專利名稱：金錢草總黃酮提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域。涉及金錢草的有效部位提取物-金錢草總黃酮提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
近年來膽結(jié)石和泌尿系結(jié)石的發(fā)病率有所上升高達(dá)10％，嚴(yán)重影響著人類的健康。目前國際上治療該病的藥物有混合膽汁酸、鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸、薄荷醇、薄荷酮等環(huán)狀單萜合劑等，研究表明，膽酸在腸道細(xì)菌作用下造成的肝膽酸有肝毒性，長期服用有潛在形成動脈粥樣硬化的脂質(zhì)代謝變化。目前溶石藥物治療尚不理想，原因有口服溶石療程長，費用高，療效不佳，患者在治療過程中出現(xiàn)各種中毒反應(yīng)，且復(fù)發(fā)率較高。隨著中藥現(xiàn)代化的快速發(fā)展，尤其在進(jìn)入WTO后，中藥有效成分的研究發(fā)展得到了國內(nèi)外的高度重視，對于有效成分明確、質(zhì)量可控及安全高效的中藥有效部位或單體在研制膽結(jié)石和泌尿結(jié)石的治療藥物方面，具有誘人的市場前景和開發(fā)價值。
金錢草為我國藥典收載品種，其藥材來源為報春花科植物過路黃(Lysimachia christinae Hance)的干燥全草。夏秋兩季采收，除去雜質(zhì)，曬干。具有清熱退黃、利膽排石、利尿解毒等功效，主治濕熱黃疸、膽道及尿道結(jié)石以及跌打損傷、療瘡腫毒等癥。尤其是對膽道結(jié)石療效頗著，被譽為治結(jié)石之要藥。近年來對川金錢草進(jìn)行了研究，尤其是對其藥效成分黃酮類物質(zhì)進(jìn)行研究，現(xiàn)已從其中分離鑒定了十余種黃酮類成分，其苷元主要為山柰素和槲皮素。由于中藥的傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，一般金錢草作為藥物使用時都采用水煎，其缺點是有效部位含量低，療效差，又由于受到制備技術(shù)的限制，目前還沒有提取自金錢草的總黃酮含量較高的產(chǎn)品問世，也未見其報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種利用現(xiàn)代分離技術(shù)得到的新的金錢草有效部位提取物—金錢草總黃酮提取物，并提供了其制備方法。其總黃酮含量高達(dá)30-80％，藥理活性好。藥理實驗證明，其安全性好，可以有效地用于利膽、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛等用途。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下本發(fā)明的金錢草總黃酮提取物，由以下方法制備得到取金錢草藥材，用20-70％濃度的乙醇液回流提取，提取液濃縮，過濾或離心，濾液或上清液上大孔樹脂，依次用水、10％乙醇、70％乙醇洗脫至流出液無色，收集10-70％乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得金錢草總黃酮。
上述的金錢草總黃酮提取物制備方法中，其中大孔樹脂為101型、HPD100型、HPD200型或AB-8型大孔樹脂。更優(yōu)選的大孔樹脂為101型或AB-8型大孔樹脂。
上述的金錢草總黃酮提取物，其中用于洗脫大孔樹脂的洗脫液依次為水、10％乙醇、70％乙醇，收集70％乙醇洗脫液。
按如上方法制備的金錢草總黃酮提取物，其總黃酮的含量高達(dá)30-80％。
本發(fā)明金錢草總黃酮中含有的黃酮類化合物主要有槲皮素，槲皮素3-O-葡萄糖苷，山柰素，山柰素3-O-半乳糖苷，山柰素3-O-三糖苷，山柰素3-葡萄糖苷，山柰素3-蕓香糖苷，山柰素3-O-鼠李糖基(1→6)葡萄糖苷，山柰素3-鼠李糖苷-7-鼠李糖基(1→3)鼠李糖苷，山柰素3-O-α-L-鼠李糖(1→2)-β-D-木糖苷，山柰素3-O-(2，6-二鼠李糖吡喃葡萄糖苷)，3，2′，4′，6′-四羥基-4，3′-二甲氧基查耳酮，楊梅苷，黃芪苷，新西蘭牡荊苷，鼠李檸檬素3′，4-二葡萄糖苷等。
本發(fā)明對金錢草總黃酮中含有的黃酮類化合物的指紋圖譜進(jìn)行研究。流動相乙腈(A)、0.2％磷酸水溶液(B)，二元梯度分離；流速0.8mL·min-1；檢測波長330nm；柱溫20℃；進(jìn)樣量20μL。記錄135min色譜圖，比較10批藥材色譜圖，確立32個共有峰。用相對保留時間標(biāo)定了HPLC指紋圖譜中的共有峰。12號峰為蘆丁，13號峰為山柰素3-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，18號峰山柰素3-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，25號峰為槲皮素，29號峰為山柰素(見附圖1)。
本發(fā)明的金錢草總黃酮提取物可以作為藥物活性成分制備成各種臨床用藥物制劑，其中含有治療有效量的金錢草總黃酮提取物及藥學(xué)上可接受的載體。還可以作為活性部位與其它中藥提取物/有效部位或相關(guān)化學(xué)合成藥物與藥學(xué)上可以接受的賦型劑或輔料一起用于制備藥物組合物。
建議臨床患者使用金錢草總黃酮的劑量為0.8-3g/天，具體可遵醫(yī)囑。
上述兩種藥物組合物均可采用制劑學(xué)的常規(guī)方法制備成各種劑型，如膠囊、片劑、丸劑、口服液、顆粒劑、酊劑、緩釋劑等胃腸道給藥劑型及注射劑、外用制劑等胃腸外給藥劑型。
藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明金錢草總黃酮提取物具有利膽、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用。本發(fā)明金錢草總黃酮經(jīng)口服給藥，能增加正常大鼠的膽汁流量，能增加正常大鼠的尿量，對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有抑制作用，對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有顯著的抑制作用。因此，可以用金錢草總黃酮提取物作為活性部位和成分制備各種醫(yī)學(xué)上可接受的劑型，用于治療膽結(jié)石和泌尿系結(jié)石。


圖1為金錢草黃酮類化合物的指紋圖譜。
具體實施例方式
實施例1金錢草總黃酮的制備取金錢草藥材10公斤，用10倍量50％濃度的乙醇液回流提取3次，提取液合并，減壓濃縮至無醇味，離心，上清液上D101大孔樹脂柱吸附后，依次用80L水、60L 10％乙醇、80L 70％乙醇洗脫至流出液無色，收集70％乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得金錢草總黃酮提取物230克，含量65％。
實施例2
金錢草總黃酮的利膽、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛作用一.試驗材料1.1藥物與試劑藥物為用實施例1方法制備的金錢草總黃酮。
劑量折算金錢草藥材人用量15～60g生藥/日/人，0.25～1.0g生藥/kg。
大鼠劑量1g/kg(人)×6倍＝1.5g生藥/kg。故受試藥相當(dāng)于6g生藥/kg的浸膏粉138mg浸膏粉/kg作為低劑量；相當(dāng)于12g生藥/kg的浸膏粉276mg浸膏粉/kg作為高劑量。
小鼠劑量0.5g/kg(人)×9倍＝4.5g生藥/kg。故受試藥相當(dāng)于2.0g生藥/kg的浸膏粉46mg浸膏粉/kg作為低劑量；相當(dāng)于4.0g生藥/kg的浸膏粉92mg浸膏粉/kg作為高劑量。
利膽排石膠囊(LP，西安兆興制藥有限公司，批號041109)。人用量7g/日/人，0.1g/kg；大鼠劑量0.1g/kg×6倍＝0.6g/kg，小鼠劑量0.1g/kg×9倍＝0.9g/kg1.2受試動物Wistar大白鼠，體質(zhì)量(220±20)g，雄性；昆明種小白鼠，體質(zhì)量(20±2)g，由沈陽藥科大學(xué)實驗動物室提供，合格證號SCXK(遼)2003-008。
二.試驗方法與結(jié)果2.1利膽試驗取雄性大鼠40只，隨機(jī)分為4組，實驗前動物禁食不禁水12h，實驗時各鼠以20％烏拉坦1g/kg ip.麻醉，背部固定于固定板上，沿腹正中線切開約2cm，打開腹腔，找到胃幽門部，翻轉(zhuǎn)十二指腸，在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，分離后在其下穿線，結(jié)扎乳頭部，做一小切口，插入塑料管，開始收集膽汁。待穩(wěn)定15min后，先收集30min膽汁，然后各組分別由十二指腸給予利膽排石膠囊1g/kg、低劑量組3g/kg、高劑量組6g/kg及等容積的0.5％CMC-Na溶液。給藥后以30min為一時限紀(jì)錄膽汁流量，觀察120min(見表1)，計算膽汁流量增加率(給藥后每30min膽汁分泌量/給藥前30min膽汁分泌量×100％)。
表1金錢草總黃酮提取物對大鼠膽汁分泌量的影響(x±s)

*P＜0.05與空白對照組比較可見受試藥物高、低劑量及利膽排石膠囊組可使膽汁的分泌量增加，高劑量組在給藥60min內(nèi)均有促進(jìn)膽汁分泌的作用(P＜0.05)。低劑量組在給藥60min時促進(jìn)膽汁分泌效果較好(P＜0.05)。
2.2利尿試驗選擇2h內(nèi)收集的尿量達(dá)灌入水量的40％以上的雄性大鼠。將大鼠40只隨機(jī)分為4組，動物禁食不禁水18h后，各組動物水負(fù)荷0.9％生理鹽水0.025mL/g，然后各組分別給予利膽排石膠囊1g/kg、低劑量組3g/kg、高劑量組6g/kg及等容積的0.5％CMC-Na溶液。給藥后壓迫大鼠下腹部使其排盡余尿，置代謝籠內(nèi)收集給藥后不同時間的尿液(見表2)。
表2金錢草總黃酮提取物對大鼠尿量的影響(x±s)

*P＜0.05，**P＜0.01與空白對照組比較可見受試藥物高劑量組在給藥后2h內(nèi)均能增加尿量(P＜0.05)，其中前1h能明顯增加尿量(P＜0.01)。利膽排石膠囊組在給藥后1h內(nèi)能增加尿量(P＜0.05)。
2.3抗炎試驗取雄性小鼠40只，隨機(jī)分為4組，分別給予利膽排石膠囊1.5g/kg、低劑量組1g/kg、高劑量組2g/kg及等容積的0.5％CMC-Na溶液，給藥體積為0.2mL/10g。每日上午10時給藥，1日1次，連續(xù)4d。在末次給藥1h后，于小鼠左耳耳廓涂二甲苯30μL致炎，1h后拉頸椎處死，剪下雙耳，用直徑為7mm的不銹鋼打孔器沖下左右耳同一部位的圓片稱重，以兩耳片重量之差作為衡量腫脹程度的指標(biāo)，并計算各組腫脹抑制率[(對照組平均腫脹值-用藥組平均腫脹值)/對照組平均腫脹值×100％](見表3)。
表3金錢草總黃酮提取物對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(x±s)

*P＜0.05，**P＜0.01與空白對照組比較可見受試藥物低劑量及利膽排石膠囊組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹均有顯著抑制作用(P＜0.01)，而受試藥物高劑量組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有抑制作用(P＜0.05)。
2.4鎮(zhèn)痛作用取雄性小鼠40只，隨機(jī)分為4組，分別給予利膽排石膠囊1.5g/kg、低劑量組1g/kg、高劑量組2g/kg及等容積的0.5％CMC-Na溶液，給藥體積為0.2mL/10g。每日上午10時給藥，1日1次，連續(xù)4d。在末次給藥1h后，ip.0.6％HAC 0.2mL/只，觀察并記錄15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，并計算各組鎮(zhèn)痛率[(對照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/對照組平均扭體次數(shù)×100％](見表4)。
表4金錢草總黃酮提取物對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響(x±s)

**P＜0.01，***P＜0.001與空白對照組比較可見受試藥物低劑量組和利膽排石膠囊組對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有非常顯著抑制作用(P＜0.001)，受試藥物高劑量組對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有顯著抑制作用(P＜0.01)。
三.試驗結(jié)論受試藥物高、低劑量及利膽排石膠囊組可使膽汁的分泌量增加，高劑量組在給藥60min內(nèi)均有促進(jìn)膽汁分泌的作用(P＜0.05)。低劑量組在給藥60min時促進(jìn)膽汁分泌效果較好(P＜0.05)；受試藥物高劑量組在給藥后2h內(nèi)均能增加尿量(P＜0.05)，其中前1h能明顯增加尿量(P＜0.01)。利膽排石膠囊組在給藥后1h內(nèi)能增加尿量(P＜0.05)；受試藥物低劑量及利膽排石膠囊組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹均有顯著抑制作用(P＜0.01)，而受試藥物高劑量組對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有抑制作用(P＜0.05)；受試藥物低劑量組和利膽排石膠囊組對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有非常顯著抑制作用(P＜0.001)，受試藥物高劑量組對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)有顯著抑制作用(P＜0.01)。
結(jié)果表明金錢草總黃酮提取物具利膽、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，可用于治療膽結(jié)石和泌尿系結(jié)石。
實施例3金錢草總黃酮片劑取實施例1方法制備的金錢草總黃酮100mg與淀粉100mg，糊精100mg混合，用適量30％乙醇作濕潤劑，制成軟材，常規(guī)方法制粒，加入適量硬脂酸鎂混合，制成片劑。
實施例4金錢草總黃酮緩釋膠囊取實施例1方法制備的金錢草總黃酮100mg與卡波姆934p30mg，羥丙基甲基纖維素K15M90mg微晶纖維素100mg，磷酸鈣70mg混合，用10％聚乙烯吡咯烷酮k30乙醇溶液適量，制成軟材，常規(guī)方法制粒，裝入硬膠囊中，制成緩釋膠囊。
權(quán)利要求
1.一種金錢草總黃酮提取物，其特征在于由以下方法制備得到取金錢草藥材，用20-70％濃度的乙醇液回流提取，提取液濃縮，過濾或離心，濾液或上清液上大孔樹脂，依次依次用水、10％乙醇、70％乙醇洗脫，收集10-70％乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得總黃酮含量為30-80％的金錢草總黃酮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金錢草總黃酮提取物的制備方法，其特征在于大孔樹脂選自101型、HPD100型、HPD200型或AB-8型大孔樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金錢草總黃酮提取物的制備方法，其特征在于用于洗脫大孔樹脂的洗脫液依次為水、10％乙醇、70％乙醇，收集70％乙醇洗脫液。
4.一種藥物組合物，其特征在于含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的金錢草總黃酮提取物與藥學(xué)上可接受的載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于所述的金錢草總黃酮還可以作為活性部位與其它中藥提取物/有效部位或相關(guān)化學(xué)合成藥物與藥學(xué)上可以接受的賦型劑或輔料混合。
6.金錢草總黃酮提取物的用途，其特征在于金錢草總黃酮提取物用于制備利膽、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種金錢草總黃酮提取物及其制備方法，發(fā)明中金錢草按照乙醇回流提取，離心，上大孔樹脂，洗脫等步驟操作，所得金錢草有效部位提取物總黃酮含量達(dá)30－80％，并對提取物中黃酮類化合物進(jìn)行了指紋圖譜分析，確立了32個共有峰。藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明的金錢草有效部位提取物可以用于利膽、排石、利尿、抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，可作為治療結(jié)石藥物的活性成分，制成各種醫(yī)學(xué)上可接受的藥物制劑。
文檔編號A61P13/04GK1931228SQ20061004785
公開日2007年3月21日 申請日期2006年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月25日
發(fā)明者孫啟時, 王宇杰, 賈凌云, 袁久志 申請人:沈陽藥科大學(xué)