專利名稱：作為Na⁺/K⁺-ATP酶抑制劑的丹酚酸B鹽的用途的制作方法
作為Na+/K+-ATP ,抑制劑的丹酚酸B鹽的用途技術(shù)領(lǐng)城本發(fā)明涉及一種丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、其醫(yī)藥上 町接受的鹽類或含有其的組合物的新用途，特別是有關(guān)于其作為抑制負(fù)責(zé) 細(xì)胞Na+ZK+主動(dòng)運(yùn)輸?shù)腘a+/K+-ATP酶的用途。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)上，各種充血性心衰竭、心因性休克及心律不齊的治療主要是利 用烏本苷(ouabain)、地高辛(digoxin)等強(qiáng)心配醣體制劑來治療。這類 強(qiáng)心劑的作用機(jī)制為抑制心肌細(xì)胞Na+/K+-ATP酶的活性，進(jìn)而抑制細(xì)胞 的>43+/1<:+主動(dòng)運(yùn)輸需伴隨的磷酸根水解，減少鈉、鉀離子通過心肌細(xì)胞， 使細(xì)胞內(nèi)的Na+濃度增高，導(dǎo)致升高鈉鈣交換效率并使內(nèi)流的鈣離子增多。 因此，可加強(qiáng)心肌收縮，達(dá)到強(qiáng)心的作用，并且可降低傳導(dǎo)速率及延長房 室結(jié)(AV node)的有效不反應(yīng)期。此外，近年來亦有報(bào)告顯示，強(qiáng)心配 醣體類藥物對腦中風(fēng)的局部缺血-再灌流現(xiàn)象有明顯幫助，其作用機(jī)制推 測亦與Na+/K+-ATP酵活性抑制作用有關(guān)。然而，由于強(qiáng)心配醣體具有抑 制Na+/K+-ATP酶的功能，直接影響細(xì)胞的NaVK+主動(dòng)運(yùn)輸，因此在急性 過量投藥后會(huì)導(dǎo)致低血鉀癥，引發(fā)心率不齊、心搏過速及心室纖維顫動(dòng)等 癥狀。而毛地黃的藥物治療最主要的問題，在于其具非常狹小的治療劑量 指數(shù)(therapeutic index)，因此藥物治療濃度與中毒時(shí)的血藥濃度并沒有 明顯的界線，其治療劑量通常因人而異。其中，老年人、心臟病或腎功能 不佳者，是中毒的高危險(xiǎn)群。因此，使用強(qiáng)心配醣體藥物時(shí)必須找出最適 當(dāng)?shù)膭┝?，否則 一不小心就會(huì)造成嚴(yán)重的中毒發(fā)生，甚至可能致命。丹參為中國傳統(tǒng)的活血化瘀藥物，神農(nóng)本草經(jīng)中將丹參列為"上品"， 其意為適合長期服用且無毒性作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)丹參中主要的有效 成分的一為丹酚酸B (Salvianolic acid B)或丹酚酸B鎂(magnesium lithospermate B、 magnesium tanshinoate B)， 為一種抗氧化劑，可促進(jìn)新 血管內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡，防止內(nèi)膜增厚。此外，丹參亦具有增加血紅細(xì)胞膜
表面電荷，防止血紅細(xì)胞聚集，降低血液粘滯度等保護(hù)心血管系統(tǒng)的作用。 因此，丹參目前被廣泛使用于一般保健及疾病治療上。發(fā)明內(nèi)客本發(fā)明公開一種丹酚酸B鹽作為細(xì)胞Na+/K+-ATP酶抑制劑的新用途， 解決傳統(tǒng)強(qiáng)心配醣體藥物的治療劑量指數(shù)狹小，容易造成中毒癥狀的問本發(fā)明還公開了丹酚酸B鹽在制備強(qiáng)心劑藥物中的用途。 本發(fā)明還公開了丹酚酸B鹽在制備抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡藥物中的用途。 本發(fā)明還公開了丹酚酸B鹽在制備抗缺氧藥物或保健品中的用途。 本發(fā)明還公開了丹酚酸B鹽在制備治療下述疾病的藥物中用途a) 充血性心臟衰弱；b) 心率不齊，包含心房纖維顫動(dòng)、心房撲動(dòng)、陣發(fā)性心室搏動(dòng)過速；c) 高血.壓d) 水腫；e) 冠心病，包含心絞痛、心肌梗塞；f) 中風(fēng)；以及 與上述疾病進(jìn)展有關(guān)的病癥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，對于包含丹酚酸B鹽的主體結(jié)構(gòu)或與 其結(jié)構(gòu)類似的、并具有相同效果的丹酚酸B鹽的異構(gòu)物、前體、衍生物、 或其藥學(xué)上可接受的鹽也包含在本發(fā)明中。依照本發(fā)明的較佳實(shí)施例，是以丹酚酸B鎂為例，分別公開了利用大 腦皮質(zhì)及心肌細(xì)胞膜粗提取物來測試丹酚酸B鹽抑制Na+/K+-ATP酶活性 的結(jié)果，其中，丹鼢酸B鎂之來源植物為丹參。隨著丹酚酸B鎂的劑量愈 高，測量到的磷酸根濃度愈低，顯示其抑制ATP水解的能力與丹酚酸B 鎂的劑量成正比。根據(jù)此成比例的結(jié)果可推定丹酚酸B鹽具有抑制細(xì)胞 NaVK+-ATP酶活性的作用，可作為Na+/K+-ATP酶抑制劑。此外，亦公開 了利用大腦皮質(zhì)提取物來測試添加金屬離子(以氯化鎂為例)對丹酚酸B 抑制Na+/K+-ATP酶活性的影響，隨著添加入丹酚酸B反應(yīng)混合物中的金 屬離子的劑量愈高，測量到的磷酸根濃度愈低，顯示其抑制ATP水解的能 力與加入丹酚酸B反應(yīng)混合物中的金屬離子的劑量成正比。即丹酚酸B結(jié) 構(gòu)中心需有金屬離子取代才具有抑制Na+/K+-ATP酶活性的效果。依照本 發(fā)明的另一較佳實(shí)施例，是以丹酚酸B鎂為例，公幵了各濃度下烏本苷 (ouabain)或丹酚酸B鎂對Na+/K+-ATP酶的抑制效率的差異。結(jié)果顯示， 丹酚酸B鹽與強(qiáng)心配醣體烏本苷對于細(xì)胞Na+/K+-ATP酶具有一致的抑制 效應(yīng)。即隨著^1礦/1^^1 酶抑制劑(丹酚酸B鎂或?yàn)醣拒?劑量愈高， 其抑制ATP水解的能力愈強(qiáng)。依照本發(fā)明的又一較佳實(shí)施例，是以丹酚酸B鎂為例，分別公開了低 劑量的丹酚酸B鹽對腦組織缺氧具有預(yù)防及延緩腦細(xì)胞死亡的效果。以及 在中風(fēng)模式下，低劑量的丹酚酸B鹽可有效降低腦細(xì)胞被破壞之程度及破 壞的體積，對于急性缺血性腦中風(fēng)引起的局部缺血-再灌流所造成之細(xì)胞死 亡有預(yù)防及治療的效果。由上述本發(fā)明較佳實(shí)施例可知，由丹酚酸B鹽制成的保健食品或醫(yī)藥 組合物可具有與強(qiáng)心配醣體等效的功能，在醫(yī)藥上可取代強(qiáng)心配醣體的強(qiáng)心、利尿、抗缺氧、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、預(yù)防及治療中風(fēng)的用途，卻不具 有強(qiáng)心配醣體使用上的容易發(fā)生中毒的危險(xiǎn)性。為了使本發(fā)明的目的及優(yōu)點(diǎn)更加容易了解，在下文中配合附圖及文字 敘述，說明本發(fā)明的實(shí)施例。


為讓本發(fā)明的上述和其它目的、特征、優(yōu)點(diǎn)與實(shí)施例能更明顯易懂，所附圖式的詳細(xì)說明如下圖1顯示不同濃度的丹酚酸B鎂對大鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞的Na+/K+-ATP 酶活性抑制效果；圖2為比較各濃度下烏本苷(ouabain)或丹酚酸B鎂對Na+/K+-ATP 酶的抑制效率的差異；圖3是丹酚酸B鎂與強(qiáng)心配醣體類的分子結(jié)構(gòu)的比較；圖4是利用大腦皮質(zhì)細(xì)胞膜粗提取物來測試丹酚酸B鎂抑制 NaVK+-ATP酶活性的結(jié)果；圖5是利用心肌細(xì)胞膜粗提取物來測試丹酚酸B鎂抑制Na+/K+-ATP
酶活性的結(jié)果圖6是利用丹酚酸B鎂進(jìn)行小鼠的亞硝酸鈉中毒存活時(shí)間的試驗(yàn) 圖7是丹酚酸B鎂應(yīng)用于腦部缺血-再灌流時(shí)對于細(xì)胞破壞的預(yù)防效 果試驗(yàn)；圖8是丹酚酸B鎂應(yīng)用于腦部缺血-再灌流時(shí)對于細(xì)胞破壞的治療效果試驗(yàn)o具體實(shí)施方式
如無特別說明，本發(fā)明實(shí)施例中所使用的材料均為市售購買，其中丹酚酸B鎂來源于嘉年生化產(chǎn)品有限公司(臺(tái)灣)，丹酚酸B來源于上海滬 云醫(yī)藥開發(fā)有限公司，烏本苷來源于Sigma chemical company。本發(fā)明公開了丹酚酸B鹽可作為細(xì)胞的Na+/K+-ATP酶抑制劑的新用 途，以丹酚酸B鎂為例，觀察不同濃度的丹酚酸B鎂對大鼠心肌細(xì)胞的 Na+/K+-ATP酶活性抑制效果，其實(shí)驗(yàn)操作步驟如下以三個(gè)月齡的雄性大鼠(Spraque-Dawley;Narll:SD)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并 飼養(yǎng)于不含病原體的環(huán)境下。飼養(yǎng)期間除提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專用的飼料 (Rodent Laboratory Chow 5001， Purina， MO)及自來水飲用外，并給予人 道的對待。最后，犧牲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，并于完全除血后直接取得其大腦皮質(zhì) (brain cortex)及心肌組織。接下來，于4'C下分離大鼠的腦^心肌細(xì)胞膜樣本。再將大鼠腦細(xì)胞 或心肌細(xì)胞懸浮于10到20倍體積的0.32 M蔗糖溶液中(含有5 mM 4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazineethanesulfonic acid (HEPES)及 1.0 mM EDTA， pH7.5)進(jìn)行勻漿。然后，此大腦皮質(zhì)細(xì)胞勻漿物或心肌細(xì)胞勻漿 物在離心力17000xg下離心30分鐘，以得到細(xì)胞膜粗提取物。接著，清洗細(xì)胞膜粗提取物二次，并再懸浮于0.32M蔗糖溶液中，用 以進(jìn)行由0.3、 0.8及1.0 mM所組成的連續(xù)蔗糖濃度梯度離心，并在離心 力63000x g下離心1小時(shí)。最后收集介于濃度梯度0.8與1.0 mM的區(qū)間 的細(xì)胞膜，并于2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行Na+/K+-ATP酶的酶活性分析。細(xì)胞的Na+/K+-ATP酶活性測量借助測定ATP水解產(chǎn)生的無機(jī)磷酸根 (Pi)的數(shù)量來測量細(xì)胞的Na+/K+-ATP酶活性。
首先，將商品化的^+/!^+-八1 酶(購自Sigma公司；來源為豬大腦 皮層)或自行純化的Na+/K+-ATP酶(來源為大鼠大腦皮質(zhì)或心肌細(xì)胞膜) 分別混入反應(yīng)混合物(3 mM ATP， 5 mM MgC12， 80 mM NaCl， 20 mM KC1， 40 mM Tris陽HCl， pH7.4)中。經(jīng)過15分鐘后，以200微升(u 1)的30% (W/V) 三氯醋酸(trichloroacetic acid)終止反應(yīng)。接著，于6000轉(zhuǎn)數(shù)(rpm)下離心約15分鐘后，取500ul的上清液， 以分光光度計(jì)來測量磷酸根(Pi)數(shù)量。Na+/K+-ATP酶的活性以每小時(shí)中 每毫克>^71(:+^?。棵缸饔孟滤坞x的磷酸根的微摩爾(ixmol)來表示。蛋白質(zhì)含量以一購自Sigma公司的Bradford protein assay kit來定量。 不同濃度下烏本苷(ouabain)或丹酚酸B鎂對Na+/K+-ATP酶的抑制效率， 在商品化的Na+/K+-ATP酶或自行純化的大鼠細(xì)胞Na+/K+-ATP酶混入反應(yīng) 混合物前10分鐘，于37'C條件下觀察。請參照圖1 (I),橫軸為加入反應(yīng)混合物的丹酚酸B鎂的濃度，縱軸 為磷酸根(Pi)的濃度。如圖1所示，隨著加入的丹酚酸B鎂劑量增加(由 Omg至iJ 10 mg)，所測到的磷酸根(Pi)濃度持續(xù)減少，顯示丹酚酸B鎂 劑量愈高，其抑制ATP水解的能力愈強(qiáng)。由該成比例的結(jié)果可推定丹酚酸 B鹽，特別是丹酚酸B鎂，具有抑制1^+/1^-八1 嗨活性的作用，可作為 Na+/K+-ATP酶抑制劑。再參照圖1 (II)，本實(shí)驗(yàn)以氯化鎂(MgCl2)為例，利用丹酚酸B外 加金屬離子，來觀察丹酚酸B結(jié)構(gòu)中心之金屬離子對抑制大腦皮質(zhì)提取物 之Na+/K+-ATP酶活性作用的影響。橫軸為丹酚酸B反應(yīng)混合物中加入的 氯化鎂(MgCl2)濃度，縱軸為磷酸根(Pi)的濃度。如圖1 (n)所示， 隨著丹酚酸B反應(yīng)混合物中加入的氯化鎂劑量增加(由0mM到5mM)， 所測到的磷酸根(Pi)濃度持續(xù)減少，顯示丹酚酸結(jié)構(gòu)中心取代的金屬離 子劑量愈高，其抑制ATP水解的能力愈強(qiáng)。由該成比例的結(jié)果證實(shí)丹酚酸 B結(jié)構(gòu)中心需有金屬離子取代才具有抑制Na+/K+-ATP酶活性的作用。此外，由圖1的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，來源植物為丹參之丹酚酸B鎂具有與強(qiáng)心 配醣體類似的作用機(jī)制，即抑制Na+/K+-ATP酶活性。因此，圖2為比較 各濃度下烏本苷(ouabain)或丹酚酸B鎂對Na+/K+-ATP酶的抑制效率的 差異。結(jié)果顯示，丹酚酸B鎂具有與強(qiáng)心配醣體烏本苷一致的抑制效應(yīng)，
即隨著Na+/K+-ATP酶抑制劑(丹酚酸B鎂或?yàn)醣拒?劑量愈髙，其抑制 ATP水解的能力愈強(qiáng)。請參照圖3，繪示丹酚酸B鹽與強(qiáng)心配醣體類的分子結(jié)構(gòu)比較圖。強(qiáng) 心配醣體式(I)化合物的結(jié)構(gòu)以固醇類的環(huán)戊氫菲環(huán)化合物及至少一個(gè)糖 基所構(gòu)成。丹酚酸B鹽式(II)化合物的結(jié)構(gòu)為以金屬離子-鎂(Mg)為 中心的結(jié)構(gòu)。根據(jù)圖2的結(jié)果，顯示丹酚酸B鎂對于Na+/K+-ATP酶活性 具有與強(qiáng)心配醣體烏本苷一致的抑制^應(yīng)，鑒于酶的活化借助鑰匙/鎖模式 (key and lock)，推定丹酚酸B鹽的結(jié)構(gòu)在Na+/K+-ATP酶水解ATP的機(jī) 制中扮演與強(qiáng)心配醣體結(jié)構(gòu)相同的角色，即利用形成相似的構(gòu)形或借助分 子間的引力使Na+/K+-ATP酶不活化。依照本發(fā)明的較佳實(shí)施例，丹酚酸B鹽式(II)化合物的中心離子可 為金屬離子，雖然在此是以鎂為例，作為丹酚酸B鹽式(II)化合物的中 心離子，但并非用以限定發(fā)明。此外丹酚酸B鹽式(II)化合物的官能基 支鏈R可以為-H、 -OH、或延伸為烷基、醣基或上述的任意組合。請參照圖4及圖5，利用不同器官的細(xì)胞膜粗提取物來測試丹酚酸B 鹽抑制Na+/K+-ATP酶活性的效果。圖4是以丹酚酸B鎂為例，利用大腦 皮質(zhì)細(xì)胞膜粗提取物來測試抑制Na+/K+-ATP酶活性的結(jié)果，其中橫軸為 加入反應(yīng)混合物的Na+/K+-ATP酶抑制劑(丹酚酸B鎂)的濃度，縱軸為 磷酸根(Pi)的濃度。結(jié)果如圖4所示，隨著Na+/K+-ATP酶抑制劑(丹 酚酸B鎂)劑量愈高，磷酸根的濃度愈低，顯示其抑制ATP水解的能力 與丹酚酸B鎂的劑量成正比。因此，丹酚酸B鹽特別是丹酚酸B鎂，具 有抑制大腦皮質(zhì)細(xì)胞膜的Na+/K+-ATP酶的能力。圖5是以丹酚酸B鎂為例，利用心肌細(xì)胞膜粗提取物來測試丹酚酸B 鹽抑制Na+/K+-ATP酶活性的結(jié)果，其中橫軸為加入反應(yīng)混合物的 Na+/K+-ATP酶抑制劑(丹酚酸B鎂)^J濃度，縱軸為磷酸根(Pi)的濃度。 結(jié)果呈現(xiàn)與圖4 一致的結(jié)果，隨著Na+/K+-ATP酶抑制劑(丹酚酸B鎂) 劑量愈高，磷酸根的濃度愈低，顯示其抑制ATP水解的能力與丹酚酸B 鎂的劑量成正比。因此，丹酚酸B鹽，特別是丹酚酸B鎂，具有抑制心肌 細(xì)胞膜的Na+/K+-ATP酶的能力。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明丹酚酸B鹽具有抑制心肌細(xì)胞膜Na+/K+-ATP
酶活性的作用，因而會(huì)產(chǎn)生減少鈉、鉀離子通過心肌細(xì)胞，并使內(nèi)流的鈣離子增多的生理效應(yīng)。因此，丹酚酸B鹽具有與強(qiáng)心配醣體相同的作用機(jī) 轉(zhuǎn)及效果，即加強(qiáng)心肌收縮，達(dá)到強(qiáng)心、利尿的用途。
此外，請參照圖6，是以丹酚酸B鎂為例，進(jìn)行小鼠的亞硝酸鈉中毒 存活實(shí)驗(yàn)，用以測試丹酚酸B鹽對腦組織缺氧的預(yù)防效果。亞硝酸鈉可使 正常二價(jià)鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)槿齼r(jià)鐵血紅蛋白，造成組織缺氧死亡。本實(shí)驗(yàn) 選用3 4周大(約20 22克)之小鼠，單一性別每組5只，按體重隨機(jī)分為 -個(gè)對照組及三個(gè)實(shí)驗(yàn)組。其中，第一組給予小鼠口服每公斤體重3毫克 的丹酚酸B鎂，第二組為9毫克/公斤體重，第三組為18毫克/公斤體重， 對照組則給予等體積之生理食鹽水。喂食七天后，于最后一次喂食后-小 時(shí)，將各組小鼠由腹腔注射亞硝酸鈉225毫克/公斤體重，立即計(jì)時(shí)，記錄 小鼠存活時(shí)間。
由圖6之結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，第一組(3毫克/公斤體重)之小 鼠存活時(shí)間約為對照組的兩倍(p0.05)，可證實(shí)丹酚酸B鎂對于腦部缺氧 時(shí)細(xì)胞存活具有顯著的幫助；此外，喂食9毫克/公斤體重(第二組)及18毫 克/公斤體重(第三組)亦具有延長存活之效果(p0.05)。因此由上述結(jié)果可 知，丹酚酸B鹽，特別是丹酚酸B鎂，對腦組織缺氧的具有預(yù)防及延緩腦 細(xì)胞死亡的效果。
參照圖7及圖8，是以丹酚酸B鎂為例，測試丹酚酸B鹽應(yīng)用于腦部 缺血時(shí)，對于細(xì)胞破壞的預(yù)防及治療效果試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)可用以模擬中風(fēng)時(shí) 腦部缺血的情況。以沙鼠(gerbil)進(jìn)行大腦缺血試驗(yàn)，將15 18只雄性沙鼠 (體重為60 85克)隨機(jī)分成三組，并以常規(guī)飼料喂食(op.， 20毫克/每公斤 體重/天)。喂食四天后，利用氫氯酸(chlorohydrate, 400毫克/每公斤體重) 以腹膜注射方式將沙鼠麻醉，于過程中以恒溫墊(CMA/150)維持其體溫為 37'C左右。接著延頸部中線切開，將右側(cè)頸動(dòng)脈露出并與迷走神經(jīng)千 (vago-sympathetic trunk)分開。沙鼠頭部則以位于水平線下方4厘米處的 nose bar固定于腦立體定位儀(stereotaxic frame; David Kopf， CA， USA)之 固定架上。之后在頸部中線切開后，將部分頭蓋骨移除以暴露出右側(cè)中大 腦動(dòng)脈(middle cerebral artery; MCA)，并利用8-0縫線結(jié)扎以阻塞血流。右 側(cè)總頸動(dòng)脈(right common carotid artery; CCA)及中大腦動(dòng)脈持續(xù)結(jié)扎60分 鐘以誘發(fā)局部大腦缺血(focal cerebral ischemia),并以激光多普勒血流計(jì) (Laser Doppler Blood Flow monitor)之激光探針(直徑0.8厘米)尖端放在接 近中大腦動(dòng)脈之腦皮層上，結(jié)扎后的中大腦動(dòng)脈血流量低于其原本血流量 之5。％。在血管結(jié)扎后5分鐘，大腦血流己達(dá)到其最低的程度，以確保在 整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間大腦缺血的狀態(tài)為可仿真為中風(fēng)之模式。之后再放開3小時(shí) 使大腦皮質(zhì)血液恢復(fù)流通，并以縫合器縫合切口。待其翻正反射(righting reflex)后，置于37°C保溫詞養(yǎng)籠24小時(shí)后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉并自左心室 快速灌注含2%等滲透壓肝素(heparin)的生理鹽水及 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)。接著，摘取大腦組織并切成5或 6片厚度為2毫米的冠狀切面，以供TTC染色。在暗室中將腦組織切片放 置于10Q/^的福爾馬林(formalin)緩沖液中并予以冷藏直到取出拍照。腦細(xì) 胞被破壞的體積之定量是將正常部分及被破壞區(qū)域的區(qū)域稱重，所有測量 結(jié)果則以統(tǒng)計(jì)軟件(ANOVA; Studenttest)分析，分析結(jié)果以P<0.05視為具 有統(tǒng)計(jì)上的顯著意義。在圖7之預(yù)防效果試驗(yàn)中，在進(jìn)行血管結(jié)扎實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前30分鐘，分 別以生理鹽水(對照組)或丹酚酸B鎂(3毫克/公斤體重或1.5毫克/公斤體重) 以腹腔注射方式給予各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。而在圖8之治療效果試驗(yàn)中，于血管 結(jié)扎60分鐘并在松脫結(jié)扎恢復(fù)血液再灌流后30分鐘時(shí)，分別以生理鹽水 (對照組)或丹酚酸B鎂(3毫克/公斤體重或0.3毫克/公斤體重)以強(qiáng)迫灌食 方式給予各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。如圖7預(yù)防效果結(jié)果所示，與對釋組相較，于大腦缺血試驗(yàn)后30分 鐘給予實(shí)驗(yàn)組注射3毫克/公斤之丹酚酸B鎂，可有效降低腦細(xì)胞被破壞之 程度(*代表具有統(tǒng)計(jì)上之顯著差異，p<0.01)。另一組為給予1.5毫克/公斤 之丹酚酸B鎂，亦可有效降低腦細(xì)胞被破壞之程度。請參照圖8，為丹酚 酸B鎂應(yīng)用于腦部缺血時(shí)，對于細(xì)胞破壞的治療效果試驗(yàn)。結(jié)果如圖8所 示，與對照組相比，于大腦缺血試驗(yàn)后30分鐘給予實(shí)驗(yàn)組口服36毫克/公 斤之丹酚酸B鎂，可有效降低腦細(xì)胞被破壞之體積(*代表具有統(tǒng)計(jì)上之顯 著差異，p<0.01)。另一組為給予0.3毫克/公斤之丹酚酸B鎂，亦達(dá)相同有 效降低腦細(xì)胞被破壞之程度。由上述結(jié)果可知，丹酚酸B鹽，特別是丹酚酸B鎂，具有降低腦部缺 血時(shí)腦細(xì)胞破壞的程度，可取代強(qiáng)心配醣體之預(yù)防或治療中風(fēng)作用，提供更安全有效的中風(fēng)預(yù)防/治療藥物或保健食品，亦揭露了丹酚酸B鎂之來源 植物丹參用于預(yù)防及治療中風(fēng)之用途。依照上述，丹酚酸B鹽，特別是丹酚酸B鎂，可用于治療或預(yù)防下列 的疾病，例如充血性心臟衰弱、心率不齊、心房纖維顫動(dòng)心房撲動(dòng)、陣發(fā) 性上心室搏動(dòng)過速、高血壓、水腫、中風(fēng)以及與上述疾病進(jìn)展有關(guān)的病癥。此外，本發(fā)明公開丹酚酸B鹽具有與強(qiáng)心配醣體等效的用途，可于有 效劑量下達(dá)到強(qiáng)心、利尿、抗缺氧、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、預(yù)防及治療中風(fēng) 引起的局部缺血現(xiàn)象的用途，因此可提供取代強(qiáng)心配醣體的另一選擇，發(fā) 展為保健食品或藥物。依照本發(fā)明的較佳實(shí)施例，丹酚酸B鹽及其衍生物的結(jié)構(gòu)可取代強(qiáng)心 配醣體或其它固醇類藥物的環(huán)戊氫菲環(huán)化合物結(jié)構(gòu)，達(dá)到等效的作用。其 中，丹酚酸B鎂及其衍生物包含其前體或其衍生物、前體的異構(gòu)物，及其 醫(yī)藥上可接受的鹽類。依照本發(fā)明的較佳實(shí)施例，組合物可以丹酚酸B鹽，例如丹酚酸B鎂 為其有效成分，用于抑制>1&+^+-八1 酶活性的用途。丹酚酸B鹽于此組 合物中的形式可包含其醫(yī)藥可接受的鹽類、溶劑化物、其鹽類的溶劑化物、 多晶形或前藥。此外，以丹酚酸B鹽，例如丹酚酸B鎂為有效成分制成的 組合物可搭配食品或醫(yī)藥上容許的載體，例如醫(yī)藥可接受性輔劑、稀釋劑、 賦形劑或上述的任意組合。由上述本發(fā)明較佳實(shí)施例可知，由丹酚酸B鹽，例如丹酚酸B鎂制成 的保健食品或醫(yī)藥組合物可具有與強(qiáng)心配醣體等效的功能，可于有效劑量 下達(dá)到抑制細(xì)胞Na+/K+AT-P酶活性的作用，在醫(yī)藥上可取代強(qiáng)心配醣體 的強(qiáng)心、利尿、預(yù)防及治療腦中風(fēng)引起的局部缺血現(xiàn)象的用途，卻不具有 強(qiáng)心配醣體使用上的容易發(fā)生中毒的危險(xiǎn)性。雖然本發(fā)明已以一較佳實(shí)施例公開如上，然其并非用以限定本發(fā)明， 任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和范圍內(nèi)，當(dāng)可作各種的 改變與潤飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)以權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽作為細(xì)胞Na+/K+-ATP酶抑制劑的用途。
2. 權(quán)利要求1所述的丹酚酸B鹽，其特征在于具有如下的基本結(jié)構(gòu):其中該R為-H、 -OH、烷基、醣基或上述的任意組合。
3. —種用于抑制細(xì)胞1^+/^^1 酶的組合物，其含有丹酚酸B鹽、 或?qū)嵁悩?gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的鹽。
4. 權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受 的載體、輔劑、稀釋劑和/或賦形劑。
5. 權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于所述組合物為藥物組合物 或保健食品。
6. 丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的 鹽在制備強(qiáng)心劑藥物中用途。
7. 丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的 鹽在制備抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡藥物或保健品中用途。
8. 丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的 鹽在制備抗缺氧藥物或保健品中用途。
9. 丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、或其藥學(xué)上可接受的 鹽在制備治療下述疾病的藥物中用途a) 充血性心臟衰弱；b) 心率不齊，包含心房纖維顫動(dòng)、心房撲動(dòng)、陣發(fā)性心室搏動(dòng)過速; C)高血壓；d)水腫； e) 冠心病，包含心絞痛、心肌梗皇；f) 中風(fēng)以及 與上述疾病進(jìn)展有關(guān)的病癥。
10. 權(quán)利要求3、 6、 7、 8、 9所述的丹酚酸B鹽，其特征在于為含鎂 之丹酚酸B鹽。
11. 一種利用環(huán)戊氫菲環(huán)化合物性質(zhì)的藥物的衍生結(jié)構(gòu)，其特征在于 用利用如權(quán)利要求2所示的化合物來取代具有環(huán)戊氫菲環(huán)化合物性質(zhì)的藥 物的環(huán)戊氫菲環(huán)結(jié)構(gòu)。
全文摘要
一種丹酚酸B鹽、或其異構(gòu)物、前體、衍生物、其醫(yī)藥上可接受的鹽類或含有其的組合物作為Na⁺/K⁺-ATP酶抑制劑的用途，借助一種常用之丹酚酸B鹽--丹酚酸B鎂，進(jìn)行Na⁺/K⁺-ATP酶活性測量，證實(shí)丹酚酸B鎂的結(jié)構(gòu)具備可取代強(qiáng)心配醣體的固醇類藥物的環(huán)戊氫菲環(huán)化合物的性質(zhì)。此外，腦部缺血試驗(yàn)亦證實(shí)丹酚酸B鎂可有效減少腦細(xì)胞被破壞的程度。上述之功效皆由于丹酚酸B鹽可抑制Na⁺/K⁺ATP酶主動(dòng)運(yùn)輸?shù)牧姿岣?，以降低?xì)胞的Na⁺/K⁺交換，并使細(xì)胞內(nèi)的鈣離子增加，而產(chǎn)生強(qiáng)心、利尿、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞凋亡、治療心臟衰弱、預(yù)防及治療中風(fēng)等病癥的用途。
文檔編號A61K31/343GK101134029SQ20061011236
公開日2008年3月5日 申請日期2006年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月31日
發(fā)明者曾志正, 陳志明, 陳怡菁, 靳子蓉 申請人:杰昇國際科技股份有限公司