專利名稱：用于殺菌、抑菌和抗炎的組合物及其方法
技術領域：
本發(fā)明涉及殺菌或抑菌方法。本發(fā)明還涉及治療因巨噬細胞產生的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)或單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)引起的炎癥的方法。
背景技術：
90％的青少年都會長痤瘡，但成年人在20-30歲的短期間內也會長痤瘡。痤瘡(或尋常痤瘡)是皮脂腺和毛囊處發(fā)生的一種慢性炎癥或疾病，其發(fā)病原因包括皮脂過度分泌、毛囊表皮異常角度化、寄居在皮膚上的厭氧菌——痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)過度繁殖及其他原因。痤瘡一般長在臉上、胸部、背部、頸部和上臂等皮膚最露的部位，癥狀為黑頭粉刺、膿皰、狼瘡、小結或疤痕等。
全世界千百萬人深受痤瘡之苦。目前使用的治療有各種缺點，包括患者產生不良反應(如起泡、感光過敏、過敏反應)、沒有效果或療效甚微(例如微生物對治療劑產生抗性)。因此，仍舊需要提供一種用于治療或控制痤瘡特別是尋常痤瘡的可替代的治療手段。
上述角質嵌塞中因細菌繁殖導致毛囊破裂，這時表現(xiàn)為膿皰、丘疹、囊腫和小結癥狀的疾病發(fā)炎期開始出現(xiàn)。盡管已使用了許多不同方法來治療這種困擾，但沒有一種方法普遍有效，而且大多都有不良副作用。
右美沙芬(DM，(+)-3-甲氧基-17-甲基-9a，13a，14a-嗎啡喃)為一種廣泛使用的非處方鎮(zhèn)咳藥，是N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)受體的非競爭性拮抗劑，可預防Hcy(高半胱氨酸)及其代謝物引起的不良反應。DM——阿片激動劑左啡諾的右旋異構體，不具有和阿片劑相關的鎮(zhèn)痛或鎮(zhèn)靜效果。DM作為一種NMDA受體的拮抗劑，可抑制由NMDA受體介導的神經沖動和神經信號的傳導。另外，據(jù)報道DM還可抑制神經元鈣通道的活性。
DM是一種鎮(zhèn)咳劑，用于治療和緩解流感或普通感冒等上呼吸疾病引起的咳嗽癥狀。商業(yè)用的DM為DM的氫溴酸鹽形式，即DM-HBr(dexromethorphan hydrobromide)。該鹽在消化液中易于溶解，其中DM進入血流。體內會立即對該藥物進行生物修飾和/或清除。對于體內速釋藥物，其使用劑量為每4-6小時給藥約15-30mg。
DM是一種人工合成的阿片類制劑。DM氫溴酸一般作為藥物使用，不過并不排除可使用DM的其他鹽類。美國第2,676,177號專利(Schnider等)和Hafliger等人，Helv.Chil.Acta 39，19562053中公開了(+)-3-甲氧基-17-甲基-9a，13a，14a-嗎啡喃的制備方法。
已知DM可用于冷凝膠繃帶透皮給藥，但不是作為鎮(zhèn)咳劑使用(美國專利5,260,066號)。
右美沙芬(DM)廣泛用作咳嗽糖漿，已經證實DM在人體內非常安全，足以作為非處方藥使用。單獨或者和奎尼丁一起口服給藥時其耐受性很好，每天可高達120毫克(mg)，而且當給藥劑量較小時(如30mg/天)即可觀察到有益的療效(參見美國專利5,206,248號)。
DM是一種較弱的非競爭性NMDA受體拮抗劑，以中高親和力與該受體復合物的苯環(huán)己哌啶位點結合。但是，DM另外具有獨特的藥理學性質。結合研究表明，它是一種在δ1位點有高親和力的配基，最初有人提出將它作為拮抗劑，但最近則認為是一種激動劑(Maurice et.al.，Brain Res.Rev.，2001；37116-32)。δ配基還可調節(jié)NMDA的反應。
Chien-Chuan Wang等人使用LPS誘導的大鼠內毒素血癥模型進行研究。在這項研究中，他們檢測敗血癥中細胞活素或NO產量減少是否與DM對內毒素血癥動物的有益療效有關。結果表明DM抑制TNF-α(因此間接抑制了IL-10產量)、NO和過氧化物陰離子，從而減緩了有害影響的發(fā)展(包括循環(huán)衰竭和死亡)。結果表明，DM具有有益療效，有望開發(fā)用于治療敗血癥患者(Wang et al.，J.Biomed Sci，2004；11739-747)。
納絡酮(Naloxone，商品名為Narcan)是一種用于抑制因過量服用海洛因或嗎啡等阿片制劑所造成的有害影響的藥物。納絡酮(Naloxone)已經被確定作為治療海洛因成癮的急救藥盒成分，結果顯示其可減少死亡率。該藥物還可抑制機體自然產生的內啡肽的鎮(zhèn)痛作用。原因可能是這些內啡肽對相同的阿片受體起作用。
美國專利第5,366,980號公開了一種治療皮炎特別是對非處方藥治療反應差的嚴重皮炎患者的方法。使用通常在止咳糖漿中作為鎮(zhèn)咳劑的DM治療這些病人。如果病人是所謂的“快代謝者″(extensive metabolizer)，可合用抗氧化藥物(如奎尼丁)，來抑制異喹胍(debrisoquin)羥化酶的DM降解活性，其中異喹胍羥化酶是一種會快速將DM轉化成其代謝產物右啡烷的酶。結果顯示，上述治療可高效治療嚴重皮炎，多數(shù)病人對上述藥物組合物不會產生明顯的不良副作用。
敲除小鼠的使用已經暗示，動脈粥樣硬化癥中，細胞活素趨化因子(化學激素)和單核細胞趨化蛋白(MCP-1)可吸引、募集巨噬細胞。與動脈粥樣硬化危險因素有關的巨噬細胞活化刺激物包括氧化的低密度脂蛋白(oxLDL，′壞膽固醇′)、糖尿病晚期糖基化終產物(AGEs)、血管緊張素II和內皮素。大量研究工作已闡明，oxLDL通過巨噬細胞清道夫受體(MSRs)，特別是MSRA和CD36，激活巨噬細胞。活化的巨噬細胞表達可殺傷細胞并降解細胞外基質的效應分子。這些分子包括Fas-L和一氧化氮(NO)。巨噬細胞NO得自高輸出量可誘導性一氧化氮合酶(iNOS)途徑，并上調血管平滑肌(VSMC)細胞表面Fas，促使它們凋亡?；罨木奘杉毎杀磉_與細胞毒性T-淋巴細胞和天然殺傷細胞類似的表面Fas-L。因為VSMCs可提高斑塊穩(wěn)定性，所以VSMC凋亡也能促進斑塊破裂。巨噬細胞表達多種金屬蛋白酶(如基質裂解素)和絲氨酸蛋白酶(如尿激酶)，這些酶可降解細胞外基質，削弱斑塊穩(wěn)定性并使其易于破裂。
巨噬細胞還可分泌大量其他效應物，包括活性氧簇(reactive oxygenspecies)、二十烷類(eicosanoid)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1(IL-1)和白細胞介素-6(IL-6)。來源于巨噬細胞的轉化生長因子β可促進組織纖維化?，F(xiàn)有的心血管治療藥物包括血管緊張素II受體拮抗劑和血管緊張素轉換酶抑制劑、阿司匹林，特別是抑制素等的膽固醇還原劑，可抑制巨噬細胞。NO供體與巨噬細胞的相互作用和凋亡很復雜，且具有雙重功能。傳統(tǒng)的抗炎劑，如糖皮質激素和環(huán)磷酰胺，都有很嚴重的副作用并且可能不太適用。

發(fā)明內容
發(fā)明概要本發(fā)明提供一種化合物用于治療細菌感染性疾病的用途。
本發(fā)明另提供一種NADPH氧化酶抑制劑用于治療因抑制巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6或MCP-1而引起的炎癥的用途。
本發(fā)明還提供包含NADPH氧化酶抑制劑和殺菌化合物的組合物。
發(fā)明詳述多數(shù)細菌感染性疾病或失調都涉及病原體的大量繁殖和例如發(fā)炎的不良副作用。雖然目前已有許多可殺死病原體或抑制病原體生長的抗生素及某些炎癥治療藥物，但是一些疑難病如痤瘡，并不能獲得好的治療效果。
本發(fā)明顯示，取代的嗎啡喃(如右美沙芬)對細菌(如痤瘡丙酸桿菌)有殺菌和抑菌活性。
因此，本發(fā)明涉及一種結構通式I或結構通式II的化合物或其藥用鹽或類似物用于治療細菌感染性疾病的用途， 或 其中R1是C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基、或C2-6烯烴，R2為H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴。
結構通式I的優(yōu)選鹽是右美沙芬氫溴酸鹽或右美沙芬磷酸鹽。結構通式II的優(yōu)選化合物是17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。結構通式I的優(yōu)選化合物是(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)。大多數(shù)可使人上癮的、有鎮(zhèn)靜作用的阿片制劑，如嗎啡、可待因和海洛因，都是左旋立體異構體(它們在所謂左手方向使偏振光旋轉)。它們都有四個被稱為“嗎啡喃″結構的分子環(huán)構型。許多嗎啡的右旋類似物并不像左旋化合物那樣使人上癮。一些右旋類似物，包括美沙芬和右啡烷，都是嗎啡喃結構的對映異構體。這些對映異構體中，從第9和13位C原子延伸出的環(huán)和上述結構中所畫方向相反。
本發(fā)明還涉及一種NADPH氧化酶抑制劑用于治療因抑制巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6或MCP-1而引起的炎癥的用途。
根據(jù)本發(fā)明，其中的感染性細菌為革蘭氏陽性或革蘭氏陰性菌。丙酸桿菌(Propionibacterium)是生長緩慢、不形成孢子的革蘭氏陽性厭氧菌。它們可能是桿狀或分支的，并可能單個、成對或成群出現(xiàn)。一般分解葡萄糖，產生乳酸、丙酸和醋酸。痤瘡丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)是寄居在成人皮膚內的革蘭氏陽性菌。雖然它與痤瘡形成有關，但一般來說它是作為無害的共生生物寄居在皮脂囊內。它還與內心膜炎、角膜潰瘍等其他疾病有關。但是，脆弱類桿菌(Bacteroides fragilis，為革蘭氏陰性桿菌)約占人體內正常菌群的1％-2％。這些細菌常常與動物和人的腸道外感染，如膿腫和軟組織感染以及腹瀉性疾病有關。所以，感染性細菌的較佳實例是痤瘡丙酸桿菌和脆弱類桿菌。感染性細菌的最佳實例為引起痤瘡的痤瘡丙酸桿菌。
單一劑量的藥物組合物含有至少一種治療有效量的活性化合物(即結構通式I的化合物或其藥用鹽)，最好由一種或多種藥物劑量單位組成。所選劑量可按已知或適當?shù)慕o藥方法給需要上述治療的哺乳動物如病人投用治療有效量的結構通式I的化合物或其藥用鹽或其類似物，所說的給藥方法包括局部施用(如制成軟劑或軟膏)、口服、直腸施用(如制成栓劑)、腸道外注射、或者陰道內、鼻內、支氣管內、耳內或眼內輸注。優(yōu)選實例是將上述化合物用于被細菌感染的哺乳動物的皮膚或粘膜表面。最優(yōu)選的哺乳動物實例是病人。
“治療有效量″是指給需要治療的哺乳動物投藥時，本發(fā)明的化合物的用量足以通過抑制細菌活性達到緩解疾病狀況的治療效果。本發(fā)明化合物達到治療效果的使用量將根據(jù)所使用的具體化合物、疾病狀況及其嚴重程度、待治療的哺乳動物的特性等因素的不同由醫(yī)生按常規(guī)確定。
給需要治療的病人投用上述化合物的有效量一般為10000ppm-1ppm，優(yōu)選為5000pm-1ppm，更優(yōu)選為1000ppm-1ppm，最優(yōu)選為1ppm。
本文使用的術語“藥用鹽″是指藥物上可接受的并具有所需的藥理學特性的任何鹽。這些鹽包括由無機或有機酸，或無機或有機堿，包括氨基酸衍生的，沒有任何毒性或不良副作用的鹽。適當?shù)臒o機鹽包括與堿性金屬，如納和鉀、鎂、鈣和鋁形成的鹽。適當?shù)挠袡C鹽包括與有機堿，如氨基，又如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等形成的鹽。這些鹽還包括與無機鹽(如鹽酸、溴酸)與有機酸(如醋酸、檸檬酸、馬來酸，烷烴與芳烴磺酸，如甲基磺酸、苯磺酸、磺酸和磷酸形成的酸加成鹽。存在兩個酸性基團時，藥用鹽可以是單酸單鹽或二鹽；同樣，當存在兩個以上酸性基團時，其中一些或全部基團可以成鹽。
已經發(fā)現(xiàn)有使用NADPH氧化酶抑制劑來治療因抑制巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6或MCP-1而引起的炎癥的先例。
本文使用的術語“NADPH氧化酶抑制劑″被限定為包含所有的化合物，包括該化合物的藥用鹽、其衍生物、其二聚體及其可被代謝轉換成NADPH氧化酶或突發(fā)性氧化抑制劑的前體藥物。只要安全有效，任何的NADPH氧化酶抑制劑都可以在本發(fā)明的方法中使用。這類化合物的適當實例包括公開號為WO97/19679的國際專利申請和美國第6090851號專利中提到的化合物。優(yōu)選的NADPH氧化酶抑制劑為結構通式I或II的化合物或其藥用鹽或類似物
或 其中R1是C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基、或C2-6烯烴，以及R2是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴。
更優(yōu)選的NADPH氧化酶抑制劑為(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)、17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。最優(yōu)選的NADPH氧化酶抑制劑是右美沙芬氫溴酸鹽或右美沙芬磷酸鹽。
巨噬細胞的主要作用是清除病原體和壞死細胞。后一功能在慢性炎癥中更為重要。巨噬細胞還將攝入的、和MHC II類分子結合的病原體片段(稱為抗原)呈遞到其細胞膜上。輔助性T細胞識別該抗原后，釋放淋巴因子并將此信息傳遞至B細胞。之后B細胞產生和釋放抗該特定抗原即上述病原體的特異抗體。因為巨噬細胞特別受到帶抗體的細胞的吸引，所以它又開始發(fā)揮作用。
巨噬細胞活化是一個改變了其形態(tài)和功能活性，使其變成活躍的吞噬細胞的過程。該活化過程由淋巴因子，如巨噬細胞活化因子(maf)與巨噬細胞移動抑制因子(mmif)、免疫復合體、c3b和各種多肽、多糖以及免疫佐劑啟動。巨噬細胞集落刺激因子是使群落化細胞系增殖并成熟為巨噬細胞的糖蛋白生長因子。
由于巨噬細胞具有吞噬作用，所以它們與許多免疫系統(tǒng)的疾病有關。例如，它們參與可能由大量疾病引起的肉芽腫和炎性病灶的形成。
已經闡述了一些罕見的，由無效的吞噬作用和巨噬細胞功能導致的疾病。巨噬細胞功能的異?；罨c自體免疫疾病以及慢性或急性炎性過程有關。
多形核嗜中性白細胞(PMNs)在炎癥中發(fā)揮主要作用。它們是抵御感染性微生物入侵的第一防線。PMNs所包含的含有蛋白水解酶和其他細胞毒性酶的微粒用于這一目的。除了釋放酶之外，PMNs還有吞噬和將氧轉化成高活性氧簇(ROS)的功能。吞噬后，被攝入的微生物在吞噬體內受酶活性與ROS產物的聯(lián)合作用而被殺死。盡管PMNs刺激形成ROS是對宿主有益的生理反應，但在許多炎癥狀態(tài)下也可能是有害的，其中這些基團有造成過多組織損傷的危險。所以，目前正在尋找一種抗炎化合物，它能在不影響PMN的其它殺傷能力前提下阻止這種有害ROS的產生。
PMNs控制微生物的一種機理是突發(fā)性呼吸。依靠這種機理，分子氧被稱為NADPH氧化酶的多成分酶轉化成過氧化物陰離子。吞噬過程中，NADPH氧化酶聚集在吞噬體膜上，過氧化物陰離子和其他ROS聚集在吞噬體內緊靠被攝入的微生物。
令人驚訝的是，一些NADPH氧化酶抑制劑(如右美沙芬)不僅表現(xiàn)出抗炎活性，而且具有殺菌或抑菌活性。這種作用對治療痤瘡或其他皮膚或粘膜表面是特別重要和有用的。
因此本發(fā)明提供一種組合物，它包括NADPH氧化酶抑制劑和結構通式I或II的化合物或其藥用鹽或類似物 或 其中R1為C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基，或C2-6烯烴，R2為H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴，以及藥用載體。
在一優(yōu)選實施例中，NADPH氧化酶抑制劑和結構通式I的化合物都是(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)、17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。
本發(fā)明的組合物可以制成軟膏、軟劑、洗劑、礦物油、化妝品、洗發(fā)水、止癢軟膏、皮膚藥膏，或其它經表皮吸收或透皮給藥的劑型。
本發(fā)明可用于選自切口、撕裂傷、擦傷、刺傷、水泡、皮膚裂傷、供體或移植部位、切割傷、灼傷或輻射傷的創(chuàng)傷愈合。


圖1顯示右美沙芬治療對LPS誘導的巨噬細胞釋放TNF-α(A)和IL-6(B)的影響。THP-1細胞培養(yǎng)物用所示濃度的右美沙芬預處理1小時，然后再用100ng/ml LPS刺激。24小時后收獲上清液，用來檢測TNF-α和IL-6。結果以3次實驗的平均值±SD表示。**p＜0.01和***p＜0.001是與LPS處理后的培養(yǎng)物進行比較。
圖2顯示納絡酮(Naloxone)治療對LPS誘導的巨噬細胞經釋放TNF-α(A)、IL-6(B)和MCP-1(C)的影響。
具體實施例方式
以下實施例是非限制性的，僅作為本發(fā)明各個方面及特征的典型實例。
實施例1DM對痤瘡丙酸桿菌(革蘭氏陽性厭氧菌)的抗菌作用制備DM貯備液500,000ppm(50％)。將0.25g DM加到250μl DMSO中，攪拌至充分混勻。然后將500,000ppm DM進行系列稀釋。
離心分離RCM(強化梭菌培養(yǎng)基)中培養(yǎng)的5ml痤瘡丙酸桿菌培養(yǎng)物。用培養(yǎng)基20倍稀釋，將細菌細胞濃度調節(jié)到大約OD595＝0.1×106CFU/ml。取等量的200μl含細菌細胞的培養(yǎng)基加到96孔板的每個孔中。將含有細菌細胞的培養(yǎng)基與2μl DM混和，各濃度三份樣品。細菌在無氧條件下37℃培養(yǎng)96小時，然后測定OD595。MIC是指足以抑制細菌生長(如生長抑制)的最低抗菌劑濃度。
將0.1ml OD595值約為0.1×106CFU/ml的含細菌細胞的培養(yǎng)基鋪敷在RCM瓊脂平板上。覆蓋0.8cm濾紙，然后將20μl DM滴在濾紙上。細菌在無氧條件下37℃培養(yǎng)96小時，然后測定抑菌圈大小。
結果表1痤瘡丙酸桿菌的MIC試驗(最小抑制濃度試驗，試驗的DM單位以ppm和百分比％表示)(+生長抑制；-無生長抑制)

表2DM圓盤擴散對厭氧菌的生長抑制痤瘡丙酸桿菌菌苔在無氧條件下37℃培養(yǎng)96小時

實施例2DM對脆弱類桿菌(革蘭氏陰性厭氧菌)的抗菌作用脆弱類桿菌在硫代硫酸鹽肉湯中無氧生長18-24小時后，用于配制Mac Faland 0.5細菌細胞懸浮液。用無氧的硫代硫酸鹽肉湯稀釋0.5g/mlDMSO貯備液。將1000μl無氧的硫代硫酸鹽肉湯加到1000μl DM中，按1∶1比例稀釋，然后放到無氧溫箱中培養(yǎng)24小時。
表3脆弱類桿菌的MIC試驗(最小抑制濃度試驗，試驗的DM單位以ppm和百分比％表示)(+生長抑制；-無生長抑制)

“陰性對照″是指含細菌的硫代硫酸鹽肉湯中沒有加DM。
實施例3DM對革蘭氏陽性需氧菌大腸桿菌的抗菌作用用于抗微生物圓盤擴散敏感性試驗的基質由Mueller Hinton II瓊脂(Becton，Dickinson and Company，F(xiàn)rance)制成。
在1升雙蒸水中懸浮38g Mueller Hinton II瓊脂粉來制備MuellerHinton II瓊脂。將上述瓊脂在121℃高壓滅菌15分鐘。然后倒入每個瓊脂平板中，等待凝固。將100μl含1×105CFU大腸桿菌的培養(yǎng)基平鋪在瓊脂板上，培養(yǎng)96小時。
表4DM圓盤擴散對革蘭氏陽性需氧菌的生長抑制大腸桿菌菌苔37℃培養(yǎng)96小時。

實施例4DM對革蘭氏陽性細菌金黃色葡萄球菌的抗菌作用用于抗微生物圓盤擴散敏感性試驗的基質由Mueller Hinton II瓊脂(Becton，Dickinson and Company，F(xiàn)rance)制成。
在1升雙蒸水中懸浮38g瓊脂粉以制備Mueller Hinton II瓊脂。將上述瓊脂在121℃高壓滅菌15分鐘。然后倒入每個瓊脂平板中，等待凝固。將100μl含1×105CFU金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基平鋪在瓊脂板上，培養(yǎng)96小時。
表5DM圓盤擴散對需氧菌的生長抑制金黃色葡萄球菌菌苔37℃培養(yǎng)96小時。

實施例5方法和結果培養(yǎng)單核細胞THP-1并使其分化成巨噬細胞。用各種濃度的右美沙芬或納洛酮將這些巨噬細胞預處理1小時，隨后加入脂多糖(LPS)培養(yǎng)24小時。LPS刺激之后，可見經右美沙芬或納洛酮預處理的含THP-1細胞的培養(yǎng)基中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的濃度明顯降低。
材料制備RPMI 1640培養(yǎng)基，佛潑醇-12-肉豆蔻酸-13-乙酸酯(PMA)、LPS(Escherichia coli 0111B4)和納洛酮均購自Sigma。人單核細胞系THP-1購自臺灣Hsin Chu食品工業(yè)研究與發(fā)展中心。培養(yǎng)基中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的水平用基于ELISA試劑盒(購自R&D Systems(Minneapolis，MN，USA))的單克隆抗體檢測，所有動物實驗都得到動物護理和使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)的批準。
細胞培養(yǎng)使THP-1細胞在含10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基、5％CO2和37℃條件下生長。培養(yǎng)物經用100nM PMA處理24小時后，細胞分化成巨噬細胞。向組織培養(yǎng)板的各孔內加入0.5mL細胞懸浮液(5×105)。用無菌水溶解LPS，分成多份儲存于-70℃下。在處理組中，THP-1細胞培養(yǎng)物用各種濃度的右美沙芬或納洛酮預處理1小時，然后用10μg/mL LPS處理達到24小時。在對照組中，THP-1細胞培養(yǎng)物只用10μg/mL LPS處理24小時。收獲上清液。用ELISA試劑盒檢測上清液中的TNF-α、IL-6和MCP-1水平。
DM對LPS誘導的巨噬細胞激活的影響少于0.01μM的右美沙芬即可抑制炎性反應。在右美沙芬存在下，用LPS(1Unit/ml)處理THP-1細胞24小時，然后用ELISA試劑盒檢測釋放到培養(yǎng)基中的TNF-α和IL-6(圖1)。圖1顯示右美沙芬處理對LPS誘導的巨噬細胞TNF-α(A)和IL-6(B)釋放的影響。THP-1細胞培養(yǎng)物在用100ng/ml LPS刺激之前，先經所示濃度的右美沙芬預處理1小時。24小時后收獲上清液以檢測TNF-α和IL-6。結果以3次實驗的平均值±SD表示。**p＜0.01和***p＜0.001是與LPS處理后的培養(yǎng)物進行比較。
納洛酮對LPS誘導的巨噬細胞活化的影響納絡酮(Naloxone)處理對LPS誘導的巨噬細胞TNF-α(A)、IL-6(B)和MCP-1(C)釋放的影響。THP-1細胞培養(yǎng)物在用100ng/ml LPS刺激之前，先經所示濃度的右美沙芬預處理1小時。24小時后收獲上清液以檢測TNF-α和IL-6。結果以3次實驗的平均值±SD表示。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001是與LPS處理后的培養(yǎng)物進行比較。
所屬領域的技術人員很容易理解，本發(fā)明適于達到所提到的及固有的目的，并獲得預期的結果和有益效果。細胞系、動物及其制備方法只是作為優(yōu)選實施例給出，而不構成對本發(fā)明范圍的限制。所屬領域的技術人員會想到變更及其他應用。這些變更均包含于本發(fā)明的精神內，受權利要求范圍的限定。
顯而易見，在不脫離本發(fā)明范圍和精神前提下，所屬領域的技術人員對本文公開的發(fā)明可能作出各種不同替換和變更。
本說明書提到的所有專利和出版物代表了本發(fā)明所屬領域普通技術人員的水平。本文中提到的所有專利和出版物均被列為參考文獻。
可以在缺少其中并未特別公開的任一要素或多個要素、任一限制或多個限制的情況下操作本文舉例描述的發(fā)明。文中所用的術語或表述是說明性的、而非限制性的，并非想要使用這些術語和表述將任何與其所顯示、描述的特征等同物或部分等同物排除在外。但是應認識到，在本發(fā)明權利要求范圍內可能做出各種變更。因此，應該明白，盡管本發(fā)明通過優(yōu)選實施例和可選特征作了特定的公開，但是所屬領域的技術人員可能會對其作出變更和改動，而這些變更和改動應認為是在權利要求限定的本發(fā)明范圍內。
權利要求
1.一種結構通式I或結構通式II的化合物或其藥用鹽或類似物用于治療細菌感染性疾病的用途， 其中R1是C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基、或C2-6烯烴，R2是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴。
2.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中結構通式I的化合物是(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)。
3.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中鹽是右美沙芬氫溴酸鹽或右美沙芬磷酸鹽。
4.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中結構通式II的化合物是17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。
5.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中細菌是痤瘡丙酸桿菌或脆弱類桿菌。
6.根據(jù)權利要求5所述的用途，其中痤瘡丙酸桿菌導致痤瘡。
7.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中化合物被施用于病人皮膚或粘膜表面。
8.根據(jù)權利要求7所述的用途，其中病人是人。
9.根據(jù)權利要求1所述的用途，其中化合物的有效量在10000ppm-1ppm。
10.根據(jù)權利要求9所述的用途，其中化合物的有效量在5000pm-1ppm。
11.根據(jù)權利要求1所述的用途，其可用于創(chuàng)傷愈合。
12.根據(jù)權利要求11所述的用途，其中創(chuàng)傷愈合是針對選自切口、撕裂傷、擦傷、刺傷、水泡、皮膚裂傷、供體或移植部位、切割傷、灼傷或輻射傷的創(chuàng)傷。
13.一種NADPH氧化酶抑制劑用于治療因抑制巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6或MCP-1而引起的炎癥的用途。
14.根據(jù)權利要求13所述的用途，其中NADPH氧化酶抑制劑是結構通式I或結構通式II的化合物或其藥用鹽或類似物， 其中R1是C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基、或C2-6烯烴，并且R2是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴。
15.根據(jù)權利要求14所述的用途，其中結構通式I的化合物是(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)。
16.根據(jù)權利要求14所述的用途，其中鹽是右美沙芬氫溴酸鹽或右美沙芬磷酸鹽。
17.根據(jù)權利要求14所述的用途，其中結構通式II的化合物是17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。
18.根據(jù)權利要求13所述的用途，其中炎癥是痤瘡。
19.根據(jù)權利要求13所述的用途，其中抑制劑被施用于病人的皮膚或粘膜表面。
20.根據(jù)權利要求19所述的用途，其中病人是人。
21.根據(jù)權利要求13所述的用途，其中化合物的有效量在10000ppm-1ppm之間。
22.根據(jù)權利要求21所述的用途，其中化合物的有效量在5000pm-1ppm之間。
23.根據(jù)權利要求13所述的用途，其可用于創(chuàng)傷愈合。
24.根據(jù)權利要求23所述的用途，其中創(chuàng)傷愈合是針對選自切口、撕裂傷、擦傷、刺傷、水泡、皮膚裂傷、供體或移植部位、切割傷、灼傷或輻射傷的創(chuàng)傷。
25.一種組合物，包括NADPH氧化酶抑制劑和結構通式I或結構通式II的化合物或其藥用鹽或類似物，以及藥用載體， 其中R1是C1-6烷基、C2-6烯基、C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基，或C2-6烯烴，R2是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基或C2-6烯烴。
26.根據(jù)權利要求25所述的組合物，其中結構通式I的化合物是(+)-3-甲氧基-17-甲基-9α，13α，14α-嗎啡喃(右美沙芬)。
27.根據(jù)權利要求25所述的組合物，其中鹽是右美沙芬氫溴酸鹽或右美沙芬磷酸鹽。
28.根據(jù)權利要求25所述的組合物，其中結構通式II的化合物是17-烯丙基-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納絡酮)或17-(環(huán)丙甲基)-4，5α-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡喃-6-酮(納曲酮)。
29.根據(jù)權利要求25所述的組合物，其中NADPH氧化酶抑制劑是右美沙芬、納洛酮或納曲酮。
30.根據(jù)權利要求25所述的組合物，其為軟膏、軟劑、洗劑、礦物油、化妝品、洗發(fā)水、止癢軟膏、皮膚藥膏，或其它經表皮吸收或透皮給藥的劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供一種右美沙芬或納洛酮化合物，或其藥用鹽或類似物用于治療細菌感染性疾病的用途；本發(fā)明另提供一種NADPH氧化酶抑制劑用于治療因抑制巨噬細胞分泌TNF－α、IL－6或MCP－1而引起的炎癥的用途。本發(fā)明還提供包含NADPH氧化酶抑制劑和殺菌化合物的組合物。
文檔編號A61K9/06GK101023947SQ200610112160
公開日2007年8月29日 申請日期2006年8月15日 優(yōu)先權日2006年2月24日
發(fā)明者江傳箕, 蘇輝斌, 吳華林, 施桂月 申請人:江傳箕, 蘇輝斌, 吳華林, 施桂月