專利名稱：用于治療呼吸系統(tǒng)病毒感染藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療呼吸系統(tǒng)病毒感染藥物的用途，尤其涉及一種用于治療柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染引起的呼吸系統(tǒng)疾病藥物的用途。
背景技術(shù)：
急性呼吸道感染是人類最常見的疾病，約80％以上是由病毒引起的，是導(dǎo)致世界范圍內(nèi)老人和小孩發(fā)病與死亡的主要原因。引起呼吸道感染的病毒種類很多，其中較為常見的是流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和某些腸道病毒(如柯薩奇病毒)。
目前很多抗病毒藥物由于毒副作用和長期應(yīng)用的耐藥性而限制了其臨床應(yīng)用如臨床上常用于治療流感的金剛烷胺及其結(jié)構(gòu)衍生物甲基金剛乙胺就存在神經(jīng)毒性、易產(chǎn)生耐藥毒株和對B型流感病毒無效等缺陷；目前經(jīng)FDA批準(zhǔn)用于防治呼吸道合胞病毒感染的藥物僅有病毒唑，但其通過靜脈給藥時存在骨髓細(xì)胞毒性，通過氣霧劑經(jīng)呼吸道少量給予時存在白細(xì)胞減少，劑量過大時可致頭痛、不可逆貧血等副作用；從而導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)病毒感染的發(fā)病率持續(xù)不衰。
化學(xué)藥物在治療病毒感染中占有極為重要的地位，因此開發(fā)研制有效防治呼吸系統(tǒng)病毒感染的新化合物具有極強(qiáng)的社會意義。鹽酸阿比朵爾是非核苷類抗病毒藥物，是前蘇聯(lián)藥物化學(xué)研究中心首先研制出的新的抗病毒藥物和免疫刺激劑，它對A、B型流感病毒的抗病毒活性最為顯著，該藥能抑制A、B型流感病毒復(fù)制的早期階段，能抑制病毒細(xì)胞漿膜的融合以及病毒與內(nèi)吞囊泡之間的膜融合。同時，鹽酸阿比朵爾在體內(nèi)還可誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素，對巨噬細(xì)胞的吞噬功能有顯著的活化作用，具有免疫調(diào)節(jié)作用。我國在其基礎(chǔ)上，采用新的合成方法及原料，合成了具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的新化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于治療呼吸系統(tǒng)病毒感染藥物的用途，該藥物為鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，化學(xué)名為6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羥基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羥酸乙酯鹽酸鹽-水合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明提供的一種新藥的用途，是用于治療柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒所致的呼吸系統(tǒng)感染。
本發(fā)明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾具有抗柯薩奇病毒B3作用，表現(xiàn)在其能提高心肌炎小鼠存活率、降低小鼠心肌病變檢出率以及心臟組織勻漿中病毒滴度。
本發(fā)明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾具有抗柯薩奇病毒B5作用，隨著藥物劑量的增加，小鼠死亡率降低，平均生存時間延長。同時，能降低感染柯薩奇病毒B5小鼠肺組織的病變程度、肺組織勻漿中的病毒滴度以及血清中和抗體的水平，且與藥物濃度呈正相關(guān)。
本發(fā)明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾有明顯抑制腺病毒的作用，表現(xiàn)在隨著藥物濃度的增加，小鼠死亡率降低，平均生存時間延長。同時能降低感染腺病毒小鼠肺組織的病變程度、肺組織勻漿中的病毒滴度以及血清中和抗體的水平，且與藥物濃度呈正相關(guān)。
本發(fā)明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾有抗呼吸道合胞病毒作用，表現(xiàn)為鹽酸阿比朵爾實驗組與病毒對照組比較，死亡保護(hù)率、延長生命率、平均肺指數(shù)等指標(biāo)評價，均有統(tǒng)計意義上的有效治療效果，且治療效果與藥物濃度呈正相關(guān)。
本發(fā)明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾對鼻病毒所致小鼠的呼吸道感染有抑制作用，隨著藥物濃度的增加，小鼠肺組織病變程度降低，肺組織中鼻病毒檢出率降低等改變，與病毒對照組相比較有顯著性差異，且與藥物濃度呈正相關(guān)。
本發(fā)明具有下列優(yōu)點和積極效果1、降低柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染后小鼠的死亡率，以及小鼠體內(nèi)病毒滴度和血清中抗體水平；2、改善臨床上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎癥狀及體征的作用。
具體實施例方式
實施例1鹽酸阿比朵爾對感染柯薩奇病毒B3動物的保護(hù)作用BalB/C小鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分為6組正常對照組、病毒對照組、陽性藥物對照組、受試藥物組(采用3個濃度即鹽酸阿比朵爾高劑量組、中劑量組和低劑量組)每組27只小鼠。于感染前用藥2天，鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日2次；陽性藥物對照組以病毒唑腹腔注射；病毒對照組以等體積的消毒飲用水替代，每日2次。正常對照組不做任何處理，自然喂養(yǎng)。實驗當(dāng)日，小鼠感染部位常規(guī)消毒后，腹腔注射CVB3，接種2h后繼續(xù)用藥。觀察存活率；連續(xù)治療至急性期時，每組隨機(jī)殺檢1/3，取心臟的右半部分勻漿，滴定病毒滴度；取心臟左半部分進(jìn)行HE染色，觀察各組小鼠心肌組織病變程度及病變檢出率；應(yīng)用組織病理分級法對心肌損傷進(jìn)行分析。剩余2/3小鼠繼續(xù)接受治療至10和20天時分別殺檢，重復(fù)上述檢測。
實驗結(jié)果為鹽酸阿比朵爾能提高心肌炎小鼠存活率。急性期5天內(nèi)病毒對照組死亡18只，鹽酸阿比朵爾高劑量組和中劑量組，死亡小鼠分別為8只和12只，差異有顯著性(P＜0.05)。鹽酸阿比朵爾各劑量組各期病變程度及范圍均明顯輕于病毒對照組。進(jìn)一步將各期主要病變檢出率量化比較，鹽酸阿比朵爾高劑量組和中劑量組0度(正常)檢出率與病毒對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，重度病變檢出率低于病毒對照組，鹽酸阿比朵爾高、中劑量組與病毒對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。鹽酸阿比朵爾實驗組小鼠的心臟組織勻漿中病毒滴度降低，與病毒對照比較有顯著性差異(P＜0.05)。
實施例2鹽酸阿比朵爾對感染柯薩奇病毒B5動物的保護(hù)作用Balb/C鼠，雌性，5～7周齡，體重為17～20g，隨機(jī)分成5組分別為正常對照組、病毒對照組、陽性藥物對照組、治療劑量25mg/kg/d實驗組和治療劑量50mg/kg/d實驗組，每組10只。
實驗當(dāng)日，小鼠感染部位常規(guī)消毒后，腹腔注射CVB5。接種病毒24h后，鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥6天；正常對照組不做任何處理；病毒對照組用等體積的PBS灌胃替代藥物。每組6只小鼠在接種病毒后第8天處死。將解剖所得到的肺、心臟和肝臟一部分HE染色進(jìn)行病理學(xué)檢測。一部分組織被冰凍做免疫熒光檢測和病毒分離。剩下的動物每天觀察體重的改變和死亡情況。評價抗病毒效果的參數(shù)包括21天內(nèi)體重的減輕，死亡率的下降和/或平均存活時間的延長。
實驗結(jié)果為每組中6只動物在接種病毒第8天被處死，將所得的肺、腎、肝、心和脾作病理學(xué)檢查。顯微鏡下，病毒對照組動物肺組織的肺泡壁增厚，心肌細(xì)胞均質(zhì)變性。除治療劑量為25mg/kg/d實驗組動物肺組織有局部出血，其他組織標(biāo)本沒有顯著病理改變。在免疫熒光檢測中發(fā)現(xiàn)，病毒對照組在接種病毒第8天所得到的肺和心，分別在肺泡壁和心肌細(xì)胞膜表面有強(qiáng)特異性熒光(++++)；治療劑量25mg/kg/d實驗組的肺和心表現(xiàn)為++～+++；治療劑量為50mg/kg/d實驗組的肺和心表現(xiàn)為+；正常對照組為陰性。
表1鹽酸阿比朵爾作用后感染CVB5小鼠存活率和存活時間

表2鹽酸阿比朵爾對感染CVB5小鼠的治療作用


為鹽酸阿比朵爾治療組與病毒對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)實施例3鹽酸阿比朵爾對感染腺病毒動物的保護(hù)作用小鼠雌雄各半，隨機(jī)分成6組，每組10只。分別為正常對照組，病毒對照組，病毒唑組，鹽酸阿比朵爾高、中、低劑量組。將小鼠用乙醚進(jìn)行麻醉，然后滴鼻感染腺病毒原液，4h后鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日2次，連續(xù)給藥8天；病毒對照組，每日灌胃消毒飲用水2次；正常對照組，不做任何處理；陽性藥物病毒唑?qū)φ战M，腹腔注射藥物。給藥8天后殺剖小鼠，精密天平稱其體重；取血分離血清，用ELISA法測定抗腺病毒抗體；解剖小鼠，取鼠肺稱肺重，觀察肺病變；計算肺指數(shù)及肺病變抑制率，公式如下肺指數(shù)＝肺重(g)÷體重(g)平均指數(shù)＝每組肺指數(shù)之和÷每組動物數(shù)肺病變抑制率＝(對照組平均肺指數(shù)-實驗組平均肺指數(shù))÷對照組平均肺指數(shù)×100％測定鹽酸阿比朵爾組肺懸液在HEp-2細(xì)胞中病毒滴度(TCID50)，與病毒對照組比較。
實驗結(jié)果為表3鹽酸阿比朵爾對腺病毒感染小鼠血清效價影響(IgM)

表4鹽酸阿比朵爾對腺病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響

△p＜0.01與正常對照組比較；*p＜0.01，**p＞0.01與病毒對照組比較表5鹽酸阿比朵爾對小鼠體內(nèi)腺病毒增殖的抑制作用

*肺病變程度以“+”評價75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病變實施例4鹽酸阿比朵爾對感染呼吸道合胞病毒動物的保護(hù)作用小鼠雌雄各半，隨機(jī)分成6組正常對照組，病毒對照組，病毒唑組，鹽酸阿比朵爾高、中、低劑量組，每組10只。將小鼠用乙醚進(jìn)行麻醉，然后滴鼻感染RSV病毒原液，4h后鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日給藥2次，連續(xù)給藥8天；病毒對照組，每日灌胃給飲用水2次；正常對照組，不做任何處理；陽性藥物病毒唑組，腹腔注射給藥。給藥8天后殺剖小鼠，精密天平稱其體重；取血分離血清，用ELISA法測定抗RSV病毒抗體；解剖小鼠，取鼠肺稱肺重，觀察肺病變；計算肺指數(shù)及肺病變抑制率，公式如下肺指數(shù)＝肺重(g)÷體重(g)平均指數(shù)＝每組肺指數(shù)之和÷每組動物數(shù)肺病變抑制率＝(對照組平均肺指數(shù)-實驗組平均肺指數(shù))/對照組平均肺指數(shù)×100％測定鹽酸阿比朵爾組小鼠肺懸液在Hela細(xì)胞中病毒滴度(TCID50)，與病毒對照組比較。
實驗結(jié)果為表6鹽酸阿比朵爾對RSV感染小鼠血清效價影響(IgM)

表7鹽酸阿比朵爾對RSV病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響

△p＜0.01與正常對照組比較；*p＜0.01，**p＞0.01與病毒對照組比較表8鹽酸阿比朵爾對小鼠體內(nèi)RSV病毒增殖的抑制作用


*肺病變程度以“+”評價75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病變實施例5鹽酸阿比朵爾對感染鼻病毒動物的保護(hù)作用Balb/C小鼠4周齡，雌性，體重17克左右，隨機(jī)分為6組A組病毒對照組、B組陽性藥物病毒唑?qū)φ战M、C組鹽酸阿比朵爾高劑量治療組、D組鹽酸阿比朵爾中劑量治療組、E組鹽酸阿比朵爾低劑量治療組、F組正常對照組，每組20只。
將A組、B組和C、D、E組小鼠分別用戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉后經(jīng)鼻腔滴入RV懸液。當(dāng)日鹽酸阿比朵爾治療組灌胃給藥；陽性藥物組腹腔注射，每日1次，連續(xù)給藥8天。治療第8天將小鼠頸脫臼致死，無菌取肺，將左側(cè)肺做電鏡病理學(xué)檢測，將右側(cè)肺用于RV分離。
實驗結(jié)果為A組20只，B組12只，病毒分離陽性；C組病毒分離陽性6只，陰性6只，陽性率為50％。電鏡結(jié)果顯示C、D組小鼠肺組織病變程度明顯輕于A組。
實施例6鹽酸阿比朵爾治療呼吸道病毒感染的臨床驗證總結(jié)一、臨床資料病例來源及選擇按呼吸道病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的門診病人共60例，其中女性26例，男性34例，年齡15～56歲，平均38歲，病程7～10天，平均8天。全身中毒癥狀均以發(fā)熱、畏寒、頭痛、肌肉酸痛、疲倦以及食欲不振為主，呼吸道癥狀以噴嚏、鼻塞、干咳、咽痛以及流涕為主，且鼻腔流涕癥狀比咽部癥狀明顯。所有患者無嚴(yán)重的心、肝、腎疾患，無精神病、癲癇病史，病毒感染后未經(jīng)其他藥物治療。將患者隨機(jī)分為兩組各30例陽性藥物對照組與鹽酸阿比朵爾治療組，兩組患者性別、年齡、臨床表現(xiàn)及病因分布經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理均無顯著性差異(P＞0.05)。
二、治療方法及療效判斷
1、治療方法應(yīng)用鹽酸阿比朵爾高劑量于呼吸道病毒感染患者，每次口服5ml，每日3次。以上治療7天為一療程。
陽性藥物對照組應(yīng)用病毒唑針0.6～1.0g加入5％葡萄糖液100～250mL中靜脈滴注，40滴/min，1次/d。以上治療7天為一療程。
2、療效觀察和評定詳細(xì)記錄主要癥狀(咳嗽、氣促、喘息)和體征(發(fā)熱、肺部羅音和哮鳴音)的嚴(yán)重程度、緩解時間和消失時間。顯效治療3天后，發(fā)熱、咳嗽、氣促等癥狀明顯減輕或消失，精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)無煩躁，肺部羅音明顯減少或消失。有效治療3天后，癥狀和體征有改善，但沒有消失。無效治療3天后，癥狀和體征均無改善。
三、結(jié)果與結(jié)論試驗組顯效26例(68.6％)，有效3例，總有效率96.7％，人均治療時間(6.61±2.0)天，對照組顯效19例(30％)，有效7例，總有效率86.7％，人均治療時間(8.41±2)天。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，試驗組的療效明顯優(yōu)于對照組(P＜0.01)，治療過程中兩組均未見明顯毒副反應(yīng)。從以上結(jié)果可得出鹽酸阿比朵爾有治療呼吸道病毒感染作用，效果優(yōu)于病毒唑，有深入研究價值。
權(quán)利要求
1.一種鹽酸阿比朵爾在制備治療呼吸系統(tǒng)病毒感染藥物中的應(yīng)用，包括鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，其化學(xué)名為6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羥基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羥酸乙酯鹽酸鹽-水合物 其中HO-表示羥基Br-表示溴CH3- 表示甲基CH2N(CH3)2- 表示二甲氨甲基-COOC2H5表示羥酸乙酯-CH2S- 表示硫甲基HCL表示鹽酸H2O表示水其特征在于在制備治療柯薩奇病毒B3(Coxsackievirus B3 Group，CVB3)、柯薩奇病毒B5(Coxsackievirus B5 Group，CVB5)、腺病毒(Adenovirus，AdV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncyntial virus，RSV)、鼻病毒(Rhinovirus，RV)感染的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療呼吸系統(tǒng)病毒感染藥物的用途。本發(fā)明提供的鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，其化學(xué)名為6－溴－4－(二甲氨甲基)－5－羥基－1－甲基－2－(苯硫甲基)－1H－吲哚－3－羥酸乙酯鹽酸鹽－水合物。本發(fā)明能降低柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染后小鼠的死亡率，以及小鼠體內(nèi)病毒滴度和血清中抗體水平；改善臨床上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎癥狀及體征的作用。
文檔編號A61P11/00GK1994299SQ20061012549
公開日2007年7月11日 申請日期2006年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月18日
發(fā)明者楊占秋, 羅凡, 鐘瓊, 王又又, 石麗橋, 肖紅, 季紅 申請人:武漢大學(xué)