述通過JEOL 1200 EX電子顯微鏡觀察p-淀粉樣蛋白的聚集程度。3. MTT分析實(shí)施MTT分析來評(píng)估噬菌體保護(hù)人神經(jīng)元細(xì)胞系存活力免于卩A毒性 的作用。該分析是基于在活細(xì)胞中將3-(4,5-二甲基瘞唑-2-基)-2，5-二苯基四 唑溴化物(MTT)還原為MTT-曱臘(formazan )。通過分光光度計(jì)在570 nm處測(cè)量MTT-甲鱺的濃度，并且其直接與細(xì)胞存活力相關(guān)。在添加10%胎牛血清和100單位/ml青霉素/鏈霉素的RPMI中培養(yǎng) LAN-1人神經(jīng)元細(xì)胞系，并且在5% C02和371C條件下進(jìn)行培育。對(duì)于神 經(jīng)毒性分析，將培養(yǎng)LAN-1細(xì)胞以104個(gè)細(xì)胞/100 fil/孔的密度接種于96 孔板。采用或者單獨(dú)或者與不同濃度嗟菌體一起的P-淀粉樣蛋白(289 jiM) 的樣品來測(cè)量劑量依賴性神經(jīng)毒性。2 nl所述肽與8 nl不同濃度噬菌體(5 x 1013/ml， 5 x 1012/ml， 5 x 10u/ml 噬菌體)在371C下培育4天，以檢驗(yàn)謹(jǐn)菌體抗pA神經(jīng)毒性的預(yù)防性作用。 在將細(xì)胞接種于并附著于所i^之后24小時(shí)添加樣品。該板在37匸下培 育2天，其后如前所述通過用3-(4，5-二甲基漆唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化 物(MTT)測(cè)量細(xì)胞的氧化還原活性來評(píng)估細(xì)胞存活力(Solomon et al， 1997)。以1 mg/ml的終濃度將MTT (Sigma)加到孔中并與細(xì)胞一^t 37匸下進(jìn)一步培育3小時(shí)。添加細(xì)胞裂解緩沖液(20% (重量/體積)SDS 溶于50%二甲基甲酰胺溶液，pH7.4),并且將該板在37t:下培育過夜。 通過采用自動(dòng)銜板分光光度計(jì)測(cè)量在570 nm處OD的變化來比色確定 MTT還原。在對(duì)已形成的PA原纖維的解聚分析中，應(yīng)用兩種肽(p-淀粉樣蛋白 17-42和p-淀粉樣蛋白1-40)作為神經(jīng)毒性因子。依照以下所述檢測(cè)噬菌 體保護(hù)細(xì)胞存活力免于聚集肽影響的能力。在第一試驗(yàn)中，細(xì)胞與預(yù)聚集 的PA1-40 —起培育5天，而在第二試驗(yàn)中，使用p-淀粉樣蛋白17-42作 為神經(jīng)毒性肽。如前所述，在加入樣品之前，將細(xì)胞以104個(gè)細(xì)胞/100 nl/ 孔的密度接種于96孔板并讓其附著24小時(shí)。向2 nl聚集肽(288 jiM-儲(chǔ) 備溶液)添加8 jil噬菌體(10"個(gè)噬菌體/ml， 1013個(gè)噬菌體/ml， 1012個(gè)噬 菌體/ml)并培育過夜。將樣品添加到細(xì)胞中，并進(jìn)一步培育2天。添加終 濃度為1 mg/ml的MTT， 3小時(shí)后加入裂解緩沖液，以測(cè)量MTT-甲臘含 量。通過定量在570 nm處的O.D.變化來評(píng)估細(xì)M活率。絲狀噬菌體的體內(nèi)應(yīng)用用絲狀噬菌體攻擊野生型以及轉(zhuǎn)基因小鼠的AD模型i^j^jr辨性游謬欲為了評(píng)估作為抗聚集劑的噬菌體活性的最大潛能，依下述將噬菌體顱內(nèi)注射給轉(zhuǎn)基因小鼠(Taconic，APPSWE(2576)，10 個(gè)月大)在10分鐘內(nèi)向一側(cè)半球注射(前囟-2.8 mm，側(cè)向2.5 mm,腹側(cè)2.5 mm) 2.5 iil所述絲狀噬菌體溶液(10"個(gè)噬菌體/ml)，而對(duì)于對(duì)側(cè)，施用 磷酸鹽緩沖溶液(PBS)作為對(duì)照(圖1 )。因?yàn)閷?duì)于噬菌體解聚淀粉樣蛋 白沉積的時(shí)間段是未知的，所以在不同的時(shí)間點(diǎn)處死處理后小鼠。第一組， 在注射后1小時(shí)心內(nèi)輸注4%低聚甲醛，第二組，兩天后施用，最后一組， 3天后。它們的腦在4。/。低聚甲醛中后固定過夜，并用切片機(jī)對(duì)其進(jìn)行切片。
用硫黃素-S染色來評(píng)估斑塊負(fù)荷。為此目的，用Mayer，s蘇木精對(duì)切片進(jìn) 行染色以淬滅核自發(fā)熒光，并且在清洗后，施加ThS溶液(1% ) 3分鐘。 用1%乙酸實(shí)施分化20分鐘，并且在清洗后，干燥載玻片并用抗褪色封固 劑包埋。采用LEICAQwin程序計(jì)算斑塊負(fù)荷。龍肅住標(biāo)記絲拔麼薪體游生欲學(xué)分東用I125對(duì)絲狀噬菌體進(jìn)行放射 性標(biāo)記。從未結(jié)合碘的噬菌體中應(yīng)用G25 sephadex柱純化所述噬菌體并且 如前所述使用聚乙二醇(PEG)進(jìn)一步沉淀洗脫液。將9只BALB/c小鼠 分成3組。在一小時(shí)內(nèi)，每只小鼠鼻內(nèi)接受100 jil的噬菌體(1.25xl012 個(gè)噬菌體)，其標(biāo)記有9微居里的I125。在心臟內(nèi)灌注施用4%低聚甲醛后 l小時(shí)處死第一組的小鼠。在處理后3小時(shí)處死第二組小鼠，在24小時(shí)后 處死最后一組小鼠。灌注后，取腦以及外周器官并測(cè)量它們的Y輻射。靡力^居絲猶麼,體.為全面評(píng)估絲狀噬菌體的作用，對(duì) SWE/APP2576轉(zhuǎn)基因小鼠(Taconic， 10個(gè)月大)鼻內(nèi)施用噬菌體。每2 周施用20 nl噬菌體溶液(5 x 1012/ml )，持續(xù)4個(gè)月并對(duì)其認(rèn)知功能進(jìn)行 評(píng)估。在第九次免疫之后，實(shí)施目標(biāo)識(shí)別測(cè)驗(yàn)以研究噬菌體對(duì)記憶改善的 影響。在第一天，將小鼠暴露于兩個(gè)新目標(biāo)20分鐘。此后一天， 一個(gè)目標(biāo) 被替換，并測(cè)試小鼠探究該新目標(biāo)的好奇心。將小鼠花費(fèi)在新目標(biāo)附近的 時(shí)間除以小鼠花費(fèi)在兩個(gè)物體附近的總時(shí)間，計(jì)算每只小鼠的識(shí)別指數(shù)。 因此，超過0.5的值指示其認(rèn)知舊目標(biāo)并且花費(fèi)更多時(shí)間在新物體周圍來 探究。結(jié)果從減少和預(yù)防淀粉樣蛋白形成的方面評(píng)估絲狀噬菌體的體外抗聚集特 性。在石危黃素-T分析中，噬菌體在解聚PA原纖維方面比預(yù)防它們形成方 面更加有效。當(dāng)肽與絲狀噬菌體以1:10,000摩爾比(噬菌體比pA) —起 培育時(shí)，觀測(cè)到PA聚集下降26% (圖2B)。向預(yù)聚集的PA添加噬菌體 (28nM)導(dǎo)致淀粉樣蛋白原纖維減少45% (圖2A)。應(yīng)用免疫金染色的p-淀粉樣蛋白及其與噬菌體的復(fù)合物來實(shí)施電子 顯微鏡對(duì)噬菌體與p-淀粉樣蛋白肽之間物理相互作用的觀察。當(dāng)噬菌體與 卩-淀粉樣蛋白^bN互作用時(shí)，與不存在噬菌體時(shí)相比，聚集物更小并且更 加分歉。令人感興趣地是，噬菌體與p-淀粉樣蛋白肽一起培育導(dǎo)致噬菌體 降解，這可以從大量的抗噬菌體主要衣殼蛋白的標(biāo)記抗體不在噬菌體顆粒
上而得知(圖3C)。當(dāng)噬菌體與p-淀粉樣蛋白肽一起培育過夜(在解聚分 析中)時(shí)或者當(dāng)噬菌體單獨(dú)培育同樣時(shí)間時(shí)(圖3D)，沒有觀測(cè)到此現(xiàn)象。 圖3 (F-K)顯示噬菌體對(duì)已形成淀粉樣蛋白聚集物的作用。圖3F表明淀 粉樣蛋白原纖維在由12 nm金顆粒標(biāo)記的IMI中。更高放大倍數(shù)(圖3G) 顯示不同大小的聚集原纖維針。圖3H-K呈現(xiàn)組織成束的噬菌體(箭頭)， 其在附著于淀粉樣蛋白針(箭)時(shí)被M。淀粉樣蛋白簇是小的并且包含 窄小的淀粉樣蛋白原纖維。尤其感興趣的是噬菌體相對(duì)于淀粉樣蛋白原纖 維(空心箭)的平行組織結(jié)構(gòu)。已表明pVIII分子存在有三種構(gòu)象。在完整的噬菌體中，該蛋白質(zhì) 至少卯％是a-螺旋，但是當(dāng)暴露于氯仿/水界面時(shí)其在形狀上就發(fā)生很大 變化。這是一種溫度依賴性的過程。在2匸形成棒形(I-形)，而在25匸形 成球形結(jié)構(gòu)(S-形)。向S-形的轉(zhuǎn)變伴隨有衣殼蛋白螺旋含量的實(shí)質(zhì)減少， 但是在色氨酸26環(huán)境中有明顯變化(Roberts and Dunker, 1993 )。用氯仿處理噬菌體3分鐘表明盡管球形噬菌體存在于PA聚集物的 部位，但是它們通常定位于原纖維的末端并且無助于溶解(圖4A-B)。MTT:采用MTT分析證明了絲狀噬菌體保護(hù)LAN-1細(xì)胞免于PA神經(jīng)毒 性的作用。當(dāng)噬菌體與PA—起培育時(shí)，與在單獨(dú)存在PA條件下生長(zhǎng)的細(xì) 胞相比，神經(jīng)元存活力增加。加到細(xì)胞培養(yǎng)物中的最大量噬菌體引起最顯 著的效果(細(xì)胞存活率增加17% )(圖5A )。噬菌體避免P-淀粉樣蛋白17-42毒性的保護(hù)作用要高于其預(yù)防p-淀 粉樣蛋白l-40毒性的作用。當(dāng)把噬菌體加入預(yù)聚集的PA17-42時(shí)，與單獨(dú) 和PA —起生長(zhǎng)的細(xì)J3^目比，細(xì)胞存活率增加30% (圖5B)。向PA1-40 加入同樣濃度的噬菌體導(dǎo)致細(xì)胞存活率只有17%的增加(圖5C)。與PA 處理過的細(xì)胞相比，加入更高濃度的噬菌體使細(xì)胞存活率成功增加到 25%。對(duì)造成此差異的可能原因可歸因于可以干擾噬菌體活性的P-淀粉樣 蛋白的N-末端，或者是由于P-淀粉樣蛋白17-42比p-淀粉樣蛋白1-40聚 集更快的事實(shí)(Pike et al.， 1995)。噬菌體對(duì)p-淀粉樣蛋白1-40的親和性 隨著肽聚集而增加。ELISA檢測(cè)噬菌體結(jié)合可溶性p-淀粉樣蛋白、l小時(shí) 聚集的p-淀粉樣蛋白或者3周聚集的肽，其表明在噬菌體結(jié)合PA1-40方
面有明顯不同。因此，噬菌體對(duì)高度聚集肽的較高親和性可解釋其與P-淀粉樣蛋白17-42的較強(qiáng)相互作用。在通過腦內(nèi)注射絲狀噬菌體解聚p-淀粉樣蛋白斑塊的體內(nèi)研究中， 在注射后1小時(shí)處死的小鼠中沒有檢測(cè)到斑塊負(fù)荷的減少。在處理后2天 處死的小鼠中，與注射PBS的半斜目比，在用絲狀噬菌體處理過的半球中 注意到斑塊負(fù)荷有25%降低。處理后3天處死的小鼠顯示在注射噬菌體的 半球中斑塊負(fù)荷有40%降低(圖6A和6B)。放射性標(biāo)記的絲狀噬菌體在腦中的分布鼻內(nèi)施用之后，在施用后早在1小時(shí)就在嗅球中和在腦中檢測(cè)到絲 狀噬菌體(圖7 )。盡管所述的組太小(n = 3 )而不能總結(jié)噬菌體清除速率， 但看上去噬菌體濃度在1小時(shí)后達(dá)到峰值，接著在24小時(shí)內(nèi)幾乎完全被消 除。在小鼠之間的高度變化性可能是吞咽和^v不同量噬菌體的結(jié)果。滲 透入腦實(shí)質(zhì)的劑量在給定劑量的0.0009%至0.018%范圍內(nèi)變化。值得M 的是0.1%的抗體血清濃度成功地到達(dá)腦并且降低了斑塊負(fù)荷。這些初步的 數(shù)據(jù)表明在正常的BALB/C小鼠中噬菌體可以在短時(shí)間內(nèi)滲透入腦并在一 小時(shí)后開始清除。因此，鼻內(nèi)施用絲狀噬菌體可以檢驗(yàn)其在治療攜帶淀粉 樣蛋白沉積的轉(zhuǎn)基因小鼠中的功效。向轉(zhuǎn)基因小鼠重復(fù)鼻內(nèi)施用絲狀噬菌體與未用噬菌體處理過的組相比，在噬菌體處理過的小鼠中注意到在 認(rèn)知功能方面有明顯改善(數(shù)據(jù)未顯示)。在研究結(jié)束時(shí)，將實(shí)施組織化 學(xué)分析以評(píng)估小鼠的斑塊負(fù)荷、小膠質(zhì)細(xì)胞活化、突觸密度和可能的副作 用以便獲得對(duì)治療功效的全面評(píng)估。討論本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)室在早前已報(bào)道針對(duì)pA N-末端區(qū)的位點(diǎn)定向單 克隆抗體(mAb)結(jié)合預(yù)先形成的PA原纖維，并且導(dǎo)致淀粉樣蛋白解 聚成無定形狀態(tài)以及抑制它們的神經(jīng)毒性作用(Solomon et al.， 1996， 1997)。在AD轉(zhuǎn)基因小鼠中也體內(nèi)證明了該活性(Bard et al., 2000 )。 應(yīng)用展示抗PA之scFv的噬菌體來鼻內(nèi)遞送抗聚集抗體片段至腦斑塊 (Frenkel et al.， 2002 )。所述噬菌體被用作載體，其可實(shí)現(xiàn)scFv滲透入 腦以及其與轉(zhuǎn)基因小鼠中淀粉樣蛋白沉積的結(jié)合。
在施用次數(shù)與在海馬和嗅球中所檢測(cè)到的噬菌體量之間顯示出直 接相關(guān)性。所述噬菌體的線性結(jié)構(gòu)顯示出賦予經(jīng)由各種膜的滲透特性。 值得提及的是，在噬菌體施用后，在那些小鼠的腦中沒有觀察到病理征兆(Frenkel et al.， 2002 )。通過ThT和熒光標(biāo)記抗噬菌體抗體可以顯示(3A原纖維并且在組 織學(xué)研究中表明絲狀噬菌體從腦中消失且不引起毒性作用。在先前報(bào)道 的試驗(yàn)中，絲狀噬菌體經(jīng)靜脈注射入小鼠并且隨后從不同器官中被找 到，這表明它們?cè)隗w內(nèi)循環(huán)中其完整性沒有受到影響。認(rèn)為淀粉樣蛋白的纖維化是由疏水性而不是靜電相互作用所驅(qū)動(dòng) 的。(3A包含兩個(gè)疏水性片段，其中心部分是由殘基17-21和包含殘基 30-40的C-末端區(qū)所組成的?；趤碜怨虘B(tài)NMR的實(shí)驗(yàn)性約束條件根 據(jù)所述模型，該肽的構(gòu)象包含兩個(gè)p-鏈，其由殘基25-29形成的180° 彎曲所分開。所述(5-鏈形成兩個(gè)互相對(duì)準(zhǔn)平行的p-片層，其通過側(cè)鏈-側(cè)鏈接觸相互作用。疏水性側(cè)鏈被暴露于外表面并且形成疏水面，而另 外的帶電和極性側(cè)鏈分布于相對(duì)面、所述彎曲的凸起側(cè)和N-末端片段 中，在此它們可以隨著原纖維生長(zhǎng)而被溶劑化(Petkova et al， 2002 )。另一方面，主要噬菌體衣殼蛋白由三部分組成外表面，被所述 亞基的N-末端區(qū)域所占據(jù)，富含與周圍溶劑相互作用并賦予毒粒低等 電點(diǎn)的酸性殘基；殼內(nèi)部，包含19殘基長(zhǎng)的非極性側(cè)鏈，在此蛋白質(zhì) 亞基主要是彼此之間發(fā)生相互作用；和內(nèi)表面，由所述亞基的C-末端 區(qū)域所占據(jù)，富含與DNA核心相互作用的堿性殘基。實(shí)際上幾乎所有 蛋白質(zhì)側(cè)鏈的相互作用是發(fā)生在衣殼蛋白陣列內(nèi)的不同亞基之間而不 是在亞基內(nèi)的事實(shí)使得這對(duì)于研究在大分子裝配中a-螺旋亞基之間的 相互作用來說是一種可用的模式系統(tǒng)。在本研究中，證明了噬菌體除了具有報(bào)道過的作為用于遞送抗PA 抗體至腦的載體的功能之外，還擁有抗聚集特性。從在實(shí)施例中所呈現(xiàn) 的數(shù)據(jù)來看，絲狀噬菌體與p-淀粉樣蛋白相互作用并且能夠干擾其聚集 過程，甚至誘導(dǎo)其溶解。解聚特性具有重要的價(jià)值，因?yàn)槟壳笆窃趐-淀粉樣蛋白斑塊已形成的疾病晚期才進(jìn)行診斷。這個(gè)過程是時(shí)間依賴性 的，因?yàn)閷⑹删w顱內(nèi)注射給攜帶有淀粉樣蛋白斑塊的Tg(轉(zhuǎn)基因) 小鼠之后，僅在3天之后即觀察到最大作用。該作用可能是噬菌體的細(xì) 長(zhǎng)纖維的獨(dú)特結(jié)構(gòu)的結(jié)果，該結(jié)構(gòu)使得它沿著淀粉樣蛋白原纖維來組
織，正如可在電子顯微鏡的纖維照片中所見的。這個(gè)推測(cè)可以通過以下事實(shí)來證明喪失其線性結(jié)構(gòu)的球狀噬菌體不能抑制淀粉樣蛋白形成的 事實(shí)來證明。可能是主要促成噬菌體活性的另一因素是其高含量的a-螺旋(蛋白質(zhì)8)，這可以干擾p片層結(jié)構(gòu)。pVIII亞基裝進(jìn)螺旋陣列從 而形成圍繞ssDNA基因組的管狀結(jié)構(gòu)。pVIII的C-末端暴露于該管狀 結(jié)構(gòu)的內(nèi)部并且含有帶正電荷的殘基，這些正電荷殘基與帶負(fù)電荷的 ssDNA基因組相互作用。中間部分富含疏水性氨基酸，其負(fù)責(zé)亞基之間 的相互作用。最后，柔性、帶負(fù)電荷的N-末端部分暴露于顆粒外部 (Marvin， 1998 )。絲狀噬菌體具有超過其它載體的明顯優(yōu)點(diǎn)。在結(jié)構(gòu)和遺傳水平上， 對(duì)絲狀噬菌體M13、fl和fd都有充分了解(Wilson and Finley 1998; Rodi and Makowski, 1999)。它們經(jīng)過遺傳改造來展示抗原和/活抗體并且被 用于不同的生物學(xué)系統(tǒng)來在它們的表面呈現(xiàn)外源蛋白質(zhì)(Scott et al. 19卯；McCafferty et al 19卯)。由于已針對(duì)原核生物的感染、裝配和復(fù) 制進(jìn)化而來，噬菌體既不能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中復(fù)制，也不表現(xiàn)出對(duì)于哺 乳動(dòng)物細(xì)胞的天然向性。這使得發(fā)生非特異性基因遞送的可能性最小 化。噬菌體載體潛在地比其他病毒更加安全，因?yàn)樗鼈兏倏赡茉趧?dòng)物 細(xì)胞中產(chǎn)生具有復(fù)制能力的實(shí)體。應(yīng)用噬菌體作為解聚劑的另一優(yōu)點(diǎn)是它的易生產(chǎn)性，因?yàn)橥ㄟ^細(xì) 菌培養(yǎng)物的生長(zhǎng)可以很容易地獲得較多的材料。根據(jù)放射性標(biāo)記分析， 噬菌體在不到一小時(shí)后就侵入腦實(shí)質(zhì)。稍后它們可能就開始消除。侵入 的噬菌體占所施用劑量的百分率從0.0009%至0.018%變化。應(yīng)當(dāng)進(jìn)行 更多的研究以盡可能降低小鼠之間的可變性。盡可能降低劑量、并在每 次點(diǎn)滴之間等待更長(zhǎng)時(shí)間會(huì)有幫助。相比較而言，抗體血清濃度的0.1% 達(dá)到腦。盡管噬菌體的分子量高于抗體兩個(gè)數(shù)量級(jí)，但是鼻內(nèi)施用可以 導(dǎo)致噬菌體的侵入。通過對(duì)本發(fā)明已進(jìn)行的全面描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解， 在很寬范圍的等效參數(shù)、濃度和條件內(nèi)可以實(shí)施本發(fā)明，而不脫離本發(fā) 明的精神和范圍并且不需要過度的實(shí)驗(yàn)。盡管本發(fā)明已結(jié)合其具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但是應(yīng)當(dāng)理解它 能夠作進(jìn)一步的改進(jìn)。本申請(qǐng)的范圍涵蓋本發(fā)明的任何變型、應(yīng)用或者 適應(yīng)性修改，通常它們遵從本發(fā)明的原理，并且包括偏離本發(fā)明的公開
內(nèi)容，但是這些偏離來自本發(fā)明所屬領(lǐng)域內(nèi)的公知內(nèi)容或者常規(guī)實(shí)踐， 以及這些偏離可應(yīng)用于以下列出的所附權(quán)利要求范圍中的前述必要技 術(shù)特征。所有在本文中引用的參考文獻(xiàn)，包括雜志文章或者摘要、公布的 或者相應(yīng)的美國(guó)或者外國(guó)專利申請(qǐng)、已頒布的美國(guó)或者外國(guó)專利、或者 任何其他參考文獻(xiàn)，通過參考全部并入本文中，包括存在于所引用參考 文獻(xiàn)中的所有數(shù)據(jù)、表、圖和文本。此外，在本文所引用參考文獻(xiàn)中所 引用的參考文獻(xiàn)的全部?jī)?nèi)容也通過參考全部并入本文。對(duì)已知方法步驟、常規(guī)方法步驟、已知方法或者常規(guī)方法的參考 無論如何不是承認(rèn)本發(fā)明的任何方面、說明或者實(shí)施方案被公開于、教 導(dǎo)于或者建議于相關(guān)領(lǐng)域中。具體實(shí)施方案的前述說明充分地披露了本發(fā)明的一般性質(zhì)，使得其他 人可以通過應(yīng)用本領(lǐng)域內(nèi)的知識(shí)(包括本文所引用參考文獻(xiàn)的內(nèi)容)^f艮容 易地改進(jìn)和/或改變具體實(shí)施方案的各種應(yīng)用，而不需要過度的實(shí)驗(yàn)、并且 沒有脫離本發(fā)明的一般性概念。因此，基于本文所提供的教導(dǎo)和指導(dǎo)，這 些改變和改進(jìn)意在涵蓋于本文所公開實(shí)施方案的等同的意思和范圍內(nèi)。應(yīng) 當(dāng)理解，本文的措辭或者術(shù)語是用于說明的目的，并無限制的意思，因此 本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)本文中所提供的教導(dǎo)或者指導(dǎo)并結(jié)合本領(lǐng)域普 通技術(shù)人員的知識(shí)來解釋本說明書中的術(shù)語或者措辭。
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權(quán)利要求
1.用于抑制或者治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥以及與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體，以抑制或者治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥以及與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥。
2. 權(quán)利要求l的方法，其中所述絲狀噬菌體選自M13、 fl和fd噬 菌體、及其混合物。
3. 權(quán)利要求l的方法，其中所述絲狀噬菌體是M13。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中通過鼻內(nèi)施用有效量的所述絲狀噬菌 體來抑制或者治療腦部炎癥。
5. 權(quán)利要求1的方法，其中所述的與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者 涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥是斑塊形成疾病。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述斑塊形成疾病是阿爾茨海默病。
7. 權(quán)利要求5的方法，其中所述斑塊形成疾病是朊病毒病。
8. 權(quán)利要求1的方法，其中所述的與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥是 多發(fā)性骨髓瘤。
9. 權(quán)利要求1的方法，其中所述的與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥是 腎淀粉樣變性。
10. —種藥物組合物，其包含藥物可接受的載體或者賦形劑、以及或 者野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗原的 絲狀噬菌體作為活性成分。
11. 權(quán)利要求10的藥物組合物，其中所述絲狀噬菌體選自M13、 fl、 fd、及其混合物。
12. 用于抑制淀粉樣蛋白沉積形成的方法，其包括使絲狀噬菌體與 斑塊形成肽接觸以抑制淀粉樣蛋白沉積的形成，其中所述絲狀噬菌體是 野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或者非絲狀噬菌體抗原的 絲狀噬菌體。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述的絲狀噬菌體選自M13、 fl和fd 噬菌體、及其混合物。
14. 用于解聚預(yù)先形成的淀粉樣蛋白沉積的方法，其包括使絲狀噬 菌體與預(yù)先形成的淀粉樣蛋白沉積相接觸以解聚預(yù)先形成的淀粉樣蛋 白沉積，其中所述絲狀噬菌體是野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展 示抗體或者非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體。
15. 權(quán)利要求14的方法，其中所述的絲狀噬菌體選自M13、 fl和fd 噬菌體、及其混合物。
16. 野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗 原的絲狀噬菌體在制備用于抑制或者治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的炎癥 以及與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者涉及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥的 藥物中的用途。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16的用途，其中與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的或者涉 及已活化小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥是選自阿爾茨海默病和朊病毒病的斑塊 形成疾病。
18. 根據(jù)權(quán)利要求16的用途，其中所述的與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的 炎癥選自多發(fā)性骨髓瘤和腎淀粉樣變性。
19. 根據(jù)權(quán)利要求16的用途，其中所述的絲狀噬菌體選自M13、 fl 和fd噬菌體、及其任意混合物。
20. 野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗 原的絲狀噬菌體在制備用于抑制淀粉樣蛋白沉積之形成的藥物中的用途。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20的用途，其中所述的絲狀噬菌體選自M13、 fl 和fd噬菌體、及其任意混合物。
22. 野生型絲狀噬菌體或者在其表面上不展示抗體或非絲狀噬菌體抗 原的絲狀噬菌體在制備用于解聚預(yù)先形成的淀粉樣蛋白沉積的藥物中的 用途。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的用途，其中所述的絲狀噬菌體選自M13、 fl 和fd噬菌體、及其任意混合物。
全文摘要
在其表面上不展示抗體或者非絲狀噬菌體抗原的絲狀噬菌體用于抑制或者治療與淀粉樣蛋白沉積有關(guān)的和/或涉及活化的小膠質(zhì)細(xì)胞的腦部炎癥、用于抑制淀粉樣蛋白沉積的形成、以及用于解聚預(yù)形成的淀粉樣蛋白沉積。
文檔編號(hào)A61K35/76GK101166536SQ200680006773
公開日2008年4月23日 申請(qǐng)日期2006年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日
發(fā)明者奧爾納·戈倫, 貝卡·所羅門 申請(qǐng)人:雷蒙特亞特特拉維夫大學(xué)有限公司