專利名稱：β－咔啉生物堿及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物合成領域，具體涉及β-咔啉生物堿，其制備方法及在治療和預防艾滋病中的應用。
背景技術：
艾滋病，又稱獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired ImmunodeficiencySyndrome，AIDS)，是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)感染引起的，以全身免疫系統(tǒng)嚴重損害為特征的傳染病。AIDS的主要臨床特征是發(fā)生機會性感染和腫瘤。自1981年被首次發(fā)現(xiàn)以來，HIV以驚人的速度在全世界范圍內(nèi)傳播?！?006年艾滋病最新流行情況》報告指出2006年全球感染艾滋病的人數(shù)已達到4200萬，其中新增感染人數(shù)500萬，并造成300萬人死亡。
由于疫苗研制無根本性的突破，抗HIV藥物治療仍是目前防治AIDS的主要途徑之一。目前臨床上應用的抗艾滋病藥物主要有逆轉錄酶抑制劑(如AZT，DDC，DDI，D4T，3TC，等)、蛋白水解酶抑制劑(如Sequanavir，Ritonavir，Indinavir，Nelfinavir等)和進入抑制劑(Enfuvirtide)。用這些藥物進行聯(lián)合化療-高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)能夠長期抑制HIV攜帶者的病毒復制，延長了HIV感染者的壽命。但這些藥物不能完全清除HIV病毒，在血液和感染組織中仍有病毒存在。另外，現(xiàn)有藥物的毒副作用大，容易產(chǎn)生耐藥性。因此，需要我們不斷地研究和開發(fā)具有新的作用機制和新的作用靶點的新型抗HIV藥物。
β-咔啉生物堿，是一類具有重要生物學意義的三環(huán)生物堿家族。作為該家族的重要成員，許多β-咔啉生物堿(如哈明呢堿，駱駝蓬堿)本身就是具有生物活性的天然生物堿。由于潛在的生物活性，目前已知結構的大多數(shù)β-咔啉生物堿是從實驗室合成制備的。他們中的許多已經(jīng)被確認對哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有潛在的生物活性(如1993年專利，新的β-咔啉衍生物及其制備和藥物應用，公開號CN 1070403A)。有的被作為治療老年性記憶減退，老年性癡呆(Alzheimer病)等老年性記憶功能障礙癥藥物(如2003年專利，1-芳基-β-咔啉及其硫代類似物、其制備方法及在藥學上的應用，公開號CN 1456560A)。有的被用做抗腫瘤藥物研究(如2004年專利，去氫駱駝蓬堿衍生物類化合物及其應用，公開號CN 1552711A，2005年專利，3-芳基-β-咔啉-1-酮類化合物及其制備方法與應用，公開號CN 1611500A，2006年專利，吲哚生物堿衍生物、其制備方法及其用途，公開號CN 1743327A)。有的被用做炎性疾病的藥物(IKK-2抑制劑)研究(如2006年專利，用于治療炎性疾病的β-咔啉，公開號CN 1802375A)。有的被用做心血管疾病的藥物研究(如2006年專利，咔啉羧酸衍生物，其合成方法及其用途，公開號CN 1743326A)。
也有文獻報道β-咔啉化合物具有抗HIV活性。2001年，Lee等(J.Ishida，H.Wang，K.Lee.J.Nat.Prod.2001.64.958-960)報道式(VI)，(VII)咔啉化合物具有弱的抗HIV活性。
2005年，楊銘研究組(X.Yu，W.Lin，M.Yang.European Journal of MedicinalChemistry.)報道式(VIII)咔啉衍生物作用于TAR RNA靶點的弱抗HIV活性。
迄今，現(xiàn)有技術中沒有含有式(I)化合物的β-咔啉生物堿具有抗HIV-1活性的報道，也沒有該化合物作為有效成分在治療艾滋病方面的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類抗HIV-1活性好，選擇性高且毒副作用小的新型β-咔啉生物堿。
本發(fā)明新型β-咔啉生物堿具有式I化合物 其中R1所代表的基團選自氫，烷基，烷氧基，羥甲基，醚化羥甲基，酯化羥甲基，鹵素(F，Cl，Br)，硝基，三氟甲基，N，N-二甲氨基；R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8可以相同或不同，獨立的所代表的基團選自氫，烷基，烷氧基，鹵素(F，Cl，Br)；R9所代表的基團選自氫，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，環(huán)烷基，芐基或取代芐基，?；?；X所代表的基團選自O，S，CH2＝CH2，NR(R為氫，直鏈或支鏈烷基)；Y所代表的基團選自OR，其中R可以為獨立的氫，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，芳基或取代芳基，環(huán)烷基；NHR，其中R可以為獨立的氫，羥基，氨基，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，芳基或取代芳基，環(huán)烷基，氨基酸；NH(CH2)nR， 其中n＝2-10；R可以為羥基，氨基，羧基；NH(CH2)nCONHR，其中n＝2-10；R可以為氫，氨基，氨基酸。
所述氨基酸可以為甘氨酸，L-丙氨酸，L-谷氨酸，L-天冬氨酸，L-脯氨酸，L-苯丙氨酸，L-亮氨酸，L-異亮氨酸，L-絲氨酸。
本發(fā)明的化合物通過HIV-1的宿主細胞C8166的細胞毒性試驗研究，HIV-1抑制C8166細胞致細胞病變(CPE)的抑制試驗研究，顯示良好的抗HIV-1活性和較小的毒副作用，可進一步研制開發(fā)為治療和預防艾滋病的藥物。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物是1，2，3，4結構化合物。
本發(fā)明的另一目的提供涉及具有式(I)結構咔啉生物堿的制備方法，主要包括以下步驟1)在二氯亞砜作用下，取代L-色氨酸與甲醇生成化合物(II)；
2)化合物(II)和(III)以二氯甲烷做溶劑，分子篩(MS)，三氟乙酸(TFA)，三氯氰尿酸(TCCA)/N，N-二甲基甲酰胺(DMF)/三乙胺(TEA)作用下縮合相繼發(fā)生縮合，環(huán)和，脫氫生成化合物(IV)； 3)化合物(IV)按照有機合成中常規(guī)的在皂化，酯化，酰氨化，烷基化條件，即可得到式(I)結構咔啉生物堿； 本發(fā)明實施例1，詳細描述了化合物1的制備方法，該化合物的制備過程如下式
本發(fā)明的進一步目的是提供一種以式(I)化合物為活性成分的用于治療和預防艾滋病的藥物組合物，及該化合物在制備治療和預防艾滋病的藥物方面的應用。
化合物1的細胞毒性低(CC50，363.03μg/ml)，具有顯著的體外抗HIV-1活性(EC50，1.16μg/ml)，選擇指數(shù)為312。
用于治療和預防艾滋病的藥物組合物，包含至少一種式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分，單獨或結合一種或幾種藥學上可接受的載體。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術方案用于治療和預防艾滋病的藥物，其中含有治療和預防艾滋病有效量的式(I)化合物及可藥用載體和/或賦形劑。
本發(fā)明化合物用作藥物上時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1-99％，優(yōu)選為0.5-90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學上可接受的，對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將所述的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)口服和注射(靜注、肌注)兩種形式給藥。
口服可用其固體或液體制劑，如粉劑、片劑、糖衣劑、膠囊、溶液、糖漿、滴丸劑等。
注射可用其固體或液體制劑，如粉針劑、溶液形注射劑等。


圖1是式1化合物合成路線。
具體實施例方式下面結合實施例進一步對本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容進行說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
本發(fā)明化合物的合成研究所有原料和/或試劑是已知的產(chǎn)品，或者是按照已知操作制備的產(chǎn)品。
實施例合成步驟中所述化合物的結構是按照常規(guī)的光譜技術(1H NMR，13H NMR，EI-MS，F(xiàn)AB-MS)測定的。
實施例1制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-甲酰胺(化合物1)步驟A合成L-色氨酸甲酯向10mmol L-色氨酸中加入200mL干燥甲醇，磁力攪拌下，冷卻至-10℃以下，緩慢加入10mL二氯亞砜，然后讓起自然升到室溫，再加熱回流3h。減壓旋去過量的甲醇和二氯亞砜，然后加適量水溶解，調(diào)PH值9-10，用乙酸乙酯萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得白色固體2.13g，Yield98％，m.p.87-90℃.C12H14N2O2.EI-MS m/z218(15％)，159(10％)，130(100％)，77(13％).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)8.27(1H，s，br)，7.61(1H，d，J＝7.8Hz)，7.35(1H，d，J＝8.0Hz)，7.19(1H，t，J＝7.4Hz)，7.12(1H，t，J＝7.4Hz)，7.05(1H，s)，3.83(1H，m)，3.71(3H，s)，3.28(1H，dd，J＝4.7，14.4Hz)，3.06(1H，dd，J＝7.7，14.4Hz).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)175.1，136.2，127.1，123.2，121.8，119.5，118.5，111.2，110.0，54.3，52.6，30.2.
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯向10mmol L-色氨酸甲酯，10mmol 5‘-乙酰氧甲基-2-呋喃醛和2.00g 4A分子篩中加入100mL干燥二氯甲烷，氮氣保護下，室溫磁力攪拌反應6h后，加入催化量的三氟乙酸，然后繼續(xù)反應24h，再加入20mL DMF和5mL三乙胺，冷卻至-30℃，加入10mmol TCCA(溶于5mLDMF中)，然后讓其自然冷卻至0℃，維持0℃在反應2-3h，然后減壓過濾除去4A分子篩，減壓蒸除二氯甲烷，加入適量碎冰，讓其自然溶解，過濾，甲醇重結晶，得淡黃色固體2.98g，Yield82％，m.p.153-156℃，C20H16N2O5.FAB+-MSm/z365(M+1).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.24(1H，s)，8.73(1H，s)，8.12(1H，d，J＝8.0Hz)，7.67(1H，d，J＝8.2Hz)，7.56(1H，m)，7.32(1H，m)，7.30(1H，d，J＝3.4Hz)，6.58(1H，d，J＝3.4Hz)，5.23(2H，s)，4.02(3H，s)，2.15(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.0，166.4，153.7，149.8，141.0，137.0，133.0，132.7，130.0，128.8，121.5，121.1，120.7，116.7，112.9，112.2，109.7，58.1，52.5，21.1.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-甲酰胺向1mmol 1-(5‘-乙酰氧甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯中加入20mL甲醇，磁力攪拌下，加入5mL濃氨水，加熱至40℃，TLC顯示原料消失，減壓蒸除溶劑，柱層析，得淡黃色固體196.5mg，Yield64％，mp194-198℃，C17H13N3O3.FAB+-MS m/z308(M+1).1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.13(1H，s)，8.76(1H，s)，8.18(1H，d，J＝8.0Hz)，7.76(1H，d，J＝8.0Hz)，7.60(1H，t，J＝7.5Hz)，7.34(1H，t，J＝7.5Hz)，7.30(1H，d，J＝3.3Hz)，6.50(1H，d，J＝3.0Hz)，4.73(2H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)166.7，157.2，151.7，141.4，139.7，131.5，131.4，130.2，128.8，122.0，121.1，120.4，112.7，112.6，111.0，109.2，55.0.
實施例2制備N-甲基-1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-甲酰胺(化合物2)向1mmol 1-(5‘-乙酰氧甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯中加入20mL甲醇，磁力攪拌下，加入4mL甲胺(33％甲胺乙醇溶液)，加熱至50℃，TLC顯示原料消失，減壓蒸除溶劑，柱層析，得黃色固體193.2mg，Yield61％，mp241-314℃，C18H15N3O3.FAB+-MS m/z322(M+1).1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.52(1H，s)，8.72(1H，s)，8.39(1H，d，J＝8.0Hz)，7.82(1H，d，J＝8.0Hz)，7.68(1H，d，J＝2.7Hz)，7.61(2H，t，J＝8.5Hz)，7.31(1H，t，J＝7，5Hz)，6.62(1H，d，J＝3.0Hz)，4.68(2H，s)，2.90(3H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)164.9，157.2，151.7，141.4，139.6，131.4，130.2，128.7，128.6，122.0，121.0，120.2，112.7，112.2，111.0，109.1，55.9.
實施例3制備1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-甲酰胺(化合物3)步驟A合成1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以2-噻吩醛和L-色氨酸甲酯為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體2.61g，Yield85％，mp151-154℃，C17H12N2O2S.FAB+-MS m/z309(M+1).1HNMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)8.75(1H，s)，8.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.82(1H，d，J＝8.0Hz)，7.58(2H，m)，7.47(1H，d，J＝4.0Hz)，7.33(1H，m)，7.16(1H，d，J＝4.0Hz)，4.05(3H，s).13CNMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.6，141.6，140.9，136.9，133.6，130.0，128.7，127.8，127.7，127.6，126.0，121.6，121.4，120.8，116.5，112.2，52.5.
步驟B合成1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-甲酰胺以1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例1步驟C，得黃色固體205.4mg，Yield69％，mp188-191℃，C17H11N3OS.FAB+-MS m/z294(M+1).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.81(1H，s)，8.77(1H，s)，8.37(1H，d，J＝7.6Hz)，8.18(1H，d，J＝8.1Hz)，7.77(2H，m)，7.62(1H，t，J＝7.2Hz)，7.53(1H，d，J＝4.0Hz)，7.33(1H，d，J＝3.2Hz).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ(ppm)166.3，142.1，141.6，139.3，134.8，132.0，130.4，128.7，128.6，128.5，126.6，121.8，121.1，120.5，112.9，112.8.
實施例4制備1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-甲酰肼(化合物4)向1mmol 1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-羧酸甲酯中加入20mL甲醇，磁力攪拌下，加入4mL水合肼(85％)，加熱至40℃，TLC顯示原料消失，減壓蒸除溶劑，柱層析，得淡黃色固體234.0mg，Yield76％，268-271℃，C17H12N4OS.FAB+-MS m/z309(M+1).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.80(1H，s)，9.31(1H，s)，8.73(1H，s)，8.37(1H，d，J＝8.0Hz)，8.16(1H，d，J＝8.0Hz)，7.77(2H，m)，7.60(1H，t，J＝7.2Hz)，7.33(1H，d，J＝4.0Hz)，7.29(1H，d，J＝3.2Hz)，4.46(2H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)163.7，142.1，141.6，138.9，135.2，132.1，130.4，129.0，128.8，128.7，126.9，122.1，121.1，120.9，112.9，112.8.
實施例5制備N-羥基-1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-甲酰胺(化合物5)向0.2mmol 1-(2-噻吩)-β-咔啉-3-羧酸甲酯中加入5mL甲醇，磁力攪拌下，加入0.5mmol羥胺鹽酸鹽和0.2mL三乙胺，加熱至40℃，TLC顯示原料消失，減壓蒸除溶劑，柱層析，得黃色固體37.9mg，Yield60％，mp 248-250℃，C16H11N3O2S.FAB+-MSm/z309(M+1).1H NMR(400MHz，DMDO-d6)δ(ppm)11.76(1H，s，br)，8.73(1H，s)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz)，8.05(1H，t，J＝8.4Hz)，7.75(1H，t，J＝8.4Hz)，7.60(1H，d，J＝8.0Hz)，7.56(1H，d，J＝4.4Hz)，7.34(1H，t，J＝7.6Hz)，7.29(1H，d，J＝4.8Hz).13C NMR(100MHz，DMDO-d6)δ(ppm)164.8，145.7，142.2，140.5，134.4，132.8，131.4，129.7，128.4，128.2，126.9，121.9，121.1，120.7，112.8，112.6.
實施例6制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸(化合物6)向1mmol 1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯中加入20mL甲醇，磁力攪拌下，加入2mL氫氧化鈉(1mol/L)，加熱回流，TLC顯示原料消失，減壓蒸除溶劑，然后加適量水溶解，調(diào)PH值5-6，用乙酸乙酯萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得淡黃色固體301.8mg，Yield98％，238-244℃，C17H12N2O4.FAB+-MS m/z309(M+1).1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.61(1H，s，br)，8.79(1H，s)，8.36(1H，d，J＝7.6Hz)，7.81(1H，d，J＝8.1Hz)，7.60(1H，t，J＝7.5Hz)，7.40(1H，d，J＝2.7Hz)，7.31(1H，t，J＝7.5Hz)，7.40(1H，d，J＝2.6Hz)，4.66(2H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)167.0，157.1，151.2，141.4，132.1，131.6，129.8，128.6，121.8，120.9，120.3，115.3，112.8，112.7，110.7，109.1，55.9.
實施例7制備1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃基)-9-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(化合物7)向1mmol 1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯，1mmolNaH中，加入無水10mLDMF和無水10mLTHF，氮氣保護下，室溫磁力攪拌30min，再滴加1mmolCH3I，繼續(xù)室溫磁力攪拌，TLC顯示原料消失，然后加適量水溶解，用乙酸乙酯萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得黃色固體182.5mg，Yield52％，238-244℃，C21H18N2O5.FAB+-MS m/z351(M+1).1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)8.86(1H，s)，8.18(1H，d，J＝8.0Hz)，7.64(1H，t，J＝7.5Hz)，7.47(1H，d，J＝8.0Hz)，7.35(1H，t，J＝7.5Hz)，6.95(1H，d，J＝3.0Hz)，6.56(1H，d，J＝3.0Hz)，4.49(2H，s)，4.04(3H，s)，3.70(3H，s)，3.40(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.4，152.0，151.2，143.1，136.8，136.7，133.5，130.5，129.0，121.6，121.1，120.8，117.3，112.2，111.4，110.1，109.1，66.5，57.8，52.6，32.1.
實施例8制備1-(3-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸(化合物8)步驟A合成1-(3-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以3-呋喃醛和L-色氨酸甲酯為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體2.65g，Yield83％，mp156-158℃.C17H12N2O3.FAB+-MS m/z293(M+1).1HNMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)9.06(1H，s)，8.80(1H，s)，8.17(1H，d，J＝8.0Hz)，8.12(1H，d，J＝8.0Hz)，7.55(1H，t，J＝8.0Hz)，7.48(1H，t，J＝8.0Hz)，7.35(2H，m)，7.02(1H，d，J＝1.0Hz)，4.03(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.5，143.9，142.7，141.4，136.8，134.9，133.6，129.3，128.7，124.0，121.9，121.1，120.5，115.7，112.8，110.1，55.2.
步驟B合成1-(3-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸以1-(3-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體36.6mg，Yield61％，mp251-254℃，C17H12N2O3，F(xiàn)AB+-MS m/z279(M+1).1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.76(1H，s)，8.84(1H，d，J＝8.0Hz)，8.39(1H，d，J＝8.0Hz)，7.92(1H，t，J＝8.0Hz)，7.78(1H，d，J＝8.4Hz)，7.61(1H，t，J＝8.0Hz)，7.47(1H，d，J＝8.4Hz)，7.32(1H，t，J＝7.5Hz).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ(ppm)167.5，143.9，142.7，141.4，136.8，134.9，133.6，129.3，128.7，124.0，121.9，121.1，120.5，115.7，112.8，109.3.
實施例9制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)6-甲基-β-咔啉-3-羧酸(化合物9)
步驟A合成L-5-甲基-色氨酸甲酯以L-5-甲基-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，得白色固體2.24g，Yield96％，mp89-92℃，C13H16N2O2，F(xiàn)AB+-MS m/z233(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-5-甲基-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.21g，Yield85％，mp155-159℃，C21H18N2O5.FAB+-MS m/z379(M+1).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.12(1H，s，br)，8.78(1H，s)，7.97(1H，s)，7.62(1H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，dd，J＝3.5Hz J＝8.5Hz)，7.32(1H，d，J＝3.5Hz)，6.63(1H，d，J＝3.5Hz)，5.28(2H，s)，4.05(3H，s)，2.56(3H，s)，2.18(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.5，166.9，153.4，150.2，144.6，143.5，133.6，133.2，130.5，129.2，122.6，121.4，120.9，117.1，112.9，112.4，109.8，58.3，52.8，21.2，14.6.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體316.8mg，Yield99％，240-244℃，C18H14N2O4.FAB+-MS m/z323(M+1)，.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.50(1H，s，br)，8.77(1H，s)，8.19(1H，s)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.47(1H，d，J＝8.0Hz)，7.41(1H，s)，6.62(1H，s)，4.68(2H，s)，2.88(3H，s).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ(ppm)167.0，157.1，151.2，141.4，132.1，131.6，129.8，128.6，121.8，120.9，120.3，115.3，112.8，112.7，110.7，109.1，55.9，14.8.
實施例10制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-甲氧基-β-咔啉-3-羧酸(化合物10)步驟A合成L-5-甲氧基-色氨酸甲酯以L-5-甲氧基-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，得白色固體L-5-甲氧基-色氨酸甲酯2.44g，Yield96％，mp89-92℃，C13H16N2O3.FAB+-MS m/z249(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲氧基-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-5-甲氧基-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.21g，Yield85％，mp 155-159℃，C21H18N2O6.FAB+-MSm/z395(M+1).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.15(1H，s)，8.76(1H，s)，7.63(1H，d，J＝8.8Hz)，7.59(1H，s)，7.33(1H，t，J＝7.2Hz)，7.26(1H，d，J＝3.2Hz)，6.63(1H，d，J＝3.2Hz)，5.27(2H，s)，4.05(3H，s)，3.78(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.1，166.6，154.7，153.8，149.8，136.5，135.9，133.6，132.9，129.8，121.6，119.3，116.9，113.2，113.2，109.8，102.9，58.2，55.8，52.6，21.2.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-甲氧基-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲氧基-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體335.8mg，Yield99％，240-244℃，C18H14N2O5.FAB+-MS m/z339(M+1).1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.47(1H，s，br)，8.85(1H，s)，8.00(1H，s)，7.70(1H，d，J＝8.8Hz)，7.40(1H，s)，7.26(1H，d，J＝8.4Hz)，6.60(1H，s)，4.66(2H，s)，2.88(3H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)166.5，157.2，154.2，151.3，136.3，136.1，132.5，132.3，129.6，121.5，119.0，116.1，113.7，110.9，109.2，103.7，55.9，55.6.
實施例11制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-氟-β-咔啉-3-羧酸(化合物11)步驟A合成L-5-氟-色氨酸甲酯以L-5-氟-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，得白色固體L-5-氟-色氨酸甲酯2.33g，Yield96％，mp89-92℃，C12H13FN2O2.FAB+-MS m/z237(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-氟-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-5-氟-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.14g，Yield82％，mp155-159℃，C20H15FN2O5.FAB+-MS m/z383(M+1)1H NMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)10.31(1H，s，br)，8.75(1H，s)，7.83(1H，d，J＝8.5Hz)，7.69(1H，dd，J＝4.0Hz，J＝8.5Hz)，7.38(1H，d，J＝8.5Hz)，7.34(1H，d，J＝3.0Hz)，6.65(1H，d，J＝2.5Hz)，5.28(2H，s)，4.05(3H，s)，2.19(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.5，166.9，153.4，150.2，144.6，143.5，133.6，133.2，130.5，129.2，122.6，121.4，120.9，117.1，112.9，112.4，109.8，58.3，52.8，21.6.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-氟-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-氟-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體316.8mg，Yield99％，240-244℃，C17H11FN2O4.FAB+-MS m/z327(M+1)H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.65(1H，s，br)，8.86(1H，s)，8.29(1H，d，J＝7.2Hz)，7.81(1H，dd，J＝3.2Hz，J＝7.2Hz)，7.60(1H，d，J＝7.2Hz)，7.40(1H，d，J＝2.4Hz)，6.61(1H，d，J＝2.4Hz)，4.66(2H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)172.5，164.6，161.9，153.5，149.8，141.9，136.5，133.6，132.6，129.8，122.8，117.6，116.3，113.0，109.7，109.5，52.7.
實施例12制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-7-氟-β-咔啉-3-羧酸(化合物12)步驟A合成L-6-氟-色氨酸甲酯以L-6-氟-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，得白色固體L-6-氟-色氨酸甲酯2.38g，Yield96％，mp89-92℃，C12H13FN2O2.FAB+-MS m/z237(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-7-氟-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-6-氟-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.24g，Yield85％，mp155-159℃，C20H15FN2O5.FAB+-MS m/z383(M+1).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.37(1H，s，br)，8.73(1H，s)，8.22(1H，dd，J＝1.2Hz J＝8.8Hz)，7.71(1H，dd，J＝2.0Hz J＝9.2Hz)，7.31(1H，d，J＝3.6Hz)，7.31(1H，dt，J＝2.0Hz J＝9.2Hz)，6.63(1H，d，J＝3.6Hz)，5.26(2H，s)，4.02(3H，s)，2.18(3H，s).13CNMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.3，164.8，162.3，153.5，149.8，141.9，137.5，133.6，132.6，129.7，122.8，117.6，116.3，113.0，109.7，109.5，98.9，57.8，52.4，21.4.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-氟-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-7-氟-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體316.8mg，Yield99％，240-244℃，C17H11FN2O4FAB+-MS m/z327(M+1)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)11.75(1H，s，br)，8.80(1H，s)，8.43(1H，d，J＝8.4Hz)，7.53(1H，d，J＝9.2Hz)，7.38(1H，d，J＝2.4Hz)，7.18(1H，t，J＝8.4Hz)，6.61(1H，d，J＝2.4Hz)，4.66(2H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)164.1，161.6，157.3，151.2，142.4，142.2，133.5，132.3，129.7，123.9，117.8，115.5，111.2，109.4，109.0，99.2，56.0.
實施例13制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-8-甲基-β-咔啉-3-羧酸(化合物13)步驟A合成L-7-甲基-色氨酸甲酯以L-7-甲基-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，得白色固體2.20g，Yield95％，mp91-94℃，C13H16N2O2.FAB+-MS m/z233(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-8-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-7-甲基-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.25g，Yield86％，mp165-167℃.C21H18N2O5.FAB+-MS m/z379(M+1)，1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.12(1H，s，br)，8.78(1H，s)，7.97(1H，d，J＝8.0Hz)，7.62(1H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，dd，J＝3.5Hz J＝8.5Hz)，7.32(1H，d，J＝3.5Hz)，6.63(1H，d，J＝3.5Hz)，5.29(2H，s)，4.02(3H，s)，2.56(3H，s)，2.32(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.3，166.9，153.4，150.2，144.6，143.5，133.6，133.2，130.5，129.2，122.6，121.4，120.9，117.1，112.9，112.4，109.8，58.3，52.8，21.2，14.6.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-8-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體313.8mg，Yield98％，240-244℃，C18H14N2O4.FAB+-MS m/z321(M+1)1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.56(1H，s，br)，8.77(1H，s)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.47(1H，t，J＝8.0Hz)，7.41(1H，s)，6.62(1H，s)，4.68(2H，s)，2.86(3H，s).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ(ppm)167.5，156.2，151.2，141.4，132.1，131.6，129.8，128.6，121.8，120.9，120.3，115.3，112.8，112.7，110.7，109.1，55.2，14.6.
實施例14制備1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-5-甲基-β-咔啉-3-羧酸(化合物14)步驟A合成L-4-甲基-色氨酸甲酯以L-4-甲基-色氨酸為原料，操作類似實施例1步驟A，，得白色固體2.28g，Yield97％，mp 89-92℃，C13H16N2O2.FAB+-MS m/z233(M+1).
步驟B合成1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-4-甲基-色氨酸甲酯和5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體3.21g，Yield85％，mp155-159℃，C21H18N2O5.FAB+-MS m/z379(M+1)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.12(1H，s，br)，8.78(1H，s)，8.02(1H，d，J＝8.0Hz)，7.67(1H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，t，J＝8.5Hz)，7.32(1H，d，J＝3.5Hz)，6.63(1 H，d，J＝3.5Hz)，5.28(2H，s)，4.05(3H，s)，2.56(3H，s)，2.15(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)172.4，166.9，153.4，150.2，144.6，143.5，133.6，133.2，130.5，129.2，122.6，121.4，120.9，117.1，112.9，112.4，109.8，58.3，52.8，21.2，14.8.
步驟C合成1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸以1-(5‘-乙酰氧亞甲基-2-呋喃)-6-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體312.8mg，Yield97％，240-244℃，C18H14N2O4.FAB+-MS m/z321(M+1)1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.50(1H，s，br)，8.72(1H，s)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.47(1H，t，J＝8.0Hz)，7.41(1H，s)，6.62(1H，s)，4.68(2H，s)，2.88(3H，s).13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ(ppm)167.0，157.1，151.2，141.4，132.1，131.6，129.8，128.6，121.8，120.9，120.3，115.3，112.8，112.7，110.7，109.1，55.9，14.8.
實施例15制備1-(4‘-甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸(化合物15)步驟A合成1-(4‘-甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-色氨酸甲酯和4‘-甲基苯甲醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體259.8mg，Yield82％，mp152-155℃，C18H16N2O2.FAB+-MS m/z317(M+1).1HNMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)8.75(1H，s)，8.13(1H，d，J＝7.5Hz)，7.75(2H，d，J＝8.0Hz)，7.51(2H，m)，7.25(3H，t，J＝7.5Hz)，3.96(3H，s)，2.34(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.9，143.1，140.9，138.8，135.0，134.5，129.2，127.8，127.7，127.6，126.0，121.6，121.4，120.5，116.5，112.0，52.3，21.0.
步驟B合成1-(4‘-甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸以1-(4‘-甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體59.4mg，Yield98％，mp262-264℃，C17H14N2O2.FAB+-MS m/z303(M+1).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.12(1H，s，br)，8.97(1H，s)，8.44(1H，d，J＝7.6Hz)，7.93(2H，d，J＝6.8Hz)，7.71(1H，d，J＝7.6Hz)，7.62(1H，t，J＝7.6Hz)，7.44(2H，d，J＝6.8Hz)，7.62(1H，t，J＝7.6Hz)，2.44(3H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)165.9，142.1，141.5，139.2，135.7，134.5，132.9，129.9，129.4，129.3，190.0，122.4，121.0，120.8，116.6，113.0，21.1.
實施例16制備1-(4‘-甲氧基苯基)-β-咔啉-3-羧酸(化合物16)步驟A合成1-(4‘-甲氧基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-色氨酸甲酯和4‘-甲基苯甲醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體265.7mg，Yield83％，mp162-164℃，C18H16N2O2.FAB+-MS m/z333(M+1).1HNMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)9.01(1H，s)，8.81(1H，s)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz)，7.81(2H，d，J＝8.4Hz)，7.58(2H，m)，7.36(1H，d，J＝7.5Hz)，6.93(2H，d，J＝8.4Hz)，4.03(3H，s)，3.80(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.9，160.2，142.8，140.5，137.8，135.0，130.1，129.5，128.7，122.1，121.8，120.9，116.4，114.3，114.2，111.9，55.3，52.6.
步驟B合成1-(4‘-甲氧基苯基)-β-咔啉-3-羧酸以1-(4‘-甲氧基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體60.4mg，Yield98％，mp269-272℃，C17H14N2O2.FAB+-MS m/z319(M+1).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.89(1H，s，br)，8.85(1H，s)，8.39(1H，d，J＝8.0Hz)，8.03(2H，d，J＝7.6Hz)，7.68(1H，d，J＝8.0Hz)，7.58(1H，t，J＝7.2Hz)，7.30(1H，t，J＝7.2Hz)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz)，3.86(3H，s).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)166.9，160.0，141.6，141.5，137.1，134.3，130.1，129.8，129.3，128.6，122.0，121.1，120.4，115.9，114.2，112.8，55.4.
實施例17制備1-(4‘-氟苯基)-β-咔啉-3-羧酸(化合物17)步驟A合成1-(4‘-氟苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-色氨酸甲酯和4‘-氟苯甲醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體259.8mg，Yield81％，mp158-159℃，C17H14N2O2F.FAB+-MS m/z322(M+1).1HNMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)9.75(1H，s)，8.83(1H，s)，8.20(1H，d，J＝7.5Hz)，7.91(2H，t，J＝6.5Hz)，7.58(2H，m)，7.35(1H，t，J＝6.5Hz)，7.18(2H，t，J＝7.5Hz)，3.96(3H，s)，2.34(3H，s).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)166.8，164.4，141.9，141.1，137.3，135.0，133.8，130.4，130.3，129.7，128.7，121.7，121.5，120.7，116.7，115.7，115.5，112.0，52.3.
步驟B合成1-(4‘-氟苯基)-β-咔啉-3-羧酸以1-(4‘-氟苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體60.2mg，Yield98％，mp266-269℃，C16H12N2O2F.FAB+-MS m/z308(M+1).1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.93(1H，s，br)，8.90(1H，s)，8.41(1H，d，J＝7.5Hz)，8.12(2H，t，J＝6.0Hz)，7.68(1H，d，J＝8.0Hz)，7.59(1H，t，J＝7.5Hz)，7.45(2H，t，J＝7.5Hz)，7.32(1H，t，J＝7.5Hz).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)166.7，163.5，141.5，140.6，137.2，134.4，133.9，130.9，130.8，129.5，128.7，122.0，121.8，120.4，116.3，115.6，115.5，112.7.
實施例18制備1-(4‘-三氟甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸(化合物18)步驟A合成1-(4‘-三氟甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-色氨酸甲酯和4‘-三氟甲基苯甲醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體300.5mg，Yield81％，mp192-194℃，C20H13N2O2F3.FAB+-MS m/z371(M+1).1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)8.82(1H，s)，8.16(1H，d，J＝7.6Hz)，8.04(2H，d，J＝8.0Hz)，7.72(2H，d，J＝8.0Hz)，，7.54(2H，t，J＝8.0Hz)，7.32(1H，d，J＝7.6Hz)，4.00(3H，s).
步驟B合成1-(4‘-三氟甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸以1-(4‘-三氟甲基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體70.1mg，Yield98％，mp240-244℃，C19H11N2O2F3.FAB+-MS m/z357(M+1).1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.00(1H，s，br)，8.94(1H，s)，8.42(1H，d，J＝7.5Hz)，8.26(2H，d，J＝8.0Hz)，7.97(2H，d，J＝8.0Hz)，7.66(1H，d，J＝7.5Hz)，7.60(1H，t，J＝7.5Hz)，7.32(1H，t，J＝7.5Hz).
實施例19制備1-(4‘-硝基苯基)-β-咔啉-3-羧酸(化合物19)步驟A合成1-(4‘-硝基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯以L-色氨酸甲酯和4‘-硝基苯甲醛為原料，操作類似實施例1步驟B，得淡黃色固體305.3mg，Yield88％，mp151-154℃，C19H13N3O4.FAB+-MS m/z348(M+1).1HNMR(500MHz，CDCl3)δ(ppm)8.91(1H，s)，8.42(2H，d，J＝8.5Hz)，8.31(2H，d，J＝8.5Hz)，8.24(1H，d，J＝7.5Hz)，7.69(1H，d，J＝7.5Hz)，7.61(1H，t，J＝7.5Hz)，7.31(1H，t，J＝7.5Hz)，4.05(3H，s).
步驟B合成1-(4‘-硝基苯基)-β-咔啉-3-羧酸以1-(4‘-硝基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體66.2mg，Yield99％，mp240-244℃，C18H11N3O4.FAB+-MS m/z334(M+1).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)12.10(1H，s，br)，8.98(1H，s)，8.46(2H，d，J＝8.8Hz)，7.43(1H，d，J＝8.0Hz)，8.35(2H，d，J＝8.8Hz)，7.69(1H，d，J＝8.0Hz)，7.63(1H，t，J＝7.2Hz)，7.34(1H，t，J＝7.2Hz).
實施例20制備N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羰基-L-亮氨酸(化合物20)步驟A合成N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)--β-咔啉-3-羰基]-L-亮氨酸甲酯向1mmol 1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羧酸，1.01mmol L-亮氨酸鹽酸鹽，2.02mmol 2，4，6-三甲基吡啶中，加入20mL干燥的DMF，冷卻至-30℃下，加入1.01mmolHATU，讓其自然冷卻至0℃，保持0℃繼續(xù)反應2h，然后讓其自然冷卻至室溫，繼續(xù)反應10h。繼續(xù)磁力攪拌下，加入飽和碳酸氫鈉溶液，10min后，用用乙酸乙酯萃取，減壓蒸除溶劑，柱層析，得黃色固體394.8mg，Yield91％，mp173-176℃.FAB+-MSm/z436(M+1)；HR-FAB+-MS m/z436.1879(M+H+)(calcd.for C24H26N3O5，436.1872).1HNMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)10.18(1H，s)，8.16(1H，s)，7.95(1H，d，J＝7.2Hz)，7.85(1H，d，J＝7.6Hz)，7.44-7.37(1H，m)，7.18-7.14(1H，m)，6.42(1H，d，J＝3.2Hz)，6.38(1H，d，J＝3.2Hz)，4.72(2H，s)，4.60-4.37(1H，m)，3.81(3H，s)，1.74-1.69(1H，m)，1.66-1.63(1H，m)，1.19-1.16(1H，m)，0.91(6H，d，J＝6.0Hz).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ(ppm)174.0，165.8，155.5，152.7，140.9，137.5，132.0，130.7，130.4，128.5，121.7，121.5，120.4，112.6，111.9，110.1，109.5，57.1，52.5，51.6，40.8，25.1，22.8，22.1.
步驟B合成N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)-β-咔啉-3-羰基]-L-亮氨酸以N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃)--β-咔啉-3-羰基]-L-亮氨酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體41.3mg，Yield98％，mp243-246℃.FAB+-MS m/z422(M+1)；HR-FAB+-MS m/z444.1541(M+Na+)(calcd.for C24H26N3O5Na 444.1535).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.53(1H，s)，8.73(1H，s)，8.71(1H，d，J＝8.4Hz)，8.38(1H，d，J＝8.0Hz)，7.61(1H，t，J＝7.6Hz)，7.54(1H，d，J＝3.2Hz)，7.31(1H，t，J＝7.6Hz)，6.62(1H，d，J＝3.2Hz)，4.67(2H，s)，4.60-4.54(1H，m)，1.90-1.83(1H，m)，1.73-1.68(1H，m)，1.18-1.14(1H，m)，0.91(6H，d，J＝6.0Hz).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)173.9，164.2，157.3，151.3，141.3，138.8，131.5，131.4，130.1，128.8，121.9，120.9，120.3，112.7，112.6，110.9，109.0，55.9，50.5，40.2，24.6，22.8，21.5.
實施例21制備N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸(化合物21)步驟A合成N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸甲酯以1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羧酸和3-氨基丙酸甲酯為原料，操作類似實施例21步驟A，得黃色固體353.7mg，Yield90％，mp181-184℃.FAB+-MS m/z394(M+1)；HR-FAB+-MS m/z394.1408(M+H+)(calcd.for C21H19N3O5，394.1402).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.60(1H，s)，8.09(1H，d，J＝8.0Hz)，7.60(1H，d，J＝8.0Hz)，7.53-7.48(1H，m)，7.26-7.24(1H，m)，7.23(1H，d，J＝3.2Hz)，6.49(1H，d，J＝3.2Hz)，4.70(2H，s)，3.74(2H，t，J＝6.0Hz)，3.70(3H，s)，2.15(2H，t，J＝6.0Hz).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)172.7，165.7，154.8，152.9，141.1，137.8，131.8，131.2，130.3，128.3，120.9，120.8，119.9，112.2，111.7，109.5，56.1，51.1，34.4，33.4.
步驟B合成N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸以N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得黃色固體34.9mg，Yield92％，mp220-222℃.FAB+-MS m/z380(M+1)；HR-FAB+-MS m/z380.1248(M+1)(calcd.for C20H18N3O5，380.1246).1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.59(1H，s)，8.72(1H，s)，8.39(1H，d，J＝8.0Hz)，7.83(1H，d，J＝8.0Hz)，7.62(1H，t，J＝7.2Hz)，7.51(1H，d，J＝4.0Hz)，7.31(1H，t，J＝7.2Hz)，6.62(1H，d，J＝4.0Hz)，4.70(2H，s)，3.59(2H，t，J＝6.0Hz)，2.65(2H，t，J＝6.0Hz).13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)173.2，164.2，157.3，151.5，141.4，139.2，131.3，130.1，128.7，121.9，120.9，120.2，112.7，112.5，112.2，110.7，108.9，55.9，34.9，34.0.實施例22制備N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酰胺(化合物22)以N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸甲酯為原料，操作類似實施例1步驟C，得淡黃色固體22.8mg，Yield61％，mp254-257℃.FAB+-MSm/z379(M+1)；C20H19N4O4.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.56(1H，s)，8.65(1H，s)，8.41(1H，d，J＝8.0Hz)，7.83(1H，d，J＝8.0Hz)，7.62(1H，t，J＝7.2Hz)，7.51(1H，d，J＝4.0Hz)，7.31(1H，t，J＝7.2Hz)，6.62(1H，d，J＝4.0Hz)，4.70(2H，s)，3.59(2H，t，J＝6.0Hz)，2.65(2H，t，J＝6.0Hz).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)172.4，164.2，157.3，151.5，141.4，139.2，131.3，130.1，128.7，121.9，120.9，120.2，112.7，112.5，112.2，110.7，108.9，55.9，35.0，34.2.
實施例23制備N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酰肼(化合物23)以N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸甲酯為原料，操作類似實施例4，得淡黃色固體23.6mg，Yield60％，mp257-262℃.FAB+-MS m/z394(M+1)；C20H20N5O4.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.62(1H，s)，8.65(1H，s)，8.39(1H，d，J＝8.0Hz)，7.85(1H，d，J＝8.0Hz)，7.68(1H，t，J＝7.2Hz)，7.52(1H，d，J＝4.0Hz)，7.33(1H，t，J＝7.2Hz)，6.56(1H，d，J＝4.0Hz)，4.65(2H，s)，3.56(2H，t，J＝6.0Hz)，2.62(2H，t，J＝6.0Hz).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)171.5，164.2，157.3，151.5，141.4，139.2，131.3，130.1，128.7，121.9，120.9，120.2，112.7，112.5，112.2，110.7，108.9，55.8，35.0，34.6.
實施例24制備N-{N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙?；鶀-L-亮氨酸(化合物24)步驟A合成N-{N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙?；鶀-L-亮氨酸甲酯以N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙酸和L-亮氨酸甲酯為原料，操作類似實施例21步驟A，得淡黃色固體461.3mg，Yield91％，mp146-148℃.FAB+-MS m/z507(M+1)；HR-FAB+-MS m/z529.2056(M+Na+)(calcd.for C27H30N4O6Na，529.2063).1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)8.58(1H，s)，8.01(1H，d，J＝8.0Hz)，7.55(1H，d，J＝8.4Hz)，7.47(1H，t，J＝7.2Hz)，7.23(1 H，d，J＝3.4Hz)，7.47(1H，t，J＝7.2Hz)，6.58(1H，d，J＝3.6Hz)，4.64(2H，s)，4.48-4.44(1H，m)，3.68(2H，t，J＝6.4Hz)，3.55(3H，s)，2.55(2H，t，J＝6.4Hz)，1.51-1.43(3H，m)，0.74-0.71(6H，m).13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)173.5，172.0，171.9，165.6，155.3，141.5，137.6 131.8，131.0，130.8，128.9，121.4，121.1，120.5，112.6，112.1，110.7，110.1，56.6，52.0，50.8，40.6，35.8，35.6，24.6，22.4，21.3.
步驟B合成N-{N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙?；鶀-L-亮氨酸以N-{N-[1-(5‘-羥甲基-2-呋喃基)-β-咔啉-3-羰基]-3-氨基丙?；鶀-L-亮氨酸甲酯為原料，操作類似實施例6，得淡黃色固體48.2mg，Yield98％，mp225-227℃.FAB+-MS m/z493(M+1)；HR-FAB+-MS m/z515.1904(M+Na+)(calcd.for C26H28N4O6Na，515.1906).1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)11.93(1H，s，br)，8.70(1H，s)，8.35(1H，d，J＝7.5Hz)，8.25(1H，d，J＝7.5Hz)，7.59(1H，t，J＝7.2Hz)，7.51(1H，d，J＝2.5Hz)，7.29(1H，t，J＝7.2Hz)，6.57(1H，d，J＝2.5Hz)，5.92(1H，s，br)，4.63(2H，s)，4.45(1H，m)，3.59-3.58(2H，m)，2.53(2H，m)，1.50-1.48(1H，m)，1.47-1.45(2H，m)，0.75(6H，m).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ(ppm)174.0，170.8，164.3，157.4，151.7，141.6，139.1131.4，131.2，130.0，128.5，121.7，120.8，120.1，113.2，112.1，110.5，108.9，55.5，50.1，40.1，35.6，35.0，24.2，22.7，21.1.
本發(fā)明化合物的藥理研究實施例25抑制HIV-1體外實驗。
材料和方法1、測定藥物和化合物檢測化合物為實施例1-24化合物；抗HIV陽性藥物為逆轉錄酶抑制劑疊氮胸苷(AZT，3’-Azido-3’-deoxythymidine)購自Sigma公司。實施例1-24化合物溶解于二甲基亞砜(DMSO)中，分裝后4℃保存。AZT溶解于RPMI-1640完全培養(yǎng)基中，0.22μm濾膜過濾除菌。分裝后-20℃保存。
2、試劑和溶液1)試劑HEPES(N-2(2-Hydroxyothyl)piperazine-N’-(2-ethanesufoni-acid)，MTT(3，(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl tetrazolium bromide)，DMF(N，N’-Dimethyl formamine)，青霉素(Penicilline)，硫酸鏈霉素(Streptomycinsulfate)，谷氨酰胺(Glutamine)均購自Amresco公司；2-巰基乙醇(2-ME，2-Mercaptoethanol)為Bio-Rad公司產(chǎn)品。RPMI-1640和新生小牛血清為Gibco公司產(chǎn)品2)培養(yǎng)基RPMI-1640完全培養(yǎng)基，含有10％新生小牛血清，2mM L-谷氨酰胺，10mM HEPES，50μM2-巰基乙醇，100,000IU青霉素，100μg/ml硫酸鏈霉素。
3)細胞和病毒人T淋巴細胞系C8166，MT-4(P)，慢性感染細胞HIV-1IIIB/H9(慢)以及HIV實驗株HIV-1IIIB均由英國MRC(Medical Research Council)，AIDS Reagent Project惠贈。所有細胞和病毒均以含10％新生小牛血清的RPMI-1640完全培基進行培養(yǎng)。按常規(guī)方法制備HIV-1IIIB，滴定并計算出病毒的TCID50。病毒儲存液分裝后，置-70℃保存。細胞和病毒均按常規(guī)方法凍存和復蘇。
3、實施例1-24化合物對C8166的細胞毒性檢測C8166為HIV-1的宿主細胞。細胞濃度為4×105個/ml的C8166細胞懸液100μl與不同濃度的實施例1-24化合物溶液100μl混合，同時設置不含藥物的對照孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)3天，采用MTT比色法檢測細胞毒性。Bio-Tek Elx-800 ELISA Reader測定OD595/630nm值。測定波長為595nm，參考波長為630nm，計算的CC50值(50％CytotoxicConcentration)，即對50％的正常人T淋巴細胞系C8166產(chǎn)生毒性時的藥物濃度，計算如下細胞存活率(％)＝(試驗孔OD值-空白孔OD值)/(正常細胞對照孔OD值-空白孔OD值)×100。
4、實施例1-24化合物對HIV-1感染C8166細胞致細胞病變(CPE)的抑制試驗100μl含有相應濃度實施例1-24化合物的培養(yǎng)液，加入C8166細胞100μl(含3×104個細胞)及HIV-1稀釋上清，M.O.I.為0.06。
同時設置不含化合物的HIV-1感染細胞對照及正常細胞陰性對照、AZT陽性藥物對照。37℃，5％CO2培養(yǎng)3天，倒置顯微鏡下(100×)計數(shù)合胞體的形成數(shù)。EC50(50％Effective Concentration)為抑制合胞體形成50％時的化合物濃度。計算如下致細胞病變(CPE)抑制率(％)＝(1-試驗孔合胞體數(shù)/對照孔的合胞體數(shù))×100。
表1 試驗結果匯總表

結果1、實施例1-24化合物對C8166細胞的毒性作用實施例1-24化合物對C8166細胞毒性CC50見表1；陽性對照藥AZT對C8166細胞毒性CC50為1288.24μg/ml。
2、實施例1-24化合物對HIV-1感染C8166致細胞病變(CPE)的抑制作用實施例1-24化合物對HIV-1致細胞病變的抑制作用其EC50見表1；AZT對HIV-1致細胞病變的抑制作用其EC50為0.092μg/ml。
3、實施例1-24化合物抗HIV-1的治療指數(shù)(Therapeutic index，TI＝CC50/EC50)。
實施例1-24化合物抗HIV-1的治療指數(shù)見表1。
本發(fā)明化合物的劑型研究實施例26按實施例1-4制得化合物，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例27按實施例1-4制得化合物，按常規(guī)膠囊制劑方法制成膠囊。
實施例28按實施例1-4制得化合物，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶2的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例29按實施例1-4制得化合物，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶3的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實施例30片劑實施例1-4制得化合物100mg淀粉 100mg玉米漿17％ 適量硬脂酸鎂 適量實施例31膠囊劑實施例1-4制得化合物100mg淀粉 100mg硬脂酸鎂 適量制備方法將實施例1-4制得化合物與助劑混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
實施例32安瓿劑實施例1-4制得化合物 50mg制備方法將實施例1-4制得化合物溶解于2毫升丙二醇中，過濾所得溶液在無菌條件下裝入安瓿瓶中。
權利要求
1.β-咔啉生物堿，其特征是具有式I結構 其中R1所代表的基團選自氫，烷基，烷氧基，羥甲基，醚化羥甲基，酯化羥甲基，鹵素(F，Cl，Br)，硝基，三氟甲基，N，N-二甲氨基；R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8可以相同或不同，獨立的所代表的基團選自氫，烷基，烷氧基，鹵素(F，Cl，Br)；R9所代表的基團選自氫，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，環(huán)烷基，芐基或取代芐基，?；?；X所代表的基團選自O，S，CH2＝CH2，NR(R為氫，直鏈或支鏈烷基)；Y所代表的基團選自OR，其中R可以為獨立的氫，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，芳基或取代芳基，環(huán)烷基；NHR，其中R可以為獨立的氫，羥基，氨基，直鏈或支鏈(C1-C6)烷基，芳基或取代芳基，環(huán)烷基，氨基酸；NH(CH2)nR，其中n＝2-10；R可以為羥基，氨基，羧基；NH(CH2)nCONHR，其中n＝2-10；R可以為氫，氨基，氨基酸。
2.權利要求1中所述氨基酸可以為甘氨酸，L-丙氨酸，L-谷氨酸，L-天冬氨酸，L-脯氨酸，L-苯丙氨酸，L-亮氨酸，L-異亮氨酸，L-絲氨酸。
3.根據(jù)權利要求1所述的β-咔啉生物堿，其特征是所述優(yōu)選化合物具有下列結構式
4.權利要求1中具有式(I)結構咔啉生物堿的制備方法主要包括以下步驟1)在二氯亞砜作用下，取代L-色氨酸與甲醇生成化合物(II)； 2)化合物(II)和(III)以二氯甲烷做溶劑，在分子篩，三氟乙酸，三氯氰尿酸/N，N-二甲基甲酰胺/三乙胺作用下縮合，環(huán)合，脫氫三步反應“一鍋煮”生成化合物(IV)； 3)化合物(IV)按照有機合成中常規(guī)的皂化，酯化，酰氨化，烷基化條件，即可得到式(I)結構咔啉生物堿。
5.用于治療和預防艾滋病的藥物組合物，包含至少一種權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分，單獨或結合一種或幾種藥學上可接受的載體。
6.權利要求1和5的化合物與藥物組合物在制備預防艾滋病的藥物中的應用。
7.權利要求1和5的化合物與藥物組合物在制備治療艾滋病的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物合成領域，具體提供一類β－咔啉生物堿(摘要式I化合物)及其制備方法，同時提供一種以式I化合物或其藥學上可接受的鹽為活性成分用于治療和預防艾滋病的藥物組合物，及該化合物及其藥物組合物在制備治療和預防艾滋病藥物方面的應用。
文檔編號A61P31/18GK1970559SQ20061004888
公開日2007年5月30日 申請日期2006年12月6日 優(yōu)先權日2006年12月6日
發(fā)明者劉吉開, 鄭永唐, 湯建國, 王云華, 董澤軍, 王睿睿, 王飛, 楊柳萌 申請人:中國科學院昆明植物研究所