專利名稱：制備丹酚酸a的控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物成分的制備方法，尤其是一種從丹參中制備丹酚 酸A的控制方法。
背景技術(shù)：
丹參是最常用的活血藥材之一，用于治療心絞痛、高血壓、冠心病和 中風(fēng)等心腦血管疾病。近二十多年，丹參的主要活性成分丹酴酸類化合物 研究比較活躍。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明，丹酚酸類化合物除了用于治療心腦血管 疾病，還可治療多種疾病，如腫瘤、肝病、腎病、消化潰瘍等。大部分研 究者以總酚酸或以丹酚酸B為目標(biāo)，而忽略含量較低而活性較強(qiáng)的丹酴酸A 及丹酚酸A的衍生物，如丹酚酸A鹽類。
歷經(jīng)20年，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所等完成的"丹參總酴酸治療 腦血管病的基礎(chǔ)與臨床研究"項(xiàng)目于2005年12月30日通過由衛(wèi)生部組織 的科技成果鑒定。
甄永蘇等人對丹酚酸A的活性進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸A及丹酚 酸A的衍生物用于治療腫瘤的作用，其特征是對腫瘤細(xì)胞的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)有抑 制作用，對腫瘤細(xì)胞有殺傷作用，可增強(qiáng)抗癌藥物的療效。
中國專利CN1384090A, 2002年公開了水提醇沉再過樹脂的提取方法， 該工藝增加醇沉使酚酸類損失30%。中國專利CN03132382. ， 2002年公開了 釆用水溫浸、離心、超濾、調(diào)酸、有機(jī)溶劑萃取再經(jīng)反相柱層析制備丹酚 酸A的方法。由于丹酚酸A在藥材中含量很低，有時(shí)甚至沒有，因此丹酚 酸A提取率很低，給大生產(chǎn)造成困難，在工業(yè)大生產(chǎn)上有一定的局限性， 因此并不能從根本上解決丹酚酸A制備的工業(yè)化問題。
本'申請人于2006年4月21曰提《了一份關(guān)于丹酚酸A的提取方法的 專利申請，該申請采用向丹參飲片或粉碎的丹參中加入適量的溶劑作為溶
媒，經(jīng)過提取后，進(jìn)行固液分離，將提取液進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)后，將得到 的藥液，加入到層析柱中，用水洗脫后，用洗脫劑洗脫，經(jīng)檢測，收集高
純度的丹酚酸A溶液，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機(jī)溶劑，然后，將所 得到的溶液用酸調(diào)PH2-6,經(jīng)氯仿或乙醚類有機(jī)溶劑萃取，棄去有機(jī)溶劑 相后，在水相中加入乙酸酯類有機(jī)溶劑萃取，將含乙酸酯類有機(jī)溶劑的藥 液，濃縮，干燥。釆用這樣的方法步驟后，解決了丹酚酸A的工業(yè)化問題， 且提取的丹酚酸A的純度較高，性能穩(wěn)定，但由于在最后步驟中用酸調(diào)PH 值，所以，為了將PH值調(diào)到所需范圍，所用酸的PH值要大于需調(diào)配溶液 的PH值，因此，對酸的要求比較嚴(yán)格，不通用；且生成物中丹酚酸A呈酸 性，性能不夠穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供了一種制備丹酚酸A的 控制方法，該方法可控制丹酴酸A在最終提取物中的含量，使丹酚酸A可
根據(jù)需要而得到不同的最終產(chǎn)物形式，，使得最終提取物性能更加穩(wěn)定，且
對所需藥品要求較低，更加通用，更加適合工業(yè)化。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所釆取的技術(shù)手段是 一種制備丹酚酸A的 控制方法，該方法包括如下步驟
步驟一、向丹參飲片或粉碎的丹參中加入適量的溶劑作為溶媒，經(jīng)過 提取后，進(jìn)行固液分離；
步驟二、將提取液進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)；
步驟三、將步驟二得到的藥液，加入到層析柱中，用水洗脫后，用洗 脫劑洗脫，經(jīng)檢測，收集高純度的丹酚酸A溶液，減壓或常壓濃縮至洗脫 液無有機(jī)溶劑；
步驟四、將步驟三得到的溶液用堿溶液調(diào)PH3 12，經(jīng)氯仿或乙醚類有 機(jī)溶劑萃取，棄去有機(jī)溶劑相后，在水相中加入乙酸酯類有機(jī)溶劑萃取， 將含乙酸酯類有機(jī)溶劑的藥液，濃縮，干燥。
該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH3 5，此時(shí)，
所得最終提取物為丹酚酸A。
該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH5 ~ 6. 5，此時(shí)， 所得最終提取物為丹酚酸A和丹酚酸A鹽的混合物。
該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH6.5 12，此 時(shí)，所得最終提取物為丹酚酸A鹽。
該方法步驟一中加入的適量的溶劑為水時(shí)，提取溫度為0 10(TC，提 取選用超聲提取、回流提取或動態(tài)逆流提取，固液分離采用過濾、自然沉 降或離心。當(dāng)釆用超聲提取時(shí)，提取的溫度不大于6(TC,當(dāng)釆用動態(tài)逆流 提取時(shí)，提取的溫度為50~95°C。
當(dāng)步驟一中加入的適量的溶劑為水時(shí)，該方法步驟二中進(jìn)行髙溫高壓 反應(yīng)前還可先將提取液進(jìn)行濃縮。 '
此外，該方法步驟一中加入的適量的溶劑為乙醇水溶液，乙醇濃度為 10~80%，提取可以選用超聲提取、回流提取或滲漉提?。还桃悍蛛x釆用過 濾、自然沉降或離心。
當(dāng)步驟一中加入的適量的溶劑為乙醇水溶液時(shí)，該方法步驟二中進(jìn)行 高溫高壓反應(yīng)前還可將提取液進(jìn)行常壓濃縮或減壓濃縮至無醇味。
在上述方法步驟二中，高溫高壓反應(yīng)條件為0. OlMpa - 0. 25MPa的壓強(qiáng)， 高溫在101~140°C，反應(yīng)時(shí)間為0.5-24小時(shí)。
該方法步驟三中層析柱中的填料為,大孔樹脂類、離子交換樹脂、 Sephadex-2G凝膠、C18鍵合相色譜柱或C8鍵合相色譜柱填料，最佳填料 用聚苯乙烯骨架的大孔樹脂；洗脫劑采用乙醇、甲醇、丙酮或乙腈的水溶 液。
該方法步驟四中，乙酸酯類有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸丁 酯；濃縮釆用減壓濃縮或常壓濃縮；干燥采用真空干燥或冷凍干燥；乙酸 酯類萃取液可釆用一步法干燥或兩步法干燥， 一步法釆用減壓濃縮干燥得 到丹酚酸A、丹酚酸A鹽或其二者的混合物的成品；兩步法為先在常壓或減 壓條件下濃縮，然后采用真空干燥或冷凍干燥等方法干燥得到丹酚酸A、丹
酚酸A鹽或其二者混合物的成品。
釆用上述技術(shù)方案后，由于在高溫高壓反應(yīng)過程中，將步驟二中提取 液的其他物質(zhì)盡可能多的轉(zhuǎn)化成丹酚酸A,提髙了丹酚酸A的含量；且由于
可通過控制所用堿的量而控制最終提取物的形式，即可得到丹酚酸A、丹酚 酸A和丹酚酸A鹽的混合物、丹酚酸A鹽三種最終提取物形式，由于丹酚 酸A鹽要比丹酚酸A更加穩(wěn)定，使得最終提取物在不減弱其性能的同時(shí)， 使得相對于單一的丹酸酚A形式存在的形式更加穩(wěn)定；由于在步驟四中調(diào) PH值所用的堿為各種堿，對堿的性能及PH值要求不高，因此，可用藥品更 多，更加通用，更適合工業(yè)化生產(chǎn)，且最終提取物為50%~84%的丹酚酸八 類產(chǎn)品。


圖i是紅外光譜圖；圖2是核磁共振圖
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例——種制備丹酚酸A的控制方法
取丹參顆粒250kg，力口8倍量的60"/。乙醇超聲提取3次，每次20分鐘， 超聲提取溫度3(TC。合并提取液，過三足離心，離心液釆用減壓濃縮，溫 度控制在6(TC,濃縮到l: 3,濃縮液置反應(yīng)釜中12(TC反應(yīng)6小時(shí)。取上 述藥液過大孔樹脂柱，上樣量(以原藥材干重計(jì)算)與大孔樹脂量比1: 5, 先用IO倍柱體積的水沖洗除去雜質(zhì)，后用IO倍柱體積濃度為20%乙醇水沖 洗除去雜質(zhì)，再用濃度為40%乙醇水溶液沖洗，至液相檢測無丹酚酸A，收 集洗脫液，6(TC減壓濃縮至無醇味，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至3，取上 清液，用上清液l倍量體積的氯仿萃取l次，棄去氯仿相，水相加1.0倍 量體積乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，減壓濃縮，使藥液至稠奢狀， 冷凍干燥，得丹酚酸A。
實(shí)施例二 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不 同的是用氫氧化鉀溶液調(diào)PH值至4，得到丹酚酸A。
實(shí)施例三 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不
同的是用氨水調(diào)PH值至5，得到丹酚酸A。
實(shí)施例四 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不 同的是'用氨水調(diào)PH值至5. 1，得到丹酚酸A和丹酚酸A鹽的混合物。
實(shí)施例五 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不 同的是用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6,得到丹酚酸A和丹酚酸A鹽的混合物。
實(shí)施例六 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至6. 5，得到丹酚酸A和丹酚酸A鹽的混 合物。
實(shí)施例七 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不 同的是用氫氧化鉀溶液調(diào)PH值至6.6,得到丹酚酸A鹽。
實(shí)雄例八 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是用氨水調(diào)PH值至7，得到丹酚酸A鹽。
實(shí)施例九 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是用氫氧化鉀溶液調(diào)PH值至IO，得到丹酚酸A鹽。
實(shí)施例十 一種制備丹酴酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所不 同的是用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至12,得到丹酚酸A鹽。
實(shí)施例十——種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是，水超聲提取。具體如下
丹參顆粒，加8倍量的水，超聲提取3次，每次40分鐘，超聲溫度40。C。
實(shí)施例十二 一種制備丹酚酸A的碰制方法與實(shí)施例十一基本相同， 所不同的是，超聲溫度為O'C,具體如下
丹參顆粒，加8倍量的水，超聲提取3次，每次90分鐘，超聲溫度O'C。 實(shí)施例十三 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十二基本相同，
所不同的是，超聲溫度為rc。
實(shí)施例十四 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十一基本相同， 所不同的是，超聲溫度為6(TC，具體如下
丹參顆粒，加8倍量的水，超聲提取3次，每次10分鐘，超聲溫度60。C。
實(shí)施例十五 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是，乙醇水溶液滲漉提取。具體如下
丹參粗粉，加1. 5倍量的60%乙醇水溶液密封浸潤6小時(shí)，裝入滲漉桶， 裝實(shí)，上端不停加60%乙醇水溶液，下面打開閥門收集滲漉液，收集到6~ 7倍量藥材體積時(shí)，至液相檢測無丹酚酸A，判斷滲漉停止。
實(shí)施例十六 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是，乙醇水溶液回流提取。
丹參飲片，加8倍量的乙醇水溶液，回流提取3次，每次1.5小時(shí)。
實(shí)施例十七 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是，水回流提取。
丹參飲片，加10倍量的水，回流提取3次，每次1小時(shí)。
實(shí)施例十八 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，所 不同的是，水動態(tài)逆流提取。
丹參飲片，加熱溫度8(TC，流速為罐/40min 。
實(shí)施例十九 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十八基本相同， 所不同的是，加熱溫度為5CTC。
實(shí)施例二十 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十八基本相同， 所不同的是，加熱溫度為95°C。
實(shí)施例二十——種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十七基本相同， 所不同的是，提取液不濃縮直接進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)。
實(shí)施例二十二 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十七基本相同， 所不同的是，提取液不濃縮直接進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)。
實(shí)施例二十三 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例十八基本相同， 所不同的是，提取液不濃縮直接進(jìn)行高'溫高壓反應(yīng)。
實(shí)施例二十四 一種制備丹酴酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同，
所不同的是，柱純化，釆用C18鍵合相作為色譜柱填料。
實(shí)施例二十五 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同， 所不同的是，柱純化，采用C8鍵合相作為色譜柱填料。
實(shí)施例二十六 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同， 所不同的是，柱純化，洗脫溶劑甲醇水溶液。
實(shí)施例二十七 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同， 所不同'的是，柱純化，洗脫溶劑丙酮水溶液。
實(shí)施例二十八 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同， 所不同的是，柱純化，洗脫溶劑乙腈水溶液。
實(shí)施例二十九 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)施例一基本相同， 所不同的是，PH值調(diào)節(jié)釆用氫氧化鉀溶液。
實(shí)施例三十 一種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)例一基本相同，所不 同的是，調(diào)節(jié)PH有機(jī)溶劑萃取時(shí)先釆用乙醚，后用乙酸乙酯萃取。
實(shí)施例三十——種制備丹酚酸A的控制方法與實(shí)例一基本相同，所 不同的是，調(diào)節(jié)PH有機(jī)溶劑萃取時(shí)先釆用氯仿，后用乙酸丁酯萃取。
核磁共振及紅外光譜圖檢測分析為丹酚酸A,檢測結(jié)果見附圖2和附 圖1。
權(quán)利要求
1、 一種制備丹酚酸A的控制方法，該方法包括如下步驟步驟一、向丹參飲片或粉碎的丹參中加入適量的溶劑作為溶媒，經(jīng)過 提取后，進(jìn)行固液分離；步驟二、將提取液進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)；步驟三、將步驟二得到的藥液，加入到層析柱中，用水洗脫后，用洗 脫劑洗脫，經(jīng)檢測，收集高純度的丹酚綾A溶液，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機(jī)溶劑；步驟四、將步驟三得到的溶液調(diào)PH值，經(jīng)氯仿或乙醚類有機(jī)溶劑萃取， 棄去有機(jī)溶劑相后，在水相中加入乙酸酯類有機(jī)溶劑萃取，將含乙酸酯類 有機(jī)溶劑的藥液，濃縮，干燥；其特征在于該方法步驟四中用堿溶液調(diào)PH3 12。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH3 5。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制脊丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH5-6. 5。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟四中調(diào)PH值用的堿溶液為各種堿溶液，調(diào)PH6. 5~12。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟一中加入的適量的溶劑為水，提取溫度為0~100°C，提取選用 超聲提取、回流提取或動態(tài)逆流提取，固液分離釆用過濾、自然沉降或離 心。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于: 該方法步驟一中超聲提取的溫度不大于'60。C;動態(tài)逆流提取的溫度為50 ~ 95°C。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于:該方法步驟二中進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)前將提取液進(jìn)行濃縮。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟一中加入的適量的溶劑為乙醇水溶液，乙醇濃度為10-80%,提 取可以選用超聲提取、回流提取或滲漉提取；固液分離采用過濾、自然沉 降或離心。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在于 該方法步驟二中進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)前還可將提取液進(jìn)行常壓濃縮或減壓濃 縮至無醇味。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1或7或9任一項(xiàng)所述的一種制備丹酚酸A的控制 方法，其特征在于該方法步驟二中，高溫高壓反應(yīng)條件為0. OlMpa ~ 0. 25MPa 的壓強(qiáng)，高溫在101~140°C,反應(yīng)時(shí)間為0.5-24小時(shí)。
11、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備丹酚酸A的控制方法，其特征在 于該方法步驟三中層析柱中的填料為大孔樹脂類、離子交換樹脂、 S印hadex-20凝膠、C18鍵合相色譜柱或C8鍵合相色譜柱填料，洗脫劑采 用乙醇、甲醇、丙酮或乙腈的水溶液。
12、 根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種制備丹酴酸A的控制方法，其特征在于該方法步驟三中層析柱中的填料為聚苯乙烯骨架的大孔樹脂。
13、 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的一種制備丹酚酸A的控制方 法，其特征在于該方法步驟四中，乙酸酯類有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸丙 酯或乙酸丁酯；濃縮釆用減壓濃縮或常壓濃縮；干燥采用真空干燥或冷凍 干燥。'
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備丹酚酸的控制方法，該方法通過向丹參飲片或粉碎的丹參中加入適量的溶劑作為溶媒，經(jīng)過提取后，進(jìn)行固液分離后，將提取液進(jìn)行高溫高壓反應(yīng)，并將得到的藥液，加入到層析柱中，用水洗脫后，用洗脫劑洗脫，收集高純度的丹酚酸A溶液，減壓或常壓濃縮至洗脫液無有機(jī)溶劑，將得到的溶液用堿調(diào)pH值，經(jīng)氯仿或乙醚類有機(jī)溶劑萃取，棄去有機(jī)溶劑相后，在水相中加入乙酸酯類有機(jī)溶劑萃取，將含乙酸酯類有機(jī)溶劑的藥液，濃縮，干燥后，得到50％～84％的丹酚酸A類產(chǎn)品，該方法通過控制丹酚酸A在最終提取物中的含量，使得最終提取物性能更加穩(wěn)定，且對所需藥品要求較低，更加通用，更加適合工業(yè)化。
文檔編號A61K36/53GK101121658SQ200610048130
公開日2008年2月13日 申請日期2006年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月11日
發(fā)明者朱長福, 楊會慈, 王國振 申請人:王國振